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Quim. Nova, Vol. 33, No.

9, 1837-1842, 2010 DETERMINAO DE HORMNIOS ESTRGENOS EM GUA POTVEL USANDO CLAE-DAD Raphael Teixeira Verbinnen* e Gilvanda Silva Nunes Departamento de Tecnologia Qumica, Centro de Cincias Exatas e Tecnologia, Universidade Federal do Maranho, Av. dos Portugueses, s/n, 65080-040 So Lus MA, Brasil Eny Maria Vieira Instituto de Qumica de So Carlos, Universidade de So Paulo, Av. Trabalhador Socarlense, 400, 13566-590 So Carlos SP, Brasil Recebido em 14/9/09; aceito em 2/6/10; publicado na web em 24/8/10

DETERMINATION OF ESTROGENS IN DRINKING WATER USING HPLC-DAD. An analytical procedure for determination of estriol, 17-estradiol, estrone and 17-ethinylestradiol in drinking water is presented. The method employs solid phase extraction (SPE) and sample dechlorination as cleanup procedures, followed by HPLC-DAD analysis. Validation was carried out using RE No. 899/2003 guidelines established by the Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria (National Agency of Sanitary Surveillance, Brazil), with some adaptations. The statistically evaluated results have shown that the method is selective, precise (0,06% to 19,40% CV) and accurate (91,52% to 109,41% average recoveries). The developed method was applied to the analysis of these contaminants in drinking water from So Lus, MA. Keywords: estrogen hormones; HPLC-DAD; water supply.

INTRODUO Desreguladores endcrinos (DE) so denidos como substncias exgenas capazes de causar efeitos adversos sade, interferindo no sistema endcrino de organismos aquticos, e nos ltimos anos tm sido um dos principais tpicos de pesquisa em diferentes reas do conhecimento.1 O estrgeno sinttico 17-etinilestradiol (EE2), amplamente usado na medicina em terapias de reposio e mtodos contraceptivos, e os naturais estrona (E1), 17-estradiol (E2) e estriol (E3) so considerados como responsveis pela maioria dos efeitos de desregulao endcrina,2-4 pois afeta o sistema endcrino de peixes em concentraes de 1 ng L-1,5 podendo ser encontrados no ambiente em concentraes na ordem de g L-1 e ng L-1.6,7 A persistncia da atividade dos estrognios tem origem na contnua introduo em ambientes aquticos por meio da disposio inadequada de esgoto sanitrio e industrial, como tambm pelo uso de lodo ativado de estao de tratamento de esgoto na agricultura.2,8 O uso de guas superciais para o consumo humano, bem como a transformao de seus mananciais como receptores de esgotos sanitrios, tratados ou no, tm sido os principais motivos de preocupao acerca da contaminao das fontes de gua.9 Diante da problemtica de poluio dos compartimentos aquticos que servem de fonte de captao de gua para o abastecimento pblico, h considerveis possibilidades de contaminao tambm da gua potvel, por esses estrgenos, j que no Brasil o ndice de tratamento de esgotos ainda baixo, principalmente na Regio Nordeste.10 Alm disso, os tratamentos convencionais de gua e de esgoto sanitrio no so capazes de remover completamente tais substncias, permanecendo ainda no meio aqutico.7,11,12 Diversos trabalhos tm sido dedicados a desenvolver mtodos para determinao e quanticao de desreguladores endcrinos e avaliao de sua atividade estrognica em organismos aquticos.1 Tcnicas de preparo de amostras (SPE, SPME) e cromatogrcas (LC, GC) com diferentes detectores (DAD, FLD, MS)8,13,14 e outras
*e-mail: raphaeltv@hotmail.com

fundamentadas em testes toxicolgicos (YES, ELISA, E-screen, ELRA)14,15 tm sido desenvolvidas. Estudos conduzidos por pesquisadores de Campinas, SP, apontaram a presena de hormnios estrgenos no Rio Atibaia, que abastece 92% do municpio.16 Em 2006, Sodr e colaboradores17 identicaram, neste mesmo ecossistema aqutico, em um ponto a jusante da cidade de Campinas, nveis de 17-estradiol e 17-etinilestradiol que chegaram a 2,51 e 0,31 g L-1, respectivamente. Em So Lus, MA, a gua potvel que distribuda populao proveniente de diferentes mananciais. O rio Itapecuru, que recebe euentes de cerca de 3 milhes de pessoas e cuja estao de tratamento de gua (ETA) dista 56 Km da rede de distribuio,18 e o Reservatrio do Batat, que recebe impactos antrpicos de mais de 40 mil pessoas,19 so as principais fontes de gua supercial. At o momento, nenhum estudo objetivando vericar se est ocorrendo contaminao por hormnios estrgenos foi realizado nessas reas, no obstante a premente necessidade. Isso se deve, de uma parte, carncia de laboratrios que se proponham a otimizar mtodos analticos e torn-los procedimentos de rotina, e de outra, falta de pessoal com formao em anlise desses poluentes. Este trabalho objetivou desenvolver um mtodo analtico que fosse, a um s tempo, sensvel, simples e relativamente rpido, voltado para anlise de hormnios estrgenos mais comumente encontrados em amostras de gua. Posteriormente, pretende-se empreg-lo em monitoramentos rotineiros e em estudos ecotoxicolgicos na regio. PARTE EXPERIMENTAL Reagentes e solues Todos os padres de estrgenos, com pureza mnima de 97%, foram obtidos da Sigma-Aldrich e da Fluka. Os solventes orgnicos de grau cromatogrco, metanol (MeOH), acetonitrila (ACN) e acetona (ACT), foram obtidos da J.T.Baker. gua desionizada foi obtida a partir dos sistemas Milli- e Direct-Q, da Millipore e o gs nitrognio, com 99,999% de pureza, da White Martins. Da Agilent, foram obtidos cartuchos de extrao em fase slida do tipo seringa,

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1838 Tabela 1. Procedimentos de extrao usados neste estudo Etapa P-1 Condicionamento Adio de amostra Lavagem Eluio Secagem do extrato Reconstituio
a

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Extrao em Fase Slida (EFS) P-2


b

P-3 6 mL Hex ; 2 mL ACT ; 6 mL MeOH; 10 mL H2O pH 3


c d

P-4 2 mL ACT; 6 mL MeOH; 10 mL H2O pH3 200 mL 10 mL MeOH:H2O (1:9) 4 mL ACT nitrognio 0,5 mL ACN

5 mL MeOH ; 7 mL ACN ; 5 mL H2O


a

9 mL MeOH; 9 mL H2O 200 mL 10 mL MeOH:H2O (1:9) 2 x 2 mL ACT nitrognio 0,5 mL MeOH

200 mL 5 mL gua 6 mL ACN nitrognio 0,5 mL MeOH

200 mL 10 mL MeOH:H2O (1:9) 4 mL ACT nitrognio 0,5 mL ACN

Metanol; b Acetonitrila; c Hexano; d Acetona. Tabela 2. Volume, concentraes e massa das solues empregadas para determinao do volume de ruptura Volume (mL) 200 400 600 800 1000 Concentrao (g L-1) 15,00 7,50 5,00 3,75 3,00 3,0 Massa (g)

sries AccuBondII ODS-C18 (500 mg, 6 mL) e SampliQ OPT (150 mg, 6 mL). Para acidicao da fase mvel, foi empregado o cido actico glacial P.A., com pureza 99,9% (Merck). Soluo aquosa de metabissulto de sdio (Sigma-Aldrich) foi preparada a uma concentrao de 3% (m/v). As solues-padro estoque dos hormnios estrgenos [estriol (E3), 17 -estradiol (E2), estrona (E1) e 17 -etinilestradiol (EE2)] foram preparadas em MeOH em uma concentrao de 100 mg L-1. A partir destas, foram obtidas as solues de trabalho, mediante diluio com MeOH. Todas as solues preparadas foram acondicionadas em frasco mbar e armazenadas em refrigerador a 4 C. Todas as vidrarias foram lavadas com gua e detergente comum, deixadas de molho em uma soluo a 5% (v/v) de Extran alcalino (Merck) por cerca de 12 h, e em seguida enxaguadas seqencialmente com gua de torneira e gua destilada, antes do uso. Extrao dos analitos Foram testados quatro procedimentos de EFS, um (P-1) segundo descrito por Arajo3 e outro (P-3) de acordo com Lopes.20 Ambos os trabalhos empregaram cartuchos preenchidos com C18 para a extrao. Os demais procedimentos, denominados P-2 e P-4 (Tabela 1), foram propostos a partir destes, buscando-se empregar solventes de baixos custo e toxicidade. Alda e Barcel6 indicaram bons resultados de recuperao ao aplicar o adsorvente polimrico (Oasis HLB, Waters) para a extrao dos quatro estrgenos aqui investigados, portanto incluiu-se no estudo a extrao empregando um adsorvente polimrico similar (OPT, da Agilent), usando-se os mesmos procedimentos descritos na Tabela 1, para comparao das performances de cada material adsorvente. Os uxos foram de 3 mL min-1 no condicionamento, de 2 mL min-1 na adio da amostra e na lavagem do cartucho e de 1 mL min-1 na eluio, controlando-se por vcuo via manifold. Os extratos foram secos sob suave uxo de gs nitrognio e reconstitudos em MeOH (P-1 e P-2) e em ACN (P-3 e P-4). Utilizou-se gua desionizada forticada com soluo-padro mista dos estrgenos, em uma concentrao inicial de 2,5 g L-1 de cada hormnio. A ecincia dos procedimentos de extrao foi medida atravs do percentual de recuperao, tendo sido aplicado o teste t de Student para comparao das mdias. Volume de ruptura Aps denio do adsorvente e do procedimento de extrao, avaliou-se a capacidade mxima de adsoro, ou seja, o volume mximo de amostra que pode ser percolado para a concentrao e separao dos analitos de interesse. Foram preparadas solues aquosas (amostra testemunha) forticadas com os analitos, mantendo-se

sempre a mesma massa das substncias (3,0 g), alterando-se o volume de gua potvel e, conseqentemente, a concentrao (Tabela 2). Desclorao Esta uma etapa de substancial importncia para prevenir a diminuio da concentrao dos estrgenos foco deste estudo. Legalmente, gua potvel deve conter cloro residual, agente que previne contra contaminao microbiolgica21 e tambm capaz de degradar hormnios estrgenos. 22,23 Para vericao da necessidade da desclorao, amostras-testemunhas contendo cloro residual (1,5 mg L-1) e outras descloradas com metabissulto de sdio (Na2S2O5) foram forticadas com 2,5 g L-1 de cada estrgeno e analisadas por CLAE-DAD. Neste estudo, usou-se metabissulto de sdio como agente neutralizador de cloro livre. Conforme descrito em Standard Methods,24 adicionou-se aos frascos de polietileno de alta densidade (PEAD), ainda antes da coleta, o equivalente a 0,1 mL de soluo a 3% deste reagente, para cada 100 mL de amostra coletada. Anlise cromatogrca As condies cromatogrcas para separao dos estrgenos foram vericadas por meio da eluio dos analitos frente a diferentes fases mveis (H2O, ACN, MeOH), variando-se seus constituintes e proporo, pH e uxo. Como ponto de partida, procedeu-se s anlises conforme descrito em diferentes bibliograas pesquisadas, as quais foram modicadas ou desconsideradas no estudo, mediante os resultados encontrados.3,6,16,20,25 Foram vericadas fases mveis binrias empregando-se ACN, MeOH e gua desionizada em diferentes propores; uxos de 0,8 a 1,0 mL min-1; e variao de pH da fase mvel aquosa. O sistema cromatogrco utilizou CLAE (Varian Inc., ProStar 210) acoplado a DAD (Varian Inc., ProStar 335). Os esterides foram separados empregando-se coluna Chromsep Microsorb 100 C18 (250 x 4,6 mm, 5 m, Varian). A introduo da amostra no sistema foi manual com loop de 20 L.

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Determinao de hormnios estrgenos em gua potvel usando CLAE-DAD

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Validao O procedimento e os critrios para validao do mtodo analtico proposto neste estudo seguiu as orientaes do Guia para Validao de Mtodos Analticos e Bioanalticos publicado pela Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria (ANVISA), mediante a Resoluo RE n 899, de 29 de maio de 2003.26 Os limites de deteco (LD) e inferior de quanticao (LIQ) foram determinados analisando-se a matriz contendo concentraes decrescentes do analito injetadas em quintuplicata. Os resultados obtidos foram comparados aos fornecidos pela anlise da amostra branco. O LIQ correspondeu ao menor nvel quanticvel com preciso (20%) e exatido (80% a 120%) aceitveis. Aquele que se apresentou como o menor nvel detectvel em comparao com o branco da matriz e que no satisfez as condies para ser considerado LIQ, foi identicado como LD do mtodo. Concomitantemente, a seletividade do mtodo foi avaliada por meio da anlise de 5 amostras da matriz forticadas em concentrao prxima ao LIQ e injetadas em triplicata, tendo sido os resultados comparados com aqueles obtidos das amostras em branco. A curva analtica foi construda para cada estrgeno, utilizandose a mesma matriz proposta para o estudo, incluindo-se a anlise de amostra em branco e de 6 amostras forticadas com o padro do analito, contemplando a faixa desde o LIQ at 120% da concentrao mais alta a analisar. O clculo da regresso linear pelo mtodo dos mnimos quadrados foi usado para anlise dos resultados, obtendo-se a equao da reta e o coeciente de linearidade. Para a validao da quanticao da substncia de interesse e correo de um possvel efeito da matriz, recorreu-se adio de padro; com isso se garantiu ainda a compensao de mudanas da resposta do equipamento, fornecendo melhor exatido e preciso ao mtodo como um todo.27 A preciso e a exatido foram vericadas utilizando-se 3 concentraes (baixa, mdia e alta), contemplando a faixa linear dinmica do mtodo, com 5 repeties para cada nvel. Estatisticamente, vericou-se a preciso, calculando-se o desvio padro relativo (DPR). No ensaio de recuperao, os resultados analticos de amostras forticadas extradas, com os obtidos a partir de solues-padro no extradas. Os resultados encontrados foram submetidos ao teste t de Student em nvel de 95% de signicncia e 4 graus de liberdade, para comparao de mdias. Anlises de amostras coletadas no sistema de distribuio de gua As amostras de gua potvel foram coletadas em abril de 2009, sendo duas na sada de duas ETAs distintas, uma em um reservatrio de distribuio de gua e outras duas na rede de distribuio de gua, j em ponto disponvel para uso do consumidor. Em conjunto com as amostras em anlise, foram preparadas quatro amostras de controle do mtodo, denominadas controle de qualidade (CQ), de maneira a assegurar a correta execuo deste e facilitar a identicao de algum erro durante alguma etapa da anlise em curso. Uma das amostras foi forticada no nvel do LIQ (CQ-LIQ), uma em concentrao baixa menor ou igual a trs vezes menor o LIQ (CQB), outra em concentrao igual mdia aritmtica entre CQB e a concentrao alta (CQA) e a ltima em concentrao alta equivalente faixa de 75 a 90% (CQA) do ltimo nvel da curva analtica. RESULTADOS E DISCUSSO As maiores diculdades encontradas na separao cromatogrca foram localizar o pico do E3 em regio de baixa interferncia e

estabelecer anlise em tempo relativamente curto, apresentando picos com boa resoluo (Rs). MeOH foi testado como alternativa ao uso de acetonitrila (ACN) na fase mvel, porm aps 25 min de anlise nenhuma das substncias foi eluda. Valores de pH ( 4,00 e 5,00) foram tambm testados, adicionando-se cido actico glacial PA fase mvel, resultando em supresso dos sinais analticos. Igual modo foi a variao do uxo de eluio que apenas alterou o tempo de reteno (tR) das substncias sem, no entanto, oferecer melhores respostas. A fase mvel selecionada consistiu de ACN e gua, em modo gradiente, iniciando-se proporo de 10:90 (ACN:H2O), alterando-se para 50:50 em 5 min e, em seguida, para 54:46 ao longo dos 10 min seguintes, sendo esta ltima proporo mantida at o m da corrida com durao total de 16,5 min. O uxo foi mantido em 1 mL min-1 e o comprimento de onda em 280 nm. Nestas condies, os picos apresentaram-se com boa resoluo e sem interferncias considerveis. Na Figura 1, apresentada a sobreposio do cromatograma de uma amostra no-forticada (branco) por um obtido a partir da injeo de soluo-padro mista na concentrao de 3 mg L-1.

Figura 1. Sobreposio de cromatogramas, mostrando a no ocorrncia de interferentes no tR dos analitos. Amostra branco no-forticada () e soluo-padro mista a 3 mg L-1 (). Condio usada: ACN:H2O, em gradiente, uxo de 1 mL min-1, volume de injeo de 20 L, = 280 nm, temp. ambiente 270,5 C

Na Figura 2 so comparadas as recuperaes obtidas mediante uso de dois materiais adsorventes para cada procedimento de extrao. Observase nitidamente que o adsorvente C18 apresentou menor disperso entre os valores de recuperao, em relao aos polimricos, principalmente os procedimentos P-1, com recuperaes variando de 88,41% (estradiol) a 96,47% (estriol); e P-2, de 76,81% (estrona) a 95,02% (estriol). Para a ANVISA, desejvel que os valores de recuperao, na validao dos mtodos voltados para anlises de traos, sejam prximos a 100%, admitindo-se valores menores, desde que no apresentem preciso e exatido superiores a 20%.26 Ribani e colaboradores27 armam que intervalos de recuperao entre 70 e 120% so geralmente aceitveis, informao corroborada por Brito e colaboradores28 e Amarante Junior, Brito e Ribeiro.29 Portanto, os procedimentos P-1, P-2 e P-4, empregando o adsorvente C18, e procedimento P-1 baseado em cartuchos com adsorvente polimrico (OPT), podem ser considerados adequados, enquanto os demais, por apresentarem resultados fora da faixa aceitvel, so estatisticamente inadequados.

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Figura 2. Comparao dos valores de recuperao entre adsorventes C18 e OPT (polimrico), para os quatro procedimentos de extrao (P-1, P-2, P-3 e P-4). As linhas em destaque correspondem ao valor mximo (120%) e mnimo (70%) aceitos para anlises de resduos

Dentre os procedimentos considerados adequados, P-1 apresentou melhor recuperao; entretanto, a sua utilizao pode tornar-se de custo elevado, face atual escassez mundial do solvente acetonitrila. No ano passado, a pequena disponibilidade deste produto para comercializao fez seu preo aumentar at dez vezes,30 restando ento como alternativa, o procedimento P-2 (uso do adsorvente C18), j que este apresentou desempenho similar ao P-4 (Tabela 1). Tal similaridade conrma-se pela comparao estatstica das recuperaes mdias obtidas para cada procedimento. Foi empregado o teste de signicncia t de Student, que resultou em valor de tcalc = - 1,125, dentro da faixa de aceitao da igualdade entre as mdias avaliadas (-ttab<tcalc<ttab), sendo ttab = 2,353 e considerando 95% (=0,05 e =0,025) de signicncia e 6 (n1+n2-2) graus de liberdade. Contrariamente s amostras com cloro residual, as descloradas apresentaram resultados semelhantes s solues-padro, fornecendo picos nos mesmos tRs dos hormnios estrgenos (dados no mostrados). Na amostra que no foi tratada com metabissulto de sdio foram identicados vrios interferentes, alm da ausncia do sinal de alguns dos analitos investigados. Tais resultados indicaram a importncia de se manter a desclorao no preparo da amostra. O fenmeno de desativao dos estrgenos por ao do cloro residual presente na gua potvel, que oriundo da etapa de desinfeco ao trmino do tratamento da gua, j era esperado, por se tratar de um processo oxidativo, um dos princpios que vm sendo estudado por diversos pesquisadores para a eliminao da atividade estrognica de diferentes substncias.7,23,31 Conforme descreve Lopes,20 mesmo na anlise imediata de gua potvel forticada, foi observada uma reduo na recuperao para um limite abaixo do mnimo aceitvel. De acordo com Huber (2005) apud Lopes,20 os agentes desinfetantes mais comuns, como o dixido de cloro e o cloro gasoso, reagem primeiramente com grupos funcionais que apresentam muitos eltrons, como fenis e aminas, sendo, portanto, efetivos na oxidao de estrognios quando aplicados no tratamento de gua. Assim, esperase que tais reaes de oxidao resultem na desarticulao do anel aromtico presente nas molculas dos estrgenos e, por conseguinte, na inativao de efeito estrognico. Hu e colaboradores32 submeteram soluo aquosa de 17-estradiol clorao com hipoclorito de sdio sob condies controladas para

avaliar a atividade estrognica potencial devida quela substncia em gua potvel. Alguns produtos e subprodutos da oxidao foram identicados como sendo 2,4-dicloro-17-estradiol, 2,4-dicloroestrona, monocloroestrona e 4-[2-(2,6-dicloro-3-hidroxifenil) etil]7-metiloctahidroinden-5-one. Observaram que a soluo aquosa exposta a hipoclorito de sdio ainda apresentou, nos tempos de 120 e 180 min, atividade estrognica cerca de 40% menor em comparao a esta mesma soluo antes da clorao. Sugerem que tal ocorrncia deve-se principalmente s substncias 2,4-dicloro-17-estradiol e 2,4-dicloroestrona. Deborde et al33 estudaram, na presena de excesso de cloro total e sob condies controladas, a cintica de clorao de 6 desreguladores endcrinos em meio aquoso, dentre eles os 4 hormnios objetos deste estudo. Observaram que todas as molculas constitudas com grupo fenlico em sua estrutura foram rapidamente oxidadas por ao do cloro. Relataram ainda que o tempo de meiavida, em pH 7, para os estrgenos avaliados variou de 6 a 8 min. A Figura 3 ilustra o comportamento da recuperao obtida para cada volume de amostra e tipo de analito tratados. A linha horizontal em destaque indica o menor valor (70%) considerado aceitvel para a recuperao. Na avaliao dos resultados obtidos, considerou-se a dependncia das recuperaes para cada analito como condio limitante para a seleo do volume de amostra. Para 800 e 1000 mL, os valores de recuperao foram inferiores faixa adequada. No volume de 600 mL, apenas estriol e estrona apresentaram resultados na faixa aceitvel (70 a 120%). Ao contrrio, os volumes de 200 e 400 mL apresentaram recuperao adequada para todos os analitos. Tendo em vista conseguir-se maior fator de concentrao e, consequentemente, menores LD e LIQ para o mtodo, selecionou-se o volume de 400 mL como sendo o adequado para a pr-concentrao da amostra.

Figura 3. Avaliao do volume de ruptura, mediante aplicao do procedimento P-2, com cartucho C18 e 3 g de cada substncia

Sabendo que o extrato, aps secagem em nitrognio, foi reconstitudo em 0,5 mL de MeOH, o fator de concentrao foi de 800 vezes. O tempo total de preparo da amostra para a anlise cromatogrca foi aproximadamente de 4 h, considerado aceitvel para anlise de rotina. Os valores encontrados para tcalc indicam que no h diferena estatisticamente signicativa entre as recuperaes obtidas e o valor

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desejado de 100%, j que todos eles so menores do que o ttab (2,132). Ademais, observando-se os valores para exatido e DPR, possvel armar que o mtodo desenvolvido exato e preciso. A ANVISA admite que o DPR seja 20% para o LIQ, no sendo superior a 15% para os demais nveis.26 O mtodo foi linear na faixa de 1,25 a 7,50 g L-1 (LD = 0,0625 g L-1), para E3 e de 3,75 a 7,50 g L-1 (LD = 1,25 g L-1) para as demais substncias. Os coecientes de regresso linear (r2) resultaram em valores maiores que 0,98, e os DPRs de cada ponto das curvas de calibrao tambm foram adequados (Figura 4). Tais resultados indicam que nesta faixa o mtodo de separao cromatogrca seguramente adequado para a determinao dos analitos de interesse. Na Tabela 3 so mostrados os resultados de recuperao, preciso e exatido obtidos para cada substncia estudada.

min), estes no foram relativos a hormnios mediante a comparao dos espectros de absoro fornecidos por estes sinais. O fato de tal amostra resultar em mais picos interferentes que as demais pode estar relacionado com o aspecto visivelmente mais turvo por ela apresentado, ocorrncia que no era esperada por se tratar de gua potvel. J que este acontecimento foi isolado, pode-se atribuir tubulao prxima ou torneira do ponto de coleta que se apresentavam sujos. Para ter avaliao mais criteriosa quanto a isto, sugere-se que, em outro estudo, sejam avaliadas as inuncias das caracterticas fsicoqumicas da gua sobre o mtodo desenvolvido.

Figura 4. Flutuao dos DPRs calculados a partir das reas obtidas na construo das curvas analticas. As linhas em destaque representam o limite mximo para valores adequados

Figura 5. Sobreposio dos cromatogramas das 5 amostras analisadas e da amostra-testemunha forticada em nvel baixo (CQB)

Observando-se a Figura 5, possvel notar que no foram detectados picos de nenhum dos hormnios estudados nas amostras analisadas. Entretanto, mesmo a Amostra 3 tendo apresentado picos prximos dos tRs do estradiol (12,6 min) e do etinilestradiol (14,0

Finalmente, os limites de deteco e inferior de quanticao do mtodo no foram sucientemente baixos para a eciente determinao destas substncias em gua potvel, pois conforme estudos j publicados,9,16,20,34 estas substncias tm potencial presena em

Tabela 3. Resultados de recuperao, preciso e exatido obtidos para cada hormnio estrgeno em trs nveis de forticao e cinco repeties (n=5) Substncia Estriol Nvel baixo mdio alto Estradiol baixo mdio alto Etinilestradiol baixo mdio alto Estrona baixo mdio alto
a

Concentrao (g L-1) 1,25 3,75 6,25 3,75 5,00 6,25 3,75 5,00 6,25 3,75 5,00 6,25

Recuperao a (%) 94 (80-119) 85 (77-91) 98 (87-104) 73 (70-75) 84 (77-89) 103 (95-109) 81 (70-91) 107 (101-117) 104 (100-105) 96 (87-105) 101 (91-107) 104 (97-107)

tcalc b -0,6870 -5,3908 -0,8137 -34,3382 -7,0292 1,2753 -4,8067 1,8603 2,0367 -1,4606 1,4907 1,3204

DPR c (%) 19,40 0,07 0,06 2,41 6,34 5,44 11,22 6,27 3,11 6,80 6,56 5,79

Exatido (%) 109,41 99,22 99,66 100,62 96,73 101,69 94,96 102,95 100,09 96,26 91,52 104,69

Corresponde mdia aritmtica dos valores e entre parnteses os valores mnimo e mximo, respectivamente, b tde Student, c desvio padro relativo (preciso)

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gua potvel, o que exige o seu monitoramento mediante mtodos analticos que cubram nveis trao. CONCLUSO O estudo possibilitou a separao cromatogrca dos hormnios estriol (E3), 17 -estradiol (E2), estrona (E1) e 17 -etinilestradiol (EE2) em tempo relativamente curto. O preparo da amostra, incluindo a desclorao e a extrao em fase slida (EFS), resultou em valores de recuperao dentro do limite aceitvel. O mtodo desenvolvido foi considerado validado, aps avaliao dos parmetros: seletividade; linearidade; preciso; exatido; limite inferior de quanticao; limite de deteco; recuperao e repetitividade, mostrando-se, portanto, seletivo, linear, exato e preciso para o procedimento de preparo da amostra e as condies cromatogrcas estabelecidas. Durante a aplicao do mtodo validado s anlises de amostras de gua potvel coletadas, observou-se que o mesmo no foi capaz de identicar ou quanticar hormnios estrgenos, no nvel de sensibilidade exigido, mas existe a possibilidade de realmente os hormnios no estarem presentes na gua potvel, na poca da coleta. Sabendo-se que o cloro residual presente pode degradar as substncias estrgenas11,32,33,35 e que, antes de chegar rede de distribuio, a gua potvel ao sair de uma das ETAs percorre mais de 56 Km de tubulao (tempo de deteno 8 h), pode-se tambm supor a sua degradao durante o deslocamento em funo do contato com cloro residual. Desta forma, necessrio pesquisar as guas naturais superciais que so captadas para o tratamento, podendo-se assim investigar a remoo destas substncias pelo processo de tratamento das ETAs. REFERNCIAS
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