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Srgio Machado Corra

CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL


APRESENTAO
Srgio Machado Corra
Tcnico em Qumica ETFQ
Licenciado em Qumica UERJ
Mestre em Fsico Qumica UFRJ
Doutor em Fsico Qumica UFRJ
Professor da Graduao em Engenharia de Produo
Professor do Mestrado em Qumica Ambiental
Professor do Doutorado em Meio Ambiente
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CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
TPICOS
Cromatografia Gasosa
Cromatografia Lquida
Anlise Quantitativa e Qualitativa
Cromatografia Preparativa
Problemas Mais Comuns
Cuidados com a Amostra
Aplicaes Ambientais
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CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
EMENTA DA CROMATOGRAFIA GASOSA
Histrico
Princpios e definies
Classificao
Aplicaes
Equipamento bsico
Vantagens e desvantagens
Teoria bsica, clssica e cintica
Parmetros operacionais
Componentes: fase mvel, filtros, injetor, microseringa, tcnicas de
injeo, forno, colunas, detetores (DIC, DCT, DCE, DNP e DSM)
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CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
EMENTA DA CROMATOGRAFIA LQUIDA
Teoria bsica
Parmetros operacionais
Instrumentao
Bombas
Sistemas de introduo de amostras
Colunas
Fase mvel
Detectores
Srgio Machado Corra
CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
BIBLIOGRAFIA
Neto, F.R.A., Nunes, D.S.S. (2003) Cromatografia.
Princpios bsicos e tcnicas afins, Editora Intercincia, 1
edio.
Collins, C.H., Braga, G.L., Bonato, P.S. (1993) Introduo
aos mtodos cromatogrficos, Editora da UNICAMP, 5
edio.
McNair, H.M., Miller, J.M. (1997) Basic Gas
Chromatography, John Wiley & Sons, Inc., 1
st
edition.
Lanas F.M., Extrao em Fase Slida (SPE), Rima, So
Carlos, SP, 2004.
Ciola R., Fundamentos da cromatografia a lquido de alto
desempenho, Ed. Edgard Blcher, So Paulo, 1998.

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HISTRICO
1900 D. T. Day estudo do petrleo
1906 botnico Tswett extrato vegetal
1930 Huhn e Lederer xantofilas e gema de ovo
1941 Martin e Synge teoria CG
1941 Hesse cromatografia gasosa
1952 Martin e Synge Prmio Nobel
1956 Griffin e George primeiro equipamento
1957 Golay CG capilar
1970 colunas SCOT
1974 colunas PLOT
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HISTRICO - Primeiros Experimentos
ter de
petrleo
CaCO
3
mistura de
pigmentos
pigmentos
separados
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PRINCPIOS
fase estacionria
fase mvel
Interao dos componentes da amostra entre a FM e a FE
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DEFINIO DA IUPAC
Cromatografia um mtodo fsico de
separao no qual os componentes a
serem separados esto distribudos entre
duas fases, uma delas estacionria e
outra se move em uma direo.
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CLASSIFICAO
CROMATOGRAFIA
FM
FE
TIPO
planar coluna
lquido gs lquido
lquido slido
CP CCD
lquido slido lquido slido
CGL CGS CLL CLS
nosso
curso
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PRINCPIOS - Pocesso de Separao
FE slida
FE lquida
FM FM
componente
FE lquida absoro FE slida adsoro
CROMATOGRAFIA GASOSA
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CLASSIFICAO
CONVENCIONAL
CG
ALTA RESOLUO
CGAR
at meados da dcada de 80
baixa resoluo
picos largos
colunas recheadas
maior quantidade de amostra
domnio aps dcada de 80
alta resoluo
picos estreitos
colunas capilares
requer menos amostra
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APLICAES
GERAL: separao e anlise de misturas com
constituintes com PE at 300
o
C e que sejam
termicamente estveis
EXEMPLOS: qumica ambiental
qumica forense
petroqumica
bioqumica
cosmticos
frmacos
70% de todas as tcnicas analticas
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EQUIPAMENTO BSICO
1- fase mvel
4 - injetor
5 forno + coluna
6 - detetor
8 - cromatograma
7 - eletrnica
3 - amostra
2- regulador
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VANTAGENS
Anlise rpida (escala de minutos)
Anlise eficiente com alta resoluo
Alta sensibilidade (>100 ppb)
No destrutiva (alguns detectores)
Alta acurcia para anlises quantitativa
Requer pouca amostra (1 L)
Operao simples
Baixo custo analtico
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DESVANTAGENS
Amostra deve ser voltil
Amostra deve ser estvel termicamente
Conhecimento prvio da amostra
Difcil para amostras complexas
No existe um detetor universal
Requer uso de padres
Pessoal qualificado
Custo do equipamento (acima de R$ 60 mil)
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TEORIA BSICA - Cromatograma
t
r1
t
r2
0,5h
w
1
w
2
At
r
t
r
tempo de reteno
w largura a altura
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TEORIA BSICA
onde:
K
D
coeficiente de partio ou de equilbrio
C
E
concentrao na fase estacionria
C
M
concentrao na fase mvel

K
D
proporcional a t
r
M
E
D
C
C
K =
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TEORIA BSICA
Tempo Morto t
M
-tempo entre a injeo e o detetor para
componentes que no interagem com a FE
ex. ar para DCT e metano DIC

Tempo de Residncia t
r
-tempo entre a injeo da amostra e o detetor
para componentes que interagem com a FE

CROMATOGRAFIA GASOSA
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TEORIA BSICA
Velocidade de migrao do analito


Velocidade de migrao da fase mvel


onde L = comprimento da coluna
t de reteno p/ componentes no retidos:
t de residncia na FM + t de permanncia na FE
r
t
L
v =
M
t
L
u =
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Analogia com a Destilao Fracionada
pratos tericos
equilbrio lquido-vapor
prato
altura
do prato
L = N . AEPT
L comprimento da coluna
N nmero de pratos
AETP altura entre pratos
TEORIA CLSSICA
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TEORIA CLSSICA
FENMENOS ENVOLVIDOS NA SEPARAO
-MIGRAO da FM para a FE
- ABSORO de FE for lquida (CGL)
- ADSORO se FE for slida (CGS)
-DIFUSO em ambos sentidos (Leis de Fick)

quanto maior t
R
maior o espalhamento


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TEORIA CLSSICA
Como Determinar o Nmero de Pratos ?
W
1/2
=2,345 o
W
B
=4 o
Teoria de GAUSS
2
. 16
|
|
.
|

\
|
=
B
R
w
t
N
2
2
1
. 54 , 5
|
|
|
.
|

\
|
=
w
t
N
R
ou
melhor
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TEORIA CLSSICA Resoluo (R
S
)
a medida da separao de dois picos consecutivos
R=0,5 R=1,0 R=1,5 R=2,0
98,0% de separao
At
r
= 4o
99,7% de separao
At
r
= 6o
) ( ) 1 (
) ( ) 1 (
) .( 2
x x
x x
B B
R R
S
w w
t t
R

=
+
+
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TEORIA CLSSICA Resoluo (R
S
)
PROBLEMA:
Como a Gaussiana assinttica, dois picos adjacentes
jamais esto integralmente separados.
SOLUO:
Kaiser e Trennzahl proporam o n de separao - TZ.
( )
1
177 , 1
1
) ( ) 1 (
) ( ) 1 (
2 1 2 1
=

=
+
+
S
R R R
w w
t t
TZ
x x
x x
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TEORIA CLSSICA Resoluo (R
S
)
Resumindo:
TZ fornece o n de picos que teoricamente
podem ser intercalados entre (x) e (x+1), com
R
S
= 4,7o

Caso R
S
= 1,177 TZ = 0, logo nenhum
pico pode estar intercalado entre (x) e (x+1).
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TEORIA CLSSICA Resoluo (R
S
)
EXEMPLO:
TZ = 5
pode-se acomodar 5 picos
TZ = 0
no se pode acomodar picos
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TEORIA CINTICA
MISSO PRINCIPAL: estreitar os picos | R
S
COMO FAZER ? evitar o espalhamento (difuso)
aleatrio
ESPALHAMENTO isotrpico
intrnseco
no pode ser
eliminado
deve ser
minimizado
CROMATOGRAFIA GASOSA
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TEORIA CINTICA
u
timo
u
timo
h
min
h
min
Coluna Recheada
Coluna Capilar
h

(
c
m
)
Velocidade linear da FM (cm/s)
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TEORIA CINTICA
C = resistncia transferncia
de massa
B

=

d
i
f
u
s

o

l
o
n
g
i
t
u
d
i
n
a
l
A = percursos mltiplos para o gs
Coluna Recheada AEPT = A + B/v + C.v
Coluna Capilar AEPT = B/v + C.v
h

(
c
m
)
Velocidade linear da FM (cm/s)
CROMATOGRAFIA GASOSA
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TEORIA CINTICA
EQUAO DE VAN DEEMTER
v C
v
B
A AEPT . + + =
A, B e C so constantes para uma T e coluna
Deve-se buscar o para maior eficincia
obtido com diversos experimentos
calculando AEPT contra velocidades
timo
v
timo
v
CROMATOGRAFIA GASOSA
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TEORIA CINTICA
EQUAO DE VAN DEEMTER
A percursos irregulares que a FM toma pela coluna
diminui com o dimetro da coluna
diminui com a homogeneidade do enchimento
A 0 em colunas capilares
v C
v
B
A AEPT . + + =
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TEORIA CINTICA
EQUAO DE VAN DEEMTER
B responsvel pelo fenmeno da difuso
aumenta com a temperatura
diminui com a presso
maior faixa de trabalho til: H
2
e He
v C
v
B
A AEPT . + + =
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TEORIA CINTICA
EQUAO DE VAN DEEMTER
C transferncia de massa entre a FM e FE
v C
v
B
A AEPT . + + =
v C v C v C
L G
. . . + =
G
C
G
D
r
k
k k
C
24
.
) 1 (
11 6 1
2
2
2
+
+ +
=
L
f
L
D
d
k
k
C
2
2
.
) 1 (
2
2
+
=
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TEORIA CINTICA
PROBLEMAS:
Como maximizar a eficincia da coluna ?
obtendo-se
valor mnimo da hiprbole onde

Problema 1: compressibilidade da FM cte
Problema 2: se v < v
timo
fator difuso
Problema 3: se v > v
timo
fator resistncia
transferncia de massa.
timo
v
0 =
c
c
v
h
v
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PARMETROS OPERACIONAIS
VAZO DA FASE MVEL - u
FM
r
FM
t
1
u
u1
FM
u2
FM
u2
FM
> u1
FM

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PARMETROS OPERACIONAIS
VOLUME DE INJEO - V
inj
Area V
inj

1,0 L
1,5 L
preserva o t
r
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PARMETROS OPERACIONAIS
AUMENTO DA TEMPERATURA DE INJEO

tende a reduzir o t
r
cauda do solvente
AUMENTO DA TEMPERATURA DA COLUNA

reduz o t
r
diminui o tempo do componente na FE
diminui a eficincia
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PARMETROS OPERACIONAIS
AUMENTO DO COMPRIMENTO DA COLUNA

aumento do t
r
aumenta o n de pratos
aumenta a eficincia da coluna
aumenta a difuso
alargamento dos picos
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PARMETROS OPERACIONAIS
AUMENTO DA QUANTIDADE DE FE

aumento do t
r
aumenta o n de pratos
geralmente filmes espessos s so usados
em situaes crticas
melhora a visualizao mas no a separao
efetiva
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PARMETROS OPERACIONAIS
AUMENTO DA ATENUAO

diminuio da rea dos picos
manuteno dos t
r
somente a insero de resistores no
amplificao do sinal que vai para o
cromatograma.
no tem efeito na separao
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COMPONENTES Fase Mvel
Tambm chamada de gs de arraste
Fonte usual cilindro de alta presso
Mais comuns N
2
, He , H
2
e Ar
No pode interagir com a fase estacionria
No pode interagir com a amostra
Deve ser de baixo custo e alta disponibilidade
Alta pureza
Deve-se usar filtros para H
2
O, O
2
e HC
H
2
O e O
2
oxidam algumas FE
HC provoca rudos no sinal do detetor
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A escolha depende do detetor empregado.

COMPONENTES Fase Mvel
DETETOR GAS DE ARRASTE
Condutividade Trmica He ou H
2
Ionizao de Chama He ou H
2
Captura de Eltrons
N
2
seco sem O
2
ou
Ar com 5% de CH
4
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CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
1
2
3
4
5
6
COMPONENTES Fase Mvel
1 Cilindro de Gs
2 - Regulador de Presso Primrio
3 - Traps para eliminar impurezas
4 - Regulador de Presso Secundrio
5 - Regulador de Vazo
6 - Medidor de Vazo
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COMPONENTES Filtros para FM
- H
2
O
slica
gel
- O
2
xido
de
cobre
- HC
carvo
ativo
a FM pode ter diferentes graus de pureza:
He 99,995 % US$ 55 (> 10 ppm)
He 99,999 % US$ 140 (<10 ppm)
He 99,9999 % US$ 280 (< 500 ppb)
Para anlise de traos, usar filtros:
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COMPONENTES Injetor
Funo: - receber a amostra
- vaporizar rapidamente
- colocar a amostra na coluna
Caractersticas: - injeo rpida
- uniformemente aquecido
- menor volume possvel
- boa juno com a coluna
- injees reprodutveis
- T acima do > PE da amostra
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COMPONENTES Injetor
t = 0
t = x
t = 0
t = x
Injeo
Rpida
Injeo
Lenta
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COMPONENTES Injetor
Injetor Convencional
1
2
3
4
1 Septo de silicone
2 Alimentao da fase mvel
3 Bloco metlico aquecido
4 Incio da coluna cromatogrfica
5
6
5 Purga de Septo
6 Divisor de amostra
CROMATOGRAFIA GASOSA
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COMPONENTES Injetor
Etapas de uma injeo
amostra
amostra
amostra
CROMATOGRAFIA GASOSA
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COMPONENTES Microseringa
mbolo
corpo (pirex)
agulha (inox 316)
Volumes tpicos de 1, 5 e 10 L
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CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
COMPONENTES Tcnicas de Injeo
SPLITLESS
sem diviso de amostra
alta sensibilidade
efeito do solvente
amostras diludas
resfriar forno a cada injeo
forno < 20C que solvente
FM
Split Vent fechado
X
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COMPONENTES Tcnicas de Injeo
SPLIT
diviso de amostra
baixa sensibilidade
componentes de alto PE retidos
diviso no linear
volume constante
FM
Split Vent aberto
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COMPONENTES Tcnicas de Injeo
Agulha fria cold needle
Agulha aquecida hot needle
Lavagem com solvente solvent flush
Expulso com ar air plug
Agulha cheia filled needle
Com diviso de fluxo split
Sem diviso de fluxo splitless
Introduo direta direct
Vaporizao programvel PTV
Na coluna on-column
A frio e na coluna cold on-column
Com resfriamento na coluna cold on-column
Com armadilhamento do soluto criogenicamente crio-focusing
CROMATOGRAFIA GASOSA
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CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
COMPONENTES Forno
compartimento onde se localiza a coluna
alta estabilidade trmica: 0,01C
ampla faixa de temperatura: at 450C
disponibilidade de criogenia: <100C
temperatura independentes do injetor e detetor
boa taxa de aquecimento
boa taxa de resfriamento
facilidade de acesso coluna
sistemas de segurana
CROMATOGRAFIA GASOSA
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COMPONENTES Colunas Cromatogrficas
onde ocorre a separao dos componentes
Propriedades:
natureza do tubo
suporte slido
tipo de fase estacionria
quantidade de fase estacionria
mtodo de enchimento
comprimento
temperatura
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COMPONENTES Colunas Cromatogrficas
C = 2 a 4 mm
L = 0,5 m a 5 m
C = 0,2 a 0,7 mm
L = 5 m a 100 m
EMPACOTADA
ou RECHEADA
CAPILAR
ou TUBULAR ABERTA
CROMATOGRAFIA GASOSA
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EMPACOTADA ou RECHEADA
suporte slido
FE lquida
COMPONENTES Colunas Cromatogrficas
CROMATOGRAFIA GASOSA
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CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
COMPONENTES Colunas Cromatogrficas
EMPACOTADA
Fceis de fazer e usar com baixo custo
Material: ao inox, vidro, nquel e teflon
FE: slida ou lquida em suporte slido (diatomcea)
Esqueletos fsseis
Chromosorb, Anachrom etc.
secagem
calcinao
fuso com soda
lavagem com cido
silanizao
CROMATOGRAFIA GASOSA
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COMPONENTES Colunas Cromatogrficas
CAPILAR
parede do capilar
filme
caminho
da FM e
da
amostra
CROMATOGRAFIA GASOSA
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COMPONENTES Colunas Cromatogrficas
COMPARAES
EMPACOTADA CAPILAR
Comprimento 0,5 a 5 m 5 a 50 m
| interno 2 a 4 mm 0,2 a 0,7 mm
vazo FM 10 a 60 mL/min 0,5 a 5 mL/min
Largura dos picos largos estreitos
Quant. de analito 10 g/pico 50 ng/pico
Quant. de amostra 0,1 a 10 L 0,1 a 3 L
Pratos tericos 2.000 a 5.000 > 200.000
Capacidade 100 g/pico 100 ng/pico
Preo < R$ 600 > R$ 2.000
CROMATOGRAFIA GASOSA
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CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
COMPONENTES Colunas Cromatogrficas
COMPARAES
Empacotada
Capilar
CROMATOGRAFIA GASOSA
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CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
COMPONENTES Colunas Cromatogrficas
Fases Estacionrias
LQUIDOS: Depositados sobre a superfcie de slidos
porosos inertes (colunas empacotadas) ou de tubos finos de
materiais inertes (colunas capilares)
FE
lquida
SUPORTE
Slido inerte
poroso
Tubo capilar de
material inerte
SLIDOS: Colunas recheadas com material finamente
granulado (empacotadas) ou depositado sobre a superfcie
interna do tubo (capilar)
CROMATOGRAFIA GASOSA
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CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
COMPONENTES Colunas Cromatogrficas
Propriedades de uma FE
Seletiva: = interao com cada componente da amostra




Temperatura: deve suportar uma ampla faixa
Estabilidade: qumica e trmica
Pureza: colunas reprodutveis
baixa alta
CROMATOGRAFIA GASOSA
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CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
COMPONENTES Colunas Cromatogrficas
Processo de Separao
FE slida: fenmeno da adsoro que ocorre
na interface FM-FE
FE
FM
CROMATOGRAFIA GASOSA
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CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
COMPONENTES Colunas Cromatogrficas
Processo de Separao
FE lquida: fenmeno da absoro que ocorre
dentro da FE
FE
FM
CROMATOGRAFIA GASOSA
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CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
COMPONENTES Colunas Cromatogrficas
COMO ESCOLHER UMA COLUNA ?
1- No hesite em perguntar para algum experiente
2- Catlogos de fabricantes de colunas
(mtodo X coluna Y)
3-Peridicos especializados
(certamente algum j fez a anlise desejada)
4- Usar as colunas genricas


CROMATOGRAFIA GASOSA
Srgio Machado Corra
CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
COMPONENTES Colunas Cromatogrficas
COLUNAS GENRICAS
PROPRIEDADE CAPILAR RECHEADA
Fase Estacionria DB-1 OV-101
Capacidade 0,25 m 3%
Comprimento 25 m 1 m
| interno 0,25 mm 2,0 mm
Faixa de T 60-320C 100-300C
CROMATOGRAFIA GASOSA
Srgio Machado Corra
CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
COMPONENTES Colunas Cromatogrficas
ESCOLHA DAS CARACTERSTICAS FSICAS

1. Dimetro interno
2. Comprimento
3. Espessura do filme
4. Composio da fase estacionria
5. Vazo
CROMATOGRAFIA GASOSA
Srgio Machado Corra
CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
COMPONENTES Colunas Cromatogrficas
ESCOLHA DAS CARACTERSTICAS FSICAS
1. Dimetro interno
- podem variar de 0,15 a 0,53 mm
- as mais comuns so de 0,25 e 0,32 mm

RESOLUO
+
RAPIDEZ
+
CAPACIDADE
+
FACILIDADE
=
BOA COLUNA
CROMATOGRAFIA GASOSA
Srgio Machado Corra
CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
COMPONENTES Colunas Cromatogrficas
ESCOLHA DAS CARACTERSTICAS FSICAS
1. Dimetro interno
| interno Resoluo Rapidez Capacidade Facilidade
100 m muito boa
muito
boa
baixa baixa
250 a 320 m boa boa boa boa
530 m baixa boa muito boa muito boa
CROMATOGRAFIA GASOSA
Srgio Machado Corra
CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
COMPONENTES Colunas Cromatogrficas
ESCOLHA DAS CARACTERSTICAS FSICAS
2. Comprimento
N de pratos tericos proporcional a L
Resoluo proporcional a L
1/2

Tempo de reteno proporcional a L

Comprimento Resoluo Rapidez
50 - 100 m alta baixa
25 - 30 m boa boa
5 - 10 m mdia alta
CROMATOGRAFIA GASOSA
Srgio Machado Corra
CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
COMPONENTES Colunas Cromatogrficas
ESCOLHA DAS CARACTERSTICAS FSICAS
3. Espessura da FE

FILMES POUCO ESPESSOS
- espessuras mais comuns: 0,25 e 0,32 m
- filme fino = baixo sangramento da coluna
- sangramento proporcional quantidade
de FE
- a resoluo e rapidez passam a serem
controladas pela vazo

CROMATOGRAFIA GASOSA
Srgio Machado Corra
CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
COMPONENTES Colunas Cromatogrficas
ESCOLHA DAS CARACTERSTICAS FSICAS
3. Espessura da FE

FILMES ESPESSOS
- bons para componentes volteis
- bons para amostras com mais de 50
componentes
- requer maior quantidade de amostra
- requer maior temperatura = sangramento
- requer maior comprimento para compensar
a perda de pratos tericos

CROMATOGRAFIA GASOSA
Srgio Machado Corra
CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
COMPONENTES Colunas Cromatogrficas
ESCOLHA DAS CARACTERSTICAS FSICAS
4- Fase Estacionria Lquida CGL
Requisitos
baixa presso de vapor
estabilidade trmica
viscosidade adequada
deve interagir com os componentes da
amostra a serem analisados
EXISTEM CENTENAS DE POSSIBILIDADES, O
QUE TORNA A ESCOLHA COMPLICADA.
CROMATOGRAFIA GASOSA
Srgio Machado Corra
CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
ESCOLHA DAS CARACTERSTICAS FSICAS
COMPONENTES Colunas Cromatogrficas
4- Fase Estacionria Lquida CGL
REGRA GERAL:
SEMELHANTE DISSOLVE SEMELHANTE


MUITAS VARIVEIS ENVOLVIDAS:
polaridade
ponto de ebulio
presso de vapor
capacidade de reteno
CROMATOGRAFIA GASOSA
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CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
ESCOLHA DAS CARACTERSTICAS FSICAS
COMPONENTES Colunas Cromatogrficas
4- Fase Estacionria Lquida CGL
MAIS COMUNS:
ESQUALANO (C
30
H
62
)
baixa polaridade
T
mx
= 125C

APOLANO (C
87
H
176
)
ligeiramente mais polar que o Esqualano
T
mx
= 185C
CROMATOGRAFIA GASOSA
Srgio Machado Corra
CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
ESCOLHA DAS CARACTERSTICAS FSICAS
4- Fase Estacionria Lquida CGL

DIMETIL SILICONE (OV-1 ou OV-101)
mais polar que o Apolano
Varian Agilent J&W Restek SGE Supelco
CP-Sil 5 CB HP-1 DB-1 Rtx-1 BP-1 SPB-1
CP-Sil 8 CB HP-5 DB-5 Rtx-5 BP-5 SPB-5
CP-Sil 24 CB HP-17
DB-
17
Rtx-50 BP-50 -
COMPONENTES Colunas Cromatogrficas
CROMATOGRAFIA GASOSA
Srgio Machado Corra
CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
COMPONENTES Colunas Cromatogrficas
ESCOLHA DAS CARACTERSTICAS FSICAS
5- Vazo da FM

- obter a vazo tima para menor largura de
pico
- hidrognio a melhor opo para filmes
finos
- faixa de trabalho: 1,0 a 3,0 mL/min
CROMATOGRAFIA GASOSA
Srgio Machado Corra
CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
COMPONENTES Detetores
~ 60 detectores j usados em CG
~ 15 equipam cromatgrafos comerciais
5 respondem por mais de 95% das aplicaes
DCT TCD
Detector por
Condutividade
Trmica
DIC FID
Detector por
Ionizao em
Chama
DCE ECD
Detector por
Captura de
Eltrons
DSM MSD
Detector Seletivo
de Massas
DNP NPD
Detector de
Nitrognio e
Fsforo
Srgio Machado Corra
CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
COMPONENTES Detetores
POSIO: ao final da coluna cromatogrfica
FUNO: medir a concentrao do analito

Na verdade, detetores so transdutores, gerando
um sinal eltrico proporcional quantidade de
molculas de analito.
O sinal eltrico ento enviado a um sistema de
coleta de dados que ento amplifica, trata e
ento gera o cromatograma.
Srgio Machado Corra
CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
COMPONENTES Detetores
CLASSIFICAO

1. CONCENTRAO x VAZO

2. SELETIVO x UNIVERSAL

3. DESTRUTIVO x NO DESTRUTIVO
Srgio Machado Corra
CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
COMPONENTES Detetores
Condutividade Trmica
Concentrao Universal No
destrutivo
Ionizao na Chama
Vazo Universal Destrutivo
Captura de Eltrons
Concentrao Halognios No
destrutivo
Nitrognio e Fsforo
N, P e
halognios
Seletivo de Massas
Seletivo
Srgio Machado Corra
CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
COMPONENTES Detetores
Caractersticas Desejveis
resposta rpida para soluto na FM
resposta linear
sensibilidade
estabilidade
facilidade de uso
baixa manuteno
baixo custo
baixo rudo
Srgio Machado Corra
CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
COMPONENTES Detetores
Caractersticas Desejveis:
quantidade mnima detectvel
S
I
N
A
L

(
S
)

RUDO (N)
= 3
S
N
RUDO: gerado pelo detector que no se origina da amostra
Fontes
de
Rudo
Contaminantes nos gases
Impurezas acumuladas no detector
Aterramento eltrico deficiente
Srgio Machado Corra
CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
COMPONENTES Detetores
Caractersticas Desejveis
resposta rpida para soluto na FM
63,2% FSD
t
TEMPO
S
I
N
A
L

Tempo decorrido entre a entrada do analito na cela do detector
e a gerao do sinal eltrico.
Srgio Machado Corra
CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
COMPONENTES Detetores
Caractersticas Desejveis
resposta linear
MASSA

R
E
A

A partir de
certo ponto o
sinal no
aumenta mais
linearmente
Srgio Machado Corra
CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
COMPONENTES Detetores
Caractersticas Desejveis
sensibilidade
MASSA

R
E
A

Fator de Resposta, S:
inclinao da reta rea do
pico x Massa do analito
Srgio Machado Corra
CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
DETETOR DE IONIZAO NA CHAMA DIC
o detetor mais comum
PRINCPIO: Formao de ons quando um composto
queimado em uma chama de hidrognio e oxignio a mais de
2000C, formando um plasma temporrio.
300V
Srgio Machado Corra
CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
DIC Qumica da Chama
Incandescncia
Reao
Quebra
Estrutura da chama
trs regies bsicas
Regio de quebra Mistura dos gases, pr-aquecimento, incio da quebra
das molculas de H
2
, O
2
e dos analitos.
Zona de reao Reaes exotrmicas com produo e/ou consumo de
radicais H, O, OH, HO
2
(provenientes do H
2
), CH e C
2
(proveniente do
analito) e ons CHO
+
(analito).
Zona de incandescncia Emisso de luz por decaimento de espcies
excitadas: OH (luz UV), C
H
e C2 (visvel).
> 2000C
Srgio Machado Corra
CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
COLETOR
FLAME TIP
BLOCO
AR
H
2

COLUNA
O ar e o H
2
se misturam ao
efluente da coluna e queimam:
Uma ddp aplicada entre o
flame tip e o coletor - quando se
formam ons na chama, gerada
uma corrente eltrica:
DIC - Funcionamento
Srgio Machado Corra
CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
SELETIVIDADE: Seletivo para substncias que contm ligaes
C-H em sua estrutura qumica (universal).
Compostos que NO produzem resposta no DIC:
Gases nobres
H
2
, O
2
, N
2

CO, CO
2
, CS
2

CCl
4
, peralogenados
NH
3
, N
x
O
y

SiX
4
(X = halognio)
H
2
O
HCOOH, HCHO *
DIC - Caractersticas
Detetor de Ionizao na Chama
Srgio Machado Corra
CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
FATORES DE RESPOSTA O fator de resposta de um determinado
composto aproximadamente proporcional ao nmero tomos de
carbono. Presena de heteroelementos diminui o fator de resposta.
Nmero Efetivo de Carbonos (NEC)
tomo X
C aliftico +1,00
C aromtico +1,00
C olefinco +0,95
C carbonila +0,00
O lcool prim. -0,60
Cl aliftico -0,12
(X =Contribuio de cada
tomo ao NEC)
C
2
H
6
NEC = 2,00
C
2
H
5
OH NEC = 1,40
CH
3
CHO NEC = 1,00
Mistura equimolares de:
Detetor de Ionizao na Chama
DIC - Caractersticas
Srgio Machado Corra
CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
Mnima Quantidade Detectvel: 10
-11
g (>50 ppb)
Resposta: hidrocarbonetos
Linearidade: excelente at 10
6
Estabilidade: excelente
T mnima: 125C (evitar condensao de gua)
T mxima: 400C
Fase Mvel: nitrognio, hidrognio ou hlio
DIC Condies Usuais
Srgio Machado Corra
CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL

DIC Aplicaes
Hidrocarbonetos em geral
Derivados do petrleo
Amostras ambientais
BTEX, PCA, HC oxigenados etc
Amostras desconhecidas
Avaliaes preliminares
Srgio Machado Corra
CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
PRINCPIO: Variao na condutividade trmica da FM e analito.
A taxa de transferncia de calor entre um
corpo quente e um corpo frio depende da
condutividade trmica do gs no espao que
separa os corpos
Se a condutividade trmica do gs diminui, a
quantidade de calor transferido tambm
diminui e o corpo quente se aquece.
DETETOR DE CONDUTIVIDADE TRMICA - DCT
Srgio Machado Corra
CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
Cela de Deteco do DCT:
1
2
3
5
4
i
1 Bloco metlico (ao)
2 Entrada de gs de arraste
3 Sada de gs de arraste
4 Filamento metlico (liga W-Re)
aquecido
5 Alimentao de corrente eltrica
para aquecimento do filamento
DCT - Funcionamento
Srgio Machado Corra
CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
CELAS DA AMOSTRA
CELAS DE
REFERNCIA
C
O
R
T
E

S
U
P
E
R
I
O
R

CELAS DA
AMOSTRA
CELAS DE
REFERNCIA
C
O
R
T
E

L
A
T
E
R
A
L

DCT - Funcionamento
Diferena de resistncia eltrica entre os
filamentos de amostra e referncia
Srgio Machado Corra
CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
Os filamentos do DCT so montados numa ponte de Wheatstone que
transforma a diferena de resistncia numa diferena de voltagem:
V Bateria
F Ajuste da corrente
I Medida da corrente
B
1
B
2
Ajuste de zero
R
1
R
2
Filamentos de referncia
A
1
A
2
Filamentos da amostra
DCT - Funcionamento
Srgio Machado Corra
CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
DCT - Caractersticas Operacionais
SELETIVIDADE: Observa-se sinal para qualquer substncia eluida
diferente do gs de arraste = UNIVERSAL
VAZO DE GS DE ARRASTE: O sinal proporcional
concentrao do analito no gs de arraste que passa pela cela
de amostra.
Com DCT, a rea dos picos cromatogrficos MUITO
dependente da vazo do gs de arraste !!!
QUANTO MENOR A MASSA MOLECULAR DO GS DE
ARRASTE, MAIOR A RESPOSTA
NATUREZA DO GS DE ARRASTE Quanto maior a diferena entre
a condutividade trmica do gs de arraste puro e do analito maior a
resposta.
Srgio Machado Corra
CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
Gs de arraste com DCT: He ou H
2

outro
gs
1
2
He ou H
2

1
2
1
Usando He ou H
2
como gs de arraste o sinal
maximizado: MAIOR RESPOSTA
2
Com outros gases, eventualmente ocorre
queda no sinal: PICOS NEGATIVOS
DCT - Caractersticas Operacionais
Srgio Machado Corra
CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
Mistura de quantidades
equimolares de:
Etano = 17,5
Clorofrmio = 6,0
Etanol = 12,7
C
2
H
6

CHCl
3

C
2
H
5
OH
DCT - Sensibilidade
Srgio Machado Corra
CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
Separao e quantificao de compostos que no geram sinal em
outros detectores (gases nobres, gases fixos)
Coluna: CP Sil 5CB
(50 m x 0.32 mm x 5 m)
Gs de Arraste: He @ 3 mL.min
-1
T
COL
: 40C Detector: DCT
1 N
2
2 CH
4

3 CO
2
4 n-C
2

5 NH
3
6 n-C
3

7 i-C
4
8 n-C
4

Separao de Gases Fixos e Hidrocarbonetos:
DCT - Aplicaes
Srgio Machado Corra
CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
DCT Condies Usuais
Mnima Quantidade Detectvel: 10
-9
g (>10 ppm)
Resposta: universal
Linearidade: at 10
4
Estabilidade: boa
T: altamente sensvel
T mxima: 400C
Fase Mvel: hlio
Srgio Machado Corra
CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
PRINCPIO Supresso de um fluxo de eltrons
lentos (termais) causada pela sua absoro por
espcies eletroflicas
Um fluxo contnuo de
eltrons lentos
estabelecido entre um
ando (fonte radioativa
| -emissora) e um catodo.
Na passagem de uma
substncia eletroflica
alguns eltrons so
absorvidos, resultando
uma supresso de
corrente eltrica.
DETETOR DE CAPTURA DE ELTRONS - DCE
Srgio Machado Corra
CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
1
2
3
4
5
1 Anodo (fonte radioativa | - emissora)
2 Sada de gases
3 Catodo
4 Cavidade
5 Coluna cromatogrfica
DCE - Estrutura
Srgio Machado Corra
CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
1 Gerao de eltrons pela interao entre a radiao |,
molculas do gs de arraste G e molculas de bloqueador Q
|
-
+ G G
+
+ e
-
+ e* energia
|
-
+ G G* + Q G + e
-
+ Q energia
2 Eltrons lentos so capturados pela espcie eletroflica AB
AB + e
-
AB
-
+ energia
O decrscimo na corrente eltrica fluindo pela cela de deteco
proporcional concentrao da espcie.
DCE - Mecanismo de Funcionamento
Srgio Machado Corra
CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
O ando dopado com um istopo radioativo |
-
emissor
Emprego universal em DCE comerciais:
3
H (|
-
, 0,02 MeV)
Sob a forma de Ta
3
H
3

T
det
deve ser <225C
Maior sensibilidade
63
Ni (|
-
, 0,06 MeV)
Usado como
63
Ni
Maior linearidade
til at ~400
o
C
63
Ni preferido em
equipamentos
modernos
- Maior durabilidade (t
1/2
= 100 a x 12 a para
3
H)
- Maior estabilidade trmica
- Menor risco de uso (radioatividade)
DCE - Fonte Radioativa
Srgio Machado Corra
CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
Dependncia do sinal com T de operao bastante significativa
Variao de 3
o
C na temperatura
Erro de ~ 10% na rea dos picos
Magnitude e sinal do erro depende do composto analisado !
TEMPERATURA DO DCE DEVE SER
RIGIDAMENTE CONTROLADA
DCE - Temperatura do Detector
Srgio Machado Corra
CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
Funcionamento do DCE muito dependente
da natureza do gs de arraste
MAIS USADOS:
N
2

Ar + 5% CH
4

Geram eltrons lentos
quando bombardeados
com |
-

O gs deve ser o mais puro possvel !!!
(traos de H
2
O e O
2
comprometem o sinal do DCE)
DCE - Fase Mvel
Srgio Machado Corra
CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
O DCE O DETECTOR PREFERENCIAL PARA ANLISES DE
TRAOS DE ORGANOHALOGENADOS E SIMILARES
hidrocarbonetos e esteres alifticos, dienos
lcoois, cetonas e aldedos alifticos, aminas, nitrilas, mono - Cl, mono - F
enis, oxalatos, mono - Br, di - Cl, hexa - F
tri - Cl, cloretos de cidos, alquil - Pb, anidridos
mono - I, di - Br, tri - Cl, mono - nitro, CS
2

di - I, tri - Br, poli - Cl, di - nitro, 1,2 - dicetonas, fumaratos, organo - Hg
S tpicos (clorobenzeno: S = 1) DCE - Seletividade
Srgio Machado Corra
CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
DIC
DCE
1, 2, 3 - Hidrocarbonetos aromticos
4, 5, 6 - Hidrocarbonetos clorados
DCE - Aplicaes: HC em ar atmosfrico
Srgio Machado Corra
CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
DCE - Aplicaes
Pesticidas (principal)
Borrachas cloradas
Organoclorados em geral
Srgio Machado Corra
CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
DCE Condies Usuais
Mnima Quantidade Detectvel: 10
-12
g
Resposta: altamente seletivo
Linearidade: at 10
4
Estabilidade: ruim
Srgio Machado Corra
CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
DETETOR DE NITROGNIO E FSFORO - DNP
Anteriormente conhecido como AFID (alkaline
flame ionization detector), por ser um DIC com
um leito de sal alcalino.
Em seguida foi chamado de TID (thermionic
ionization detector), e outros nomes.
Basicamente um DIC onde a chama entra em
contato com uma prola de sal de rubdio.
Ao ser aquecido, o Rb vai para a fase gasosa e
na presena de N ou P, forma-se CN e PO ou
PO
2
, que ionizam o Rb e descarregam no
coletor.
Srgio Machado Corra
CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
DNP - Estrutura
Prola de
Rubdio
Srgio Machado Corra
CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
FAIXA DE TRABALHO DOS DETETORES
1E-14 1E-11 1E-8 1E-5 0,01
DCT
DIC
DCE
DNP
DSM
quantidade detectvel (g)
SIM SCAN
Srgio Machado Corra
CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
DETETOR SELETIVO DE MASSAS - DSM
A CG-EM uma tcnica que combina:
o poder de separao da cromatografia
a capacidade de identificar substncias
a
b
u
n
d

n
c
i
a

tempo
Srgio Machado Corra
CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
DETETOR SELETIVO DE MASSAS - DSM
HISTRICO

1913 J.J. Thompson: separao de istopos
1959 Gohlke: acoplamento com CG
anos 80: equipamentos comerciais
anos 90: desejo de 10 em 10 analistas
Srgio Machado Corra
CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
DETETOR SELETIVO DE MASSAS - DSM
EQUIPAMENTO DA CG-EM
amostra
cromatograma
fragmentograma
CG EM
US$ 40 mil
Srgio Machado Corra
CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
DETETOR SELETIVO DE MASSAS - DSM
O QUE OCORRE NO DSM ?
IONIZAO
FRAGMENTAO
DETECO
ABCD + e
-
ABCD-
+
+ 2e
-
ABCD-
+
AB- + CD
+
ABCD-
+
AB
+
+ CD-
ABCD-
+
ACD
+
+ B-
ABCD-+
CD+
ACD+
Srgio Machado Corra
CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
DSM - Componentes
SISTEMA
DE DADOS

CG

ANALISADOR
B
O
M
B
A
vcuo
detetor
interface
fonte de ionizao
Srgio Machado Corra
CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
DSM - Componentes
DESCARTE
DSM
split
CG
100 partes 1 parte
Diviso da Amostra
a interface deve ser capaz de remover a FM e
deixar entrar apenas uma poro da amostra.
Srgio Machado Corra
CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
DSM Componentes Tipos de Interface
SEPARADOR MOLECULAR
VCUO
CG DSM
VANTAGEM
simples e
barato
DESVANTAGEM
seletividade
depende do PM
fase mvel
analito
Srgio Machado Corra
CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
DSM Componentes Tipos de Interface
INTERFACE DE PERMEAO
Membrana seletiva por polaridade ou PM
Resposta lenta
Pouca entrada de analito
membrana
para o DSM
Srgio Machado Corra
CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
DSM Componentes Tipos de Interface
RESTRITOR DE FLUXO
CG DSM
restritor de fluxo
sada de Hlio entrada de Hlio
liner
Srgio Machado Corra
CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
final da
coluna
capilar
fonte de ionizao
DSM Componentes Tipos de Interface
INTERFACE DIRETA P/ CAPILAR
Srgio Machado Corra
CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
DSM Componentes Sistema de Vcuo
A necessidade do vcuo:
aumentar o livre caminho mdio, que o
caminho percorrido por ons e molculas
antes de colidir
um grande livre caminho mdio conduz a
uma fragmentao previsvel e reprodutvel
o vcuo empregado costuma ser da ordem
de 10
-4
Torr podendo chegar a 10
-6
Torr
Srgio Machado Corra
CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
DSM Componentes Sistema de Vcuo
1 estgio do vcuo:
bomba rotativa
10
-2
a 10
-3
Torr

2 estgio do vcuo:
bomba turbomolecular ou difusora
10
-5
Torr
Srgio Machado Corra
CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
DSM Componentes Sistema de Vcuo
BOMBA TURBOMOLECULAR
opera de 30.000 a 90.000 rpm
funciona como uma turbina
lminas rotativas
lminas fixas
p/ pr-vcuo
eixo
motor
Srgio Machado Corra
CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
DSM Componentes Sistema de Vcuo
BOMBA DIFUSORA
aquecedor
refrigerao
aspersores
p/ pr-vcuo
entrada
Srgio Machado Corra
CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
DSM Tipos de Ionizao
Impacto de Eltrons (EI)
Ionizao Qumica (CI)
Bombardeamento por tomos
Rpidos (FAB)
Ionizao por Campo
Desoro por Plasma
a
u
m
e
n
t
o

d
a

e
n
e
r
g
i
a


e

d
a

f
r
a
g
m
e
n
t
a

o

mais usados
Srgio Machado Corra
CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
DSM Tipos de Ionizao
e- de baixa energia
Ionizao por Impacto de Eltrons
Srgio Machado Corra
CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
DSM Tipos de Ionizao
Ionizao por Impacto de Eltrons
lentes
Srgio Machado Corra
CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
DSM Tipos de Ionizao
Ionizao por Ionizao Qumica
amostra
final da coluna
lentes
magneto
filamento
feixe de e
-
anodo/alvo
Srgio Machado Corra
CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
DSM Tipos de Ionizao
Mecanismos da Ionizao Qumica
Troca de Carga
He
+
+ M He + M
+
Acido/Base com metano
CH
5
+
+ M CH
4
+ MH
+
CH
5
+
+ MH CH
4
+ M
+
Acido/base com gua
OH
-
+ MH H
2
O + M
-
Adio de alquila
C
2
H
5
+
+ M MC
2
H
5
+
Srgio Machado Corra
CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
DSM Analisadores de Massa
Magntico
Eletrosttico
Tempo de Vo
Filtro de Massa Quadrupolo
Estoque de ons Quadrupolo (ion trap)
mais comuns
Srgio Machado Corra
CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
DSM Analisadores de Massa
Quadrupolo
fonte de
ionizao
analisador
quadrupolo
lentes

detetor
Srgio Machado Corra
CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
DSM Analisadores de Massa
Quadrupolo
consiste em quatro fios
operam em pares com
potenciais definidos
somente ons com
razo massa/carga
definida atravessam
o eixo Z
Srgio Machado Corra
CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
DSM Analisadores de Massa
Armadilha de ons Ion Trap
filamento
entrada de e
-
passagem dos ons

detetor

Srgio Machado Corra
CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
DSM Deteo dos ons
Uma vez separados os ons, o detetor
gera um sinal eltrico
O mais usado o multiplicador de
eltrons
um detetor do tipo diodo contnuo
DESCRIO DO DETETOR
Srgio Machado Corra
CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
DSM Deteo dos ons
A parte interior do detetor um
material que emite eltrons
Quando um on colide com o
este material, vrios eltrons
so ejetados
A cada choque mais eltrons
so emitidos
1
2
3
4
5
on
COMO FUNCIONA
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CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
DSM Fragmentograma Tpico do Hexano
CH
3
CH
2
CH
2
CH
2
CH
2
CH
3
+e
-
[CH
3
CH
2
CH
2
CH
2
CH
2
CH
3
]
+-


CH
3
CH
2
CH
2
CH
2
CH
2
+
CH
3
CH
2
CH
2
CH
2
+
CH
3
CH
2
CH
2
+
CH
3
CH
2
+

M/Z 71 57 43 29

Srgio Machado Corra
CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
DSM Fragmentograma Tpico do Hexano
Srgio Machado Corra
CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
DSM Modos de Aquisio de Dados
SIM monitoramento de alguns fragmentos
aumento da sensibilidade
altamente seletivo
pequeno arquivo de dados
evita-se o solvente
anlise de rotina pode omitir compostos
cromatograma mais limpo

SCAN monitoramento de todos os fragmentos
diminuio da sensibilidade
no seletivo
grande arquivo de dados
problema com o solvente
bom para anlises preliminares
cromatograma complexo
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SISTEMA DE AQUISIO DE DADOS
Sem um SAD no haveria como manipular os dados
gerados por um DSM
Baixo custo

REQUISITOS
controlar as operaes do CG e DSM
ajustar o DSM
receber e armazenar os dados
controlar o hardware

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CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
AJUSTE DO DSM
Ao contrrio dos demais detetores, o DSM precisa ser
ajustado / calibrado periodicamente
O ajuste para calibrar o tempo de reteno em funo
da razo massa / carga
Tambm importante para otimizar a resposta e a
linearidade do detetor
O material de referncia o perfluortributilamina
(PFTBA)
Este ajuste depende de cada aparelho e devem ser
seguidas as recomendaes de cada fabricante.
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LIMPEZA DO DSM
O DSM deve sofrer uma limpeza peridica
Depende muito do tipo de amostra analisada e das
condies de operao do CG
Os primeiros sinais so perda de intensidade de sinal
para massas pesadas
um processo difcil, demorado e requer sala limpa
Para cada tipo de equipamento um processo nico
Deve ser feito nas primeiras vezes pelo fabricante
Aps alguns acompanhamentos possvel ser
realizado por um tcnico local habilidoso
Se for mal feito pode inutilizar o equipamento
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ANLISE QUALITATIVA
Comparao do t
r
do padro com o t
r
da amostra
um processo arriscado, podendo haver duas substncias
diferentes com o mesmo t
r

Estima-se mais de 30.000 compostos usuais em CGAR
Deve-se analisar o padro e amostra nas mesmas
condies, no menor intervalo de tempo possvel.
Na dvida deve-se fazer a comparao em condies
diferentes, em especial colunas diferentes ou detetores
diferentes.
O ideal dispor de um DSM
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CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
ANLISE QUANTITATIVA
Como medir a rea do pico ?

1. Cortar e pesar
2. Triangulao
3. Planmetro
4. Integrador eletrnico
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ANLISE QUANTITATIVA
a comparao entre a rea de um pico da
amostra com a rea de um padro.

Existem 5 tcnicas bsicas:
1. Normalizao de reas
2. Normalizao de reas com Fatores de Resposta
3. Normalizao Externa (Curva de Calibrao)
4. Normalizao Interna (Padro Interno)
5. Adio de Padro
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ANLISE QUANTITATIVA
1- Normalizao de reas
A
B
C
100 % x
Area Area Area
Area
A
C B A
A
(

+ +
=
100 % x
Area
Area
X
i
X
X
(
(
(

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CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
ANLISE QUANTITATIVA
1- Normalizao de reas
Independe do uso de padres
Todos os componentes devem ter sido detectados
Todos os componentes devem ter sido eludos
Todos os componentes devem ter a mesma
sensitividade

Raramente usado pois as condies acima devem
ser satisfeitas conjuntamente.
Srgio Machado Corra
CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
ANLISE QUANTITATIVA
2- Normalizao de reas - Fatores de Resposta
1 Etapa:
Fazer cromatograma dos padres de igual concentrao

2 Etapa
Obter as reas de cada padro

3 Etapa
Obter os fatores de resposta em relao a um dos padres
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CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
ANLISE QUANTITATIVA
3 Etapa
Obter os fatores de resposta em relao a um dos padres


4 Etapa
Calcular o teor de cada componente
referncia
X
X
Area
Area
f =
100
) . (
.
% x
f Area
f Area
X
i
X X
X X
(
(
(

2- Normalizao de reas - Fatores de Resposta


Srgio Machado Corra
CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
ANLISE QUANTITATIVA
Depende do uso de padres
Todos os componentes devem ter sido detectados
Todos os componentes devem ter sido eludos
Todos os componentes devem ter a mesma
sensitividade

Difcil de ser usado pois as condies acima devem
ser satisfeitas conjuntamente.
2- Normalizao de reas - Fatores de Resposta
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3- Normalizao Externa - Curva de Calibrao
ANLISE QUANTITATIVA
0,5 ppb
1,0 ppb
2,0 ppb
3,0 ppb
hexano
1 Etapa
Passar padres
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ANLISE QUANTITATIVA
2 Etapa
Construir Curva de Calibrao

3 Etapa
Obter a equao da reta

0,0 0,5 1,0 1,5 2,0 2,5 3,0 3,5
0
2
4
6
8
10
12
14
16
Sinal = 0,111 + 4,591 * Concentrao
S
i
n
a
l

(
m
V
)
Concentrao de Hexano (ppb)
mV = 0,111 + 4,591 x ppb
3- Normalizao Externa - Curva de Calibrao
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CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
ANLISE QUANTITATIVA
4 Etapa
Analisar a amostra

5 Etapa
Obter o sinal do analito

6 Etapa
Interpolar a concentrao
da amostra


0,0 0,5 1,0 1,5 2,0 2,5 3,0 3,5
0
2
4
6
8
10
12
14
16
Sinal = 0,111 + 4,591 * Concentrao
S
i
n
a
l

(
m
V
)
Concentrao de Hexano (ppb)
mV
amostra
= 0,111 + 4,591 x ppb
amostra

3- Normalizao Externa - Curva de Calibrao
Srgio Machado Corra
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ANLISE QUANTITATIVA
No necessrio detectar todos os componentes
Deve-se trabalhar na faixa linear da curva de calibrao
o mtodo mais empregado
Pode ser implementado nos sistema de aquisio
Pode ocasionar problemas para amostras complexas (= t
R
)
3- Normalizao Externa - Curva de Calibrao
Srgio Machado Corra
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4- Normalizao Interna - Padro Interno
ANLISE QUANTITATIVA
Usado em situaes no reprodutveis
Usado quando no possvel calibrar frequentemente

ESCOLHA DO PADRO INTERNO:
Deve eluir prximo ao pico de interesse
Ser similar quimicamente e no reagir com os demais
Deve ser disponvel em alta pureza
Deve ser injetado em teores prximos ao analito
Srgio Machado Corra
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4- Normalizao Interna - Padro Interno
ANLISE QUANTITATIVA
As etapas so
similares Curva de
Calibrao com a
adio do PI tanto na
curva de calibrao
quanto na amostra.
Uma vez elaborada a
curva do padro
contra o PI s
necessrio o uso
regular do PI na
amostra.

0,0 0,5 1,0 1,5 2,0 2,5 3,0 3,5
0
2
4
6
8
10
12
14
16
Sinal = 0,111 + 4,591 * Concentrao
S
i
n
a
l

(
m
V
)
Concentrao de Hexano (ppb)
C
PI
/C
padro
A
r
e
a
P
I
/
A
r
e
a
p
a
d
r

o

amostra
Srgio Machado Corra
CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
5- Adio de Padro
ANLISE QUANTITATIVA
amostra
adies de
padro
Os padres
so injetados
em pores da
amostra
aumentando o
pico do
analito.
Resolvido
graficamente
Srgio Machado Corra
CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
PROGRAMAO DA TEMPERATURA
a variao da temperatura da coluna cromatogrfica
durante uma anlise.
de grande importncia para otimizar um
cromatograma
Temperatura um dos dois parmetros mais
importantes em uma anlise cromatografia, o segundo
a fase estacionria.
Tempos de reteno sempre diminuem com o aumento
da temperatura pois a presso de vapor decresce com
o logaritmo da T:
cte
RT
H
P
o
+
A
=
3 , 2
log
Srgio Machado Corra
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PROGRAMAO DA TEMPERATURA
Geralmente, ao se aumentar a Temperatura:
+ tempo de reteno
+ fator de reteno
+ seletividade
| eficincia
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PROGRAMAO DA TEMPERATURA
EXEMPLO DA SEPARAO DE QUEROSENE
Isotrmico a 150C
50 a 250C a 8C/min
Srgio Machado Corra
CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
PROGRAMAO DA TEMPERATURA
VANTAGENS

Boa ferramenta para investigaes preliminares
Diminuio do tempo de anlise
Melhor separao para comp. com grandes = em PE
Melhora no limite de deteco
Melhora na forma dos picos finais
Boa ferramenta de limpeza de colunas
Srgio Machado Corra
CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
PROGRAMAO DA TEMPERATURA
DESVANTAGENS

Instrumentao mais complicada
Aumento do rudo em altas temperaturas
Nmero limitado de FE para escolher
Problema de sangramento de colunas
Apesar da reduo do tempo de anlise,
necessrio aguardar esfriar a coluna para nova
injeo.
Srgio Machado Corra
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PROGRAMAO DA TEMPERATURA
INSTRUMENTAL NECESSRIO
Fase mvel seca
Programador de temperatura
Trs fornos separados (injetor, coluna e detector)
Controlador de fluxo
Fase estacionria adequada
baixa presso de vapor na faixa de trabalho de T
baixa viscosidade na faixa de trabalho de T
Srgio Machado Corra
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PROGRAMAO DA TEMPERATURA
VARIAO DA TEMPERATURA COM A PRESSO DE VAPOR
40 60 80 100 120 140 160 180 200
1
10
100
1000
heptano
propano
butano
pentano
hexano
P

T (C)
Srgio Machado Corra
CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
PROGRAMAO DA TEMPERATURA
TEORIA DA PTCG
Exemplo:
Determinar o aumento de temperatura necessrio para
reduzir o volume retido de 50%.
2
1
2
1
=
R
R
V
V
2 1 1
2
. .
.
2 ln ln
T T R
T H
P
P A A
= =
H
T R
T
A
= A
2
. . 693 , 0
Regra de Trouton:
23 =
A
ebulio
T
H
Para um PE de 500 K (227C):
C T 30 ~ A
preciso aumentar 30C
para reduzir o t
R
de 50%.
Srgio Machado Corra
CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
COMO EVITAR PROBLEMAS ?
FASE MVEL
Usar gases ultrapuros, mn 99,9% e 99,999% para DSM
Usar filtros para H
2
O e HC (principalmente CH
4
)
Usar filtro para O
2
para ECD e T alta em colunas capilares
Usar He ou H
2
para DCT ao invs do N
2
Usar He ou N
2
para DIC
Conhea a grfico de Van Deemter de sua coluna v
timo
Srgio Machado Corra
CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
COMO EVITAR PROBLEMAS ?
INJETOR
Tenha certeza que todos os componentes da amostra so
volteis
Tenha certeza do carter cido/bsico da amostra
Troque o septo a cada 20 injees
Faa limpeza regular com solventes volteis / ultrassom
Cuidado com T alta para no degradar a amostra
Usar liner corretamente

Srgio Machado Corra
CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
COMO EVITAR PROBLEMAS ?
COLUNA
Compre colunas de fabricantes confiveis
No tente fazer economia barata
Teste sua coluna regularmente contra um padro
Faa a limpeza da coluna regularmente:
Deixe durante a noite a coluna passando FM a uma T
30 abaixo da T limite
Corte os 5 cm iniciais uma vez por ms

Srgio Machado Corra
CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
COMO EVITAR PROBLEMAS ?
COLUNA CAPILAR
COMPRIMENTO
comear com 25m
DIMETRO INTERNO
comear com 0,25 ou 0,32 mm
FASE MVEL
comear com He ou H
2
ESPESSURA DO FILME
comear entre 0,2 e 0,5 m
Srgio Machado Corra
CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
COMO EVITAR PROBLEMAS ?
DETETOR
Usar a FM recomendada pelo fabricante e de boa pureza
Usar filtros
Mantenha o detetor aquecido mesmo fora de uso para
evitar condensao.
Manter o detetor coberto quando fora de uso para evitar
poeira
Evitar corrente de ar em cima dos detectores

Srgio Machado Corra
CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
COMO EVITAR PROBLEMAS ?
VAZAMENTOS
No apertar as juntas em excesso
Apertar com a mo e em seguida de volta
No reaproveitar anilhas de grafite
No usar bolhas de sabo para procurar vazamentos
Seguir o fluxo da FM desde o cilindro at o detetor

Srgio Machado Corra
CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
COMO EVITAR PROBLEMAS ?
Verificar regularmente a calibrao do medidor de vazo
com um medidor de bolhas de sabo
No colocar o medidor de vazo digital na sada dos
detetores em funcionamento
No abrir a porta do forno com a coluna em T alta
Usar estabilizadores de voltagem de boa qualidade
Usar um terra eletrnico
Evite usar o microcomputador para outras tarefas durante
a aquisio de dados
Lavar a seringa com solvente aps cada injeo
Srgio Machado Corra
CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
ERROS MAIS COMUNS
SINTOMA POSSVEL CAUSA REMEDIAO
fora desligada
fusvel queimado
detetor desligado
amplificador desligado
ausncia de FM
SAD no conectado
T baixa do injetor
seringa vazando
ligar a fora
trocar fusvel
ligar detetor
ajustar amplificador
ajustar a FM
conectar o SAD
aumentar T injetor
trocar seringa
ausncia de picos
Srgio Machado Corra
CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
ERROS MAIS COMUNS
SINTOMA POSSVEL CAUSA REMEDIAO
vazamento no septo
vazamento na coluna
chama do DIC apagada
ddp do detetor desligada
T baixa da coluna
trocar septo
trocar/apertar unies
checar a chama
ligar/medir a ddp
aumentar T coluna
ausncia de picos
Srgio Machado Corra
CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
ERROS MAIS COMUNS
SINTOMA POSSVEL CAUSA REMEDIAO
muita atenuao
pouca amostra
muito split
vazamento de seringa
vazamento de septo
baixa cond. trmica DCT
baixa resposta DIC

reduzir atenuao
aumentar a V
injeo
reduzir split
trocar seringa
trocar septo
aumentar a corrente
usar outro detetor
picos pequenos
sem alterar t
R
Srgio Machado Corra
CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
ERROS MAIS COMUNS
SINTOMA POSSVEL CAUSA REMEDIAO
vazamento de FM
vazamento no injetor
eliminar vazamento
eliminar vazamento


picos pequenos
com alterao
de t
R
Srgio Machado Corra
CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
ERROS MAIS COMUNS
SINTOMA POSSVEL CAUSA REMEDIAO
conexes trocadas
injeo na coluna
errada
MODE na posio
errada
inverter plos
injetar corretamente

verificar MODE


picos invertidos

Srgio Machado Corra
CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
ERROS MAIS COMUNS
SINTOMA POSSVEL CAUSA REMEDIAO
localizao do CG
falta de aterramento
coluna sangrando
vazamento de FM
detetor contaminado
FM com fluxo variando
H
2
ou Ar variando DIC
filamento defeituoso
DCT
evitar fluxo de ar
evitar cond. de ar
providenciar terra
abaixar T
localizar e corrigir
limpar e rinsar
verificar e corrigir
verificar e corrigir
trocar filamento

linha base irregular
em modo
isotrmico

Srgio Machado Corra
CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
ERROS MAIS COMUNS
SINTOMA POSSVEL CAUSA REMEDIAO
coluna contaminada


sangramento da coluna
cortar 10 cm
limpar a noite

usar menos filme
abaixar temperatura

aumento da linha
base em modo de
programao de
temperatura

Srgio Machado Corra
CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
ERROS MAIS COMUNS
SINTOMA POSSVEL CAUSA REMEDIAO
mudana da presso
ambiente

poeira no detetor


rudos na eletrnica


evitar ambientes
pressurizados

no usar salas
abertas

aterrar equipamento
usar estabilizadores

picos na linha
base

Srgio Machado Corra
CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
ERROS MAIS COMUNS
SINTOMA POSSVEL CAUSA REMEDIAO
coluna sangrando
coluna contaminada
FM de baixa qualidade
fluxo alto da FM
fluxo alto do H
2
ou Ar
vazamentos
falta de aterramento
injetor sujo
detetor sujo
abaixar T
limpar coluna
trocar FM ou filtros
abaixar fluxo
abaixar fluxo
localizar e corrigir
aterrar
limpar
limpar
rudos na linha
base

Srgio Machado Corra
CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
ERROS MAIS COMUNS
SINTOMA POSSVEL CAUSA REMEDIAO
muita amostra
injetar menos
amostra
aumentar o split
cauda frontal

Srgio Machado Corra
CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
ERROS MAIS COMUNS
SINTOMA POSSVEL CAUSA REMEDIAO
FE muito ativa
trocar de coluna
aumentar a T
aumentar a vazo
da FM
pico com cauda

Srgio Machado Corra
CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
AMOSTRA requisitos desejveis
Quantidade disponvel - mnimo desejvel de 2 mL
Dividir em 2 ou 3 pores (segurana)
Orgnico, inorgnico ou ambos ?
Voltil ?
Qual o solvente ?
Qual o componente principal ?
Qual o maior ponto de ebulio ?
Possui presso de vapor elevada ?
Degrada com a luz ?
Sensvel ao calor ?
Srgio Machado Corra
CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
AMOSTRA requisitos desejveis
Qual a polaridade da amostra ?
Amostra cida, alcalina ou neutra ?
Amostra oxidante ou redutora ?
Qual a composio aproximada ?
Quantos componentes ?
Qual os teores aproximados ?
Existe cromatograma prvio ?
Existe mtodo analtico padro ?
Existem padres disponveis ?

Srgio Machado Corra
CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
FABRICANTES MAIS COMUNS
VARIAN
PERKIN ELMER
SHIMADZU
AGILENT - HP
Srgio Machado Corra
CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
Cromatografia Lquida
CROMATOGRAFIA LQUIDA
HPLC High Performance Liquid Chromatography
CLAE Cromatografia Lquida de Alto Desempenho
Fase mvel lquida
Alta presso (> 1000 psi)
Fase estacionria slida
Srgio Machado Corra
CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
Cromatografia Lquida
CROMATOGRAFIA LQUIDA - APLICAES
GERAL: separao e anlise de misturas de
compostos no volteis ou termoinsatveis
Solveis
EXEMPLOS: qumica ambiental
qumica forense
petroqumica
bioqumica
cosmticos
frmacos
% crescente nas tcnicas analticas
Srgio Machado Corra
CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
HPLC: separao e anlise de misturas de compostos
no volteis ou termoinsatveis.
GPC (Cromatografia de Permeao em Gel):
separao de macromolculas, naturais ou sintticas.
Troca Inica: separao de molculas com carga
formal diferente de zero.
Quanto ao tipo de separao
Cromatografia Lquida
TIPOS DE EQUIPAMENTOS
Srgio Machado Corra
CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
Cromatografia Lquida
EQUIPAMENTO BSICO
fase
mvel
bomba
injetor
coluna
detetor
purga
controle e
aquisio
de dados
amostra
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CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
Cromatografia Lquida
CONSIDERAES BSICAS
1- Solubilidade: hexano, clorofrmio, metanol, gua, outros.
2- Peso Molecular: CPG pode ser til na anlise ou na
preparao da amostra ?
3- Grupos Funcionais: algum grupo ionizvel? cido, bsico ou
neutro?
4- Matriz: quais quantidades so esperadas?
5- Detectabilidade: grupos cromforos ou fluorforos?
Considerar reaes redox ou derivatizao.
6- Como as espcies diferem em sua estrutura.
Srgio Machado Corra
CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
Cromatografia Lquida
FABRICANTES MAIS COMUNS
VARIAN
PERKIN ELMER
SHIMADZU
AGILENT HP
WATERS
LACHROM - MERCK
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CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
Cromatografia Lquida
VANTAGENS
Anlise ainda rpida (minutos)
Anlise eficiente com alta resoluo
Alta sensibilidade (>100 ppb)
No destrutiva (exceo do DSM)
Quantitativa
Requer pouca amostra (1-20 L)
Operao relativamente simples
Boa relao custo / Benefcio
Capaz de analisar quase todo tipo de amostra
Baixo consumo de energia (temperatura ambiente)
Dispensa uso de gases
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Cromatografia Lquida
DESVANTAGENS
Amostra deve ser solvel
Conhecimento prvio da amostra
Difcil para amostras complexas
Requer uso de padres
Pessoal qualificado
Custo do equipamento (acima de R$ 80 mil)
Custo operacional mdio
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CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
Cromatografia Lquida
TEORIA BSICA - Cromatograma
Srgio Machado Corra
CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
Cromatografia Lquida
TEORIA BSICA
onde:
K
D
coeficiente de partio ou de equilbrio
C
E
concentrao na fase estacionria
C
M
concentrao na fase mvel

K
D
proporcional a t
r
M
E
D
C
C
K =
Srgio Machado Corra
CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
Cromatografia Lquida
TEORIA CLSSICA
FENMENOS ENVOLVIDOS NA SEPARAO
-MIGRAO da FM para a FE
ADSORO FE slida
-DIFUSO em ambos sentidos (Leis de Fick)
quanto maior t
R
maior o espalhamento

- HPLC: tempo de anlise maior que CG
picos mais largos

Srgio Machado Corra
CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
Cromatografia Lquida
Fase Normal Fase Estacionria Polar
Fase Mvel Apolar

Fase Reversa Fase Estacionria Apolar
Fase Mvel Polar
Fase
Mvel
TEORIA GERAL
Srgio Machado Corra
CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
Cromatografia Lquida
GPC - Cromatografia por Permeao em Gel
Cromatografia Excluso em Gel ou de
separao por tamanho de partcula
Srgio Machado Corra
CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
Cromatografia Lquida
GPC - Cromatografia por Permeao em Gel
ou Cromatografia por Filtrao em Gel
Srgio Machado Corra
CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
GPC - Cromatografia por Permeao em Gel
- Separao de biomolculas (protenas e polinucleotdeos)
- Caracterizao de PM de polmeros sintticos
- Difuso de molculas polimricas nos interstcios capilares de um gel
- Tcnica desenvolvida por Moore em 1964

Cromatografia Lquida
Srgio Machado Corra
CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
V
total
= V
0
+ V
p
+ V
gel
V
0
= volume morto: V ocupado pela FM externa aos poros
V
p
= V dos poros
V
gel
= V do material que constitui o gel
V
E
= V de eluio de uma molcula
K = coef. de partio: frao de volume de poros disponvel
Depende do tamanho da molcula.
Varia entre 0 (molcula > poros) e 1 (molcula < poro)
V
E
= V
0
+ K.V
p
K = (V
E
V
0
)/V
p
= C
S
/C
M
Teoria da GPC
Cromatografia Lquida
Srgio Machado Corra
CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
Cromatografia Lquida
TROCA INICA
Molculas
carregadas
contrariamente a
fase estacionria
apresentam um t
r

MAIOR
amostra
fase mvel
bomba
coluna
Srgio Machado Corra
CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
Cromatografia Lquida
TROCA INICA
PROCESSO EM 6 ETAPAS:
- Condicionamento Prvio: encharcar em gua para atingir mximo
volume
- Carga: contato com a soluo contendo os ons
- Eluio: remoo dos ons fixados durante a carga
- Lavagem: remoo do excesso de reagente da superfcie da resina
- Regenerao: preparao para o prximo ciclo
- Retrolavagem: eliminao de partculas finas de resinas produzidas
durante os ciclos.

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Tipo Coluna Vazo Aplicao
CL Capilar
capilar, microbore,
narrowbore,
solvent saver,
analtica
1 L/min
a
2,5 mL/min
amostra
limitada
DSM
CL
narrowbore,
solvent saver,
analtica, semi-prep
0,05 a 5
mL/min (grad)
0,2 a 10
mL/min (iso)
analtica
DSM
CL
Preparativa
semi-prep, prep 1 a 100
mL/min
purificao
DIMENSES
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Cromatografia Lquida
OTIMIZAO DOS PARMETROS OPERACIONAIS
Trabalhar a Fase Mvel

Corrida programada
Troca de coluna
Temperatura
Vazo
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Cromatografia Lquida
PARMETROS OPERACIONAIS: fase mvel
Fase mvel - proporo
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PARMETROS OPERACIONAIS: temperatura
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- Deve ser considerada em ltimo caso
- Favorece a transferncia de massa
- Melhora a resoluo
- Diminui o tempo de anlise
- Diminui a viscosidade da fase mvel
- Pode alterar a seletividade
- Diminui a presso de trabalho
PARMETROS OPERACIONAIS: temperatura
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PARMETROS OPERACIONAIS: pH
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PARMETROS OPERACIONAIS: pH
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PARMETROS OPERACIONAIS: Coluna
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PARMETROS OPERACIONAIS: Coluna
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PARMETROS OPERACIONAIS: Presso
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PARMETROS OPERACIONAIS: Vazo
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PARMETROS OPERACIONAIS: Clula Deteco
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PARMETROS OPERACIONAIS: Tempo de Resposta
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Cromatografia Lquida
FASE ESTACIONRIA
Fase Normal

Slica de alta superfcie

Grupamentos polares
Fase mvel apolar
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FASE ESTACIONRIA
Fase Reversa

Slica de alta superfcie

Grupamentos apolares
Fase mvel polar
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FASE ESTACIONRIA
Propriedade Fase Normal Fase Reversa
Fase Estacionria Polar (SiO
2
) Apolar (C18)
Fase Mvel Apolar
(solventes orgnicos)
Polar
(aquosa/orgnica)
Movimentao Apolar veloz Polar veloz
Processo de Separao Diferentes polaridades
(funcionalidades)
Diferena no
contedo de HC
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Tipo
| interno
mm
Comp.
mm
| partcula
m
Vazo

Aplic.
Capilar 0,3 0,5 35 - 250 3,5 5,0 1 10 L/min CL/DSM
Microbore 1,0 30 - 150 3,5 5,0 30 60 L/min CL/DSM
Narrowbore 2,1 15 - 150 3,5 5,0 0,1 0,3 mL/min CL/DSM
Solvent Saver 3,0 150 - 200 3,5 5,0 0,3 1,0 mL/min Analtica
Analtica 4,6 15 - 250 3,5 5,0 1 4 mL/min Analtica
Semi-Prep 9,4 50 - 250 5,0 4 10 mL/min Separao
Preparativa 21,2 50 - 250 5,0 7,0 20 60 mL/min Purifica
o
APLICAES
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RESOLUO X VELOCIDADE
Pratos Seletividade Reteno
Para manter R
s
L/2 d
P
/2
+ L = + N
+ d
P
= | N
+ d
P
= | N
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RESOLUO X VELOCIDADE
Partculas menores exibem curvas mais planas
mL/min
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L x d
P
x EFICINCIA
Colunas curtas com partculas pequenas
=
Colunas longas com partculas grandes
L (mm) N (5 m) N (3,5 m) N (1,8 m)
E
f
i
c
i

n
c
i
a

P
r
e
s
s

o

G
a
s
t
o

d
e

S
o
l
v
e
n
t
e

Tempo de
Anlise
150 12.500 21.000 NA -
100 8.500 14.000 NA - 33%
75 6.000 10.500 NA - 50%
50 4.200 7.000 12.000 - 67%
30 NA 4.200 6.500 - 80%
15 NA 2.100 2.500 - 90%
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L x d
P
x EFICINCIA
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L x d
P
x EFICINCIA
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L x d
P
x PRESSO
2
.
. .
P
d
v L
P
u
q
= A
AP = queda de presso
q= viscosidade
L = comprimento da coluna
v = velocidade
d
P
= dimetro da partcula
u = parmetro adimensional
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FASE MVEL
Pureza
Compatibilidade com o detector
Solubilidade do analito
Baixa viscosidade
Inrcia qumica
Preo razovel

Fase normal: principalmente apolar
Fase reversa: gua + outro polar (acetonitrila)
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FASE MVEL
Tipos de Eluies:
Isocrticas: Composio invarivel da FM
Gradiente: Composio varivel da FM
Mistas
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TIPOS DE ELUIES

Isocrticas
Sem mistura de fases
Baixo poder de resoluo
Diminuio de custos (equipamento)
Menor gasto de solvente (clula e tubos menores)
Analitos dissolvidos no solvente = FM
Injees consecutivas
Evita problemas com resposta do detector
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Gradiente
Menor custo (solventes e tempo de anlise)
Maior resoluo
Tipo:
Binrio
Ternrio
Quaternrio
TIPOS DE ELUIES
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FORA DO ELUENTE: FASE ???

Resoluo X Tempo de anlise
ter de petrleo
hexano
tetracloreto de carbono
benzeno
clorofrmio
acetona
acetato de etila
etanol
metanol
gua
a
u
m
e
n
t
o

d
o

p
o
d
e
r

d
e

e
l
u
i

o

a
u
m
e
n
t
o

d
a

p
o
l
a
r
i
d
a
d
e

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Cromatografia Lquida
ESCOLHA DO ELUENTE
Viscosidade
Presso de vapor
Ponto de fulgor
Valor limite de toxidez
Compressibilidade
ndice de refrao
Corte do UV
Custo
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Cromatografia Lquida
COLUNAS CROMATOGRFICAS
Fases Estacionrias
HPLC: Colunas recheadas com material finamente granulado
(empacotadas) sob alta presso em equipamentos especiais.
Grande superfcie de contato
Alta Resoluo/ Alta Presso

GPC: Resinas com cavidades excludentes a macromolculas

TROCA INICA: Resinas com grupos funcionais inicos capaz de
interagir com molculas carregadas

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Cromatografia Lquida
COMO ESCOLHER UMA COLUNA ?

1- Perguntar para algum experiente
2- Catlogos de fabricantes de colunas
(mtodo X coluna Y)
3-Peridicos especializados
4- Usar as colunas genricas
5- Bibliografia
COLUNAS CROMATOGRFICAS
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COLUNAS CROMATOGRFICAS
Cromatografia Lquida
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Cromatografia Lquida
Colunas Guarda

Servem para proteo da coluna principal
MicroColunas ou Colunas capilares p/ HPLC

Alta resoluo

Equipamentos menores
COLUNAS CROMATOGRFICAS
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Cromatografia Lquida
Colunas Preparatrias

Servem para separao de amostras.

Grandes quantidades 100-500 L
COLUNAS CROMATOGRFICAS
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Cromatografia Lquida
Amostra a ser trabalhada:

Separao de micromolculas ? Macromolculas ?

Polares ? Muito ou Pouco ?
O
O
HO
O
OH
H
HO
O
HO
OH
OH
*
OH
*
N N
O O
O
H H
Fenobarbital (Luminal)
N
N
Me
O
Cl
Diazepan
COLUNAS CROMATOGRFICAS
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Cromatografia Lquida
COMPONENTES Detetores
POSIO: ao final da coluna cromatogrfica
FUNO: medir a concentrao do analito

Na verdade, detectores so transdutores, gerando um sinal
eltrico proporcional quantidade de molculas de analito.
O sinal eltrico ento enviado a um sistema de coleta de
dados que ento amplifica, trata e ento gera o
cromatograma.
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Cromatografia Lquida
TIPOS DE DETETORES
Condutividade
Ultravioleta
ndice de Refrao
Fluorescncia
Eletroqumico
Espalhamento de Luz por Evaporao
Espectrometria de Massas

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DETETOR DE CONDUTIVIDADE
Waters 432
Medida da conduo eltrica
Medida de espcies carregadas
eletricamente
Ctions, nions e molculas com
carga
Alta sensibilidade
Tambm denominada cromatografia
de ons
Usado em modo isocrtico
Severo controle da temperatura
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DETETOR UV-VIS
Nome Cromforo (nm) Absortividade c
olefina -C=C 175-180 6,000
aldedo -CHO 210 1,500
amina -NH
2
195 2,800
azo -N=N- 285-400 3-25
brometo -Br 208 300
carboxlico -COOH 200-210 50 - 70
dissulfeto -S-S- 194 5,500
ster -COOR 205 50
ter -O- 185 1,000
cetona R
sec
-C=O 195 1,000
Baseado na absoro molecular
Obedece a Lei de Lambert Beer
C b
I
I
a Absorvnci . . log
0
c = =
Comprimento de Onda Varivel
Comprimento de Onda Fixo
Sens. = 5 ng
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DETETOR DE INDICE DE REFRAO
Waters 2414
o nico detector universal na CLAE
Medida da alterao no ndice de refrao
Procurar FM com IR diferente da amostra
(sensibilidade)
um instrumento de medida diferencial
Muito til na identificao de ismeros ticos
Sensibilidade: 4g
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Cromatografia Lquida
DETETOR DE FLUORESCNCIA
Waters 2475
Um dos detectores mais sensveis
Possvel detectar uma nica molcula na
clula de medida
10-1000 vezes mais sensvel que UV-VIS
Fluorescncia: molculas recebem curto
e emitem longo
Cerca de 15% das molculas exibem
fluorescncia: ligaes duplas,
principalmente os aromticos
Sensibilidade = 3 pg


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Cromatografia Lquida
DETETOR ELETROQUMICO
Waters 2465
Resultante da variao na corrente resultante
de um processo de oxidao/reduo em um
eletrodo.
Corrente desenvolvida proporcional
concentrao, de acordo com a Lei de Faraday
Requer FM que conduza corrente eltrica
Requer cuidadosos ajustes de pH
Alta sensibilidade e especificidade
Muito til em matrizes complexas
Aplicaes: fenol, nitrosaminas, cidos
orgnicos.
Sensibilidade = 0,1 pg

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Cromatografia Lquida
DETETOR ESPALHAMENTO DE LUZ POR EVAPORAO
Waters 2420
Grupamento no cromforos
Substncias semi e no volteis
Sinal proporcional a concentrao
Quase universal
Formao de aerossol, com formao
de FM gasosa e particulado com
analito

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Cromatografia Lquida
DETETOR DE ESPECTROMETRIA DE MASSA
Necessidade de volatilizar a FM
Equipamento mais vendido atualmente (sensibilidade = 1pg)
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Cromatografia Lquida
DETETOR DE ESPECTROMETRIA DE MASSA
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Cromatografia Lquida
SISTEMA DE INJEO
Fluxo normal
Amostrando
Injetando
loop
seringa
coluna
bomba
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Cromatografia Lquida
UPLC
Ultra High Pressure Liquid Chromatography
Dimetro de coluna < 50 m
Colunas longas: 25 50 cm
Partculas pequenas: < 1 m
Alta presso: > 7500 bar
Baixa vazo: < 50 nL/min
Nmero de pratos tericos: N > 100.000
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Extrao em Fase Slida
EXTRAO EM FASE SLIDA - SPME
O QUE ?

Separao lquido-slido
Tcnica de preparao de amostras
Adsoro seletiva
Remoo de interferentes
Reteno de analitos
Concentrao de analito
Precede geralmente uma tcnica cromatogrfica
Alternativa de excelente custo/benefcio extrao lquido-lquido
Incio em meados dos anos 70
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Extrao em Fase Slida
SPME - Aplicao
Separao de Naproxeno de Soro Humano
ANTES
DEPOIS DE CARTUCHO C18
padro
interno
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Extrao em Fase Slida
SPME x Extrao Lquido Lquido
Trabalho braal
Tempo de espera
para separao de fases
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Extrao em Fase Slida
SPME x Extrao Lquido Lquido
Processamento paralelo x serial
Menor uso de solventes
Menor gerao de resduos
Recuperao superior e mais reprodutvel
Extrao mais limpa
No h formao de emulses
Seletividade
Passvel de automao
500 mL na ELL contra 10 mL na SPME
60 min na ELL contra 5 min na SPME
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Extrao em Fase Slida
SPME Aplicaes Tpicas
Limpeza de amostra (cleanup)
Detectores sensveis (DSM)
Estudos farmacocinticos
Isolamento de analitos em matrizes complexas
Remoo de substncia que danificam colunas
Eliminao de substncias que eluem tarde
Pr-Concentrao
Amostras ambientais (analito em matriz inerte)
Aplicaes farmecuticas e agroqumica
Remoo de sais (CG)
Troca de solvente
Preservao e armazenagem de amostra
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Extrao em Fase Slida
SPME Diferentes Modos
Adsoro do Analito
Analito retido (K
D
>> 1)
Matriz no retida (K
D
~ 0)
Matriz fortemente retida (K
D
>>1)
Pr-concentrao
Extrao mais limpa
50 150 L s
-1
(1-3 gotas)
Adsoro da Matriz
Analito no retido (K
D
~ 0)
Matriz retida (K
D
>> 1)
Sem pr-concentrao
Eluato no est limpo
Menos empregada
Carga por gravidade
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Extrao em Fase Slida
SPME Etapas Principais
lavagem condicionamento carga lavagem eluio
remoo de
contaminantes
preparo do
cartucho
MeOH ou
CH
3
CN
passagem da
amostra
< 2mL/min
lavagem com
solvente que
no remova o
analito
eluio do
analito com
mnimo de
solvente
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Extrao em Fase Slida
SPME x HPLC
Parmetro HPLC SPME
formato coluna inox cartucho plstico
tamanho da partcula (m) 3 5 40
formato da partcula esfrica irregular
n pratos 20 a 25.000 < 100
separao contnua batelada
custo da coluna R$ 1500 a 2500 R$ 5 10
operao reutilizvel descartvel
custo da operao moderato-alto baixo
custo do equipamento alto baixo
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Extrao em Fase Slida
SPME Estrutura do Cartucho
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Extrao em Fase Slida
SPME Formato Tpico dos Meios
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Extrao em Fase Slida
SPME Automao
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Extrao em Fase Slida
SPME Automao
mltiplos filtros e adsorventes
96 cartuchos
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Extrao em Fase Slida
SPME Automao
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Extrao em Fase Slida
SPME Tipos de Extrao
presso vcuo
centrifugao
manifold de vcuo
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Extrao em Fase Slida
SPME Extratores Automticos
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Extrao em Fase Slida
SPME Fases Extratoras Mais Comuns
Slica gel (mais popular)
Polmeros (resinas PS-DVB, copolmeros etc.)
xidos metlicos (alumina, titania, zircnia)
Carbono grafitizado
Florisil (silicato de magnsio)
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Extrao em Fase Slida
SPME Slica Gel
grupos
silanol
isolados
pontes de
hidrognio
ligaes
siloxano
silica gel
C18 monocloro siloxano
SiO
2
C18
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Extrao em Fase Slida
SPME Slica Gel
superfcie da slica gel
poros
A separao ocorre
majoritariamente dentro
dos poros
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Extrao em Fase Slida
SPME Excluso por Tamanho
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Extrao em Fase Slida
SPME Comparao das Aplicaes
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Extrao em Fase Slida
SPME Tipos de Interao
1. Apolar (fase reversa)

Alquil (C1, C2, C3, C4, C5, C6, C7, C8, C10,
C12, C18, C20, ciclohexil)
Aromtico (fenil e difenil)
Polimrico (PS-DVB, PS-DVB-C18, XAD, DVB-N-
vinilpirrolidona)
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Extrao em Fase Slida
SPME Tipos de Interao
2. Polar (fase normal)
Slica gel
Florisil
Kieselguhr
Alumina
Cianopropil
Aminopropil
Diol
Polimrico (DVB-vinilpirrolidona)
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Extrao em Fase Slida
SPME Tipos de Interao
3. Troca Aninica
Amino e diamino
Amina primria/secundria
(quelante)
dietilamino etil (DEAE)
Amina quaternria
Polietilenoimina (PEI)
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SPME Tipos de Interao
4. Troca Catinica
Tipo cido alquil sulfnico (SCX)
Tipo cido carboxlico (WCX)
Tipo cido sulfnico aromtico
(SCX)
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SPME Tipos de Interao
5. Mistos
Fases que contm dois ou mais tipos de grupos
funcionais que permitem mltiplas interaes
qumicas objetivando-se seletividade.
Ex.:
PS-DVB, C18, e vinilpiridina
PS-DVB, C18 e grupos cidos sulfnicos
SiO
2
, C8 e cido propil sulfnico
SiO
2
, C18 e troca catinica
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Extrao em Fase Slida
SPME Desenvolvimento de Mtodo
analito
adsorbente
matriz
Como o analito
adsorvido e
dessorvido ?
Quais so as
diferenas
entre analito e
matriz ?
Como a matriz interage
com o adsorvente ?
MTODO
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Extrao em Fase Slida
SPME Mtodo: Estratgias
1. Pesquisa do Problema
- Existe condies de anlises anteriores para analito/matriz ?
- Artigos, livros, normas, fabricantes, profissionais experientes

2. Caracterizao do Analito
- Estrutura, pK
a
, polaridade, grupos funcionais
- Solubilidade e estabilidade do solvente
- Restries do solvente com o detector

3. Caracterizao da Matriz
- Possveis interferentes com similaridade qumica
- pH e fora inica
- Estabilidade e solubilidade do solvente
- Variao quantitativa e qualitativa
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Extrao em Fase Slida
SPME Mtodo: Estratgias
4. Verificao da Eficincia (CLAE ou CG)
- Eficincia e limpeza
5. Seleo dos Adsorventes
- Determinao de possveis adsorventes p/ reteno do analito
- Determinao do solvente com melhor recuperao
6. Seleo do Solvente de Lavagem
- Limpeza do eluato e mxima reteno do analito
- Solvente que no elua o eluato
7. Seleo do Solvente de Eluio
- Solvente que elua o analito somente
8. Testes com amostras reais

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Extrao em Fase Slida
SPME Recuperao
R
e
c
u
p
e
r
a

o

Vazo
baixa alta
valor timo
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Extrao em Fase Slida
SPME Aplicaes Ambientais
HPAs em guas
Cartucho:
AccuBOND, 500 mg, 6 mL
Preparao da Amostra:
- 2 mL isopropanol em 20 mL gua
- mistura vigorosa
Condicionamento:
- 5 mL cloreto de metileno
- 5 mL de metanol
- 5 mL gua deionizada
- 1 mL gua deionizada at preencher
Carga:
- 24 mL de amostra
- fluxo < 10 mL/min
Lavagem:
- 3 mL acetonitrila 1:1 gua
- vcuo por 30 s
- centrifugao 1000-1500 rpm por 5 min
Eluio:
- 3 mL cloreto de metileno e coletar
- evaporar a 50-200 mL (sem calor)
- avolumar a 200 mL
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Extrao em Fase Slida
SPME Desenvolvimento de Mtodo
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Extrao em Fase Slida
SPME Seleo do Solvente de Eluio
Solvente Valor Eluotrpico c
Acetato de Etila 0,45
Acetona 0,43
Acetonitrila 0,50
gua 0,73
Diclorometano 0,32
Hexano 0,00
Metanol 0,73
Tetrahidrofurano 0,35
Tetracloreto de carbono 0,14
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CROMATOGRAFIA APLICADA A QUMICA AMBIENTAL
Extrao em Fase Slida Extrao em Fase Slida
SPME Fornecedores
3M www.3m.com
Alttech www.alltech.com
Varian Chrompack www.varianinc.com
Merck www.merck.com
Hamilton www.hamiltongroup.com
Supelco www.supelco.com
Baker www.jtbaker.com
Restek www.restekcorp.com
Whatman www.whatman.com