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UNIVERSIDADE FEDERAL DE SANTA CATARINA CENTRO DE CINCIAS AGRRIAS DEPARTAMENTO DE FITOTECNIA FIT 5205 Bioqumica Agrcola (Agronomia) 2013/2

/2 Bianca Coelho (coelho_bia@yahoo.com.br) CARACTERIZAO DE CARBOIDRATOS Objetivos: 1. Demonstrar as propriedades redutoras dos carboidratos; Identificar e discutir a estrutura de polissacardeos. REAES DE REDUO (Teste de Benedict)

1.1 Introduo Observa-se que os acares que apresentam a hidroxila livre no carbono anomrico (C-1 em aldoses e C-2 em cetoses) so bons agentes redutores. Por esse motivo a extremidade que contm a OH livre passa a ser chamada extremidade redutora e o acar, de carboidrato redutor. A capacidade que esses compostos apresentam de reduzir ons metlicos em solues alcalinas um bom mtodo de identificao desses compostos.

Figura 1- Exemplos de carboidratos redutores

A reao abaixo esquematiza o princpio do teste de Benedict, baseada na reduo de ons Cu2+ a Cu+, com formao de um precipitado vermelho-tijolo:

Testes que verifiquem a presena de acares redutores tem importncia na indstria alimentcia na determinao do padro de qualidade. Por exemplo, o mel apresenta em sua constituio: 78% de acares redutores, distribudos em 34% de glicose, 40% de frutose e 1,9% de sacarose. O aumento da composio em sacarose um indcio da adulterao por acares comerciais.

1.2

Reao de Benedict

Fundamento: Os acares redutores (que possuem grupamento aldedico e cetnicos livres) em meio alcalino e em presena de ons cpricos se oxidam e, portanto, reduzem esses ons metlicos, produzindo um precipitado de xido cuproso, com colorao vermelho-tijolo (teste positivo). Os ons cpricos nesta reao esto complexados com citrato de sdio do reativo de Benedict. 1.3. Material Reagentes e solues Soluo de glucose 1% Soluo de sacarose 1% Soluo de lactose 1% gua destilada Reativo de Benedict

1.4. Procedimento: 1. Pipetar, em tubos devidamente identificados, as seguintes quantidades: Tubo 1: Tubo 2: Tubo 3: Tubo 4: 1mL da soluo de glucose 1mL da soluo de sacarose 1mL da soluo de lactose 1mL de gua destilada (branco)

2. A cada um dos tubos adicionar 2mL do reativo de Benedict; 3. Aquecer em banho-maria fervente durante 10 minutos; 4. Aps esfriar, observar e descrever os resultados. Comparar com o tubo branco. O aparecimento de um precipitado de colorao vermelho-tijolo indica que os ons Cu do reagente de Benedict foram reduzidos a Cu+, indicando a presena de acar redutor.
2+

2. REAO DE POLISSACARDEOS (Teste de Lugol) 2.1 Introduo Polissacardeos so molculas de elevado peso molecular, cuja unidade fundamental so os monossacardeos, principalmente a glucose. Como exemplos de polissacardeos importantes na natureza pode-se destacar o glicognio, a celulose e o amido. O amido, polissacardeo de extrema importncia em alimentos, produzido em grande quantidade nas folhas dos vegetais como forma de armazenamento dos produtos da fotossntese, e constitudo por dois outros polissacardeos estruturalmente diferentes: amilose e amilopectina. Encontra-se nos gros dos cereais (milho, trigo, aveia, arroz etc), nas sementes das leguminosas, nas frutas, nas razes e tubrculos (batata, mandioca).

2.2 Reao de Lugol Fundamento: O iodo em soluo produz reao colorida com polissacardeos, sendo que apresenta cor vermelho-castanho com glicognio, azul-violceo com amido, azul com amilose, e vermelho-violceo com amilopectina, por exemplo. Solues de polissacardeos com estrutura helicoidal cujas dimenses internas permitem que a molcula de iodo se deposite em seu interior formam um complexo iodo-polissacardeo responsvel por essas coloraes. O aparecimento de uma colorao azul caracterstico de teste positivo para amido. A complexao com iodo uma importante ferramenta de diagnstico para caracterizao do amido. IMPORTANTE - nem todos os polissacardeos, apesar de serem molculas grandes, apresentam complexo colorido com o iodo. Isso porque necessrio que a molcula apresente uma conformao que propicie o "encaixe" do iodo.

Figura 2 - Complexo amido-iodo

2.3 Material Reagentes e solues Soluo de amido de mandioca 1% Soluo de glucose 1% Soluo de amilopectina de milho 1% gua destilada Lugol diludo

2.4 Procedimento: 1. Pipetar, em tubos devidamente identificados, as seguintes quantidades: Tubo 1: Tubo 2: Tubo 3: Tubo 4: 2mL da soluo de amido 2mL da soluo de glucose 2mL da soluo de amilopectina 2mL de gua destilada (branco)

2. Acrescentar a cada um dos tubos 2 mL de lugol diludo 3. Comparar os resultados com o tubo branco. Descrever os resultados.

RESULTADOS DOS TESTES CARACTERIZAO DE CARBOIDRATOS Tubo Teste 1 Glucose 2 Sacarose 3 Lactose 4 gua (branco)

Benedict (para acares redutores)

Colorao reativa positiva Precipitado vermelhotijolo

Amido Azul Lugol (Iodo) (polissacardeos) intenso *Amido

Glucose

Amilopectina gua (branco)

Questes As explicaes devem ser realizadas em um contexto bioqumico.

1) Explique e justifique os diferentes resultados obtidos no teste de Benedict com base na estrutura dos carboidratos testados (monossacardeos, polissacardeos, carbono anomrico, etc.). 2) Aponte um ou mais exemplos (distinto do apresentado nesta prtica) da importncia da utilizao do teste de Benedict. 3) Para a obteno de um resultado positivo no teste de lugol necessrio uma conformao helicoidal do polissacardeo em teste. Diante desta assertiva explique porque a celulose, que no possui estrutura helicoidal, apresenta colorao em contato com este reagente?