PROBLEMAS DE MTODOS DE SEPARACIN 1.

La determinacin de plomo en agua natural empleando la tcnica de absorcin atmica con llama requiere la utilizacin de una columna preconcentradora. La ecuacin matemtica que representa el calibrado sin preconcentracin es A= 0,002 + 0,00965 C; mientras que si se pasan las disoluciones estndar de plomo a travs de la columna preconcentradora durante 5 minutos a un caudal de 1,0 ml .min1 y posteriormente se eluye el plomo retenido con 150 l de HCl 0,1 M, el calibrado obtenido se ajusta a la siguiente ecuacin: A= 0,003 + 0,317 C (las unidades de C, en ambos casos, son mg l-1). Calcular: a. Factor de preconcentracin. b. La eficiencia de la columna preconcentradora. c. La muestra de agua tratada en iguales condiciones que el calibrado dio una absorbancia de 0,021, qu contenido de plomo tiene el agua? d. Al modificar exclusivamente el tiempo de preconcentracin se obtuvieron los siguientes factores de preconcentracin experimentales: Tiene la columna "efecto lavado"? Pierde eficiencia?

Tiempo
10 30

F. prec.
57 100

4.

La evaluacin de una posible contaminacin de plomo en un alimento enlatado se realiz empleando como tcnica de anlisis la absorcin atmica y un sistema de preconcentracin en lnea. Se pide: a) Cmo se disolvera la muestra? Indicar los posibles riesgos de error. b) Considerando que pasando 5 ml de muestra a travs de una columna preconcentradora y eluyendo con 50l de HCl se consigue una preconcentracin del analito de 80 veces. Indicar la eficacia de la columna. c) Si el contenido de plomo en la muestra puede estar en el intervalo 0,050-0.1 g/g y que el calibrado es lineal de 1 a 8 g/g, indicar si se deberan pasar mayores volmenes de muestra por la columna y los riesgo a controlar. Se desea conocer el contenido en benzo(a)pireno en una muestra de agua de ro. El lmite de deteccin de la tcnica disponible en el laboratorio hace necesaria la preconcentracin del analito con un factor de preconcentracin de al menos 500. Para ello se tom 1 litro de muestra y se pas a travs de un cartucho relleno con material polimrico (SDB), quedando el analito retenido en l y siendo posteriormente eluido con 10 ml de acetonitrilo. Se tomaron 5 ml del extracto anterior, se diluyeron hasta 100 ml con agua destilada y se hizo pasar a travs de un inmunosorbente selectivo de PAHs. Posteriormente, el benzo(a)pireno fue eluido con 5 ml de metanol:agua (1:1). Con el procedimiento descrito, se consigue el factor de preconcentracin requerido? R: Para la determinacin de fenamifos en naranjas, se tomaron 2 g de muestra y fueron sometidos a extraccin con microondas con 10 ml de una mezcla hexano:acetona (1:1) a 90 C durante 10 min. Posteriormente, y una vez fros los recipientes, el sobrenadante se filtr y el residuo slido se lav con 5 ml de hexano. De la disolucin obtenida (filtrado + lavado), se tomaron 5 ml, se evapor a sequedad y se redisolvi con 2 mI de acetato de etilo. Finalmente, se inyectaron 0,5 l del extracto en un cromatgrafo de gases, siendo la concentracin de fenamifos de 0,15 g/ml. Calcular la concentracin de fenamifos en la muestra de naranjas. R: Para la extraccin de aflatoxina A en pistachos, se tomaron 5 9 de muestra y se aadieron 20 ml de metanol. La mezcla se agit durante 5 minutos centrifug y se recogi el sobrenadante. Posteriormente, se tomaron 2 ml de sobrenadante y se pasaron a travs de un inmunosorbente especfico, consiguiendo la retencin del analito. Despus de varias etapas de lavado para eliminar compuestos dbilmente retenidos la totalidad del analito fue eluido con 1 ml de etanol:fosfato (1:1) pH 2. El eluato obtenido fue analizado mediante HPLC con deteccin UV obtenindose 1 concentracin de analito en el eluido de 15 ppb: Calcular la concentracin de aflatoxina A e; muestra de pistachos.

5.

6.

7.

R: 8. Para la determinacin de aminas aromticas heterocclicas en carnes, se tomaron 10 g de muestra se trataron con 25 ml de NaOH 1 M. La mezcla se pas a travs de un cartucho de slica, eluyendo los analitos con 200 ml de diclorometano con una recuperacin del 80% .Esta disolucin se hizo pasa nuevo por otro cartucho idntico, siendo los analitos eluidos con 100 ml de metanol:amoniaco (50:1). Despus de la evaporacin de todo el disolvente, el residuo fue disuelto en 1 ml de metanol y diluido con 3 ml de agua. Esta disolucin se paso a travs de un cartucho de octadecilslica, eluyendo los analitos con 6 ml de metanol:agua (70:30). Finalmente, el extracto fue evaporado a sequedad y disuelto en 1 ml de metanol, siendo analiz por HPLC con deteccin UV, encontrando concentracin de 87 ppb. Cul es la concentracin de aminas aromticas en la muestra? R: El coeficiente de selectividad, KAI' de un anlisis determinado es 0,816. Cuando se analiza una muestra patrn que se sabe contiene analito e interferente en una proporcin 5:1, el error en la determinacin del analito es +6,3%. (a) Determine la recuperacin aparente del analito si RI = 0. (b) Determine la recuperacin aparente de el interferente si RA = I. R: a) 106.3%; b) 38.6% Se va a determinar la cantidad de Co en una muestra de mena, usando un procedimiento en el que el Fe acta como interferente. Para valorar la exactitud del procedimiento, se analiza una muestra patrn de mena con un cociente Co/Fe conocido de 10.2:1. Cuando se toman muestras puras de Co y Fe durante el procedimiento, se obtienen la siguiente relacin de calibracin: SCo = 0,786 x nmero de gramos Co Spe = 0,699 X nmero de gramos Fe Despus de someter 278,3 mg de Co a una etapa de separacin se recupera una cantidad de 275,9 mg. Si, en cambio, se someten a separacin 184,9 mg de Fe, slo se recuperan 3,6 mg. Calcule (a) las recuperaciones de Co e Fe; (b) el factor de separacin; (c) el error, si no se intenta la separacin de Co y Fe antes del anlisis; (d) el error, si se efecta la etapa de separacin y( e) la recuperacin mxima de Fe si se recupera todo el Co y el error mximo permitido es 0,5%. R: RCo=0.991; RFe=0.019; b) 0.0196; c) 8.72%; d) -0.73%; e) 0.57%.

9.

10.

11. La cantidad de calcio en una mezcla de orinas se determina con un mtodo en el que el magnesio acta como interferente. El coeficiente de selectividad K Ca,Mg del mtodo es 0,843. Cuando se somete al procedimiento una muestra con una relacin Mg/Ca de 0,50, el error obtenido es de -3,7%. Al usar una relacin Mg/Ca de 2,0, el error es de +5,5%. (a) Determinar las recuperaciones de Ca y Mg. (b) Cul ser el error previsto para una muestra de orinas en la que el cociente Mg/Ca sea de 10,0? R: RCa= 0.932; R Mg= 0.073; b) 54.7%.

Tema 4

4.1.- Una disolucin acuosa contiene 10 g del compuesto A en 500 mL. La constante de distribucin de A entre cloroformo y agua es log K = 4,6. Qu volumen mnimo de cloroformo debe utilizarse para que la
D

extraccin sea cuantitativa? (una operacin es cuantitativa cuando se recupera el 99,9 % del producto.

R: K = 10
D

4,6

= [(10-0,010) g/ 0,010 g] (500 mL/ v ); v = 12,5 mL

o o

4.2.- Mediante extraccin lquido-lquido se quiere reducir la concentracin del compuesto A de una disolucin acuosa hasta que slo quede el 0,1 % de su concentracin inicial (esto es, para que la extraccin sea cuantitativa). Responder las siguientes cuestiones: a) Si inicialmente hay 1 g/ L qu concentracin final debe quedar? b) Cul debe ser el factor de capacidad para que se consiga la extraccin cuantitativa en una sola etapa. c) Si log K = 4,3 qu volumen de fase orgnica ser necesario para extraer 1 L de disolucin acuosa?
D

R: a) 0,001 x 1 g/ L = 1 mg/ L
b) R = k/ (k+1) = 0,999; k = 999 c) k = 10
4,3

V / 1000 = 999; V = 50 mL
o o

4.3.- Se toma una muestra de 100 mL de una disolucin acuosa del insecticida teflubenzuron (TFB), y se extrae con cloroformo. Sabiendo que log K = 2,8, calcular:
D

a) El factor de capacidad para extracciones con 10 mL de cloroformo. b) El rendimiento de una extraccin. c) El volumen de disolvente necesario para que la extraccin sea cuantitativa en una sola etapa. d) El rendimiento resultante de realizar dos extracciones sucesivas con 10 mL cada vez.

R: a) k = 10
2

2,8

(10/ 100) = 63,1

2,8

b) R = k/ (k+1) = 98,4% c) R = k/ (k+1) = 0,999 k = 999 = 10 [1/(k+1)] = (1/ 64,1) = 2,43 x 10 R = 1-2,43 x 10 = 99,98%
2 2+ 2 -4 -4

(V / 100) V = 158 mL, d) (1-R ) =

o o 2

4.4.- Se dispone de 100 mL de una disolucin acuosa de Cu de 5 g/ mL. Se a_ade un ligando L y se extrae el complejo con 20 mL de ter diisoproplico. Por absorcin atmica se establece la concentracin residual de Cu en la fase acuosa, que resulta ser de 0,1 g/ mL. Calcular el rendimiento de la extraccin y la constante de distribucin. R: a) m = 5 g/ mL x 100 mL - 0,1 g/ mL x 100 mL = 490 g ; R = 490/ 500 = 98,0% ; b) R = 0,98 =
o 2+

K (20/ 100) / [K (20/ 100) + 1]; log K = 2,4

D D D

4.5.- Un gramo del compuesto A est disuelto en 50 mL de agua, qu volumen de cloroformo se necesita para realizar una extraccin cuantitativa si log K = 3,7?
D

R: a) R = 0,999 = (10

3,7

V / 50)/ [(10
o

3,7

V / 50) + 1]; V = 9,97 mL

o o

4.6.- La extraccin de 100 mL de disolucin acuosa del compuesto A con diisopropilter se realiza con un valor de K = 80. Calcular el rendimiento para los dos casos siguientes y comentar los resultados:
D

a) Cuando se extrae una sola vez con 10 mL. b) Cuando se extrae en dos veces, consumiendo 5 mL de disolvente cada vez.

R: a) R = (80 x 10/ 100)/ [(80 x 10/ 100) + 1] = 88,9% ; b) (1-R) = ( 1/ [(80 x 5/ 100) + 1] ) = 0,04;
1-(1-R) = 96 %.
2

4.7.- Se quiere reducir el contenido en cafena de una serie de infusiones de t, desde su concentracin inicial hasta menos del 1% de la misma. Se parte de botellines que contienen 150 mL, y extrae con porciones de 10 mL de un disolvente tal que log K = 2,4. Calcular:
D

a) El nmero de extracciones necesarias. b) Si se realizan las extracciones predichas en el apartado anterior cul ser el rendimiento?

R: : a) R = 0,99; (1-R) = 0,01 = ( 1/ [(10

n -2 2,4 2 2,4

2,4

x 10/ 150) + 1] )

n log 5,64x10 = -2; n = 1,6, por lo tanto, son necesarias 2 extracciones b) R = (10
2

x 10/ 150) / [(10

-2 2

x 10/ 150) + 1] = 0,94365

R = 1-(1-R) = 1-(5,64x10 ) = 99,7% 4.8.- Se tiene 1 L de una disolucin que contiene sacarina. Responder: a) Cuntas extracciones lquido-lquido se necesitan para asegurar su extraccin cuantitativa si se utilizan porciones sucesivas de 20 mL de un disolvente tal que log K = 4,0? b) Si se realizan las extracciones predichas en el apartado anterior cul ser el rendimiento?

Solucin: a) (1-R) = 1-0,999 = 0,001= ( 1/ [(10 x20/ 1000) + 1] )

b) (1/ 201) = (1-R) ; R = 1-(1-R) = 99,998%
2 2 2 2

n log (1/ 201) = log 0,001; n = 1,3, por lo tanto, son necesarias 2 extracciones

4.9.- Utilizando 20 mL de acetato de etilo se extraen 500 mL de una disolucin acuosa que contiene 2 mg/ mL de bromuro de tetraalquilamonio. La constante de distribucin es log K = 2,1. Al evaporar el
D

extracto cuanto peso de sal se espera recoger?

R: : a) R = (10

x 20/ 500)/ [(10 500 x 2 mg x 0,8343 = 83,43 mg

2,1

2,1

x 20/ 500) + 1] = 0,8343

4.10.- Un soluto A se encuentra disuelto en 50 mL de agua y se pretende extraer el 99,8 % del mismo con cloroformo (K = 21,2). Calcular el nmero de extracciones necesarias y el volumen total de disolvente
D

consumido en cada uno de los siguientes casos: a) Extraccin mltiple manual, con porciones de 10 mL de cloroformo cada vez. b ) Extraccin mltiple automtica, utilizando una gota de 0,01 mL de clorofomo cada vez.

R: : a) ( 1/ [(21,2x10/ 50) + 1] ) = 0,19084

n

n = log 0,002/ log 0,19084 = 3,75, por lo tanto, son necesarias 4 extracciones y 40 mL b) 0,002 = ( 1/ [(21,2x0,01/ 50) + 1] ) = 0,995778 n = log 0,002 / log 0,995778 = 1469; V = 1469 x 0,01 = 15 mL
total n

Tema 5 5.1- Supngase una columna de HPLC de relleno en el que la columna tiene 10 cm de longitud y 0,46 cm de dimetro interno, y en cuyo interior la fase mvil ocupa el 40% del volumen (la porosidad interparticular es 0,40, que es un valor tpico en columnas de relleno). Si se trabaja a un caudal de 0,30 mL/ min, calcular: a) La velocidad lineal de la fase mvil. b) El tiempo de elucin de un soluto no retenido.

Respuesta: La seccin libre es S = 0,4 r = 0,0665 cm . Por tanto:

a) u = F/S = (0,30 cm / min)/ 0,0665 cm = 4,51 cm/ min b) t = L/ u = 10 cm/ 4,51 cm/ min = 2,2 min
M
3 2

5.2.- Una columna de HPLC tiene L = 10,3 cm y un dimetro interno de 4,61 mm. La fase estacionaria ocupa el 61 % del volumen interno. Calcular: a) La velocidad lineal del flujo cuando se trabaja con un caudal de 1,13 mL/ min. b) El tiempo y volumen de fase mvil que necesita un soluto no retenido para atravesar el sistema. c) El tiempo y el volumen de retencin para un soluto cuyo factor de capacidad es 10,0. Respuestas: u = 17,36 cm/ min; t = 0,593 min; V = 0,670 mL; t = 6,53 min; V = 7,38 mL.
M M R R

5.3.-Una columna tubular abierta para GC de 30,1 m de longitud y 0,530 mm de dimetro interno est recubierta por una pelcula de fase estacionaria de 3,1 m de espesor. En las condiciones de trabajo un soluto no retenido la recorre en 2,16 min, y otro soluto muestra un tiempo de retencin de 17,32 min. Calcular: a) u y F; b) el factor de capacidad del soluto y la fraccin de tiempo que permanece en la fase estacionaria; c) la constante de distribucin del soluto.

Respuestas: a) 13,9 m/ min y 3,08 mL/ min; b) k = 7,02 y p = 87,5 %; c) log K = 2,48.
D

5.4.- Se ha desarrollado un mtodo de HPLC capaz de purificar hasta 4 mg de un compuesto A sin que el cromatograma muestre sobrecarga apreciable. La columna tiene 25 cm de longitud y un dimetro interno de 0,85 cm. Se quiere escalar el mtodo con fines preparativos. A este respecto calcular: a) Las dimensiones que debe tener una columna para purificar hasta 100 mg de A en cada inyeccin. b) Si el caudal de la columna pequea es 0,22 mL/ min, el caudal que deber utilizarse en la grande. c) Si la fase mvil ocupa el 35 % del volumen interno de ambas columnas, u en cada caso.

Respuestas: a) 4,25 cm; b) 5,5 mL/ min; c) 1,11 cm/min.

5.5.- Una columna de HPLC de L = 25 cm tiene un volumen muerto de 1,37 mL, y la fase estacionaria ocupa 0,164 mL. A la vista de los datos obtenidos con cuatro solutos de prueba de la tabla, y sabiendo que un soluto no retenido aparece a los 3,1 min, calcular: a) N, H, k, K , R y .
D BC BC

Soluto A B C D

t , min
R

4, min 0,41 1,07 1,16 1,72 = 1 sin modificarlas condiciones de

5,4 13,3 14,1 21,6

b) La longitud que debera tener la columna si se quisiera alcanzar R trabajo.

BC

Respuestas: Para A: N = 2800; H = 90 m; k = 0,74; K = 6,2. Otras respu Un soluto no retenido eluye a
D

los 4,2 min. A la vista de los datos de la tabla, calcular N y H (valores promedio), k (para A, B y C), K (para A, B y C), R y .estas: R = 0,72, = 1,08; L = 48,7 cm.
BC BC BC BC

5.6.- Una columna de HPLC de L = 22 cm tiene un volumen muerto de 1,26 mL, y la fase estacionaria ocupa 0,148 mL. Se est trabajando a un caudal de 0,30 mL/ min.

Soluto A B C D

t , min
R

4, min 0,45 1,07 1,16 1,45

6,4 14,4 15,4 20,7

Respuestas: N = 3060; H = 74 m; k = 0,52 (A); k = 2,43 (B); k = 2,67 (C); K = 4,43 (A); K = 20,7 (B);
D D

K = 22,7 (C); R = 0,90, = 1,1.

D BC BC

5.7.- Los pesticidas Aldrin (A) y Dieldrin (D) se separan mediante GC. La columna es de 15 m, y en las condiciones de trabajo funciona con N = 20000 platos tericos. El caudal medio o corregido es de 15 mL/ min. Inyectando aire se observa que el tiempo muerto es 30 s. Los tiempos de retencin de los solutos A y D son 11,4 y 11,6 min, respectivamente. Calcular: a) La anchura esperable de los dos picos. b) H (valor promedio), el nmero medio de platos por metro de columna y la resolucin entre A yD.

Respuestas: a) 0,322 y 0,328 min; b) H = 0,75 mm/ plato; 1/ H = 1333 platos/ m; R = 0,62.
5.8.- Para una columna de GC que trabaja con N = 40000 platos tericos, representar grficamente cmo vara la resolucin entre dos picos, R, en los supuestos que siguen, y comentar los resultados: a) Mantenindose constante = 1,2 para esos dos solutos, se llevan a cabo inyecciones sucesivas,
AB

reduciendo la temperatura de la columna cada vez, de modo que va aumentando k. b) Repetir el grfico anterior para dos solutos tales que = 1,02.
AB

c) Para los dos casos anteriores, y siendo k = 3, cuando se modifica progresivamente la fase estacionaria de modo que aumente.
AB

5.9.- Para columnas de relleno y para GC, la forma extendida de la ecuacin de Van Deemter es: .-

donde es el factor de empaquetado y vale aproximadamente 0,5; d es el dimetro interno de la columna; es el factor de tortuosidad y vale aproximadamente 0,7; D y D son las difusibilidades del
M S

soluto en las fases mvil y estacionaria; d es el dimetro de partcula y d es el espesor de la pelcula de

p f

fase estacionaria. Para butano como soluto y utilizando He a 25 C i a 1 bar como gas portador, se tiene: D = 0,342 cm / s. En cambio, si se utiliza N en las mismas condiciones: D = 0,0960 cm / s. Responder
M 2 M 2 2

razonadamente a las cuestiones siguientes: a) Comentar las variables y trminos de la ecuacin, relacionndolos con los de la ecuacin de velocidad simplificada, y razonando por qu estn en el numerador o denominador. b) Comentar cualitativamente cmo se ven afectados H, y H al sustituir He por N .
opt mn 2

5.10.- Repetir el problema anterior para el caso de una columna capilar. La ecuacin de Van Deemter extendida para columnas capilares de GC es:

donde r es el radio interno del capilar y d es el espesor de la pelcula de fase estacionaria depositada
f

sobre la pared interna del mismo. Comparar tambin esta ecuacin con la anterior. 5.11.- En un cromatgrafo se realizan 12 inyecciones repetidas de una misma muestra. El rea promedia de la serie de 12 picos del insecticida paratin es 13408, y su desviacin estndar 255. A continuacin se inyecta una disolucin patrn de 15 g/ mL de paratin y se obtiene un pico con un rea de 75992. Calcular la concentracin en la muestra, el LOD del mtodo.
-1

Respuestas: 2,65 g/ mL ; LOD = 0,15 g/ mL .

5.12.- En la determinacin del problema anterior, se tiene la sospecha de que la sensibilidad del detector vara con el tiempo, por lo que se decide utilizar metil-paratin como patrn interno. El metil-paratin se aade a las disoluciones de ambos, la muestra y el patrn de paratin, en una concentracin de 5,00 g/ mL . Al inyectar de nuevo la muestra, las reas de los picos del paratin y del metil-paratin son 14163 y 18052, respectivamente. Cuando se inyecta el patrn de paratin de 15 g/ mL se obtienen reas de 75043 y 18556, para el paratin y el metil-paratin, respectivamente. Calcular la concentracin de paratin en la muestra cuando no se aplica y cuando se aplica la correccin del patrn interno.
-1 -1

-1

-1

Respuestas: 2,83 g/ mL y 2,91 g/ mL .

5.13.- Para el pico cromatogrfico de la figura adjunta: a) Aplicar el procedimiento "5s" para establecer el valor de la desviacin estndar del ruido de fondo, s, en mili-unidades de absorbancia (mAU). b) Establecer la relacin seal/ruido en la posicin del mximo del pico. c) Utilizando los datos anteriores y el punto de calibrado de la figura de la derecha, calcular el LOD (con 2 cifras significativas y unidades!). Aplicar el criterio 3s (IUPAC, 1978).

-1

-1

Respuestas: a) 5s = 2 mAU, de donde s = 2/ 5 = 0,4 mAU; b) desde la media de las oscilaciones en la lnea base y en el pico, h = 8,5 1 = 7,5 mAU; por tanto, S/N = 7,5/ 0,4 = 18,8 (pico por encima del LOQ); c) la pendiente de la curva de calibrado es b = 500 mAU / 10 mg / L, de donde LOD = 3s/ b = 3 x 0,4 / (500 / 10) = 0,024 mg/ L, o bien, 24 microgramos/ L

5.14.- Las sustancias A y B tienen los tiempos de retencin de 16.40 y 17.63 minutos, respectivamente, en una columna de 30.0 cm. Una especie no retenida pasa a travs de la columna en 1,30 minutos. Las anchuras de pico (en la base) de A y B son 1.11 y 1.21 minutos, respectivamente. Calcular: a) la resolucin de la columna, b) el nmero medio de platos en la columna, c) la altura de plato, d) la longitud de columna que se necesita para conseguir una resolucin de 1.5, e) el tiempo necesario para eluir la sustancia B en la columna ms larga.

R:. a) 1.06; b)3.4x103; c) 8.7x10-3 cm; d) 60 cm; e) 35.3 minutos.

Tema 6 6.1.- Un compuesto eluye con un tiempo de retencin neto de 15 min a 373 K, y de 20,0 min a 363 K. Predecir el tiempo de retencin neto a 353 K.

Respuesta: 27,1 min.

6.2.- Una columna capilar de GC de L = 45,7 m y 2 mm de dimetro interno opera a un caudal promedio de 46,6 cm / min. Al cromatografiar steres metlicos de cidos grasos se observa una eficacia promedia de N = 47480. Calcular: a) La velocidad lineal promedia. b) Para un soluto A con k = 4,71, el tiempo de anlisis. c) La resolucin y el factor de selectividad para dos solutos B y C que eluyen con k = 0,12 y 0,18. d) La longitud de columna que sera suficiente para que dichos solutos eluyeran con R = 1,5. e) Con una columna de dicha longitud cul sera el tiempo de anlisis de A?
3

Respuestas: u = 24,7 cm/ s; t = 4,40 min; 0,40; R = 2,4; = 1,5; L = 18,3 m; t = 1,76 min.
R AB R

6.3.- Con una columna capilar de 15 m, y trabajando en condiciones isotermas, se han obtenido los
resultados de la tabla. Calcular: a) N, H y el nmero de platos por metro de columna. b) Predecir la anchura del pico del benceno. c) La resolucin del par ciclohexano/ciclopenteno, y el factor de selectividad de la columna respecto a este par. d) El nmero de platos necesario para que este par de solutos se resuelva con R = 1,0. e) Comentar qu se puede hacer para mejorar R. Soluto Aire A. Ciclohexano B. Ciclopenteno C. Ciclohexeno D. Benceno

t , min
R

4, min 0,30 0,33 -

2,50 10,70 10,82 11,60 14,00

Respuestas: N = 20060 platos; H = 750 m/ plato; N/ L = 1333 platos/ m; R = 0,40; = 1,015; N =

AB AB

130590 platos. Para mejorar R se puede aumentar la eficacia global (alargando la columna), mejorar la eficacia por unidad de longitud (cambiar la columna por otra de menor dimetro, o con una fase estacionaria de menor espesor), o mejorar el factor de selectividad (cambiando la columna por otra con una fase estacionaria ms selectiva).

6.4.- Utilizando una columna de carbowax se encontraron los siguientes tiempos de retencin corregidos: Alcohol tR' (segundos) n-butanol 42 n-hexanol 73 n-octanol 135 n-decanol 250

Un alcohol de cadena lineal se inyect en la misma columna y en las mismas condiciones que los estndares. Si su tiempo de retencin corregido fue de 100 s de qu alcohol se trataba?.

R:. 7 tomos de carbono.

6.5.- Se prepara una disolucin con pesos iguales de patrones de n-hexano, n-heptano, n-undecano y de n-tetradecano. Se toma una porcin de esta disolucin que de acuerdo con su densidad pesa 0.80 g y se inyecta en el cromatgrafo. Las reas de los picos para los patrones y para la muestra son: Patrones C6 C7 C11 C14 rea del pico 106.9 102.6 80.0 50.0 Muestra C6 C7 C11 C14 rea del pico 32.6 46.8 73.8 84.9

Calcular el porcentaje en peso a) utilizando el calibrado con patrones y b) el mtodo de normalizacin de reas. R:. a) 9.02 %, 13.49 %, 27.28 % y 50.21 %. b) 13.69 %, 19.66 %, 30.99 % y 35.66 %. 6.6- Las reas relativas de los picos obtenidos mediante cromatografa de gases de una mezcla de acetato de metilo (A), propionato de metilo (P) y n-butirato de metilo (B) fueron 18.4, 30.6 y 49.3, respectivamente. Calcular el porcentaje de cada componente si los factores de respuesta relativas del detector (sensibilidades) fueron 0.65, 0.83 y 0.92, respectivamente.

R:. A = 23.84 %, P = 31.04 y B = 45.12%.

Tema 7 7.1.- Una columna para HPLC de 15 cm x 0,46 cm, y con un relleno de partculas de 5 m, se est utilizando con una fase mvil que tiene un 80% de ACN y que se bombea a 1 mL/ min. Se obtienen 100 cromatogramas por semana, cada uno de los cuales supone 24 min de funcionamiento. a) Calcular el gasto de ACN por semana. b) Calcular dicho gasto si se sustituye la columna por otra equivalente de 1 mm de dimetro interno. c) Repetir el mismo clculo para una columna ultrarrpida (con partculas de 1,7 m) de 0,46 cm de dimetro y de 5 cm de longitud, y que se utilice tambin para obtener 100 cromatogramas semanales.

Respuestas: a) 1920 mL; b) 90,5 mL; c) 640 mL.

7.2.- Se separan compuestos aromticos por HPLC con una columna C18. El eluyente tiene MeOH y agua. Razonar cmo se vern afectados los tiempos de retencin si se pasa de un 70% de MeOH a: a) 90% de MeOH; b) 60% ACN; c) 45% THF. Datos: tringulo de selectividad de Snyder.

Respuestas: a) Se acortarn por aumento de la fuerza eluyente; b) ya que los compuestos aromticos son polarizables, aumentarn por reducirse la dipolaridad de la fase mvil; c) se acortarn, ya que el THF es ms dipolar.
7.3.- Al utilizar el tringulo de desarrollo de mtodos se observa una resolucin satisfactoria de los picos 1 y 2 con una fase que tiene 50:50 MeOH/ agua (punto B). Utilizando un nomograma se calcula la mezcla isoeluotrpica THF/ agua (punto C). Esta fase resuelve bien los picos 1 y 2, pero no resuelve los picos 3 y 4, por lo que a continuacin se prepara una fase de propiedades intermedias (punto E). Calcular la composicin de las fases C y E. Datos: nomograma de mezclas isoeluotrpicas.

Respuestas: C = 30:70 THF/ agua; E = 25:15:60 MeOH/ THF/ agua.

7.4.- En el desarrollo de un mtodo, al hacer un gradiente desde A = 5% hasta B = 95% de ACN en 30 min, el primer pico aparece a los 11 min, y el ltimo a los 20 min. Calcular la composicin que deben tener las fases A y B para reducir al mnimo el tiempo de anlisis.

Respuesta: A = 38% (mejor empezar en 35%), y B = 65% (mejor finalizar en 70%).

7.5.- Mediante cromatografa lquida de alta resolucin se puede determinar la concentracin media de pesticidas en un vegetal. Se pesan 5.0000 gramos de vegetal, se disuelven de la forma adecuada y se afora a 10 ml. Se pipetean 2 ml de esta disolucin, se aade 1 ml de una disolucin de 500 ppm de un patrn interno adecuado y se afora a 10 ml. Para realizar la curva de calibrado, en aforados de 10 ml se introducen distintos volmenes, entre 0.25 y 1.50 ml, de una disolucin patrn de1000 ppm de pesticida y 1ml de una disolucin de 500 ppm del mismo patrn interno y se afora. Expresar la concentracin de pesticidas en el vegetal en ppm y en %. Nota: El tR para el pesticida es del orden de 3.2 minutos y l del patrn interno del orden de 5.4 minutos. ml de patrn 1000 ppm 0.25 0.50 0.75 1.00 1.25 1.50 Muestra Rplica 1 Rplica 2 Rplica 3 concentracin patrn, ppm rea pesticida tR = 3.2 min 9.501 21.003 28.502 38.002 50.004 63.005 rea muestra 30.002 28.501 31.503 rea P.I. tR = 5.5 min 19.002 21.002 19.001 19.002 20.003 21.004 rea PI muestra 20.001 19.004 21.003 Apesticida / API

R:. (375.1 0.1) ppm de pesticida; % (0.07502 0.00003).

7.6.- Mediante cromatografa lquida de alta resolucin y deteccin UV a = 259 nm es posible la determinacin de cefalexina en muestras de orina.a) Calcular las ecuaciones de las rectas de calibrado as como los valores de sa y de sb cuando se utiliza el rea de la cefalexina como seal analtica y cuando se emplea el mtodo del patrn interno. Los valores obtenidos cuando se miden disoluciones patrn de cefalexina y de patrn interno se muestran en la siguiente tabla.

ccefalexina (mg/l) rea cefalexina tR =4.7min rea patrn interno tR =5.5min

5 23.85 65.46

10 46.84 64.85

15 69.86 65.07

20 92.83 64.66

25 115.89 65.21

b) Calcular y expresar de forma adecuada la concentracin de la cefalexina empleando los dos calibrados anteriores y sabiendo que se pinchan en el cromatgrafo tres rplicas de una misma muestra de orina obtenindose las siguientes reas: N 1 rplica 2 rplica 3 rplica tR = 4.7 min 65.25 65.83 65.16 tR = 5.5 min 64.86 65.97 65.48

c) Sabiendo que la muestra de orina contiene 14 mg/l de cefalexina, calcular el error relativo, % de recuperacin y estimar estadsticamente si los valores calculados utilizandos los dos calibrados son comparable al valor real. R: a) y=(0.820.03)+(4.6030.002)C, r=0.9999998; y=(0.013 0.006)+(0.07080.0003)C, r=0.99996, respectivamente. b) c = 14.03 0.08; c = 13.94 0.08. c) r = 0.2; r = - 0.4; %recuperacin = 100.2; % recuperacin = 99.6; son comparables. 7.7.- Mediante cromatografa lquida de alta resolucin es posible la determinacin de etanolamina en muestras de vino empleando deteccin fluorimtrica, OPA como reactivo derivatizante, heptilamina como patrn interno y midiendo a excitacin = 250 nm y emisin = 395 nm. a) Calcular la ecuacin de la recta de calibrado, indicando la expresin con sa y sb, utilizando el mtodo del patrn interno y los datos de la siguiente tabla. cetanolamina (g/l) Aetanolamina (tR=8min) AP.I. (tR=10min) 100 7.53 17.88 200 13.85 17.89 300 20.20 17.90 400 26.75 17.99 500 33.07 17.88

b) Calcular la concentracin de etanolamina sabiendo que se pinchan en el cromatgrafo tres rplicas de una misma muestra de vino obtenindose las siguientes reas: N 1 rplica 2 rplica 3 rplica tR = 8 min 13.75 13.63 13.86 tR = 10 min 17.88 17.89 17.88

R: y = (0.0610.004) + (35.70.1)x10-4 C. b) 198 g/l. c) (1982) g/l; s = 2 g/l; d.e.m = 1 g/l; sR = 0.01 g/l; CV = 1%.d) r = - 1%; % recuperacin = 99; son comparables.

c) Expresar el resultado de la forma adecuada y calcular la desviacin estndar, la desviacin estndar de la media, la desviacin estndar relativa y el coeficiente de variacin.d) Sabiendo que la muestra de vino contiene 200 g/l de etanolamina calcular el error relativo, % de recuperacin y estimar estadsticamente si el valor obtenido es comparable al valor real.