DOCTORADO EN CIENCIAS: REA BIOTECNOLOGA

CONCENTRACIN DE REGULADORES DEL DESARROLLO

VEGETAL INDUCIDA POR HONGOS ENDOMICORRZICOSEN DOS
CULTIVARES DE CHILE (Capsicum annuum L.)
1
TESIS
COASESOR: DR. JOS GERARDO LPEZ AGUIRRE
PARA OBTENER
EL GRADO DE DOCTOR EN CIENCIAS,
REA BIOTECNOLOGA
PRESENTA:
FRANCISCO ROMN GARCA
ASESOR INTERNO: DR JAVIER
FARAS LARIOS
ASESOR EXTERNO: DRA. MARIA PATRICIA YAHUACA MENDOZA
COASESOR: DRA. MARA DEL ROCO FLORES BELLO
COASESOR: DR. SERGIO AGUILAR ESPINOSA
C. FRANCISCO ROMN GARCA
EGRESADO DEL DOCTORADO EN CIENCIAS
AREA: BIOTECNOLOGA
P R E S E N T E .
Biotecnologa de esta Facultad a mi cargo, de su trabajo de tesis del Doctorado y en virtud de que
se le autoriza la impresin de la tesis Concentracin de reguladores del desarrollo vegetal
inducida por hongos endomicorrzicos en dos cultivares de chile (Capsicum annuum L.) ,
misma que ha sido dirigida por los C.C. Dr. Javier Farias Larios, Profesor-Investigador de la
Universidad de Colima y la Dra. Mara Patricia Yahuaca Mendoza de la Universidad Autnoma
de Zacatecas.
Este documento reuni todas las caractersticas apropiadas como requisito parcial para
obtener el grado de Doctor en Ciencias, Area: Biotecnologa y fue revisado en cuanto a forma y
contenido por los C.C. Dra. Mara del Rocio Flores Bello, Dra. Mara de los Remedios Cigales
Rivero, Dr. Javier Faras Larios, Dr. Jos Gerardo Lpez Aguirre y el Dr. Sergio Aguilar
Espinosa, Profesores-Investigadores de la Universidad de Colima.
Sin otro particular de momento, me despido de usted muy cordialmente.
A T E N T A M E N T E
ESTUDI A * LUCHA * TRABAJ A
TECOMN, COL., A 29 DE ABRI L DEL 2003.
C.C.P. EXPEDI ENTE ACADEMI CO DEL ALUMNO
C.C:P. EXPEDI ENTE CORRESPONDI ENTE.
C.C.P. ARCHI VO.
RVMD/gng* * Of. No. 188/2003.
Km 40 Autopista Colima-Manzanillo * Tecomn, Colima, Mxico * C.P. 2 8 1 0
Tel. 01 (313) 322 94 05 0 Fxt. 52251 * Fax 52252 * fcba@tecoman.ucol.mx
0
UNIVERSIDAD DE COLIMA
FACULTAD DE CIENCIAS BIOLLGICAS Y AGROPECUARIAS
efectu las correcciones y acat las sugerencias que le habian indicado los integrantes del mismo,
Con fundamento en el dictamen emitido por el jurado revisor del colegiado del rea: de
OFICIO No. 188/2003
DEDICATORIAS
A MI ESPOSA: MA. SOLEDAD SAUCEDO VENEGAS, por SU amor y por su calidad
humana, as como por compartir como pareja y acompaar la formacin de nuestros
hijos, a comprenderlos, a guiarlos
con sabidura, con una disciplina positiva
fundamentada en valores y amor, y a orientarlos con nuestro testimonio, para que
asuman una libertad responsable. Por apoyarme en los proyectos por los que
luchamos juntos. Por tener una familia enriquecida en su esencia, fortalecida en el
valor, la grandiosidad y el enaltecimiento de cada miembro.
A MIS HIJOS: FRANCISCO GERARDO y OCTAVIO ISRAEL, por acompaarme
en mis viajes de trabajo, noches de desvelo, desnimos y transformarlos en
momentos de alegra. Para que se motiven, preparen y desarrollen su talento, as
como para que sean capaces de enfrentar con determinacin, coraje y compromiso
este nuevo siglo.
A MIS PADRES: FRANCISCO ROMN AMAYA (+) y MA. AURORA GARCA
CANALES, por motivarnos para luchar y aquilatar el amor por la vida, la libertad y la
bsqueda de significado, que agigantan su esencia e impregnan los estudios para
adquirir habilidades y dar sentido,
visin, orientacin y compromiso a nuestra
existencia.
A MIS HERMANOS: MANUEL, DELIA, RUBEN, ESTHER, ISMAEL, ROSALBA y
OMAR ALEJANDRO, por mantener y cultivar en todos nosotros una profunda
amistad sin intereses ni prejuicios. Por hablar y enfrentar los problemas o diferencias
con bondad, inteligencia y tolerancia. Por su comprensin y solidaridad en la unin
familiar.
. . .
111
AGRADECIMIENTOS
A DIOS, por todo lo que me ha dado y porque nos ensea que: Feliz el hombre que
no sigue el consejo de los malvados, ni va por el camino de los pecadores, ni hace
causa comn con los que se burlan de Dios, sino que pone su amor en la ley del
Seor y en ella medita noche y da. Ese hombre es como un rbol plantado a la
orilla del ro, que da fruto a su tiempo y jams se marchitan sus hojas. iTodo lo que
hace, le sale bien! (Salmo l:l-3)
AL DR. JAVIER FARIAS LARIOS, por la asesora y direccin del trabajo de tesis y
por el apoyo brindado en mi estancia en la Facultad de Ciencias Biolgicas y
Agropecuarias de la Universidad de Colima, pero sobre todo por su amistad
brindada.
A LA DRA. MARIA PATRICIA YAHUACA MENDOZA, por la direccin del trabajo de
tesis y por el apoyo brindado en el Laboratorio de Farmacologa de la Facultad de
Medicina Humana y Ciencias de la Salud, dependiente de la Universidad Autnoma
de Zacatecas.
AL DR. MARA DEL ROCO FLORES BELLO, por la coasesora y consejos
recibidos del trabajo de tesis.
.
AL DR. SERGIO AGUILAR ESPINOSA, por la coasesora y consejos recibidos del
trabajo de tesis, as como por la atencin brindada en la Facultad de Ciencias
Biolgicas y Agropecuarias de ia Universidad de Colima.
DR. JOS GERARDO LPEZ AGUIRRE, por la coasesora y revisin del trabajo de
tesis.
DRA. MARIA DE LOS REMEDIOS CIGALES, por sus comentarios y sugerencias
sobre el presente trabajo de tesis.
MC. ARNOLDO MICHEL ROSALES, por sus comentarios y sugerencias sobre el
presente trabajo de tesis, as como por su amistad brindada.
ING. RODOLFO V. MORENTIN DELGADO, por su atencin y confianza brindada
durante los estudios de
posgrado en la U. de C.
DR. HECTOR ROMO MORENO, por su apoyo brindado en los estudios de
Laboratorio de Cromatografa de la Unidad Acadmica de Ciencias Qumicas de la
UAZ y por los consejos recibidos.
MC. JOS HERNNDEZ MARTINZ, por sus aportaciones y sugerencias sobre el
presente trabajo de tesis. Por ser un compaero de trabajo y un amigo.
v
i
AGADECIMIENTOS INSTITUCIONALES
AL COMIT FUNDADOR DE LA UNIVERSIDAD DE COLIMA Y DE LA FACULTAD
DE CIENCIAS BIOLGICAS Y AGROPECUARIAS, Por darme la oportunidad de _
estudiar el Doctorado en Ciencias, rea: Biotecnologa.
AL PROGRAMA DE PROMEP Y EN ESPECIAL AL C. RECTOR DE LA
UNIVERSIDAD AUTNOMA DE ZACATECAS. I.Q. ROGELIO CARDENAS.
HERNNDEZ por el apoyo brindado a travs del programa de formacin de
profesores por la beca otorgada y por las facilidades para realizar los estudios de
posgrado.
A LA UNIDAD ACADMICA DE AGRONOMA DE LA UAZ, a travs del director DR.
ARMANDO LEGASPI GUZMN, por su apoyo y confianza brindada para mi
superacin personal.
v
ABREVIATURAS
ABA cido abscsico
AIA cido indol-3-actico
AIB cido indolbutrico
AIAId cido indol-3-acetaldehido
ARN cido ribonuclico
CO2 Dixido de carbono
cm Centmetros
cv Cultivar
g Gramo
GA3 cido Giberlico
h Hora
HMA Hongo micorrizico arbuscular
IPA cido indolpiruvico
kg/cm2 Kilogramo por centimetro cuadrado
L Litro
M Modalidad
MA Micorrzico arbuscular
m Metro
mL/min Milimetro por minuto
m Mol por litro
ME Micelio extramatrical
MI Micelio interno
mm Milimetro
mg Miligramo
mg/kg Miligramo por kilogramo
mg/L Miligramo por litro
mg/ml Miligramo por mililitro
N Normalidad
nm Nanmetro
pH Potencial hidrgeno
ppm Partes por milln
psi Presin por pulgadas cuadradas
RCV Reguladores de crecimiento vegetal
rpm Revoluciones por minuto
Micra
L Microlitro
g/mL Microgramo por mililitro
vi
CONCENTRACIN DE REGULADORES DEL DESARROLLO VEGETAL
INDUCIDA P0R HONGOS ENDOMICORRZICOS EN DOS CULTIVARES
DE CHILE (Capsicum annuum L.)
RESUMEN
La contribucin de los hongos micorrzicos arbusculares (HMA) en el
incremento de la concentracin de los reguladores de crecimiento vegetal en plantas
de chile, en diferentes fenofases es desconocido. En este estudio se evalu el
efecto de la inoculacin de Glomus sp. Zac-19, G. etunicatum, G. intraradices y
plantas sin inocular, en los cultivares de chile mirasol y ancho, bajo condiciones de
invernadero, sobre la produccin de fruto fresco y la concentracin de fitohormonas
como cido indolactico, cido giberlico (GA3) y 6-amino purina. Se registr un
44% de colonizacin micorrzica en chile mirasol y un 42.4% en chile ancho, la cual
tuvo un -efecto positivo en el crecimiento y desarrollo, expresado en una mayor
altura, nmero de hojas, rea foliar, peso fresco total y nmero de frutos. Se registr
un incremento del 80% en el rendimiento de frutos en las plantas inoculadas con
respecto al testigo. Las concentraciones de cido indolactico y cido giberlico en
meristemos apicales, fueron mayores en las plantas colonizadas por los hongos
micorrzicos arbusculares (HMA) con respecto a las no inoculadas. La concentracin
de 6-amino purina en meristemos de raz de plantas colonizadas por HMA mostr
valores ms altos. Estos resultados sugieren que la simbiosis micorrzica modifica la
concentracin hormonal en las plantas favoreciendo a su vez el desarrollo y
rendimiento de las mismas.
Palabras clave: Hongos micorrzicos arbusculares, Capsi cum annuum L.,
Fitohormonas, cido indol 3-actico, cido giberlico y 6-amino purina.
vii
mycorrhzal fungus on two chili cultivars (Capsicum annuum L.)
ABSTRACT
levels of growth factors the chili plants, in differents steps is presently unknown. In
this experiment was evaluated the effect of the inoculation whit AMF Glomus sp. Zac-
79, G. etunicatum and G. intraradices, and either inoculated or not inoculated on two
chili cultivars (Capsicum annuum L.), mirasol and ancho, under greenhouse
conditions, on the production of fresh fruit and the concentration the indolacetic acid,
giberellin GA3 and 6-amnopurine. It was registred that mycorrhizal colonization
average of the three fungus was 44% in mirasol cultivar y 42% ancho cultivar. The
colonization shad an effect on a better growth and development in both cultivars,
expressed in a greater height, leaf number, foliar area, total fresh weigh and fruit
mass. Was registred an increase of 80% in the yield in plants inoculated respecting
to the control. Indolacetic acid and gibberellins concentration in shoots, were bigger in
plants colonized by the arbuscular mycorrhizal fungus (AMF) than in controls. The 6-
aminopurine levels in roots of plants colonized by AMF showed higher values. These
Plant promoting growth hormonal concentration induced by arbuscular
results suggest that AM fungi modify the hormonal synthesis of growth factors by the
plants.
Key Words: Arbuscular mycorrhizal, Capsicum annum L., Indolacetic acid.
Giberellin GA3, 6-aminopurine.
viii
3.
DEDICATORIAS
AGRADECIMIENTOS
ABREVIATURAS
RESUMEN
ABSTRACT
INTRODUCCIN
NDICE
REVISIN DE LITERATURA
2.1. Conceptos generales de la micorriza arbuscular
2.2. Evolucin de los hongos (MA)
Pginas
III
iV
V i
Vii
VIII
1
5
5
7
2.3. Taxonoma de los hongos (MA)
2.4. Caractersticas morfolgicas
2.5. Aspectos bioqumicos de la simbiosis
2.6. Factores predisponentes para la colonizacin HMA
2.7. Dependencia micorrzica
2.8. Especificidad de los hongos MA
2.9. Efectividad del sistema MA
2.10. Efecto de la fertilidad del suelo en la simbiosis micorrzica
arbuscular
2.11. Efectos de la simbiosis MA en el crecimiento de las plantas
7
1 0
1 5
1 7

1 9
21
2 2
24
2.12. Relaciones MA-fsforo
2.13. Otros nutrimentos y la MA
2.14. Otros efectos de la MA
2.15. Relacin MA-especies hortcolas
2.16. Relacin hormonas vegetales-HMA
2.16.1. Los hongos MA y las auxinas
2.16.2. Los hongos MA y las citocninas
2.16.3. Los hongos MA y las giberelinas
MATERIALES Y MTODOS
3.1. Descripcin geogrfica
18
3.2. Cepas de hongos micorrzicos arbusculares (HMA)
3.3. Material vegetal
3.4. Diseo experimental
3.5. Siembra e inoculacin
3.6. Anlisis estadstico
4.
3.7. Mediciones de crecimiento
3.8. Colonizacin micorrzica
3.9. Determinacin de cido indol 3-actico (AIA)
3.10. Determinacin de cido giberlico
3.11 Determinacin de 6-amino purina
3.12. Determinacin de la clorofila total
3.13. Determinacin de protenas totales solubles
3.14. Cuantificacin de esporas de HMA
RESULTADOS
4.1. Efecto de los HMA sobre el crecimiento en plantas de chile
4.1.1 Altura de plantas de chile
4.1.2. Nmero de hojas en plantas de chile
Pgina
49 \
4 9
50
50
52
53
53
54
55
56
57
57
58
59
59
6 1
4.1.3. rea foliar en plantas de chile
62
4.1.4. Dimetro de tallo en plantas de chile
4.1.5. Longitud de races en plantas de chile
4.2. Colonizacin micorrzica en plantas de chile
4.3. Contenido de clorofila total
6 4
6 6
6 7
69
4.4. Contenido de protenas totales solubles
4.5. Nmero y peso fresco de frutos de chile
4.6. Determinacin de cido indol 3-actico (AIA)
4.7. Determinacin de cido giberlico (GA3)
4.8. Determinacin de 6-amino purina
5. DISCUSIN
6. CONCLUSIONES
70
72
74
75
76
78
8 3
7. LITERATURA CITADA
85
INDICE
59
Cuadro
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10
l l
NDICEDE CUADROS
Pgina
Clasificacin taxonmica de los hongos formadores de micorrizas 9
Tratamientos evaluados en el experimento 50
Poblacin de esporas en muestras de inculo
Fechas de muestreo 52
Efecto de la inoculacin de HMA sobre el rea foliar (cm
2
) en
plantas de chile mirasol, crecidas en condiciones de invernadero 63
Efecto de la inoculacin de HMA sobre el rea foliar (cm
2
) en
plantas de chile mirasol, crecidas en condiciones de invernadero
Efecto de la inoculacin de HMA sobre el dimetro de tallo (mm) en
plantas de chile mirasol 65
Efecto de la inoculacin de HMA sobre el dimetro de tallo (mm) en
plantas de chile ancho 6 5
Efecto de los HMA sobre la concentracin de AIA (mg/L) en \
diferentes etapas fenolgicas de plantas de chile 75
Efecto de los HMA sobre la concentracin de GA3 (mg/L) en
diferentes etapas fenolgicas de plantas de chile
. Efecto de los HMA sobre la concentracin de 6-amino purina
fma/L) en diferentes etapas fenolgicas 77
63
51
76
NDICE DE FIGURAS
Pgina
Efecto de la inoculacin de HMA sobre la altura (cm) de plantas
de chile mirasol a diferentes tiempos
condiciones de invernadero
de estudio, crecidas en
2
Efecto de la inoculacin de HMA sobre la altura (cm) de plantas
de chile ancho a diferentes tiempos de estudio, crecidas en
condiciones de invernadero
3 Efecto de la inoculacin de HMA sobre el nmero de hojas en
60
plantas de chile mirasol a diferentes tiempos de estudio, crecidas
en condiciones de invernadero
4 Efecto de la inoculacin de HMA sobre el nmero de hojas en
62
plantas de chile ancho a diferentes tiempos de estudio, crecidas
en condiciones de invernadero
5
Efecto de la inoculacin de HMA sobre la longitud de raz (cm) en
62
plantas de chile mirasol a diferentes tiempos de estudio, crecidas
en condiciones de invernadero
6 Efecto de la inoculacin de HMA sobre la longitud de raz (cm) en
6 6
plantas de chile ancho a diferentes tiempos de estudio, crecidas
en condiciones de invernadero
7 Colonizacin micorrzica en plantas de chile mirasol, crecidas en
6 7
condiciones de invernadero
8 Colonizacin micorrzica en plantas de chile ancho, crecidas en
6 7
condiciones de invernadero
9 Efecto de los HMA sobre el contenido de clorofila total en plantas
6 8
de chile mirasol
10 Efecto de los HMA sobre el contenido de clorofila total en plantas
6 9
de chile ancho
11 Efecto de los HMA sobre el contenido de protenas totales
6 9
solubles en plantas de chile mirasol
71
1
60
NDICE DE FIGURAS
Figura Pgina
12 Efecto de los HMA sobre el contenido de protenas totales
13
14
1 5
16
solubles en plantas de chile ancho 7 1
Efecto de los HMA sobre e! nmero de frutos en plantas de chile
mirasol 72
Efecto de los HMA sobre el nmero de frutos en plantas de chile
ancho 73
Efecto de los HMA sobre el peso fresco de frutos en plantas de
chile mirasol 74
Efecto de los HMA sobre el peso fresco de frutos en plantas de
chile ancho 74
1 . INTRODUCCIN
La importancia de los hongos micorrzicos en la agricultura sustentable, est
basada en su funcin de unir a la planta con el suelo, al servir como agente de
transporte nutrimental entre otros componentes, teniendo un impacto en la
conservacin de ste recurso (Elliot y Coleman, 1988; Bethlenfalvay y Linderman,
1992). En los ltimos aos ha sido un problema del cual se ha generado una gran
cantidad de informacin (Smith, 2001).
La inoculacin con hongos micorrricos arbusculares (HMA), la fijacin
biolgica de ntrgeno, el uso de rizobacterias promotoras del crecimiento vegetal
(PGPR), la adicin de materia orgnica, el control biolgico y otras prcticas de
cultivo que favorecen la produccin, son alternativas viables que pueden ser
empleadas para la solucin de algunos problemas de la agricultura, teniendo una
repercusin favorable en el medio ambiente (Bethlenfalvay y Schuep, 1994).
El desarrollo vegetal puede incrementarse por la utilizacin de elementos
biolgicos que acten en forma coordinada en la interfase suelo-raz, entre stos
cabe resear la intervencin de hongos formadores de la asociacin micorriza y otros
organismos rizosfrcos (Azcn-Aguilar y Barea, 1992). En la rizosfera se llevan a
cabo importantes procesos, que definen el desarrollo y la produccin de las plantas.
Existe un flujo de compuestos producto de la fotosntesis, que son exudados por la
raz, en forma de carbohidratos, aminocidos, vitaminas, enzimas, y nucletidos, lo
que hace de la rizosfera, una zona ideal para el establecimento de una gran
variedad de microorganismos (Buttner y Sauer, 2000).
Una forma de eficientizar la produccin agrcola, es a travs del uso de
microorganismos del suelo (bacterias, hongos, algas, actinomicetos, nematodos,
colmbolos y caros, entre otros), los cuales pueden mejorar las caractersticas
fsicas, qumicas y biolgicas del agrosistema (Azcn-Aguilar y Barea, 1997).
Con el uso de microorganismos en la agricultura como los hongos
micorrzicos arbusculares (HMA), se mejoran las propiedades fsicas del suelo, el
crecimiento de las plantas y el reciclado de los nutrientes del suelo. Gracias a estos
1
!
microorganismos existe una mejor asimilacin de nutrientes a travs de la liberacin
del fsforo, potasio, la fijacin biolgica del nitrgeno (No
3
-, NH4+), la produccin de
hormonas vegetales, la simbiosis con hongos formadores de la micorriza y el control
biolgico natural. Los microorganismos endofitos comprenden a los hongos y
bacterias que viven sin causar dao en el interior de clulas o tejidos de las plantas
superiores durante una parte considerable de su ciclo de vida (Quispel, 1992). En
general, los microorganismos endofitos pueden localizarse en
espacios
intracelulares, intercelulares o en el tejido vascular (Reinhold y Hurek, 1998).
LOS hongos micorrzicos son microorganismos que estn presentes en la
rizsfera de muchas plantas, donde se establece una simbiosis mutualstica, con lo
cual se logra una mejor estabilizacin del sistema suelo-planta (Hamel ef al., 1997;
Schreiner y Bethlenfalvay, 1997).
Los HMA son simbiontes obligados, ya que no pueden completar su ciclo de
vida, sin la presencia de la planta hospedera. Este tipo de hongos todava no se han
podido cultivar in vitro, lo cual ha impedido estudiar, el desarrollo de las esporas
reproductoras (ontogenia). Su reproduccin es clonal, las esporas son vstagos
somticos multinucleados (Bcard y Pich, 1990; INVAM, 1997).
Son muchas las maneras en que actan los HMA en la rizosfera y tal vez la
ms importante sea que incrementan significativamente el volumen de suelo
explorado por las races de las plantas, sobre todo tratndose de la bsqueda de los
elementos de menor movilidad en el suelo (Ayling et al., 1997).
El uso de la micorriza arbuscular en viveros es factible en aquellos cultivos
que habitualmente contemplan la prctica del trasplante, como es el caso de los
frutales y de muchas hortalizas. En ese sentido, es necesario utilizar cepas altamente
efectivas y competitivas tanto en viveros como en almcigos, ya que las plantas
herbceas necesitan a la micorriza para crecer mejor, mientras que las plantas
arbreas las precisan para sobrevivir (Roldan-Fajardo y Barea, 1987).
La fisiologa de la micorriza, es uno de los temas que mayor atencin ha
recibido, lo cual ha ampliado el notable conocimiente sobre las interacciones entre
los simbiontes en trminos de nutricin mineral, relaciones hdricas, flujos de carbono
2
y los efectos hormonales. A lo largo de la evolucin las plantas han ido adquiriendo
capacidad para regular su actividad metablica para asegurarse un desarrollo
controlado. Esa capacidad toma cuerpo en determinados mecanismos internos,
regulados por hormonas, las cuales influyen en el crecimiento y desarrollo de las
plantas. Los reguladores del crecimiento vegetal (RCV) causan diversos efectos
biolgicos a diferentes especies vegetales o variados efectos a una misma especie,
dependiendo de la etapa fenolgica en que se estudie (Davies, 1395).
La asociacin simbitica entre hongos del orden Glomales y la mayora de las
plantas del tipo mutualista llamada micorriza arbuscular (MA), puede modificar el
balance de reguladores del crecimiento como auxinas, citocininas, giberelinas y cido
abscsico, las cuales favorecen el porte y vigor de las plantas colonizadas
(Gianinazzi, 1991; Legue et al., 1996).
La colonizacin micorrzica es estimulada por la presencia de exudados
radicales, afectando a su vez a la planta, ya que los HMA incrementan la produccin
de compuestos biolgicamente activos, como las hormonas, enzimas, quelatos, entre . .
otros. Sin embargo, la accin de las hormonas vegetales depende de su
concentracin, funcin a su vez de procesos de biosntesis y de la sensibilidad de los
tejidos a esos estmulos, los que conducen finalmente a una respuesta fisiolgica
(Davies, 1995).
La funcin de la micorrizacin y su influencia en las relaciones hdricas,
balance hormonal, fotosntesis y distribucin de carbono en la planta, son aspectos
relacionados con la interaccin en ambos simbiontes y su efectividad en nutricin
vegetal (Azcn et al., 1996).
La simbiosis micorrzca entre los hongos MA y las races de las plantas,
involucra varias interacciones a nivel molecular entre ambos simbiontes. Una de esas
interacciones es la produccin endogena de hormonas vegetales, de la cual se han
hecho pocos estudios (Regvar y Gogola, 1995).
Con el uso de los HMA, se mejora el vigor de las plantas y es posible que
stos induzcan un incremento en la concentracin de hormonas vegetales y con ello
se mejore la productividad. A la fecha la informacin generada sobre el efecto de los
3
HMA sobre la boregulacn en las plantas ha sido escasa y adems no se ha
estudiado su variacin en funcin de las diferentes fenofases de las plantas. Por otro
lado, los HMA han sido considerados como hospederos no especficos y por tanto se
requiere estudiar la contribucin de la colonizacin micorrzica en diferentes
cultivares de plantas (Morton, 1988).
Es por ello que en este trabajo de investigacin se plante la siguiente
pregunta: Cul ser el efecto de la colonizacin de los hongos MA en la
concentracin de los reguladores de crecimiento vegetal, en diferentes fenofases de
dos cultivares de chile ?.
La hiptesis a esta pregunta es que: la concentracin de los reguladores de
crecimiento vegetal, inducida por hongos micorrzicos arbusculares ser mayor en
plantas colonizadas por hongos MA, lo cual influir en una mayor respuesta
fisiolgica en la planta, adems existir una correlacin positiva entre la colonizacin
de la planta y los reguladores de crecimiento en diferentes fenofases de las plantas
de chile (Capsicum annuum L.).
Para probar esta hiptesis se plante el siguiente objetivo general: Estudiar el
efecto de la inoculacin de HMA en dos cultivares de chile crecidos bajo condiciones
de invernadero, para demostrar su participacin como elicitores de la sntesis de
reguladores del crecimiento vegetal, en diferentes fenofases de la planta.
Particularmente, este objetivo se puede desglosar de la siguiente manera:
a). Determinar el efecto de la inoculacin de diferentes hongos micorrzicos
arbusculares en la concentracin de cido indol-3-actico (AIA), cido giberlico
(GA3) y 6-aminopurina en plantas de dos cultivares de chile (Capsicum annuum L.)
crecidas bajo condiciones de invernadero en diferentes fenofases.
b). Evaluar el efecto de la colonizacin micorrzica en el desarrollo de las
plantas de chile y correlacionarlo con la concentracin de reguladores de crecimiento
en las diferentes fenofases de las plantas.
4
2. REVISIN DE LITERATURA
2. 1. Conceptos generales de la micorriza arbuscular (MA)
El trmino micorriza se refiere a la asociacin simbitica mutualstica, que se
desarrolla entre las races de la mayora de las plantas superiores y ciertos hongos
que son comunes en el suelo (Gianinazzi, 1991; Bethlenfalvay, 1992). En ella, el
micelio del hongo infecta la corteza radical a modo de endofito y proyecta sus hifas
tanto al interior como al exterior de la raz. La micorriza funciona como rgano de
absorcin y translocacin de agua y nutrientes; es una de las ms sobresalientes
adaptaciones de la raz para desenvolverse adecuadamente en el ambiente edfico
(Barea et al., 1984; Le Tacon, 1985; Creighton et al., 1986; Bethlenfalvay, 1992). Para
estos autores se trata de una simbiosis casi universal por l nmero de plantas
susceptibles de ser colonizadas por hongos micorrzicos arbusculares y por su
existencia en la inmensa mayora de los hbitats naturales. De hecho algunos
la condicin micorrzica es la regla y tanto el hongo como la planta presentan mnima
Son muchos los autores que han definido este concepto, (Powel y Bagyaraj,
1984; Harrison, 1997), citan al patlogo Alemn Albert Bernard Frank como el
acuador del trmino hace ms de cien aos, para describir esta asociacin.
La nutricin de la mayora de las plantas vasculares y briofitas, est
directamente relacionada con la nutricin de los hongos, fenmeno llamado
micotrofa. El micelio del hongo combinado con las races forma una estructura
compuesta, denominada micorriza.
En la simbiosis formada, la energa se mueve primariamente desde la planta
hasta el hongo y los recursos inorgnicos se mueven desde el hongo a la planta. En
todos los casos se refieren a un concepto doble, que encierra los componentes:
hongo y planta, del mismo modo en que lo ndica su nombre, del griego: mykes:
hongo y rhiza: raz (Allen, 1991; Harrison, 1997).
Ce los tipos de micorriza que han sido reconocidos, la ms abundante es la
vesculo-arbuscular, en la cual, hongos Zygomycetos producen arbsculos, hifas y
5
vegetales no parecen crecer y desarrollarse normalmente sin la MA. De esta manera,
especificidad (Creigton et al., 1986).
-
vesculas dentro de las clulas del cortex radical (Stribley; 1990; Gianinazzi, 1991;
Brundrett, 1991). Estos hongos incluyen alrededor de 150 especies pertenecientes a
EI hongo coloniza la corteza de las races y, en perfecto equilibrio biologico
establece con las plantas una serie de interrelaciones biotrficas. La planta
hi f as externas, capta elementos minerales, principalmente fosfatos, de la solucin
edfica y los transfiere a la planta por medio de mecanismos de gran eficiencia
El estudio de los HMA y la simbiosis formada con las races de las plantas
hospederas es complicado por la naturaleza biotrfica e hipogea de 1os micobiontes
involucrados (Fortin et a/., 2002).
2.2. Evolucin de los hongos (MA)
La micorriza es el producto de un proceso de coevolucin entre plantas y
hongos, como parte del avance colonizador de las plantas acuticas primitivas hacia
el medio ambiente terrestre (Simon et a/., 1993). Una asociacin de este tipo
aparece en musgos, plantas vasculares primitivas y helechos. Tal ha sido su xito
evolutivo que la simbiosis mantiene una presencia casi universal entre las plantas
vasculares con semilla.
Las micorrizas Son tan antiguas como las propias plantas, hecho deducido de la
observacin del primer registro fsil que se conoce de un vegetal, el fsil Rhynie,
fechado en 370 millones de aos (Nicolson, 1975). Por otro lado Redecker et al.
(2000), mencionan que los fsiles encontrados datan de 400 a 460 millones de aos:
estos mismos autores muestran que los HMA del orden Glomales, formaron
simbiosis con las plantas terrestres ancestrales, posiblemente influenciadas por SU
inicio crucial y su colonizacin en fa tierra.
Le Tacon (1995), seala que cuando las plantas comenzaron a colonizar Ias
tierras emergidas, encontraron condiciones totalmente adversas. Tambin indica que
se encontraban bsicamente en forma insoluble; su concentracin
er a
seis gneros del orden Glomales (Morton y Benny, 1990; Gianinazzi, 1991).
suministra substratos energtcos y funcionales al hongo, y este, mediante su red de
en los suelos procedentes de la degradacin de las rocas, los elementos minerales
(Barea et al., 1984).
6
extremadamente pequea en la composicin del suelo y los intercambios ent r e las
formas solubles e insolubles eran lentos.

Las primeras plantas terrestres tuvieron que adaptarse a estas condiciones tan
especiales y solamente las que pudieron asociarse a hongos y a ciertas bacterias
consiguieron colonizar los continentes. Se puede decir, que las plantas y los hongos,
formadores de las micorrizas, han evolucionado paralelamente de tal manera que se
han dado diferentes grados de interdependencia.
Marks (1991), propone la idea de que los hongos formadores de MA fueron
derivados del grupo de hongos que forman infecciones subletales, en las cuales los
hongos sin matar a sus hospedantes, penetran en las clulas corticales con la
formacin de interrelaciones prolongadas. Hoy. se sabe que casi todas las plantas
necesitan, en mayor o menor grado, estar colonizadas por hongos (MA) para captar
elementos minerales y crecer adecuadamente. Sin embargo, la dependencia es ms
marcada por parte de los hongos MA, ya que no se ha logrado evidenciar que estos,
sean capaces de completar su ciclo d e vida en ausencia de la planta hospedera,
especficamente raz hospedera, en condiciones axnicas. Actualmente se.
consideran como simbiontes obligados (Barea ef al., 1984), ya que ninguno de los
medios de cultivo comnmente utiiizados en el laboratorio para el. crecimiento de
microorganismos parece cubrir las necesidades bsicas de los HMA (Azcn-Aguilar
et al., 1991; 1998).
2.3. Taxonoma de los hongos MA
La formulacin de un sistema de clasificacin para los HMA no ha sido una
tarea fcil, las evidencias fsiles que se tienen no han sido capaces de proveer
muchas pistas sobre las relaciones simbiticas durante la evolucin, importantes en
la definicin de un sistema de clasificacin estable (Morton, 1988). Adems los
esfuerzos para estudiar el desarrollo de las esporas reproductoras (ontogenia), han
sido truncados por la imposibilidad de cultivar los hongos MA axnicamente (Hepper,
1984).
El Sistema tradicional de clasificacin de las micorrizas se basa en criterios
morfolgicos que definen dos categoras bsicas: a) ectomicorriza, y b)
7
endomicorriza, a las cuales algunos autores aaden una tercera categora: c)
ectoendomicorriza (Morton y Benny, 1990; Gianinazzi, 1991).
La simbiosis micorrzica, es formada por la mayora de las plantas superiores y -
un grupo especial de hongos fngicos de los glomales (Morton y Benny, 1990).
Desde que Gerdemann y Trappe (1974), presentaron su revisin de las
Endogonaceae, el nmero de especies reconocidas se ha duplicado. A pesar de esto
todava y no requera de una revisin a fondo (Hall, 1984).
La mayora de los esfuerzos, desde entonces, se han concentrado ms en la
descripcin de nuevas especies, que a la consideracin de sus relaciones
taxonmicas (Morton, 1988). Tambin se seala que hasta 1974, se haban descrito
slo 27 especies, de entonces a enero de 1988, se incluyeron 96, lo que da una idea
de la constante evolucin del sistema taxonmico de los hongos micorrzicos, ya
para el ao 1993 se haban identificado cerca de 150 especies (Walker y Trappe,
1993).
Una clasificacin basada en los hospederos no puede ser usada porque pocos
son los hongos que presentan especificidad. Por otro lado, las caractersticas
anatmicas no son lo suficientemente diferentes entre grupos taxonmicos, para un
sistema de clasificacin (Morton,. 1988).
En la ectomicorriza, el hongo forma sobre la superficie de la raz un manto
intercelular ofreciendo, al microscopio, un aspecto de red que se ha bautizado como
red de Hartig. En la endomicorriza, en cambio, no se forma manto fngico y las hifas
del endofito crecen no slo inter sino intracelularmente. La ectoendomicorriza, por
ltimo, Sera la categora que incluye aquellas formas intermedias entre las dos
anteriores, con red de Hartig e hifas intracelulares; en realidad se tratara de una
variante de la ectomicorriza.
La clasificacin de los HMA es discutida actualmente incluyendo la informacin
adicional de autores como: Trappe (1982) y Morton (1988), por lo que hasta ese
tiempo la clasificacin de los HMA queda como sigue:
8
y de Ia incorporacin de los gneros Complixepes y Entrophospora, Y ms
recientemente scutellospora, el sistema de clasificacin se consideraba adecuado
micelial y las hifas que penetran la corteza radical- se distribuyen de manera
Reino: Mycetae
Divisin: Amastigomycota
Subdivisin: Zygomycotina
Clase: Zygomycetes
Orden: Endogonales
Familia: Endogonaceae
Gneros: Acaulospora, Entrophospora, Gigaspora, Glomus, Sclerocystis,
Scutellospora.
Ms recientemente Morton y Benny (1990) dan a conocer la clasificacin
taxonmica de los grupos formadores de micorrizas, las cuales han sido definidad
por su modo de formacin de esporas (Cuadro 1).
Cuadro 1. Clasificacin taxonmica de los hongos formadores de micorrizas.
Divisin Eumycota
Subdivisin Zygomycota
Clase Zygomicetes
Orden Glomales
Suborden Glomineae y Gigasporineae
Familia Glomaceae, Acaulosporaceae y Gigasporaceae
Gnero Glomus, Sclerocystis, Acaulospora, Entrophospora,
Scutellospora y Gigaspora
Fuente: Morton y Benny (1990).
El orden Glomales est clasificado en la clase Zygomycetes. Sin embargo, est
siendo ahora cuestionado. Reciente la informacin de la secuencia de sus genes
ribosmicos (18S), podria establecer que eiios forman un grupo antiguo de
Ascomycetes y de Basidiomycetes (Rosendahl et al., 1994).
El gnero Glomus es el ms abundante (56%) de las especies descritas
(Mot-ton y Benny, 1990). Mor-tan y Redecker (2001), realizaron estudios sobre las
caractersticas morfolgicas y moleculares de nuevas familias de Gloma/es,
9
encontrando que la secuencia de nucletidos va desde regiones 5.8 a 18s de .sus
pesar de SU similaridad en la morfologa micorrzica y de su perfil de cidos grasos.
Redecker (2000) y Kramadibrata et al., (2000), realizaron anlisis moleculares,
gerdemanni), concluyendo que la tcnica de PCR, es un potencial importante para
futuros estudios de las poblaciones de HMA.
Ms recientemente en el lnternatonal Culture Collection of Arbuscular &,
Vesicular-Arbuscular- Mycorrhizal Fungi (INVAM) se han hecho adiciones a esta
clasificacin, donde se han incluido nuevas familias dentro del suborden Glomineae
(Paraglomaceae y Archaeosporaceae), la cual est basada sobre un consenso de
caractersticas morfolgicas y moleculares.
2.4. Caractersticas morfolgicas
La ampla diversidad de grupos fngicos forman diversos tipos morfolgicos de
asociaciones mcorrzcas. Las micorrizas se clasfcan con base en su morfologa y
con los tipos de estructuras especializadas que producen en el proceso de
penetracin nter o intracelular (Marks, 1991).
La ntma relacin botrfica hongo-planta, junto con la dependencia recproca
de los dos organismos para crecer y sobrevivir, permite sugerir que la micorriza
forma parte integral de las plantas. El establecimiento de la micorriza involucra
mltiples procesos y pueden ser determnados por una secuencia de fenmenos de
reconocimiento entre los simbiontes, los cuales inician antes del contacto fsico y
permiten su integracin morfolgica (Gianinazzi y Ganinazzi-Pearson, 1990).
El desarrollo vegetal puede incrementarse por la utilizacin de elementos
biolgicos que acten de forma coordinada en la interfase suelo-raz, entre stos
cabe resear la intervencin de hongos formadores de la asociacin micorriza y otros
organismos rizosfricos (Lnderman, 1992; Azcn-Aguilar y Barea, 1992).
La infeccin o colonizacin de una raz por parte de un hongo mcorrzico es un
proceso que involucra una secuencia de etapas reguladas por una precisa
10
r-DNA. Clasificndolas como dos nuevas familias de Archaeosporaceae y
Paraglomaceae. Cada familia es filogenticamente diferente y de otros Glomales, a
a races de Plantago meda colonizadas por hongos MA (Glomus clarum Y A.
interaccin entre endosimbionte y hospedero. En trminos generales, las etapas
bsicas son: a) pre-infeccin, b) penetracin,
c) colonizacin intraradical, d)
desarrollo del micelio externo, e) esporulacin del hongo y f) re-infeccin (Azcn, et
al., 1996).
La micorriza es resultante de complejas interacciones secuenciales entre las
hifas de los hongos arbusculares y clulas hospedantes, permitiendo as un estado
mutualista funcional (Bonfante-Fasolo, 1988), donde factores de la planta, estimulan
el crecimiento hifal de los hongos arbusculares en la fase de precolonizacin y
formacin de la simbiosis.
La pre-infeccin est asociada a la actividad de los propgulos infectivos
presentes en el suelo que circunda a la raz. Dichos propgulos pueden ser esporas
o micelio fngico. Este ltimo, generalmente se encuentra vinculado a raicillas de
plantas vivas o a segmentos de raz infectados. La germinacin de esporas requiere
en muchos casos del estmulo de exudados radicales (Daniels, 1984). El tubo de
germinacin se proyecta desde la espora hasta encontrar la superficie de la raz. La
hifa micelial tiene, en cambio, un origen menos definido y puede ser el producto de
mltiples ramificaciones dicotmicas (Elas y Safir, 1987).
Bcard y Pich (1989) distinguen dos mecanismos por los cuales las races
contribuyen en el crecimiento hifal. El primer mecanismo es iniciado inmediatamente
por la presencia de las races y es una respuesta de una estimulacin en el
crecimiento hifal de esporas germinando y requiere de las esporas hasta la
progresiva prdida de sus reservas. El segundo mecanismo es la activacin que
ocurre antes del contacto del hongo con la raz y el crecimiento fngico cesa
inmediatamente despus de remover las races.
La penetracin se inicia con la formacin de un punto de entrada que se
caracteriza por el desarrollo de un abultamiento o apresorio de contacto sobre la
superficie de la raz. No es del todo claro si el mecanismo de penetracin est
mediado por un evento enzimtico, por un evento mecnico o, por una combinacin
de ambos. En cualquier caso, dado el carcter no patognico de estos hongos, la
produccin de enzimas hidrolticas sera en cantidad apenas suficiente para abrir
11
Paso a la hifa de penetracin sin alterar la estructura de la pared celular (Barea et al.,
1991).
endomicorrzica se establece morfolgicamente, donde las estructuras
caractersticas son las vesculas y los arbsculos, estructuras internas de ta raz
colonizada y por las cuales la micorriza se denomina arbuscular. Una vez que
penetra la hifa del hongo por el apresorio de la raz, se genera un proceso
proliferatvo que conduce al establecimiento de una unidad de colonizacin que se
puede extender hasta cm de distancia a partir del punto de penetracin (Barea et
El avance de la infeccin est restringido a la epidermis y parnquima cortical.
La endodermis acta como una barrera que impide el paso del hongo hacia el
cilindro vascular, evitando el nesgo de una infeccin sstmca (Bar-ea et al., 1991).
Laundad de colonizacin avanza mediante el crecimiento de hfas aseptadas que
se extienden por entre las clulas corticales y que generan estructuras
caractersticas, como los arbsculos y las vesculas.
LOS arbsculos son estructuras del tipo de los haustorios que se originan a
partir de la ramificacin dicotmica repetida de una hifa al interior de una clula
vegetal. Las finas ramificaciones de los arbsculos realmente no entran en contacto
con el protoplasma de las clulas, sino que penetran como dedos en un guante,
denominndose invaginaciones de la membrana celular (Newman et a/., 1994). De
esta forma se produce una extensa superficie de contacto a travs de la cual se
lleva a cabo el intercambio de nutrentes minerales y carbohidratos entre el hongo y
la planta. LOS arbsculos son estructuras de corta vida, cuya presencia es indicativa
de la actividad metablica asociada al transporte de sustancias a travs de
membranas.
Con posterioridad a la aparicin de los arbsculos, el micelio empieza a
acumular reservas de carbono en forma de lpidos, lo cual se manifiesta mediante la
aparicin de ensanchamientos terminales de las hifas conocidas como vesculas.
El tipo ms comn es la endomicorriza arbuscular, formada en muchas
especies vegetales y por miembros fngicos de orden Glomeles de ta clase
Despus de la secuencia de fenmenos de reconocimiento, la simbiosis
al., 1991).
12
I
1
Zygomycefes (Morton y Benny, 1990). Las micorrizas endotrficas, estn formadas
I
por especies del gnero Scutellospora, correspondientes a la subdivisin
.
Zygomyco tina, agrupadas en el orden Glomales. Estas son conocidas como
/
l
micorrizas arbusculares (MA); ya que el hongo, produce vesculas largas e hinchadas
/
y arbsculos ramificados complejos en el interior de las clulas vegetales, excepto
los gneros Gigaspora y Scutellospora, los cuales forman estructuras llamadas
1
clulas auxiliares originadas en el exterior de la raz (Deacon, 1980; Morton y Benny, I
/
I
1990).

/
El desarrollo del micelio externo o micelio extramatricai (ME), es un evento
simultneo al avance de la infeccin cortical del micelio interno (MI). Este micelio
L
l
/
acta como un puente que conecta el suelo con el interior de la raz. Las hifas
externas se proyectan en el suelo algunos centmetros ms all de la superficie de la
raz, e incluso pueden establecer vnculos con races vecinas (Newman et al., 1994).
Algunas semanas despus de iniciada la infeccin, el hongo est en
condiciones de esporular, lo cual est supeditado a las condiciones ambientales del
suelo. En particular, la humedad parece ser el factor regulador de importancia, ya
que se ha visto que el estrs hdrico en el suelo acelera la esporulacin. En el micelio
externo se desarrollan las estructuras reproductoras del hongo, en tanto que en el
micelio interno se concentran las actividades metablicas y de almacenamiento de
carbono (Siquiera et al., 1991).
Una micorriza completamente funcional es aquella en la cual el hongo penetra
las clulas de la raz del hospedero para formar arbsculos en los que se lleva a
cabo el intercambio de fosfatos, carbohidratos y otros iones indispensables para el
desarrollo del hongo (Koide y Schneider, 1992). El intercambio de seales entre el
hongo y la planta hospedera ocurre en tres zonas.. en la zona de adhesin (Smith y
Gianinazzi-Pearson, 1988), dentro de la raz (Anderson, 1988) y en la rizsfera
(Siqueira et a!.,
1991). Es probable que la transduccin de seales tenga una
estrecha relacin con el aumento de la actividad de ATP asa en la membrana del
hospedero que rodea las ramificaciones fngicas en las clulas infectadas, as como
con el incremento de los contenidos de algunos reguladores del crecimiento o
fitohormonas (Danneberg et al., 1992).
13
Originalmente las micorrizas fueron agrupadas en tres grandes grupos: ecto,
endo Y ectoendo-micorrrkas, basados fundamentalmente en los tipos de estructuras
hongo-raz que se forman (Azcn y Barea, 1982; Harley y Smith, 1983; Creighton et
a/., 1986). Enseguida se presentan brevemente algunas de las caractersticas
l
morfolgicas ms importantes, as como su significado ecolgico.
a). Ectomicorrizas: en la naturaleza se encuentran alrededor de 5000 especies
de hongos formadores de Ectomicorrizas, las cuales se asocian a unas 2000
especies de rboles como el pino, roble, abedul, haya, abeto, suace, cedro, nogal,
castao Y eucalipto entre Otros. En un bosque maduro pueden encontrarse ms de
25 especies de hongos formando Ectomicorrizas en un solo rbol. Estos hongos
forman el manto de Sheating que envuelve a la raz; sus hifas son intercelulares (red
de Hartig) y presentan micelio septado. Las familias botnicas ms destacadas que
pertenecen la mayora de las especies de inters forestal (Morton y Benny, 1990).
b). Endomicorrpzas: se desarrollan principalmente dentro de la raz, con hifas
externas no formadoras del manto de Sheating, micelio no septado, salvo en hifas
adultas. Mismas que pueden ser inter e intracelulares. Las intercelulares no forman la
red de Hartig y las intracelulares forman: vesculas y arbsculos. La endomicorriza es
el tipo de simbiosis (hongo-raz) ms comn, que se establece en ms del 90% de
las Plantas. Las micorrizas arbusculares son las ms representativas de las
Endomicorrizas. Solo se conocen 150 especies de hongos MA. Sin embargo, este
tipo de hongos se asocian con las 300,000 especies de plantas (agrcolas, frutales y
ornamentales, enredaderas, pastos, rboles como el maple, fresno, nogal cerezo,
acacia, magnolia, ginkgo, palmito, laurel. Los hongos MA no tienen asociaciones
especficas, cualquier especie de hongo puede establecer asociaciones con todas las
plantas. Usualmente est asociada con plantas herbceas tales como maz, tomate,
fresa, leguminosas, oleaginosas y muchas ms. Sin embargo tambin se forma en
rboles como manzano, naranjo y muchos frutales de este tipo. Los hongos
responsables son de los gneros: Glomus, Scl erocysti s, Acaulospora,
presentan este tipo son: Betulaceae, Fagaceae, Pinaceae y Myrtaceae, a Ias que
14
Entrophospora Scutellospora y Gigaspora (Morton y Benny, 1990)..
c). Ectoendomicorriras: este es un grupo mixto que se divide a su vez en
Ericaceas y Orquidaceas. Las primeras pueden ser ericoides o arbutoides, y forman
estructuras intermedias de los grupos ya descritos. Sus principales plantas
hospedadoras pertenecen a las familias: Ericaceae, Epacrdaceae, Empetraceae,
Pyrolaceae, Monotropaceae y Orchdaceae, principalmente. Los hongos
responsables son Ascomicetos, Boletus o Basidiomicetos (Morton y Benny, 1990).
Los hongos micorrzicos arbusculares (HMA) son componentes importantes de
las comunidades terrestres para la ecologa, pero la estrategia de la colonizacin
micorrzica es an incierta. Hart y Reader (2002) estudiaron el comportamiento de la
colonizacin de 21 aislados de HMA de tres familias (Acaulosporaceae,
Gigasporaceae y Glomaceae), para probar su relacin entre la taxonoma y su,
estrategia de colonizacin. La proporcin y la magnitud de la colonizacin fueron
consideradas, midiendo el porcentaje de la raz colonizada, biomasa fngica de la
raz y la longitud de la hifa del suelo a las 12 semanas. De las tres familias,
Glomaceae coloniz ms rpidamente y presentaron hifas ms extensas.
Gigasporaceae mostr baja colonizacin de races y alta colonizacin del suelo,
mientras que, Acaulospora, tuvo baja colonizacin de raz y del suelo. Estos
resultados fueron similares para cuatro diferentes plantas hospederas. Estos
resultados indican que las estrategias de colonizacin por los HMA difieren
considerablemente y que la variacin taxonmica es basada al nivel de familia.
2.5. Aspectos bioqumicos de la simbiosis
,
Innumerables estudios se han realizado sobre la simbiosis micorrzica,
encaminados en su mayora a los aspectos fisiolgicos, dada la importancia que
reviste su potencialidad como fertilizante biolgico. En cambio, son relativamente
pocos los trabajos que tratan los aspectos morfolgicos y bioqumicos de la
simbiosis. Johnson et al., (2002) aplicaron l3C en pasto n situ y encontraron que las
plantas transfieren entre 5 y 8% del carbono sintetizado al micelio externo en el
establecimiento de la simbiosis micorrzica. Estos resultados demuestran que bajo
condiciones de campo, el micelio de los HMA proporciona un flujo rpido del carbono
de las plantas al suelo y a la atmsfera.
15
Bago et aI., (2002) evaluaron mediante tcnicas de resonancia magntica la
translocacin y utilizacin de lpidos del almacenamiento fngico en la simbiosis
micorrzica arbuscular, encontrando que el carbono se transfiere de la planta al
hongo en forma de hexosa y este es transformado en triacilglicerol. Los experimentos
realizados mostraron que este lpido de almacenamiento es exportado al micelio
extraradical, lo cual indica que hay una recirculacin sustancial de lpidos a lo largo
de las estructuras del hongo. De igual forma mencionan que se sintetiza arginina y
otros aminocidos en el proceso de germinacin de las esporas. .Estos estudios son
de inters, bajo el conocimiento de que la transferencia de fsforo del hongo al
hospedante, ocurre en el arbsculo, pero tambin puede estar involucrada la
liberacin de fosfato por otras estructuras del endofito, como las hifas o las vesculas,
aunque la extensa rea de contacto del arbsculo y el hospedante, lo hacen el mas
probable sitio de transferencia de nutrimentos, donde las fosfatasas desempean
una funcin importante en el transporte activo del fsforo o mecanismos de
transferencia de otros nutrimentos por los hongos (Hayman, 1987; Gianinazzi, 1991).
Durante las ltimas tres dcadas, se han hecho varios esfuerzos para
desarrollar la simbiosis micorrzica in vtro y el uso de races ha sido exitoso,
mediante la transformacin, perfilndose el uso potencial de cultivos continuos y la
criopreservacin de esporas para su almacenamiento a largo plazo, esto permitir
desarrollar investigacin en el mbito fisiolgico, bioqumico y molecular (Fortin et al.,
2002).
Tambin se han realizado algunos trabajos para estudiar la sntesis y el
metabolismo del esterol por Glomus intraradices, bajo diversas condiciones
experimentales (fase simbitica, fase aislada y fase de germinacin), encontrndose
que en los tres estados, G. intraradices contiene una mezcla de 24 eti colesterol,
como el principal compuesto, pero no ergosterol, el predominante esterol de muchos
hongos (Fontaine et aI., 2001).
2.6. Factores predisponentes para la colonizacin MA
Se ha observado que al incrementarse el nivel del fsforo en la solucin del
suelo, se reducen los beneficios aportados por las asociaciones micorrzicas, lo cual
16
es un factor negativo para la colonizacin de HMA (Hayman, 1987; Kitt et al,, 1988;
Hetrick et al., 1989; Brkert y Robson, 1994).
Hay ciertas evidencias de que la micorriza puede tener un mayor efecto
cuando el fsforo est presente en sus formas menos solubles (Brundrett, 1991). La
adaptacin de hongos mcorrzicos a condiciones particulares del suelo,,
aparentemente es ms comn que interacciones especficas con plantas
hospedantes. As, en sistemas experimentales, son raras las combinaciones
hospedante-hongo incompatibles, pero en ecosistemas naturales muchas de estas
combinaciones pueden ser menos exitosas porque los hongos son pobremente
adaptados al hbitat normal de las plantas (Brundrett, 1991).
Fundamentalmente, para que se forme un sistema MA, en un medio natural,
debern existir dos condiciones, la presencia de una planta susceptible y la de algn
tipo de propgulo en el medio. En teora, cualquier medio natural puede reunirlas; sin
embargo, las propiedades de infectividad de los hongos presentes y de efectividad
de la simbiosis resultante dependern de los siguientes factores: el grado de
dependencia de las plantas a la MA, la especificidad de los hongos y las condiciones
fsicas, qumicas y biolgicas del medio (Azcn et al., 1984); Los HMA del gnero
Glomus prefieren suelos ligeramante alcalinos o neutros (Nelsen et al., 1981).
Muchos hongos endomicorrzicos poseen caractersticas especficas
individuales que les confieren mayor tolerancia a temperaturas extremas del suelo,
humedad, baja fertilidad y salinidad, presencia de txicos y metales pesados
(Dosskey et al., 1990), los cuales pueden proveer a la planta hospedante ventajas de
competencia ecolgica e incrementar la supervivencia, crecimiento, nutricin 0
rendimiento en estas condiciones. El tipo de suelo, capacidad de fijacin de P, pH,
contenido de agua, nivel del ion calcio y fertilidad general del suelo son algunos de
los factores conocidos de importancia para la infectividad y efectividad de la micorriza
(Daft, 1991; Arines, 1991). A un nivel ms global, los hongos micorrzicos tienden a
seguir una distribucin geogrfica determinada por la latitud y la altitud sobre el nivel
del mar, adems, por supuesto, de los mencionados factores suelo y vegetacin
(Read, 1991).
17
Una de las ventajas distintivas prciporcionadas a las plantas colonizadas, es la
habilidad de producir plantas de mejor calidad que plantas no inoculadas, an bajo
una gran variedad de situaciones adversas del .medio. Dehne (1990) reporta que Ia
inoculacin en campo de hongos arbusculares eficientes adaptables a prcticas
agrcolas y hortcolas intensivas, puede incrementar la resistencia de la planta
hospedante a varias condiciones adversas y organismos fitopatgenos, y beneficios
especiales se observan en cultivos perennes, donde las plantas normalmente son
precultivadas en sustratos esterilizados o fumigados.
2.7. Dependencia mcorrzica
La dependencia micorrzica es definida como: El grado en el cual la planta
depende de la condicin de estar colonizada con hongos MA, para que produzca su
crecimiento mximo a un nivel dado de fertilidad del suelo.
Las plantas exhiben diferentes grados de dependencia frente a la micorriza.
Algunas son mictrofas obligadas y, por tanto, ven severamente disminuido su
desarrollo si no cuentan con esta asociacin; otras son rnictrofas facultativas, pues
no precisan obligadamente de la micorriza, pero bajo determinadas condiciones
crecen mejor con ella (bajo contenido de fsforo en el suelo); y finalmente una pocas
plantas no forman micorriza, es el caso de la mayora de las Cyperaceae,
Crucifereae, Caryophyllaceae, Urticaceae, Chenopodiaceae Brassicaceae,
Polygonaceae y Juncaceae, as como las plantas carnvoras, parsitas y pioneras de
suelos degradados, las cuales cuentan en general, con otras adaptaciones para
adquirir nutrientes (Paul y Clark, 1989 y St. John, 2000).
Algunas de las caractersticas de las races que no forman asociaciones
micorrzicas son: tienen poca rea superficial para la absorcin de agua y elementos
nutritivos, adems son de corta vida (1
-6 semanas> y son susceptibles de
enfermedades como Pythium, .Phytophthora, Fusarium y al ataque de nematodos. En
las plantas se presenta un amplio espectro de casos, desde la independencia total
como son las crucferas y cheenopodiaceas, que no forman MA en condiciones
normales, hasta la dependencia absoluta de ciertas plantas que son incapaces de
18
desarrollarse en suelos de elevada fertilidad como por ejemplo: las orqudeas y
algunas especies de ctricos.
Las especies con ms dificultad para captar fosfatos de la solucin del suelo o
con mayor demanda de ellos son las que tienen mayores grados de dependencia
micorrzica (Hayman, 1982).
Las especies del orden Magnoliales, las angiospermas ms primitivas, ancestro
de todas las mono y dicotiledneas, son especialmente dependientes de las MA para
captar elementos minerales, es decir, son altamente micotrficas. A las plantas con
este tipo de races se les llama magnoloides, e incluye tambin este grupo a las
otras plantas pertenecientes a ordenes diferentes. Estas races carecen de pelos
radicales o bien los tienen cortos y en escaso nmero, y las plantas que los poseen
dependen de la colonizacin an en suelos muy frtiles.
Las plantas con races de este tipo slo responden a la inoculacin de MA en
suelos deficientes en fosfatos asimilables. Entre ambos extremos se encuentran la
mayora de las especies botnicas, esto es, races del tipo intermedio.
Existen otros trbajos, como el de St. John (1980) y Azcn et al., (1984):
donde se encontr una estrecha relacin entre la micotrofa y las races de tipo
magnoloide. Sin embargo, Hayman (1982), seala que hay excepciones a esta
hiptesis, ya que encontr plantas con races del tipo graminoide fuertemente
dependientes de la MA.
/
Azcn et al., (1984), sugieren la existencia de otros factores de tipo fisiolgico o
anatmico que influyen en la mayor o menor dependencia de una determinada planta
a la MA. Sin embargo, la respuesta a la micorrizacin no depende nicamente del
hongo, sino tambin de la planta husped (Morton y Benny, 1990).
2.8. Especificidad de los hongos MA
En general, los hongos micorrzicos son simbiontes obligados, pero no son
hospederos especficos, como ocurre con otros microorganismos que establecen
simbiosis con las races de las plantas. Sin embargo, aunque no exista especificidad
taxonmica estricta entre endofito y planta hospedera, s parece evidente que se
presenten afinidades entre especies de hongos y rangos de hospederos (Restrepo et
19
aI., 1993). Existen dos aspectos importantes a considerar cuando se habla de
especificidad: el relacionado con las condiciones del suelo y el referente a las
relaciones plantz-hongos MA.
Los niveles de macro y micronutrientes asimilables y en especial el pH del
suelo, influyen selectivamente sobre las distintas especies de hongos MA. Se ha
demostrado que existe cierta especificidad entre determinadas caractersticas del
suelo y las especies de hongos MA predominantes.
En el sentido estricto, no hay especificidad entre las plantas superiores y las
especies de hongos MA, ya que cualquier hongo puede colonizar cualquier planta
susceptible. Sin embargo se presentan grandes diferencias en cuanto a la morfologa
de la infeccin y el grado de colonizacin que producen, as como en la efectividad
de la simbiosis cuando se utilizan determinados tipos de hongos y especies de
plantas (Schenck y Kinloch, 1980; Creighton, 1986).
Azcn et al., (1984), consideran adecuada una revisin del tema, en et sentido
de no utilizar el trmino especificidad si se quiere respetar el significado estricto del
mismo, sealan, ms lgico, hablar de compatibilidad en las distintas
combinaciones de una planta con especies MA.
Algunas plantas no forman sistemas con los HMA como las crucferas y las
chenopodiaceas en general y otras se muestran ms favorables a la simbiosis como
la cebolla (Yost y Fox, 1982).
Lo interesante de este punto radica en que, existen diferencias de
compatibilidad entre especies de hongos MA con especies de plantas, sobre todo
tratndose de la efectividad del sistema simbitico. Esto implica que se podrn
seleccionar aquellos sistemas ms favorables o compatibles para la planta en
cuestin.
Creighton et al., (1986), sealan que la respuesta, en trminos de colonizacin
y desarrollo radical, vara considerablemente de un hospedero a otro, donde las
plantas desempean una funcin importante.
Desde el punto de vista prctico, el hecho de seleccionar el hongo especfico
para un sistema suelo-planta dado, es absolutamente clave para la aplicacin de las
MA a la agricultura.
20
2.9. Efectividad del sistema MA
La estabilidad del sistema suelo-planta depende no slo de la raz vegetal

(tamao, morfologa y fisiologa) sino tambin de la microbiota asociada, la cual
afecta la captacin de nutrientes, y de la qumica del medio (pH, potencial redox) Por
esta razn, Ia productividad vegetal y el reciclaje de nutrientes estn influidos por las
poblaciones rizosfricas (Barea y Jeffries, 1995).
De acuerdo con los estudios de Abbott y Robson (1982), las caractersticas que
definen la eficacia de un hongo MA son: la capacidad de formar un micelio externo y
bien distribuido en el suelo; as como formar colonizaciones extensivas en las races
nuevas, la eficacia para absorber el fosfato de la solucin del suelo y el tiempo que
las hifas permanecen efectivas en el transporte de elementos minerales.
Hayman y Tabares (1985), indican que la distribucin, la efectividad de la
simbiosis o eficiencia de los hongos endomicorrzicos depende de mltiples factores
del suelo y del ambiente. Jaen (1989), menciona que son cuatro los factores que
pueden determinar el xito y la eficiencia de esta relacin simbitica:
a). El genotipo de la planta hospedera para el. reconocimiento bioqumico y
aceptacin de la relacin gene-gene.
b). La efectividad e infectividad de las especies endomicorrzicas para promover
o inducir efectos morfolgicos y fisiolgicos en las plantas hospederas.
c). La cantidad del fsforo presente en el suelo.
d). Los requerimientos nutrimentales de la planta.
Se podran incluir factores como la capacidad de intercambio nutritivo: planta-
hongo, mediante la formacin de arbsculos y la alteracin del metabolismo del
hospedero.
Con frecuencia, las poblaciones naturales de hongos micorrzicos son
insuficientes o ineficientes para el establecimiento de la simbiosis, lo cual afecta
negativamente el desarrollo de una comunidad vegetal, tanto en ecosistemas
agrcolas como naturales. En estos casos, la eficiencia de la micorriza puede ser
incrementada ya sea por manejo adecuado de los hongos nativos de un determinado
suelo, o por la inoculacin, de hongos ms eficientes y competitivos. Por tanto, la
inoculacin de hongos formadores de micorriza no debe ser una prctica
21
indiscrminada sino que debe responder a condiciones ecolgicas y edficas
particulares. En ocasiones, puede resultar ms apropiado el manejo agrocultural de
los hongos nativos y no la introduccin de hongos exticos.
El uso prctico. de la micorriza encaja dentro de una estrategia de gestin
biolgica de fertilidad de los suelos, dirigida a obtener una productividad sostenida.
Los sistemas de inoculacin y manejo cultural de los hongos micorrzicos son
tecnologas ecolgicamente racionales, y aparecen como una de las prcticas de
base biolgica ms promisorias e innovativas para los sectores agrcola y forestal.
El estudio de los hongos micorrzicos arbusculares y la simbiosis formada con
las races de las plantas hospederas es complicado por la naturaleza biotrfica de los
micosimbiontes involucrados. Fortin ef a/:, (2002) proponen que para conocer la
efectividad del sistema micorrzico arbuscular, es necesario realizar estudios en el
mbito fisiolgico, bioqumico y molecular en condiciones n vitro.
2.10. Efecto de la fertilidad del suelo en la simbiosis micorrzica arbuscular
El nivel de fertilidad del suelo y algunas prcticas como la fertilizacin afectan el
proceso de formacin y desarrollo del sistema hongo-raz (Menge et al.,1 980; Strobel
et al., 1982; Diederichs y Moawad, 1993).
La aplicacin excesiva de fertilizantes qumicos fosforados y nitrogenados
afectan negativamente la formacin de la simbiosis MA, es decir, condicionan la
seleccin de hongos adaptados a la formacin de la simbiosis en suelos frtiles o
fertilizados (Alexander y Fairley, 1983). Autores como Buwalda et al., (1982), sealan
tambin, que disminuye notablemente la colonizacin con la adicin de niveles
elevados de fsforo.
Hayman (1987), menciona que al existir una menor cantidad de fsforo
asimilable en la solucin del suelo, se incrementa en la planta la sntesis de la
enzima fosfatasa, la cual inhibe a as lectinas y permite el desarrollo de la MA.Por el
contrario, al existir una mayor cantidad de fsforo asimilable, decrecer en la planta
la sntesis de la enzima fosfatasa, lo anterior permite que no se inhiban, las lectinas
promoviendo as que se bloque el desarrollo de la MA.
22
La adicin de bajas cantidades de fsforo es compatible e incluso

complementaria con los HMA en la estimulacin del crecimiento de la planta, pero al
incrementar la dosis se comienza a interferir la formacin de la simbiosis, llegndose
incluso a la inhibicin de la infeccin (Abbott y Robson, 1982; Hayman, 1982).
Los estudios realizados sobre la accin directa de los fertilizantes en el
desarrollo preinfectivo del hongo y la formacin de la simbiosis micorrzica han
puesto de manifiesto, que ni la germinacin, ni el posterior desarrollo de las hifas se
ven afectados por la concentracin del fsforo del medio, lo que hace suponer que la
inhibicin de la colonizacin es producida fundamentalmente a travs de la planta.
Boisson-Dernier et al., (2001), sealan que una alta fertilizacin nitrogenada afecta
negativamente la simbiosis micorrzica arbuscular.
Las diferentes especies de hongos MA, muestran distintos grados de
resistencia a la aplicacin de fertilizantes y productos fitosanitarios, lo que tiene
consecuencias de inters prctico en relacin con la seleccin de hongos MA
especficos para una planta en el suelo que ha recibido dichos aportes (Hayman,
1982).
t
Otros factores del suelo que actan sobre el desarrollo de las MA son: la
temperatura, la humedad, el pH y el nivel del oxgeno en la atmsfera del suelo
(Cooper y Tinker, 1981).
Sobre la temperatura, Harley y Smith (1983), sealan que el incremento de la
temperatura es proporcional con el porcentaje de infeccin hasta los 30C, donde
decrece y despus de los 40C se inhibe por completo; as como la germinacin de
las esporas y el desarrollo de otros propgulos.
Las hifas del hongo en el suelo, pueden facilitar el transporte de agua hacia la
raz, especialmente bajo condiciones de sequa y en suelos arenosos; as como
soportar condiciones de estrs durante el transplante (Read y Boyd, 1986).
Tommerup y Kidby (1980), sealan que el contenido ptimo de humedad para
/
el desarrollo de la MA es coincidente con el de las plantas. El pH y el nivel de
oxgeno ,afectan el desarrollo de la MA casi en el mismo grado que para las plantas
hospederas; as que en valores extremos del pH y en bajos niveles de oxgeno
existente en la atmsfera del suelo habr inhibicin.
I
I
l
23
La simbiosis y la fisiologa de la planta se ven afectadas por varios factores
gentico, tipo de hongo micorrzico, nutricional, fenologa de la planta, mecanismos
de transferencia de nutrientes del hongo a la planta, fitohormonas, exudados
radicales, microorganismos de la rizsfera y condiciones ambientales. Sin embargo,
en general se habla de seales bioqumicas y aspectos genticos (Schwab et al.,
1991; Koske y Gemma, 1992; Barker et aI., 1998; Douds et al., 1998).
2.11. Efectos de la simbiosis MA en el crecimiento de las plantas
A menudo se ha reportado que la colonizacin micorrzica, adems de
incrementar el crecimiento y la absorcin de fsforo, tambin incrementa la
concentracin de otros nutrimentos en los tejidos de las plantas. Sin embargo,
Hughes ef al., (1979) encontraron que Glomus fasciculatum no influy en la
utilizacin de N, Mg, B y Zn, en ninguna dosis de fertilizacin de P. Sin embargo-es
necesario aclarar que las hifas externas de las diferentes especies endomicorrzicas
difieren en su papel de contribuir a la mayor absorcin de nutrimentos y esto est en
relacin con el nutrimento involucrado y requerimiento nutrmental de la planta
hospedante. Por otro lado Gianinazzi et al.,(1983) reportan que el beneficio de la
inoculacin se refleja en un adecuado contenido de P, K y Mg en la planta.
Entre los microorganismos cuyas acciones desempean un papel importante en
el crecimiento y nutricin vegetal los hay de naturaleza saproftica o simbitica. En
\ ambos grupos existen especies a las que se les han atribuido actividades como el
control biolgico de patgenos, favorecimiento del, enraizamiento vegetal,
transformacin qumica de formas no asimilables y biorremediacin entre otras
(Barea, 1986; Bethlenfalvay y Linderman, 1992).
La simbiosis micorrzica arbuscular se caracteriza por ser la parte ms activa de
los rganos de absorcin de la planta, y es altamente efectiva en la captacin de
nutrientes y agua del suelo (Barea y Jeffries, 1995; Ruiz-Lozano y Azcn, 1995). La
micorriza estimula el crecimiento vegetal debido principalmente al efecto benfico
sobre la nutricin mineral de las plantas (Barea et al., 1984; Diederichs y Moawad,
1993).
24
El incremento de la concentracin y/o contenido de fsforo en los tejidos
vegetales es el efecto micorriza ms estudiado y universalmente aceptado, aunque
tambin se han encontrado incrementos en el contenido y concentracin de otros
nutrientes en la planta (Brkert y Robson, 1994).
En algunos casos esto puede deberse al efecto directo de los HMA, aunque en
otros, esto puede ser una consecuencia ndirecta, cuando la planta alcanza un
equilibrio nutrcional, las races sern ms capaces de captar mejor otros nutrientes,
como los elementos menos solubles y menos mviles en el suelo como el fsforo,
cobre y zinc (Le Tacon, 1985).
La MA no slo incrementa la biomasa vegetal, sino que tambin influye sobre la
proporcin en la cual sta se distribuye entre la parte area y la parte radical. La
estimulacin de la captacin de elementos minerales y la subsiguiente translocacn
de stos a la parte area, ocasiona que se transloquen a la raz, relativamente
menos productos de la fotosntesis, y una mayor proporcin de stos sea retenida en
la parte area y utilizada en la produccin de materia verde. Como consecuenca, la
relacin peso seco de la parte area-peso seco de la raz, es normalmente ms alta
en plantas colonizadas por hongos MA (Smith, 1980).
2.12. Relaciones MA-fsforo
Las formas existentes del fsforo en el suelo son poco solubles en el agua y por
ello su concentracin es muy pequea en la solucin del suelo. Entre el 95 a 99%
del fsforo del suelo, no est disponible para las plantas, esto incluye las formas del
fsforo orgnico y el mineral insoluble. Se pens en la posibilidad de que el fsforo
extra que las plantas colonizadas captan, procediera de una solubilizacn de estos
fosfatos no asimilables. Sin embargo, los ensayos de Hayman (1982), con 32P han
puesto de manifesto que, tal como lo hacen las propias races, los HMA absorben el
fsforo de la fraccin soluble de! suelo.
La concentracin de fsforo en el micelio fngico es 1000 veces superior que en
el suelo, ya que se presenta mayor afinidad para la captacin de fsforo que por la
propia raz. La HMA incrementa la asimilacin del fsforo por las plantas, llevado a
travs de las hifas. Pocos autores han considerado la utilizacin del fsforo orgnico
25
por la asociacin hongo micorrzico arbuscular y las plantas (Jayachandram et al.,
1992).
La explicacin de la aparente solubilizacin del fsforo por los HMA, puede ser
que las hifas externas del hongo proporcionan a la planta ms posibilidades de
contacto con superficies de partculas insolubles de fosfato que las simples races,
por lo que hay muchas ms posibilidades de que los distintos microhbitats donde
qumica y bioqumicamente se est disociando el fsforo, mantengan el nivel de P
soluble y pueda ser captado por los HMA (Le Tacon, 1985; Estrada y Davies, 2001).
Existen considerables evidencias sobre la funcin que realizan los hongos
micorrzicos en mejorar la absorcin de fosfatos y su transferencia hacia las plantas
hospederas y que su presencia prevalece ms en las races localizadas en suelos

pobres en fsforo.
,
Los mecanismos que se han propuesto para explicar en qu se basa la
interferencia por fsforo en la formacin y operatividad de los HMA son:
a). La aplicacin de P soluble provoca un descenso en la exudacin radical y
en la formacin de la simbiosis micorrzica, establecindose una relacin causa-
efecto y explica la participacin del fsforo en la constitucin de las membranas
celulares (Ratnayake et al., 1978).
b). Regulacin por fosfatos de la transferencia de fsforo. Al aumentar la
concentracin de fsforo en las clulas radicales, se inhiben las fosfatasas
especficas de las micorrizas arbusculares encargadas de degradar los grnulos de
polifosfato en el interior del arbsculo, paso previo a la transferencia de iones fosfato
desde el hongo a la planta (Gianinazz-Pearson y Gianinazzi, 1981).
c). La concentracin de fsforo en la planta es inversamente proporcional a la
concentracin de carbonatos solubles en la raz y sus exudados, como consecuencia
de ello, es ms baja la frecuencia de los puntos de entrada del hongo en la raz. Esto
puede constituir una evidencia de que la planta condiciona la colonizacin de
acuerdo a sus necesidades nutrimentales (Same et al., 1983).
26
Estrada y Davies (2001), mencionan que el fosfato, desde la solucin del suelo,
hacia la planta se presenta en tres fases:
a). El fsforo es captado por las hifas externas de la planta, unas 1000 veces
ms rpido que por la difusin a travs de la solucin del suelo.
b). Posteriormente el fosfato es trasladado a travs de las hifas intraradicales, y
c). Finalmente se da la transferencia al citoplasma o es acumulado en las
vacuolas, en forma de grnulos de polifosfato, el cual es impulsado a travs del \
lumen de las hifas por corrientes citoplasmticas hacia los arbsculos, en donde el
polifosfato es degradado y el in fsforo es transferido a la clula hospedadora.
El fsforo orgnico en el suelo puede ser utilizado,por las plantas, despus de
la mineralizacin, la cual es una actividad importante de los microorganismos del .
suelo (Joner et al., 1995).
Por lo general, los fertilizantes completos (N, P y K), crean efectos negativos \
sobre la intensidad de la colonizacin micorrzica. Por lo tanto suelos con alta
fertilidad conducen a una pobre colonizacin, siendo poco probable encontrar
abundantes hongos MA en suelos agrcolas que son fertilizados intensivamente.
Consecuentemente a la aplicacin de fertilizantes, los cultivos dependen menos de
los hongos MA para su crecimiento. Bajo estas condiciones, algunas especies de
hongos son incapaces de colonizar y de beneficiar al cultivo (Sieverding, 1989;
Sieverding, 1991).
Al producirse la entrada del hongo en la clula vegetal, sta sintetiza la
membrana perisimbitica que posee fosfatasas neutras y ATP asa, implicadas en la
degradacin de grnulos de fosfato y su transferencia activa al vegetal,
respectivamente, y dicha membrana contina con la membrana plasmtica que es la
que rodea a la hifa del hongo (Perotto et al,, 1994). Cabe destacar que la pared del
hongo cambia la estructura de quitina de estratificada a amorfa, lo que la convierte
en ms fina y desaparecen los -. 1 3 glucanos con la formacin del arbsculo. El
incremento de la actividad fosfatasa que ocasionalmente se ha observado alrededor
de las races micorrizadas parece ser atribuible al incremento, en la micorrizosfera,
de poblaciones microbianas con dicha actividad (Tarafdar y Marschner, 1994).
27
2.13. Otros nutrimentos y la MA
Las hifas de los HMA pueden absorber nutrientes de la solucin del suelo, tales
como: P, Zn, S, Ca, B y Cl (Buwalda et al., 1982) y N (Ames et a/., 1983), y los
traslocan a las races de las plantas hospedantes, pero es ms importante la
absorcin de los ms inmviles que son P, Zn y Cu (Kothari et a/,, 1991).
Las plantas por s solas absorben a travs de sus races solo los elementos
minerales solubles que se encuentran en cantidades muy pequeas en la solucin
del suelo.
Los elementos minerales que circulan con facilidad hacia la rizosfera, como
nitratos y sulfatos, no suelen crear zonas de deficiencia alrededor de las races y la
contribucin de las hifas, en la captacin de ellos, es limitada (Barea et a/., 1984).
Los iones fosfato y amonio, que se difunden ms lentamente en la solucin del suelo,
Son captados relativamente ms por las hifas de los HMA. La captacin de los
micronutrientes es a Veces contradictoria, ya que se tiene evidencia consistente de
un incremento en Su captacin por los HMA, slo para zinc y cobre (Rhodes y
Gerdemann, 1980).
2.14. Otros efectos de ta MA
Son Varios Ios efectos fisiolgicos con los que la planta responde a la
inoculacin, por mencionar algunos de ellos: incremento en la concentracin de
algunos reguladores de crecimiento vegetal (Allen et al., 1980); mayores tasas
fotosintticas (Allen et al., 1981; Del Val et a/., 1999); mayor produccin de arginina
(Barea y Azcn-Aguilar, 1983); mayor produccin de isoflavonoides (Morandi et el.,
1984).
Algunos autores sugieren un efecto adicional de las micorrizas, en condiciones
de estrs hdrico (Ruz-Lozano et al., 1995), al mero aporte de fosfatos, esto
adquiere especial relevancia cuando la movilidad del ion se dificulta aun mas en
condiciones de escasa humedad (Nelsen y Safir, 1982).
Louis y Lim (1987), estudiaron la relacin entre la densidad de esporas y la
Colonizacin en cuatro especies de plantas bajo suelos forestales, encontrando que
28
cuando el nmero de esporas fue alto, el porcentaje de colonizacin fue bajo, pero
que cuando el nmero de esporas declin, la colonizacin se increment.
Allen et al., (1980; 1982), encontraron que adems del efecto de los HMA sobre
la nutricin, existen otros mecanismos que actan sobre el crecimiento de las plantas
colonizadas, detectando niveles elevados de fitohormonas como giberelinas,
citocinnas, lo que se manifest en adelantos en la floracin de dichas plantas.
Foster y Ncolson (1981); Koske y Halverson (1981); Schreiner y Bethlenfalvay
(1995), coinciden en afirmar que los efectos de los HMA sobre el mejoramiento de la ,~
estructura del suelo es a travs de la formacin y estabilizacin de los agregados del
suelo, en concreto por las hfas del hongo.
Dehne (1975), encontr un mayor contenido de clorofilas a y b, en plantas
colonizadas de tomate (Licopersicum sculentum L.), las cuales fueron monos
afectadas por las enfermedades vasculares. Otros investigadores sealan a los HMA
como los responsables de ejercer sobre la planta una proteccin contra patgenos
del suelo. En el caso de enfermedades que afectan al sistema radical, los HMA
pueden actuar protegiendo a la raz frente al patgeno o bien compensando el dao
causado. En cualquier caso, esta proteccn puede ser debida simplemente a la
mejor nutricn de la planta (Graham y Menge, 1982).
La MA puede sintetizar los siguiente compuestos: etanol-sobutanol, cido
butrico, monoterpenos, sesquterpenos, cido ascrbico, etileno, argnina, protenas,
_
isoflavonoides y fitoalexinas, los cuales pueden inhibir el crecimiento de otros hongos
fitopatgenos como:
Pythum, Phytophthora y Pmez, (Hayman, 1987).
La MA acumula manitol y trehalosa en las vacuolas de las clulas vegetales, al
contraro de lo que ocurre normalmente con otro tipo de micorriza, el material de
reserva en la MA se acumula en forma de lpidos, ya que la mitad del peso del
micelio lo constituye material lipdico (Cooper et al., 1978); esto permite una mayor
resistencia al estrs hdrico, reduce la incidencia al ataque de patgenos, por medio
de los rizomotfos las cuales son bandas alargadas de hifas paralelas, que forman
una maraa que sirve como barrera fsica contra la entrada de patgenos (Siquiera,
\
1988).
29
Diversos estudios han demostrado que la colonizacin MA puede controlar las
enfermedades de las plantas causadas por patgenos de la raz, y, que solamente
una vez establecidos los HMA podran reducir el peligro (Rosendahl y Rosendahl,
1990; Perrin, 1990). La asociacin de los microorganismos endofitos con su
hospedero puede ser mutualstica y llegar hasta el umbral de un organismo patgeno
en estado de latencia (Strobei y Long, 1998).
La produccin de la peroxidasa, la cual produce paredes celulares
secundarias y suberizacin de las mismas, puede contribuir a crear resistencia a
subsecuentes microorganismos patgenos invasores. Con este probable control
biolgico de enfermedades por la MA, se abre un nuevo proceso de investigacin en
la fisiologa de la simbiosis, ya que su potencial en la produccin de cultivos permite
su explotacin (Giannazzi, 1991).
Existen ms evidencias de lo que la micorriza puede llegar a significar en sus
aplicaciones en la agricultura, por lo pronto, slo constituyen lneas de investigacin
que incrementan el inters por su estudio.
2.15. Relacin MA - especies hortcolas
Los cultivos hortcolas se constituyen como de gran valor estratgico y social
para la agricultura en Mxico por varias razones, entre las cuales destacan las
siguientes:
a). La potencialidad que ofrecen las condiciones climticas y edficas en el
pas.
b). La diversificacin de la agricultura.
c). Sus necesidades de mano de obra, que generan fuentes de empleo en el
campo durante casi todo el ao.
d). El valor alimenticio que representan para productores y consumidores.
e): Las superficies establecidas que normalmente tienden a incrementarse en
muchas reas del pas.
Por estas y otras razones, el fomento de la horticultura es esencial para el
desarrollo sano de la agricultura en general.
30
En algunos trabajos que se han realizado en cultivos hortcolas se han
corroborado los efectos benficos de los hongos MA en el desarrollo y en la mejor
nutricin de stos cultivos. Por ejemplo, Wacker y Safir (1990) reportaron que las
races de esprrago produjeron un compuesto fenlica llamado cido ferlico, el cual
es inhibitorio para el crecimiento de HMA. Pedersen et al., (1991) determinaron que
el esprrago produce tres cidos fenlicos (ferlico, cafico y metilenedioxicinmico),
los que inhibieron la colonizacin micorrzica. Por su parte Smith (1980), realizando
estudios, en cultivos anuales, encontr que la mxima abundancia de esporas,
ocurri al final de la estacin de crecimiento.
Nelsen et al., (1981), reportan que a niveles superiores a 10 kg/ha de P
disponible, la colonizacin es uniformemente baja en cebolla (Allium cepa L.). La
fuerte respuesta de las plantas de Allium a la colonizacin micorrzica es
probablemente atrbuble a la baja eficiencia con la que sus races absorben P de la
solucin del suelo y a una baja longitud radical especfica as como a una escasez
de pelos radcales (Itoh y Barber, 1983).
Snellgrove y Stribley (1986), demostraron que las plantas de cebolla (Allium
cepa L.), inoculadas en el almcgo con G. mosseae y transplantadas un mes
despus, a la cosecha dieron menor rendimiento que con la tecnologa comercial,,_
pero produjeron menor nmero de bulbos divididos. En Inglaterra la fertilizacin de la
cebolla significa slo el 5% de los costos variables de produccin, por lo que el

empleo de la micorriza significara poco ahorro. Tal vez el potencial de la micorriza

est en la agricultura orgnica donde el fsforo autorizado por la Britsh Organic
Standard Committe est basado en materiales orgnicos poco solubles roca
fosfrica.
Stribley (1990), recalca que desde 1904 Gallaud, demostr que la raz de
cebolla, es material excelente para el estudio de la colonizacin micorrzica. Las
plantas de cebolla colonizadas con HMA mantuvieron ms altas concentraciones de \
P que las no inoculadas, hasta que la concentracin de P en la solucin del suelo fue
de 0.8
mg/L .
Linderman y Davis (2001), estudiaron los efectos de Glomus intraradices y
cornposta, en la captacin de fsforo por parte de la micorriza y en la retencin de
31
agua , encontrando que las plantas de cebolla son altamente susceptibles de ser
colonizadas y que el crecimiento del bulbo fue debido a la captacin de fsforo por
parte de la hifa extraradical, se mejor la eficiencia nutrimental y que Ios HMA tienen
efectos estimulantes en las plantas.
Al-Karaki (2002), en un experimento de campo, en el cultivo de ajo inoculado \
l con Glomus mosseae, evalu el rendimiento del bulbo y encontr que eI anlisis del
beneficio-costo se mejor en las plantas hospederas, concluyendo que los HMA
pueden utilizarse para optimizar el rendimiento del cultivo.
Entre las hortalizas, el cultivo de chile (Capscum annwwm L.), ha mostrado una
respuesta significativa a la inoculacin micorrzica (Bagyaraj y Sreeramulu, 1982).
Estos autores inocularon semillas de chile al momento de la siembra, sin tratar al \
suelo; seis semanas despus lo trasplantaron, observando que la inoculacin puede
sustituir en un 50% la fertilizacin fosfatada, midiendo como respuesta el peso seco
deIOfrutos y contenido de cido ascrbico, entre otras variables. Ellos encontraron
que las plantas provenientes del almcigo tenanun 30% de colonizacin (el doble
que las no inoculadas) y al final de la cosecha presentaron. de 90 a 100% de
colonizacin, mientras que las no inoculadas presentaron un 80%.
Yocom (1985) report la influencia de la MA en el esfuerzo reproductivo, es
decir que indujo una proporcin mayor de recursos hacia la fructificacin en el cultivo
de chile (Capsicum annwwm L.). La produccin de plntulas de chile, debe hacerse
utilizando las tcnicas que garanticen su posterior desarrollo para que lleguen a
producir adecuadamente, tanto en cantidad como en calidad. Babu y Lokeshwar
(1988), afirman que se puede ahorrar de 50 a 70% del fertilizante fosfatado al
inocular el chile con HMA.
Waterer y Coltman (1989) compararon la inoculacin al momento de la siembra
y al transplante y obtuvieron mejores resultados cuando lo hicieron a la siembra.
Tambin observaron que los HMA no tuvieron efectos negativos discernibles cuando
el fsforo. del suelo fue suficiente. Estos mismos autores, al trabajar tambin con
chile y G. aggregafwm, variaron la concentracin de P en la solucin de 0.01 a 1.0
mg/L y notaron que a concentraciones de 0.01 y 0.03 mg/L, la inoculacin con HMA
increment la absorcin de P, produccin total de materia seca, rendimiento de fruto
32
I
y reduccin del tiempo a la antesis. Arriba de 0.4 mg/L las plantas testigo y las
colonizadas rindieron similarmente. Tambin notaron que con 60% de infeccin
radical al transplante no fue suficiente para una respuesta mxima durante el
crecimiento subsecuente.
Recientemente Aguilera-Gmez et al., (1999) evaluaron la influencia del fsforo
y la endomicorriza (Glomus intraradices) sobre el crecimiento de plantas de chile
ancho (Capsicum annuum L. CV. San Luis), encontrando que la endomicorriza
increment el nmero de hojas, rea foliar, tallo, races y tamao del fruto,
comparado con las plantas no colonizadas. La colonizacin de races (arbsculos,
vesculas, hifas internas y extrarradicales) fue elevada en niveles bajos de fsforo,
mientras que la esporulacin no fue afectada negativamente.
Por su parte, Davies et al., (1993) demostraron que plantas micorrizadas de
chile ancho, cultivar San Luis (Capsicum annuum), son capaces de regular sus
estomas en forma ms rpida y presentar tasas fotosintticas ms altas que las
I
plantas no inoculadas durante la etapa de aclimatacin. En s, plntulas
/
micorrizadas de chile ancho tienen una alta tasa fotosinttica, as como mayor
expresin de crecimiento y desarrollo y, mayor capacidad de absorcin nutrimental
que las plntulas no inoculadas por estos hongos.
La inoculacin con Glomus aggregatum en plantas de chile, increment la
absorcin de P y el rendimiento de materia seca, donde la concentracin de P en la
II
solucin del suelo fue de 0.02
mg/L (Waterer y Coltmann, 1989b).
1989b).
/
I Afek et al., (1990) probaron el tiempo requerido para la colonizacin micorrzica,
basndose en la edad de la raz y posicin del inoculante en suelo con 9.5 ppm de P
y 632 ppm de N, empleandoGlomus desertcola, G. intraradix y G. mosseae, en
cebolla y chile, reportando los siguientes datos: en suelo esterilizado, plantas de
cebolla de tres das de edad fueron inoculadas con G. desertcola, presentando
colonizacin a los tres das, la cual increment a 50% despus de 21 das. En chile,
G. desertcola present colonizacin a los tres das y alcanz un 60% a los 21 das;
G. mosseae mostr colonizacin a los 6 das y se registr un 13% a los 21 das; y
para G. intraradix, la colonizacin fue observada a los 6 das llegando a 10% a los 21
das despus. La mxima colonizacin fue lograda cuando el inculo se coloc a 3
33
cm abajo de la semilla cuyo mximo pico fue a las 5 semanas tanto para el suelo
fumigado como para el control.
Davies et a/., (2002) realizaron estudios del efecto de los HMA en plantas de
chile ancho (Capsicum annuum L.) CV. San Luis en la resistencia a sequa. Glomus
fasciculatum y Glomus sp. Zac-19 fueron los inculos utilizados, donde las plantas
fueron expuestas a 20 das de sequa, la cual afect la conductancia estomatal, la
transpiracin y biomasa de la planta. Las plantas colonizadas con Glomus sp. Zac-
19, fueron ms resistentes a la sequa, ya que encontraron una mayor proporcin de
races y mayor biomasa total en las plantas inoculadas, con respecto de las plantas
sin inocular. As mismo encontraron que la sequa reforz la formacin de arbsculos
y el desarrollo de la hifa de G. sp. Zac-19, mientras que la colonizacin por G.
fasciculatum fue menor.
Gaur et al., (1998), estudiaron el efecto de los HMA en el cultivo de chile en
suelos enriquecidos con materia orgnica, encontrando que G. intraradices coloniz
en un 68% y tuvo un efecto en el incremento en rendimiento del orden del 112% en .
comparacin con plantas sin inocular.
2.16. Relacin hormonas vegetales - HMA
El desarrollo de cualquier tejido vegetal es un proceso sumamente complejo en
el cual interviene un gran nmero de factores externos e internos cuyos mecanismos
precisos de accin en muchos casos an no se han esclarecido. Entre los factores
internos que controlan el desarrollo en los diferentes tejidos de una planta destacan
los llamados reguladores del crecimiento vegetal (RCV), tambin conocidos como
hormonas vegetales o fitohormonas. Los RCV son compuestos orgnicos
sintetizados por la propia planta, que en muy pequeas cantidades alteran el
crecimiento o los patrones del desarrollo en los tejidos vegetales (Davies, 1995).
Estos reguladores vegetales qumicos son compuestos que en cantidades bajas
estimulan, inhiben o modifican los procesos fisiolgicos, son especficos en cuanto a
su accin y regulan el crecimiento de las clulas, la divisin y la diferenciacin
celular as como la organognesis, la senescencia y el estado de latencia. Su accin
es probablemente secuencial (Takahashi, 1986).
.
34
Hasta hace pocos aos se tena la creencia de que la mayora de los
fenmenos relacionados con el desarrollo de los vegetales podan ser explicados
sobre la base de simples cambios en las concentraciones y tipos de estos
compuestos presentes en un tejido. Actualmente se sabe que el papel de la
concentracin de estos compuestos en un tejido, aunque importante, no es tan
determinante como lleg a suponerse, pues hay otro tipo de consideraciones a tomar
para explicar el proceso del desarrollo en las plantas (Davies, 1995).
La fisiologa de la micorriza, es uno de los temas que mayor atencin ha
recibido en aos recientes, lo cual ha ampliado el notable conocimiento sobre las
interacciones entre los simbiontes en trminos de nutricin mineral, . relaciones
hdricas, flujos de carbono y efectos hormonales (Davies, 1995).
Las hormonas regulan muchos procesos fisiolgicos en plantas superiores,
tales como crecimiento y alargamiento celular, diferenciacin y especializacin de
tejidos, y la induccin de sntesis de protenas. Las hormonas de las plantas pueden
ser divididas en 5 clases principales: auxinas, citocininas, giberelinas, gas etileno y
cido abscsco, aunque recientemente se han encontrado substancias que ejercen
accin parecida como los brasinoesteroides, poliaminas, jasmonatos y cido
salislico (Darnell ef al . , 1990; Davis, 1995).
La palabra hormona significa mensajero, un mensajero qumico que ejerce
accin a una distancia. El trmino fue usado primero por Starling en 1906, en
relacin con animales y apareci en la literatura botnica en 1910 (Gardner et al.,
1985). Los fitoreguladores son aquellos compuestos que en cantidades bajas
estimulan, inhiben o modifican los procesos fisiolgicos de las plantas. Bidwell (1979)
define a las hormonas vegetales o fitohormonas como reguladores vegetales
(auxinas, citocininas, giberelinas e inhibidores de crecimiento y etileno), que son
transportados del lugar donde son producidos en la planta, al lugar donde ejercen su
accin y que entonces sirven como portadores de informacin. Frecuentemente los
procesos del desarrollo estn afectados en rutas contrarias por dos a ms hormonas.
Actualmente se sabe que estos compuestos actan no solamente sobre el
crecimiento. sino tambin sobre muchos otros fenmenos del desarrollo, por tanto
sera ms apropiado llamarlos reguladores del desarrollo.
35
Las poblaciones microbianas del suelo se desarrollan fundamentalmente
alrededor de las races de las plantas, donde son estimuladas por la presencia de
exudados radicales, clulas desprendidas, fragmentos de tejidos, entre otros,Ios
cuales son aportados por las plantas. Esta es la principal suministradora de sustratos
energticos al suelo, por lo que, al ser hetertrofos la mayor parte de Ios
microorganismos que all viven, se constituyen en la principal fuerza motriz del
sistema suelo-planta. Este incremento en la actividad microbiana de la zona de
influencia de las races, la rizsfera, afecta a su vez a la planta, ya que los
microorganismos estimulados llevan a cabo una serie de actividades que repercuten
en el desarrollo de la misma. Entre tales actividades cabe destacar la produccin de
compuestos biolgicamente activos, como son hormonas, enzimas, quelatos, entre
otros; su implicacin en el ciclo de nutrientes y de la materia orgnica; as como su
contribucin al mantenimiento de la estructura del suelo (Azcn et al., 1984; Barea y
Azcn-Aguilar, 1992).
Esencialmente, las interacciones de los HMA con algunas bacterias como
Rhizobium, han mejorado la nodulacin y fijacin de nitrgeno, inducida por las
micorrizas y, recprocamente, un incremento de la colonizacin micorrzica en plantas
bien noduladas. Como en leguminosas, se han argumentado mecanismos basados
en la mejora de la nutricin fosforada y nitrogenada, as como cambios en el balance
hormonal de la planta. Son necesarios, sin embargo, ms estudios que profundicen
entre las interacciones de ambos endofitos (Russo, 1989).
Azcn et al., (1984) demostraron la interaccin sinrgica entre Azotobacter,
Rhizobium y Pseudomonas sp. (bacterias solubilizadoras de fosfatos), las cuales
producen reguiadores del crecimiento y son un factor que les permite incrementar la
colonizacin de la MA en las plantas.
2.16.1 Los hongos MA y las auxinas
Gaspar et al., (1996) sealan que las auxinas son un grupo de compuestos
derivados comnmente del triptfano, sintetizados por lo general en los pices de las
plantas, y que estn implicados en varios eventos relacionados con el crecimiento y
diferenciacin celular. Se sabe que participan en la regulacin de algunos procesos
36
que ocurren en los tejidos vegetales como el crecimiento celular, estimulacin del
crecimiento del tallo, la acidificacin de la pared celular, el inicio de la divisin celular,
la formacin de tejidos no diferenciados (tejido calloso), la diferenciacin del tejido
vascular y la formacin de rganos (races, flores y frutos). En las plantas, las
auxinas tienen que ver con la dominancia apical, afectan la senescencia y abscisin
de las hojas y coordinan algunas respuestas trpicas. La auxina natural ms comn
es el cido indol-3-actico (AIA), pero dependiendo de la especie, edad de la planta,
estacin del ao y condiciones de crecimiento pueden aparecer otras auxinas
naturales en los tejidos, como por ejemplo el cido 4cloroindol-3-actico, el cido
indol-3-acrlico o el cido indolbutrico (AIB). Estos mismos autores sealan que
algunos precursores de las rutas biosintticas de las auxinas pueden tener actividad
propia como auxinas y sustituir as al AIA.
Muchas plantas superiores crecen ms por alargamiento celular que por
proliferacin celular, el tamao y forma de la planta esta determinada primariamente
por la cantidad y direccin de ese alargamiento. El nombre auxina significa en griego
crecer y es dado a un grupo de compuestos que estimulan la elongacin (Mc.
Dougall y Hillman, 1978).
El cido indol-3-actico (AIA) es la forma predominante, sin embargo,
evidencias recientes sugieren que existen otras auxinas indlicas naturales en las
plantas. Aunque las auxinas se encuentran en toda la planta, las ms altas
concentraciones se localizan en las regiones meristemticas en crecimiento activo,
Se les encuentra tanto como molcula libre o en formas conjugadas inactivas.
Cuando estn conjugadas, las auxinas Se encuentran metablicamente unidas a
otros compuestos de bajo peso molecular. Este proceso parece ser reversible. La
concentracin de auxinas libres en las plantas vara de 1 a 100 mg/kg de peso fresco
(Barker y Tagu, 2000).
Slankis (1973) examin los efectos de los hongos micorrzicos sobre la
histologa y morfognesis de algunas plantas hospederas como el pino, encontrando
que la colonizacin de hongos micorrzicos induce la formacin de auxinas, las
cuales participan directamente en el crecimiento de la longitud de races y en Ia
cantidad de races. Este mismo autor observ que el AIA es absorbido y
37
translocado al sistema radicular y que parece tener efectos en otras regiones donde
no ha sido producido, concluyendo que esta hormona causa desviaciones
morfolgicas en la formacin de micorriza; que las hormonas influyen totalmente en
el sistema radicular, afectando la frecuencia y secuencia de races cortas y largas; y
que no Solamente se increment la dicotoma de las races, sino que caus
modificaciones histolgicas o diferenciacin cerca de los meristemos. As mismo
sugiri que la estructura de las ectomicorrizas refleja una fisiologa especfica y un
estado metablico que es reducido y mantenido por auxinas fngicas y que ese
estado es Un prerrequisito para el establecimiento y funcin de la relacin simbitica.
Tambin encontr que elevadas concentraciones de nitrgeno disminuyen la
formacin de auxinas por los hongos.
El cido indolactico (AIA) fue aislado por primera vez por Kogl y Kosterman en
1934. Llamado originalmente " heteroauxina, tambin fue aislado de medios de
cultivo de levadura y del hongo Rhizopus suinus (Leopold, 1987).
Antoszewsk (1973) establece que las condiciones para la actividad de los
reguladores de desarrollo en el organismo vivo son:
a). Debe existir el emisor del regulador y el sistema que lo suministra. Es decir,
el regulador puede producirse en el mismo sistema o recibirse de afuera (por
ejemplo, de parte de los organismos que viven en simbiosis con la planta).
Frecuentemente el regulador es producido por el emisor a partir de precursores
suministrados por otros rganos. El emisor produce el regulador de crecimiento, el
cual Sea transpmta Otras partes de la planta. En el caso de fas auxinas, se puede
considerar como emisor, la parte apical del brote con el meristemo, entrenudos
inmaduros y hojas jvenes.
b). Debe existir el sistema que controla el lmite superior e inferior de
concentraciones. El lmite inferior es controlado frecuentemente por el mismo emisor.
El lmite superior esta dado por los sistemas enzimticos que desintegran el
regulador (por ejemplo: oxidasa de cido indol 3-actico), conjugndolo con otras
sustancias de una manera reversible o irreversible.
38
c). En el organismo debe existir el sistema que hace posible el transporte del
regulador, desde el emisor hasta el lugar donde desempea su accin. Conocido
como canal de informacin, sistema de translocacin sistema translocador.
d). La parte de la planta, en la cual el regulador despliega su accin, debe
disponer del sistema para recibir la informacin y descifrarla, as como un receptor de
informacin. El conocimiento sobre receptores de hormonas es muy escaso. Por lo
general, las funciones fisiolgicas del organismo se regulan por la transmisin de
alimentacin e informacin. Se debe recordar que cada proceso- fisiolgico aunque
localizado en una parte de la planta, depende de lo que ocurre en otras partes de
sta.
Algunos progresos se han dado; en la ltima dcada, en respuesta a esos
postulados. Las evidencias acumuladas indican que las auxinas son transportadas
dentro de las races, desde la base hasta el pice de la raz, esto es una direccin
acroptala y el transporte est polarizado, el cual es dependiente de la energa
metablica y es favorecido por la luz y por la temperatura.
Por otro lado, algunos estudios bioqumicos empiezan a aclarar el panorama
sobre las interacciones enzimticas entre el hongo y la raz. Parece ser que el hongo
MA contribuye significativamente a la actividad metablica de la raz colonizada
(Gianinazzi, 1991). Este mismo autor seala que, la MA puede afectar el balance
hormonal de las plantas hospederas como cido abscsico (ABA), cido indolactico
(AIA), citocininas, giberelinas, vitaminas y compuestos volatiles, incrementando de \
esta forma el tamao y longevidad de la raz, as como-lograr un mejor crecimiento y
desarrollo del vegetal.
Rayle y Cleland (1992), sealan que las auxinas se generan principalmente en
las partes jvenes de las plantas: pices, frutos y hojas en desarrollo. Las auxinas
estimulan el crecimiento por elongacin del tallo, participan en la inhibicin correlativa,
de las yemas axilares, estimulan la accin del cambium y diferenciacin del xilema y
promueven la formacin de races.
La propiedad ms importante de las auxinas es su transporte, baspetala en el
tallo y la raz. Otra propiedad importante de las auxinas es que el tejido en donde se
encuentran en alta concentracin, se convierte en el punto de atraccin de
39
nutrientes. En las Plantas se encuentran muchos derivados del indol, entre ellos, el
triptfano es uno de los Precursores principales del cido indol -3- actico (AlA).
Danneberg et al., (1992) cuantificaron las fitohormonas cido indol -3 actico
(AlA), cido abscsico (ABA), citocinina (zeatina ribsido) en maz (Zea mays L.)
inoculado por Glomus. Las mediciones por ELISA indirecta mostraron elevados
niveles de ABA en plantas colonizadas en todos los estados de crecimiento (40, 60,
80 Y 110 das). En contraste la cantidad de zeatina ribsido, fue similar en plantas
colonizadas y no colonizadas tanto en races como tallos, con la excepcin de que al
final del Ciclo Vegetarivo (110 das), se mostr un nivel alto de zeatina ribsido en
plantas colonizadas. El contenido de AIA fue esencialmente la misma en las plantas
evaluadas.
Allen et aI., (1980), mencionan que la concentracin de AIA y citocininas fue
mayor en plantas colonizadas, que en las no inoculadas.
La dominancia apical, la elongacin de entrenudos, crecimiento radicular y
tamao celular del xilema en la copa y races apicales de Betulapubescens y Betula
pendula, fueron determinadas y relacionadas con los niveles de AIA endgeno,
encontrando que no hubo diferencias significativas entre ambas plantas en cuanto al
?993).
los
ltimos aos, desde que se encontraron los cidos libres en las plantas, aunque
tambin existen formas conjugadas (Folke et al., 1993). Tambin se ha estudiado la
el
el
Wightman et al., (1980) estudiar los factores hormonales como control de laI
iniciacin y desarrollo de races laterales de frijol, encontraron que la concentracin
concentracin
Ia
contenido AIA (Pivi et al., 1993).
El metabolismo de AIA de las plantas ha sido objeto de muchos inters en los
relacin exsistente entre las hormonas y el fenmeno de estrs, destacndose que el
contenido y actividad fisiolgica de auxinas, giberelinas y citocininas decrece cuando
el contenido de agua disponible para las plantas es limitado. Mientras que el
contenido de cido abscsico se increment en las hojas cuando el potencial hdrico
disminuy (Sharp y Davies, 1989).
ptima de AIA de 1x10-4 M, promueve la iniciacin de races laterales (primordios
laterales) y todas las auxinas exepto el cido indol-3.propinico inhiben la
elongacin de races laterales.
40
Law y Davies (1990), estudiaron el contenido de AlA en Sleder pea, bajo
diferentes contenidos de giberelina, realizado con el mtodo de cromatografa de
gases y espectrometra de masas (GC-MS)., Los niveles de AIA de brotes de
crecimiento fueron similares en las lneas de frijol evaluadas. Las muestras fueron
obtenidas de pices y brotes tiernos,
2.16.2 Los hongos MA y las citocininas
Gaspar et al., (1996) mencionan que las citocininas generalmente son
derivados de la adenina y son sintetizadas en tejidos jvenes y races. Poseen dos
propiedades que las hacen muy tiles para el cultivo n vitro de tejidos vegetales; por
un lado estimulan, la divisin celular y por otro rompen la latencia de las yemas
axilares hacindolas brotar. En las plantas, las citocininas promueven la brotacin de
yemas axilares, estimulan la expansin de las hojas y retardan la senescencia. Junto
con las auxinas, las c itocininas regulan a d visin celular. D ebido a o a nterior, el
balance entre auxinas y citocininas en las plantas suele ser determinante para el
patrn de desarrollo.
Greene (1980) seala que las citocininas se localizan en los pices de las
races de donde se transportan hacia la parte area y que son el principal grupo de
reguladores de crecimiento de las plantas, ya que stas estimulan la divisin celular y
retardan la senescencia.
Smith (1983) considera que la intervencin de los hongos en la derivacin de
hormonas puede ser una hiptesis que puede explicar la morfognesis de la planta,
y, que los factores fsicos y funciones bioqumicas son vagas, por lo que sugiere una
experimentacin racional. Tambin seala que las funciones fisiolgicas de un
grupo dado de clulas dependen en la mayora de los casos, de la influencia de ms
de una hormona. Por tanto se requiere conocer la informacin cuantitativa sobre la
formacin de hormonas y otros factores de crecimiento, bajo ciertas condiciones
ecolgicas
Linderman (1988) menciona que los beneficios de la simbiosis micorrzica son
muy variados, destacando que los procesos fisiolgicos de la planta se favorecen, al
incrementarse las substancias reguladoras del crecimiento, induciendo cambios en la
41
permeabilidad de la membrana celular y produciendo algunos exudados que son un
potencial para el desarrollo de la microfauna de la rizsfera, la que a su vez ejerce
efectos positivos
en la planta. Los microorganismos de la rizsfera liberan
nutrimentos, intervienen en la nitrificacin y desnitrificacin, aumentan la
disponibilidad del fsforo, modifican la morfologa de la raz favoreciendo el aporte
nutrimental adems de que el desarrollo de la planta se incrementa por sustancias
como las fitohormonas.
La simbiosis micorrzica aumenta el nivel de citocininas, las cuales son
producidas principalmente en las races, se transportan por el xilema y floema en
forma acroptala y basiptala, estimulando la sntesis de protena, clorofila y divisin
celular de los meristemos, retardando la senescencia de rganos y en presencia de
auxinas estimulan la actividad del cambium,. neutralizan la inhibicin del crecimiento
de las yemas axilares causadas por auxinas o cido abscsico, intervienen en la
regulacin de muchos otros fenmenos biolgicos, razn por la cual las plantas
tienen un incremento en su desarrollo (Hirsch et al., 1997).
Pohleven (1989) analiz la influencia de k inetina, z eatina, zeatina-ribsido y
otras citocininas de exudados radiculares, sobre el transporte de K, Ca, P y Na en el
micelio de Suillus varegatus. Encontrando que estas sustancias tienen efectos
especficos sobre cada ion y que ejercen una influencia marcada sobre el crecimiento
micelial de los hongos micorrzicos. Las concentraciones ptimas para el crecimiento
del hongo son 1 x 10-7 a 1 X 10-8 mol/L . Alguna otra concentracin de las citocininas
inhibe el crecimiento micelial. La investigacin realizada demostr que la activacin
de iones transportados est ms intimamente conectada a la sntesis de protenas
que a otros procesos metablicos.
Los efectos exgenos de as c itocininas son a Itamente dependiente d e otros
factores: la concentracin aplicada, las condiciones ambientales (fotoperodo), el sitio
y el tiempo de aplicacin. Los estudios con la longitud del da, en plantas de Sinapia
alba, sugieren la existencia de seales entre ramas y races, las cuales estn bajo el
control del fotoperodo y afectan la sntesis de citocininas y su liberacin desde las
races (Kinet et al., 1993).
42
Drge et al., (1992) evaluaron el efecto de la colonizacin por hongos
micorrzicos arbusculares sobre la transpiracin, fotosntesis y crecimiento en
relacin con los niveles de citocininas (zeatina ribsdo) por la tcnica de ELISA, en
plantas de Linux usitatissimum L., encontrando que no hubo una correlacin entre la
colonizacin y los incrementos de N , P o K en el anlisis foliar. Por otro lado, las
plantas altamente colonizadas manifestaron incrementos en la transpiracin y CO2.
Desde el inicio de la colonizacin micorrzica, los niveles de zeatina ribsido,
incrementaron en las yemas apicales, manifestndose una respuesta en el
Goicoechea et al., (1997), mencionan que hay una crecimiento de brotes y races.
correlacin positiva entre el incremento de las citocinnas y la tasa de intercambio de
CO2, conductancia estomatal y la transpiracin. Estos resultados conducen a la
conclusin de que los niveles de esta citocinina estn involucrados en el
mejoramiento de la fotosntesis y el crecimiento de plantas colonizadas por HMA.
2.16.3 Los hongos MA y las giberetinas
El estudio de las giberelinas comenz a partir de 1926, cuando Kursawa, en
Japn, analiz una enfermedad comn en los arrozales llamada Bakanae
(gigantismo). La enfermedad es causada por Gibberella fujikuroi Saw, hongo
Ascomiceto denominado Fusarium monilforme Sheld, en su forma asexual. Las
plantas atacadas se caracterizan por el tamao desmesurado que alcanzan sus
caas, las que raramente florecen y fructifican. Con filtrados de cultivos del hongo,
libres de micelio o esporas, Kurosawa pudo reproducir la enfermedad y lleg a la
conclusin de que el fenmeno era causado por una sustancia activa sintetizada por
el microorganismo parsito.
En el ao 1939, Yabuta y Hayashi (Barlow, 1987) lograron aislar el producto
activo, al que denominaron giberelina A. Slo en 1954, Curtis y Cross, en
Inglaterra, determinaron la composicin qumica del producto y lo llamaron cido
giberlico, conocido tambin como giberelina (GA3). Poco despus, Radley en 1956
demostr la presencia de principios activos semejantes en plantas superiores. Ms
tarde fueron identificadas tambin en las gimnospermas, pteridofitas, algas, hongos y
bacterias (Takahashi, 1986).
43
Radamacher (1994) Y Danneberg et al., (1992) seala que las giberelinas: se
producen en las Partes jvenes de las plantas; las fuentes ms ricas y abundantes
de esta hormona son las races y Ios frutos jvenes, especialmente sus semillas;
estos compuestos estimulan el Crecimiento por alargamiento de los tallos de
numerosas Plantas; que la presencia de auxinas estimula la actividad del cambium;
en Plantas herbceas de da largo, la produccin de giberelinas es estimulada por la
longitud del da, lo cual favorece !a induccin floral, estas se transportan fcilmente
en forma basiptala como acroptala; la giberelina ms comn es GA3; que
Participan en la floracin y amarre de frutos, con lo cual se incrementa la produccin.
La concentracin de giberelinas en la maduracin de hojas de plantas
frondosas de naranja fue consistentemente alta en comparacin con plantas con
Poco follaje, mientras que el ABA en el fruto decreci durante el desarrollo del mismo
(Sager y Erner, 1991).
Las giberelinas GA1, GA4, GA9, GA20 y fueron identificadas en extractos
de hojas de begonia (Begonia evansiana), las cuales fueron purificadas usando fase
reversa y por fase normal, mediante la tcnica de HPLC, donde se seala que las
giberelinas afectan la floracin inicial y el desarrollo. Destacndose que la variacin
cuantitativa de esas cinco giberelinas bajo varias condiciones de temperatura Y
regmenes de fotoperodo, fue estudiada posteriormente (Oden y Ola, 1988).
Wightman et al., (1980) comprobaron que las concentraciones endgenas de
giberelina (GA3) de 1x1 O-3 10-4, 1 O-5 , promueven el desarrollo de raices de frjoi y
mencionan que los entrenudos son regulados por el nivel-de giberelina.
Barea y Azcn-Aguilar (1982), utilizaron una cepa de G/omus mosseae, Ia cual
es capaz de formar micorriza arbuscular y evaluaron la capacidad de la cepa para Ia
produccin de fitohormonas. Las esporas de G. mosseae fueron axnicamente
germinadas en, agua, y el micelio resultante fue ensayado por procedimientos
estndares para la extraccin de hormonas desde el cultivo microbiolgico.
Utilizando bioensayos especficos y papel cromatogrfico para separar e identificar
las sustancias reguladoras de crecimiento, encontraron que los microorganismos
sintetizaron un mnimo de dos sustancias parecidas a las giberelinas (con Rf
44
correspondiente en posicin al cido giberlico y cuatro substancias con las

propiedades de las citocininas).

Allen et al., (1982) realizaron un estudio sobre los cambios fitohormonales en
Bouteloua gracilis, la cual fue inoculada con Glomus fascculatum, en un perodo de
50 das, determinando los niveles de giberelinas (GA) y cido abscsico (ABA), por
HPLC. La infeccin por hongos micorrzicos result en incrementos significativos por
el cido giberlico en las hojas y una tendencia por disminuir en las races. La
concentracin de ABA fue menor en hojas de plantas colonizadas, pero sin cambios
en las races. Esto puede indicar que al incrementarse los niveles de GA, se reducen
los niveles de ABA en las hojas, lo cual puede alterar sustancialmente la fisiologa de
Bouteloua gracilis.
Fos et al., (2000), cuantificaron la concentracin de giberelinas mediante HPLC
en ovarios de tomate (Lycopersicum esculentum Mill.) y afirman que elevando la
concentracin de esta hormona, se puede producir partenocarpa en los frutos y
actualmente se estudian los genes que estn involucrados en este fenmeno.
Akiyama y Hagashi (2002), evaluaron races de meln mediante la tcnica de
HPLC y TLC, para cuantificar los niveles de metabolitos secundarios, al ser
inoculadas con HMA Glomus caledonium, encontrando que estos inducen la
acumulacin de triterpenos.
Ebel ef al., (1997) determinaron que el nivel del ABA en el xilema, se alter por
la simbiosis micorrzica de Cowpea (Vigna unguiculata), creciendo en condiciones de
sequa, reportando que el ABA se encontro en niveles ms bajos en plantas
colonizadas, atribuyendo dicha alteracin al cierre de los estomas.
Elas y Safir (1987) evaluaron los exudados radicales de Trifolium repens a las
2, 4 y 6 semanas despus de la siembra, utilizando Glomus fasciculatum,
encontrando que no hubo diferencia significativa entre la cantidad de exudados en
plantas con y sin aplicacin .fsforo. Los resultados sugieren que es la calidad de
exudados de las plantas la que estimula la elongacin de las hifas de los hongos
micorrzicos arbusculares.
Las nuevas aproximaciones al estudio de la micorriza, mediante el uso de
tcnicas bioqumicas y moleculares, permitirn comprender mejor la dinmica de
45
esta simbiosis, as como identificar y cuantificar a tos hongos que colonizan una raz,
adems de manipularlos genticamente (Piche et al., 1994).
Los hongos micorrzicos requieren de un adecuado suministro hidrocarbonado
Por. Parte del vegetal para un correcto funcionamiento del sistema simbitico, se ha
determinado que, en el caso de la simbiosis tripartita (leguminosa-rhizobium-
micorriza), tal requerimiento llega a ser compensado ya que la actividad fotosinttica
del vegetal colonizado se incrementa, como consecuencia del aporte mineral Y
hormonal en mayor medida de lo que los endofitos respectivos consumen. Este
balance positivo para el vegetal conocido con el nombre de compensacin
fotosinttica" tiene lugar cuando existe compatibilidad funcional del sistema (Ruz-
Lozano y Azcn, 1993).
La funcin de la colonizacin de los HMA y, su influencia en las relaciones
hdricas, balance hormonal, fotosntesis y distribucin de carbono en la v planta son
aspectos relacionados con la interaccin entre ambos simbiontes (Rizobium-
Micorriza) y SU efectividad en nutricin vegetal (Azcn et al. 1996).,
Los hongos micorrzicos pueden actuar como bioreguladores, biofertilizantes y
bioprotectores de las plantas, haciendo posible la produccin de ms alta calidad y
con menos insumos qumicos (Lovato et al., 1996).
Las races colonizadas por hongos micorrzicos pueden afectar el crecimiento y
el desarrollo. Se ha demostrado que la presencia de sta asociacin, evita bloquear
la dominancia apical del crecimiento en plantas de transplante, lo cual es una
caracterstica importante para reducir el tiempo de produccin (Berta et al., 1994).
Uno de los grandes problemas con las hormonas vegetales es eI ensayo. Por lo
general estn presentes en cantidades minsculas y son muy difciles de detectar o
caracterizar qumicamente.
Se puede destacar la importancia que todos los das adquieren los trabajos de
investigacin con HMA y los cultivos en general, ya que idealmente el uso prctico de
los HMA en los sistemas de produccin vegetal, eficientizar el uso del fsforo del
suelo y de los fertilizantes fosfricos, optimizar la productividad de los suelos Y
cultivos con niveles bajos de insumos, har ms rentable la produccin de cultivos en
46
condiciones adversas y ayudar a establecer cultivos en suelos erosionados o
degradados.
El uso de los hongos micorrzicos arbusculares en sistemas comerciales de
propagacin de plantas ha do en aumento. La actividad de los hongos micorrzicos
repercute en la reduccin de estrs en la planta, un aumento tanto en la resistencia a
enfermedades, como en la absorcin de nutrientes ,mejoramiento de las relaciones
hdricas en la planta, incremento en la tasa fotosinttica e induccin de mayor vigor,
todas esas caractersticas tienen especial importancia en los sistemas de
propagacin de plantas.
En Mxico, se ha trabajado con el sistema producto chile, ya que este cultivo es
de gran importancia econmica, por la mano de obra que ocupa y por ser uno de los
cultivos importantes que repercute en la dieta de la poblacin. Por tal motivo, se
considera necesario establecer lneas de investigacin tendientes a mejorar la
productividad de este cultivo, mediante el uso de HMA, los cuales sean evaluados
en condiciones de campo e invernaderos.
Por ahora la mayor parte de los trabajos se relacionan con aspectos nutritivos,
pronto podrn extenderse a condiciones de campo. Lo que s ya es un hecho, es su
aplicacin en condiciones de almcigo, con lo que se logran plntulas de calidad y
libres de organismos patgenos del suelo, y una mejor adaptacin al transplante de
vivero a campo cuando se trata de rboles frutales y forestales, as como de algunas
hortalizas de importancia econmica, lo cual permite asegurar un mejor desarrollo en
condiciones productivas.
Los niveles de fertilizacin qumica, la fuente de fsforo, la fertilizacin del suelo
con materia orgnica, el tipo de fungicidas aplicados y la rotacin de cultivos, entre
otros, son variables de las prcticas agronmicas que afectan de manera
determinante el establecimiento y la efectividad de la micorriza, ya que sta es el
principal mecanismo con que cuentan !as plantas en su adaptacin al medio
ambiente.
El estudio de la micorriza contribuye a un mejor conocimiento sobre la
estructura de ecosistemas naturales y los procesos sucesionales de la vegetacin.
47
Por tanto el manejo de los hongos MA es coherente con modelos tecnolgicos para
una gestin sostenible de los recursos naturales.
Los hongos formadores de micorriza arbuscular son considerados como ,un
recurso biolgico multipropsito, adems de los efectos sobre la productividad
vegetal, produce beneficios ambientales, pues mejora las propiedades fsico-
qumicas y biolgicas del suelo y disminuye la erosin.
El desarrollo de la investigacin sobre la simbiosis microbiana se ha estimulado
en los ltimos 50 aos. El advenimiento de nuevas tcnicas experimentales sobre el
origen de la simbiosis en la biotecnologa y en la conservacin de la biodiversidad
deber ser explorada (Smith, 2001).
Por otro lado, no est claro, si los efectos observados en cuanto a la alteracin
de los niveles hormonales son debidos directamente al hongo mcorrzico o
indirectamente a alguna alteracin en la fisiologa del hospedero como un resultado
de su mejoramiento nutricional.
Los cambios en los balances de las cuatro hormonas ms importantes en las
plantas (auxinas, giberelinas, citocininas y cido abscsico), aun no han sido
examinadas para alguna especie de planta infectada por HMA y tampoco en
diferentes etapas de desarrollo, por lo que sta es una justificacin importante
(Danneberg et al., 1992).
Finalmente, los trabajos que se han desarrollado sobre la relacin y HMA
promotores del desarrollo vegetal, se han enfocado a la investigacin de una o dos
variables de estudio, por lo que se considera necesario abordar este tema desde
diversos puntos de vista: nutritivos, fisiolgicos, metablicos y hormonales.
48
v
3. MATERIALES Y MTODOS
3.1. Descripcin geogrfica
El presente trabajo de investigacin se realiz en la Unidad Acadmica de
Agronoma y en el Laboratorio de Farmacologa de la Unidad Acadmica de
Medicina Humana as como en el Laboratorio de la Unidad Acadmica de Ciencias
Qumicas dependientes de la Universidad Autnoma de Zacatecas en la Ciudad de
Zacatecas, Zac. Se ubican entre las coordenadas 22 45 de Iatitud norte y 102 42 \
de longitud oeste. Su altura sobre el nivel del mar es de 2190 m.
El clima predominante en la zona es semi-seco templado, del tipo BS1
KwlG
segn la clasificacin de Kppen modificada por Enriqueta Garca (1988). La mayor
parte de las precipitaciones pluviales se presentan durante el verano (445 mm), con
una temperatura media anual de 16C.
3.2. Cepas de hongos mcorrzicos arbusculares (HMA)
Los inculos de hongos micorrzicos arbusculares (HMA) empleados, fueron
proporcionados por el rea de Microbiologa del Instituto de Recursos Naturales del
Colegio de Postgraduados de Ciencias Agrcolas ubicado en Montecillo, estado de
Mxico, y por el laboratorio de fertilidad de suelos de la Facultad de Ciencias
\
Biolgicas y Agropecuarias de la Universidad de Colima, ubicado en Tecomn,
Colima. En este experimento se usaron las cepas: Glomus sp. Zac-19 (multicepa
integrada por G. albidum, G. claroides y G. diaphanum; Chamizo et al., 1998),
Glomus etunicatum (Becker y Gerdemann) y Glomus intraradices (Schenck & Smith),
los inculos fueron reproducidos en plantas de frjol (Phaseolus vulgaris L.), sin
fertilizar y bajo condiciones de invernadero, durante 120 das, en recipientes de 1 kg
de peso, previamente desinfectados con alcohol utilizando un sustrato de arena y
\
suelo esterilizado a 18 Ib/cm
3
durante 3 h, en una proporcin 3:1.
3.3. Material vegetal

Los materiales vegetales utilizados Fueron semillas de los cultivares: chile
mirasol y chile ancho, proporcionados por el Campo Agrcola Experimental de Calera
49
de Vctor Rosales, Zacatecas (CAEZAC) del INIFAP. Dicho material fue lavado en
agua destilada a una temperatura de 40C durante 20 min y se puso en imbibicin
durante 24 h antes de la siembra.
3.4. Diseo experimental
El experimento fue desarrollado bajo condiciones de invernadero (30C con un
fotoperodo de 12 hrs), con un diseo experimental completamente al azar. Se
evaluaron las cepas de hongos mcorrzicos:Glomus sp. Zac-19, Glomus
etuncatum, Glomus intraradices y el testigo, en dos cultivares de chile: mirasol y
ancho. Se establecieron 8 tratamientos con 16 repeticiones cada uno. A
continuacin se mencionan los tratamientos:
Cuadro 2. Tratamientos evaluados en el experimento.
nculo Chile mirasol Chile ancho
Glomus etunicatum T2 T6
Testigo T4 T8 \
3.5. Siembra e inoculacin
Para la siembra del material biolgico se usaron recipientes de unicel
(volumen de 296 mL), utilizando sustrato a base de la mezcla de Peat moss y arena
fina (1 :1), esterilizados con bromuro de metilo durante 3 das. Para la inoculacin de
las cepas de hongos micorrzicos correspondientes en cada uno de los tratamientos,
se realiz previamente una cuantificacin del nmero de esporas presentes en 100 g
de suelo seco, por el mtodo de tamizado y decantacin de Gerdemann y Nicolson
(1963), obteniendo lo siguiente:
Glomus intraradices T3 T7
Glomus sp. Zac-19 Tl T5
50
I
/
Cuadro 3. Poblacin de esporas en muestras de inculo.
Inculo Esporas en 100 g de suelo Esporas aplicadas por
seco* tratamiento
Glomus sp. Zac-19 9 1598 16 479
Glomus etunicatum 162622 488
Glomus intraradces 1741 24 522
* promedio de 6 repeticiones.
El procedimiento utilizado para la siembra fue el siguiente: a cada unidad
experimental se le coloc 28 g del sustrato, luego se us 30 g de inculo del hongo
micorrzico correspondiente, se sembr y finalmente se procedi a cubrirla con el
mismo sustrato (6.8 g). Se reg con agua destilada cada tercer da hasta el
momento del trasplante, posteriormente se utiliz agua comn.
El trasplante se
realiz a los 40 das, colocando en recipientes de 1 L para el muestreo a los 80 das
y de 10 L para los de 120 y 160 das de edad. La temperatura mnima promedio
registrada dentro del invernadero fue de 8C y la mxima promedio fue de 45C. Se
l
fertiliz con solucin nutritiva de Hoagland desde el inicio de germinacin del cultivo,
aplicando a cada unidad experimental 60 mL, con una frecuencia de 15 das.
La solucin nutritiva de Hoagland se prepar a base de: 0.025 g/L de KH2PO4
1.25 g/L de KNO , 3- 1.25 g/L de Ca(N03); 0.50 g/L de MgSO4 1.25 g/L de Fe EDTA;
1.67 g/L de Na2 EDTA;
los cuales se aforaron a un litro de solucin. Adems se
prepar una solucin de micronutrientes a base de: 2.86 g/L de H3B03; 1.81 g/L de
MnCl2; 0.22 g/L de ZnSO , .
4- 0 08 g/L de CuS04; 0.025 g/L de NaMoO4 y 0.025 g/L de
CoCL2. De sta solucin de micronutrientes, se tomaron 0.25 L y se agreg a un litro
de la solucin Hoagland. El pH de la solucin nutritiva se ajust a 5.5 con HCI.
51
Cuadro 4. Fechas de muestreo.
Fecha de muestreo (das)
40
Etapa de desarrollo del cultivo
8 0
Cr eci mi ent o veget at i vo
120
Inicio de floracin
160
Formacin de frutos
Fructificacin (cosecha)
Cada fecha de muestreo se cosecharon cuatro unidades experimentales (una
Planta) Por tratamiento con el objeto de evaluar las diferentes variables agronmicas
(altura, numero de hojas, rea foliar, dimetro de tallo, longitud radical, peso fresco
total, Peso fresco de raz, peso fresco foliar). As como el porcentaje de colonizacin
Hayman, 1970). Al final del experimento se evalu el numero de frutos v peso fresco
de hongos micorrzicos arbusculares por el mtodo de clareo Y tincion (Phillips y
de fruto.
En los muestreos peridicos destructivos del tejido joven y de crecimiento
meristemtico de las plantas, que luego fueron procesados en el laboratorio se
determinaron los contenidos de hormonas (AIA y GA3 Para la cuantificacin de 6-
amino-Purina (adenina), Se procesaron muestras de pice de raz. Tambin se
cuantifico el contenido de clorofila a, b y total, as como protenas totales solubles.
3.6. Anlisis estadstico
Se us el procedimiento de ANOVApara obtener el anliss de varianza deI
programa SAS, el cual sirve para hacer anlisis de varianza en situaciones
balanceadas, donde el mismo tratamiento se repite el mismo nmero de veces y
donde no hay datos perdidos. Despus de hacer el anlisis de varianza y verificar
que s hubo efectos significativos entre los tratamientos, eso quiere decir que al
menos un tratamiento es diferente de los dems. Por tanto se realizo una
comparacin de medias de tratamientos, mediante la prueba de Tukey a un nivel de
significancia de 0.05 (=0.05). La Cual permiti resolver si se rechaza o no la
hiptesis.
52
/
,
Finalmente se realiz un anlisis de los coeficientes de correlacin (Pearson)
1
entre todas las variables evaluadas.
3.7. Mediciones del crecimiento
La altura de planta (cm) se determin midiendo longitudinalmente desde la base
hasta el pice; el rea foliar fue medida en cada una de las hojas en cm2 con un
planmetro polar; el dimetro de tallo se midi con vernier en la parte ms cercana al
cuello de la raz; la longitud de la raz fue medida en cm desde la base del tallo al
pice radical; el peso fresco de raz, se realiz una vez que stas se limpiaron y
lavaron perfectamente. El peso fresco de follaje, incluy al conjunto de hojas, ramas
y tallos; el peso fresco total fue la sumatoria de los dos anteriores; y el peso de fruto,
fue evaluado al momento de la cosecha, en base a la cantidad producida por
tratamiento. Todas las variables de peso fueron realizadas en balanza analtica.
3.8. Colonizacin micorrzca
Se sigui el mtodo de Phillips y Hayman (1970). Una vez que se han lavado
las races cuidadosamente, stas se cortaron en segmentos de 1.0 cm de longitud
aproximadamente, se colocaron dentro de cpsulas de acero inoxidable, las cuales
se colocaron en un recipiente agregando (KOH) al 10% hasta cubrir la cpsula.
Posteriormente se aplic el primer ciclo de calentamiento en autoclave a 1.05 kg/cm2
de presin y a una temperatura de 121C, durante 10 min. Se retir el KOH,
procurando que no se abrieran las cpsulas. Se enjuagaron bien, por lo menos 3
veces con agua potable, hasta eliminar el exceso de KOH. Despus se aplic
perxido de hidrgeno por 3 min y posteriormente se enjuag 3 veces con agua.
Para acidificar las races, las cpsulas se sumergieron en HCI al 1% durante 3 min,
se retir el HCI y ya no se lavaron posteriormente. La tincin de races se realiz con
azul de tripano al 0.05%, aplicndose un segundo ciclo de calentamiento durante 10
min. Despus de ese tiempo se retir la solucin colorante y se lav, adicionando
enseguida lactoglcerol. Se montaron en portaobjetos 25 fragmentos de races
1
teidas; se agreg lactoglicerol para clarificarlas y se coloc el cubreobjetos,
I
I
53
eliminando las burbujas de aire; se elimin el exceso de lactoglicerol y se sell con
esmalte. La colonizacin micorrzica se estim basndose en Ia observacin al
microscopio realizndose tres pasajes equidistantes sobre cada fragmento con
ayuda de un microscopio binocular compuesto utilizando el objetivo de 100x. La
identificacin se bas en la observacin, de las vesculas, arbsculos e hifas
caractersticas de Ios hongos micorrzicos arbusculares. La frmula para calcular el
porcentaje de colonizacin fue la siguiente:
% de colonizacin = segmentos totales colonizados
segmentos totales observados
x 100
3.9. Determinacin de cido Indol 3-Actico (AIA)
Para la extraccin Separacin y cuantificacin de esta hormona se utiliz la
metodologa descrita por Li et al., (1992) en este anlisis se utiliz un cromatgrafo
de gases (HP 6890 GS System) el cual tiene acoplado un espectrmetro de masas
(HP 5973 MS).Este equipo de cromatografa de gases trabaja con Helio comprimido
como gas de arrastre y cuenta con una columna capilar de 30 m de largo y 0.25 mm
de dimetro interno. Este equipo cuenta con una biblioteca de datos denominada
NBS 75%, la cual permite la identificacin de diferentes Compuestos Contenidos en
una muestra.
Se Pesaron 3 g de material fresco de meristemos apicales (pice Y hojas en
desarrollo), se pes 3 g de material fresco y se coloc en un recipiente Con hielo La
extraccin Se realiz Con metanol fro (4C) al 80% y agitando durante 24 h . se
removi el metanol por filtracin con Vaco y el residuo acuoso fue parficionado con
acetato de etilo a pH 3; se evapor el acetato de etilo por sequedad, el residuo se
disolvi en metanol al 7O%, pH 8.5; a Solucin se evapor a sequedad y luego fue
inyectada manualmente al equipo mencionado.
Cabe sealar, que en todos los estudios de cromatografa, en los que se
requiera hacer una cuantificacin de compuestos contenidos en una muestra, es
necesario Contar Con la curva de calibracin del compuesto por estudiar, partiendo
de una solucin madre a una concentracin conocida y haciendo varias diluciones,
Para obtener la pendiente de la curva de calibracin respectiva. Es importante
54
mencionar que los tiempos de retencin relativos (trr) del estndar de alta pureza,
sirven de base para comparar los tiempos de retencin de los compuestos buscados
bajo idnticas condiciones de trabajo. La aproximacin del tiempo relativo se duplica
por cada disminucin de 2OC.
Las muestras fueron inyectadas en un volumen de 3 L, a una temperatura
inicial de 160C, con un incremento de 20C por min, hasta llegar a una temperatura
final de 280C. La velocidad de flujo fue de 1.2 mL/min. Se utiliz la tcnica de
monitoreo de iones seleccionados (SIM), la cual consiste en determinar el pico
sobresaliente que contenga los iones seleccionados, en este caso fueron los iones
sobresalientes 130 y 174 de acuerdo a su relacin masa sobre carga (m/z). El tiempo
de corrida fue de 10 min. Con este procedimiento se determina la masa o
concentracin de un componente en la muestra y compara su porcentaje de
composicin. Se obtuvo el promedio de tr,
de tres inyecciones por muestra.
Esta tcnica analtica permite determinar una cantidad muy grande de
compuestos orgnicos, y brinda. un resultado llamado cromatograma, que es
caracterstico en las condiciones obtendas y simulara ta huella dactilar del
compuesto, que proviene del espectro de masa va una lnea de transferencia, el cual
es el resultado del barrido de la elucin que es realizada por el espectro de masas
varias veces por segundo durante una corrida cromatogrfica completa, generndose
una gran cantidad de datos sobre el compuesto.
Esta informacin se correlacion con la curva de calibracin especfica y los
datos se transformaron a concentracin (mg/L). Para el AIA, bajo las condiciones de
trabajo, el tiempo de retencin fue de 6.3 min.
3.10. Determinacin de cido giberlico (GA3)
Para la extraccin, separacin y cuantificacin de esta hormona tambin se
utiliz la metodologa descrita por Rodrigo et al., (1997), este anlisis se llev a cabo
usando un GC-MS (HP 6890 GS System) con detector selectivo de masas (HP 5973
MS).
Las muestras se obtuvieron de yemas meristemticas y pices de hoja; se pes
55
agitando durante 24 h; el homogenado se filtro a vacio, los residuos fueron levados
dos veces. con metanol al 80%, la fase lquida se ajust a pi-i 8 usando 0.1 N de
NH4O-I con igual volumen de hexano; la solucin se evapor a sequedad a 35C
para posteriormente ser utilizada para cuantificacin de GA3.
Las muestras se filtraron en Milipore de 1cm de dimetro y 0.2 m de tamao
de poro. Posteriormente, fueron inyectadas en un volumen de 3 L, a una
temperatura inicial de 60C, con un incremento de 20C por min, hasta llegar a una
temperatura final de 28OC. La velocidad de flujo en la columna fue de 1.2 mL/min.
Se utiliz la tcnica SIM, por lo que los iones seleccionados, en este caso fueron
347, 370, 475, 489 y 504 de acuerdo a su relacin masa sobre carga (m/z). El
equipo funcion a una presin de 0.5 - 3.8 PSI y un tiempo de corrida de 12 min.
La informacin proveniente del cromatograma fue correlacionada con la curva
de calibracin especfica y los datos transformados a una concentracin conocida, El
tiempo de retencin para GA3 fue de 8.4 min en las condiciones de trabajo utilizadas.
3.11. Determinacin de 6-amino purina (Adenina)
Para la extraccin, separacin y cuantificacin de esta hormona se utiliz la
metodologa descrita por Mller et al., (1988) mediante el procedimiento GC-MS.
Las muestras se obtuvieron de pice de raz en desarrollo; se pesaron 5 g de
tejido fresco; la extraccin se realiz con metanol fro (4C) al 70% y se agit durante
24 h; se filtr y la fraccin orgnica se evapor en rotavapor a 40C, se redisolvi en
Finalmente se filtraron todas las muestras en papel filtro Milipore de 1 cm de
dimetro y 0.2 m de tamao de poro, luego se inyect manualmente al equipo
mencionado, para hacer la cuantificacin de la hormona descrita.
Las condiciones de corrida fueron semejantes a las anteriores: las muestras
fueron inyectadas en un volumen de 3 L, a una temperatura inicial de 160C, con
un incremento de 20C por min, hasta llegar a una temperatura final de 25OC. La
velocidad de flujo en la columna fue de 1.2 mL/min. Al utilizar la tcnica SIM, los
iones fueron 135, 108, 81 y 54 de acuerdo a su relacin masa sobre carga (m/z). El
agua con pH=4 y se almacen en refrigerador antes de hacer la determinacin.
56

equipo funcion a una presin de 0.5 - 3.8 .PSI y un tiempo de corrida de 10 min.


3.12. Determinacin de clorofila total
Para la determinacin de clorofila total, se utilizaron los siguientes materiales:
hielera, papel filtro, papel aluminio, sacabocados de ll mm aproximadamente,
balanza, estufa, morteros, acetona (Merck Co.), centrfuga clnica, espectrofotmetro
(UV - Visible Perkin-Elmer) y carbonato de calcio (Merck Co.).
Para la determinacin de clorofila a y b, se utiliz la metodologa basada en
el mtodo de Harbone (1973). El muestreo se realiz en las diferentes fechas
descritas con anterioridad, donde, la hoja de la planta que sirvi de muestra, se
envolvi en papel filtro hmedo y en papel aluminio. Posteriormente se cortaron 6
discos (ll mm) de cada hoja. Tres discos se colocaron en la estufa hasta su
deshidratacin para determinar el peso seco. Los otros tres discos se tomaron para
hacer la extraccin de clorofila. Los tres discos de la hoja se maceraron y trituraron
con 10 ml de acetona al 80%, agregando un poco de carbonato de calcio. La mezcla
se centrifug a 3000 rpm durante 5 min, hasta que los residuos se compactaron en el
fondo del tubo, para tomar libremente el sobrenadante. Este se afor a un volumen
de 10 ml, para hacer las lecturas de absorbancia relativa en el espectrofotmetro. Se
tomaron las lecturas de absorbancia a 645 y 663 nm. Se utiliz un blanco de acetona
al 80%.
Las cantidades de clorofila "a, b y total se obtuvieron sustituyendo los valores
obtenidos en las ecuaciones siguientes:
Clorofila "a" = 12.7 (Absorbancia 663 nm) -
2.69 (Absorbancia 645 nm) = mg/L
Clorofila b =
22.9 (Absorbancia 645 nm) - 4.68 (Absorbancia 663 nm) = mg/L
Clorofila total = (Absorbancia 663 nm) + 20.2 (Absorbancia 645 nm) = mg/L.


3.13. Determinacin de protenas totales solubles

Para la extraccin y cuantificacin de las protenas totales solubles, se utiliz la
metodologa propuesta por Bradford (1976).El reactivo de Bradtord utilizado se
Bajo las condicionas de trabajo, la adenina tuvo un tiempo de retencin de 7.3 min.
57
Prepar a base de: 100 mg de azul de Coomasie, 50 mL de etanol, 100 mL de cido
fosfrico Y agua destilada, y se afor a un litro.
Inicialmente Se prepar Una curva de calibracin utilizando albmina srica
bovina (ASB) como estndar (0.5, 1 2 4 8 y 16 g/mL), uyendo con agua
destilada; se aadi 2.0 ml del reactivo de Bradford Y Se procedi a leer
inmediatamente a 620 nm). Una vez obtenidas las lecturas de cada muestra en el
espectrofotmetro, se elabor 1a curva patrn y se realiz el anlisis de regresin
lineal. Se Pes un gramo de tejido vegetal fresco, se lav cuidadosamente y en agua
destilada se homogeneiz hasta obtener una pasta muy fina. Posteriormente se
tom una submuestra del homogenado de ocacionando 400 L de agua
destilada. Se aadi 2.0 mL de reactivo de Bradford y se agit suavemente. Se
procedi a medir la cantidad de proteinas en un espectrofotmetro DU-65 Beckman,
donde Se hicieron las lecturas a 620 nm en luz visible y finalmente se correlacionaron
los Valores obtenidos basndose en la curva de calibracin, para expresarlos en
g/mL.
3.14. Cuantificacin de esporas de HMA
En este estudio se hizo el conteo de esporas, ya que stas se reprodujeron en
un cultivo trampa (frijol) antes de ser utilizadas para la inoculacin en el experimento
de chile. Para la cuantificacin de esporas se utiliz Ia metodologa propuesta por
Gerdeman Y Nicolson (1963), la cual consisti en lo siguiente. Se pes 100 g del
suelo-inculo Y se coloc en un vaso de precipitados de dos litros de capacidad Y se
agreg agua potable comn y agitando mecnicamente durante 10 min para
Propiciar una suspensin. Se dej reposar durante 3 min y la suspensin se pas por
una serie de tamices de 250, 105 y 44 m de dimetro de poro en forma sucesiva,
lavando Con agua. Dos veces ms se agreg agua al decantado del suelo y se repiti
el tamizado. A la fraccin obtenida del tamiz de 44 m, se agreg sacarosa al 30%
y Se agit suavemente durante 10 minutos; se centrifug a 2500 rpm (Jenkins, 1964)
y Se recolectaron las esporas; posteriormente stas se pasaron sobre papel filtro
hmedo para su conteo en microscopio estereoscpico. Los datos obtenidos se
reportan en el cuadro 3, los cuales son el promedio de seis repeticiones.
58
4. RESULTADOS
4.1. Efecto de los HMA sobre el crecimiento de las plantas de chile
En el estudio realizado con los dos cultivares de chile e inoculados con las tres
cepas de hongos micorrzicos arbusculares (HMA), se estableci que los valores
obtenidos para los diferentes parmetros evaluados, fueron mayores en las plantas
inoculadas, con respecto a las plantas sin inocular. Se aprecia que en el cultivar
ancho fue mayor la evidencia del efecto de la colonizacin MA. De manera general
se demostr que la inoculacin de Glomus sp. Zac-19, Glomus intraradices y Glomus
etunicatum, indujeron respuestas favorables en las plantas. Mismas que se
proporcionan a continuacin.
4.1 .1. Altura de plantas de chile
Los hongos micorrzicos que confirieron un mayor efecto sobre la altura de
plantas fueron Glomus sp. Zac-19 y Glomus intraradices. El mayor crecimiento
registrado, fue en el cultivar de chile ancho, inoculado con Glomus sp. Zac-19, con
una altura de ll 9 cm, mientras que en el control fue de 110 cm, tenindose un
incremento del 8%.
Las plantas de chile mirasol presentaron una altura promedio de 111 cm,
mientras que en las plantas sin inocular fue de 93 cm, registrando una diferencia del
16%. Se manifest un efecto significativo (P<_0.05), esto indica que la altura de la
planta (promedio de los dos cultivares), se increment conforme aument la
colonizacin micorrzica; sin embargo, la altura de planta fue mayor en el chile ancho,
donde se aplic Glomus sp. Zac-19, lo cual se aprecia en las Fig. 1 y 2.
59
El anlisis de la asociacin de la altura de planta de chile mirasol en la etapa
de crecimiento vegetativo (40 das de edad) fue positiva con varios parmetros
evaluados. Los coeficientes de correlacin fueron los siguientes: con la colonizacin
micorrzica (0.71), con el contenido de clorofila (0.92) y con el nmero de hojas
(0.60). Al inicio de floracin (80 das), con la concentracin de cido giberlico (0.71);
mientras que en la etapa de formacin de frutos (120 das de edad), las variables con
60
Figura 1. efecto de la inoculacin de HMA sobre la altura (cm) de plantas de chile
mirasol a diferentes tiempos de estudio, crecidas en condiciones de invernadero.
Figura 2. Efecto de la inoculacin de HMa sobre la latura (cm) de plantas de chile
ancho a diferentes tiempos de estudio, crecidas en condiciones de invernadero.
ms correlacin fueron: el porcentaje de colonizacin (0.84) y la concentracin de
auxinas (0.82); mientras que en la madurez fisiolgica (160 das), las variables que
ms se correlacionaron con la altura de planta fueron: el peso fresco total (0.91), el
nmero de frutos y el nmero de hojas (0.90), el peso fresco (0.87), la concentracin
de AIA y GA3 (0.85), el porcentaje de colonizacin (0.82) y la clorofila total (0.77).
En el cultivar de chile ancho, en la etapa de crecimiento vegetativo (40 das)
de la planta, esta variable se asoci con el nmero de hojas (0.65); al inicio de
floracin (80 das), con el porcentaje de colonizacin (0.84), con la concentracin de
AIA (0.85) y con la concentracin de GA3 (0.75); y a la madurez fisiolgica (160 das)
se asoci positivamente con el porcentaje de colonizacin (0.92), con el nmero de
hojas (0.83), con la clorofila total (0.80) y con el nmero de frutos (0.70).
4.1.2. Nmero de hojas en plantas de chile
Las hojas juegan un papel importante en el cultivo de chile porque, en funcin
del nmero de stas, se puede determinar la futura produccin. En este experimento
se encontr que las plantas de chile inoculadas con los HMA, presentaron mayor
cantidad de hojas (100%) que las plantas sin inocular. El inculo que propici mayor
efecto fue el consorcio Glomus sp. Zac-19, con 297 hojas por planta, seguido de
Glomus etunicatum con 259, con G. intraradices fue de 203, mientras que las plantas
sin inocular presentaron 148 hojas al final del ciclo de cultivo.
El nmero de hojas entre cultivares no fue significativo, ya que en chile
mirasol, el nmero de hojas fue de 226, mientras que para chile ancho fue de 227
(Fig. 3 y 4).
61
El anlisis de correlacin para los valores registrados en plantas del cultivar
mirasol, a los 40 y 80 das, mostr coeficientes significativos entre el rea foliar y el
nmero de hojas (0.68 y 0.90, respectivamente). A los 120 das, con la concentracin
de 6-amino purina (0.79) y a los 160 das de edad, se present mayor correlacin
con el peso fresco total (0.86), con el peso de fruto (0.84), con AIA (0.87) y con GA3
(0.67).
En plantas del cultivar chile ancho, a los 40 das de edad de la planta, los
valores no mostraron una correlacin significativa; mientras que a los 80 das se
registr un coeficiente significativo con el nmero de hojas (0.76); a los 120 das, con
el nmero de hojas (0.85), con 6-amino purina (0.87), con GA3 (0.84) y con el
contenido de protenas totales solubles (0.72); y a los 160 das de edad se
correlacion con el peso fresco total (0.95) y con la concentracin de AIA (0.89).
4.1.4. Dimetro de tallo en plantas de chile
El dimetro como un parmetro que permite conocer el vigor de la planta,
manifest diferencia estadstica (P<_0.05) entre los inculos utilizados, sobresaliendo
la cepa de Glomus intraradices y el consorcio Glomus sp. Zac-19 y se evidenci con
el cultivar de chile ancho y estadsticamente significativo a los 160 das de edad de
la planta (Cuadros 7 y 8).
64
Cuadro 7. Efecto de la inoculacin de HMA sobre el dimetro de tallo (mm) en
Los datos son promedio de cuatro repeticiones y no son significativamente diferentes cuando
Cuadro 8. Efecto de la inoculacin de HMA sobre el dimetro de tallo (mm) en
plantas de chile ancho.
GL error = 12; Prueba de Tukey a) = 0.01)
CME 0.063 0.208 0.54 0.005
son seguidas por la misma letra.
la son seguidos por misma letra.
Los datos son promedio de cuatro repeticiones y no son significativamente diferentes cuando
65
4.1.5. Longitud de races en plantas de chile
La mayor longitud de raz se registr en las plantas inoculadas: con HMA,
sobresaliendo las colonizadas por Glomus etunicatum, registrndose valores de 56
cm. El uso de los hongos micorrzicos arbusculares beneficiaron a la longitud radical
de las plantas de chile y de manera significativa en el cultivar de chile ancho, a los 40
y 1 60 d as de edad de las plantas, establecindose un incremento del 22% en la
longitud radical entre las plantas inoculadas y el control. La diferencia en la longitud
del sistema radical, entre los cultivares fue de 9%, siendo superior en el cultivar de
chile ancho (50 cm). El coeficiente de variacin promedio de las cuatro etapas de
muestreo fue del 9.07% y la longitud radical tuvo una correlacin positiva (0.76) con
la colonizacin micorrzica (Fig. 5 y 6).
+ G. etunicatum
Figura 5. Efecto de la inoculacin de HMA sobre la longitud de raz (cm) en p
lantas
de chile mirasol a diferentes tiempos de estudio, crecidas en condiciones de
invernadero.
66
G. Zac-19
G. intraradices
Cotrol 1
40 80 120 160
20--
30--
40--
50--
60--
10
0--
Tiempo (dias)
L
o
n
g
i
t
u
d

e

r
a

z

(
c
m
)
75
Zac-19
----- G. efunicafum
G. infraradices
0
80 120 160
tiempo (dias)
1
Figura 6. Efecto de la inoculacin de HMA sobre la longitud de raz (cm) en plantas
de chile ancho a diferentes tiempos de estudio, crecidas en condiciones de
invernadero.
4.2. Colonizacin rnicorrzica en plantas de chile
La colonizacin micorrzica mostr variacin a travs de diferentes estados de
desarrollo de las plantas de chile, cuyos intervalos fueron de 12% a los 40 das y del
44% de colonizacin a los 160. Los hongos del consorcio Glomus sp. Zac-19 y
Glomus intraradices presentaron los valores ms altos en la etapa de fructificacin.
Tambin se observ que la colonizacin micorrzica se increment paulatinamente,
en funcin del estado de desarrollo de las plantas (Fig. 7 y 8).
Figura 7. Colonizacin micorrzica en plantas de chile mirasol, crecidas en
condiciones de invernadero.
Control 2
40--
etunictum
67
Zac-19
- G. etunicatum
G. intraradices
---x-- Control 2
Fi gura 8. Colonizacin mcorrzica en plantas de chile ancho, crecidas en condiciones
de invernadero.
En el cultivar de chile mirasol, a los 40 das de edad, el porcentaje de
colonizacin micorrzica se correlacion con la altura de planta (0.71); a los 80 das
se correlacion con el rea foliar (0.71), con el peso fresco total (0.72), con la
concentracin de 6 amino purina (0.93), con cido giberlico GA3 (0.75) y con la
clorofila total (0.66); a los 120 das con la altura de planta (0.84), nmero de hojas
(0.70), el peso fresco total (0.89), la concentracin de 6 amino purina (0.90) y con la
clorofila total (0.70); mientras que al los 160 das se present la mayor correlacin
con las variables: altura de planta (0.82), con el peso fresco total (O-83), con el
nmero de frutos (0.68), con la concentracin de 6 amino purina (0.72) y con AIA
(0.65).
En el cultivar de chile ancho, a los 40 das de edad, el porcentaje de
colonizacin micorrzica se correlacion con el nmero de hojas (0.70), con la
concentracin de AIA (0.80) y con la clorofila total (0.92); a los 80 das, con la altura
de planta (0.84), con la concentracin de AIA (0.98) y con la clorofila total (0.86); a
los 120 das de edad con el nmero de hojas, con la concentracin de 6 amino purina
(0.69), con la clorofila total (0.91) y se present una correlacin negativa con la
concentracin de AIA (-0.72); a los 160 das se correlacion con la altura de la planta
(0.92), con el nmero de hojas (0.77), con el nmero de frutos (0.83), con la
concentracin de AIA (0.71) y con la clorofila total (0.85).
68
4.3. Contenido de clorofila total
El efecto de los hongos micorrzico-arbusculares en el contenido de clorofila
total, fue evidente comparado contra las plantas sin inocular, con una diferencia del
10%. Se observ un efecto significativo entre inculo, sobresaliendo Glomus
intraradices (41.37 mg/L) a los 160 das de edad. La diferencia entre cultivares, fue
notoria destacando que, el cultivar de chile ancho sobresali al mirasol a los 40, 120
y 160 das de edad (Fig. 9 y 10). y 160 das de edad (Fig. 9 y 10).
- - G. etunicatum
G. intraradices
Figura 9. Efecto de los HMA sobre el contenido de clorofila total en plantas de chile
50
45
30
25
2 0
1 5
1 0
5
0
G. etunicatum
G. intraradices
---x--- control-2
40 80 120
Tiempo (das)
160
Figura 10. Efecto de los HMA sobre el contenido de clorofila total en plantas de chile
ancho
69
mirasol.
35
40
C
l
o
r
o
f
i
l
a

t
o
t
a
l

m
g
/
L
)
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
En el cultivar de chile mirasol, a los 40 das de edad, la clorofila total present
una correlacin con la altura de planta (0.92) y con el porcentaje de colonizacin
(0.73); a los 80 das de edad, solamente se present correlacin con el porcentaje de
colonizacin (0.66); a los 120 das se present correlacin con la concentracin de 6
amino purina (0.68), giberelina GA3 (0.87), AIA (0.60) y con el porcentaje de
colonizacin (0.70); mientras que a los 160 das se presento mayor correlacin con
las variables: altura de planta (0.77), rea foliar (0.77), peso fresco total (0.89),
nmero de frutos (0.75), peso de fruto (0.75), con la concentracin de AIA (0.74) y
con el porcentaje de colonizacin (0.92).
En el cultivar de chile ancho, a los 40 das de edad de la planta se present
una correlacin con el porcentaje de colonizacin (0.92); mientras que a los 80 das
de edad se correlacion con el peso fresco total (0.84) y con el porcentaje de
colonizacin (0.86); a los 120 das, con el nmero de frutos (0.72), con el porcentaje
de colonizacin (0.91) y con el contenido de protenas totales solubles (0.72); a los
160 das con la altura de planta (0.80), con el nmero de frutos (0.72) y con la
concentracin de AIA (0.85).
4.4. Contenido de protenas totales solubles
protenas desempean una gran cantidad de funciones, siendo de las
orgnicas ms importantes para las clulas. Se utilizan como material
Las
sustancias
estructural, hormonas, enzimas y como proteccin contra infecciones. De manera
general se aprecia que el contenido de protenas totales solubles, es mayor en las
plantas inoculadas que en las no inoculadas, lo cual puede tener un efecto directo en
la produccin y en la calidad de los frutos, as como en el contenido de los
promotores del crecimiento vegetal.

en el contenido de protenas totales solubles, entre las plantas inoculadas con HMA y
las no inoculadas fue del 20% (Fig. ll y 12).
Glomus sp. Zac-19 y Glomus intraradices en los muestreos realizados. La diferencia
Se estableci una diferencia significativa entre inculos, sobresaliendo
70
+ Glomus etunicatum
Glomus intraradices
- - -X- - -control-l
80 120 160
TlEMPO (das)
Figura 11 I Efecto de los HMA sobre el contenido de protenas totales solubles en
plantas de chile mirasol.
-._______ _ _______ -.---
0. 95
l
40 80 120 160
TIEMPO (das)
Figura 12. Efecto de los HMA sobre el contenido de protenas totales solubles en
plantas de chile ancho.
En el cultivar de chile mirasol a los 40 das de edad, se correlacion
nicamente con el porcentaje de colonizacin (0.77).
En el cultivar de chile ancho a los 120 das de edad, se correlacion con el
rea foliar (0.72), con AIA (0.77) y con la clorofila total (0.72).
40
C
o
n
c
e
n
t
r
a
c
i

n

e
n

m
i
c
r
o
g
r
a
m
o
s
/
m
L
C
o
n
c
e
n
t
r
a
c
i

n

e
n
e
n

m
i
c
r
o
g
r
a
m
o
s
/
L
71
4.5. Nmero y peso fresco de frutos de chile
En estas variables, se registr que los hongosmic orrzicos arbusculares
tuvieron un efecto positivo, destacndose que las plantas inoculadas con Glomus sp.
Zac-19 y Glomus intraradces mostraron mayor nmero de frutos (35 y 32,
respectivamente), comparado con las plantas sin inocular (21), en trminos
porcentuales esto significa un aumento del 46%. De igual forma se observ que el
nmero de frutos fue mayor en el cultivar mirasol, lo cual se atribuye a sus
caractersticas genticas (Fig. 13 y 14).
En el cultivar de chile mirasol, al momento de la cosecha se present
correlacin con el nmero de frutos y con la concentracin de AIA (0.94), con la de
giberelina GA3 (0.95) y con el porcentaje de colonizacin (0.68).
En el cultivar de chile ancho al momento de la cosecha, se present
correlacin con el nmero de frutos y con altura de planta (0.70) con el rea foliar
(0.90), con el peso fresco total (0.87), con el peso de fruto (0.88) y con la
concentracin de AIA (0.81).
G. sp. Zac-19 G. etunicatum G. intraradices control
Figura 13. Efecto de los HMA sobre el nmero de frutos en plantas de chile mirasol.
72
0
G. sp. Zac-19 G. etunicatum G. i nt r ar aci i ces control
Figura 14. Efecto de los HMA sobre el nmero de frutos en plantas de chile ancho. Figura 14. Efecto de los HMA sobre el nmero de frutos en plantas de chile ancho.
La produccin de chile, calculada como peso fresco del fruto, muestra que La produccin de chile, calculada como peso fresco del fruto, muestra que
para las plantas inoculadas con Glomus para las plantas inoculadas con Glomus sp. Zac-19, Glomus etunicatum y con sp. Zac-19, Glomus etunicatum y con
Glomus intraradices presentaron mayor produccin (0.81, 0.54 y 0.68 kg., Glomus intraradices presentaron mayor produccin (0.81, 0.54 y 0.68 kg.,
respectivamente) que las plantas no inoculadas (0.44 kg). El incremento en el peso
fresco de fruto entre las plantas inoculadas y las no inoculadas fue del 53%. Estos fresco de fruto entre las plantas inoculadas y las no inoculadas fue del 53%. Estos
resultados muestran la importancia de encontrar las mejores interacciones entre el resultados muestran la importancia de encontrar las mejores interacciones entre el
hongo MA y cultivar de chile, lo cual mejore y optimice el proceso de produccin. hongo MA y cultivar de chile, lo cual mejore y optimice el proceso de produccin.
Tambin sedebe destacar que hubo diferencia significativa entre cultivares, ya que
en el cultivar de chile mirasol se obtuvo en promedio 0.52 kg, mientras que en chile
ancho fue de 0.71 kg (Fig. 15 y 16). ancho fue de 0.71 kg (Fig. 15 y 16).
La asociacin del rendimiento del fruto con las caractersticas agronmicas La asociacin del rendimiento del fruto con las caractersticas agronmicas
vari en relacin con los cultivares empleados. vari en relacin con los cultivares empleados.
En el chile mirasol se observaron En el chile mirasol se observaron
correlaciones positivas significativas con la altura de la planta (0.87), con el rea correlaciones positivas significativas con la altura de la planta (0.87), con el rea
foliar (0.84) y con el peso fresco total (0.93); mientras que en el cultivar de chile foliar (0.84) y con el peso fresco total (0.93); mientras que en el cultivar de chile
ancho, el rendimiento mostr correlaciones positivas significativas con el rea foliar ancho, el rendimiento mostr correlaciones positivas significativas con el rea foliar
(0.95), con el peso fresco total (0.84), con el nmero de frutos (0.88) y con el (0.95), con el peso fresco total (0.84), con el nmero de frutos (0.88) y con el
contenido de AIA (0.81). contenido de AIA (0.81).
73
Figura 15. Efecto de los HMA sobre el peso fresco de frutos en plantas de chile
mirasol
08.
0.6
0.4
0.2
0 --
G. sp. Zac-19 G. etunicatum G. intraradices control
Figura 16. Efecto de los HMA sobre el peso fresco de frutos en plantas de chile
ancho.
Los resultados obtenidos muestran que hubo efecto de los HMA en la
concentracin de AIA en tres etapas fenolgicas del cultivo (desarrollo, floracin y en
la madurez fisiolgica), es decir a los 40, 80 y 160 das de edad de la planta,
mientras que a los 120 das (etapa de formacin de frutos), las plantas sin inocular
fueron superiores a las inoculadas con Glomus sp. Zac-19. La diferencia en
74
P
E
S
O

F
R
E
S
C
O

K
G
1
1.2
concentracin de AIA, entre las plantas inoculadas y las no inoculadas fue del 45%.
Por otro lado tambin se observa que hay diferencia entre cultivares, ya que en
general las plantas del cultivar mirasol mostraron mayor concentracin de AIA que
las de chile ancho, en un 32% (Cuadro 9).
Cuadro 9. Efecto de los HMA sobre la concentracin de AIA (mg/L) en diferentes
etapas fenolgicas de plantas de chile
Cultivar Inculo Edad de la planta (das)
Mirasol
40 80
120 160
G. sp. Zac-19
0.57 b 11.50 c 3.67 b 7.01 a
G . etunica tum
0.19 c 16.63 a 2.29 c 3.40 b
G. in traradices 1.14 a 15.23 b 1.32 d 6.56 a
Anlisis estadstico por cultivar de acuerdo con la prueba de Tukey a = 0.01
Los datos son promedio de cuatro repeticiones y no son significativamente diferentes cuando son seguidos
por la misma letra, dentro de un mismo cultivar.
4.7. Concentracin de cido giberlico (GA3) .
De los resultados obtenidos se aprecia que existe diferencia altamente
significativa en el contenido de GA3 y que la mxima concentracin se registr en las
plantas inoculadas con Glomus sp. Zac-19 y Glomus etunicatum. Tambi n se
observ que en los tratamientos donde se aplic HMA superaron en concentracin
75
Control 1 0.16c 11.12c 4.44a 3.10b
Ancho
G. sp. Zac-19 1.35b 11.81c 2.36d 7.34a
G. etunicatum 2.86a 14.65a 3.06c 4.9b
G. intraradices 2.75a 14.00b 4.97b 4.24c
Control 2 1.12c 5.89d 6.04a 2.69d
de cido giberlico a las plantas no inoculadas y en todas las etapas fenolgicas
(Cuadro 10).
La diferencia en la concentracin de este regulador del crecimiento, entre las
plantas inoculadas y las no inoculadas fue del 50%. Por otro lado, tambin se
observa que hay diferencia entre cultivares, ya que en general las plantas del cultivar
mirasol mostraron mayor concentracin de GA3 que las de chile ancho, en un 50%.
Cuadro 10. Efecto de los HMA sobre la concentracin de GA3 (mg/L) en diferentes
etapas fenolgicas de plantas de chile
Cultivar Inculo Edad de la planta (das)
G. etunica tum
G. intraradces
3.6 c 15.0 a 6.0 b 3.1 a
12.0 a 8.50 a 15.0 a 6.0 b
G. etunicatum
G. intraradices
6.5 a 13.0 ab 1.0 b 6.3 ab
6.0 a 8.5 a 1.0 a 3.3 a
,
misma letra, dentro de un mismo cultivar.
Los datos son promedio de cuatro repeticiones y no son significativamente diferentes cuando son seguidos por la
4.8. Concentracin de 6-amino purina
Los resultados muestran que hubo diferencia significativa (P<_0.01) para (los
inoculantes utilizados, destacando que el mayor contenido de 6-amino purina se
76
Mirasol
G. sp. Zac-19 1.8 a 15.0 a 15.0 a 8.5 a
40 80 120 160
Control 1 8.0 a 6.50 b 6.5 b 3.1 b
Ancho
G. sp. Zac-19 10.5 a 8.0 a 3.0 a 6.5 ab
Contro 2 6.1 a 6.5 b 1.0 b 3.0 b
Anlisis etadistico por culivar deacero con la prueba de Tukay a= 0 01
present en las plantas inoculadas con Glomus sp.Zac-19 a los 80, 120 y 160 das
de edad. Es importante sealar que el contenido de este regulador del crecimiento, a
los 120 das fue ms alto, a diferencia de los contenidos de AIA y de GA3. Los
tratamientos donde se aplicaron HMA, superaron en concentracin de esta citocinina
a las plantas no inoculadas en un 20% en promedio. As mismo, se observ
diferencia entre cultivares, donde el contenido de 6-amino purina fue superior en el
cultivar de chile ancho a los 80, 120 y 160 das de edad.
Para la concentracin de .6-amino purina del sistema radical en los cultivares
de chile y los inoculantes empleados, los anlisis de varianza permitieron detectar
una respuesta diferencial (P<_0.01) entre los inoculantes utilizados (Cuadro ll).
Cuadro ll. Efecto de los HMA sobre la concentracin de 6-amino purina (mg/L) en
diferentes etapas fenolgicas de plantas de chile.
Cultivar Inculo Edad de la planta (dias)
Mirasol 40 80 120 160
G. sp. Zac-19 3.1 a 4.5 a 7.3 a 2.9 a
G. etunicatum 3.2 a 4.1 ab 6.2 b 3.2 a
G. intraradices 3.2 a 4.1 a 7.1 a 2.3 b
Control 1 3.1 a 3.5 b 6.1 b 1.9 b
Ancho
G. sp. Zac-19 3.3 a 5.1 a 9.5 a 2.9 ab
G.etunicatum 3.2 a 4.9 ab 7.5 b 2.7 ab
G.intraradices 3.1 a 5.1 a 9.1 a 3.3 a
Control 2 3.1 a 4.5 b 7.2 b 2.5 b
Anlisis estadstico por cultivar de acuerdo con la prueba de Turkey a= 0.01
Los datos son promedio de cuatro repeticiones y no son significativamente diferentes cuando son seguidos por la
misma letra, dentro de un mismo cultiva.
La presente investigacin, donde se evalu el efecto de la colonizacin con
hongos micorrzicos arbusculares, sobre la concentracin de los reguladores de
crecimiento vegetal en plantas de chile, revelan resultados positivos, ya que en el,
caso del cido indol 3-actico (AIA), en las muestras evaluadas, el contenido de este
regulador de crecimiento en brotes de hojas apicales de los dos cultivares de chile
fue superior a los 40, 80 y 160 das en comparacin con las plantas no inoculadas.
Es posible que el incremento de AIA en las etapas fenolgicas haya promovido la
elongacin del tallo en las plantas colonizadas por los HMA. A los 120 das de edad,
las plantas no inoculadas presentaron mayor contenido de esta hormona que las
plantas inoculadas con Glomus sp. Zac-19, esto podra ser atribuido a algunos
factores genticos propios de la planta y que es necesario plantear en nuevas
investigaciones para su conocimiento.
La mxima concentracin de AIA registrada fue al inicio de la floracin (80
das), estos resultados son diferentes a los reportados por Danneberg et a/., (1992),
quienes encontraron un efecto similar entre los tratamientos evaluados en plantas de
maz (Zea mays L.), aunque los niveles de AIA que ellos encontraron fueron
ligeramente superiores a los 120 das. Estos resultados permiten afirmar que s hay
un efecto de los HMA sobre las plantas de chile en la concentracin de cido indol 3-
actico y de manera muy importante a los 80 das de edad, lo cual coincide con la
etapa de floracin de las plantas de chile (Capsicum annuum L.).
Los valores obtenidos para la concentracin de AIA, muestran que la cepa de
Glomus intraradices fue la que sobresali para los dos cultivares de chile, ya que los
valores acumulados fueron ms altos (24.25 y 25.96 mg/L) para chile mirasol y ancho
respectivamente.
Para el caso de cido giberlico (GA3), la concentracin ms alta se present
al inicio de la floracin (80 das) en las plantas inoculadas con HMA en comparacin
con las plantas no inoculadas. Los resultados obtenidos permiten afirmar tambin
que la dinmica de esta hormona es ms variable en el caso de chile mirasol que en
chile ancho. Esto concuerda con los resultados obtenidos por Allen et al., (1982), los
50. DlSCUSlN
78
cuales encontraron que los niveles de giberelinas se incrementaron con la simbiosis
micorrzica en plantas de Bouteloua gracilis.
Akiyama y Hagashi (2002) encontraron que el nivel de terpenoides se
increment en races de meln al ser colonizadas con Glomus caledonium, con lo
cual se asegura que los HMA promueven la acumulacin de gberelinas. Estos
mismos autores afirman que la inoculacin con Glomus mosseae, tambin mejor la
acumulacin de triterpenos.
La concentracin de AIA y GA3, mostraron un comportamiento similar, ya que
a los 40 y 160 das presentan una concentracin baja, mientras que a los 80 y 120
das su concentracin se incrementa de manera significativa en ambos cultivares de
chile. Esto posiblemente se deba a que la demanda hormonal por parte de la planta
supera a su sntesis a los 40 y 160 das de edad; tambin puede ser que la
colonizacin de los hongos micorrzicos arbusculares influy positivamente en la
produccin de estas hormonas a los 80 y 120 das de edad, los cuales mejoraron el
vigor de la planta, aumentaron la elongacin del tallo y el crecimiento celular, lo que
se reflej en un mayor nmero de hojas y mayor rea foliar.
Los resultados muestran que la colonizacin micorrzica en plantas de chile
modificaron el balance hormonal de GA3, y que la cepa de Glomus intraradices fue la
que sobresali para el cultivar de chile mirasol con 41.5 mg/L acumulados en las
cuatro etapas , mientras que para el cultivar de chile ancho sobresali el consorcio
Glomus sp. Zac-19, ya que el valor acumulado fue de 28.0 mg/L.
En el caso de 6-amino purina en brotes de races, a los 40 das (crecimiento
vegetativo), la concentracin fue similar en los tratamientos y entre cultivares,
mientras que en los diferentes estadios del desarrollo (80, 120 y 160 das), la
concentracin de esta hormona fue superior en fas plantas inoculadas con respecto
de las plantas sin inocular, lo cual pudo afectar la expansin de tejidos de hojas
\ (dada su capacidad para inducir divisin celular) y actuar sobre los pigmentos de
clorofila, ya que se increment en las plantas inoculadas con los HMA. Los niveles de
citocininas han sido incrementados como resultado de la simbiosis micorrzica y esto
concuerda con los resultados obtenidos por Allen et al., (1980), en sus
investigaciones con plantas de B. gracilis.
80
Los valores obtenidos para la concentracin de 6-amino purina muestran que
el consorcio Glomus sp. Zac-19, fue la que sobresali para los dos cultivares de chile
mirasol y ancho con valores acumulados de 17.8 y 20.8 mg/L respectivamente.
Muchos microorganismos como Azofobacfer (Taller y Wong, 1989) o
Rhizobium (Sturtevant y Taller, 1989) son reconocidos por producir fitohormonas y
los resultados de esta investigacin demuestran que los hongos micorrzicos lo
hacen tambin, lo cual coincide con los trabajos realizados por Barea y Azch
(1982). Tambin se ha descrito que la colonizacin de los HMA incrementan el flujo
de citocininas desde las races hasta los brotes apicales en ctricos (Dixn et al.,
1988). Las citocninas tpicamente estimulan la sntesis de protenas y clorofila, as
como la divisin y expansin celular en plantas.
La correlacin entre el grado de colonizacin micorrzica y los niveles
hormonales encontrados fue positiva en las diferentes fenofases de las plantas, por
lo que se acepta la hiptesis planteada, sin embargo a los 120 das de edad en el
cultivar de chile ancho, los niveles de auxinas y giberelinas disminuyeron a medida
que la colonizacin aument, mientras que los niveles de citocininas se elevaron. Las
interacciones entre los hongos micorrzicos y las plantas de chile son complejas, y
esto tiene relacin directa con muchos otros factores involucrados en regular esta
simbiosis.
Los HMA pueden afectar el balance hormonal de la rizsfera, ya que secretan
una gran cantidad de reguladores de crecimiento como AIA, citocininas, giberelinas,
ABA, vitaminas y compuestos volatiles. De tal suerte se ha demostrado que el AlA es
la hormona que promueve principalmente la colonizacin MA en la raz hospedadora
(Gianinazzi, 1991; Bethlenfalvay y Schuep, 1994,; Hodge, 2000). Lo antes citado
coincide con los resultados obtenidos ya que, en el presente trabajo de
investigacin, se demostr que las plantas de chile mirasol y ancho inoculadas con
HMA incrementaron la concentracin de AIA, GA.3 y 6-amino purina. Con relacin a lo
anterior, se ha cumplido en dar respuesta a la pregunta cientfica, ya que las plantas
de chile inoculadas con HMA, mostraron una modificacin en el balance hormonal y
existi una correlacin positiva entre los reguladores de crecimiento y la colonizacin
micorrzica.
80
La simbiosis de los HMA en plantas de chile fue en promedio del 45%, estos
valores de colonizacin micorrzica son comparables a los reportados por Davies et
al., (1993) quienes reportan una colonizacin del 48% y ligeramente inferiores a los
reportados por Gaur et al., (1998). En este estudio se destaca que los hongos
Glomus sp. Zac-19 y Glomus intraradices, presentaron la mayor colonizacin,
mientras que Glomus etunicatum coloniz menos a las plantas de chile. Diferentes
investigadores como Smith y Gianinazzi-Pearson (1988), Harley y Smith (1983)
concuerdan que la colonizacin micorrzica, estimula el crecimiento vegetal, pero que
la dimensin de este estmulo del crecimiento es variable y depende del estatus
nutrimental, particularmente del abastecimiento de fsforo.
De acuerdo a los resultados obtenidos en este trabajo, se encontr una
respuesta favorable para las variables agronmicas, mejorando su crecimiento y su
productividad.
La capacidad de los hongos micorrzicos arbusculares para colonizar a las
plantas de chile, bajo condiciones de invernadero fue en grado intermedio de
micotrofa, lo cual mejor algunos parmetros agronmicos como la altura de la
planta en un 18%, resaltando que estos resultados contrastan con lo reportado en la
literatura, en los cuales se ha consignado que la colonizacin micorrzica en plantas
de chile afecta positivamente su crecimiento vegetativo (Berta et al., 1994; Aguilera-
Gmez et a/.,1999).
El nmero de hojas y el rea foliar, tambin fueron afectados positivamente
por la colonizacin de los HMA en un 100 y 64 %, respectivamente, existiendo una
correlacin directa entre ambas variables y que al final afectaron al peso fresco total
de la planta. Estos resultados coinciden con lo reportado por Davies et al., (2002), ya
que en un experimento de chile ancho del CV. San Luis, con inoculacin de Glomus
fasciculatum y Glomus sp. Zac-19, se tuvo un efecto importante en la produccin de
biomasa.
Las asociaciones entre la planta de chile y los HMA, increment en un 22% la
longitud de raz, la cual influy en que la planta tuviese un mejor anclaje al sustrato,
mayor absorcin y transporte de agua y nutrimentos de minerales, una mayor sntesis
de reguladores de crecimiento y una mayor contribucin a la rizsfera. Adems de lo
81
anterior, la raz influy en el tamao y forma- de la planta, en la floracin y
fructificacin, en el tamao de fruto y en la produccin. El dimetro de tallo fue
incrementado en un 20% en las plantas colonizadas por los HMA en comparacin
con las no inoculadas, lo cual mejor el vigor, se observ que las plantas eran ms
robustas, de alto porte y en consecuencia se mejor la productividad.
Tambin se increment el contenido de clorofila total (10%) y el contenido de
protenas totales solubles (20%), en las plantas inoculadas con HMA, lo cual
concuerda con estudios realizados por Davies et a/., (1993), los cuales reportaron
que en plantas micorrizadas de chile ancho se tuvieron altas tasas fotosintticas, as
como mayor expresin del crecimiento y desarrollo, as como mayor capacidad de
absorcin nutrmental, que en las plantas no inoculadas.
Estas variables que fueron afectadas por la colonizacin micorrizica,
propiciaron un mayor nmero de frutos (46%) y una mayor produccin de chile fresco
(53%). Estos resultados indican que la inoculacin de plntulas de chile con HMA
afectan en mayor magnitud los componentes del rendimiento final y que coinciden
con los resultados obtenidos por Yocom (1985);, Waterer y Coltman (1989); y Gaur
et a/., (1998), los cuales reportan un incremento en el rendimiento del 112% en Ias
plantas de chile que fueron inoculadas con Glomus intraradices. Es importante
reconocer que se presentaron algunas diferencias entre las especies de hongos
micorrzicos en cuanto al beneficio que aportaron a las plantas de chile.
Los inhibidores constituyen, entre los reguladores del crecimiento vegetal, un
grupo conformado por compuestos de estructura qumica muy variada que, por tanto,
provocan muy diversos efectos biolgicos en las plantas, por lo que es importante
realizar estudios del efecto de los HMA sobre los inhibidores del crecimiento vegetal.
82
6. CONCLUSIONES
La colonizacin de los hongos micorrzicos arbusculares (HMA) tuvo un efecto
significativo en la concentracin de cido indol-3-actico (AIA), cido giberlico (GA3)
y de 6-amino purina, en las plantas de los dos cultivares de chile (Capsicum annuum
L.) crecidas bajo condiciones de invernadero, en las diferentes fenofases del cultivo.
El efecto de los hongos micorrzicos en el desarrollo de las plantas de chile
mostr una correlacin positiva con la concentracin de los diferentes reguladores de
crecimiento en diferentes fenofases de la planta.
La respuesta de la colonizacin micorrzica en los dos cultivares de chile fue
diferente, ya que en la concentracin de cido indol-3-actico y de cido giberlco
(GA3) se present en mayor proporcin en chile mirasol que en chile ancho. Mientras
que la concentracin de 6-amino purina fue mayor en chile ancho.
Se estableci una correlacin positiva entre los niveles de colonizacin
micorrzica y el contenido de promotores del desarrollo vegetal, los cuales
propiciaron un incremento en el crecimiento vegetativo y en la fase de fructificacin.
El efecto de los hongos micorrzicos arbusculares (HMA) en la concentracin
de los reguladores de crecimiento fue mayor para cido giberlico (GA3), luego para
cido indo-3-actico y finalmente para 6-amino purina en un incremento del 50, 45 y
20% de su concentracin en los diferentes tejidos evaluados, lo que permite aceptar
la hiptesis planteada. Se estableci tambin que a medida que se incrementa el
contenido de GA3, se incrementa el contenido de AIA.
La colonizacin de los HMA en plantas de chile bajo condiciones de
invernadero, indujo respuestas favorables en el nmero de hojas (100%), rea foliar
(64%), en el nmero de frutos (46%) y en el peso fresco del fruto (53%); que se
traduce en un mayor crecimiento y desarrollo e incremento en la produccin de chile.
El efecto de la colonizacin micorrzica afect la concentracin de protenas
totales solubles y el de clorofila total. Por tanto se sugiere investigar a mayor
profundidad que tipo de protenas se estn expresando en cada etapa fenolgica de
83
la planta y en que concentracin.
Los HMA evaluados en la presente investigacin representan una alternativa
viable para las plantas de chile y en la medida que estos se apliquen en el proceso
productivo, los resultados sern favorables para los productores de este sistema
producto.
El grado de colonizacin registrado entre los HMA y las plantas de chile, no
fue significativamente diferente, lo cual sugiere que existen diferencias en cuanto a
Su efectividad, ya que los endfitos asociados a la misma planta, pueden tener
diferente efecto sobre el propio husped dependiendo de su infectividad y efectividad
de colonizacin.
La inoculacin micorrzica, mejoran el rendimiento de fruto frasco en plantas
de chile, registrndose un mayor efecto con Glomus sp. Zac-19 y con Glomus
intraradices, ya que fueron las cepas que indujeron una mayor concentracin de
reguladores de crecimiento, as como mayor correlacin con el crecimiento y
desarrollo de las plantas.
84
7. LITERATURA CITADA
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103
FACULTAD DE CIENCIAS BIOLGICAS Y AGROPECUARIAS
POSGRADO EN BIOTECNOLOGA
ING. RODOLFO M. MORENTIN DELGADO

DI RECT R DE F.C.B.A.


PRESENT E
En atencin a que el C, Julin Gonzlez Trinidad, alumno egresado del Doctorado
en Ciencias, rea: Biotecnologa, con nmero de cuenta 99-3004, ha realizado
todas las correcciones al manuscrito de tesis que present al cuerpo acadmico
de revisores, constituido por: Dra. Maria del roco Flores Bello, Dr. Javier Farias
Larios, Dr. Sergio Aguilar Espinosa y Dra. Mara de los Remedios Cigales Rivero
esta en calidad de suplente, profesores - investigadores de la Universidad de
Colima, y el Dr. Octavio Prez Zamora Investigador del INIFAP-Tecomn, me dirijo
respetuosamente para solicitarle la autorizacin de impresin de la tesis titulada:
Efecto de la adicin de agua residual urbana sobre las caractersticas de un suelo
Esta tesis ha sido dirigida por el Dr. Jos Gerardo Lpez Aguirre de la Universidad
de Colima.
Sin otro asunto ms que tratar, reciba saludos.
Atentamente
Tecomn, Colima a 29 de Abril de 2003

c.c.p Expediente Acadmico del Alumno
c.c.p. Interesado
Km. 40 Carretera Colima-Manzanillo, Tecomn Colima, Mxico Cp. 28100
Tels. 01 (313) 3229409, 01 (312) 3161000 exts 52500, 52501 Tel-fax. 01 (313) 3229405 Email saqullar@ucol mx
Universidad de Colima
ESTUDIA - LUCHA - TRABAJ A
agricola"
FACULTAD DE CIE CIAS BiOLGlCAS Y AGROPECUARIAS
PROGRAMA DE POSGRADO EN BIOTCNOLOGA

De la manera ms atenta me permito comuncarle que he concluido con la
revisin del informe en Extenso de los estudios de Doctorado en Ciencias del C.
Francisco Romn Garca, titulado CONC TRAC/N DE REGULADORES DEL
DESARROLLO VEGETAL INDUCIDA POR HONGOS ENDOMICORRZICOS EN
DOS CULTIVARES DE CHILE (Capsicum annuum L). Luego de su segunda
revison he ontrado que el documento rene los requisitos necesarios, tanto en
su contenido como en su forma. Por lo anterior, deseo expresarle mi aceptacin
para su impresin final.
Agradezco la oportunidad brindada para fungir como revisor de este
documento, a la vez que ratifico mi firme deseo de continuar contribuyendo en la
formacin de recursos humanos altamente calificados y con carcter
independiente.
Sin otro particular, aprovecho la presente para enviarle un cordial saludo.
ATENTAMENTE
Tecomn Col., a 11 de Abril del 2003.

C.c.p. Dr. Carlos E. Izquierdo Espinal. Delegado Regional No. 2.
C.c.p. Ing. Rodolfo Valentino Morentn Delgado. Director de la FCBA.
UNIVERSIDAD DE COLIMA
DR. SERGIO AGUILAR ESPINOSA
COORDINADOR DEL POSGRADO EN BIOTECNOLOGA
P R E S E N T E
C.c.p .Interesado
C.c.p. Archivo
RIOS
OR
Asunto: Aprobacin de tesis de Doctorado
Por este medio me dirijo a Usted para comunicarle que he discutido el documento de tesis
titulado CONCENTRACIN DE REGULADORES DEL DESARROLLO
VEGETAL INDUCIDA POR HONGOS ENDOMICORRZICOS EN DOS
CULTIVARES DE CHILE (Capsicum annuum L.); en forma conjunta con el alumno
de Doctorado en Biotecnologa, FRANCISCO ROMAN GARCA, en donde revisamos
las observaciones hechas por los revisores, mismas que fueron tomadas en cuenta, por lo
que considero que el documento rene los requisitos necesarios para que el mencionado
alumno pueda continuar los trmites acadmicos para tal fin y as mismo, que la presente
ante un jurado y realice su defensa.
Director externo de tesis de alumno
FACULTAD DE CIANCIASAS BIOLAGICAS Y AGROPECUARIAS
Asunto: Autorizacin de Tesis de doctarado
UNIVERSIDAD DE COLIMA
DR. SERGIO AGUILAR ESPINOSA
COORDINADOR DEL POSGRADO EN BIOTECNOLOGIA
PRESENTE.
Zacatecas, zac., a 8 de Abril de 2003
Dra. en C. Maria Patircia Yahuaca Mendoza
c.c.p. Francisco Roman Garca . Alumno
Son ms por el momento, envindole un cordial saludo.
c.c.p. Archivo
UNIVERSIDAD DE COLIMA
CENTRO UNIVERSITARIO DE INVESTIGACIN Y DESARROLLO
AGROPECUARIO (CUIDA)
DR. SERGIO AGUILAR ESPINOSA
COORDINADOR DEL POSGRADO EN RIOTECN OLOGIA
P R E S E N T E .
Por este conducto me dirijo a usted, para comunicarle que he revisado el documento de tesis
titulado CONCENTRACION DE REGULADORES DEL DESARROLLO VEGETAL
INDUCIDA POR HONGOS ENDOMICORRIZCOS EN DOS CULTIVARES DE CHILE
(Capsicum annuumm L.), en forma conjunta con el alumno de Doctorado en Biotecnologa.
FRANCISCO ROMN GARCA. en donde revisamos las observaciones hechas por Losrevisores.
mismas que fueron tomadas en cuenta, por lo que considero que el documento rene los requisitos
necesarios para que el mencionado alumno pueda continuar los trmites acadmicos para tal fin y as
mismo. que la presente ante un jurado y realice su defensa.
Sin ms por el momento, me despido de usted con un cordial saludo
DRA. MARIA DE LOS REMEDIOS CIGALES RIVER
ATENTAMENTE.
APR/amv *
Tecomn, Colima., a de abril de 2003
REVISORA DE TESIS
UNIVERSIDAD DE COLIMA
FACULTAD DE CIENCIAS BIOLGlCAS Y AGROPECUARIAS
PROGRAMA DE POSGRADO EN BIOTECNOLOGA
COORDINADOR DEL POSGRADO EN BIOTECNOLOGA
P R E S E N T E .
De la manera ms atenta me permito comunicarle que he concluido con la
revisin del Informe en Extenso de los estudios de Doctorado en Ciencias del C.
Francisco Romn Garca, titulado CONCENTRACIN DE REGULADORES DEL
DESARROLLO VEGETAL INDUCIDA POR HONGOS ENDOMICORRZlCOS EN
DOS CULTIVARES DE CHILE (Capsicum annuum L.). Luego de su segunda
revisin he encontrado que el documento rene los requisitos necesarios, tanto en
su contenido como en su forma. Por lo anterior, deseo expresarle mi aceptacin
Agradezco Ia oportunidad brindada para fungir como revisor de este
documento, a la vez que ratifico mi firme deseo de continuar contribuyendo en la
formacin de recursos humanos altamente calificados y con carcter
independiente.
Sin otro particular, aprovecho la presente para enviarle un cordial saludo.
A T E N T A M E N T E
Tecomn, Col., a ll de Abril del 2003.

DR. JOSE GERARDO LPEZ AGUlRRE
PROFESOR- I NVESTI GADOR
Dr. Carlos E. Izquierdo Espinal. Delegado Regional No. 2.
C.C.p. Ing. Rodolfo Valentino Morentn Delgado. Director de la FCBA.
C . c . p .
C.C.p. Interesado.
C.c.p. Archivo.
DR. SERGIO AGUILAR ESPINOSA
Asunto: Aprovacin de tesis de Doctorado.
para su impresin final.

DR. SERGIO AGUILAR ESPINOSA
RESPONSABLE DEL POSGRADO EN BIOTECNOLOGIA
\
FACULTAD DE CIENCIAS BIOLGICAS Y AGROPECUARIAS
PRESENTE

borrador de tesis de doctorado titulado Concentracin de reguladores del desarrollo
vegetal inducida por hongos endomicorricicos en dos cultivares de chile (Capsicum
annuum L.)"; que presenta el C. Francisco Romn Garca, considero que rene los
elementos suficientes de contenido y forma de un documento de doctorado en ciencias. Por
lo que expreso mi aprobacin para que se siyan los tramites acadmicos que correspondan.
ATENTAMENTE
Tecomn, Col , a 12 de abril de 2003




c.c. p, Ing Rodolfo V. Morentin Delgado - Director de la F,C.B.A:
c.c p Interesado
c.c p Archivo personal
sin otro paticular, me despido de usted.
Dr. Sergio Aguilar Espinosa
Responsable del Posgrado
Por este conducto me permito comunicar que he revisado el documento
doctoral Concentracin de reguladores del desarrollo vegetal inducida
por hongos endomicorrzicos en dos cultivares de chile (Capsicum
annuum L), que presenta el C. Francisco Romn Garca, mismo que
considero que incluy las revisiones que le fueron recomendadas, por lo que
expres mi aprobacin para que se sigan los trmites acadmicos que
correspondan.
A T E N T A ME N T E
Tecomn, Colima 12 de Abril de 2003

Si otro particular, agradezco su atencin.
.
c.c.p. Ing. Rodolfo valentino Morentn Delgado- Director de la F.C.B.A.
c.c.p. Interesado
c.c.p. Archivo Personal
PRESENTE.-