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Universidade Federal da Fronteira Sul Campus Cerro Largo Curso de Graduao em Cincias Biolgicas-Licenciatura Disciplina: Bioqumica

Relatrio de Aula Prtica: Avaliao da atividade amilsica da saliva Data da aula: 26/06/2013 Aline Luft Ana Paula Dutra Carla Joseane Sorge Carmine Zimermmann Claudia Maiara Heck Jaqueline Pinheiro Andres Introduo As enzimas so protenas que atuam acelerando as reaes, ou seja, so catalisadores orgnicos. Porm para que estas possam atuar dependem de vrios fatores, entre os principais esto a temperatura, a presso, o pH, a concentrao de substrato e de enzimas que existem no meio. Para observar a influncias dessas variveis foi realizada esta aula prtica. Vale ressaltar que o amido reage com o iodo formando uma colorao verde escura, quase preta. Atravs disso pode-se observar se a enzima est atuando sobre seu substrato (amido), atravs da medio do tempo necessrio para que ocorra a digesto total do amido. Ao degradar todo o amido presente na soluo, quebrando ele em molculas menores (aminocidos), a soluo passa a apresentar apenas a cor do iodo (vermelha). Com isso, pode-se observar diversas variveis e analisar se essas variveis afetam a atuao da enzima. A presenta aula prtica tem como objetivo analisar a atividade enzimtica verificando os diferentes fatores que afetam a atuao de enzima e o tempo necessrio para que ocorra a digesto total, nesse caso do amido.

Materiais e Mtodos Para a realizao dessa aula, a turma foi dividida em grupos para verificar o efeito de cada varivel na influncia da atividade da enzima amilase. As variveis estudadas foram o pH, a temperatura, concentrao do substrato, concentrao da

enzima e dos diferentes ons no meio de incubao. A varivel a ser observada por nosso grupo foi o efeito de diferentes ons no meio de incubao. Vale ressaltar que as solues utilizadas nessa aula prtica foram preparadas anteriormente pelas tcnicas de laboratrio. Ao dar incio na aula prtica cada aluno teve que mastigar uma bolacha integral, para que ocorresse a produo da enzima amilase salivar. Depois disso, preparamos 8 tubos de ensaio e pipetamos 0,5 mL de lugol (pesar 2g de iodo, 10g de iodeto de potssio e dissolver em 200 mL de gua destilada) em cada tubo (numerar os tubos da seguinte forma 0, 3, 6, 9, 12, 15, 18, 21). Sendo que no nosso caso, foram usadas trs fileiras de tubos de ensaio contendo lugol, para que pudssemos analisar a atuao dos diferentes ons: fluoreto, cloreto e a ausncia destes. Em um tubo de ensaio preparar o meio de incubao: 5 mL de soluo de amido 1% 2 mL de tampo de pH 7,0*

Em um recipiente, cuspir a saliva. Pipetar 1 mL desta saliva em outro recipiente contendo 49 mL de gua destilada e misturar bem. Adicionamos 1 mL desta saliva diluda no meio de incubao acima. Logo aps, preparamos os trs meios que analisaramos na referida prtica. Em cada meio pipetamos 5 mL da soluo de incubao. No meio 1 pipetamos mais 2 mL de gua destilada, no segundo meio pipetamos 2 mL de soluo de fluoreto de sdio a 2% (modo de preparo: dissolver 0,2 g de fluoreto de sdio em 10 mL de H2O). J no meio 3 pipetamos 2 mL de cloreto de sdio a 1% (modo de preparo: dissolver 1 g de cloreto de sdio em 100 mL de H2O destilada). Com todas essas etapas prontas, pipetamos 2 gotas de cada meio nos tubos de ensaio com nmeros zero. A partir disso comeamos a cuidar o tempo, a cada trs minutos pipetvamos mais 2 gotas dos meios nos tubos de ensaio marcados com o nmero 3, sendo assim feito em sequncia: 0, 3, 6, 9, 12, 15, 18 e 21. E deveramos anotar o tempo no qual a colorao da mistura fique idntica do lugol, mostrando que todo o amido j teria sido consumido pela amilase.

Resultados Aps passar os 21 minutos, observamos que no houve alterao na cor da soluo dos tubos de ensaio, o que demostra a tabela abaixo:

Tabela 1: Colorao da soluo nos diferentes meio de acordo com o tempo. Tempo 0 3 6 9 12 15 18 21 Meio 1 Meio 2 Meio 3

O que espervamos que ocorresse era a mudana de cor das soluo em determinado tempo, se aproximando da cor do lugol. Com isso, saberamos que a enzima amilase salivar teria atuado degradando o amido contido nos meios.

Discusso Na nossa prtica no aconteceu o que espervamos. No tubo contendo cloreto de sdio, a enzima deveria agir mais rapidamente, porque o cloro uma coenzima do processo de quebra do amido, atuando juntamente com a enzima amilase salivar. No caso do fluoreto de sdio, a reao no deveria acontecer, porque o flor um inibidor da enzima amilase salivar. J no tubo com gua destilada, o processo deveria acontecer de forma mais lenta comparado com o tubo com o cloreto de sdio, porque nesse caso no teria o cloro como coenzima. O que acreditamos que ocorreu na nossa prtica foi a influncia do flor. Como todas haviam escovado os dentes antes da prtica, e o principal componente da pasta de dente o flor, ele pode ter influenciado em todos os tubos, impedindo o processo de quebra do amido. O tempo de mastigao da bolacha integral e a quantidade da mesma tambm pode no ter sido suficiente para impedir a ao do flor.

Referncias CONN, E. E.; STUMPF, P. K. Introduo a Bioqumica. So Paulo: Edgar Blcher LTDA. 4 ed. 1980. CHAMPE. P. C.; HARVEY. R. A.; FERRIER. D. R. Bioqumica Ilustrada. Porto Alegre: Artmed. 2009.