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UNIVERSIDADE FEDERAL DO PARAN

Disciplina: Cromatografia e Espectrometria - CQ040 Curso: Farmcia

Relatrio n 3 (02/10/2013)

Assunto da aula:

CROMATOGRAFIA DE CAMADA DELGADA PREPARATIVA

Professores responsveis: Ana Lusa Lacava Lordello

Membros do grupo: Mayara Luiza Rodrigues Patricia Veiga Taissa Ayami de Camargo Turma: A

CURITIBA 2013

SUMRIO I. II. III. IV. V. INTRODUO OBJETIVO DO EXPERIMENTO MATEIRAIS E METDOS RESULTADOS E DISCUSSO REFERNCIAS

I.

INTRODUO

A cromatografia em camada delgada (CCD) uma tcnica de adsoro lquidoslido. Nesse caso, a separao se d pela diferena de afinidade dos componentes de uma mistura pela fase estacionria. A CCD pode ser utilizada tanto na escala analtica quanto preparativa. As placas utilizadas s de vidro com espessura de 3 a 4 mm. Placas analticas usualmente tm 10 cm x 2,5 cm e preparativas 20 cm x 20 cm. As amostras a serem analisadas por devem ser aplicadas a aproximadamente 1 cm da base inferior da placa, com a ajuda de um capilar. Aps a aplicao, a cromatoplaca deve ser introduzida numa cuba contendo a fase mvel adequada, essas cubas geralmente so de vidro, com fundo chato. Uma vez que as fases

estacionrias mais usadas so extremamente polares, os solventes utilizados no devem ser poucos polares, tendo em vista que no removeriam os compostos do ponto de aplicao, nem solventes muito polares, capazes de arrastar os componentes da amostra at o topo da placa. Com base nisso, a melhor escolha a utilizao de um solvente com polaridade intermediria. A placa deixada na cuba por algum tempo, para que o solvente suba por capilaridade, arrastando os compostos que tem menos afinidade pela fase estacionria, fazendo assim a separao desses componentes dos mais adsorvidos pela fase estacionria.

II.

OBJETIVO DO EXPERIMENTO

No dia 2 de outubro de 2013 foi realizado um experimento de cromatografia de camada delgada preparativa, cujo objetivo era separar os pigmentos vegetais por meio da tcnica CCDP. .

III.

MATEIRAIS E METDOS

Cromatoplaca de 20x5 cm Cromatoplaca de 5x5 cm Capilar Bquer de 50ml Filtro Algodo Amostra concentrada Cuba cromatogrfica Mistura de hexano e acetato de etila (2:1, v/v)

PROCEDIMENTO: Utilizando um capilar, aplicar a amostra concentrada na cromatoplaca formando uma faixa contnua (assegurar que a linha de aplicao da amostra no esteja muito baixa).

Esperar a amostra secar Transferir a cromatoplaca preparada para a cuba cromatogrfica. Depois de toda fase mvel passar pela cromatoplaca, destampar a cuba cromatogrfica e retirar a cromatoplaca. Deixar a cromatoplaca secar em ambiente arejado Selecionar uma das bandas e remov-la cuidadosamente com auxilio de uma esptula. Transferir a slica contendo o pigmento para um bquer de 50 ml. Adicionar uma mistura de hexano e acetato de etila e deixar em contato por alguns minutos sob agitao. Filtrar a suspenso Diminuir o volume do filtrado em banho maria Aplicar a amostra do componente extrado j filtrado sobre uma cromatoplaca de 5x5cm e, ao lado, aplicar a amostra concentrada utilizada no inicio do procedimento.

Transferir a cromatoplaca para uma cuba de vidro contendo mistura de hexano e acetato de etila.

IV.

RESULTADOS E DISCUSSO

Os vegetais apresentam cores variadas, e as substncias que atribuem colorao so os pigmentos. A clorofila apresenta cor verde e um dos pigmentos mais comuns nos vegetais, alm de ser ativa na fotossntese. As clorofilas

localizam-se nos cloroplastos, que a organela em que a fotossntese ocorre. Alm da clorofila h tambm os carotenides (carotenos e xantofilas). E apesar da grande importncia da clorofila ela representa apenas 1% da estrutura das folhas verdes. As ligaes entre as molculas de clorofilas so muito frgeis (no covalentes), rompendo-se com facilidade ao macerar o tecido em solventes orgnicos. A escolha do solvente utilizado em uma extrao baseada na polaridade da substncia a ser tratada. Os solventes polares so os mais eficazes na extrao completa de clorofilas, enquanto os apolares so menos eficientes. O betacaroteno encontrado principalmente em vegetais amarelos, alaranjados e verde-escuros, pode se transformar em vitamina A, caso o organismo precise, fortalecendo o sistema imunolgico e ajuda na preveno do cncer (principalmente de pulmo) e da cegueira noturna, alm de deixar a pele saudvel. E assim como o betacaroteno a xantina tambm est presente nos vegetais. A extrao de produtos naturais e sua separao cromatogrfica podem ser utilizadas para ilustras vrios fenmenos envolvendo interaes moleculares ou foras intermoleculares. A separao de uma mistura em um sistema cromatogrfico depende das interaes que ocorrem entre os componentes da mistura e as fases estacionria e mvel. Quando apresentam interaes diferentes, os constituintes de uma amostra podem ser separados, em princpio, por cromatografia em coluna ou outro mtodo cromatogrfico (Collins et al.,1997). Os principais pigmentos da fotossntese so as clorofilas a e b (figura 1), que so pigmentos verdes que contm um anel porfirnico e um tomo de magnsio no centro deste anel, e quatro estruturas modificadas de pirrol, favorecendo assim interaes polares. O eluente utilizado uma mistura de solventes, acetato de etila e hexano, possui polaridade mediana e provoca desvantagem na competio pelo stio de ativao do adsorvente slica, ou seja, os componentes do grupo interagiram mais com a fase estacionria que o eluente, sendo pouco deslocado pelo mesmo. Outros pigmentos presentes nas folhas so os carotenos (figura 2), pigmentos

amarelos, ao analisar as estruturas desses dois pigmentos constatamos que eles so bastante apolares.

Figura 1) Estrutura qumica da clorofila a e b

Figura 2) Estrutura qumica do Beta e alfa caroteno

Pela anlise das estruturas destes componentes e atravs dos dados obtidos na tabela 1, possvel notar que aquele que possui natureza menos polar o caroteno, de cadeia carbnica insaturada. A este componente razovel atribuir ento a mancha amarela mais intensa, de maior valor de Rf (1,0), e menor afinidade pela fase estacionria. A outra mancha amarela, corresponden te xantofila, tem valores de Rf bastante menores, devido sua natureza muito mais polar, pela presena de dois grupos hidroxila nas extremidades da cadeia carbnica de sua estrutura. Esta molcula capaz de interagir fortemente com a slica (a fase estacionria), por meio de ligaes de hidrognio, tendo sua corrida na

cromatoplaca limitada a um pequeno descolamento. As manchas verdes, referentes s clorofilas a e b, podem ser diferenciadas pelo grupamento R. A clorofila a, que tem como substituinte na posio -pirrlica uma metila (um grupo apolar), tem menos afinidade pela fase estacionria, e assim, maior valor de Rf, sendo a mancha verde-bandeira. A outra mancha verde, de colorao verde-musgo, corresponde clorofila b, que tem como substituinte um grupamento aldedo, que a torna mais polar. Assim, esta interage mais com a slica, e possui menor deslocamento na cromatoplaca.
Tabela 1) Dados obtidos no experimento

Na Cromatografia de Camada Delgada Preparativa (CCDP), obtivemos o resultado apresentado na figura 3.

Figura 3) Cromatoplaca

O eluente utilizado permitiu uma forte interao dos carotenos com a fase mvel de mdia polaridade, que foram deslocados at a extremidade superior da cromatoplaca e, consequentemente, interagindo pouco com a fase estacionria. O pigmento escolhido para extrao cromatogrfica foi o cinza, na etapa de separao obteve-se um Rf=0,39, indicando que a separao foi satisfatria e permitindo assim a posterior anlise separada deste pigmento. Nesta etapa de anlise o Rf foi de 0,5 , este aumento no Rf pode indicar duas consequncias: que o pigmento foi separado e que no h, ou h pouca, impureza. Se o aumento fosse mais incrementado isso poderia indicar que h contaminao de outros pigmentos. Foi possvel separar os componentes do extrato de espinafre e retirar um dos pigmentos desse extrato. Atravs da comparao dos resultados obtidos para o extrato puro e o pigmento retirado, possvel concluir que este pigmento contem relativo grau de pureza, devido o valor de Rf=0,5 calculado pela cromatografia de camada delgada. Conclui-se tambm que alm da identificao dos pigmentos, a CCDP tambm til na separao de pigmentos de folhas vegetais

V.

REFERNCIAS

[1] COLLINS, C. H.; BRAGA, G. L.; BONATO, P. S., Fundamentos da Cromatografia. Campinas, SP: Unicamp, 2006. [2] Qumica Nova Interativa. Cromatografia: um Breve Ensaio. Disponvel em<http://qnint.sbq.org.br/qni/visualizarConceito.php?idConceito=33> Acesso em: 15/10/2013