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OFICINA ESPAOLA DE PATENTES Y MARCAS

11 Nmero de publicacin: 21 Nmero de solicitud:

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200302270

ESPAA

51 Int. Cl.7: A01G

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SOLICITUD DE PATENTE

A1

22 Fecha de presentacin: 01.10.2003

71 Solicitante/s: Ramn Milln Novillo

c/ Calatrava 19 4 B 13003 Ciudad Real, ES

43 Fecha de publicacin de la solicitud: 16.04.2005

72 Inventor/es: Milln Novillo, Ramn

43 Fecha de publicacin del folleto de la solicitud:

74 Agente: No consta

16.04.2005

54 Ttulo: Produccin de Ganoderma lucidum.

57 Resumen: Procedimiento de produccin de Ganoderma lucidum. El procedimiento se caracteriza por la formulacin del sustrato de Ganoderma lucidum a base de paja de cereales, tales como el trigo o la cebada, y consiste en un tratamiento trmico de pasteurizacin del sustrato a una temperatura mxima comprendida entre los 65C y 75C. A continuacin se siembra el compost obtenido con semilla de Ganoderma lucidum para, nalmente, ensacar el sustrato en bolsas de polietileno perforadas y sin ltro.

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Venta de fascculos: Ocina Espaola de Patentes y Marcas. C/Panam, 1 28036 Madrid

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DESCRIPCIN Procedimiento de produccin de Ganoderma lucidum.
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Campo tcnico de la invencin La presente invencin se encuadra dentro del sector agrcola.

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Ms especcamente, la presente invencin posibilita la produccin de esporforos del moho basidiomiceto Ganoderma lucidum a las grandes plantas de compostaje de sustratos para seta ostra y championes ya existentes en Espaa, Europa y Amrica. Este proceso se suma a los conocidos para aprovechamiento de los excedentes de paja de trigo y cebada, tanto en agricultura como en ganadera, y da la posibilidad de produccin a las explotaciones de cultivo de seta ostra y championes en los meses calurosos, cuando la actividad de estas instalaciones prcticamente se paraliza. Estado de la tcnica anterior a la invencin

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La Ganoderma (Ganoderma lucidum Leyss ex Fr. Karst) es una seta polporo. Pertenece a la familia de las ganodermatceas, hongos leosos en mnsula o pedicelados, con costra dura o resinosa y esporas distintivas provistas de poro germinal y pared gruesa y ornamentada. Esta seta se conoce vulgarmente en castellano como seta pipa (Espaa), hongo de pipa, nenejn, oreja de palo, or de tierra (Latinoamrica), pipa o paella en cataln o ardegai pipa en vasco. En China se la nombra Ling Zhi, pero su nombre ms conocido es el de Reishi, denominacin japonesa con la que se comercializan numerosos preparados supuestamente medicinales. En la medicina tradicional china, y en las culturas donde estos conocimientos ancestrales han tenido inuencia, se ha venerado como un hongo milagroso por su capacidad para prolongar la vida, siendo considerado como paradigma de salud en Asia. Se ha credo que las sustancias que produce pueden estimular o modular los sistemas del cuerpo humano para luchar contra la enfermedad. La Ganoderma es tambin conocida por sus renombradas propiedades antitumorales y de estimulacin inmune, (Kim et al., Int. J. Mol. Med (1999), 4(3):273-277), efectos cardiovasculares (Lee et al., Chem. Pharm. Bull. (1990 ), 38:1359-1364), tanto como por su lucha contra los radicales libres y su actividad hepatoprotectora (Lin et al., J. Etnopharmacol., (1995), 47(I):33-41). Existen dos grupos de sustancias a las que se les atribuyen los efectos beneciosos de esta seta: triterpenos y polisacridos, aunque no hay evidencia clnica que lo demuestre. (Mekkawy et al., Phytochemistry, (1998), 49(6):1651-1657; Wasser et al., Crit. Rev. Immunol., (1999), 19(1):65-96). En todo caso, se ha realizado y se sigue realizando un considerable esfuerzo de aislamiento y caracterizacin de estas sustancias. Alrededor de cien triterpenos han sido aislados tanto del pleo como del micelio de la Ganoderma, a los que slo unos pocos se les ha testado su bioactividad (Mizuno et al. 1995. Reishi, Ganoderma lucidum and Ganoderma tsugae: bioactive substances and medicinal effects. Food Rev. Int. 11(1).173-178). Paralelamente a los esfuerzos por dilucidar la actividad farmacolgica de la Ganoderma, una parte de la industria productora de setas ha dedicado su atencin a las tcnicas de cultivo ms apropiadas, sin que estas tcnicas se diferencien bsicamente de las utilizadas en la produccin de otras setas.

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Comparado con el volumen de produccin de otras setas al nivel mundial el cultivo de Ganoderma es una actividad casi anecdtica, con una produccin estimada de 4.500 toneladas en 1997, cuando ya en 1991 la produccin mundial de setas rondaba las 4.300.000 toneladas (Royse, D.J. 1996. Specialty mushrooms. P. 464-475. In: J. Janick (ed.), Progress in new crops. ASHS Press, Arlington, VA.). La produccin de nuevas variedades de setas en Europa ha experimentado un incremento en la ltima dcada siguiendo la tendencia mundial. As, la Ganoderma se est convirtiendo en la seta medicinal por antonomasia en todo el mundo, cuando hoy en da cualquier documento en el que se hable de las propiedades medicinales de las setas probablemente la nombrar. En estas condiciones se comercializan multitud de productos con el reclamo de este hongo: cpsulas, ampollas bebibles, tinturas, dentfricos, sucedneos de caf, champs y jabones, e incluso existen patentes para utilizarla como aditivo en cerveza. Para entender el estado de la tcnica ayuda conocer la taxonoma y ecologa de la Ganoderma. Ganoderma lucidum es la especie pivote en la que se centra el concepto del gnero Ganoderma y que, aunque empieza a tener un gran inters industrial, su taxonoma queda por aclarar, porque hasta ahora los estudios se han basado en la caracterizacin morfolgica de las setas, tanto en el mbito macroscpico (coloracin, ausencia o presencia de estpite, tamao del pleo, etc.) como microscpico (tamao de las esporas, presencia o ausencia de determinadas clulas especializadas en el himenforo, etc.), en el estudio de sus hospedantes y en el uso de reactivos colorantes, que no son datos concluyentes cuando la idea de especie se basa en la interfertilidad de los taxones. Es por lo que algunos taxonomistas la incluyen en el llamado Ganoderma lucidum Complex (Gua Incafo. Hongos, tomo I, pag 508) en el que entran las siguientes especies: G. oregonense, G. tsugae, G. curtisii, G. japonicum, G. neojaponicum o G. sinense. Esto ha sido as porque Ganodermas muy distintas morfolgicamente crecen en diversas latitudes sobre maderas tan diferentes como la de las encinas, chopos o diversos tipos de conferas cuando las condiciones son las apropiadas. Pero, como se ha comentado, la actual taxonoma centra sus estudios en caracteres biolgicos de interfertilidad y huella gentica con tcnicas PCRrDNA. Aunque este trabajo est por hacer, se puede decir que la tendencia es a agrupar dentro de una misma especie
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todas estas setas, sobre todo desde que la experiencia en el cultivo ha demostrado que cepas de distintos orgenes fructican perfectamente en maderas de las que no son nativas y que los fenotipos se ven muy afectados por el ambiente. La propia naturaleza del trabajo del taxonomista puede explicar que las monografas ms relevantes hayan apuntado en el pasado reciente en distinta direccin, tendiendo a la diferenciacin de especies ms que al agrupamiento (monograa de Gilbertson y Ryvarden 1987, North American Polypores: Vol I y II y la monografa de Zhao, The Ganodermataceae in China, de 1989). La Ganoderma es un hongo cosmopolita, distribuido fundamentalmente en zonas templadas o tropicales. Aquellas culturas que la han utilizado tradicionalmente optaron en un principio por su recoleccin. No se pueden aventurar fechas sobre el comienzo de su cultivo, mucho ms cuando la historia del cultivo de setas habla del siglo XVIII para el mundo occidental y de ms de un milenio para el mundo oriental. Lo importante es que tarde o temprano se intent el cultivo de las especies ms apreciadas y que las tecnologas que lo han posibilitado han utilizado, por ejemplo, el diseo industrial ms renado para construir mquinas que han permitido la automatizacin de muchos de los procesos implicados, sobre todo aquellos que resultaban muy penosos para la mano de obra. Hoy en da el cultivo industrial de setas combina multitud de disciplinas que se han ido desarrollando, sobre todo, segn el grado de implicacin econmica en la problemtica del cultivo: topatologa, fsica, qumica y biologa de sustratos, automatizacin, conservas, marketing, etc. En Europa y en Amrica no existen ms de tres setas importantes para la industria: Agaricus bisporus o champin, Pleurotus o seta ostra y Lentinula edodes o shiitake. El shiitake est empezando a introducirse con fuerza, aunque todava no es del todo conocida. En el resto del mundo se cultivan del orden de veinte especies distintas en mayor o menor medida. La produccin de cada una de estas setas se adapta mejor a uno o dos sistemas de produccin, aunque sea posible utilizar otros menos ecientes o cuya eciencia se mida teniendo en cuenta factores importantes en una determinada zona geogrca. As se utilizan tcnicas muy distintas para producir setas en diferentes partes del mundo y que haya setas que se puedan producir en unos lugares y no en otros. Los conocimientos tradicionales del cultivo, la disposicin de tecnologa y el clima son algunos de los factores ms importantes para la produccin. El gran incremento experimentado en la produccin de nuevas especies de setas en las dos ltimas dcadas se puede explicar, obviando la necesaria demanda del mercado, desde el punto de vistas del estado de la tcnica en combinacin con una caracterstica comn a todos estos microorganismos: su condicin de saprobios facultativos, es decir que son organismos que tienen la capacidad de desarrollarse sobre otro ser orgnico muerto o sobre sustancias orgnicas, utilizando estos sustratos como alimento, tanto como, segn las circunstancias, infectar otro organismo vivo. Este relativamente sencillo comportamiento metablico es el que posibilit el cultivo rudimentario de hongos con tcnicas que imitaban muy de cerca a la naturaleza. Una de las referencias histricas del cultivo de un hongo saprobio como el shiitake (Lentinula edodes) tiene como origen China (Przybylowicz y Donoghue 1990, Shiitake growers handbook). En 1313, el autor chino Wang Cheng indica en su Libro de Agricultura como seleccionar un buen lugar para el cultivo, elegir los troncos ideales y tratarlos para que produjeran shiitake. Su mtodo consista en golpear la corteza con un hacha y cubrir los troncos con tierra. Despus de un ao, se cubran los troncos con ramas y hojas y se regaban profusamente. Una tcnica parecida fue introducida en Japn entre los aos 1500 y 1600 por los chinos y desde entonces los japoneses son lderes en el cultivo de shiitake en troncos. Para un microbilogo es claro que resulta altamente probable que esta fuera una de las primeras tcnicas utilizadas en el cultivo de una seta. La explicacin se basa en que la madera viva y protegida por la corteza es una materia estril, en su interior no existen contaminantes. Por lo tanto, si se trocean troncos de una zona boscosa donde se ha detectado el crecimiento de shiitake y este ya ha depositado su carga de esporas, se golpea la corteza introduciendo las esporas para que colonicen esta materia inerte y se le dan las condiciones apropiadas de cultivo, obtendremos setas casi con toda seguridad. Aquellos mtodos rudimentarios dieron lugar a estudios de los diferentes tipos de madera, silvicultura, serrado y tratamiento de la madera, seleccin de cepas, tcnicas de inoculacin, de mecanizacin para el manejo de la enorme cantidad de troncos, etc. Esta tcnica tuvo su mayor desarrollo en Japn inmediatamente despus de la II guerra mundial. Con ella se puede cultivar la mayora de hongos saprobios de inters comercial: Auricula spp., Flammulina Velutipes, Grifola frondosa, Hericium erinaceus, Hypsizygus marmoreus, Pleurotus spp., Pholiota nameko, Tremella fuciformis, Ganoderma lucidum, etc. La preocupacin por la escasez de rboles, el poco rendimiento obtenido y la gran inversin en tiempo hizo que con la experiencia acumulada de este primer mtodo industrial se fuera ensayando paralelamente el cultivo en serrn suplementado y esterilizado. Este es el sustrato ms eciente en la actualidad para cultivar shiitake y el utilizado para cultivar la gran mayora de los hongos saprobios enumerados en el prrafo anterior. Con l se obtiene la mxima eciencia biolgica empleado mucho menos tiempo. La esterilizacin de sustratos para el cultivo de hongos saprobios es un proceso que implica la utilizacin de vapor de agua a presin o sin ella. Existen varios mtodos de llevarla a cabo, pero el resultado nal es la obtencin de un sustrato muerto, en el que se han destruido totalmente las bacterias, esporas y micelios de hongos y levaduras. La base terica de este mtodo de cultivo es muy sencilla, pero la realizacin tcnica se ha perfeccionado en algunos casos hasta niveles de mecanizacin no conocidos en otros sectores de la industria de produccin de setas. Se utilizan tanto bolsas como botellas de polipropileno (ver patentes JP2000300067 y JP2001103839 en las que se ofrece una muestra de la sosticacin del cultivo en botella de polipropileno). En este ltimo caso el proceso est totalmente mecanizado y de nuevo fue desarrollado en Japn para extenderse a otros pases cercanos como Corea. En el primer caso las bolsas pueden utilizarse en explotaciones modestas, pero para utilizar el mtodo de las botellas de polipropileno se necesitan inversiones millonarias y gerencia muy experimentada.
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El mtodo de cultivo en sustrato esterilizado en botellas de polipropileno ha posibilitado la explotacin industrial de una gran variedad de setas saprobias que no se adaptan bien a ningn otro mtodo industrial, bsicamente por las necesidades de induccin de primordios. Los casos de Pleurotus eryngii, Flammulina velutipes (Japn produjo 103.357 toneladas en 1993), Hyzsizygus marmoreus (48.479 toneladas en Japn durante 1993), Pholiota nameko (22.613 toneladas slo en Japn en 1993) son ejemplos de setas que no estaran masivamente en el mercado si no fuera por el desarrollo de esta tecnologa (Royse, D.J. 1996. Specialty mushrooms. P. 464-475). Pasamos a explicar brevemente esta tecnologa. Con el sustrato preparado, que consiste bsicamente en serrn de frondosas, en algunos casos se utilizan conferas, y salvado de arroz en una proporcin 4:1, mezclado e hidratado, se rellenan botellas de polipropileno resistente al calor, con una capacidad de 800 a 1.000 ml. Estas botellas van provistas de un ltro para preservar la esterilidad que puede ser manipulado mecnicamente al sembrar. Ms tarde se esteriliza (4 horas a 95C y 1 hora a 120C) y una vez se ha enfriado se inocula mecnicamente para incubarlo a 25 por un periodo de 20 a 25 das. Segn la seta de que estemos hablando se proceder de una u otra forma para la induccin de primordios. Otras setas no se adaptan a este mtodo, como son los casos del shiitake o la Auricularia spp., que fructican y producen con otro tipo de envases, ya que utilizan toda la supercie colonizada para producir sus carpforos, como en el caso del shiitake o la recoleccin se hace imposible en las botellas, como en el caso de la Aurcula spp. En estos casos la mejor opcin es la utilizacin de bolsas de polipropileno, ya que se pueden eliminar sin daar el sustrato colonizado o perforar para facilitar el aoramiento de setas. Respecto al cultivo en bolsas de polipropileno hay que indicar que existen dos tendencias en el mbito mundial, cada una de ellas con sus ventajas e inconvenientes. Una de las tendencias, la ms desarrollada en Japn, Estados Unidos y Europa utiliza bolsas con un ltro termosellado; con dos funciones: evitar la perdida de humedad del sustrato y posibilitar la respiracin. En este caso las bolsas se llenan aproximadamente hasta su mitad de sustrato, dejando una cmara de aire, se esterilizan (4-5 horas a 121 o 12 horas a 100), se inoculan, se sellan y se germinan para pasar a las fases de cultivo. En China, Taiwan y Malasia est muy arraigado el cultivo en bolsas cilndricas, sin cmara de aire, a las que se les coloca un tapn con ltro mediante diferentes sistemas de anclaje. Ambos son sistemas que no se adaptan a la mecanizacin por la falta de rigidez y la delicadeza del plstico. Son sistemas que se adaptan bien a lo que se pueden considerar medianas empresas dentro de la industria del cultivo de setas. Una de las setas ms importantes para la industria, el shiitake, se cultiva idneamente en ambos tipos de bolsas. Despus de lo expuesto se puede denir el estado de la tcnica para el cultivo de Ganoderma. Un artculo excelente sobre el estado de la tcnica se puede encontrar en la publicacin electrnica www.mushworld.com, escrita por Alice W. Chen el 01/12/2001 con el ttulo Cultivation of the Medicinal Mushroom Ganoderma lucidum (Curt.: Fr.) P. Karst (Reishi) in Nort America (1). Este artculo lo completa la autora, en meses posteriores, en la misma publicacin electrnica www.mushworld.com con otros cuatro artculos de mismo ttulo, salvo el nmero nal entre parntesis que los numera como (2), (3), (4) y (5). El grueso de la produccin de Ganoderma se realiza en bolsas de polipropileno cilndricas, de 3 a 5 litros de capacidad, rellenas de sustrato esterilizado y a las que se las dota de un anillo ltrante. En Japn se utiliza el mtodo de botella de polipropileno. El sustrato, en ambos casos, est compuesto de serrn de diversos rboles y una quinta parte aproximadamente de salvado de arroz, aunque existen multitud de frmulas, casi tantas como cultivadores. La razn por la que se utilizan bolsas cilndricas obedece a las particulares caractersticas del cultivo de esta seta. En primer lugar, para obtener ejemplares de calidad para el mercado, se debe concentrar toda la energa de la bolsa en la produccin de uno o dos carpforos, cosa que se consigue, con este hongo, exponiendo una mnima parte del sustrato al aire, ya que ser all donde nicamente se generen los primordios. La mnima apertura del anillo permite, en segundo lugar, evitar la perdida de humedad, parmetro fundamental para el buen desarrollo de las funciones metablicas del micelio, mucho ms cuando para el buen desarrollo de las setas se necesita, en su ltima fase de maduracin, una humedad relativa del aire baja, en comparacin con la gran mayora de las setas, para no ser atacadas por bacterias y hongos microscpicos (aspergillus spp. y penicilium spp.) que pueden malograrlas. Hay que explicar que el desarrollo de una seta de Ganoderma necesita, en las mejores condiciones, dos meses de desarrollo para obtener ejemplares de mxima calidad, circunstancia que compromete la produccin si no se es muy cuidadoso y observador de las condiciones de cultivo. Otra tendencia muy extendida es el cultivo en trozos de troncos, inoculados y enterrados, en un proceso que tiene muchos puntos comunes con el cultivo en tronco del shiitake. Este sistema se utiliza en zonas donde es fcil obtener madera a buen precio; lo utilizan cultivadores importantes de EE.UU. (Vitasol (Organotech products), San Antonio, Texas) y en muchas zonas de China.
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Se resume de lo dicho que en la actualidad la Ganoderma se produce en sustrato esterilizado formulado a partir de serrn o sobre troncos. Explicacin de la invencin
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Hay que retomar en este apartado la historia del cultivo industrial de setas. Se pueden encontrar documentos chinos milenarios donde se describe el cultivo del shiitake, seta saprobia que pertenece al numeroso grupo de hongos que crecen sobre la madera, aquellos que poseen un sistema enzimtico capaz de degradar los polisacridos que
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la componen y aprovechar su energa, aquellos que los cultivadores conocen como degradadores primarios de la madera. El cultivo articial de lo que se conoce como degradadores secundarios es ms reciente, si no mucho ms reciente. El primer hongo degradador secundario que se empez a cultivar industrialmente fue el Agaricus bisporus (el champin), hace tan slo dos siglos. Si nos jamos en su metabolismo, se puede denir como un hongo subcoprlo.
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En el siglo XVIII se empezaron a dar los primeros pasos cerca de Pars para su cultivo industrial y hoy en da es el hongo comercial mejor estudiado. A pesar de lo que se pueda pensar, siendo la seta cultivada ms comn en el mercado, es difcil de producir, en algunos aspectos mucho ms complicado que cualquier degradador primario de la madera. La explicacin es sencilla, para producir champin hay que dominar la elaboracin de su compost.
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Compostar es, en el sentido amplio del concepto, la reduccin biolgica de desechos orgnicos a humus, una sustancia del suelo aprovechable por las races de las plantas. Este proceso se repite sin n en cualquier sitio donde crezca una planta, es una parte de la lgica que soporta la vida en la Tierra. Pero una denicin ms comn de compostaje comporta la intervencin del hombre en el tratamiento de materias orgnicas de desecho para producir materiales aprovechables en granjas, huertas o jardines, para cultivar setas o abonar nuestras plantas. Compostar implica necesariamente la utilizacin de grandes volmenes de materias primas, se dice que se trabaja en masa, para hacer rentables las operaciones gracias a la utilizacin de maquinaria y al aprovechamiento del calor que genera la propia masa. Lo que el hombre ha conseguido, con la acumulacin de conocimientos sobre la naturaleza del compostaje, es dirigir las compostas, beneciando o perjudicando segn a qu microorganismos. Esta tarea puede ser muy complicada cuando no existe una caracterizacin fsica, qumica y microbiolgica clara de los sustratos utilizados para cultivar una u otra seta. Por eso la tendencia, hoy que el mercado demanda diversidad en las setas y se crean empresas sin experiencia en compostaje, es que los productores opten por sistemas fcilmente reproducibles, y la respuesta a sus necesidades pasa por la esterilizacin de sustratos. Un sustrato esterilizado para Lentinula edodes puede funcionar muy bien para Pleurotus, Hericium, Ganoderma, etc. No ocurre lo mismo con un sustrato pasteurizado, selectivo, en la mayora de los casos, nicamente para una seta. Slo existen dos setas con gran importancia econmica que, actualmente, se cultiven en sustratos pasteurizados en masa: Agaricus bisporus (champin) y Pleurotus ostreatus (y anes). Mencin aparte merece el caso de Volvariella volvacea, de gran importancia econmica en Asia y cuyo cultivo se realiza normalmente en sustrato fermentado, sin un tratamiento en cmara, aunque parece ser que se tiende a la pasteurizacin cuando su produccin pasa a ser una actividad industrial y deja de ser mera subsistencia. Agaricus bisporus crece en un compost de unas caractersticas totalmente distintas al compost donde crece Pleurotus ostreatus y anes. Tampoco Pleurotus ostreatus y sus anes pueden crecer en el compost de Agaricus bisporus. Media docena ms de setas se cultivan en sustratos pasteurizados en masa, pero su cultivo es regional o, en algunos casos, anecdtico, tal como revisamos a continuacin.

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Agrocybe aegerita es conocida como seta de chopo en Espaa y como Pioppino en Italia. Se cultiva en sustrato pasteurizado en masa en Italia y su cultivo, an siendo una seta apreciada en muchos pases no se ha extendido. El sustrato es selectivo para este hongo y su preparacin requiere conocimientos que no se han difundido, sobre todo porque, aunque es una seta muy apreciada gastronmicamente, su cultivo es muy penoso por la gran cantidad de problemas a las que se enfrenta el cultivador. Pleurotus eryngii es conocida como seta de cardo en Espaa y Cardonchello en Italia. Se cultiva en sustrato pasteurizado en masa en Italia, aunque se est tendiendo al cultivo en sustrato esterilizado para evitar las enfermedades criptogmicas que le afectan. El sustrato necesario es diferente al de Pleurotus ostreatus y sus anes. Esta es una de las pocas excepciones desde el punto de vista metablico en el Gnero Pleurotus, pues todas las especies de este Gnero con importancia econmica en la actualidad se desarrollan bien en un sustrato en el que crezca Pleurotus ostreatus. Lentinula edodes, conocida como shiitake, necesita mucha investigacin para poder ser producida en sustrato pasteurizado en masa a partir de paja de cereales, pues tiene muchos inconveniente con respecto a los mtodos en que se usa la esterilizacin. En el instituto INRA francs han investigado su produccin.

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Lepista nuda, Stropharia rugoso-annulata y Coprinus comatus se producen en diferentes sustratos pasteurizados, pero es una actividad casi desconocida de la que no existe apenas informacin. Citamos a continuacin las referencias ms importantes.

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Chang, S.T. and P.G Miles. 1989. Edible mushrooms and their cultivation. CRC Press, Boca Raton, FL. Chang, S.T. and W.A Hayes (eds.), The biology and cultivation of edible mushrooms. Academic Press, NY. C.I.E.S 1994. I jornadas tcnicas del champin y otros hongos comestibles en Castilla-La Mancha.

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C.I.E.S 1999. II jornadas tcnicas del champin y otros hongos comestibles en Castilla-La Mancha. Furukawa, h. 1987. Mushroom production in Japan. Farming Japan 22(6):12-23.
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Miller, M. And S.C. Jong. 1987. Commercial cultivation of shiitke in sawdust lled plastic bags. Developments in Crop Science, Cultivating Edible Fungi Vol. 10:421-426.
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Oei, P. 1991. Manual on mushroom cultivation: techniques, species and opportunities for commercial application in developing countries. Tool Publ., Amsterdam, The Netherlands. Przybylowicz, P. And J. Donoghue. 1988. Shiitake growers handbook. Kendall/Hunt Publ. Co., Dubuque, IA.

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Quimio, T.H., S.T. Chang, and D.J. Royse. 1990. Technical guidelines for mushroom growing in the tropics. FAO Plant Production and Protection Paper 106. FAO, United Nations, Rome. Royse, D.J. 1995. Specialty mushrooms: cultivation on synthetic substrate in the USA and Japan. Interdisciplin. Sci. Rev. 20:205-214.

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Stamets, P. 1993. Growing gourmet and medicinal mushrooms. Ten Speed Press, Berkeley, CA. Stamets, P. And J.S. Chilton. 1982. The mushroom cutivator: A practical guide to growing mushrooms at home. Agarikon Press. Olympia, WA.

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Vedder, P.J.C. 1979. Culture moderne des champignons. Para dar el paso nal en la argumentacin tenemos que introducir unas apreciaciones sobre la logenia de setas cultivadas en sustrato pasteurizado en masa. Se sigue en este caso la taxonoma propuesta por Ainsworth, G.C., 1971. Ainsworth and Bisbys Dictionary of Fungi.

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Todas las setas que hemos enumerado en los prrafos anteriores se clasican dentro de cinco familias: Tricholomataceae, Strophariaceae, Volvariaceae, Agaricaceae y Coprinaceae. Es decir, todas las setas que se cultivan en sustrato a base de paja de cereales y pasteurizado en masa pertenecen al Orden de los Agaricales. Pues bien, Ganoderma lucidum es la primera seta que se puede cultivar industrialmente en un sustrato a base de paja de cereales y pasteurizado en masa y que pertenece a otro Orden: Aphyllophorales, familia Ganodermataceae. Esto abre las puertas, adems, a futuras innovaciones en el cultivo de Aphyllophorales de importancia econmica en sustratos a base de paja de cereales pasteurizados en masa, cuando existen varias especies interesantes para la industria de las setas medicinales y comestibles dentro de este Orden: Grifola frondosa (familia Polyporaceae), Coriolus Versicolor (familia Polyporaceae), Polyporus Tuberaster (familia Polyporaceae), Schizophyllum Commune (familia Schizophyllaceae), Sparassis spp. (familia Sparassidaceae), Stereum Hirsutum (familia Stereaceae), Hericium spp. (familia Hydnaceae), Forres Fomentarius (familia Polyporaceae), Laetiporus Sulphureus (familia Polyporaceae), etc. Las ventajas de este mtodo de produccin de Ganoderma lucidum con respecto al estado de la tcnica anterior son cinco: 1. Automatizacin del cultivo all donde la utilizacin de mano de obra resulta muy conictiva por la penosidad del trabajo. Las perforaciones para el intercambio gaseoso, gura 1(2), no necesitan aislarse con dispositivos ltrantes, pues el sustrato posee microora protectora frente a posibles contaminantes. Con el mtodo de bolsas de polipropileno, los dispositivos ltrantes deben colocarse manualmente. 2. Utilizacin de polietileno en vez de polipropileno, permitiendo as la compactacin del sustrato, el termosellado automtico y un ptimo tratamiento mecnico por parte de mquinas paletizadoras, soportando perfectamente adems el maltrato a que se someten las bolsas en las manipulaciones posteriores en las naves de cultivo. El polietileno no se puede utilizar cuando se trabaja con altas temperaturas. 3. Utilizacin de pajas de cereales, materia prima excedente en muchos pases, con la consiguiente proteccin de los bosques.

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4. Utilizacin de un tratamiento trmico muy econmico, ya que la mayor parte del calor es generado en el interior de la masa y no es necesaria la utilizacin de temperaturas ms all de los 70C. 5. Obtencin de cuerpos fructferos sin estpite, con gran proporcin de himenforo con respecto al pleo. Esto se consigue por la gran cantidad de sustrato con que se rellenan los sacos. La ausencia de estpite es una caracterstica de este mtodo de cultivo y se debe a la rpida disipacin del CO2 en las perforaciones para el intercambio gaseoso, gura 1 (2). Descripcin de los dibujos

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La gura 1(1) muestra una clsica bolsa de polietileno plegada, rellenada de sustrato y termosellada mecnicamente por una mquina ensacadora automtica de compost. La gura 1(2) muestra las perforaciones de 2 centmetros de dimetro por las que el sustrato respira y produce las
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fructicaciones. La colonizacin del sustrato por parte del micelio de Ganoderma lucidum preere poca ventilacin, por lo que es suciente la realizacin de 8 agujeros, simtricamente distribuidos, por ejemplo, como en la gura 1. La gura 2 muestra el aspecto de la bolsa despus de 2 meses de produccin.
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La gura 2(1) muestra una seta de Ganoderma lucidum totalmente desarrollada. Realizacin de la invencin
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El compostaje de sustratos para champin se lleva a cabo clsicamente en dos fases. La primera fase a su vez se puede dividir en dos partes fundamentales, una primera manipulacin en la que se realiza un proceso fsico con los materiales: trituracin, mezcla y homogeneizacin y una segunda manipulacin en la que se produce calor y los microorganismos generan amonaco con las protenas que pueden obtener del sustrato, que es la forma nitrogenada que pueden utilizar para generar sus propios tejidos. La sucesin de microorganismos transforman el nitrgeno y la lignina en un complejo hmico benecioso para posteriores generaciones de microorganismos. La segunda fase persigue dos objetivos fundamentales: pasteurizacin, para eliminar los insectos, semillas y microorganismos patgenos, y acondicionamiento, para crear alimento que slo benecie el crecimiento del hongo que nos interesa. Despus de estos tratamientos comunes, el compost obtenido para el champin nada tiene que ver con el obtenido para Ganoderma lucidum. La realizacin prctica de la invencin puede abordarse en teora con distintas proporciones y formulaciones del sustrato y tratamientos de pasteurizacin. En este caso se ha realizado un cultivo industrial en las instalaciones de Pleochamp, S.L., fbrica de compost para setas ubicada en Sisante (Cuenca, Espaa). El blanco de siembra se ha elaborado as mismo en el laboratorio de micelios de la propia planta. El proceso se ha realizado en los meses de junio a septiembre de 2003. Se sembraron 4 toneladas de compost con 100 Kg de blanco de siembra de Ganoderma lucidum y se ensacaron en 200 bolsas. Se produjeron 150-200 gramos de Ganoderma desecada por bolsa, eciencia biolgica pareja a la obtenida con mtodos actuales.

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Se selecciona paja de cereales con buenas caractersticas fsicas, qumicas y microbiolgicas. Una buena opcin es la combinacin de una parte de paja de cebada caballar y otra de trigo. El trigo proporciona estructura al sustrato. La paja debe ser nueva y a poder ser cultivada en secanos, ya que esto favorece la idoneidad de su composicin qumica y preserva de contaminaciones.
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Se procede al picado e hidratacin de la paja hasta un 65 o 70% en el sinfn del molino. El largo de la paja debe revisarse segn las caractersticas de cada tipo de paja. Ganoderma lucidum se benecia de un sustrato bien hidratado y compactado, por lo que es necesario picar corta la paja.
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Se aaden las enmiendas y los suplementos para tamponar el ph a 7,5 y llevar el contenido en nitrgeno a 1,5 (proteina/6.5). El ph regula con carbonato clcico y la protena se aporta con grnulos de cscara de girasol (la composicin de la cscara de girasol vara entre un 4 y 6% de protena y un 5% de carbohidratos totales). La suplementacin se puede realizar con cualquier aditivo rico en protenas que pueda adaptarse al cultivo de setas. En este caso utilizamos grnulos de cscara de pipas de girasol, ya que se pueden formular correctamente desde fbrica y ofrecen muy buenas caractersticas de manejabilidad e hidratacin. Utilizamos un 1% de producto, formulado especialmente, sin la adiccin de melazas. El almacenamiento de los suplementos debe hacerse cuidadosamente para que no se degrade el contenido en protena. Se forma un cordn con una mquina volteadora y se deja fermentar durante 24 horas oxigenando por volteo en tres ocasiones para beneciar a la ora termla. Esta fase I se diferencia de la del compost de champin por su corta duracin, para evitar la reduccin de sustancias orgnicas y la generacin de excesiva microora, que no es aprovechable por un hongo degradador primario de la madera como Ganoderma lucidum. Se introduce el sustrato en la cmara de pasteurizacin y se procede al tratamiento trmico aerbico controlado. Esta operacin debe hacerse con sumo cuidado, pues si la densidad en menor en alguna zona de la cmara, el ujo de aire se dirigir hacia esa zona y se crear una composta anaerobia que no funcionar correctamente. La curva de temperatura y ventilacin debe ajustarse para obtener un sustrato selectivo para Ganoderma lucidum. La clave del xito del proceso de la fase II es conseguir llegar al punto de exterminacin de microorganismos patgenos sin comprometer el acondicionamiento posterior. Para conseguir este objetivo se debe combinar tiempo y temperatura. La ora termla protectora aguanta ms horas la accin de la temperatura que la patgena (hongos Trichoderma fundamentalmente) por lo que se adopta una estrategia bien conocida en las plantas de compost: subir la temperatura en 4 horas a 70C y mantenerla durante 3 4 horas. Una vez alcanzada la pasteurizacin (eliminacin de patgenos) se aborda el acondicionamiento, para el cual se
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baja la temperatura hasta los 50 a 55C y se mantiene 48 horas, durante las cuales, se inactivar paulatinamente el crecimiento de los microorganismos y se apreciar una bajada de temperatura que, una vez alcance 30C, nos indicar que el compost est preparado para ser sembrado.
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El proceso de la fase II debe proporcionar el oxigeno necesario para la generacin de la microora. Se estima que el proceso se estar realizando correctamente si una llama es capaz de mantenerse encendida dentro de la cmara (11% de oxigeno en el compost). Si todo ha ido bien se habrn generado hongos tipo humcola y actinomicetos (Nocordia, Streptomyces y Thermoactinomyces) entre otros termlos beneciosos. El compost debe sembrarse con un 5% de blanco de siembra. Las cepas se pueden aislarse fcilmente de variedades silvestres o conseguirse a travs de colecciones de cultivos tipo como por ejemplo: German Collection of Microorganins and Cell Cultures, DSMZ n 3515, n 3534, n 9621; Centraalbureau voor Schimmelcultures, CBS n 251.61, n 176.30; American Type Culture Collection ATCC n 52412. El blanco de siembra se elabora sobre distintos tipos de cereales (mijo, trigo, centeno, etc.).

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La mquina ensacadora debe prepararse para que el sustrato sea comprimido dentro del saco con la densidad idnea. No deben quedar espacios huecos dentro del saco. En caso contrario no se producir la colonizacin. El micelio de Ganoderma lucidum tolera y se benecia de valores de dixido de carbono por encima del 5% (50.000 ppm). Valores menores pueden inactivar el blanco de siembra. Adems de la compresin del sustrato, al saco deben realizrsele pocas perforaciones por dos razones: aumentar el contenido de CO2 y obtener pocas fructicaciones pero de mxima calidad. Las bolsas sembradas se llevan a las salas de germinacin y se colocan sucientemente juntas para que generen el calor necesario para su germinacin (31C en el corazn de la bolsa). La temperatura ambiente debe rondar los 25C. En 3 4 das se apreciar un aroma caracterstico de la germinacin de este hongo que nos indicar que todo va bien.

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En estas condiciones las setas aparecern a los 20 das. No deben regarse hasta que tengan 4 centmetros de dimetro. Las setas se pueden regar durante las dos primeras semanas de crecimiento y se debe dejar de hacerlo para que completen su desarrollo sin dar la posibilidad de ataque a hongos tipo penicillium y aspergillus. El saco evita la perdida de humedad del sustrato y la necesidad de elevar la humedad relativa en las naves de fructicacin.
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Durante el desarrollo de las setas, la temperatura de las naves de fructicacin deben estar por encima de los 25C, vindose beneciadas por temperaturas altas extremas, siempre que se rieguen los suelos en tal caso.
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REIVINDICACIONES 1. Procedimiento de produccin de Ganoderma lucidum en sustrato formulado con paja de cereales, consistente
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en: a) Tratamiento trmico del sustrato alcanzando temperaturas mximas entre 65C y 75C. b) Siembra del sustrato con semilla de Ganoderma lucidum.

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c) Ensacado del sustrato en bolsas de polietileno perforadas. 2. Procedimiento de produccin de Ganoderma lucidum en sustrato formulado con paja de cereales, segn la reivindicacin 1, caracterizado por la utilizacin de un sustrato formulado a partir de paja de trigo o cebada.

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3. Prodedimiento de produccin de Ganoderma Lucidum en sustrato formulado con paja de cereales segn las reivindicaciones anteriores, caracterizado por la ausencia de ltro en las perforaciones de ventilacin de las bolsas.

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OFICINA ESPAOLA DE PATENTES Y MARCAS

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ES 2 229 926 200302270

21 N de solicitud:

ESPAA

22 Fecha de presentacin de la solicitud: 01.10.2003 32 Fecha de prioridad:

INFORME SOBRE EL ESTADO DE LA TCNICA

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Int. Cl.7:

A01G 1/04

DOCUMENTOS RELEVANTES Categora Documentos citados Reivindicaciones afectadas A ES 2054803 T3 (PENFORD PRODUCTS CO.) 16.08.1994, reivindicaciones 1,4,9. EP 0076172 B1 (KUREHA KAGAKU KOGYO KABUSHIKI KAISHA) 18.12.1985, todo el documento. JP 2003180159 A (KONO BUHEI) 02.07.2003 (resumen) [en lnea] [recuperado el 20.01.2005]. Recuperado de EPO PAJ Database. JP 10-066535 A (MORIKAWA KENDOKO) 10.03.1998 (resumen) [en lnea] [recuperado el 20.01.2005] Recuperado de EPO WPI Database. Nmero de acceso 1998-224314. 1

Categora de los documentos citados

X: de particular relevancia Y: de particular relevancia combinado con otro/s de la misma categora A: reeja el estado de la tcnica O: referido a divulgacin no escrita P: publicado entre la fecha de prioridad y la de presentacin de la solicitud E: documento anterior, pero publicado despus de la fecha de presentacin de la solicitud

El presente informe ha sido realizado

 para todas las reivindicaciones

Fecha de realizacin del informe 28.01.2005

para las reivindicaciones n: Examinador Fco. J. Haering Prez

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OFICINA ESPAOLA DE PATENTES Y MARCAS

11 N de publicacin

ES 2 229 926 A1 200302270

21 Nmero de solicitud: ESPAA

CORRECCIN DE ERRATAS DEL FOLLETO DE PATENTE

Pg./Inid 1/54

Errata PRODUCCIN DE GANODERMA LUCIDUM.

Correccin PROCEDIMIENTO DE PRODUCCION DE GANODERMA LUCIDUM.

19.04.2005