Aflatoxinas Jul 2012

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CENTRO NACIONAL DE ALIMENTACIN

CURSO sobre SEGURIDAD ALIMENTARIA Y NUTRICIN : ACTUALIDAD y NUEVOS ENFOQUES (Lugo, 18 de julio de 2012)
AFLATOXINAS en los ALIMENTOS

RIESGOS Y PREVALENCIA
Pedro A. Burdaspal Centro Nacional de Alimentacin Agencia Espaola de Seguridad Alimentaria y Nutricin Majadahonda, (Madrid) pburdaspal@msssi.es
MICOTOXINAS:
Denominacin genrica de toda una serie de metabolitos secundarios txicos, biosintetizados por hongos de diferentes gneros y especies. ! Micotoxinas conocidas = 474 (2005) ! Micotoxinas sanitariamente relevantes = 15
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Estimacin del riesgo

Riesgo Toxicidad Exposicin Incidencia Nivel Consumo
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Ergotismo
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Alcaloides del Ergot

Grupo de sustancias, estructuralmente relacionadas entre si y responsables de un cuadro txico en animales y en el hombre, denominado Ergotismo, provocado por consumo de centeno contaminado con cornezuelo.
Claviceps purpurea (Cornezuelo del centeno)
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Micotoxina
Hongo productor
Aflatoxinas B1, B2, G1, G2
Aspergillus flavus, Aspergillus parasiticus, Aspergillus australis
Transformacin de Aflatoxina B1 a Aflatoxina M1
Fuente: Micotoxinas en alimentos, Jos Miguel Soriano del Castillo (Director-Coordinador) Ed. Daz de Santos (2007)
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Aflatoxinas
! La Agencia Internacional de Investigacin del Cncer de Lyon ha clasificado a la mezcla natural de las aflatoxinas B1, B2, G1 y G2 en la categora 1, como agente carcingeno humano.
Aflatoxina M1
! La Agencia Internacional de Investigacin del Cncer de Lyon ha clasificado a esta toxina en la categora 2B, como posible carcingeno humano.
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Efectos txicos de las Micotoxinas

Micotoxina Aflatoxinas (B1, B2, G1, G2, M1, M2) Efecto patolgico Hepatotoxicidad Hiperplasia del conducto biliar Hemorragia Tubo digestivo Riones Carcinognesis (tumores de hgado).
Valores DL50 por intoxicacin aguda por aflatoxinas en diferentes especies animales
Especies Conejo Pato Perro Gato Cerdo Conejillo de indias Papin mg/kg peso corporal 0,3 0,34 0,5 - 1,0 0,55 0,62 1,4 2,0 Especies Oveja Pollo Rata Macaco Ratn Hamster mg/kg peso corporal 2,0 3,4 - 6,8 7,2 - 17,9 7,8 9,0 10,2
Basado en: Handbook of Foodborne Diseases of Biological Origin, Miloslav Rechcigl, Jr. (ed.) (1983)
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Fuente: Handbook of Foodborne Diseases of Biological Origin, Miloslav Rechcigl, Jr. (ed.) (1983)
Mecanismo de accin de la Aflatoxina B1
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ADVERSE EFFECTS OF FOODS Edited by E.F. Patrice Jelliffe and Derrick B. Jelliffe (1982)
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AFLATOXICOSIS AGUDA - KENIA - 2004

-! -! -! -! -! -! Sntomas: Anorexia, fiebre ligera, vmitos, dolor abdominal, hepatitis aguda, muerte. Casos identificados : 317 Fallecimientos : 125 (39,4 %) Duracin del episodio : enero - junio de 2004 Alimento responsable : maz (cultivo domstico-no comercial) Factores de riesgo : a)! Almacenamiento de maz insuficientemente seco en ambientes domsticos - no en graneros. Concentracin media de aflatoxinas: maz sospechoso / maz control 354,5 g/kg / 44,1 g/kg b) Positividad frente al antgeno de la hepatitis B casos / controles 44 % / 7 %
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Contaminacin fngica Pienso Alimentos de origen animal Productos agrcolas y alimentos Huevos Carne Leche Morcilla
Micotoxina
Inhalacin
Humanos
Nios
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Caractersticas Generales - I
! Alta toxicidad / carcinogenicidad ! Toxicidad crnica y ms raramente aguda ! Estabilidad trmica ! Electroestticas ! Ubicuidad ! Naturaleza sumamente heterognea de contaminacin en el campo o en las materias primas. ! Fcil y verstil deteccin analtica
Caractersticas Generales - II
! Metabolitos fngicos txicos que se estima pueden afectar al 25 % de la produccin mundial de alimentos y piensos. ! Principalmente en maz, trigo, frutos secos, especias, pueden causar prdidas de cosechas considerables. ! Humedad, temperatura y el ataque de insectos son los principales responsables de la contaminacin. ! El consumo a largo plazo de alimentos con bajos niveles est relacionado con el cncer de hgado primario (exposicin crnica).
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Caractersticas Generales - III: Ingestas mximas tolerables

AFLATOXINAS (B1 y Totales : B1+B2+G1+G2) : Son cancergenos genotxicos en humanos ! No se establece ingesta mxima tolerable ! Contenidos mximos tan bajos como sea razonablemente posible : Principio ALARA.
Caractersticas Generales - IV
! Condiciones de crecimiento de la mayora de los hongos micotoxignicos: - aw : < 0,85 0,99 - Temperatura ptima de crecimiento: 20 - 35C ! Todos los alimentos pueden estar involucrados, excepto los pescados.
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REGLAMENTO (CE) N 1881/2006 DE LA COMISIN de 19 de diciembre de 2006 por el que se fija el contenido mximo de determinados contaminantes en los productos alimenticios Diario Oficial de la Unin Europea L 364 de 20.12.2006
REGLAMENTO (EU) N 165/2010 DE LA COMISIN de 26 de febrero de 2010 que modifica, en lo que respecta a las aflatoxinas, el Reglamento (CE) n 1881/2006 por el que se fija el contenido mximo de determinados contaminantes en los productos alimenticios (Texto pertinente a efectos del EEE)
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MICOTOXINA
NIVELES MXIMOS B1 (g/ kg) 2 8 8 5 2 5 5 0,10 0,10 B1+B2+G1+G2 (g/kg) 4 15 10 10 4 10 10 -
ALIMENTOS / PIENSOS
Cacahuetes, y frutas desecadas para consumo directo. Cacahuetes para seleccin o tratamiento fsico posterior. Almendras y pistachos para consumo directo. Avellanas, nueces de Brasil para consumo directo Cereales y derivados. Maz. Pimentn, pimienta, nuez moscada, crcuma y jengibre. Alimentos infantiles y alimentos elaborados a base de cereales para lactantes y nios de corta edad. Alimentos dietticos destinados a usos mdicos especiales dirigidos especficamente al los lactantes.
AFLATOXINAS
MICOTOXINA
NIVELES MXIMOS B1 (g/kg) 20 1 5
ALIMENTOS / PIENSOS Materias primas para piensos Piensos complementarios y completos excepto: Ganado lechero, terneros, corderos, cabritos, lechones y aves de corral jvenes. Piensos compuestos para bovinos, ovinos y caprinos (excepto ganado lechero, terneros y corderos). Piensos compuestos para cerdos y aves de corral (excepto animales jvenes).
AFLATOXINAS
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MICOTOXINA
NIVELES MXIMOS M1 (g/kg) 0,05 Leche.
ALIMENTOS / PIENSOS
AFLATOXINAS
0,025
Preparados para lactantes y preparados de continuacin, incluidas la leche para lactantes y la leche de continuacin. Alimentos dietticos destinados a usos mdicos especiales dirigidos especficamente a los lactantes.
0,025
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INTENSIFICACIN DE LOS CONTROLES OFICIALES (Reglamento N 294/2012) Todava en vigor las siguientes frecuencias establecidas en el Reglamento (CE) n 187/2011 :
ALIMENTO CACAHUETES Y DERIVADOS (pienso y alimento) CACAHUETES Y DERIVADOS (pienso y alimento) CACAHUETES Y DERIVADOS (pienso y alimento) SEMILLAS DE SANDA CHILI (Capsicum anuum) CACAHUETES Y DERIVADOS (pienso y alimento) UVAS PASAS PAS DE PROCEDENCIA BRASIL GHANA INDIA NIGERIA PER SUDFRICA UZBEKISTN RIESGO AFLATOXINAS AFLATOXINAS AFLATOXINAS AFLATOXINAS AFLATOXINAS OCRATOXINA A AFLATOXINAS OCRATOXINA A FRECUENCIA 10 % 50 % 20 % 50 % 10 % 10 % 10 %
INTENSIFICACIN DE LOS CONTROLES OFICIALES (Reglamento N 294/2012) Frecuencias nuevas o modificadas con respecto al Reglamento (CE) n 187/2011
ALIMENTO AVELLANAS (pienso y alimento) ESPECIAS Otros frutos desecados del gnero Capsicum (excepto Capsicum annuum), enteros PAIS DE PROCEDENCIA AZERBAIYN INDIA RIESGO AFLATOXINAS AFLATOXINAS AFLATOXINAS OCRATOXINA A FRECUENCIA 10 % 20 %
PER
10 %
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CONTROL DE MICOTOXINAS (Aflatoxinas, Ocratoxina A, etc.)
Lote Partida
Anlisis
Resultado
("g/kg)
Aceptacin Rechazo
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CONTENIDO DE AFLATOXINAS EN 20 SUBMUESTRAS TOMADAS EN UNA MUESTRA DE 54 kg DE CACAHUETES Contenido de Aflatoxinas (g/kg)
202 1 16 0
5 0 0 94
0 159 46 0
39 1 14 43
0 1 0 0
Contenido medio de Aflatoxinas = 31 g/kg (ppb)
Error Total Error de la toma de muestras
Error del >> submuestreo >
Error del anlisis
Lote
Muestra
Submuestra
Anlisis
Aflatoxinas x Resultado (g/kg)
Decisin Aceptacin / Rechazo
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TOMA DE MUESTRAS PARA EL CONTROL OFICIAL DE AFLATOXINAS FRUTOS SECOS

Ejemplo: CONTENEDOR DE 15 TONELADAS 100 muestras elementales de 200 g 2 submuestras de 10 kg Trituracin / homogenizacin 1 Submuestra Anlisis Anlisis Inicial Anlisis Dirimente Contradictorio 2 Submuestra Anlisis Anlisis Inicial Anlisis Dirimente Contradictorio = 20 kg
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EJEMPLOS DE TAMAOS DE DISTINTOS TIPOS DE BARCOS PARA EL TRANSPORTE DE GRANELES Clase PANAMAX : 60.000 - 65.000 Toneladas, en 7 - 9 bodegas Clase HANDY : 15.000 - 25.000 Toneladas, en 5 - 7 bodegas
Clase COASTER : 2.000 - 5.000 Toneladas, en 2 - 3 bodegas Tipo gabarra barcaza fluvial : 500 - 2.500 Toneladas, en 1 - 2 bodegas Una bodega puede tener tpicamente desde 2 hasta 10 12 metros de profundidad
Fuente : F. Verstraete (Reunin del Grupo de Trabajo de 8 de Enero de 2010)
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TOMA DE MUESTRAS PARA EL CONTROL OFICIAL DE AFLATOXINAS - CEREALES

Buque mercante con 50.000 Toneladas de grano en 10 bodegas de 5.000 Toneladas cada una 50.000 Toneladas 100 Sublotes de 500 Tn 100 muestras de 10 kg, cada una 300 submuestras de 3,3 kg aprox. cada una
Anlisis Inicial
Anlisis Anlisis Contradictorio Dirimente
Total: 100 anlisis iniciales !!!
Reglamento (EU) n 178 / 2010

MTODO DE MUESTREO DE CACAHUETES Y OTRA SEMILLAS OLEAGINOSAS, HUESOS DE ALBARICOQUE Y FRUTOS SECOS ARBREOS
Muestras elementales (100) SubSubmuestras Muestra PreDivisin de muestras Homoge- Homogeneiza- Muestras global mezclado la muestra de 10 kg neizacin das de 10 kg idnticas 20 kg global cada una cada una
Muestra para A. inicial Muestra para A. contradictorio Muestras para A. dirimente
Muestra para A. inicial Muestra para A. contradictorio Muestras para A. dirimente
Lugar del muestreo Laboratorio

Basado en el documento SANCO-0064-2003-rev.3
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Reglamento (EU) n 178 / 2010

MTODO DE MUESTREO DE CACAHUETES Y OTRA SEMILLAS OLEAGINOSAS, HUESOS DE ALBARICOQUE Y FRUTOS SECOS ARBREOS
Muestras elementales (3 x 100) Muestra PreDivisin de Submuestras Submuestras global mezclado la muestra de 10 kg homogeneizadas Muestras 3 x 20 kg global cada una de 10 kg cada una idnticas Muestras para A.inicial
Muestras para A.inicial Muestra para A.contradictorio
Muestra para A.contradictorio Muestra para A.dirimente
Muestra para A.dirimente
Lugar del muestreo Laboratorio
MUESTRA
Analisis Inicial
20 kg
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Submuestras molidas de almendras ( 2 X 10 Kg. )
Submuestras analticas ( 2 X 25 g. )
CACAHUETES SIN CSCARA ADICIONADOS CON AFLATOXINAS (Nivel : 2 ppb de AF B1)

MOLIENDA EN SECO vs MOLIENDA y MEZCLADO EN HMEDO REPRODUCIBILIDAD INTERNA AF B1 : 7,4 % ! 0,8 % AF B2 : 5,9 % ! 2,3 % AF G1 : 16,1 % ! 3,2 % AF G2 : 17,2 % ! 3,8 %
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RAPID ALERT SYSTEM FOR FOOD AND FEED (RASFF) Notificaciones sobre Micotoxinas en la UE desde 2002 a 2011
Micotoxina Aflatoxinas DON Fumonisinas Ocratoxina A Patulina ZON 14 15 26 14 27 2 42 6 15 54 7 1 6 2002 288 2003 762 2004 839 2005 946 2006 801 2007 705 10 9 30 2008 902 4 2 20 3 2 2009 638 3 1 27 2010 649 2 3 34 2011 584 11 4 35
RAPID ALERT SYSTEM FOR FOOD AND FEED (RASFF) SISTEMA RPIDO DE ALERTAS EN ALIMENTOS Y PIENSOS
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Mtodos analticos disponibles en el Centro Nacional de Alimentacin

Aflatoxinas Procedimiento Normalizado de Trabajo para la Categora de Ensayos: Determinacin de Aflatoxinas B1, B2, G1 y G2 en alimentos por cromatografa lquida con derivatizacin postcolumna con bromo o yodo y deteccin fluorimtrica ! Mtodo A. Extraccin en fase slida ! Mtodo B. Cromatografa de inmunoafinidad
Procedimiento analtico Laboratorio TOXINAS
Mezcla / homogeneizacin
Pesar alicuota
adicin de disolvente: Metanol/H2O
Extraccin
Filtrar a travs de filtro de 0,20 m (25 l HPLC) Elucin con Metanol / H2O centrifugacin Purificacin por columna de Inmunoafinidad (IAC) o extraccin en fase slida (SP)
HPLC con deteccin por fluorescencia
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!"#$%&'()*'")!+#&,'(%!-(( +./(0(/!"/.1("'2*!()*!"!.+&/(%!( /3-/#'4&./"(!.()&5!.#6.
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ESTUDIO DE PROSPECCIN de AFLATOXINAS EN PIMENTN

CNA - Laboratorio de Toxinas y HAPs
OBJETIVOS DEL ESTUDIO:

!!Proporcionar informacin sobre la situacin actual en el mercado nacional tanto en pimentn con denominacin de origen, como en pimentn sin denominacin de origen. Establecer la frecuencia y niveles de contaminacin. !!Comparar los resultados obtenidos en el mercado nacional con muestras de pimentn adquiridas en el comercio minorista de Hungra y Francia.

Total de muestras analizadas: 84

Adquiridas en comercio nacional
Con D.O Sin D.O
Adquiridas en Budapest
Adquiridas en Francia
15 11
(pimentn dulce: 6; pimentn picante: 5)
11
(todas pimentn dulce)
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(pimentn dulce: 26; pimentn picante : 21) (pimentn dulce: 8; pimentn picante: 6; sin determinar: 1)
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Nmero de MARCAS representadas en las muestras adquiridas:

Adquiridas en comercio nacional
Con D.O Sin D.O
Adquiridas en Budapest
Adquiridas en Francia
21

Perodo de adquisicin de las muestras: Noviembre 2010 Septiembre 2011 Perodo de anlisis de las muestras: Octubre 2011 Noviembre 2011
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Todas las muestras del mercado nacional se adquirieron en el comercio minorista, fundamentalmente aunque no exclusivamente, en la C.A. de Madrid, estando siempre dentro del plazo de la fecha de caducidad de consumo preferente. Todas las muestras menos dos, correspondieron a envases comerciales cuyos pesos netos oscilaron entre 31 gramos y 250 gramos.

Mtodo analtico:
DATOS TCNICOS DEL MTODO ANALTICO Tcnica HPLC FL con purificacin por columnas de inmunoafinidad AF: B1, B2, G1 Y G2 AF TOTALES: AFB1+AFB2+AFG1+AFG2 AFB1:0,41 g/kg (0,085 g/kg) AFB2:0,29 g/kg (0,040 g/kg) AFG1:0,49 g/kg (0,100 g/kg) AFG2:0,32 g/kg (0,071 g/kg) AFB1:4,5%-7,2% (92,1%-99,7%) AFB2:4,5%-8,6% (95,5%-104,1%) AFG1:0,6%-5,3% (96,9%-115,7%) AFG2:1,1%-9,6% (78,5%-105,2) AFB1: 10,5%16,5 AFB2: 9,4%19,8% AFG1: 1,3%11,3% AFG2: 2,3%20,8% Unidad de Toxinas y HAP (rea Qumica)
Analito Lmite de cuantificacin (y lmite de deteccin)
Reproducibilidad interna (y recuperaciones)
Incertidumbre expandida
Unidad analtica del CNA
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Cromatograma de una muestra de pimentn dulce contaminada naturalmente con 2,34 g/kg y 0,23 g/kg de Aflatoxina B1 y B2, respectivamente.

RESUMEN RESULTADOS:
!! Un 3,4% de las muestras del mercado nacional superan el contenido mximo en vigor en la UE para AFB1 (2 de las 58 muestras). Se trataba de muestras sin D.O (2 de 47 muestras sin D.O o el 4,3%). !! Los contenidos mximos detectados en las muestras adquiridas en el mercado nacional fueron los siguientes: AF B1: 12,20 g/kg. AF B2: 0,95 g/kg AFG1: 1,42 g/kg AG G2: No se detecta en ninguna muestra.
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RESUMEN RESULTADOS: !! En 40 de las 58 muestras (69 %) del mercado nacional, se cuantific la presencia de Af B1, y en otras 13 muestras (14,9 %) se detect su presencia. O sea, en 53 de las 58 muestras haba Aflatoxina B1 (91,4 %) !! En 36 de las 47 muestras (76,6 %) sin D.O., se cuantific la presencia de Af B1 y en otras 7 muestras (14,9 %) se detect su presencia. O sea, en 43 de las 47 muestras haba Aflatoxina B1 (91,5 %) !! En 4 de las 11 muestras (36,4 %) con D.O., se cuantific la presencia de Af B1 y en otras 6 muestras (54,5 %) se detect su presencia. O sea, en 10 de las 11 muestras haba Aflatoxina B1 (90,9 %)

RESUMEN RESULTADOS: !! Ninguna de las muestras adquiridas en Hungra o Francia superaron los contenidos mximos en vigor en la UE. !! Ninguna de las muestras adquiridas en Hungra superaba el lmite de cuantificacin para ninguna de las 4 Aflatoxinas. En 12 muestras (80 %) ni siquiera se detect la presencia de AF B1 por encima del lmite de deteccin. !! En 8 de las 11 muestras adquiridas en Francia, se cuantific la presencia de AF B1 aunque a niveles inferiores al contenido mximo permitido (< 5 ug/kg) => 72,7 %.
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Muchas gracias por su atencin
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Alcaloides del Ergot

Claviceps purpurea (Cornezuelo del centeno)

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Aflatoxinas B1, B2, G1, G2

Aspergillus flavus, Aspergillus parasiticus, Aspergillus australis

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Caractersticas Generales - III: Ingestas mximas tolerables

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NIVELES MXIMOS B1 (g/ kg) 2 8 8 5 2 5 5 0,10 0,10 B1+B2+G1+G2 (g/kg) 4 15 10 10 4 10 10 -

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NIVELES MXIMOS B1 (g/kg) 20 1 5

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NIVELES MXIMOS M1 (g/kg) 0,05 Leche.

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