Centro Universitrio Nossa Senhora do Patrocnio Faculdade de Sade e Cincias da Vida

BIOMEDICINA

Jssica Galina Arajo de Oliveira, 12 Isabelle Matheus Mendes, 10 Professora Sheila Menegatti

RELATRIO DE AULAS PRTICAS BANCO DE SANGUE

ITU 2013

OBJETIVO

Aprender como realizado tipagem sangunea (ABO/Rh);

INTRODUO

O exame de tipagem sangunea serve para determinar o tipo de sangue, com relao ao Sistema ABO e Fator Rh. Ele consiste na determinao da presena ou no de protenas da membrana da hemcia, com base em reao antgeno/anticorpo. O Sistema ABO possui quatro fentipos mais comuns: A, B, AB e O, alm de subgrupos de A e B. O Sistema Rh composto por 49 antgenos, sendo o antgeno D o mais imunognico. Os antgenos do Sistema Rh so especficos das clulas vermelhas do sangue e comeam a se desenvolver na 8 a 12 semana de gestao. O mais imunognico destes antgenos o D, que pode se apresentar de vrias formas: D normal, D fraco e D Parcial. A tcnica utilizada foi a Tcnica em tubo.

RELATRIO

Tipagem Direta ou Fenotipagem Direta Pesquisa-se o Antgeno presente na membrana do eritrcito, utilizando soros comerciais: Anti-A, Anti-B e Anti-D. Tipagem ou Fenotipagem Reversa Pesquisa-se o Anticorpo presente no soro/plasma utilizando hemcias comerciais: Antgeno A, Antgeno B e Antgeno D. No se realiza em recm-nascido. inversa Tipagem Direta. Imunoglobulinas (Anticorpos): Anti A, Anti B, Anti AB e Anti D. Dentre as imunoglobulinas existem 5 classes: IgG, IgM, IgA, IgE e IgD. Sendo de maior importncia clnica em imunohematologia, IgG e IgM, porque esto em maior concentrao nos grupos ABO/Rh. IgG: molcula nica atravessa barreira placentria. IgM: pentmero reage melhor em temperatura at 25C (Anticorpo frio). Uma preocupao em imunohematologia pelo poder reacional dele, e porque ele ativa a cascata do complemento (composto por protenas da membrana plasmtica e solveis no sangue e participam das defesas inatas e adquiridas. Essas protenas reagem entre elas para opsonizar os patgenos e induzir uma srie de respostas inflamatrias que auxiliam no combate infeco.). Protenas: C1, C2, C3, C4 e C5, marcam a clula portadora do Antgeno ou corpo estanho, para ser destruda. O IgM, est presente, por exemplo, no Anti A; numa gestao pode causar uma Doena Hemoltica do Recm-Nascido por ABO (que mais preventora por Rh) e no mais por Rh

Mtodos e Materiais: 01 tubo marcar nmero e pipetar 50 a 100 L de sangue total homogeneizado (1 ou 2 gotas), completar o tubo com soluo fisiolgica e centrifugar por 5 minutos 3.000 RPM repetir este procedimento 3 vezes. Em sangue de recm nascido, geralmente coletado sangue do cordo umbilical, portanto deve-se realizar o processo de lavagem por 8 vezes, pois a intenso deixar apenas o anticorpo eritrocitrio, sem que hajam interferentes. Em trs novos tubos colocar uma gota:

ANTI A

ANTI B

Anti A: Universalmente azul Anti B: Universalmente amarelo Anti D: incolor E preferencialmente, colocar esse soro comercial (anticorpo) antes de colocar a amostra. Aps as lavagens, preparar uma suspenso de hemcias, que fique aproximadamente entre 3 a 5%. Suspenso de hemcias: Aproximadamente 50 a 100 L de sangue lavado, mais 19 gotas de soro fisiolgico. Para, ento colocar uma gota dessa suspenso nos tubos com Antgenos, se passar dessa quantidade de 50 a 100 L, tero mais hemcias para pouco anticorpo, podendo, ento, ocorrer a liberao de um falso resultado, devido a essa

ANTI D

alta concentrao, por isso, no se deve realizar esse processo em lmina que utiliza sangue puro (sem lavagem), com todos os antgenos, o que pode camuflar o processo de aglutinao. In vivo: Sangue do tipo A, possui antgeno A e anticorpo B; Sangue do tipo B, possui antgeno B e anticorpo A In vitro: Anti A comercial aglutina amostra antgeno A Anti B comercial aglutina amostra antgeno B Pesquisa de DU ( D fraco) caso tivesse dado negativo: Colocar tubo de D em banho-maria 37C durante 15 minutos, ocorre, ento, uma amplitude trmica. Verificar se no existe reao antgeno/anticorpo que no ocorreu porque estava em temperatura ambiente. Caso no tenha ocorrido, centrifugar 15 segundos em rotao alta e verificar se ocorre a positividade ou no. Se aps esse processo de amplitude trmica e centrifugao positivar, como soltar esse resultado? Rh D negativo, Rh D positivo aps amplitude trmica. Se mesmo aps essa amplitude trmica continuar negativo, deve-se lavar com soluo fisiolgica como na primeira etapa e aps a ltima lavagem, colocar 2 gotas de soro de coombs.

Antgenos Hemcias Zona de represso Ac comerciais

A hemcia, atravs de uma fora inica, ela repele esse anticorpo, porm para o anticorpo vencer essa zona, coloca-se o soro de coombs, que neutraliza essa zona de potencial zeta (anula e aproxima o anticorpo ao antgeno). Nesse caso s se enxerga a reao (D fraco) aps fase de coombs. Como liberar esse resultado? Rh negativo, DU positivo aps fase de coombs. Como verificar na primeira fase se positivo ou negativo? Positivo: aps centrifugao formar um boto ao fundo do tubo, e ao deitar ligeiramente o tubo, este boto no de desmanchar. Negativo: aps centrifugao formar um boto ao fundo do tubo, e ao deitar ligeiramente o tubo, este boto se desfar, formando um cordo.

1. CONSIDERAES FINAIS

Pode haver resultado inconclusivo? Sim, isto pode ocorrer em pacientes politransfundidos. O Rh D Fraco apresenta menor quantidade de stios antignicos, levando a uma fraca reatividade ou baixa expresso do antgeno D. Isto pode ser interpretado erroneamente como Rh Negativo. Os reagentes utilizados nesta tcnica no so to sensveis para fentipos Rh D Fraco, uma vez que 85% da populao caucasiana Rh Positivo. Sendo assim, para os casos de Rh Negativo, exige-se uma tcnica auxiliar para confirmao deste resultado com reagente mais sensvel. O que pode interferir no bom resultado da Tipagem Sanguinea? Alguns fatores podem interferir no bom resultado, por exemplo: - Erro na informao da data de nascimento: h diferenas entre a tcnica aplicada para Tipagem sangunea de crianas e de adultos. A principal delas a determinao da Prova Reversa, pois os antgenos ABO esto presentes a partir da 5 a 6 semana de vida intra-uterina e embora ao nascimento expressem um menor nmero de stios antignicos, estes s alcanaro expresso plena ao redor dos 2 a 4 anos de vida. Os idosos tambm podem apresentar baixa expresso. - Pacientes submetidos a transplante de Medula ssea. - No confirmao de um Rh Negativo. - Pacientes com teste de COOD DIRETO Positivo. - Gelia de Wharton, no caso de recm-nascidos.

2. REFERNCIAS

1. www.anvisa.gov.br 2. www.filantropia.org/sangue.htm 3. www.colsan.com.br 4. www.drauziovarella.com.br