Laboratorio de Qumica Orgnica

Microbiologa y Bioanlisis, Grupo H1

Informe 04

Extraccin lquido-lquido de la cafena a partir del cloroformo y agua

Jhon Alexander Suescn Seplveda y Andrea Carolina Gutirrez Sarmiento*
Fecha 1 Marzo 2013
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En el presente informe, esta contenido el reporte de la prctica realizada acerca de la extraccin lquidolquido de la cafena; la cual se realiz mediante la diferencia de solubilidades del cloroformo, como disolvente orgnico que contena la muestra problema y el agua. Adems, se pudo comprobar que el incremento del nmero de extracciones a un mismo volumen, es un mtodo til para aumentar la eficacia del proceso.

Introduccin
La extraccin, es una de las tcnicas ms utilizadas en el laboratorio de qumica como mtodo para separar un compuesto orgnico de una mezcla o de sus fuentes naturales.1 Para llevarla acabo correctamente, se debe seleccionar un buen disolvente, pues de las caractersticas del mismo depender el xito del proceso. a) b) Que no sea miscible con el otro disolvente. Que el componente deseado sea soluble en el disolvente de extraccin y las impurezas en el otro disolvente. c) Debe ser suficientemente voltil para separarlo del compuesto extrado. d) No debe reaccionar con las sustancias extradas o con el otro solvente.2 Por otro lado, para aumentar la eficacia de la separacin, debe extraerse la capa acuosa varias veces, puesto que el soluto de inters puede tener solubilidad en ambas fases y debe utilizarse un agente deshidratante como MgSO4, NaSO4, CaCl2, etc.; que asegure la eliminacin del agua en la fase orgnica. Adems, si durante el proceso se forman emulsiones, deben eliminarse adicionando y agitando una solucin saturada de NaCl. 3 La relacin de solubilidad se designa como coeficiente de distribucin Kd, el cual es una constante de equilibrio que posee un valor caracterstico para cada componente y par de solventes a una temperatura determinada est dado por: Kd= C1/ C2 = S1/ S2 Donde C1 y C2 corresponde a las concentraciones del compuesto de inters en los solventes inmiscibles 1 y 2. 4 Los diferentes tipos de extraccin del ADN como: el salting out, la cromatografa de intercambio inico, el mtodo del fenolcloroformo, entre otros. Son procedimientos ampliamente utilizados e imprescindibles para la Microbiologa, pues a partir de la extraccin de un ADN genmico y la reaccin en cadena de la polimerasa o PCR, tcnica utilizada para amplificar in vitro
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secuencias de ADN y obtener millones de copias a partir de unas pocas iniciales. Se puede hacer clonaciones de un ADN genmico, caracterizacin de muestras forenses, deteccin de agentes infecciosos, diagnostico prenatal de enfermedades, anlisis estructural de genes y ARN, 5 etc.; aplicaciones de vital importancia para la comunidad en general por sus beneficios para la salud. Los diferentes mtodos de extraccin del ADN, guardan relacin a los procedimientos convencionales de la tcnica, pues el fundamento de la separacin es la diferencia de solubilidades de la molcula que se quiere separar (ADN) y los dems compuestos que la acompaan (lpidos, protenas y carbohidratos). Teniendo en cuenta lo anterior, como estudiantes de Microbiologa y Bioanlisis, es de gran utilidad conocer los fundamentos y caractersticas de la extraccin; para en el mbito propio de la profesin poder llevar a cabo este procedimiento de manera correcta y confiable.

Metodologa
Se pesaron cinco bolsas de t y se pusieron a hervir por 15 minutos en un vaso de precipitado con 100 mL de agua. Posteriormente se agreg gota a gota acetato de plomo al 10%, hasta que precipitaron todos los taninos, comprobndose mediante carbonato de calcio en polvo. Luego se filtr la mezcla en caliente con embudo Buchner conectado a una bomba de vaco. Al filtrado obtenido se le hizo reduccin de volumen a 50 mL, por calentamiento y se dej enfriar a temperatura ambiente. Seguidamente, se extrajo la solucin en embudo de decantacin, utilizando el cloroformo como disolvente orgnico, que contena la cafena. En total se realizaron tres extracciones y en cada extraccin se usaron 10 mL del disolvente de extraccin. Para finalizar, se reunieron todas las fases que contenan la cafena y se sec el agua con sulfato de magnesio anhidro, se elimin el cloroformo mediante ebullicin quedando la cafena en la capsula.

Informe 04| 1

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Microbiologa y Bioanlisis, Grupo H1

Informe 04
M= 0.027 mol = 0,54 M de S2 0,05L

Discusin de Resultados
Teniendo en cuenta, la informacin suministrada por la literatura, la cantidad de cafena presente en una taza de t es de 25-75 mg; 3 experimentalmente se obtuvieron 40 mg, en aproximadamente media taza (100 mL). El asegurar la eficacia de la extraccin resultara presuroso, porque, dicha cantidad corresponda a cafena cruda, es decir sin purificar. De manera que, no se sabe que cantidad exacta corresponda a cafena y que cantidad a impurezas. Adems se sabe que la cantidad de cafena por bolsa de t vara segn la empresa y no ser la misma en cada bolsa.

Kd= C1/ C2 = S1/ S2 = 0,18M/ 0,54M = 0.33

Conclusin
No se logr cumplir con todos los objetivos propuestos al inicio de la prctica, pues no se realiz sublimacin, para purificar la cafena cruda. Sin embargo, el objetivo principal si se llev a cabo, el cual era realizar una extraccin lquido-lquido de una muestra de cafena, presente en 5 bolsas de t negro, mediante la diferencia de solubilidad del cloroformo y el agua. Adems, se comprob que el incremento del nmero de extracciones es un mtodo til para aumentar la eficacia del proceso. Por ltimo, se conoci el modo de proceder ante la aparicin de emulsiones y la identificacin de los agentes desecantes adecuados.

El cido oxlico se disuelve 9,5 gramos en 100mL de agua, 16,9 g en 100mL de ter, 23,7 g en 100mL de etanol y 0,2 g en 100mL de hexano. cul disolvente recomienda usar para la extraccin del cido oxlico? El solvente ideal para la extraccin del cido oxlico es el ter, ya que presenta una baja solubilidad en agua y es altamente voltil.7

Referencias
1 CASAMITJANA, N.; CAUBET, A.; LLOR, N.; MUOZ, D.; GARCIA, A.; ROSELL, G. y VELASCO, D. Operaciones bsicas en el laboratorio de qumica, Universidad de Barcelona, Barcelona, Espaa, s.f., pg.32-38 BAUTISTA, G. Laboratorio de qumica orgnica I, Universidad Industrial de Santander, Bucaramanga, Colombia, 1994, pg. 29-38 LOZANO, L. Laboratorio de qumica orgnica I, Universidad Industrial de Santander, Bucaramanga, Colombia, 1993, pg.24-28 CORREA, Y.; MOSQUERA, O. y NIO, J. Manual de prcticas de laboratorio de qumica orgnica I, 1 Ed, Universidad Tecnolgica de Pereira, Pereira, Colombia, 2008, pg. 23 ZAVALA, J. Manual de Tcnicas Bsicas de Biologa Molecular, Universidad Autnoma de Yucatn, Yucatn, Mxico, 2005, pg.117 PASTO, D. y JOHNSON, C. Determinacin de estructuras orgnicas, Reverte, Barcelona, Espaa, 1981, pg.16 MONCALEANO, H. Qumica orgnica fundamental, Universidad Industrial de Santander, Bucaramanga, Colombia, 1986, pg. 115

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Preguntas
Diga dos criterios que deben ser usados para hacer efectiva la sublimacin como una tcnica de purificacin Hay que tapar la capsula con un vidrio de reloj, enfriado con hielo y la temperatura de la muestra debe mantenerse por debajo de su temperatura de fusin.6 La cafena cruda aislada del t tiene color pardo verdoso, explique por qu? El color pardo verdoso en la cafena cruda se debe a la presencia de clorofila.3 Cuando una solucin que contiene 4 gramos de cido butrico en 100mL de agua se extrae en 50mL de benceno a 15C, 2,4 gramos del cido se transfieren al benceno. cul es la constante de reparto para el cido butrico en benceno/agua a 15C? C4H8O2= 88.11g/mol 1,6g * (1 mol/ 88.11 g) = 0.018 mol C4H8O2 en agua 2,4 g* (1mol/ 88.11g) = 0.027 mol C4H8O2 en benceno
M= 0.018mol = 0.18 M en S1 0,1L 5 6 7

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