9/27/2012

Electroforese

Digesto e Electroforese de DNA

Separao de componentes de uma mistura. Protenas ou cidos nucleicos DNA ou RNA

Migrao dependente da carga elctrica da molcula.

Arne Tiselius

Polinucletido Cadeia simples de DNA

Cientista sueco ganhou o prmio Nobel da Qumica em 1948. Foi assistente de Svedberg e desenvolveu o mtodo da electroforese para separao de protenas em suspenso a partir da sua carga elctrica

Carga global negativa

9/27/2012

Electroforese Procedimento experimental

Electroforese Global

Em Gel de Agarose Toma partido da carga global negativa das molculas de DNA

A visualizao do DNA corado com brometo de etdeo corante fluorescente - s possvel com luz UltraVioleta
Visualizao do DNA

Visualizao de DNA

Visualizao do DNA
W R T W R T W R T

Separa molculas de DNA de diferentes tamanhos

9/27/2012

DNA do Fago Lambda

Enzimas de restrio

Corte cego Deixando extremidades adesivas

ou

Figure 8-31 Molecular Biology of the Cell ( Garland Science 2008)

Corte frequente ou raro

Enzyme Recognition sequence Type of ends End sequences
________________________________________________________________________________ 5 -AGCT-3 3' -TCGA-5 5-GATC-3' 3' -CTAG-5' 5' -GANTC-3' 3' -CTNAG-5' 5' -GGATCC-3' 3' -CCTAGG-5' 5' -CCGCTC-3' 3' -GGCGAG-5' 5' -GAATTC-3' 3' -CTTAAG-5' 5' -CTGCAG-3' 3' -GACGTC-5' 5' -GCGGCCGC-3' 3' -CGCCGGCG-5' 5' -GCCNNNNNGGC-3' 3' -CGGNNNNNCCG-5' 5 -AG CT-3' 3' -TC GA-5 5' - GATC-3' 3' -CTAG -5' 5' -G ANTC-3' 3' -CTNA G-5' 5' -G GATCC-3' 3' -CCTAG G-5' 5' - NNNCCGCTC-3' 3' - NNNGGCGAG-5' 5' -G AATTC-3' 3' -CTTAA G-5' 5' -CTGCA G-3' 3' -G ACGTC-5' 5' -GC GGCCGC-3' 3' -CGCCGG CG-5' 5' -GCCNNNN NGGC-3' 3' -CGGN NNNNCCG-5' AluI Sau3AI HinfI BamHI BsrBI EcoRI PstI NotI BglI Blunt Sticky, 5 overhang Sticky, 5' overhang Sticky, 5' overhang Blunt Sticky, 5' overhang Sticky, 3' overhang Sticky, 5' overhang Sticky, 3' overhang

Molculas hbridas

DNAs de diferentes origens cortados pelas mesmas enzimas podem dar origem a molculas hbridas

________________________________________ N = any nucleotide. Note that most, but not all, recognition sequences have inverted symmetry: when read in the 5' 3 direction, the sequence is the same in both strands. Biologia 2009 5aula _____________________________________

Figure 8-32 Molecular Biology of the Cell ( Garland Science 2008)