UNIVERSIDAD DE CORDOBA FACULTAD CIENCIAS DE LA SALUD PROGRAMA BACTERIOLOGIA V SEMESTRE- 2013-01 DOCENTE: AGUSTINA NOBLE GONZLEZ GUIA DE LABORATORIO

RECUENTO MANUAL Y DIFERENCIAL DE LEUCOCITOS INTRODUCCION La evaluacin de los glbulos blancos considera el conteo total de leucocitos, y la cuenta diferencial de cada uno de ellos. La medicin del nmero total de leucocitos se realiza en cmara de Neubauer; para el estudio de la morfologa utilizamos el extendido de sangre perif rica coloreado, el cual suministra informacin importante, no slo en los procesos !ematolgicos sino tambi n en general para detectar y seguir la evolucin de enfermedades infecciosas y cuadros linfoproliferativos y mieloproliferativos. Neces !"! " #es$%&e#: "ealizar recuento manual de #lbulos blancos y leucocitos en extendidos de sangre perif rica. O'(e)$ !e es)*! $: "ecuento manual de leucocitos y su diferencial. O'(e) &$ +e,e#"% -e!*c") &$.: $alorar la importancia del recuento manual de leucocitos para la deteccin y tratamiento de ciertas !emopatas. O'(e) &$ ,s)#*c) &$: %ontar leucocitos en cmara de Neuba&er 'ominar el procedimiento y los clculos necesarios para realizar el recuento manual de leucocitos. (plicar control de calidad a la coloracin de )rig!t S s)e/" !e 0"' % !"!es: (plicar las normas de bioseguridad dentro del laboratorio de !ematologa 'iferenciar morfolgicamente los leucocitos. *reparar la dilucin correcta para el recuento manual de leucocitos. S s)e/" !e "c) )*!es 1 &"%$#es: +l estudiante debe tener disponibilidad para el traba,o, comportarse de forma adecuada dentro del laboratorio y activa al momento de participar en la prctica. 'ebe ser respetuoso tanto con sus compa-eros como con el docente. .tilizar un vocabulario adecuado al momento de expresarse en el laboratorio. /ane,ar en secreto profesional los resultados obtenidos durante la prctica de laboratorio. 0er responsable, preparar el pre y post laboratorio de la gua y traba,ar de acuerdo a la metodologa establecida. recuento diferencial de

METODOLOGIA: M")e# "%es 1 #e"c) &$s 0angre venosa anticoagulada con +'1( %mara de Neubauer con cubreob,etos *ipeta para recuento de glbulos blancos, micro pipetas /icroaspirador Laminilla de cuarzo /icroscopio (gitador el ctrico (cido (c tico al 2 3 o 0olucin de 14r5 FUNDAMENTO: +l recuento de leucocitos es uno de los m todos de rutina. La condicin previa de todos los m todos de recuento es la dilucin y preparacin programadas de una muestra de sangre entera. +l cido ac tico contenido en la solucin de 14r5 !emoliza los eritrocitos pero no los leucocitos ni los eritrocitos nucleados. 0e cuenta el tipo de c lula deseado en un volumen definido y se calcula el nmero de c lulas en un microlitro de sangre. La dilucin estndar para el conteo de leucocitos es de 1:20 y puede prepararse con pipetas automticas siempre conservando la proporcin de la dilucin METODO PARA AUTOMATICAS: RECUENTO DE GLOBULOS BLANCOS CON PIPETA

12 /ezcle cuidadosamente la sangre anticoagulada durante un minuto aproximadamente, con el fin de obtener una mezcla !omog nea 22 "ealice la dilucin 1:20, para un volumen final de 6778L 32 Llene la cmara, su,etando la pipeta con delicadeza, controlando el flu,o de l9uido; la punta de la pipeta se sita en el borde del cubreob,etos, en cada uno de los extremos de la cmara y se llena la plataforma correspondiente. No debe !aber burbu,as y los surcos adyacentes no deben contener l9uido. 32 'e,en reposar 2 minutos para obtener la !emlisis total, y las c lulas se distribuyan. P#$ce! / e,)$ c$, 4 4e)" !e #ec*e,)$ !e '%",c$s: /ezcle suavemente la sangre, por inversin, para lograr la !omogenizacin de la muestra Llene la pipeta con la muestra de sangre !asta la marca 025 e6"c)"/e,)e, !aga uso del microaspirador Limpie las paredes externas de la pipeta para 9ue no contamine el l9uido diluente (spire el :cido (c tico !asta la marca 117 e6"c)"/e,)e 0u,ete la pipeta entre los dedos pulgar e ndice, desprenda el micropipeteador y agita la pipeta en forma !orizontal, durante 2 minutos, para obtener la !emlisis total de las c lulas ro,as o ll vela al agitador el ctrico. +n esta practica utilizaremos pipeta automtica para realizar la dilucin ;<=7

Los recuentos se realizan en donde se encuentran las letras L.

PROCED IMIENTO PARA LLENAR LA C8MARA DE NEUBAUER : %olo9ue la laminilla de cuarzo sobre la cmara y verifi9ue su limpieza mediante observacin microscpica %on el dedo ndice tapa el extremo superior de la pipeta y col9uela en forma vertical 'escarte las cuatro primeras gotas de la dilucin para eliminar el contenido del capilar 9ue no contiene leucocitos .se el dedo ndice para controlar la gota 9ue sale de la pipeta, con la cual va a llenar los retculos de la cmara. %olo9ue la cmara sobre al platina del microscopio y espere aproximadamente un minuto para iniciar el conteo .se el ob,etivo de ba,o poder ;7> para observar la distribucin de las c lulas en la cmara y a,ustar la intensidad de luz de manera 9ue visualice me,or las c lulas blancas. %uente todos los leucocitos contenidos en los cuatro cuadrados grandes de las es9uinas, siguiendo las mismas instrucciones 9ue para el recuentote glbulos ro,os

CALCULOS: +l recuento de leucocitos por milmetro cbico se calcula teniendo en cuenta< +l volumen del rea contada< 7.?mm2 @;x;x7.;x?A Nmero de c lulas contadas 'ilucin empleada< ;<=7 LeucocitosB mm2 C Nmero de c lulas contadas @DA x ; x dilucion EEEEEEEEEEEEEEEEEEEEEEEEEEEEEEEEEEEEEEEEEEEEE volumen de rea contada

LeucocitosB mm2 C

D x ; x =7 EEEEEEEEE 7.? Dx 67

LeucocitosB mm2 C

CAUSAS DE ERROR: ;. "ecoleccin de la sangre en condiciones de cianosis. 0i se practica la puncin venosa, evitar la compresin exagerada y prolongada. =. *ipetas mal calibradas. 2. 'ilucin agitada insuficiente. ?. %arga de la cmara con la primera gota de la pipeta. 6. 'istribucin desigual de la cmara. F. Gncorrecto a,uste del cubreob,etos H. %uenta defectuosa de los elementos celulares. OBSERVACIONES: %uando el paciente presenta leucopenia con una cifra igual o menor a =.677B mm2, la muestra de sangre debe aspirarse !asta la marca ; para obtener una dilucin de ;<;7 @el factor de multiplicacin es de =6A. %iertas situaciones como Leucemia, el recuento de leucocitos puede ser extremadamente alto, por lo cual empleamos la pipeta de glbulos ro,os !asta la marca ; @;<;77A o !asta la marca 7.6 @;<=77A. Los factores de multiplicacin sern =67, y 677 respectivamente. ( mayor nmero de c lulas contadas menor ser el error estadstico. La diferencia entre el valor mayor y el menor en los cuatro cuadrados, no debe exceder ;7 c lulas. +n algunas entidades !ematolgicas, la presencia de eritroblastos circulantes aumenta el recuento de leucocitos ya 9ue son c lulas nucleadas, y el cido ac tico no las destruye. *or esto se !ace necesario corregir el recuento inicial con la siguiente formula. Rec*e,)$ c$##e+ !$ !e +%9'*%$s '%",c$s : "ecuento inicial x ;77 ;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;; ;77 leucocitos I el nmero de eritroblastos encontrados en el recuento diferencial E(e/4%$< si el recuento inicial de leucocitos es de =6.777B mm 2, al realizar el recuento diferencial, en ;77 c lulas blancas encontramos =6 eritroblastos Rec*e,)$ c$##e+ !$ : =6.777 x ;77 < ;=6 : 202000 %e*c$c )$s< mm2,

VALORES DE REFERENCIA: *ara definir los valores de referencia del recuento de leucocitos deben tenerse en cuanta las siguientes variables fisiolgicas< +dad< (l nacer el nmero de leucocitos debe oscilar entre J.7 y 27.7 x ;7JBL; disminuye progresivamente y alcanza en la adultez un valor de ?.6K;; x ;7 JBL. +n el anciano el promedio de leucocitos es de 6.L x ;7JBL 'esviacin de las condiciones bsales como estr s fsico y estr s emocional, la cual llevan a una leucocitosis a expensas del compartimiento marginal +mbarazo< +n el embarazo se observa una leucocitosis de !asta ;L.7 x ;7 JBL ; aparece a partir del tercer mes, aumenta progresivamente !asta el momento del parto y empieza a normalizarse a partir del segundo da post parto "aza< 0e !a encontrado 9ue los individuos de raza negra presentan ligera leucopenia. $alores de referencia del nmero de leucocitos< A's$%*)$ ?.6KK;;.7 x ;7J BL =.2KK F.6 x ;7J BL 7KK7.6 x ;7J BL 7.76KK7.6 x ;7J BL 7KK7.; x ;7J BL ;.6KK?.7 x ;7J BL 7.;KK7.L x ;7J BL P$#ce,)"(e ?6KF6 3 7K6 3 ;K6 3 7.; 3 27K?7 3 2KL3

#lbulos Dlancos Neutrfilos Danda Neutrfila +osinfilos Dasfilos Linfocitos monocitos

RECUENTO DIFERENCIAL DE LEUCOCITOS O FORMULA LEUCOCITARIA F*,!"/e,)$: +n los extendidos de sangre coloreada con )rig!t, las c lulas blancas obtienen patrones morfolgicos caractersticos reconocibles microscpicamente, lo cual permite identificar cada uno de los leucocitos presentes en sangre perif rica. (l mismo tiempo, tiempo se realiza un estudio de la morfologa de los eritrocitos, los leucocitos y las pla9uetas, a la vez 9ue se realiza un estimativo burdo de su recuento. M")e# "%es: +xtendido de sangre perif rica en laminas nuevas y coloreado con )rig!t (ceite de inmersin /icroscopio.

P#$ce! / e,)$: %olo9ue la lmina sobre la platina del microscopio +xamine el extendido de sangre utilizando el ob,etivo ;7>, con el propsito de identificar el rea ideal para observacin< el rea del cuerpo del frotis, donde las c lulas se tocan pero no se sobreponen. %olo9ue una gota de aceite de inmersin y cuidadosamente cambie al ob,etivo de ;77, identifi9ue cuando menos ;77 leucocitos consecutivos en el frotis te-ido con )rig!t, observe la morfologa de las c lulas blancas y reporte estos valores en porciento. +l recorrido debe !acerse de manera vertical, para no omitir las c lulas de los mrgenes y para no salirse del rea ideal para el recuento. #radualmente mueva la lmina como se muestra en la = +*#" 1, desde el borde superior externo del extendido !asta el borde inferior externo, contando y clasificando los leucocitos en los campos sucesivos. %ontinu en esta forma !asta 9ue cuente en nmero re9uerido de c lulas. +l registro se !ace en papel o tabuladores mecnicos. /ientras cuenta las c lulas blancas, tome nota de cual9uier anormalidad morfolgica presente en ellas. Mbse?ve la morfologa eritroide. (note cual9uier variacin de lo normal y proceda a semicuantificar para realizar el informe y la morfologa y nmero de pla9uetas. .n extendido normal debe tener aproximadamente LK=7 pla9uetas por campo.

NG#."( ;< OBSERVACIONES: +l recuento diferencial y la revisin del extendido deben realizarse una vez !ec!as las mediciones cuantitativas del !emograma +l nmero de c lulas por contar viene dado por el recuento leucocitario< 100 para un recuento normal, 300 para un recuento entre =7.777 y 67.777 B mm 2 o =7K67 x ;7JBL y de 300-500 para recuentos superiores a 67.777 B mm2 7 67 x ;7JBL. 0i se conocen por la frmula leucocitaria los porcenta,es relativos y se sabe el recuento leucocitario total, nada impide calcular los valores absolutos as< N>MERO ABSOLUTO DE CELULAS POR L: % de cada tipo de clula en el diferencial X recuento de leucocitos por L. +l informe en presencia de eritroblastos debe incluir< Nmero de eritroblastos por ;77 c lulas blancas %aracterizacin morfolgica Nmero de eritroblastos por mm2

%uando el recuento de c lulas blancas es menor de ;.777 es difcil encontrar c lulas en el extendido de sangre; en esta situacin el diferencial se realiza contando 67 c lulas, esto se anota claramente en el informe. VARIACIONES FISIOLOGICAS: La frmula diferencial vara con la edad. +l ni-o, en t rminos generales, posee mas linfocitos 9ue el adulto normal, y alrededor de los ;7 a-os comienza a estabilizarse en los valores normales del adulto; el anciano presenta un recuento de leucocitos entre 2.;77K L.677 por mm2 o 2.;y L.6 por ;7JBL +n el +mbarazo, y sobretodo en el ltimo trimestre, !ay un aumento de polimorfonucleares neutrfilos y linfocitos. VARIACIONES PATOLOGICAS: Ne*)#$= % ": Gncremento absoluto en el nmero de neutrfilos; se presenta en apendicitis, infecciones bacterianas, Leucemia /ieloide %rnica. E$s ,$= % "< Gncremento absoluto en el nmero de +osinfilos; reacciones al rgicas, fiebre escarlata, infecciones parasitarias, Leucemia +osinoflica. L ,=$c )$s s< Gncremento absoluto en el nmero de linocitos; infecciones virales, tos ferina, mononucleosis infecciosa, Leucemia Linfoctica %rnica. M$,$c )$s s< Gncremento absoluto en el nmero de monocitos; tuberculosis, Leucemia monoctica, infecciones por "ic5etsia. PRELABORATORIO: 12 Gdentificar en un +0* las siguientes c lulas blancas< *olimorfo nuclear neutrfilo, polimorfo nuclear eosinofilos, polimorfo nuclear basfilos, linfocitos y monocitos. 22 %ules son los anticoagulantes ms usados en !ematologa y cul es su accin en la sangre. POST-LABORATORIO: 12 "esuelva el siguiente caso clnico< /u,er de F7 a-os de edad, fue admitida en la sala de urgencias, por presentar dolor torcico, cefalea u prurito; el m dico tratante orden biometra !emtica con los siguientes resultados< Hemoglobina< L grBdL Leucocitos: =6 x ;7JBL +n ;77 leucocitos se contaron 27 eritroblastos. D =e#e,c "%: Neutrfilos< ?L3 +osinfilos< 763 %ayados< ;7 Linfocitos< 263 Dasfilos< 7;3 /onocitos< 7 ;3 ?TO: =H3

;. "ealice la correccin de leucocitos

=. %alcule los valores absolutos de leucocitos

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