UNIVERSIDAD DE CORDOBA

FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD BACTERIOLOGIA LISY GRACIA HERRERA

(BACTERIOLOGO)

LEISY SAHORY MONTIEL MAYERLIS CARRASCAL DAISON CONTRERAS GISELLA PETRO MARIA JESUS ANICHIARICO

11/10/13

MARCO TEORICO

en los cultivos las bacterias crecen y pueden reproducirse dando como resultado la forma de colonias en medios solidos con esto se puede entonces obtener los mencionados anteriormente cultivos puros a partir de una clula bacteriana estos difieren segn su consistencia origen y el uso al cual se destinan En esta prctica podremos conocer a fondo los medios de cultivo interactuar con ellos y con las necesidades que posee cada uno su funcin y el tipo de bacterias con las cuales trabajan estos van de la mano con los mtodos de asepsia y de esterilizacin ya que para obtener cultivos con calidad se requiere un buen rendimiento durante la siembra aislamiento o creacin de un cultivo ya que la desinfeccin es fundamental al ser la ocasionante de la destruccin de microorganismo patgenos sobre personas , animales, ambiente, etc. adems de ser aquellos capaces de destruir las bacterias en un tiempo de 10 a 15 minuto otros de los mtodos utilizado para la aislacin o siembra de un cultivo es la esterilizacin la cual resulta ocasionar la destruccin de todas las formas de vida macro o microscpicas patgena o saprofita vegetativa o de resistencia esta est basada en mtodos fsicos y qumicos la eliminacin de la bacterias depende en gran parte a la temperatura por lo tanto es de carcter necesario resaltar la accin de calor seco y hmeda en conclusin existen factores externos e internos que interviene de forma inmediata en los procesos de medios de cultivo la meta es cumplir todas las normas adecuadas para as obtener una buena valoracin del cultivo la productividad de este y la seleccin adecuada

OBJETIVOS

Conocer los medios de cultivo y a partir de estos preparar algunos que sean de uso en el laboratorio de microbiologa

Poner en prctica los mtodos de asepsia en el trabajo realizado en el laboratorio de microbiologa

Conocer los tipos de detergentes y la utilidad que tiene cada cuanto al proceso de desinfeccin y asepsia en el laboratorio

uno en

Conocer los mtodos de asepsia en cuanto al trabajo en el laboratorio para obtener una buena calidad den los medios de cultivo

Discernir en los medios de cultivo a a partir de los tipos de cada uno y su funcin

 PRE- LABORATORIO

1. Establezca diferencias entre medios de cultivos selectivos y medios no selectivos

2. Mencione tres medios de cultivos selectivos

3. Explique brevemente la accin de calor hmedo y calor seco

4. defina cepa o clon y de ejemplos de la codificacin internacional para algunas bacterias de acuerdo al tipo de coleccin

5. Mencione al menos tres desinfectantes utilizados en el laboratorio de microbiologa

SOLUCION

1R/

CONCEPTOS PREVIOS Medios selectivos: han sido formulados para promover el desarrollo de un cierto tipo de bacterias, inhibiendo el resto. Ej.: Agar S-110 (para Staphylococcus) Agar SS (para Salmonella-Shigella)

Medios diferenciadores: Proporcionan caractersticas especiales para determinadas bacterias por el aspecto que las colonias adquieren al crecer en ellos. ej: EMB ENDO XLD y Mac Conkey

Diferencias Los medios selectivos utilizados durante el trabajo ordinario deben ir acompaados (microorganismo que se desea recuperar) y un control negativo ( microorganismo que se desea inhibir parcial o totalmente ) Los medios no selectivos deben ir acompaados de un control de medios de cultvo se requieren cultivos bacterianos en fases estacionaria de las cepas de referencia seleccionadas para efectuar el control de calidad de los medios seerologica de las especies que representan

 Diferencias segn su uso

medio general: medio en donde crecen todo tipo de microorganismos, excepto los que necesitan condiciones especiales (por ejemplo, agar CLED). medio selectivo: permite seleccionar el crecimiento de una especie o grupo determinado (hongos, bacterias entricas, protozoos...). medio diferencial: permite identificar una especie con otra, ambas en el mismo medio. Puede ser por su crecimiento, su metabolismo, su respiracin, etc medio de enriquecimiento: contiene los nutrientes necesarios para apoyar el crecimiento de una amplia variedad de microorganismos, se utiliza para la cosecha de diferentes tipos de microorganismos en un mismo medio. medio mnimo: contiene la mnima cantidad de nutrientes posible que permite el crecimiento de una especie;

medio de transporte: preparado para servir como almacenamiento temporal a especmenes transportados o en transferencia; mantienen su viabilidad y su concentracin;

2R Medios de cultivo selectivos: son medios utilizados para favorecer el crecimiento de ciertas bacterias contenidas en una poblacin poli microbiana. El fundamento de estos medios consiste en facilitar nutricionalmente el crecimiento de una poblacin microbiana especfica. Agar Mac Conkey Contiene sales biliares antibacterianas pero permiten el crecimiento de las Enterobacterias cuyo hbitat natural (el intestino) contiene tales sales antibacterianas.

Agar Mac Conkey

Selenito Caldo Medio que permite el enriquecimiento selectivo de Salmonella spp. a partir de muestras clnicas, especialmente heces y orinas.

selenito caldo con salmonella

En el medio de cultivo la peptona aporta los nutrientes necesarios para el adecuado desarrollo bacteriano, la lactosa es el hidrato

De carbono fermentable, el selenito de sodio inhibe la flora Gram Positiva y la mayora de la flora entrica excepto Salmonella spp. Durante las primeras 8-12 horas de incubacin

Agar Mitis Salivarius Es usado con la Solucin Telluriteel 1 % en el aislamiento Streptococcus mitis, S. salivarius y enterococci, en particular de especmenes extremamente contaminados.

S. mitis, S. salivarius y la especie Enterococcus hacen parte de la flora normal humana. S. mitis y S. salivarius se conocen como streptococcos viridans. Estos organismos desempean un papel en cariogenesis e infecciones endocarditis y causan un nmero creciente de bacteremias. Los Enterococcos causan infecciones de extensin urinarias, enrollan infecciones y bacteremia. Estos organismos pueden colonizar las membranas de la piel 3R / Calor hmedo: Tiene un mayor y ms rpido efecto sobre las bacterias, porque el agua es buen conductor, y el calor penetra mejor y se distribuye ms uniformemente. Este se aplica en forma de agua caliente o vapor de agua. Los microorganismos se destruyen por coagulacin y desnaturalizacin de las estructuras proteicas y enzimas. Procedimientos ms comunes:

El agua hirviente a 100c: aplicada durante 10 a 30 minutos, destruye todas las formas vegetativas de las bacterias.

En ocasiones no se puede aplicar este procedimiento a sustancias que se pueden alterar por las altas temperaturas y se recurre a tcnicas que en las que se usen temperaturas inferiores como: Pasteurizacin: aplica el calor 30 minutos a 63c, con lo que se consigue la destruccin de todas las formas vegetativas, excepto de las termfilas.

(Termfilas: tienen una temperatura ptima por encima de los 45c)

Stassanizacin: se aplica durante 15 segundos a 72c o 75c en capa fina.

Tindalizacin: consiste en someter el producto tres das sucesivos a un calentamiento entre 56c y 100c (por lo general a 65c) durante media hora, con lo que se destruyen las formas vegetativas.

En los intervalos a temperatura ambiente o a 37c, los esporos germinan y las bacterias resultantes de ellos se hacen sensibles al calentamiento posterior. Ollas a presin o autoclaves: Olla a presin: el vapor de agua se aplica en una cmara cerrada en la que se aplica una cmara cerrada en la que existe un generador de vapor, cuando este se produce desplaza aire, que sale por un orificio que se cierra en el momento en que ya sale el vapor. Posteriormente se consigue la presin deseada.

Autoclave: este requiere de unos indicadores, que compruebe que en el interior del recipiente se han dado las condiciones deseadas de temperatura y tiempo. Los principales fallos en la esterilizacin se deben al mal funcionamiento del equipo o a que el programa era inadecuado.

Calor seco: Los sistemas de aplicacin del calor seco para la destruccion de los microorganismos por una oxidacion de los constituyentes esenciales son tres: El flameado: es una practica que se usa en el laboratorio para la esterilizacion del asa de siembra antes de afectuar la siembra de un producto. Esta tecnica no se usa en superficies por que no se consiguen las temperaturas suficientes.

La incineracion: se usa en porductos es los que no importa su destruccion como: cadaveres de animales, ropa contaminada, apsitos, etc. Para esta tecnica se utiliza la combustion directa o el horno crematorio.

El calor seco por aire caliente: tiene un menor efecto sobre los microorganismos, por lo que necesita aplicarse durante mayor tiempo que el hmedo; se usa el horno de Pasteur o Poupinel, donde se logra la esterilizacin en una hora a 160c, 40 minutos a 170c 20 minutos a

180c

4R/

CEPA Cepa Bacteriana Es una poblacin de microorganismos que desciende de un nico microorganismo. Pureza gentica. Cepa tipo Serotipos . Presentan propiedades antignicas diferentes Biovares Son variantes de cepas bacterianas por diferencias bioqumicas y fisiolgicas Agrupaciones ERAM Las cepas se pueden agrupar segn sus caractersticas comunes: biovar o biotipo, que son aquellas cepas que tienen caractersticas bioqumicas y fisiolgicas especiales. morfovar o morfotipo, con morfologa especifica. serovar o serotipo, con caractersticas antignicas especficas . patovar o patotipo, con propiedades patgenas para ciertos hospedadores. fagovar o fagotipo, con especificidad para lisar ciertos bacterifagos

Categoras: Taxonoma

Existen sociedades cientficas, las colecciones de cultivos tipo, que almacenan una gran diversidad de microorganismos y que los difunden a peticin de los investigadores; en dichas colecciones, la atribucin taxonmica de cada clon est perfectamente asegurada hasta el nivel de cepa.

TAXONOMA Clasificacin Agrupamiento ordenado de unidades en grupo dentro de un grupo mayor basndose en sus relaciones. Grupos taxonmicos llamados actualmente dominios o imperios, reinos, tribu, clase, orden, familia, gnero o especie. Nomenclatura Nombre de unidades definidas por la clasificacin. Asignacin de nombres cientficos a las unidades descritas en un sistema de clasificacin admitido internacionalmente.

Sistemas de Clasificacin Sistema fentico Similitudes globales. Observacin de caractersticas fenotpicas o clsicas Morfolgicas, fisiolgicas, bioqumicas, estructurales, ecolgicas y genticas Sistema Filogentico Caractersticas moleculares Relaciones evolutivas de una especie. Se fundamenta en las relaciones genticas que tienen los microorganismos sobre la base de antepasados comunes. Se estudia el material gentico, (composicin del DNA, Hibridizacin del DNA y secuenciacin del los cidos nucleicos), y los productos gnicos como el RNA y las protenas . Clasificacin de los Prokariotes International Journal of Systematic Bacteriology Bergey Manual of determinative bacteriology. Manual de Bergey. 5 volmenes Categoras taxonmicas: Reino Phylum Clase Orden Familia Tribu Gnero Especie

Nomenclatura Bacteriana Sistema binomial de nomenclatura asignado por el gnero y la especie Los nombres de gneros y especies son derivados latinos o griegos que describen alguna propiedad del microorganismo Las reglas de nomenclatura se publican en The International Code of Nomenclature of Bacteria Cuando se quiere identificar y nombrar a un nuevo microroganismo se compara con cepas tipo (ATCC), American Type Culture Collection) El nuevo microorganismo debe publicarse en el International Journal of Systematic Bacteriology, (IJSB) 1Nomenclatura de los Microorganismos Ejemplo: Streptococcus pyogenes. S. pyogenes beta hemoltico del grupo A Cocos Gram positivos, agrupados en cadenas Cndida albicans Levadura, Gram positiva Trichomonas vaginalis. Parsito genital. Ascaris lumbricoides. Parsito intestinal Esquema taxonmico: Taxa, taxn Clase, orden, familia, gnero, especie, (categora bsica) Cepa. Pureza gentica Biovar (biotipo) Serovar (serotipo)

5R/ DESINFECTANTES DEL LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA

Clorhexidina Alcohol

Lavado quirrgico de las manos Desinfeccin preoperatoria de la piel en pacientes con bocio o alrgicos al yodo Desinfeccin del campo quirrgico (piel intacta) Desinfeccin del campo quirrgico (piel no intacta) Implante de catteres vasculares Desinfeccin de la piel para inyecciones intramusculares y extracciones de sangre Desinfeccin de heridas y quemaduras. Irrigaciones oculares Desinfeccin vaginal

Solucin jabonosa 4 % (w/v) Solucin alcohlica 0,5 % (w/v) Solucin alcohlica 0,5 % (w/v) Solucin acuosa 0,1 % al 0,5 % (w/v) Solucin alcohlica 0,5 % (w/v) Solucin acuosa 0,2 % (w/v) Crema al 1 %, solucin acuosa 0,2 % (w/v)

Etlico 70-76 (v/v)

Principio Activo Formaldehd o

DESINFECTANTES USADOS EN EL LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA Eficacia Compatibilidad Estabilidad Principales usos

Buen espectro concentraciones elevadas

Buena compatibilidad con materiales

Las soluciones acuosas polimerizan en fro

Fenol

Derivados Clorados

Poca actividad fngica. No se consideran virucidas ni esporocidas Buenos bactericidas y virucidas. Espectro de eficacia variable frente a micobacterias Buen espectro de eficacia contra

Buena compatibilidad con materiales.

Se consideran estables

Derivados Yodados

Fuertemente oxidante y corrosivo (corrosin de superficies por picado). Todos los metales son sensibles Buena compatibilidad con

Inestable a temperatura y luz

Normalmente empleado para desinfeccin area, siempre que haya un criterio de alerta epidemiolgica (construcciones, ruptura de las condiciones controladas habituales, etctera) Desinfectante eficiente de superficies. Desinfectante de eleccin para descontaminar reas donde se trabaje con micobacterias Desinfeccin de superficies

En forma de compuesto

Antisepsia (jabones, soluciones, etctera)

bacterias, hongos, virus y esporas a concentraciones elevadas. Efecto virucida controvertido Alcoholes (etanol, isopropanol, 1propanol)

materiales (pueden colorear)

resulta estable

No son agresivos con los materiales

Muy voltiles pero estables

Se usan en antisepsia de piel, desinfeccin de superficies, equipos no crticos e higiene de manos

APLICACIN DE MEDIDAS DE ASEPSIA, DE ESTERILIZACION Y PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVO

MATERIALES DE LABORATORIO

1. Cajas de Petri y tubos tapa rosca estriles. 2. Balanza. 3. Papel kraft. 4. Frasco tapa rosca por 250 ml. 5. Buretas. 6. Erlenmeyer. 7. Esptulas. 8. Asas bacteriolgicas calibradas a 10 microlitros. 9. Solucin desinfectante yodada. 10. Tubos con 9 ml de caldo lactosado. 11. Agar nutritivo en caja grande. 12. Medios de cultivo deshidratados. Agar SS; Agar XLD; Agar Manitol salado; Agar EMB; Agar base sangre; Agar plate count; Agar TSI; Agar LIA; Agar SIM. Caldo tetrationato; caldo rappaport vassileidiais; caldo lactosado. 13. Agua destilada. 14. Cinta termosensible. 15. Ampollas de geobacillus stearothermophilus. 16. Cepas en fase estacionaria de E.coli; S.aureus; Salmonella SP (En tubos de caldo BHI y en cajas de agar selectivo).

PROCEDIMIENTO.

A. Preparacin de medios de cultivo. 1. Lemos las instrucciones que se encuentran en la etiqueta adherida al recipiente que contiene el medio de cultivo a preparar. 2. Realizamos los clculos correspondientes para pesar los gramos que se requieren de acuerdo a la cantidad de ml requeridos, teniendo presente la proporcin para un litro que est en la etiqueta 13 g---------1000 ml X--------------> 200 ml X= 13g x 200ml 1000 ml = 26 10 = 2,6 g.

3. Despus de realizar los clculos necesarios, colocamos en un baln de vidrio los 2,6g de medio y adicionamos lentamente los 200 ml de agua destilada. 4. Calentamos hasta obtener una emulsin completamente transparente, agitndola constantemente para impedir que el medio se pegue en el fondo del recipiente. 5. Envasamos en 40 tubos de ensayo, cada uno contena 5 ml aproximadamente y por ltimo los marcamos con el nombre del medio (caldo lactosado), utilizando cinta termosensible. 6. Despus llevamos a la autoclave a 121 C durante 15 minutos. A 15 libras de presin.

B. Control de calidad de la esterilizacin de medios de cultivo.

2. Medios de cultivo lquidos

Productividad: Se seleccion un tubo con 10ml de caldo Rapappor

 Se inocularon cultivos deseados ( staphylococcuss aureus en cantidades de 10 UFC y 100 UFC) y cultivos de microorganismos no deseados ( E. coli en cantidades mayores a 1000 UFC) Se incubo a temperatura y tiempo requerido por los medios y la cepa deseada ( S . aureus ) Al finalizar el tiempo de incubacin se debe remover 10 microlitros del emdio de cultivo mixto Sembrar en caja de agar del medio selectivo especfico para microorganismos deseados Incubar a temperatura y tiempo requerido para el medio de cultivo y la cepa deseada Finalizado el tiempo de la incubacin observar las cajas en ls cuales halla crecimiento d ela cepa deseada La productividad del caldo evaluado ser satisfactoria si al menos 10 UFC del microorganismo S. aureus hayan crecido sobre la caja de agar selectivo

RESULTADO DE PRODUCTIVIDAD La productividad fue satisfactoria ya que si se encontr crecimiento del microrganismo S. aureus en el medio de cultivo y la cantidad suficiente para obtener un buen resultado de productividad

Selectividad: Se seleccion un tubo con 10ml de caldo Rappapor, se inoculo cultivos de microrganismos no deseados ( E. coli en cantidades mayores a UFC ) Se incubo a temperatura y tiempo requerido con los medios de cultivo evaluado Finalizado el tiempo de incubacin se removieron 10 microlitros y se sembraron en agar no selectivo Se incubo a temperatura y tiempo requerido por el medio de cultivo Terminada la incubacin se observ inhibicin de crecimiento en las cajas o EVALUACION DE SELECTIVIDAD

Resultado satisfactorio no hay crecimiento de las cepas (E. coli) en el agar no selectivo

Evaluacin del procedimiento de la desinfeccin de manos (medidas de asptica bsica) Se tom un hisopo estril y humedzcalo ene l tubo que contiene 10 ml de caldo lactosado estril Se realiz un frotis en la palma de la mano y entre los dedos a un compaero de grupo ( sin lavar las manos previamente Se deposita el hisopo en el mismo tubo rotule y se lleva a incubacin 37C por 24 horas Transcurrido el tiempo de incubacin se tom alcuota del tubo incubado y vierta este contenido en una caja de Petri estril Se adiciono de 10 a 15 ml de agar plate cont fundido Se homogenizo y se llev a incubacin a 37 C por 24 horas

BIBLIOGRAFIA PIEDROLA GIL, G, Y PIEDROLA-ANGULO, G. DESINFECCION Y ESTERILIZACION, METODOS Y TECNICAS. EN MEDICINA PREVENTIVA HIGIENE Y SANIDAD, 7 EDI. 351-381. ARMARO, MADRID 1983. RUSELL, A. D, HUGO, W. B, Y AYLIFFE, G A. J: PRINCIPLES AND PRACITCE OF DESINFECTION, PRESERVATION AND STERILISATION. BLACKWELL, OXFORD, 1982

LVAREZ, A.; RODRGUEZ, R.; MARN, A., Y CUETO, A.: MTODOS DE VALORACIN DE ANTISPTICOS Y DESINFECTANTES. I. MTODOS DE VALORACIN IN VITRO NO CUANTITATIVOS, TEST PRCTICOS Y TEST EN USO. LABORATORIO, 74, 529-545, 1983 HUGO. W. 8.: EL MECANISMO DE ACCIN DE LOS DESINFECTANTES. LABORATORIO, 78, 87-94. 1984. LOWBURY, E. J. L.; AYLIFFE. G. A. J.; GEDDES, A. M., Y WILLIAMS, J. D.: CONTROL OF HOSPITAL INFECTION: A PRACTICAL HANDBOOK. CHAPMAN & HALL, LONDON, 1975.