Tema XII: Vas metablicas y de transferencia de energa Catabolismo y anabolismo. Vas catablicas, anablicas y anfiblicas.

Ciclo de la energa en las clulas. Distribucin intercelular de las enzimas y sistemas enzimticos. El metabolismo Es definido brevemente, como la suma total de las reacciones enzimticas que tienen lugar en la clula. Cuatro son las funciones especficas del metabolismo: Obtener energa qumica del entorno de los elementos orgnicos nutritivos o de la luz solar Convertir los elementos nutritivos exgenos en los precursores de los componentes moleculares de las clulas. Reunir los precursores para formar protenas, cidos nucleicos, lpidos y otros componentes celulares. Formar y degradar aquellas biomolculas necesarias para las funciones celulares especializadas. Las secuencias reaccinales del metabolismo son semejantes en todas las formas de vida especialmente las que se conocen como rutas metablicas centrales. Catabolismo y anabolismo El metabolismo se divide en catabolismo y anabolismo: El catabolismo: Es lo degradacin enzimtica, mediante reacciones de oxidacin, de molculas nutritivas relativamente grandes (carbohidratos, lpidos y protenas) procedentes del entorno de la clula o de sus propios depsitos de reservas nutritivas, hasta transformarlas en molculas simples y menores, por ejemplo, cido lctico, cido actico, CO 2 , amonaco o urea. El catabolismo va acompaado de liberacin de energa libre, la cual se conserva en el ATP. El anabolismo: Es la sntesis enzimtica de componentes celulares relativamente grandes de la clula, ejemplo: polisacridos, cidos nucleicos, protenas, lpidos a partir de molculas precursoras sencillas. Puesto que los procesos sintticos provocan un aumento en el tamao y la complejidad de las estructuras, se necesita la energa proporcionada por el enlace fosfato del ATP. Tanto el catabolismo como el anabolismo son dos procesos simultneos e interdependientes, que pueden analizarse por separado. Cada uno de los procesos abarca la secuencia de reacciones enzimticas mediante las cuales se degrada o se sintetiza el esqueleto covalente de una determinada biomolcula. Los intermediarios qumicos de este proceso se denominan metabolitos, y este proceso metablico: metabolismo intermedio. Acompaando a cada una de las reacciones qumicas del metabolismo intermediario; tiene efecto un cambio de energa caracterstico. En algunas de las etapas de las secuencias catablicas puede conservarse la energa qumica, habitualmente en forma de energa del enlace fosfato y en ciertas etapas de las

secuencias anablicas puede utilizarse esa energa del enlace fosfato. Esta fase del metabolismo se denomina acoplamiento energtico. El metabolismo intermedio y el acoplamiento de energa estn obligatoriamente interconectados y son interdependientes. Por ello, cuando examinamos los esquemas metablicos deberemos analizar: 1. Las etapas de reaccin por las que la estructura covalente del precursor se altera para formar el producto. 2. Los cambios de energa qumica que acompaan a esta conversin. Transformaciones catablicas, anablicas y anfiblicas La degradacin enzimtica de cada uno de los principales elementos nutritivos (hidratos de carbono, lpidos y protenas) tiene lugar a travs de cierto nmero de reacciones enzimticas consecutivas que se desarrollan en tres fases: Fase I: En esta fase las grandes molculas de los elementos nutritivos se degradan hasta los principales componentes. Los polisacridos son degradados a pentosas o hexosas, los lpidos a cidos grasos, glicerina y otros componentes, y las protenas a sus veinte aminocidos constitutivos. Fase II: Los numerosos productos distintos de la Fase I son recogidos y convertidos en un nmero pequeo de molculas ms sencillas. As, las hexosas, las pentosas y la glicerina se degradan en el azcar fosforilado de tres tomos de carbono, el gliceraldehdo-3-fosfato y despus hasta un compuesto sencillo de dos tomos de carbono, la acetil-coenzima A. Los aminocidos diferentes son tambin degradados a: acetil-coenzima A, alfacetoglutarato, succinato, fumarato y oxalacetato. Fase III: Los productos formados en la fase II pasan a la fase III que es el camino comn final en el cual se oxidan a CO2. El anabolismo tiene lugar tambin en tres fases, comenzando por las pequeas molculas originadas en la tercera fase del catabolismo. Por ejemplo, la sntesis proteica comienza en La Fase III, a partir de los alfa-cetocidos que son los precursores de los aminocidos. En la Fase II los alfa-cetocidos son aminados por donadores de grupos aminos y se forman los alfa-aminocidos y en la Fase I se renen los aminocidos para producir cadenas peptdicas. Aunque los caminos del catabolismo y el anabolismo no son idnticos la Fase III constituye un camino central accesible a ambos. Esta senda central, que recibe el nombre de anfiblica, desempea una doble funcin (amphi: ambos). La ruta anfiblica puede utilizarse catablicamente para lograr la degradacin completa de pequeas molculas producidas en la Fase II del catabolismo o puede utilizarse anablicamente como precursora de molculas para la Fase II del anabolismo.

Lpidos Fase I cidos grasos glicerina

Polisacridos

Protenas

Hexosas Pentosas

Aminocidos

Gliceraldehdo 3-fosfato Fase II Fosfoenol piruvato Piruvato

Acetil - C o A

oxalacetato Fase III malato

citrato isocitrato

Fumarato Ciclo de los cidos tricarboxilos succinato CO 2

Alfa - cetoglutarato

LA ENERGA EN LA CLULA Las molculas orgnicas complejas, tales como la glucosa contienen mucha energa potencial a causa de su elevado grado de ordenacin estructural; poseen una entropa relativamente pequea. Cuando la molcula de glucosa se oxida y forma seis molculas de CO 2 y seis de H2 O , sus tomos experimentan un aumento en el desorden. Como resultado de esta transformacin, la molcula de glucosa experimenta una prdida de energa libre que es energa til y capaz de realizar trabajo. La energa libre se conserva, como energa qumica, especficamente como ATP. Dado que el ATP formado puede difundirse hacia aquellos lugares en la clula en que se necesite su energa, constituye una forma de transportar la energa. La energa qumica del ATP se libera despus, durante la transferencia de su grupo o grupos fosfatos terminales, a determinadas molculas de un aceptor especfico, que adquiere un nivel superior de energa y puede realizar trabajo. Un segundo camino para transportar la energa qumica de las reacciones de xido-reduccin del catabolismo a las reacciones anablicas, que necesita de energa, es en forma de electrones. En las sntesis de algunas biomolculas ricas en hidrgeno, tales como los cidos grasos y el colesterol, se requieren electrones e hidrgeno para la reduccin de los enlaces dobles a simples. En La clula los

electrones son transportados enzimticamente desde las oxidaciones productoras de electrones tales como los dobles enlaces carbono-carbono o carbono-oxgeno, mediante coenzimas transportadoras de electrones, la ms importante es la nicotinamida-adenindinucletido fosfato (NADP). El NADP desempea de este modo, el panel de transportador de electrones ricos en energa desde las reacciones catablicas hasta las reacciones anablicas que los necesitan. Distribucin intracelular de las enzimas y de los sistemas enzimticos Las diferentes enzimas y sistemas enzimticos se hallan localizados caractersticamente, en una u otra organela o estructura intracelular de las clulas. El sistema enzimtico glicoltico est localizado en el citoplasma mientras que las enzimas implicadas en la oxidacin del piruvato, de los cidos grasos y de algunos aminocidos estn en la mitocondria donde tambin se hallan las enzimas de la cadena respiratoria y de la fosforilacin del ADP. La ventaja de la compartimentacin la constituye el hecho de que separa reacciones qumicamente incompatibles. Por ejemplo, una clula puede realizar, a un mismo tiempo, la oxidacin de los cidos grasos de cadena larga hasta el estado de cido actico y el proceso inverso de reduccin del cido actico para formar cidos grasos de cadena larga. Estos procesos qumicamente incompatibles se producen en diferentes partes de la clula; la oxidacin en las mitocondrias y la reduccin en el citoplasma extramitocondrial. Regulacin celular de las sendas metablicas La velocidad del catabolismo de una clula no es controlada por la concentracin de los elementos nutritivos del entorno, sino ms bien por sus necesidades energticas en forma de ATP. La regulacin de una ruta metablica puede llevarse a cabo a varios niveles. El tipo de regulacin ms sencilla implica los parmetros que afectan a las velocidades de las reacciones enzimticas (pH, concentracin de enzima, concentracin de cada intermediario, concentracin de iones metlicos y coenzimas esenciales, etc.). El segundo mecanismo de regulacin consiste en la accin de enzimas reguladoras que se hallan localizadas, habitualmente, en el comienzo o en proximidades de una secuencia multienzimtica. El tercer nivel en que se ejerce la regulacin metablica es a travs del control gentico de la velocidad de la sntesis enzimtica. En organismos multicelulares superiores el control se ejerce a travs de sistemas endocrinos. Las hormonas elaboradas por una glndula endocrina son mensajeros qumicos que estimulan o inhiben actividades metablicas especficas en otros tejidos u rganos.

TEMA XIII: PRINCIPIOS DE BIOENERGETICA Y CICLO DEL ATP Localizacin y propiedades del ATP y del ADP. Variacin de energa libre estndar de las reacciones qumicas. Energa libre estndar de la hidrlisis del ATP. Compuesto con enlace fosfato de bajo y alto nivel energtico. Vas enzimticas de la transferencia de fosfato. Principio del intermediario comn. Otros ribonucletidos que participan en la transferencia de energa en la clula 5' difosfato y 5' trifosfato. Papel del AMP y del pirofosfato. El sistema ATP - ADP acta como transportador de energa qumica, ya que el ADP es capaz de aceptar un grupo fosfato en las reacciones acopladas productoras de energa del catabolismo, y el ATP as formado puede ceder su grupo fosfato terminal, en otras reacciones acopladas que requieren energa. En este captulo examinaremos los principios qumicos y termodinmicos en que se basa el funcionamiento del sistema ATP - ADP.

LOCALIZACION Y PROPIEDADES DEL ATP Y EL ADP

El ATP fue aislado por primera vez, en 1.929 por Fiske y Subbarow, de los extractos cidos de msculo. Su estructura se dedujo algunos aos despus, mediante experimentos de degradacin y fue definitivamente confirmada por sntesis qumica total realizada por Todd y sus colegas en 1948. Desde los inicios del descubrimiento, se sospech que el ATP desempeaba un papel en la transferencia de energa celular pero recin en 1939-1941 Lipmann propuso que actuaba como medio principal de transferencia de la energa qumica en la clula. El ATP, el ADP y el AMP no son sustancias que existen solo en trazas; la suma de sus concentraciones en la fase acuosa de los diversos tipos de clulas intactas oscila entre 2 y 15 mM. La concentracin de ATP es por lo comn, muy superior a la suma de las otras dos concentraciones del AMP, habitualmente es la menor de las tres. Estos nucletidos estn presentes no slo en el citoplasma, sino tambin en organelas tales como mitocondrias y ncleo. La compartimentacin intracelular del sistema ATP constituye una caracterstica importante en la regulacin celular del metabolismo. A pH 7,0 tanto ATP como ADP son aniones muy cargados, el ATP posee cuatro protones ionizables en su grupo de cido trifosfrico. Tres de los protones poseen valores de pK (K = constante de disociacin) bajo entre 2 y3; por lo tanto a pH 7,0 estn completamente disociados; el cuarto protn tiene un pK' de 6,5; por consiguiente a pH 7,0 se halla disociado en un 75%.

NH2 N N N OH 2 C O N ATP

O HO P OH O

O P OH O

O P OH H

H H

H : hidrgenos que cede en su disociacin OH OH

El ADP posee tres protones ionizables, dos de ellos estn completamente disociados a pH 7,0 y el tercero que posee un pK' de 7,2 a pH 7,0 se halla disociado alrededor del 39%. La elevada concentracin de cargas negativas en torno al grupo trifosfato del ATP constituye un factor importante en su naturaleza de compuesto de alto contenido energtico. En la clula intacta existen muy pocas cantidades de ATP y de ADP en forma de aniones libres, se hallan presentes en su mayor parte en forma de complejos Mg ATP y Mg ADP a causa de la gran afinidad de los grupos pirofosfato para enlazar cationes divalentes y de la elevada concentracin de in Mg en el fluido intracelular. La afinidad del ATP por el Mg es unas diez veces mayor que la del ADP.
mg O Adenina Ribosa O P O mg O Adenina Ribosa O P O O O P O O
-

O O P O O

O P O O
-

mg-ATP

mg-ADP

En muchas de las reacciones enzimticas en que participa el ATP como dador de fosfato, su forma activa es la del complejo mg-ATP. El ADP y el ATP pueden separarse y medirse con facilidad mediante electroforesis o por cromatografa en capa fina. PRINCIPIOS DE TERMODINAMICA QUIMICA Una descripcin de las bases fsico-qumicas de la funcin del ATP en el ciclo energtico de la clula, requiere un breve repaso de algunos principios de la termodinmica. El anlisis termodinmico de los intercambios energticos se inicia por las siguientes definiciones: a. Sistema: Es el conjunto de materia que es objeto de nuestro estudio.
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b. Entorno: Toda materia del universo, aparte del sistema que se considera. En el transcurso del proceso en estudio la energa puede pasar del sistema al entorno, o viceversa. c. Estado inicial: Es el contenido de energa del sistema y del entorno, al iniciar el proceso que se analiza. d. Estado final: Contenido de energa de sistema y entorno una vez que se ha alcanzado el equilibrio. El contenido de energa de cada estado es una funcin de diversas magnitudes medibles (temperatura, presin, volumen, masa, etc.) que se formulan mediante una ecuacin de estado. A partir de las medidas de los cambios de contenido de energa del sistema y el entorno, a medida que el sistema evoluciona desde su estado inicial hasta su estado final, puede realizarse un balance de energa.
(Bloques de cobre) caliente frio Estado inicial

Estado de equilibrio

La primera ley de termodinmica es el principio de conservacin de la energa. La energa no se crea ni se destruye, sino que se transforma en una u otra forma (ej. calorfica, qumica, mecnica, etc.). La segunda ley establece algunas limitaciones en los tipos de transformaciones energticas que ocurren en los procesos fsicos-qumicos, y predice la direccin en que es probable que ocurra un proceso determinado. Establece que todos los procesos tienden a evolucionar en una direccin tal que la entropa del sistema ms la del entorno, aumenta hasta alcanzar un estado de equilibrio. Entropa: Se define como el grado de desorden. Equilibrio: Se define como aquel estado en que no ocurre ningn cambio fsico o qumico ulterior, y en el que la temperatura, la presin y la concentracin son uniformes en todo el sistema. UN SISTEMA DE EQUILIBRIO 1. Ha agotado su capacidad de realizar trabajo sobre su entorno, 2. El proceso no puede invertirse de modo espontneo y volver a su estado inicial, lo cual requerir una disminucin de entropa. Un sistema desordenado al azar no se reordena por si mismo espontneamente. Los procesos que se realizan con aumento de entropa se denominan irreversibles. Los procesos que tienen lugar sin cambio de entropa son reversibles. Ejemplo: si tenemos bloques de piedra dispuestos al azar y queremos disponerlos de tal modo que formen un arco la entropa o sea el grado de organizacin disminuye y es reversible porque espontneamente sin cambio de entropa puede pasar del orden al

desorden (arco a bloques al azar).

entropa ( S) elevada (desorden) ( S) disminuye

reversible endotrmico

irreversible espontneo exotrmico

S disminuye (orden)

S aumenta

En reacciones qumicas los cambios de entropa ( S ) no siempre pueden medirse o calcularse con facilidad. Sin embargo, el cambio de entropa durante un proceso est relacionado cuantitativamente con los cambios de la energa total del sistema por una tercera funcin, llamada energa libre, mediante una ecuacin que combina la primera y la segunda ley de termodinmica. Puesto que los cambios de la energa libre de las reacciones qumicas pueden medirse con relativa facilidad, esta ecuacin resulta muy til para predecir la direccin y el equilibrio de las reacciones qumicas. El cambio de energa libre ( G ) cuando la temperatura y presin son constantes se define del siguiente modo:

H - T. S

(1)

En la que H es la variacin de entalpa, T la temperatura absoluta y S variacin de entropa. La variacin de entalpa ( H) que tambin se denomina cambio calorfico, se define mediante la ecuacin:

PV

(2)

E = variacin de le energa total del sistema. P = presin V = volumen

En los sistemas biolgicos las reacciones qumicas tienen lugar en disoluciones acuosas diluidas, en las que la temperatura, presin y volumen permanecen constantes. En estas condiciones, PV es cero, por lo tanto:

H
Si sustituimos en la ecuacin (1)

E
E - T. S

G
reordenamos la ecuacin:

G T. S
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Con esta ecuacin vemos que a temperatura y presin constantes la variacin de energa total del sistema ( E ) (que es equivalente al cambio calrico H) es la suma de T. . S ms la variacin de la energa libre. La variacin de energa libre puede definirse como aquella fraccin del cambio de energa total del sistema disponible para realizar trabajo a medida que el sistema evoluciona hacia su estado de equilibrio, a T y P constantes. Mientras el sistema se aproxima al equilibrio, la energa libre disminuye hasta un valor mnimo. VARIACION DE LA ENERGIA LIBRE ESTANDAR EN LAS REACCIONES QUIIMICAS El cambio de energa libre que tiene lugar durante las reacciones qumicas se calcula empleando una ecuacin que puede derivarse de la ley de equilibrio qumico. Para una reaccin general del tipo:
aA + bB cC + dD (3)

en la que a, b, c y d son el nmero de molculas de A, B, C, y D que participan en la reaccin. El cambio de energa libre ( G ) est dado por la ecuacin:

G RT ln

C .D A .B
a

d b

(4)

en la que los trminos A, B, C y D son las concentraciones molares de A, B, C, y D y a, b, c y d son ahora los exponentes de sus concentraciones. R es la constante de los gases (1.987 cal mol-1 grado-1); T la temperatura absoluta y G la variacin de energa libre estndar. Cuando la reaccin (3) se halla en equilibrio, independientemente de las concentraciones iniciales de A, B, C y D prevalece la condicin que la energa libre es mnima y no es posible ningn cambio ulterior; por tanto G 0 . Entonces:

0 G RT ln
De donde:

C .D A .B
G
a

d b

(5)
C .D A .B
a c d b

RT ln

(6)

Puesto que la constante de equilibrio K'eq para la ecuacin (3) es:

K' eq

C .D A .B
a

d b

(7 )

Podemos sustituir K'eq en la ecuacin (6) y obtener la ecuacin general:

G
O bien:

RT ln (K' eq) (8)

2.303 RT log10 (K' eq)

Esta ecuacin nos muestra que G , la variacin de energa libre estndar de una reaccin qumica, puede calcularse a partir de su constante de equilibrio. La G constituye, por lo tanto, una constante termodinmica para una reaccin qumica dada. Puede definirse de otro modo, que indica claramente su verdadero significado. La variacin de energa libre estndar de una reaccin constituye, en realidad, la diferencia existente entre la energa libre estndar de los reactivos y la energa libre estndar de los productos, hallndose cada trmino ajustado a la estequiometra de la ecuacin de reaccin:
G G productos G reaccionantes

Para la reaccin (3) ser:

G (c G C d G D ) (a G A b G B )
La energa libre estndar de un compuesto constituye la medida de la cantidad total de energa libre que puede proporcionar por descomposicin completa. Es importante comprender la diferencia que hay entre G , que es la variacin de energa libre estndar, y G que es la variacin de energa libre medida o real. Esta diferencia puede explicarse mejor utilizando una analoga. G es un valor constante para una determinada reaccin a una temperatura tambin determinada. Por otra parte, G vara con las concentraciones de los reaccionantes y de los productos. El valor de G nicamente es igual al de G cuando todos los reactivos y todos los productos estn presentes a concentracin 1,0M. El valor de G es el que determina si una reaccin qumica ocurrir en la direccin escrita, partiendo de unas concentraciones de reaccionantes determinadas. Recurdese que una reaccin qumica solamente ocurrir si G es negativo, es decir, si la energa libre del sistema disminuye. Las reacciones qumicas con un G negativo reciben el nombre de exergnicas; se realizan espontneamente en la direccin en que estn escritas. Si recordamos el ejemplo de los bloques:
ordenado

G disminuye, es negativo

exergnica o exotrmica espontnea irreversible

desordenado

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Las reacciones con un cambio de energa libre estndar positivo reciben el nombre de endergnicas o endotrmicas, no se realizan de modo espontneo en la direccin en que se escriben. Volviendo al ejemplo:
desordenado

G aumenta, es postivo

endergnica o endotrmica no es espontnea reversible

ordenado

Ahora podemos exponer un ejemplo de la G a partir de la siguiente reaccin:

glucosa_1_fosfato glucosa_6_fosfato

G
G

R T ln(K' eq)
1.987 x 298 x 2.303 log19 1745 cal 1.745 Kcal

Puesto que G es negativo, la conversin de glucosa-1-fosfato en glucosa-6-fosfato es exergnico. El anlisis qumico muestra que parte de una concentracin 0,020 M de glucosa-1-fosfato con un exceso de enzima y permitimos que la reaccin ocurra en sentido directo, o si partimos de la concentracin 0,020 M de glucosa-6-fosfato y la reaccin transcurre en sentido inverso, las concentraciones de la mezcla final en equilibrio son, en ambos casos, 0.001 M de glucosa-1-fosfato y 0,019 de glucosa -6fosfato a 25 C y pH 7,0. Hay dos tipos de reacciones que tienen lugar con disminuciones especialmente grandes de G , son la hidrlisis de los anhdridos y las reacciones de oxidacin. G de la hidrlisis del ATP El camino ms sencillo para determinar G para la reaccin:
ATP + H2O ADP + fosfato (10)

Es determinar la constante de equilibrio y calcular G empleando la relacin dada por la ecuacin (8):
G -2.303 R T log10 (K' eq)

La medida directa de la constante de equilibrio de la hidrlisis del ATP no es prctico. Una de las razones, y la ms importante, es que los mtodos analticos que se disponen no son lo suficientemente precisos o sensibles para determinar con exactitud las concentraciones de equilibrio de ATP, ADP y el in fosfato, porque en el estado de equilibrio el ATP se encuentra casi completamente hidrolizado en ADP y en in fosfato. En realidad, esto constituye un problema serio para muchas reacciones que poseen

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grandes valores negativos de G . Para poder medir el G de la hidrlisis del ATP, se descompone en cierto nmero de etapas menores, las cuales pueden medirse ms fcilmente. Veremos un ejemplo: en primer lugar, se deja reaccionar al ATP con la glucosa, en presencia de hexoquinasa para formar ADP y glucosa-6-fosfato. Se mide la constante de equilibrio, y a partir de ella se calcula G .
hexoquinasa ATP + glucosa ADP + glucosa_6_fosfato K'eq = 661 G = - 4.00 kcal (11)

Se contina despus con la medida de la K'eq y la G de la reaccin de hidrlisis de la glucosa-6- fosfato catalizada por una fosfatasa.
fosfatasa glucosa_6_fosfato + H2O glucosa + fosfato Pi K'eq = 171 G = - 3.30 kcal (12)

La suma de las reacciones (11) y (12) es la ecuacin de hidrlisis del ATP.

hexoquinasa ATP + glucosa fosfatasa glucosa_6_fosfato ATP + + H2O H2O glucosa ADP + + fosfato Pi fosfato ADP + glucosa_6_fosfato

Puesto que los valores de G de las dos reacciones son aditivas, la G de la hidrlisis del ATP puede calcularse a partir de ellos:
G G G - 4.00 (-3.30) - 7.30 kcal Es importante hacer notar que este valor est basado en que pH = 7,0; T = 37 C, en presencia de exceso de ion Mg y concentraciones 1,0 M de los reaccionantes y de los productos. El grupo fosfato terminal del ADP tambin posee una G de hidrlisis relativamente grande. Es igual a -7,30 kcal.
ADP + H2O AMP + Pi

G -7.3 kcal

Sin embargo el nico grupo fosfato del AMP tiene un valor mucho menor:

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AMP

H2O

adenosina

Pi

G -3.40 kcal

Lo que sucede es que los enlaces entre grupos fosfatos adyacentes son enlaces del tipo de anhdrido, mientras que el enlace entre el fosfato y la ribosa en el AMP es un enlace ster. COMPUESTOS CON ENLACES FOSFATO DE ALTO Y DE BAJO NIVEL ENERGTICO En la escala termodinmica de G , el ATP es el nico que posee un valor de G , intermedio. Daremos el G de algunos compuestos fosforilados.
G (kcal)

Fosfoenol piruvato

1-3 difosfoglicerato ... Fosfocreatina .. Acetil-fosfato .. Fosfoarginina .. ATP . ... ... ...

-14.80 - 11.80 - 10.30 -10,10 - 7.70 - 7.30 - 5.00 - 3.80 - 3.30 - 2.20

ATP

Glucosa-1- fosfato Fructosa-6-fosfato Glucosa-6-fosfato Gliceril-1-fosfato

ATP

O sea que la funcin del sistema ATP-ADP, consiste en servir como transportador obligatorio intermedio de grupos fosfato desde los compuestos con enlaces fosfato de elevado nivel energtico, situados por encima del ATP en la escala termodinmica, hasta las molculas aceptoras que forman compuestos con enlaces fosfato de bajo nivel energtico situados en la escala por debajo del ATP. COMPUESTOS FOSFATO DE ALTO NIVEL ENERGETICO Hay dos clases de compuestos fosforilados que poseen una G de hidrlisis ms negativa que la del ATP: 1. Los compuestos fosfato que se forman durante la ruptura enzimtica de molculas combustibles. 2. Los compuestos fosfato utilizados como almacenadores de la energa del enlace

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fosfato. Los dos miembros ms importantes de la primera clase son el 1-3 difosfoglicerato y el fosfoenol piruvato, los cuales se forman durante la fermentacin anaerobia de la glucosa (gluclisis).
1-3 difosfoglicerato ATP + + ADP H 2O 3 fosfoglicerato ADP + Pi + ATP

G -4.5 kcal G -7.3 kcal

Total -11.80 kcal

Los compuestos fosfato de elevado nivel energtico, que actan como reservorio de la energa de enlaces fosfato, reciben con frecuencia el nombre de fosfgenos. Los dos fosfgenos principales son la fosfocreatina hallada en muchos vertebrados, y la fosfoarginina, presente en muchos invertebrados. Ambos se forman a partir de la creatina y de la arginina por transferencia de grupos fosfato desde el ATP en reacciones catalizadas por la creatin-fosfoquinasa y la arginin-fosfoquinasa, respectivamente. Ambas reacciones son reversibles pero el equilibrio se halla desplazado hacia la formacin de ATP.
fosfocreatina + ADP creatina + ATP

COMPUESTOS FOSFATO DE BAJO NIVEL ENERGETICO La mayora de los compuestos fosfato pobres en energa son steres fosfricos de alcoholes. Se conocen muchas enzimas que catalizan la transferencia de grupos fosfato desde el ATP a aceptores de fosfato especficos, para formar compuestos fosfato pobres en energa; entre las enzimas mencionadas se hallan la glicero quinasa y la hexoquinasa, que catalizan la transferencia de fosfato desde el ATP a la glicerina y desde el ATP a la D-glucosa, respectivamente.
ATP ATP + + glicerina D-glucosa ADP ADP + + glicerol_3_fosfato D.glucosa_6_fosfato

G -4.5 kcal G -7.3 kcal

RUTAS ENZIMATICAS DE LA TRANSFERENCIA DE FOSFATO

Fosfoenol piruvato Dadores de P de alta energa P 1-3 difosfoglicerato P ATP Aceptores de P de baja energa P P Glucosa_6_fosfato Glicerol_3_fosfato P Reservorio de fosfocreatina

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La figura es un esquema de las reacciones enzimticas de transferencia de fosfato en la clula. Constituye un rasgo importante que el sistema ATP-ADP sea el nexo de unin obligado entre los compuestos fosfato de elevado y de bajo nivel energtico. Los grupos fosfato se transfieren, en primer lugar, mediante la accin de fosfotransferasas especficas, desde compuestos de alto nivel energtico al ADP, como en el ejemplo:
fosfoenol piruvato + ADP piruvato quinasa piruvato + ATP

El ATP as formado se transforma entonces en el dador de fosfato especfico de una segunda reaccin enzimtica, para formar compuestos fosfato de baja energa.
hexoquinasa ATP + D-glucosa ADP + D-glucosa_6_fosfato

La reaccin global es la siguiente:

fosfoenol piruvato + D-glucosa piruvato + D-glucosa_6_fosfato

El resultado final es la transferencia de un grupo fosfato desde un donador de energa elevado a un aceptor de bajo nivel energtico, a travs del sistema ATP-ADP, que acta como intermediario. El contenido de energa de la D-glucosa se ha elevado al fosforilarse, la glucosa-6-fosfato puede considerarse una forma de glucosa que ha recibido energa. En el flujo principal de reacciones transferidoras de energa de la clula, la transferencia del fosfato nunca se produce directamente desde un compuesto de elevado nivel energtico como el 1-3 difosfoglicerato a un aceptor de fosfato de bajo nivel energtico, como por ejemplo, la glicerina, no se han encontrado enzimas capaces de catalizar tales transferencias directas de fosfato. Esencialmente, todas las reacciones de transferencia de fosfato en la clula tienen que efectuarse a travs del sistema ATPADP. La figura tambin muestra el papel de reservorio desempeado por la fosfocreatina, que se forma por transferencia enzimtica directa de un grupo fosfato desde el ATP a la creatina; no existe ningn otro camino para su formacin. Adems, la nica ruta principal conocida para su desfoforilacin es la inversa de la reaccin por la que se forma. El sistema reservorio de la fosfocreatina es muy importante en el msculo esqueletal. Tambin se encuentra en el msculo liso y en las clulas nerviosas, y en pequeas cantidades en el hgado, rin y otros tejidos de mamferos.

PRINCIPIO DEL INTERMEDIARIO COMUN En dos reacciones consecutivas en que un producto de la primera es un sustrato de la segunda, como ocurre en las siguientes reacciones:
A D + + B E C F + + D G

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ambas reacciones estn ligadas por un intermediario comn, en este caso el componente D. El nico camino mediante el cual la energa qumica puede ser transferida desde una reaccin a otra en condiciones isotrmicas es el de que ambas reacciones posean un intermediario de reaccin comn. Casi todas las reacciones metablicas de la clula se realizan mediante secuencias de esta clase. En las reacciones consecutivas, responsables de la transferencia de energa a travs del ATP, la energa qumica se transfiere desde un dador fosfato de elevada energa hasta el ADP, y se conserva en forma de ATP como producto de reaccin. En la reaccin subsiguiente, el ATP se comporta como un sustrato, y cuando pierde su grupo fosfato terminal, que cede a la molcula del aceptor, sta ltima aumenta su contenido energtico. Por lo tanto, el ATP es el intermediario comn. En realidad, la transferencia de intermediarios comunes constituye un atributo general de las reacciones qumicas consecutivas y no necesita por fuerza, ni grupos fosfatos, ni ATP. En efecto, veremos que muchos grupos funcionales distintos del fosfato, por ejemplo, tomos de hidrgeno, grupos acetilo, se transfieren enzimticamente mediante reacciones consecutivas que poseen intermediarios comunes, tales reacciones pueden analizarse termodinmicamente por los mismos mtodos que se han desarrollado para el caso especial de las transferencias del grupo fosfato. CANALIZACION DE GRUPOS FOSFATO POR LA VIA DE OTROS NUCLEOSIDOS 5' TRIFOSFATO Aunque el sistema ATP-ADP constituye el transportador obligado de fosfato en el flujo principal de transferencia de energa en la clula, tambin participan en dichas transferencias los 5' di y trifosfatos de otros ribonuclesidos y los 2 desoxirribonuclesidos. Los 5' di y trifosfatos de diversos ribonuclesidos no solamente actan como precursores en la sntesis de ARN, sino tambin canalizan los grupos fosfato de alto contenido en energa hacia reacciones biosintticas especficas.
P ATP P UTP ATP GTP ATP P CTP ATP P P P CTP GTP UTP ATP P P P P d ATP d GTP d TTP d CTP ADN ARN Polisacridos

Protenas

Lpidos

16

Todas estas canalizaciones conectan con el ATP mediante la enzima nuclesidos difosfoquinasa presente en las mitocondrias y en el citoplasma de la clula, cataliza las reacciones del tipo mostrado en el esquema. Cada tipo de nuclesido trifosfato posee una funcin especializada. Por ejemplo: el UTP es el dador de fosfato inmediato, y por lo tanto el donador de energa de reacciones que conducen a la sntesis de polisacridos. PAPEL DEL AMP Y DEL PIROFOSFATO Aunque el ADP constituye el producto de muchas reacciones celulares que emplean el ATP, y el ADP es el aceptor directo del fosfato en las reacciones productoras de energa de la gliclisis y de la fosforilacin oxidativa de la mitocondria; en muchas de las reacciones que utilizan el ATP en la clula los dos grupos fosfato terminales de ste se separan conjuntamente en forma de pirofosfato y se libera AMP como producto.
ATP AMP + PPi

El pirofosfato inorgnico es un compuesto fosfato de nivel energtico elevado que posee un G de hidrlisis comparable al fosfato terminal del ATP. Para regenerar el ATP a partir de PPi y AMP intervienen dos enzimas auxiliares: la pirofosfatasa inorgnica y la adenilato-quinasa. La primera cataliza la hidrlisis del pirofosfato inorgnico (PP i).
PPi + H2O 2 Pi

Esta hidrlisis secundaria del pirofosfato constituye una etapa valiosa de liberacin de energa, la cual se utiliza para asegurar que ciertas reacciones biosintticas se realicen por completo. El Pi formado se utiliza para la regeneracin del ATP a partir de ADP. La adenilatoquinasa cataliza la refosforilacin del AMP a ADP.
ATP + AMP ADP + ADP

El ATP, el ADP y el AMP de la clula existen en concentraciones constantes.

17

TEMA XIV: GLUCOLISIS Vamos a considerar los mecanismos por los que las molculas combustibles se degradan y su energa se conserva en forma de energa de enlace fosfato ATP. Se estudiarn los procesos conocidos como fermentacin, mediante el cual muchos organismos extraen energa qumica de la glucosa y otros combustibles en ausencia de oxgeno molecular. Nos referimos primeramente el proceso de fermentacin para luego poder hablar de respiracin. FERMENTACION Y RESPIRACION Los organismos inferiores que viven en condiciones anaerobias (ciertas bacterias, invertebrados inferiores) obtienen su energa de la fermentacin de la glucosa. Los organismos que viven en condiciones aerobias (hongos, bacterias, mayora de los animales y plantas superiores) degradan sus combustibles por la ruta anaerobia pero despus oxidan los productos de la fermentacin utilizando el oxgeno molecular. En esta fermentacin el oxidante final o aceptor final es una molcula orgnica producida en el proceso fermentativo. En los organismos superiores la ruta anaerobia es una primera etapa de la fase aerobia de la respiracin.

Utilizacin de la glucosa por los organismos inferiores superiores: La ruta de la fermentacin es comn tanto en la utilizacin anaerobia de la glucosa como en la aerobia.
Anaerobios Aerobios

glucosa sin O2 fermentacin sin O2

glucosa fermentacin

productos de la fermentacin

productos de la fermentacin

con CO 2 CO2 + H2O

Entre las clases de fermentacin nombraremos la fermentacin homolctica y la alcohlica. La fermentacin homolctica: La molcula de glucosa de 6 tomos de carbono se degrada a dos molculas de cido lctico de tres tomos de carbono. Este

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proceso se denomina gluclisis que significa lisis de la glucosa. La fermentacin alcohlica: La molcula de glucosa de 6 tomos de carbono se degrada a dos molculas de etanol de 2 tomos de carbono y 2 de CO 2 .
1. Glucosa C C C C C C C C 2. Glucosa C C C C

triosas C C C C C C C C

triosas C C C C

cido lctico CH3 CH OH COOH

cido lctico CH3 CH OH COOH

etanol CH3 CH2 OH + CO 2

etanol CH3 CH2 OH + CO 2

En estas reacciones tenemos que hablar de las reacciones de xido reduccin que se producen en todo organismo donde el agente oxidante recibe los electrones y el agente reductor entrega electrones. En este caso de la fermentacin alcohlica el etanol es una molcula relativamente reducida rica en H 2 , pobre en O 2 . La molcula de CO 2 es relativamente oxidada, pobre en H 2 . En el caso de la fermentacin homolctica el grupo metilo se halla ms reducido que el grupo carbonilo. Veamos la reaccin completa:
1. Glucosa O C H HC OH HO C H + 2 Pi + 2 ADP 2 CH OH COOH + 2 ATP + 2 H2O CH3 cido lctico

HC OH HC OH CH2 OH

2. Glucosa + 2 Pi + 2 ADP

2 CH3 CH2 OH

2 CO2 + 2 ATP + 2 H2O

Etanol

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ANALIZAREMOS LA REACCION ENERGETICA DE LA GLUCOLISIS 1) La conversin de glucosa en lactato es exergnica y 2) la formacin de ATP a partir de ADP y de Pi es endergnica. Se deduce de estos datos que la transformacin de glucosa en lactato proporciona energa para producir la fosforilacin de 2 molculas de ADP a ATP. Esta reaccin es irreversible. Lo demuestra el G negativo.

ETAPA DE LA GLUCOLISIS: La gluclisis es catalizada por la accin de un grupo de 11 enzimas. Se cree que estn localizadas en la porcin soluble del citoplasma. Se pueden considerar dos etapas o fases. En la primera fase la glucosa se fosforila y se escinde pare formar gliceraldehdo 3 P; y en la segunda fase ste se convierte en cido lctico. LA FASE I: Constituye un proceso preparativo o de congregacin en el que cierto nmero de hexosas penetran en el esquema, despus de fosforilarse a expensas del ATP, y dan un producto comn, el gliceraldehdo 3 P. LA FASE II: Es la ruta comn para todos los azcares, se produce la fosforilacin del ADP y se llevan a cabo las reacciones de xido reduccin, obtenindose el lactato. En este proceso hay tres tipos de transformaciones interconectadas. 1.La ruta de los tomos de carbono : o sea degradacin de la glucosa para formar cido lctico. 2.La ruta del fosfato: o sea que el Pi (fsforo inorgnico) se transforma en P del ATP. 3.La ruta de los electrones: o sea las reacciones del xido-reduccin.

20

glucosa ATP

almidn glucogeno Pi glucosa-1-P

FASE I Congregacin de azcares sencillos y su conversin en fosfato de

ATP galactosa manosa pentosa ADP glucosa-6-P fructosa-6-P

gliceraldehdo; entrada de ATP

ADP fructosa-1-6-di P glicealdehdo-3-P (2) 2 NAD+ Pi 1,3 difosfoglicerato (2)

FASE II
2 ATP

2 ADP 3 difosfoglicerato (2) 2 difosfoglicerato (2) fosfoenolpiruvato (2) 2 ADP 2 ATP 2 NAD+ 2 lactato piruvato (2)

2 NADH

Oxidacin - reduccin y formacin acoplada de ATP; salida de lactato

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1. Fosforilacin de glucosa por el ATP: catalizada por dos enzimas: la hexoquinasa y glucoquinasa.
Mg++

ATP

glucosa

ADP

glucosa-6-P

4 kcal

Es una reaccin irreversible. La hexoquinasa es de mayor afinidad que la glucoquinasa por la glucosa. La glucoquinasa solo acta cuando hay alta concentracin de glucosa en sangre; las dos enzimas necesitan del catin Mg Mn para formar el verdadero sustrato que es Mg Mn ATP . La hexoquinasa acta tambin fosforilando otras hexosas. La reaccin es irreversible.
CH2 O H H OH OH H glucosa OH H OH H + ATP ADP + OH OH H OH H OH H H OPO 3= O H

CH2 OH

G -4 kcal

glucosa-6-fosfato

2. Conversin de glucosa-6-P fosfoglucoisomerasa.

CH2 H H OH OH H glucosa-6-P OH H OH OPO 3= O H

fructosa-6-P:

Catalizada

por

la

CH2

OPO 3= O CH2 OH H OH H OH OH

0.4 kcal

OH

(reaccin reversible)

fructosa-6-P

3. Fosforilacin de la fructosa-6-fosfato a fructosa 1-6 difosfato. Interviene una segunda molcula de ATP. Esta reaccin es catalizada por la fosfofructoquinasa.
CH2 OPO 3= O CH2 + OH OH H OH H OH OH H OH OH ATP ADP + OH H OH CH2 OPO 3= O CH2 OPO 3=

G -3.4 kcal
(reaccin irreversible)

22

4. Escisin de la fructosa 1 - 6 difosfato por una aldosa (la fructosa-1-6-difosfato gliceraldehdo 3-liasa) dando fosfato de dihidroxiacetona + gliceraldehdo-3fosfato.
1. 2.

CH2 C O

OPO 3= H 1. CH2 OPO 3= O + OH 4. C O

3. HO CH 2. C 4. H COH 3. CH2 5. H COH 6. CH2 OPO 3= fosfato de dihidroxiacetona 6. CH2 5. H COH

5.73 kcal

OPO 3=

fructosa 1-6-di P (cadena abierta)

gliceraldehdo 3-P

INTERCONVERSION DE LOS FOSFATOS DE TRIOSA Solamente uno de los dos fosfatos de triosa, el gliceraldehdo 3-fosfato, puede ser directamente degradado en las reacciones posteriores de la gluclisis. El otro, el fosfato de dihidroxiacetona, se convierte reversiblemente en gliceraldehdo-3-fosfato por accin de la enzima triosa fosfato isomerasa.
O CH2 OPO 3= C O C H

G 1.83 kcal
H C OH CH2 OPO 3=

CH2 OH

As en la primera fase una molcula de glucosa da dos molculas de gliceraldehdo 3 P. SEGUNDA FASE 1. Oxidacin del gliceraldehdo 3 P a 1-3 difosfoglicerato. La enzima que acta es G_3_fosfato deshidrogenasa, o gliceraldehdo 3 fosfato deshidrogenasa.

2 gliceraldehdo-3-P + 2 NAD+ + 2 Pi

(2) 1,3 di-fosfoglicerato + 2 NADH + 2 H+

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O C H C O + NAD+ + Pi HC 2 CH2 OH O
+ PO 3= + NADH + H

PO 3=

2 H COH

G 1.5 kcal

CH2 OPO 3=

El NAD+ y el NADH transportan los electrones. 2. Transferencia de fosfato desde el 1-3 difosfoglicerato al ADP. El 1-3 difosfoglicerato + ADP da 3-fosfoglicerato + 2 ATP; es catalizada la reaccin por la enzima fosfogliceratoquinasa.
O 1. C O 2. H COH 3. CH2 PO 3= + ADP OPO 3= 3. CH2 OPO 3= + ATP
-

2. H COH 1. COO

4.50 kcal

(reaccin irreversible)

3. Conversin del 3-fosfoglicerato dando 2-fosfoglicerato. Acta la fosfogliceratomutasa.

CH2 OPO 3= H COH COO
-

CH2 OH H COPO 3= COO

-

G 1.06 kcal

3-fosfoglicerato

2-fosfoglicerato

4. El 2-fosfoglicerato da fosfoenolpiruvato + H20 por medio de una enzima, la enolasa, en un proceso de deshidratacin.

24

CH2 OH enolasa H COPO 3= COO

-

CH2 C
-

PO 3=

+ H2O

0.44 kcal

COO

2-fosfoglicerato

fosfoenolpiruvato

5. Transferencia de fosfato desde el fosfoenolpiruvato al ADP. El fosfoenolpiruvato da piruvato por una enzima piruvato quinasa en presencia de ADP y Mg .

CH2 C
-

CH3

G
O PO 3= + ADP ATP + C O
-

7.5 kcal

(reaccin irreversible)

COO

COO

fosfoenolpiruvato

piruvato

6. Reduccin de piruvato a lactato . Piruvato da lactato por medio de lactato deshidrogenasa.

CH3 C O
-

CH3 + NADH + H+
+ H COH + NAD

6.0 kcal

COO

COO

piruvato

lactato

En condiciones anaerobias el lactato es producto final de la gluclisis el cual difunde a travs de la membrana plasmtica de la clula hacia el entorno como producto de desecho. Cuando las clulas musculares de los animales superiores actan de manera anaerobia durante cortos esfuerzos de actividad vigorosa (excepcionalmente) el lactato escapa desde las clulas musculares a la sangre y es transformado nuevamente en glucosa en el hgado.

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BALANCE GLOBAL
2 ADP glucosa + 2 ATP + 2 NAD+ + 2 Pi + 4 ADP + 2 NADH+ + 2 H+ + 2 ATP + 2 NADH + 4 ATP + 2 H2O + 2 H+ + 2NAD+ glucosa + 2 Pi + 2 ADP 2 lactato + 2 ATP + 2 H2O 2 lactato + 2 ADP +

ENTRADA DE LOS OTROS HIDRATOS DE CARBONO Los polisacridos de reserva el glucgeno, almidn, azcares sencillos distintos de la glucosa penetran en la primera fase de la gluclisis. El glucgeno y el almidn penetran por la accin de dos enzimas que actan sobre los extremos terminales no reductores de la molcula, escindiendo los enlaces alfa (1-4). Otra enzima acta sobre las ramificaciones alfa (1-6) dando glucosa-1-fosfato para luego dar glucosa-6-fosfato. Los azcares sencillos una vez fosforilados, por ej. : manosa-6-P, fructosa-6-P recin penetran al ciclo.
manosa + ATP fructosa + ATP manosa-6-P + ADP fructosa-6-P + ADP

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TEMA XV: CICLO DE LOS ACIDOS TRICARBOXILICOS Y VIA DEL FOSFOGLUCONATO Energtica de la fermentacin y respiracin. Plan de organizacin de la respiracin. Oxidacin del piruvato a acetil CoA. Ciclo de Krebs. Vas del fosfogluconato. Las clulas aerobias obtienen la mayor parte de su energa de la respiracin, esto es, gracias a una transferencia de electrones desde les molculas orgnicas combustibles hasta el oxigeno molecular. La respiracin es mucho ms compleja que la gliclisis. En este tema se esboza el plan general de le respiracin y despus se considera con detenimiento el ciclo del cido tricarboxlico de Krebs, que es la ruta catablica comn por la que finalmente se degradan todas las molculas combustibles de la clula (carbohidratos, cidos grasos y aminocidos). Tambin se describe la ruta del fosfogluconato de oxidacin de la glucosa, mecanismo que genera potencial de reduccin para las reacciones biosintticas.

ENERGETICA DE LA FERMENTACION Y LA RESPIRACION En la gliclisis se libera solamente una fraccin muy pequea de la energa qumica potencialmente asequible en la estructura de la molcula de glucosa. Se libera ms energa cuando sta se oxida completamente a CO 2 y H2 O como se pone de manifiesto al comparar las variaciones de energa libre estndar de la conversin anaerobia de la glucosa en lactato y de su oxidacin a CO 2 y H2 O .
glucosa glucosa + 6 O2 2 lactato

47 kcal G 686 kcal

6 CO2 + 6 H2O

Cuando las clulas fermentan a la glucosa anaerobiamente, los productos que ya no son susceptibles de ulterior empleo, y por ello abandonan la clula, todava contienen la mayor parte de la energa de la molcula de glucosa original. Por esta razn, las clulas que viven anaerobiamente, para obtener una misma cantidad de energa utilizable tienen que consumir mucho ms glucosa que cuando viven en condiciones aerobias. Por qu rinde la respiracin mucho ms energa que la gliclisis? En primer lugar, el producto de la gliclisis, el cido lctico, es una molcula casi tan compleja como la de glucosa y sus tomos de carbono todava se hallan en un mismo estado de oxidacin. El CO 2 , producto de la respiracin, es una molcula mucho ms sencilla y pequea que la glucosa, y su tomo de carbono est completamente oxidado. En segundo lugar, la cantidad de energa que se libera en la transferencia de un par de electrones desde una molcula combustible determinada a un aceptor electrnico, vara con la naturaleza del aceptor. Puede liberarse mucha ms energa cuando el aceptor electrnico el oxgeno molecular, como ocurre en la respiracin, que cuando es el piruvato el que acta como aceptor, que es el caso de la gliclisis.
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ORGANIGRAMA RESPIRATORIO En la figura se muestra un diagrama de la respiracin. lkk Los grupos acetilo procedentes de los carbohidratos, de los lpidos y de los aminocidos en la fase II del catabolismo, en la siguiente fase III se incorporan al ciclo de Krebs, que en las aerobias constituye la ruta comn final del catabolismo oxidativo de todas las molculas combustibles. En este ciclo los grupos acetilo se desintegran para formar CO 2 y tomos de hidrgeno. Estos ltimos (o sus electrones equivalentes) posteriormente se incorporan a la cadena respiratoria constituda por una serie de transportadores electrnicos. El proceso subsiguiente de transporte de electrones hasta el oxgeno molecular se realiza con un descenso muy grande de energa libre, gran parte de la cual se conserve en forma de ATP, gracias a la fosforilacin oxidativa acoplada del ATP. La reaccin global catalizada por el ciclo de Krebs es la siguiente:
CH3COOH + 2 H2O 2 CO2 + 8 H +

Como puede verse en la ecuacin, no participan en el ciclo ni el oxgeno molecular, ni el fosfato inorgnico, ni el ATP. Su funcin primaria consiste en la deshidrogenacin del cido actico para formar, en ltimo trmino, dos molculas de CO 2 y cuatro pares de tomos de hidrgeno. Este proceso es catalizado en una serie cclica de reacciones consecutivas, en contraste con la secuencia glicoltica, que es lineal. En cada vuelta del ciclo de Krebs se incorpora una molcula de cido actico (dos tomos de carbono) por condensacin con una molcula del compuesto de cuatro carbonos, el cido oxal actico, para formar el cido ctrico de seis tomos de carbono. Posteriormente, el cido ctrico se degrada con produccin de dos molculas de CO2 y cido succnico, compuesto de cuatro tomos de carbono. Finalmente, este ltimo se oxida a cido oxalactico, con lo que puede iniciarse de nuevo una vuelta del ciclo. En cada una de las vueltas se incorpora una molcula de cido actico y se eliminan dos molculas de CO 2 , en cada giro completo se emplea tambin una molcula de oxal acetato para formar citrato, pero aquel se regenera al final del ciclo. Por tanto, cuando el ciclo funciona no hay prdida neta de oxalacetato, basta con una molcula para llevar a cabo la oxidacin de un nmero infinito de molculas de acetato. Las reacciones enzimticas del ciclo de Krebs tienen lugar en el compartimiento interno de la mitocondria (a diferencia de la glucolisis que tiene lugar en el citoplasma celular).

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Carbohidrato Movilizacin del acetil CoA Aminoacidos Piruvato 2H CO2 cidos grasos

Acetil-CoA

oxalacetato

citrato cis-aconitato CO2 isocitrato

Ciclo del cido tricarboxilo

malato

fumarato

-oxoglutarato CO2 succinato

2H

2H

2H

2H

ADP + Pi

NAD flavoproteina

ATP

coenzima Q Transporte electrnico y fosforilacin oxidativa 2H

+

citocromo b ADP + Pi citocromo c citocromo a + a3 + ADP A Pi ATP ATP

2 H+ + 1/2 O2

H2O

29

Oxidacin del Piruvato a acetil CoA

O Piruvato NAD+ NADH2 CH3 C COOH

HS-CoA Acetil-CoA

CO2 CH3

O C S CoA + CO
2

La ecuacin global es:

Piruvato + NAD + + HSCoA

acetil-S-CoA+ NADH2 + CO 2

8.0 kcal

La oxidacin de piruvato a acetil-SCoA, catalizada por el sistema piruvatodeshidrogenasa, en realidad constituye un proceso muy complejo. A causa del gran descenso de energa libre estndar, la reaccin es esencialmente irreversible. Aunque en si misma no forma parte del ciclo del cido tricarboxlico, constituye una etapa obligatoria, mediante le cual los hidratos de carbono se incorporan al ciclo. En este proceso participan dos coenzimas importantes: CoA y cido lipoico. CoA: Acta como transportador de grupos acilo, efectuando una funcin anloga a la que desempea el ATP como transportador de grupos fosfato. La forma acetilada de la coenzima A (acetil CoA) es un tioster del cido actico. El tioster es un enlace de elevado contenido energtico, es decir, posee un G fuertemente negativo.
acetil-S-CoA + H2O acetato + CoA - SH

7.52 kcal

cido lipoico: es un factor de crecimiento para algunos microorganismos, un cido graso saturado de 8 tomos de carbono, en el que los carbonos 6 y 8 estn unidos por un grupo disulfuro formando un anillo de cinco trminos.
CH2 S CH2 S CH (CH 2)4
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COOH

La decarboxilacin oxidante del piruvato a acetil CoA CO2 necesita tres enzimas diferentes y 5 coenzimas que constituyen el:
enzimas Piruvato-deshidrogenasa dihidrolipoil-transacetilasa dihidrolipoil-deshidrogenasa

Sistema de la piruvato-deshidrogenasa coenzimas

Coenzima A cido lipoico Pirofosfato de tiamina (TPP) NAD FAD

REACCIONES INDIVIDUALES DEL CICLO DEL ACIDO TRICARBOXILICO La acetil-CoA formada como producto final de la piruvato-deshidrogenasa se encuentra ahora dispuesta para incorporarse al ciclo de Krebs. 1. Se produce la condensacin de la acetil-CoA con el oxalacetato, para formar citrato. La reaccin es catalizada por la citrato-sintetasa.
O Acetil - CoA CH3 C S CoA CoA COOH COOH C oxalacetato CH2 COOH O HO CH2 C CH2 COOH COOH citrato SH

En esta reaccin el grupo metilo (CH3 ) de la acetil CoA se condensa con el tomo de carbono carbonlico del oxalacetato con la hidrlisis del enlace tioster y formacin de la CoA SH libre.
O C

2. Acta una enzima, la aconitasa que cataliza la formacin de isocitrato con formacin de un compuesto intermedio el cis-aconitato. En esta reaccin se produce prdida, y posterior adicin de agua.
OH COOH CH2 C CH2 COOH H2O COOH CH2 C CH COOH

COOH citrato

COOH cis-aconitato

31

H2O

COOH

CH2

CH COOH isocitrato

CH OH

COOH

3. Se produce una oxidacin del isocitrato y prdida de CO 2 . La reaccin es catalizada por la isocitrato-deshidrogenasa ligada al NAD , que requiere Mg Mn para su actividad.
CO2 COOH CH2 CH COOH isocitrato CH OH COOH NAD+ COOH NADH2 CH2 CH2 O C COOH

alfa-cetoglutarato

La reaccin transcurre con gran descenso de exergnica.

G es una reaccin altamente

4. La oxidacin de alfa-cetoglutarato a succinato se produce en dos etapas. a. En la primera el alfa-cetoglutarato experimenta una decarboxilacn oxidativa para formar succinil-S-CoA y CO 2 . Esta reaccin es comparable a la de la oxidacin del piruvato a CoA y se produce por el mismo mecanismo con intervencin de:
NAD
+

pirofosfato de tiamina cido lipoico FAD

que participan como cofactores necesarios ligados a la enzima succinil-CoAsintetasa. b. El producto final de la reaccin la succinil-CoA que es un tioster de elevado contenido energtico, experimenta prdida de su grupo CoA, pero no por una simple reaccin de hidrlisis sino por una reaccin con el GDP y fosfato en el que se conserva la energa.
succinil-CoA + Pi + GDP succinato + CoA SH + GTP

A continuacin el GTP formado en esta reaccin cede terminal al ADP para formar ATP.
GTP + ADP GDP + ATP

La reaccin es catalizada por la nuclesido-difosfoquinasa. Este tipo de fosforilacin se designa como fosforilacin a nivel de sustrato, para distinguirla de las fosforilaciones ligadas a la cadena respiratoria. 5. El succinato es oxidado a fumarato en una reaccin catalizada por la succinatodeshidrogenasa que contiene FAD como coenzima que acta como aceptor de
32

hidrgeno.
COOH CH2 CH2 succinato COOH + FAD COOH CH CH COOH + FADH2

fumarato

6. Se produce una hidratacin del fumarato dando malato, actuando coma catalizador la fumarasa.
OH COOH CH CH COOH + H2O COOH C H CH2 Malato COOH

Fumarato

7. En la ltima reaccin del ciclo la malato-deshidrogenasa dependiente del NAD cataliza la oxidacin del malato a oxalacetato.
OH COOH C H Oxalacetato CH2
+ COOH + NAD

O COOH C CH2 COOH + NADH2

Malato

Podemos ahora resumir los productos producidos en una vuelta del ciclo del cido tricarboxlico. Dos tomos de carbono aparecen en forma de CO 2 equivalentes, aunque no idnticos, a los dos tomos de carbono del grupo acetilo que ingresa en el ciclo. Por deshidrogenacin enzimtica se producen cuatro pares de tomos de hidrgeno, tres pares se utilizan para reducir el NAD y uno para reducir el FAD. En ltimo trmino, estos cuatro pares de tomos de hidrgeno y electrones se combinan con el oxgeno, una vez realizado su transporte a lo largo de la cadena respiratoria. RUTA DEL FOSFOGLUCONATO O VIA DE LAS PENTOSAS Muchas clulas disponen, adems del ciclo del cido tricarboxlico, de otra ruta de degradacin de la glucosa cuya primera reaccin es la oxidacin de la glucosa-6fosfato a 6-fosfato gluconato. La ruta del fosfogluconato, conocida como ruta de los fosfatos de pentosa o desviacin del monofosfato de hexosa, no es una ruta principal de oxidacin de la glucosa. Su objetivo primordial, en la mayor parte de las clulas, es obtener NADP reducido en el citoplasma extramitocondrial. Una segunda funcin es la produccin de pentosas en especial D-ribosa, que se emplea en la sntesis de cidos nucleicos. Otra funcin importante consiste en participar en la formacin de glucosa, a partir del CO 2 , en las reacciones de fotosntesis. Las diversas etapas de la ruta del fosfogluconato tienen lugar en la porcin soluble del citoplasma extramitocondrial de la clula.
33

1. La primera reaccin de la ruta del fosfogluconato es la deshidrogenacin enzimtica de la glucosa-6-fosfato por la glucosa-6-fosfato deshidrogenasa para formar 6-fosfogluconato.
H H HO H H C C C C C CH 2OPO 3= glucosa-6-fosfato OH OH O + NADP+ H OH HO H H C C C CH 2OPO 3= 6-fosfogluconato-lactona H OH H C C O OH O +NADPH
2

COOH H HO C C HC HC OH H OH OH

CH2 O PO 3= 6 Fosfogluconato

La enzima es especfica para el NADP como aceptor electrnico. Realiza la deshidrogenacin del tomo de carbono 1 de la forma piranosa de la glucosa-6-fosfato y rinde la 6-fosfogluconato lactona. Esta ltima es inestable y experimenta hidrlisis espontnea a cido libre en presencia de una lactonasa. 2. En la etapa siguiente el 6-fosfogluconato experimenta una decarboxilacin oxidativa por accin de la 6-fosfogluconato-deshidrogenasa y se forma una pentosa la D-ribulosa-5-fosfato, reaccin que produce una segunda molcula de NDAHP2 .
CH2 OH COOH H H HO H C C C C OH H COH OH H CH 2OPO 3= OH + NADP+ H COH + NADPH2 + CO2 C O

CH 2OPO 3= 6-fosfogluconato ribulosa-5-fosfato

3. Por accin de la fosfo-pentosaepimerasa la ribulosa-5-fosfato se transforma reversiblemente en xilulosa-5-fosfato, su epmero en el tomo de carbono 3. Por accin de la fosfo-pentosa-isomerasa, la ribulosa-5-fosfato, puede convertirse, tambin reversiblemente, en su ismero aldo, la ribosa-5-fosfato que puede emplearse en la sntesis de los nucletidos que contienen pentosa y el ARN.

34

CH2 OH C HO C H CH2 OH HC C H H C C O OH O xilulosa-5-fosfato

m epi
OH

sa era

CH 2OPO 3= CHO

OH

CH 2OPO 3= ribulosa-5-fosfato

iso me ras a
H H

HC

OH ribosa-5-fosfato

C OH C OH CH 2OPO 3=

En ciertas circunstancias, la ruta del fosfogluconato finaliza en este punto, y entonces su ecuacin global se escribe as:
glucosa-6-fosfato + 2NADP+ + H2O ribosa-5-fosfato + CO2 + 2NADPH2

El resultado neto es la produccin del NADPH necesario para las reacciones biosintticas de reduccin en el citoplasma extramitocondrial, y la formacin de ribosa como precursor para la sntesis de nucletidos. En otras circunstancias, sin embargo, la ruta del fosfogluconato contina ms all, ya que las pentosas-5-fosfato pueden experimentar otras transformaciones que son posibles gracias a dos enzimas adicionales: la transcetolasa y la transaldolasa. *La transcetolasa que contiene pirofosfato de tiamina ntimamente unido como coenzima y Mg , realiza la transferencia de un grupo glicoaldehdo desde la xilulosa-5-fosfato a la ribosa 5 fosfato. En este proceso el grupo glicolaldehdo ( CH2 OH CO ) se transfiere en primer lugar al pirofosfato de tiamina unido a la enzima, que acta como transportador intermediario del grupo glicolaldehdo, que a continuacin es transferido a la molcula del aceptor, la ribosa-5-fosfato. El resultado neto consiste en la formacin de un ceto-azcar de 7 tomos de carbono, la sedo heptulosa-7-fosfato, y un azcar de 3 tomos de carbono, el glicer aldehdo-3fosfato.
CH2 OH C HO H C C O H OH + H H CHO HCOH C C OH OH HO CH2 OH C C HC HC HC O H OH OH OH + CHO HC OH

CH 2OPO 3=

CH 2OPO 3=

CH2 O PO 3=

Debe observarse que uno de los productos de la accin de la transcetolasa es el

xilulosa-5-P ribosa-5-P sedoheptulosa-7-P

CH2 O PO 3=

gliceraldehdo-3-P

35

gliceraldehdo-3-P que es un intermediario de la secuencia glicoltica. Su formacin constituye un lazo de conexin entre la va glicoltica y la del fosfogluconato. *La segunda enzima que participa en transformaciones ulteriores de la va del fosfogluconato es la transaldolasa, que acta sobre los productos de la reaccin catalizada por la transcetolasa Cataliza la transferencia del grupo dihidroxiacetona correspondiente a los tomos de carbono 1-2-3 de la sedoheptulosa para formar un azcar de 6 tomos de carbono, la fructosa-6-fosfato, y otro azcar de 4 tomos de carbono, la eritrosa-4-fosfato.
CH2 OH C HO H H H C C C C O H OH OH OH PO 3= + H CHO C OH PO 3= HO H H

CH2 OH C C C C O H OH OH PO 3= + CHO HC HC OH OH PO 3=

CH2 O

CH2 O CH2 O

CH2 O

La fructosa-6-fosfato, es tambin un intermediario de la gliclisis y por lo tanto, el segundo punto de conexin entra las dos rutas: glicoltica y fosfogluconato. Otra reaccin destacada que cataliza la transcetolasa es:
xilulosa-5-P + eritrosa-4-P fructosa-6-P + gliceraldehdo-3-P

En la que dos intermediarios de la va del fosfogluconato pueden convertirse en intermediarios de la va glicoltica. Una consecuencia importante de la accin de las dos enzimas, consiste en que hacen posible, junto con las enzimas de la secuencia glicoltica la interconversin de los azcares. La ltima parte de la va del fosfogluconato no es bien definida, no conduce a un nico producto final, sino a una ruta ramificada, capaz de gran flexibilidad metablica. Es probable que la ruta del fosfogluconato normalmente se rena con el ciclo glicoltico por interconversin en intermediarios de la gliclisis.

36

TEMA XVI: TRANSPORTE DE ELECTRONES Y FOSFORILACION OXIDATIVA Reacciones de xido reduccin. Enzimas de xido-reduccin. Va de transporte de electrones: la cadena respiratoria. Energtica del transporte de electrones. Fosforilacin oxidativa. Acoplamiento de la fosforilacin oxidativa al transporte de electrones. Veremos en este captulo que los pares de electrones derivados de los intermediarios del ciclo del cido tricarboxlico fluyen a lo largo de una cadena de varios eslabones, constituidos por enzimas de transporte electrnico, con niveles de energa sucesivamente inferiores hasta reducir al oxgeno molecular, que es el ltimo aceptor electrnico, en la respiracin. Durante este proceso se conserva gran parte de la energa libre de estos electrones en forma de energa del enlace fosfato del ATP; el proceso se denomina fosforilacin oxidativa. El transporte electrnico y la fosforilacin oxidativa suceden en casi todas las clulas aerobias, las enzimas que catalizan estas reacciones se hallan localizadas en la membrana interna de las mitocondrias. Reacciones de oxidacin-reduccin Antes de referirnos a oxidaciones biolgicas, veremos que se entiende por oxidacin y reduccin. a. Si el hierro (Fe) reacciona con el oxgeno
4Fe

3O2

2Fe2

O3

Este proceso de ganancia de oxigeno se denomina oxidacin y lo inverso o sea la prdida de oxgeno, reduccin. b. Si se combina un elemento con otro distinto al oxgeno.
Zn + Cu++ SO4= Zn++ SO4= + Cu

Lo que ocurri es lo siguiente: el Zn es neutro, de l se desprenden una pareja de electrones y se convierte en in Zn.
Zn carga 0 Zn++ carga 2

Se produce una oxidacin del Zn porque de carga 0 pasa a carga 2. A su vez el in Cu capta los electrones.
Cu++ + 2ecarga 2 Cu metalico carga 0

El cobre se reduce de carga 2 pasa a 0.

37

Resumiendo: 1. La prdida de electrones se denomina oxidacin. 2. La ganancia de electrones se denomina reduccin. c. En compuestos orgnicos el proceso de oxidacin se acompaa de prdida de hidrgeno o ganancia de oxgeno.
H H C H metano H H2O -2H H H C H metanol metanal OH -2H H H C O H2O -2H H H C O -2H CO 2 anhdrido carbnico

cido metanoico

El carbono llega a su grado mximo de oxidacin. O sea que la prdida de tomos de hidrgeno o deshidrogenacin equivale tambin a una oxidacin y el proceso inverso a una reduccin.
oxidacin gananca de oxgeno prdida de electrones prdida de hidrgeno prdida de oxgeno ganancia de electrones ganancia de hidrgeno

reduccin

Las reacciones de oxidacin-reduccin son aquellas en que tiene lugar una transferencia de electrones, desde un dador electrnico (el reductor) hasta un aceptor electrnico (el agente oxidante u oxidante). Es decir que siempre que hay prdida de electrones por un tomo se produce una transferencia de electrones a otro tomo. O sea que la oxidacin y la reduccin son simultneas.

Ared. + Boxid.

Aoxid. + Bred.

Al equilibrio entre la forma reducida y oxidada se llama sistema de xido reduccin o sistema redox. La tendencia de un agente reductor a perder electrones se puede expresar mediante el potencial de reduccin estndar. Es decir colocando la especie oxidante y reductora a concentracin 1.0 M, pH = 7, y a 25 C. Para medir el potencial se establece como patrn de referencia el potencial de reduccin del H 2 en la siguiente reaccin.
H2
2H+

+2e-

El cual por convencin se ha establecido que es igual a 0,0 voltios, cuando la

38

presin de H 2 gaseoso es de 1,0 atmsfera, la concentracin 1,0 M, el pH 0,0 y temperatura 25 C. Cuando se corrige este valor a pH 7,0 el potencial estndar del sistema hidrgeno-in hidrgeno es de -0,42 voltios. Potenciales de reduccin estndar de algunos pares redox

Reductor Acetaldehdo
H2

Oxidante Acetato
2H

E voltios - 0.60 - 0.42 - 0.38 - 0.32 - 0.19 - 0.11

Isocitrato NAD + H Lactato NADH deshidrogenasa (reducida) Citocromo b Fe (II) Citocromo c Fe (II)
H2 O

cetoglutarato +
CO 2

NAD

Piruvato Oxidada

Fe (III) Fe (III) O2

0.00 + 0.26 + 0.82

Los sistemas que poseen un potencial estndar de reduccin ms negativo que el del par H2 2H muestran mayor tendencia a perder electrones que el hidrgeno. Los que poseen potencial ms positivo tienen menor tendencia a perder electrones. Obsrvese la pareja agua-oxgeno: posee un potencial estndar de reduccin fuertemente positivo.
H2O
+

1/2 O2

2 H+

+2e-

Por dicha razn el agua muestra muy poca tendencia a perder electrones y a formar oxgeno molecular. Dicho de otro modo, el oxgeno molecular tiene gran afinidad por los electrones, superior que la de aceptores biolgicos de electrones tales como el NAD , las flavoprotenas y los citocromos. Cadena respiratoria:

Sustrato reducido

NAD+

FADH2

CoQ

Fe++ cit. b

Fe+++ c Fe++
ATP H
+

Fe++ a+ a3 Fe+++ 2H ATP 2H+ + 1/2 O2

Sustrato oxidado

NADH2 ATP

FAD+

CoQH2

Fe+++

39

H2O

En el proceso un sustrato que se va a oxidar entrega sus electrones H al primer constituyente de la cadena que es el NAD y se reduce. El NADH H entrega sus hidrgenos y respectivos electrones a una flavoprotena y sta a la coenzima Q, que desempea el papel de transportador electrnico entre las deshidrogenases ligadas al NAD y FAD y los citocromos. De aqu en adelante lo que se transfieren ya son electrones y los H irn al medio. Los electrones son captados por el citocromo b, c y a + a3. Este ltimo es autooxidable y entrega los electrones al 1/ 2 O 2 que con los H formar H2 O .

Enzimas de xido-reduccin: Tres son las clases principales de enzimas que participan de la corriente del transporte electrnico desde los sustratos orgnicos hasta el oxgeno molecular. De acuerdo al orden en que participan son los siguientes: 1. Deshidrogenasas ligadas a la piridina que requieren NAD o NADP como coenzima. Participan en la primera parte del eslabn:
Sustrato reducido NAD+

Sustrato oxidado

NADH + H+

2. Deshidrogenasas ligadas a la flavina que tienen como grupo prosttico al FAD o al FMN. Participan en la segunda parte del eslabn
FADH + H CoQ

FAD

CoQH + H +

3. Los citocromos que contienen un sistema nuclear ferroporfirnico. Participan en la ltima parte del eslabn

Fe++ cit. b Fe+++

Fe+++ c Fe++

Fe++ a+ a3 Fe+++ 2H+ + 1/2 O2 H2O

Analizamos cada una de las enzimas con sus respectivas coenzimas:

40

Deshidrogenasa ligada a la piridina: Se conocen alrededor de 150 y catalizan la siguiente reaccin:

Sustrato reducido + NAD+ Sustrato oxidado + NADH + H+

Las deshidrogenases ligadas a la piridina transfieren reversiblemente dos equivalentes de reduccin desde el sustrato a la forma oxidada del nucletido piridnico; uno de ellos aparece en el nucletido reducido como un tomo de hidrgeno. El otro tomo de hidrgeno separado del sustrato aparece en forma de H libre en el medio. Veamos la estructura del NAD:
O HO P
+

H2C H

adenina H

OH

OH

CONH 2

HO

H2C H

O H

OH

OH

La parte activa de los nucletidos piridnicos es la nicotinamida, ya que sta es la porcin de la molcula que va a recibir el hidrgeno del sustrato. Es importante destacar que la nicotinamida es una vitamina del complejo B. O sea que por su participacin en los mecanismos de xido-reduccin cumplen un papel fundamental en la clula. El mecanismo de xido-reduccin se realiza segn el siguiente esquema:
H CONH H CONH

+ 2H

+ H+

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Deshidrogenases ligadas a la flavina: Esta clase de enzimas contienen flavn-adenn-dinucletido (FAD) o bien flavnmononucletido (FMN) como grupos prostticos. En la mayor parte de las flavndeshidrogenasas el nucletido flavnico se halla firmemente unido y no se separa de la enzima durante el ciclo cataltico. Veamos la estructura del FMN:
6-7 dimetil-iso-aloxacina

CH2 CH2 CH2

riboflavina (vitamina B2)

CH2 CH2 O HO P
+

OH O P O H OH OH OCH2 H O

FDN
adenina H

FDN: resulta de la unin pirofosfrica entre el FMN y el AMP. La parte activa del FAD y del FMN es el anillo de isoaloxacina.
O N CH3 N H CH3 H N N O H

CH3 N R N O

CH3 N R N H O

En cuanto a la coenzima Q o ubiquinona existen controversias. Importantes experimentos recientes permiten creer que la CoQ es realmente uno de los transportadores de la cadena respiratoria, y que funciona, posiblemente, como una molcula liposoluble que acta a modo de nexo de unin entre las flavoprotenas y el sistema de los citocromos. Citocromos: Los citocromos son un grupo de ferroprotenas transferidoras de
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electrones en las clulas aerobias, que actan secuencialmente transfiriendo electrones desde las flavoprotenas al oxgeno molecular .Todas ellas contienen grupos prostticos ferroporfirnicos; en este aspecto se parecen a la hemoglobina y a la mioglobina. Los citocromos experimentan cambios de valencia reversibles, Fe (II) Fe (III), durante el ciclo cataltico. El citocromo terminal de la cadena, que puede reaccionar con el oxgeno, es la citocromo-oxidasa. Las formas reducidas de los dems citocromos no pueden reoxidarse directamente por el oxgeno molecular. Estructura: Los citocromos tienen grupos prostticos hierro porfirnicos. El anillo porfirnico deriva del compuesto tetrapirrlico llamado porfina que se designa segn sus cadenas laterales sustituyentes.

HC N
++

CH Fe
+++

Fe

HN

N HC CH

Forman quelatos (literalmente, cuatro dientes) con iones metlicos como el hierro, por ejemplo. En los citocromos, el tomo de Fe experimenta cambios reversibles entre las formas Fe (II) y Fe (III); su funcin real es la de desempear el papel de transportadores electrnicos. Potencial estndar de xido-reduccin en la cadena respiratoria Los potenciales de reduccin de los diferentes transportadores electrnicos, se hacen ms positivos a medida que los electrones pasan desde el sustrato el oxgeno. Es decir, que el transportador electrnico ms prximo el extremo inicial de la cadena, o sea el NAD es el trmino ms reducido, mientras que los transportadores situados en el extremo del oxgeno (citocromo a + a3) estn casi por completo en la forma oxidada. Los transportadores intermedios en estados sucesivamente ms oxidados, segn una escala que va desde el sustrato hasta el oxgeno. Energtica del transporte electrnico-Fosforilacin oxidativa Hemos visto que el G que se produce en el transcurso de cualquier reaccin qumica es funcin de su constante de equilibrio.

RT Ink eq
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Puede utilizarse una forma modificada de esta expresin para calcular la G que se produce cuando reaccionan entre s dos pares de xido-reduccin cuyos potenciales de reduccin estndar son conocidos.

nFT

E '0

G = variacin de energa libre estndar expresada en caloras; n = nmero de electrones transferidos; F = equivalente calorfico de Faraday; E' 0 = la diferencia entre los potenciales de reduccin estndar del aceptor del dador electrnico. Se supone que todos los componentes se hallan a concentraciones 1, 0 M, a 25 C y pH = 7,0 Mediante esta relacin, podemos calcular la G cuando se transfiere un par equivalentes electrnicos desde el NADH al oxigeno molecular, es decir a lo largo de toda la cadena respiratoria.
G 2 23062 0.82 0.32 52.700 kcal 52.7 kcal

Se produce, por tanto, una variacin de energa libre muy grande durante el proceso de transporte electrnico desde el NADH hasta el oxgeno molecular, a travs de la cadena respiratoria. Este valor puede compararse con la energa libre estndar de formacin de ATP a partir del ADP y el fosfato.
ADP + FOSFATO ATP + H2O

7.3 kcal

Puede verse que la transferencia de un par de electrones, desde el NADH al oxgeno va acompaada de una disminucin de energa libre lo suficientemente grande para que resulte posible la sntesis de varias molculas de ATP, a partir de ADP y de fosfato, en las condiciones estndar, siempre que se disponga de un mecanismo de acoplamiento. Mediante clculos semejantes se obtienen las G que tienen lugar en cada una de las etapas principales de transferencia electrnica en la cadena respiratoria, cuyos potenciales de reduccin estndar son conocidos. Tres de los pasos de la cadena respiratoria muestran G relativamente grandes; ellos son: 1. Entre NAD y FAD 2. Entre citocromo b y c 3. Entre citocromo a y el oxgeno En cada uno de ellos se produce una disminucin de energa libre suficientemente grande para que se origine la formacin acoplada del ATP a partir de ADP y de fosfato. Las G en otros puntos de la cadena son pequeas y, por ello resultan insuficientes para provocar la formacin de una molcula de ATP.

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Acoplamiento de la fosforilacin oxidativa al transporte electrnico La fosforilacin del ADP acoplado a la respiracin representa un mecanismo de recuperacin aerobia de energa y recibe el nombre de fosforilacin oxidativa. La ecuacin global para las fosforilaciones de la cadena respiratoria puede escribirse como sigue:
NADH + H+ + 3 ADP + 3 Pi + +1/2 O2 NAD+ + 4 H2O + 3 ATP

que podemos analizar desde el punto de vista de su componente exergnico.

NADH + H+ + 1/2 O2 NAD+ + H2O
G 52.7 kcal

y de su componente endergnico:
3 ADP + 3 Pi 3 ATP + 3 H2O G 3 7.3 21.9 kcal

La fosforilacin oxidativa acoplada de tres molculas de ATP conserva por lo tanto 21,9/52,7 x 100, es decir, alrededor del 40% del descenso total de energa libre. Slo se formarn 3 molculas de ATP si el sustrato se oxida a nivel del NAD. Puede ocurrir que el sustrato entregue sus electrones a la flavoproteina (por ej. succinato) en este caso se producen 2 molculas de ATP; y si entrega sus electrones al citocromo a, (por ej. cido ascrbico) se forma solamente una molcula de ATP. Balance energtico de un proceso de respiracin Es decir, el G , cuando la glucosa se oxida completamente hasta CO2 H2 O por la secuencia glicocoltica y el ciclo del cido tricarboxlico. 1.
glucosa

2 piruvato

glucosa + 2 Pi + 2 ADP + 2 NAD+

2 piruvato + 2 NADH + H+ + 2 ATP + 2 H2O

2.
2 piruvato 2 acetil CoA 2 acetil CoA + 2NADH + 2H+ + 2CoA2

2 (piruvato + NAD+ + HS - CoA)

NADH H se reoxida en la cadena respiratoria y se producen 3 ATP; como son 2 moleculas de NADH + H+ 3 ATP x 2 = 6 ATP

3. Ciclo de Krebs se producen 24 ATP a. 2 isocitrato 2 alfa-cetoglutarato hay deshidrogenacin, los H 2 son captados por el NAD que se reoxida en la cadena respiratoria y se
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producen 6 ATP.
H2O

b. 2 alfa-cetoglutarato tambin se producen 6 ATP. c. 2 malato

H2
H2

2 succinato, ocurre lo mismo, o sea que

2 oxalacetato

6 ATP.

d. 2 succinato 2 fumarato. En este caso los hidrgenos son captados por el FAD. Se producen 4 ATP. e. 2 succinato CoA 2 succinato, hay una fosforilacin a nivel de sustrato de producen 2 ATP. Resumiendo: a .. b .. c .. d .. e .. 6 ATP 6 ATP 6 ATP 4 ATP 2 ATP
24 TP

4. El NAD H que se produce en la gliclisis en el pasaje de gliceraldehdo 3 P 3 P glicerato , cuando el proceso es anaerobio se reoxida en el pasaje de piruvato lactato . Cuando el proceso es aerobio el NADH H se reoxida en la cadena respiratoria, por lo tanto se producen 2 ATP x 2 (porque son dos molculas de NADH H ) = 4 ATP. O sea que el balance global ser: 1. .. 2 ATP 2. ... 6 ATP 24 3. .. ATP 4. .. 4 ATP 36 ATP
glucosa + 6 O2 + 36 Pi + 36 ADP 6 CO2 + 36 ATP + 42 H2O

Si analizamos el componente exergnico

glucosa + 6 O2 6 CO2 + 6 H2O

680 kcal

componente endergnico
36 Pi + 36 ADP 36 ATP + 36 H2O

263 kcal

La eficacia global de la recuperacin de energa resulta ser:

46

263 100 680

39%

Cmo entra el NADH producido en la gliclisis a la cadena respiratoria? El NADH 2 citoplasmtico producido en la gliclisis es impermeable a la membrana mitocondrial, por lo tanto si no penetra en la mitocondria no se puede reoxidar a nivel de la cadena respiratoria. Aunque el NADH no puede penetrar, sus electrones pueden hacerlo por medios indirectos denominados lanzaderas. La mejor conocida es la lanzadera del glicerolfosfato. El NADH citoplasmtico reacciona con la dihidroxiacetona citoplasmtica para formar glicerol-3-fosfato en una reaccin catalizada por la glicerofosfato-deshidrogenasa citoplasmtica.

dihidroxiacetona fosfato + NADH + H+

glicerol-3-fosfato + NAD+

El glicerol-3-fosfato atraviesa fcilmente la membrana mitocondrial. En el interior de la mitocondria otra glicero-3-fosfato-deshidrogenasa reoxida el glicerol-3-fosfato a dihidroxiacetona fosfato.
glicerol-3-fosfato + FAD dihidroxiacetona fosfato + FADH2

La flavoprotena reducida cede sus equivalentes de reduccin a la cadena respiratoria a nivel de CoQ y finalmente pasan al oxgeno. La dihidroxiacetona fosfato formada en esta reaccin difunde fuera de la mitocondria el citoplasma en donde puede aceptar electrones de otra molcula de NADH extramitocondrial.

NADH + H+

NAD+

DIHIDROXICETONA-P NAD FAD ATP ATP O2

GLICEROL-FOSFATO

MITOCONDRIA

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TEMA XVIII: Oxidacin de los cidos grasos Hidrlisis intracelular de los lpidos. Ciclo de oxidacin de los cidos grasos: activacin y entrada de los cidos grasos a la mitocondria. Primera deshidrogenacin. Hidratacin. Segunda deshidrogenacin. Clivaje tilico. Oxidacin de los cidos grasos insaturados. Cuerpos cetnicos y su oxidacin. Oxidacin de los cidos grasos de carbono impar.

Aunque los hidratos de carbono, a causa de su abundancia constituyen el combustible principal para la mayor parte de los organismos, los cidos grasos desempean tambin un papel muy destacado como fuente energtica. La oxidacin de los cidos grasos es importante en los animales superiores y en las plantas, que pueden almacenar cantidades grandes de grasa neutra como combustible de reserva. La grasa neutra posee un valor calorfico elevado (9 Kcal) y puede almacenarse en forma casi anhidra en las gotitas de grasa intracelulares, mientras que el glucgeno o el almidn (valor calrico = 4 Kcal) se hallan demasiado hidratados para poder almacenarse en forma tan concentrada. Hidrlisis intracelular de los lpidos Los cidos grasos que experimentan oxidacin en los tejidos de los animales superiores provienen del fluido extracelular o bien de los lpidos intracelulares endgenos. La sangre de los vertebrados contiene cantidades considerables de triacilgliceroles y de fosfoglicridos, as como cantidades muy pequeas de cidos grasos libres unidos a la protena seroalbmina, que acta transportando los cidos grasos. Estos ltimos son oxidados en tejidos tales como el corazn y el msculo. La fuente endgena principal de cidos grasos combustibles es grasa de depsito, en foma de gotitas de grasa del citoplasma, constituido, en su mayor parte por triacilgliceroles. Resumiendo lo expuesto:
de la sangre que contiene triacilgliceroles, fosfoglicridos, cidos grasos 1. grasa de depsito constituida por triacilgliceroles. b. fuente endgena 2. fosfoglicridos de las membranas

a. fluido extracelular cidos grasos a oxidarse provienen

A. Hidrlisis intracelular Los cidos grasos deben hallarse en forma libre, es decir, no esterificados para que puedan experimentar el proceso de activacin y oxidacin. Para ello, deben en primer lugar, hidrolizarse por la accin de lipasas intracelulares para rendir cidos grasos libres y glicerina. Se sabe relativamente poco acerca de la secuencia y
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detalles de la hidrlisis intracelular de los lpidos. Sin embargo, en general, no tiene lugar acumulacin significativa de cidos grasos o de otros productos de hidrlisis que seran txicos para la estructura de la membrana. Evidentemente, la velocidad y la ruta de hidrlisis de los lpidos intracelulares est ajustada a la velocidad de utilizacin de los cidos grasos. B. Ciclo de los cidos grasos Activacin y penetracin de los cidos grasos en el interior de la mitocondria Existen 3 fases en la entrada de los cidos grasos procedentes del citoplasma extramitocondrial, en el interior de la mitocondria. 1. Esterificacin enzimtica del cido graso libre con la CoA extramitocondrial, a expensas del ATP, que tiene lugar en la membrana exterior. 2. Transferencia del grupo acilo graso desde la CoA a la molcula transportadora carnitina, la cual lo conduce a travs de la membrana interior. 3. Transferencia del grupo acilo graso desde la carnitina a la CoA intramitocondrial. Activacin de los cidos grasos Tres enzimas diferentes catalizan la formacin de steres acil-CoA graso; cada una de ellas se especfica para un determinado intervalo de longitud de cadena de cido graso.
Acetato-tioquinasa Tioquinasa de cido graso de cadena media Tioquinasa de cido graso de cadena larga Activa los cidos actico, propinico y acrlico Activa los cidos grasos desde cuatro hasta doce tomos de carbono Activa los cidos grasos de 12 a 22 o ms; tomos de carbono

Las ltimas dos tioquinasas activan tanto los cidos grasos saturados como los no saturados. Las tres se encuentran en la membrana exterior de la mitocondria. Las propiedades y mecanismos de las tres tioquinasas, son ms o menos idnticos. La reaccin global catalizada por las tioquinasas ligadas al ATP es la siguiente:
O R COOH + ATP + CoA SH R CH SCoA + AMP + PPi

A medida que el enlace tioster se forma entre el grupo carboxilo del cido graso y el grupo tiol de la CoA, el ATP experimenta ruptura pirofosfrica y rinde AMP PPi . A su vez el PPi formado resulta hidrolizado por la pirofosfatasa inorgnica.

49

PPi

H2O

2 Pi

El efecto neto de esta hidrlisis es la utilizacin de dos enlaces fosfato de elevada energa para impulsar el equilibrio global de la etapa de activacin a la formacin de acil CoA graso. Transferencia de carnitina Los cidos grasos superiores poseen una capacidad limitada para atravesar la membrana interior de la mitocondria en forma de steres de CoA; pero su entrada es estimulada por la carnitina. En el proceso acta una enzima la acil-CoA graso: carnitin transferasa de cido graso, que cataliza la transferencia del grupo acilo graso desde su enlace tioster con la CoA, a un enlace ster con la carnitina que es un enlace de elevada energa.

CH3 CH3 N
+

O CH2 CH OH CH2 COOH + R C S CoA

CH3

CH3 CH3 N
+

CH2

CH O C R O

CH2

COOH +

CoA

SH

CH3

El compuesto carnitn-O-acilo graso, as formado, atraviesa con facilidad la membrana interna de la mitocondria; no se sabe si el paso se realiza por simple difusin o con intervencin de algn mecanismo transportador de la membrana mitocondrial. Transferencia de la CoA intramitocondrial En la ltima etapa del proceso de penetracin, el grupo acilo graso es transferido desde la carnitina a la CoA intramitocondrial por accin de la carnitn-transferasa de cido graso intramitocondrial.
acil-graso-carnitina + CoA SH acil-graso-CoA + carnitina

Este mecanismo de entrada ejerce el efecto de mantener separada la CoA extramitocondrial de la intramitocondrial. El acil-graso-CoA se emplea entonces
50

como sustrato para el ciclo de oxidacin del cido graso, que tiene lugar en el compartimiento interno de la matriz. Las mitocondrias contienen otro tipo de aciltioquinasas que participan en la activacin del cido graso. Esta enzima necesita GTP en lugar de ATP y produce GDP Pi .
O GTP + RCOOH + CoASH R C SCoA + GDP + Pi

Puesto que la carnitina no es necesaria para su accin, probablemente est implicada en la activacin de los cidos grasos libres formados en el interior de las mitocondrias.

C. Primera etapa de deshidrogenacin A continuacin de la etapa de activacin, las reacciones de oxidacin del cido graso tienen lugar en el compartimiento interior de la mitocondria. El ster formado experimenta la deshidrogenacin enzimtica en los tomos de carbono alfa y beta, es decir, en los tomos de carbono 2 y 3, para formar un acil-graso-CoA no saturado. La posicin del doble enlace se designa mediante el smbolo 2,3 . Existen cuatro clases diferentes de deshidrogenasas de acil CoA graso que contienen FAD, cada una de las cuales es especfico para un determinado intervalo de longitud de cadena del cido graso.

O R
2

CH2

CH2 +

SCoA

acil-graso CoA

FAD oxi.

H R C H C

O C SCoA
2,3

trans-enoil CoA + E

FAD red.

El enlace no saturado 2,3 formado en esta reaccin es el ismero geomtrico trans. Los electrones del FAD red. son cedidos a la cadena respiratoria. D. Etapa de hidratacin La hidratacin reversible del doble enlace de los steres 2,3 enolicos del CoA para formar beta-hidroxiacil-CoA es catalizada por la enzima enoil-hidratasa.
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H R CH2 C H OH R CH2 C H CH2 C

O C S CoA
2,3

trans-enoil CoA

O C SCoA hidroxi-acil-CoA

E. Segunda etapa de deshidrogenacin El compuesto obtenido se deshidrogena para formar un 3-oxoacil-graso-CoA, con intervencin de la -hidroxiacil-graso-CoA-deshidrogenasa siendo el NAD el aceptor electrnico especfico.
OH R CH2 C H O R CH2 C CH2 O C
+ SCoA + NADH + H

O CH2 C SCoA + NAD+

El NADH cede sus electrones a la NADH deshidrogenasa de la cadena respiratoria. Etapa de ruptura tilica En la ltima etapa de la secuencia de la oxidacin del cido graso, que es catalizada por la tiolasa, el 3 oxoacil-graso-CoA experimenta una escisin por interaccin con una molcula de CoA libre para producir un fragmento de dos carbonos que contiene el carboxilo terminal en forma de acetil-CoA libre, y el ster del CoA de un cido graso cuya cadena se ha acortado en dos tomos de carbono.
O R CH2 C CH2 O C O R CH2 C SCoA + CH3 SCoA + CoA O C SCoA SH

La reaccin es muy exergnica, y el equilibrio favorece por tanto la ruptura. Balance de la oxidacin Con la reaccin de tilisis se ha completado una vuelta de la secuencia de oxidacin del cido graso, en la que una molcula de acetil-CoA, y dos pares de tomos de hidrgeno resultan eliminados de un acil-CoA graso de cadena larga. La ecuacin
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global de una vuelta de la secuencia de oxidacin del cido graso actuando sobre el palmitoil-CoA es la siguiente:
palmitoil CoA + CoA + FAD + NAD+ + H2O CoA + acetil CoA + FADH2 + NADH + H+

miristoil

Ahora podemos escribir la ecuacin para las siete vueltas del espiral necesarias a fin de convertir una molcula de palmitoil-CoA en 8 molculas de acetil CoA (el cido palmtico tiene 16 tomos de carbono). Cada molcula de FADH 2 cede un par de equivalentes electrnicos a la cadena respiratoria a nivel de la CoA y se generan 2 molculas de ATP. De modo anlogo, la oxidacin de cada molcula de NADH da por resultado la formacin de 3 molculas de ATP. Por lo tanto, se forman un total de 5 molculas de ATP por molcula de acetil-CoA escindido. Podemos escribir ahora la ecuacin que tambin comprende las fosforilaciones:
(1) pamitol CoA + 7 CoA + 7 O2 + 35 Pi + 35 ADP 8 acetil CoA + 35 ATP + 42 H2O

Las 8 molculas de acetil CoA formadas en el ciclo del cido graso pueden incorporarse ahora al ciclo de Krebs
(2) 8 acetil CoA + 16 O2 + 96 Pi + 96 ADP 8 CoA + 96 ATP + 104 H2O + 16 CO2

Combinando la ecuacin (1) y (2) obtenemos la ecuacin global:

pamitol CoA + 23 O2 + 131 Pi + 131 ADP CoA + 16 CO2 + 131 ATP + 146 H2O

Puesto que se necesita una molcula de ATP ( o de GTP) para activar el cido palmtico libre al comenzar, podemos suponer que el rendimiento neto de ATP es de 130 molculas.

Oxidacin de los acidos grasos no saturados Los cidos grasos no saturados, son oxidados por las mismas rutas generales que los cidos saturados; pero se plantean dos problemas: 1. Los dobles enlaces de los cidos grasos no saturados existentes en la naturaleza se hallan en la configuracin geomtrica cis, mientras que los steres 2,3 insaturados del acil CoA que actan como intermediarios en la oxidacin de los cidos grasos saturados, son trans. 2. Los dobles enlaces de la mayor parte de los cidos grasos no saturados aparecen en posiciones tales que la eliminacin sucesiva de fragmentos de dos tomos de carbono rinde un acil-CoA graso 3,4 en lugar de 2,3 .
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Se ha resuelto este problema con el descubrimiento de una enzima auxiliar, la 3,4 cis- 2,3 -trans-enoil CoA-isomerasa que cataliza el desplazamiento del doble enlace desde la configuracin 3,4 -cis a la 2,3 -trans que es el sustrato normal de la siguiente enzima de la secuencia de oxidacin del cido-graso. Cuerpos cetnicos y su oxidacin En muchos vertebrados el hgado posee la capacidad enzimtica adecuada para desviar algo de acetil-CoA, hacia la formacin de acetoacetato y -hidroxibutirato, los cuales son transportados por la sangre a los tejidos perifricos, en donde pueden ser oxidados por el ciclo del cido tricarboxilico. Estos compuestos reciben el nombre de cuerpos cetnicos. El acetoacetato proviene de la condensacin de dos molculas de acetil-CoA catalizado por la tiolasa.
acetil CoA + acetil CoA acetoacetil CoA + HSCoA

La acetoacetil CoA experimenta la prdida de la CoA para transformarse en acetoacetato, proceso conocido como desacilacin. La principal ruta para la desacilacin es la formacin y escisin enzimtica del hidroxi- -metil glutaril CoA.
CH3 HOOC CH2 C OH acetoacetil CoA + acetil CoA -hidroxi -metil glutaril CoA + CoA CH2 O C SCoA

El acetoacetato libre as producido se reduce enzimticamente hidroxibutirato, por la Beta-hidroxibutirato deshidrogenasa ligada al NAD.
acetoacetato + NADH + H+ Beta-hidroxibutirato + NAD+

Beta-

La mezcla de acetoacetato y Beta hidroxibutirato resultante de esta reaccin pueden difundir despus, fuera de la clula heptica, a la corriente sangunea y llegar a los tejidos perifricos. Normalmente la concentracin de cuerpos cetnicos en la sangre es muy baja, pero a causa del ayuno o por la diabetes puede alcanzar niveles elevados. Esto es debido, a que al no existir glucosa utilizable por la clula, sta se vale de las grasas, las cuales al degradarse dan como producto acetil CoA en cantidades elevadas. Oxidacin de cidos grasos de nmero impar de carbonos Estos cidos grasos raramente se encuentran en la naturaleza. Son oxidados por el ciclo de oxidacin del cido graso. Se separan sucesivamente restos de acetil CoA hasta que se llega a un resto terminal de tres tomos de carbono: propionil-CoA. El propionil CoA experimenta una carboxilacin enzimtica que lo transforma en metil-malonil CoA que es isomerizado a succinil CoA, que pierde la CoA para rendir succinato que se incorpora al ciclo del cido tricarboxlico.
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TEMA XIX: Degradacin oxidativa de los aminocidos Esquema de la oxidacin de los aminocidos. Transaminacin y funcin del piridoxal fosfato. Desaminacin oxidativa. Vas de la acetil CoA y del alfacetoglutorato, del succinato, del oxalacetato. Formacin de los productos de excrecin nitrogenada. Ciclo de la urea. Excrecin de amonaco. Formacin de cido rico. Aunque la funcin primordial de los A.A. es la de ser precursores de las protenas y de otras biomolculas, se emplean con frecuencia como fuente energtica. Los animales superiores oxidan activamente los aminocidos tanto exgenos como endgenos. An cuando no se haya ingerido cantidad alguna de protenas, los seres humanos pueden excretar hasta 5 grs. de N 2 cada da, que corresponden a la oxidacin neta de casi 30 grs. de protena endgena. El ciclo de los cidos tricarboxlicos es la ruta definitiva para la oxidacin de los esqueletos carbonados de los aminocidos. En este captulo describiremos la degradacin oxidativa de los aminocidos normalmente presentes como unidades estructurales de las protenas, lo que constituye la corriente principal del catabolismo de los aminocidos. Aunque las reacciones enzimticas bsicas implicadas en el catabolismo aminocido son en su mayor parte semejantes en todos los organismos, el ritmo real de utilizacin y la proporcin de los diferentes aminocidos empleados en un organismo determinado dependen de muchos factores que incluyen: La capacidad gentica para metabolizar aminocidos; La asequibilidad de aminocidos del entorno; La dependencia nutritiva del organismo respecto de los aminocidos esenciales; La disponibilidad de otros combustibles calorficos; Las necesidades de aminocidos del organismo para la sntesis proteica; La necesidad de aminocidos especficos como precursores de ciertas biomolculas importantes, tales como purinas, pirimidinas, componentes de la pared celular, hormonas y otras molculas especializadas. PROTEOLISIS Antes que las protenas puedan incorporarse a las rutas catablicas deben experimentar hidrlisis completa hasta transformarse en aminocidos ya que las molculas proteicas intactas y la mayora de los pptidos no pueden atravesar la membrana celular, mientras que los aminocidos libres son absorbidos fcilmente. Los pptidos extracelulares y las protenas con frecuencia son hidrolizados por accin de enzimas segregadas al entorno, por ejemplo muchos microorganismos forman y segregan peptidasas y enzimas proteolticas. Sin embargo, la protelisis extracelular ha sido estudiada con mximo detalle en el tracto digestivo de los vertebrados (ver proceso en pgina 460 de Lehninger). Por accin combinada de las enzimas proteolticas segregadas por el estmago, el pncreas y el intestino delgado, las protenas ingeridas se hidrolizan por completo hasta aminocidos, los cuales son absorbidos por las clulas epiteliales del intestino delgado, mediante un transporte activo que requiere energa. Los aminocidos son enviados luego a los
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tejidos por medio de la sangre. Al entrar en las clulas individuales tambin por transporte activo, se incorporan a los canales metablicos. Se sabe muy poco de la protelisis intracelular, que en algunos tejidos como el hgado, tiene lugar a un ritmo elevado. ESQUEMA DE LA OXIDACION DE LOS AMINOACIDOS Para la oxidacin de los 20 aminocidos diferentes existen 20 secuencias multienzimticas distintas. En ltimo trmino todas convergen en unas pocas rutas terminales que conducen al ciclo de los cidos tricarboxlicos. Los esqueletos hidrocarbonados de 10 de los A.A. son convertidos finalmente en acetil-CoA, ya sea por la va del piruvato o por la del acetoacil-CoA, cinco se convierten en cetoglutarato, tres en succinil-CoA y dos en oxalacetato. La fenilalanina y la tirosina se degradan de modo que una porcin del esqueleto hidrocarbonado se incorpora como acetil-CoA y lo otra como fumarato. Sin embargo no todos los tomos de C de los 20 A.A. se incorporan al ciclo del cido tricarboxlico ya que algunos se pierden por el camino de la descarboxilacin. Las rutas del catabolismo no son necesariamente idnticas a las de la biosntesis, pero hay algunas etapas que son comunes.
Alanina Cistena Glicocola Serina Treonina Isoleucina Leucina Triptfano

Piruvato

Glutamato

Arginina Histidina Glutamina Prolina

Oxoglutarato Isocitrato Isoleucina Metionina Valina

Succinil-CoA Citrato Succinato Oxalacetato

Acetil-CoA

Tirosina Fumarato Fenilalamina Malato

Acetoacetil-CoA

Fenilalanina Tirosina Leucina Lisina Triptfano

Aspartato Asparagina

Los grupos -amino de los aminocidos comparten un destino comn, al menos en los vertebrados, los cuales excretan el N 2 amnico en forma de Urea, Amonaco o de cido rico, segn la especie. Los mecanismos por los cuales los grupos NH2 son eliminados de los A.A. y luego convertidos en cualquiera de los tres productos de excrecin, son completamente semejantes. Puesto que la eliminacin de los grupos
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NH2 constituye la primera etapa en la degradacin de los A.A., examinaremos

ahora los dos procesos principales implicados en esta reaccin, ellos son la Transaminacin y la Desaminacin Oxidativa. TRANSAMINACION Por este proceso el grupo amino de por lo menos 11 aminocidos es separado enzimticamente por transaminacin y transferido al carbono de uno o tres oxocidos (piruvato; cetoglutarato o al oxalacetato). Por lo tanto el aminocido al perder su grupo NH2 se transforma en el oxocido correspondiente y el -oxocido que acepta el grupo NH2 se transforma en el aminocido correspondiente. Dos transaminasas importantes son: la ALANIN-TRANSAMINASA; que cataliza la reaccin:
a minocido cido pirvico

oxocido alanina

y la GLUTANATO-TRANSAMINASA, que cataliza la reaccin:

a minocido cido oxoglutrico oxocido cido glutmico

Ejemplo de transaminacin:
R' H C COOH NH2 + R2 O C COOH R1 O C COOH + R2 NH2 C H COOH

Cualquiera sea la ruta de transaminacin, el -cetoglutarato es el aceptor final de los grupos NH2 de la mayor parte de los A.A. y luego transporta esos grupos NH2 hasta una secuencia final de reacciones mediante las cuales se forman los productos nitrogenados finales o de excrecin. Por ejemplo en la reaccin anterior la alanin-transaminasa cataliza la formacin de alanina a partir de un aminocido ms cido pirvico, luego esa alanina le transfiere el grupo NH2 al cetoglutarato por accin de la alanin-glutamato-transaminasa.
Alanina cido oxoglutri co
cido pirvico cido glutmico

(aceptor final)

Las transaminasas se encuentran tanto en el citoplasma como en la mitocondria de las clulas eucariticas; las formas mitocondriales y las extramitocondriales difieren en sus propiedades fsico-qumicas. Todas las transaminasas emplean una misma coenzima y comparten un mecanismo de reaccin comn. La coenzima es el fosfato de piridoxal, un derivado de la vitamina B 6 , necesario como factor de crecimiento y esencial en la dieta de muchos microorganismos y animales.
H C HO C C C O CH2 O O P OH Fosfato de piridoxal OH

El fosfato de piridoxal es tambin el grupo prosttico de cierto nmero de otras enzimas que catalizan
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C H3C N

CH

reacciones en las que intervienen -aminocidos. En principio el fosfato de piridoxal acta como un transportador de grupos O, en algunos casos de aminocidos. La clave de accin es su grupo aldehdo que puede formar una base de Shiff o cetimina, con amonaco o con diversas aminas. Durante su ciclo cataltico en las transaminasas, la coenzima experimenta reacciones reversibles entre la forma de aldehdo libre (fosfato de piridoxal) y su forma aminada (el fosfato de piridoxamina). Se produce el ciclo en dos etapas: El complejo enzima-fosfato de piridoxal, acepta un grupo amino del dador de grupos NH2 con formacin de un complejo enzima-fosfato de piridoxamina; ello ocurre mediante dos bases de Shiff intermedias. El complejo enzima-fosfato de piridoxamina forma una base de Shiff con el aceptor entrante del grupo NH2 , el -oxocido, al que se cede a continuacin el grupo NH2 .
NH2 R1 CH COOH + E O C H H2O + R1 H C COOH Base de Shiff I O R1 C COOH Base de Shiff II O E CH2 NH2 + R2 C COOH R2 C N CH2 E N CH2 E R1 C COOH + E CH2 NH2 N H C E

Dador de NH2

oxocido

enzima-fosfato de piridoxamina

oxocido aceptor de NH2

COOH Base de Shiff III

H R2 C COOH N

H C E E

O C H + R2

NH2 CH COOH

enzima-fosfato de piridoxal

aminocido

Base de Shiff IV

DESAMINACION OXIDATIVA Este proceso ocurre en la mitocondria y los grupos NH2 recogidos de los diferentes aminocidos por la accin de las transaminasas, aparecen en el ltimo trmino en forma de grupos -aminos del L-glutamato. En algunas clulas, particularmente en las bacterias, el glutamato experimenta una
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desaminacin oxidativa rpida, catalizada por la glutamato-deshidrogenasa ligada a la piridina.

L-glutamato + NAD+ oxoglutarato + NH+4 + NADH + H+

Descarga as en forma de iones NH 4 , los grupos aminos recogidos de los dems aminocidos. La L-glutamato deshidrogenasa puede usar tambin el NADP como aceptor de electrones, el NADPH as formado, acta como reductor en las reacciones biosintticas. La mayor parte de los organismos tienden a reutilizar el NH 4 formado en el catabolismo de los A.A. recuperndolo.
cetoglutar ato NH4 NADH H glutamato NAD

Glutamato deshidrogenasa

RUTAS QUE CONDUCEN AL ACETIL-CoA

Treonina

Cistina

Glicocola

Cisteina

Serina

Alanina

cido Pirvico

Acetil-CoA

El esquema muestra los portales de entrada por los que penetran en el ciclo de los cidos carboxlicos, los esqueletos carbonados de los diferentes aminocidos. Las rutas de los 20 A.A. dependen del punto de entrada. El punto principal de entrada en el ciclo es por la va del acetil-CoA, diez aminocidos penetran por esta ruta, cinco de ellos se degradan al acetil-CoA por la va del piruvato y los restantes por la del acetoacetil-CoA.

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NH2 CH3 CH OH Treonina Glicocola H2N CH2 COOH CH3 C H acetaldehdo CH COOH

CH

OH

Serinhidroximetil tranferasa NH 2

NAD+ ATP COOH Serina deshidrasa CoA

Serina

CH2 OH

CH

O cido Pirvico CH3 C COOH O CH3 C S CoA NADH + H+ AMP; Pi

Piruvato deshidrogenasa

Acetil CoA

VIA DEL PIRUVATO Los cinco aminocidos que penetran por la va del piruvato son la alanina, la cistena, la glicocola, la serina y la treonina (ejemplo anterior). La alanina rinde directamente piruvato por transaminacin con el -cetoglutarato. En el ejemplo puede verse como se degradan hasta piruvato, la treonina, la glicocola y serina. RUTA DEL -OXOGLUTARATO Los esqueletos carbonados de cinco aminocidos (arginina, histidina, cido glutmico, glutamina y prolina) entran en el ciclo de los cidos tricarboxlicos por la va de -cetoglutarato, cuyo precursor inmediato es el cido glutmico.
Arginina Prolina

Semialdehdo glutmico Histidina cido Glutmico Glutamina

cetoglutar ato

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El esquema muestra las rutas que conducen hasta el distintos A.A. para poder entrar al ciclo de Krebs.

-cetoglutarato de los

RUTA DEL SUCCINATO Los esqueletos carbonados de la metionina, la isoleucina y la valina, se degradan definitivamente, por la va del propionil-CoA y del metilmalonil-CoA, a succinil-CoA que experimenta una desacilacin para dar succinato, intermediario del ciclo de Krebs.
METIONINA

cido

oxobutrico Isoileucina

Propionil-CoA Valina Metilmalonil-CoA

Succil-CoA

RUTA DEL OXALACETATO La asparagina y cido asprtico se incorporan finalmente al ciclo de Krebs en forma de oxalacetato. La asparagina en primer lugar se hidroliza a cido asprtico y amonaco por la accin de la asparaginasa.
Asparagina + H2O cido-aspartico + NH3

El aspartato as formado, experimenta transaminacin con el cido para formar cido oxalactico.
cido aspartico + cido oxoglutarato

-cetoglutarato

cido oxalactico + cido glutmico

De esta manera los cuatro tomos de carbono de estos aminocidos pueden incorporarse al ciclo de Krebs. En las plantas y en algunos microorganismos el cido asprtico experimenta una eliminacin directa de NH3 para dar fumarato, catalizada por la enzima aspartasa, que no se encuentra presente en los tejidos animales.
cido aspartico cido fumrico + NH3

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FORMACION DE PRODUCTOS DE EXCRECION NITROGENADOS La mayora de los vertebrados excretan definitivamente cierta fraccin del amonaco formado en una de estas tres formas: urea, amonaco, o cido rico. El N 2 amnico es excretado por la mayor parte de los vertebrados terrestres en forma de urea. Son organismos designados como ureotlicos. Muchos animales acuticos, tales como los peces telesteos, excretan nitrgeno amnico en forma de NH3 y se les denomina amonotlicos. Los pjaros y los reptiles terrestres, cuyo consumo de agua es limitado, excretan el N 2 amnico en forma de cido rico (en forma semislida) y a estos organismos se los llama uricotlicos. Los anfibios ocupan una posicin intermedia. El renacuajo, cuyos hbitos son acuticos, excreta amonaco, despus de la metamorfosis, durante la cual el hgado adquiere las enzimas necesarias, la rana adulta excreta urea. CICLO DE LA UREA La formacin de urea tiene lugar casi por completo en el hgado de los organismos ureotlicos, es catalizada por un mecanismo cclico denominado ciclo de la urea. Penetran en este ciclo dos grupos aminos que proceden inicialmente de los aminocidos por desaminacin, junto con una molcula de CO 2 y forman arginina a partir de la ornitina, diaminocido homlogo de la lisina. Esta parte del ciclo de la urea tiene lugar en casi todos los organismos capaces de realizar la biosntesis de la arginina pero solamente los animales ureotlicos poseen grandes cantidades de enzima arginasa, que cataliza la hidrlisis irreversible de la arginina para formar urea regenerando ornitina. La urea molcula neutra soluble en H2 O se excreta con la orina.
- NH2 oxoglutarato cido glutmico carbamilfosfato C O NH2 cido asprtico - NH2 arginina arginasa

Grupos -amino

H2N citrulina

C O

NH2

- NH2

ornitina

El primer grupo NH2 que entra al ciclo surge en forma de NH3 libre como consecuencia de la desaminacin oxidativa ligada al NAD del glutamato en las mitocondrias.
cido glutmico + NAD+ cido oxoglutrico + NH3 + NADH + H+

Entonces el NH3 libre es utilizado junto con el CO 2 para formar fosfato de carbamilo en una reaccin compleja, catalizada por la carbamil-fosfato sintetasa.
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O CO2 + NH3 + 2 ATP + H2O H2N C O

O P O

+ ADP + Pi

Fosfato de carbamilo

Se necesitan dos molculas de ATP para formar cada molcula de fosfato de carbamilo que interviene en esta reaccin, la cual es irreversible. El fosfato de carbamilo es un compuesto rico en energa. El fosfato de carbamilo originado en esta reaccin, cede a continuacin, su grupo carbamilo a la ornitina para formar citrulina y fosfato; la reaccin es catalizada por la ornitin-transcarbamilasa. El segundo grupo NH2 penetra despus en el ciclo de la urea, al que llega en forma de aspartato que a su vez lo adquiri del glutamato por accin de la aspartatoglutamato-transaminasa.
cido glutmico + cido oxalactico cido oxoglutrico + cido asprtico

A continuacin el grupo NH2 del aspartato se condensa con el tomo de carbono carbonlico de la citrulina en presencia de ATP para formar argininosuccinato, reaccin catalizada por la arginosuccinato sintetasa. El arginosuccinato es escindido en forma irreversible por accin de la argininsuccinasa, con formacin de arginina y fumarato libre. Hasta este punto la secuencia de la reaccin es empleada por la mayora de las clulas en la biosntesis de la arginasa. Los animales ureotlicos sin embargo poseen arginasa, la cual desdobla, la arginina en urea y ornitina que vuelve al ciclo. La ecuacin global del ciclo de la urea es:
2 NH3 + CO2 + 2 ATP + H2O Urea + 2 ADP + 2 Pi + AMP + PPi

EXCRECION DE AMONIACO Se cree que en los organismos amonotlicos los grupos NH2 derivados a diversos -aminocidos, se transaminan para formar glutamato, que experimenta despus una desaminacin oxidativa mediante la glutamato-deshidrogenasa. El NH3 as formado se convierte despus en N 2 amdico de la glutamina, que es la forma de transporte del NH3 en la mayor parte de organismos. La glutamina se forma por accin de la glutamina-sintetasa, a partir de cido glutmico.
NH2 HOOC CH2 CH2 CH Acido Glutmico COOH + NH3 + ATP Mg++ H2N O C NH2 CH2 CH2 CH Glutamina COOH + ADP + Pi

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La glutamina rinde NH3 libre en los tbulos renales de la mayora de los vertebrados, pero esta reaccin predomina en los organismos amonotlicos. La reaccin es:
Glutamina + H2O Glutamato + NH4+

El NH 4 as formado pasa directamente a la orina. Dado que la glutamina no es txica constituye un medio de transporte eficaz del NH3 .

FORMACION DE ACIDO RICO En los organismos uricotlicos, el cido rico es la forma principal de excrecin de los grupos NH2 de los -aminocidos. Es tambin el producto principal de excrecin del metabolismo purnico en los primates, los pjaros y los reptiles terrestres. La ruta de formacin de cido rico es compleja, puesto que en primer lugar debe formarse el anillo purnico a partir de precursores sencillos.
OH C Amino cidos N C C N N H HO C N C N

NH2

N C

C C

N C C N H H

O2 Xantin oxidasa

Anillo de Purina

Xantina

O H N C O N H C C

H N C C N H O

Acido Urico (forma oxo)

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TEMA XX: BIOSINTESIS DE CARBOHIDRATOS Principales vas de la sntesis de carbohidratos. Formacin de fosfoenol-piruvato a partir de piruvato. Conversin de fosfoenol-piruvato a glucosa. Gluconeognesis a partir de los intermediarios del ciclo de Krebs, de la acetil CoA y de los aminocidos. Hemos visto que la transformacin de la glucosa en piruvato es la senda principal del metabolismo de los carbohidratos en la mayora de las clulas, tanto en condiciones aerobias como anaerobias. El proceso inverso, la conversin del piruvato en glucosa es el camino ms importante. Convergen sobre esta senda central biosinttica otras dos sendas las cuales provienen de dos precursores diferentes que no son carbohidratos. Una de ellas est dada por productos intermedios del ciclo de Krebs, que se transforman en piruvato. Este proceso se denomina gluconeognesis. El otro camino est dado por las reacciones que provocan la reduccin del CO 2 para formar glucosa (es en las clulas fotosintticas). 1.- Formacin de fosfoenol-piruvato La conversin del piruvato en fosfoenol-piruvato no puede realizarse en presencia de la piruvato-quinasa ya que el G 75 kcal . La fosforilacin del piruvato se consigue tanto en el citoplasma como en la mitocondria mediante una secuencia reaccional de rodeo que necesita de la intervencin de varias enzimas. La primera reaccin es la catalizada por la piruvato-carboxilasa (de la mitocondria).
H2O piruvato + CO2 + ATP Acetil CoA + oxalacetato + ADP + Pi

0.5 kcal

La enzima piruvato carboxilasa que se encuentra en la mitocondria necesita de le accin de la acetil CoA para actuar. 2.- El oxalacetato es reducido a malato por el NADH 2
NADH2 + oxalacetato NAD+ + malato

6.7 kcal

3.- El malato formado difunde al citoplasma donde es reoxidado por la forma citoplasmtica de la malato-deshidrogenasa ligada al NAD para formar oxalacetato extramitocondrial.
malato + NAD+ oxalacetato + NADH2

6.7 kcal

Esta reaccin es muy endergnica, se desplaza hacia la derecha porque los productos finales se eliminan rpidamente. 4.- El oxalacetato se transforma en fosfoenol-piruvato por la accin de los fosfoenolpiruvato-carboxiquinasa. En esta reaccin el donador de fsforo es el GTP (o el ITP).
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Mg++ oxalacetato + GTP fosfoenol-piruvato + CO2 + GDP

0.7 kcal

Sumando todas las reacciones, escribimos la ecuacin global, teniendo en cuenta la suma algebraica de los G .
piruvato + ATP + GTP fosfoenol-piruvato + ADP + GDP + Pi

0.2 kcal

Esta reaccin global es reversible, puesto que su variacin de energa libre estndar es muy pequea. Tender a desplazarse a la derecha siempre que el cociente (ATP) / (ADP) tenga un valor elevado y que haya presente un exceso de piruvato. Para fosforilar una molcula de piruvato se consumen dos enlaces de alto valor energtico. Practicando le direccin energtica de la ecuacin, se observa que el proceso endergnico que requiere energa es:
piruvato + GTP fosfoenol-piruvato + GDP

7.5 kcal

Mientras que el proceso que cede energa es:

ATP + H2O ADP + Pi

7.3 kcal

Conversin en glucosa del fosfoenol-piruvato El fosfoenol-piruvato se convierte fcilmente en fructuosa 1 - 6 difosfato por inversin de las reacciones de la gliclisis que comienzan con la enolasa y terminan en la aldolasa.
enolasa fosfoenol-piruvato + H2O (1) 2-fosfoglicerato (2) ATP + 3-fosfoglicerato ADP + 1,3-difosfoglicerato (3) 1-3 difosfo-glicerato + NADH2 gliceraldehdo-3-P (4) dihidroxiacetona-P (5) 3-fosfoglicerato 2-fosfoglicerato

gliceraldehido-3-fosfato + NAD+ + Pi

gliceraldehdo-3-P + dihidroxiacetona-P

fructosa-1-6-di P

(1) fosfoglicerometasa - (2) - fosfoglicerato-quinasa - (3) - gliceraldehdo-3 Pdeshidrogenasa - (4) - triosa-fosfato-isomerasa (5) - aldolasa

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La reaccin siguiente no se realiza en direccin a le sntesis catalizada por la fosfofructoquinasa. Esta reaccin es catalizada por la fructosadifosfatasa.
fructosa-1-6-difosfato + H2O fructosa-6-P + Pi

0.4 kcal

En la etapa siguiente en camino hacia la glucosa la fructosa 6 P se convierte de modo reversible en glucosa 6P por la accin de la fosfohexoisomerasa o fosfoglucoisomerasa.
fructosa 6-P glucosa 6-P

En la mayora de las clulas la glucosa-6-P formada durante la gluconeognesis se emplea como precursor en la produccin de polmeros de reservas como glucgeno, almidn, de otros monosacridos de la glucosa, de disacridos y polmeros estructurales. Sin embargo en determinadas clulas como en el hgado, rin, epitelio intestinal de los vertebrados, la glucosa-6-P puede desfosforilarse y libera glucosa. El hgado constituye la fuente ms importante de la glucosa sangunea. La escisin de la glucosa-6-P; no puede tener efecto por inversin de la reaccin de la hexoquinasa, a causa del gran cambio de energa libre estndar positiva que hay en la direccin de formacin de la glucosa libre.
glucosa-6-P + ADP glucosa + ATP

4.0 kcal

Sin embargo la produccin de glucosa libre es inducida por la glucosa -6-fosfatasa, que cataliza la siguiente reaccin exergnica de hidrlisis.
glucosa-6-P + H2O glucosa + Pi

3.3 kcal

Esta enzima se encuentra de modo caracterstico en el hgado y rin de los vertebrados. Su actividad es dependiente de los lpidos y de la estructura de la membrana. La glucosa-6- fosfatasa no se encuentra en los msculos, ni en el cerebro, por lo que estos rganos no poseen la capacidad de donar glucosa libre.

Resumiendo:
2 piruvato + 4 ATP + 2 GTP + 2 NADH2 + 6 H2O glucosa + 2 NAD+ + 4 ADP + 2 GDP + 6 Pi

Por cada molcula de glucosa que se forma se consumen seis enlaces fosfato de alto valor energtico y se requiere dos molculas de NADH2 como reductor.

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La reaccin global es exergnica.

glucgeno UDP-glucosa UTP glucosa-1-P glucosa libre glucosa-6-P disacridos fructosa-6-P Pi ATP fructosa-1-6 P gliceraldehdo-3-P 3-P-glicerato 2-P-glicerato fosfoenolpiruvato GTP CO2 oxalacetato malato Pi monosacridos

malato oxalacetato piruvato

piruvato

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Gluconeognesis a partir de los intermediarios del ciclo de los cidos tricarboxlicos Dijimos anteriormente que la sntesis de glucosa podra tener varios precursores. Entre ellos los principales son los productos intermedios del ciclo de los cidos tricarboxlicos que pueden experimentar oxidacin a malato. Entonces el malato puede abandonar las mitocondrias y experimentar su oxidacin a oxalacetato en el citoplasma extramitocondrial; donde tiene lugar la formacin de fosfoenol-piruvato por la accin de la fosfoenolpiruvato-carboxiquinasa del citoplasma. Tres tomos de carbono de los distintos intermediarios del ciclo de los cidos tricarboxlicos se convierten, finalmente en tres tomos de carbono del fosfoenol-piruvato. Estos carbonos proceden de los tomos alfa-carboxlicos (alfa-carboxlicos) y beta del oxalacetato. Acido oxalactico.
COOH CH2 C O

COOH

Gluconeognesis a partir de acetil CoA En los tejidos de los animales superiores no hay formacin neta de nueva glucosa a partir de los dos tomos de carbono del grupo acetilo del acetil CoA. Lo que s sucede es que la condensacin de la acetil CoA con el oxalacetato de citrato que al oxidarse para dar fosfoenol-piruvato pierde 3 tomos de C en forma de CO 2 . Se deduce que no puede formar ms glucosa que el oxalacetato. En los tejidos animales la acetil CoA no puede convertirse directamente en piruvato o en succinato. En los animales superiores no existe senda metablica alguna por lo que los tomos de carbono de los cidos grasos puedan ser utilizados para producir nueva glucosa.

Gluconeognesis a partir de los aminocidos Como se ha visto, algunos o todos los tomos de carbono de los distintos aminocidos derivados de protenas son finalmente convertibles en acetil CoA o en intermediarios del ciclo de Krebs. Aquellos aminocidos que pueden servir de precursores del fosfoenol-piruvato y por consiguiente de la glucosa son aminocidos glucognicos. Ej: alanina, arginina, glicina, histidina, valina, prolina, etc. Los aminocidos que por degradacin son capaces de formar acetoacetato se los denomina cetgenos. Ej.: leucina. La fenilalanina y la tirosina constituyen ejemplos de aminocidos que a la vez son glucognicos y cetognicos puesto que por degradacin se escinden para formar cido fumrico (glucognico) y acetil CoA (cetognico).
69

TEMA XXI: BIOSNTESIS DE LPIDOS Biosntesis de cidos grasos saturados. Formacin de malonil CoA. Pasos en la sntesis de cidos grasos. Prolongacin de los cidos grasos saturados en la mitocondria y los microsomas. Biosntesis de triacil-gliceroles. Biosntesis de colesterol. La ruta biosinttica que conduce desde la glucosa a los cidos grasos es importante en la mayora de los organismos. Puesto que la capacidad de los animales superiores para almacenar polisacridos es bastantes limitada la glucosa ingerida en exceso, respecto a las necesidades calricas inmediatas y a la capacidad de almacenaje, se convierte en cidos grasos, y stos a su vez, en triacilgliceroles que pueden almacenarse en grandes cantidades en el tejido adiposo. Constituye otro proceso importante la biosntesis de fosfoglicridos de las membranas, puesto que la mayora de las clulas experimentan un recambio relativamente veloz. Tambin se ver la biosntesis de colesterol. Aunque desde el punto de vista cuantitativo se trata de una va secundaria, el gran nmero de esteroles, biolgicamente activos, que derivan del colesterol le confiere considerable importancia. BIOSINTESIS DE LOS CIDOS GRASOS SATURADOS La sntesis completa de cidos grasos saturados de largas cadenas tiene efecto, solamente en la fraccin soluble del citoplasma. Esta catalizada por un complejo de siete enzimas que se denomina complejo sintetasa de cidos grasos. Los acilderivados intermediarios del proceso no son los tiosteres de la CoA, como en el caso de la oxidacin de los cidos grasos, sino tiosteres de una protena de bajo peso molecular denominado protena transportadora de cil os (o ACP). Esta protena puede formar complejos con las enzimas sintetasas a manera de un racimo.

Malonil transferasa Acil transferasa

Palmitil transferasa

Enzima condensante ( citonil sintetasa) Deshidrogenasa (2 reduccin)

SH (resto fosfopantotenil con grupo SH terminal que enlaza los intermediarios aclicos)

Deshidratasa

Deshidrogenasa (1 reduccin)

SH (resto SH perteneciente a la protena transportadora de grupos acilos)

70

La malonil CoA es el precursor inmediato de 14 de los 16 tomos de carbono del cido palmtico; se forma a partir de la acetil-CoA citoplasmtica (que deriva de la acetil-CoA mitocondrial) y del CO 2 por la accin de la acetil-CoA-carboxilasa.

O CH3 C SCoA + CO2 + ATP

biotina HOOC Mn
++

O CH2 C S CoA

El CO2 se convierte en el carbono carboxlico libre distal de la malonil CoA. Los grupos acilos de la acetil-CoA y de la malonil CoA son transferidos al grupo tiol de la ACP por accin de dos enzimas acil-transferasa y malonil-transferasa.
O SH + CH3 C SCoA acil transferasa S O C CH3 + HSCoA

SH O S C CH3 + COOH CH2 O C SCoA

SH O malonil transferasa S C CH3 + HSCoA

SH

S C CH2 COO H O

Acetil-S-ACP y malonil-S-ACP reaccionan entre s de manera que el grupo acetilo del primero pasa a formar los carbonos 3 y 4 del grupos acetoacetilo, con desplazamiento del CO 2 .

71

SH + CO2

condensante

S C CH2 C CH3 O O

La acetoacetil-S-ACP se reduce por accin del NADPH.

SH NADPH+ + H+ S C CH2 C CH3 O H O NADP S C CH2 C CH3 OH O

SH

SH NADPH+ + H+ deshidratasa H2O S C CH CH CH3 crotonil-S-ACP O NADP

deshidrogenasa

Hidroxibutiril - S- ACP

SH acil transferasa O SH

S C CH2 CH2 CH3 O

S C CH2 CH2 CH3

butiril-S-ACP

72

La formacin de butiril-S-ACP completa el primer ciclo, el cual se repite seis veces ms en el cual una molcula de malonil-S-CoA se incorpora a la ACP para dar malonil-S-ACP la cual experimenta prdida de CO 2 y condensacin con el acilo graso que se encuentra en el otro brazo. De sta manera el producto es el cido palmtico de 16 tomos de carbono. Al final del ciclo se libera la ACP por la accin de una desacilasa hidroltica.

SH + CH3

(CH 2)14

COOH

cido palmitico

SH

Las reacciones enzimticas de la sntesis de cidos grasos difieren de la oxidacin en: Su localizacin dentro de la clula. En el portador de grupos acilos. En la forma en que las unidades de dos tomos de carbono se adicionan o eliminan. El NADPH necesario en la reduccin proviene de la va del fosfogluconato. PROLONGACION DE LOS ACIDOS GRASOS SATURADOS EN LAS MITOCONDRIAS Y LOS MICROSOMAS El cido palmtico que es el producto final normal del sistema de la sintetasa de los cidos grasos del citoplasma, puede prolongarse mediante dos tipos diferentes de sistema enzimticos: el de las mitocondrias y del retculo endoplasmtico. En las mitocondrias los cidos grasos saturados de 12 a 16 tomos de carbono, en forma de steres de la CoA, se alargan por adiciones sucesivas de acetil-CoA. La ruta mitocondrial se realiza por inversin de las mismas etapas implicadas en la oxidacin, con excepcin de la reduccin del doble enlace que conduce al cido graso saturado, que se verifica a expensas del NADHP como reductor, y no de la flavoprotena. El sistema mitocondrial es capaz de alargar tambin los cidos grasos no saturados. En los microsomas tanto los steres de cidos grasos saturados, como los de los no saturados pueden prolongarse, pero en este caso es la malonil-CoA la fuente de grupos acetilos.

FORMACION DE ACIDOS MONOENOICOS (con doble enlace) Los precursores de los cidos grasos monoenoicos son el:

73

Acido palmtico (C16)

Acido Esterico (C18)

Acido palmitoleico (

Acido oleico (

Aunque la mayora de los organismos tienen capacidad para formar cido palmitoleico y cido oleico, la ruta y el mecanismo utilizado dependen si el organismo es anaerobio o aerobio. En los organismos aerobios los dobles enlaces son introducidos por una oxigenasa especfica localizada en la fraccin microsmica, especialmente del hgado y del tejido adiposo. No se conocen detalles completos del mecanismo enzimtico, pero se sabe que se utiliza la molcula de oxgeno como aceptor de dos pares de electrones, uno de los cuales procede del sustrato acil-CoA y el otro del NADPH, que se requiere en la reaccin.
palmitol-CoA + NADPH + H+ + O2 1 par 1 par palmitolel-CoA + NADP+ + 2 H2O

FORMACION DE ACIDOS POLIENOICOS Todos los cidos polienoicos se forman a partir de cuatro precursores: 1.- Acido palmitoleico 2.- Acido oleico 3.- Acido linoleico 4.- Acido linolnico Los cuales sufren ulterior alargamiento y/o desaturizacin. Los cidos linoleicos y linolnicos no pueden ser sintetizados por los mamferos quienes tienen que tomarlos de fuentes vegetales por esta razn se denominan cidos grasos esenciales. BIOSINTESIS DE TRIACIL GLICEROLES (TAG) Los TAG, que actan como lpidos de depsito o de almacenamiento, son activamente sintetizados por las clulas hepticas y adiposas de los mamferos. Para la sntesis se requieren dos precursores principales: 1.- Glicerol 3-fosfato 2.- Acil CoA graso El glicerol 3-fosfato procede de dos fuentes: 1.- Dihidroxiacetona-fosfato que se produce en la gliclisis.
Dihidroxiacetona-fosfato + NADH + H+ glicerol-3-fosfato + NAD+
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2.- Tambin puede formarse por la accin de la gliceril-quinasa

ATP + glicerina glicerol-3-fosfato + ADP

ETAPAS DE LA BIOSINTESIS - Primera etapa: Acilacin de los grupos oxidrilos libres del glicerol-3-fosfato por dos molculas de acil-CoA graso, produciendo un cido fosfatdico.
O CH2 OH CH OH CH2 O + 2 R CH2 O O C S CoA CH O C R O C R' + 2 HSCoA

PO 3H2

CH2 O

PO 3H2

- Segunda etapa: El cido fosfatdico experimenta una hidrlisis por accin de una fosfatasa especfica formando diacilglicrido.
O CH2 O CH O C O C R' + H2O CH O R CH2 O O C O C R' + Pi R

CH2 O

PO 3H2

CH2 OH

- Tercera etapa: El diacilglicrido reacciona con una molcula de acil-graso CoA dando triacilglicerol.
O CH2 O CH O C O C R' + R'' R O C S CoA CH O CH2 O O C O C O CH2 OH CH2 O C R''' R'' + HSCoA R'

BIOSINTESIS DE FOSFOGLICERIDOS Los principales fosfoglicridos que sirven como componentes de las membranas y las lipoprotenas de transporte se forman por ramificaciones de la ruta biosinttica a partir del cido fosfatdico. Adems intervienen los nucletidos citidnicos. Todas estas reacciones tienen lugar en el retculo endoplsmico. 1) El cido fosfatdico con el CTP se convierte en citidn-difosfato-diacilglicrido que es el precursor comn de todos los fosfoglicridos formados por sta ruta.
Acido fosfatdico + CTP citidn-difosfato-diacilglicrido + PPi
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Su porcin CMP puede considerarse la portadora del cido fosfatdico. En las reacciones subsiguientes, cada una de las cuales es catalizada por una enzima especfica la porcin CMP es desplazada por los alcoholes: serina, inositol, fosfato de glicerilo.
O CH2 CH CH2 O HO P O HO P O CH2 H H OH OH O H citosina O O O C O O C R' R

1). CDP - diacilglicrido + serina 2). CDP - diacilglicrido + inositol 3). CDP - diacilglicrido + glicerol-fosfato CMP

fosfatidil-serina + CMP fosfatidil inositol + CMP fosfatidil-glicerol-fosfato +

La descarboxilacin enzimtica del resto de la serina de la fosfatidilserina conduce a la formacin de la fosfatidil-etanolamina. La fosfatidil-etanolamina es precursora de la fosfatidil-colina, la cual se forma por transferencia de tres grupos metilos. El fosfatidil-gliceril-fosfato es precursor de dos lpidos. Por desfosforilacin rinde fosfatidil-glicerina que es uno de los componentes de la membrana celular de muchas bacterias. El fosfatidil-gliceril-fosfato con una segunda molcula de CDP diacilglicrido rinde cardiolipina.

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Acido fosfatdico CTP

ina Ser

CDP - diacilglicrido Inositol

Fos fato de glice rilo

Fosfatidil-serina CO2 Fosfatidil-etanolamina 3 CH3-

Fosfatidil-inositol

Fosfatidil-glicerol-fosfato Pi Fosfatidil-glicerina + CDP-diacilglicrido

Cardiolipina Fosfatidil-colina

BIOSINTESIS DE COLESTEROL Comprende tres etapas: 1.- Conversin de acetato en cido mevalnico 2.- Conversin de cido mevalnico en escualeno 3.- Conversin de escualeno en colesterol. 1). Conversin de acetato en cido mevalnico: El cido mevalnico tiene seis tomos de carbono por lo que se forma por condensacin de tres molculas de acetil-CoA.
Acetil CoA + acetoacetil CoA NADPH2 hidroxi metil - glutaril CoA + CoA

hidroxi -

metil - glutaril CoA

cido mevalnico + NADP + HSCoA

2). Conversin de cido mevalnico en escualeno: El cido mevalnico es fosforilado por el ATP y se convierte en cido-3-fosfo-5pirofosfomevalnico.
CH3 COO H CH2 C O HO P O OH CH2 CH2 O OH P O O OH P O OH

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El compuesto es muy inestable pierde H3PO 4 y se descarboxila dando isopentenil-pirofosfato que se isomeriza y d el 3-3'-dimetil-alil-pirofosfato.
CH2 C CH3 CH2 CH2 O OH P O O OH P O OH

CH3 C CH3 CH CH2 O

OH P O O

OH P O OH

Estos dos compuestos se condensan con prdida de PPi dando geranil-pirofosfato.

geranil-pirofosfato + isopentenil pirofosfato - PPi farnesil pirofosfato

El cual experimenta condensaciones reductoras y conducen al escualeno. 3). Conversin de escualeno en colesterol El escualeno sufre un ataque del oxgeno formando el 2-3 epxido, el cual sufre una ciclizacin a lanosterol en el cual se producen desplazamientos electrnicos con el cierre de los cuatro anillos y formacin de colesterol.-

78

TEMA XXII: BIOSNTESIS DE LOS AMINOACIDOS La biosntesis de los aminocidos a partir de precursores sencillos, es vital para todas las formas de vida, puesto que los aminocidos son los precursores de las protenas. Sin embargo los organismos vivos difieren considerablemente en lo que se refiere a las formas de N 2 que son capaces de utilizar con dicha finalidad. Los animales superiores pueden utilizar NH3 como fuente de N 2 para la sntesis de aminocidos no indispensables, pero son incapaces de utilizar, nitritos y nitratos o N 2 . Los rumiantes pueden utilizar los nitritos y nitratos pero solo despus que las bacterias de su panza los reducen a NH3 . Las plantas superiores pueden producir todos los aminocidos requeridos para la sntesis de protenas, a partir tanto de NH3 como de nitratos, como fuentes de N 2 . Pueden utilizar el NH3 como tal o despus de su oxidacin a nitrato por accin de las bacterias del suelo. Las leguminosas son capaces de fijar N 2 atmosfrico como NH3 por accin de las bacterias que se encuentran en sus ndulos radiccolas. Los microorganismos difieren ampliamente en cuanto a su capacidad de efectuar sntesis de aminocidos. Algunos no pueden crecer si no se le suministran algunos aminocidos ya formados. Otros como E.Coli pueden obtener todos sus aminocidos a partir de NH3 . Los veinte aminocidos se sintetizan gracias a unas secuencias polienzimticas, algunas de las cuales son extremadamente complejas como es el caso en las mayora de las vas biosintticas, las sendas de las sntesis aminocidas son, en su mayor parte, diferentes a las seguidas en sus degradaciones. Por una parte los aminocidos sirven no slo como bloques de montajes en la sntesis de protenas sino tambin como precursores de muchas biomolculas que poseen gran variedad de funciones especializadas. Es frecuente que las rutas de sntesis y degradaciones aminocidas incluyan ciertas ramificaciones o extensiones conducentes a la formacin de tales productos especializados. Ya hemos visto que las formas biolgicas de N 2 disponibles son relativamente escasas en los ambientes inanimados, porque el proceso de fijacin de N 2 atmosfrico est circunscrito a unos pocos organismos Adems las propias sntesis de las enzimas que catalizan la formacin de los aminocidos se hallan tambin bajo control, tales sntesis pueden resultar reprimidas, si la clula dispone de un suministro exgeno de aminocido. Ambas formas de regulacin constituyen el reflejo de una intrnseca economa celular que prevalece en la sntesis y en la utilizacin de los aminocidos.

BIOSINTESIS DE LOS AMINOACIDOS NO ESENCIALES: Se definen a stos como aquellos aminocidos que pueden ser sintetizados por la rata albina. Conviene considerar en primer lugar este grupo de aminocidos, porque la mayora de los organismos pueden realizar su sntesis. Adems este grupo se distingue porque sus rutas biosintticas son ms bien cortas y muestran variaciones relativamente pequeas de unas especies a otras.

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BIOSINTESIS DE ACIDO GLUTAMICO, GLUTAMINA Y PROLINA: Las rutas biosintticas de estos aminocidos que estn ntimamente relacionados son idnticas en todas las formas de vida. Los tres se degradan por sendas que conducen al cetoglutarato, y los mismos caminos que se emplean para su sntesis. El cido glutmico se forma desde luego a partir de NH3 y de cido cetoglutrico por accin de la L-glutamato ~ deshidrogenasa.
NH3 + cido oxoglutrico + NADPH + H+ cido L-glutmico + NADP+

Esta reaccin es de importancia fundamental en la biosntesis de cualquier aminocido en todas las especies, pues se trata de la ruta primaria sino la nica de formacin directa de grupos amino a partir de NH3 . La transaminacin de los cidos -ceto con el cido glutmico como donador de grupos NH2 , constituye la senda principal de introduccin de grupos -amino en la biosntesis de la mayora de los aminocidos. La Glutamina se forma a partir del cido glutmico por la accin de la glutamina ~ sintetasa.
NH3 + cido glutmico + ATP Glutamina + ADP + Pi

Esta reaccin es bastante compleja e implica dos o ms etapas intermedias. Se ha observado que el ~glutamil fosfato acta como intermediario de alta energa ligado a la enzima.
O C CH2 CH2 H C COOH
ATP + Acido glutmico ADP + glutamil~fosfato

OH O P O OH

cido NH2

glutamil-fosfrico

glutamil~fosfato

+ NH3

glutamina + Pi

La prolina se sintetiza a partir de cido glutmico por inversin de la ruta metablica, antes descrita para la oxidacin de la prolina. Los restos de hidroxiprolina que se encuentran en el colgeno y en otras protenas fibrosas, se forman a partir de determinados restos de prolina de esas protenas por accin de la prolin-hidroxilasa. Esta oxigenasa de funcin mixta utiliza el cetoglutarato como correductor y el oxgeno corno aceptor electrnico. En la
80

reaccin se requieren Fe y cido ascrbico como cofactores. Sin embargo la prolin-hidroxilasa no transforma la prolina libre en hidroxiprolina.
NH 2 OH-C-CH 2-CH 2-CH-COOH O Acido Glutmico NADH NH2 H C O CH2 CH2 CH COOH semialdehdo glutmico
2

inhibicin

H2C HC N NADH 2 H2C H2C N H Prolina

CH2 H C COOH Acido 1~pirroln 5 carboxlico

CH2 H C COOH

BIOSINTESIS DE ALANINA: ACIDOS ASPARTICO Y ASPARAGINA: En muchos organismos la alanina y el cido asprtico se forman por transaminacin de cido pirvico y del cido oxalactico respectivamente. ALANINA
O CH3 C COOH + HOOC NH2 CH2 CH2 C H Acido pirvico Acido glutmico COOH NH2 CH3 C H Alanina COOH + HOOC O CH2 CH2 C COOH

cetoglutarato

ACIDO ASPARTICO
O HOOC CH2 C COOH + Acido glutmico HOOC NH2 CH2 C H Acido Asprtico COOH + Acido -oxoglutmico

Acido oxalactico

En algunas plantas estos dos compuestos se producen por Aminacin reductora. El

81

cido Asprtico es el precursor directo de la asparagina. En muchos organismos sta se forma por una reaccin similar a la catalizada por la glutamin-sintetasa.
NH2 HOOC CH2 C H Acido Asprtico COOH + NH3 + ATP O NH2 C CH2 NH2 C H Asparagina COOH + ADP + Pi

TIROSINA Aunque la Tirosina es un aminocido no indispensable, su sntesis requiere el aminocido esencial feniIalanina, como precursor. La tirosina se forma a partir de la fenilalanina por una reaccin de hidroxilacin catalizada por la fenil-alaninhidroxilasa. La cual como hemos visto participa de la degradacin de la fenilalanina.
Fenilalanina + NADPH + H+ + O2 Tirosina + NADP+ + H2O

BIOSINTESIS DE AMINOACIDOS ESENCIALES Las sendas de la sntesis de los aminocidos esenciales se han deducido en gran parte, de estudios bioqumicos y genticos practicados con bacterias. En general los caminos son idnticos en la mayora de las especies bacterianas y plantas superiores. Sin embargo en algunos casos se observan diferencias de especie en algunas etapas individuales. Las sendas que llevan a la biosntesis de los aminocidos esenciales son ms largas que las que llevan a la sntesis de los no esenciales. Tambin son ms complejas posiblemente porque varios intermediarios sirven tambin como precursores de muchas otras clases de biomolculas. BIOSINTESIS DE METIONINA Y TREONINA Estos dos aminocidos esenciales tienen un denominador comn: sus esqueletos carbonados proceden de la homoserina. Anlogo de la serina con cuatro tomos de carbono. A su vez la cadena de carbonos de la homoserina deriva del esqueleto del cido asprtico, luego de una serie de reacciones que no tienen lugar en los mamferos. El camino metablico de la reduccin del grupo -carboxlo de cido asprtico al correspondiente aldehdo se parece a la reduccin de 1-3 difosfoglicerato al 3 gliceraldehdo-fosfato de la ruta de la gliclisis. La homoserina formada en la primera etapa se fosforila a fosfato de homoserina mediante una reaccin que requiere ATP. El fosfato de homoserina se convierte en Treonina por accin de la Treonnsintetasa, enzima que requiere fosfato de Piridoxal. En esta reaccin se elimina cido fosfrico de los carbonos 3 y 4, se obtiene as un
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doble enlace 3,4 que se isomeriza a la posicin formar Treonina.

2,3

y despus se hidrata para

SINTESIS DE TREONINA
O COOH CH2 H C ATP ADP C CH2 H C NH2 O OH P O H OH NADH NAD+ C O CH2 C NH2 H H NADH NAD+ CH2 OH CH2 C NH2

apartil NH2 quinasa

COOH Acido asprtico

COOH aspartil fosfato

COOH Semialdehdo asprtico

COOH Homoserina

OH ATP ADP CH2 CH2 C N O P O CH ENZ. OH - Pi Complejo enzimtico -homoserin-fosfato

CH2 CH C N CH ENZ.

H+

COOH

COOH CH3 H
+

CH3 H2O N CH ENZ. H H C C OH N CH ENZ. H2O H H

CH3 C C OH + O NH2 CH ENZ.

CH C

COOH

COOH

COOH Treonina

Se cree que la secuencia completa tiene lugar con el grupo NH2 del sustrato unido al grupo aldehdo del fosfato de piridoxal de la enzima como una base de Schiff, en ste complejo el tomo de H2 es lbil. El producto final de la secuencia, la treonina, es un inhibidor modulador de la primera enzima del sistema que es la enzima regulador aspartil-quinasa. METIONINA La conversin de la homoserina en metionina comienza con la formacin enzimtica de la O~succinil homoserina por transferencia de un grupo succinilo del succinil-CoA. En la reaccin siguiente se forma cistationina a partir de la O succinil-homoserina y de la Cistena la cual, a su vez escinde, para dar homocistena cido pirvico y NH3 . La Cisitationina puede experimentar dos tipos de escisin, uno a cada uno de los lados del tomo de azufre, as puede servir como intermediario de la conversin de Metionina en Cistena en los mamferos y de la transformacin de Cistena en Metionina en las plantas y bacterias.

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O CH2 OH CH2 H C NH2 H Succinil CoA CH2 O CH2 C C CH2 NH2 CH2 COOH H Cistena CH2 CH2 C NH2 S H CH C NH2

COOH

COOH Homoserina

COOH

COOH Cistationina

O succinil - homoserina

CH3 SH Piruvato + NH2 H CH2 CH2 C NH2 DA ~ Cobalanina N ~ Metil tetrahidroflorato

5

S CH2 CH2 H C NH2

COOH Homocisteina

COOH Metionina

La metilacin de la Homocistena a Metionina en E. Coli tiene lugar por transferencia del grupo Metilo de N5 metil tetrahidrofolato.
N5 metil tetrahidrofolato + homocistena D. A. ~ Cobalamina tetrahidrofolato + metionina

En esta reaccin se requiere Desoxiadenosilcobalamina, coenzima que contiene vitamina B12 , su accin como portador de grupo metilo ( CH3 ) del N5 metiltetrahidrofolato el cual puede provenir originalmente de varios donadores de grupos ( CH3 ) metilo, tales como la colina o la 5-adenosil-metionina. A su vez, la homocistena es uno de los posibles aceptores de grupos ( CH3 ) metilo. Funciones Precursoras de los Aminocidos: Biosntesis de Porfirinas Los aminocidos son precursores de muchas biomolculas (aparte las protenas) que ejercen importantes funciones biolgicas, tales como hormonas, vitaminas, coenzimas, alcaloides, porfirinas, antibiticos, pigmentos y sustancias neurotransmisoras. Es digno de mencin especialmente, el hecho de que los aminocidos cromticos, sean los principales precursores de buen nmero de alcaloides entre ellos la morfina, la codena, y la papaverina, as como de muchas otras sustancias con intensa actividad biolgica, tales como la hormona tiroxina, la hormona de crecimiento vegetal: cido indolactico, el poderoso vasocontrictor neurohumoral: serotonina y las hormonas catecolamnicas: epinefrina y norepinefrina. Los aminocidos son precursores de pequeos pptidos, como el glutatin y de las hormonas pptidas, como la bradiquinina, oxitocina y la vasopresina. El pptido glutation se sintetiza segn las siguientes reacciones:
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Acido glutmico + Cistena + ATP Glutamilcistena + Glicina + ATP

Mg++ Glutamilcistena + ADP +P Glutatin + ADP + Pi

i

La biosntesis de las Porfirinas cuyo principal precursor es la Glicina requiere especial atencin por la importancia central del ncleo porfirnico en la funcin de la hemoglobina, de los citocromos y de la clorofila. Los tetrapirroles se construyen a partir de cuatro molculas del derivado monopirrlico Porfobilingeno, que a su vez se sintetiza segn las siguientes etapas:
COOH CH2 + CH2 C O Succinil~CoA S CoA COOH Glicina H CH2 C O C NH2 CH2 C O CH2 NH2 Acido amino levulnico CH2 NH2 HSCoA COOH CH2 COOH COOH CH2

COO H Acido amino oxoadpico

En la primera reaccin la glicina reacciona con el succinil-CoA para dar cido amino oxoadpico quien luego se descarboxila para dar cido amino-levulnico reaccin que es catalizada por la amino~levulnico~sintetasa; enzima que requiere fosfato de piridoxal y se encuentra en el retculo endoplsmico de las clulas hepticas. Luego dos molculas de amino-levulnico se condensan para formar porfobilingeno bajo la accin de la aminolevulnico deshidrasa.
COOH CH2 H C C CH2 NH2 H O H + COOH HOOC CH2 2 H2O CH2 C C N H O CH2 C H NH2 H H Porfobilingeno N C H CH2 C CH2 COOH CH2 C

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Como precursores de la Protoporfirina actan cuatro molculas de porfobilingeno, a travs de una serie compleja de reacciones, la primera de las cuales la cataliza la porfobilingeno~desaminasa. Algunas de las etapas de la serie permanecen an oscuras. El hierro no se incorpora hasta que se ha completado la molcula de la protoporfirina. Esta incorporacin requiere una enzima, la hemo-sintetasa o Ferroquelatasa que est localizada en las mitocondrias.
CH3 HOOC CH2 C CH2 C N NH2 H Porfobilingeno CH2 COOH CH2 C C H CH2 CH2 COOH C C H HC C C CH2 CH2 COOH Protoporfirina IX C C CH3 CH C C CH CH2 CH3 C CH C N H H N C C H C C CH3 CH C C CH CH2

La degradacin de la protoporfirina IX, conduce a la bilirrubina y a biliverdina, que son pigmentos segregados en la bilis.

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TEMA XXIII: BIOSINTESIS DE LOS MONONUCLEOTIDOS Biosntesis de los nucletidos de purina. Vas del cido inosnico hacia los cidos adenlico y guanlico. Biosntesis de los nucletidos de pirimidina. La biosntesis de ribonucletidos y desoxiribonucletidos es un proceso vital ya que estos compuestos son precursores directos del ADN y del ARN as como de las coenzimas nucleotdicas. Las rutas metablicas de formacin de sus bases (pricas y pirimidnicas) tienen una importancia central. Biosntesis de nucletidos purnicos : Origen biosinttico de los tomos del anillo purnico. Proviene de los experimentos realizados por Bucherer quin administr a animales precursores marcados y luego determin los sitios del ncleo purnico a los que se haban incorporado los tomos marcados. Esta experiencia se realiz en aves, que excretan el N 2 en forma de cido rico que es un derivado de las purinas. cido rico:
CO 2
7

Glicina

C
6

N
5

Aspartato

C C Formiato

Formiato

C
2

C
4

N
3

N
9

amida de la glutamina

Construccin del ncleo prico:

N9 NH2 de la glutamina aminotransferasa PP cido glutmico NH 2 R P fosforibosilamina OH H H glicina ATP

ADP + P

O P P O CH2 H H

OH OH fosforibosilpirofosfato (FRPP)

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C4 y C5

N7 NH2

C8 NH "CHO" CoF CH2 CHO C NH O P R P glutamina cido glutamnico

CH C NH O R

glicinamida ribtido

formil - glicinamida ribtido

N3 N1 N CH CH C NH2 N R P Acido asprtico CO2 NH2

O C CH

C6 N "CHO" CH CoF

NH2

N R P

5 aminoimidazol ribtido

5 aminoimidazol 4 carboxamida ribtido

O C NH

C2 N CH

CH N N

R P Inosina 5' - fosfato Acido Inosnico IMP

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Vas del cido inosnico hacia los cidos adenlico y guanlico

O H N N

IMP (H+ inosnico)

N R P aspartato GTP GDP + Pi H HOOC

NAD [O] NADH2 O H N N

CH2 C NH

COOH

N H

N R P

N glutamina H+ glutmico H+ Xntico

N R fumarato P

aspartato AMP

ATP

AMP + PP

O NH2 H N N H NH2 N N N R P R GMP (H+ guanlico) AMP (H+ adenlico) P N N N

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Vas de la biosntesis de nucletidos purnicos:

ATP Ribosa 5 P AMP 5 P Ribosil PP base prica Pi

Nucletido

Ribosa 1 P

base prica Pi

Nuclesido

ATP

AMP

Nucletido

Biosntesis de GDP, GTP y ADP, ATP:

GMP + ATP GDP + ATP AMP + GTP ADP + GTP GDP + ADP GTP + ADP ADP + GDP ATP + GDP

Regulacin de la sntesis de Nucletidos Purnicos:

E PRPP 5 fosforibosilamina H+ inosnico

AMP

ADP

ATP

GMP

GDP

GTP

En este caso el exceso de ATP, ADP o AMP o de GTP, GDP o GMP producen una inhibicin a nivel de la enzima que cataliza la reaccin entre el fosforibosilpirofosfato y la 5 fosforibosilamina, por lo tanto se frena la secuencia metablica y se inhibe la biosntesis. Es un caso de retroalimentacin negativa. Biosntesis de Nucletidos de Pirimidina Es una ruta similar a la de los nucletidos purnicos, pues las bases libres no son productos intermedios. Esta ruta es ms simple y se diferencia en que la D-Ribosa se acopla despus que se ha formado el anillo pirimidnico. El precursor es el cido Ortico.
O C H N C O N
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C C

H COOH

cido ortico

Acido Asprtico

carbamil PO4 PO4

H2O
Acido Carbamil Asprtico Dihidrotasa

NAD Acido Dihidrtico NADH2 Acido Ortico

PRPP

PP Acido Orotidlico OMP

fosforibosil-tr ansferasa

CO2 Acido Uridlico OMP descarboxilasa UMP (uridin monofosfato)

UMP + ATP UDP + ATP

UDP + ADP UTP + ADP

Biosntesis de CTP (citidin trifosfato)

O C H N C O N R P P P C C H + H O NH3 C N R P P P C H ATP ADP + Pi N NH2 C C H

triofosfato de uridina (UTP)

triofosfato de citidina (CTP)

En Escherichia Coli (bacteria) el que dona el grupo NH2 es el NH3 libre. En los mamferos es el grupo amino de la glutamina. Regulacin de la biosntesis de nucletidos de pirimidina Cuando hay un exceso de UTP y de CTP este exceso determina la inhibicin de la aspartato carbamil transferasa, enzima que inicia la ruta de biosntesis, por lo tanto se produce el fenmeno de retroalimentacin negativa o feed-back.
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Acido Asprtico aspartato carbamil transferasa Acido carbamil Asprtico

UMP

UTP CTP

Biosntesis de desoxi-TMP (timidn-monofosfato)

O C H N C O N desoxi R P (dUMP) CH CH H H O N5; N10.Metilen Tetrahidrofolato FH2 Dihidrofolato H N C N desoxi R P (d-TUMP) O C C C CH3 H

Reacciones fosfotransfersicas:
ATP + d ADP ATP + d CDP ATP + d TDP ATP + d GDP ADP + d ATP ADP + d CTP ADP + d TTP ADP + d GTP

Los precursores del ADN (cido desoxiribonuclico) son desoxi-ribonucletidos. Los precursores del ARN (cido ribonuclico) son ribonuclotidos.

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TEMA XXIV: NATURALEZA, ESTRUCTURA Y REPLICACION DEL MATERIAL GENETICO Evidencias de que el ADN es el material gentico. Estructura del ADN: Ley de Chargaff, estudios de difraccin con rayos X. Modelo de Watson y Crick. El dogma central de la Biologa Molecular. Replicacin del ADN: replicacin semiconservativa. La gentica estudia la transmisin hereditaria y la variabilidad de los caracteres de los organismos. En este captulo veremos las bases bioqumicas de algunas cuestiones centrales, que plantea la continuidad gentica y la evolucin de los organismos vivos. Cul es la naturaleza molecular del material gentico y de sus unidades fundamentales, los cromosomas, los genes, los smbolos de cdigo? Cmo se replica la informacin gentica para pasar de una generacin a otra? Cmo se transcribe la informacin en la clula? Cmo se traslada la informacin gentica a la secuencia de aminocidos de las molculas proteicas? Los extraordinarios avances en el conocimiento de la base molecular de la gentica han provocado una revolucin intelectual en biologa, que se considera comparable a la que comenz con la teora de Darwin sobre el origen de las especies. Todos los campos de la biologa han resultado profundamente infludas por tales avances, de tal modo que en la actualidad no se puede estudiar problema bioqumico alguno prescindiendo de su fondo gentico. El conocimiento actual de la base molecular de la gentica deriva de los avances realizadas en tres campos cientficos diferentes: la gentica, la bioqumica y la fsica molecular. A. En el campo de la gentica, qu progresos hubieron? Al principio el nico medio de llevar a cabo anlisis genticos consista en realizar experiencias con apareamientos debidamente orientados, es decir ya teniendo un conocimiento de los resultados de la reproduccin sexual. Experiencias de esta clase presenta grandes limitaciones en cuanto al tiempo de generacin que es relativamente grande y el nmero de descendientes que es relativamente pequeo. Supongamos por ejemplo, que se investigan fenmenos genticos utilizando cobayos como animales de experimentacin. Se eligen progenitores apropiados y se identifican por anticipado los caracteres de la descendencia. El perodo de gestacin es de 10 semanas y el nmero de descendientes es de 2 a 4. Con este nmero de descendientes se revela una pequea parte de los rasgos potenciales capaces de ser transmitidos por los padres y para estudiar la reproduccin de los descendientes hay que esperar que los cobayos alcancen la madurez sexual. El desarrollo de la gentica microbiana ha aportado un gran avance. Los microorganismos y particularmente las bacterias se multiplican rpidamente (algunos a intervalos de 15'). Otro progreso experimental que es el uso de rayos X y otros agentes mutagnicos, que incrementan la velocidad de mutaciones espontneas. MUTACION: alteracin de un gen que puede ser espontnea o inducida (rayos X, radiacin U.V., etc.
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Como las propiedades de la clula estn controladas por genes los caracteres pueden cambiar por mutacin. De esta manera se pudo conocer la secuencia de los genes en los cromosomas y saber que los genes poseen un gran nmero de locus que pueden experimentar mutacin; y que qumicamente estn constituidos por cido desoxiribonuclico. Pero el desarrollo ms importante en el campo de le gentica fue: La enunciacin de la hiptesis de "un gen - una enzima", por Beadle y Tatum que dice que los genes se expresan a travs de protenas, por lo tanto, las mutaciones darn origen a protenas alteradas. El descubrimiento de Avery y Col, que demostraron que el ADN contiene la informacin gentica. B. En el campo de la bioqumica, muchos avances experimentales importantes se hicieron posibles gracias a la mejora de mtodos cromatogrficos, que hicieron posible el anlisis cuantitativo de la composicin aminocida y de la secuencia de las protenas y mostraron que le secuencia vara segn funcin de la protena. Tambin se lleg a establecer la composicin y estructura covalente de los cidos nucleicos.Uno de los desarrollos ms significativos consisti en el descubrimiento de la equivalencia de ciertas bases del ADN que se convirti en un elemento importante para deducir su estructura tridimensional. C. En el campo de la fsica molecular la aplicacin de difraccin de rayos X a la conformacin de molculas de protenas fibrosas y globulares llev al concepto de que cada tipo de molcula proteica posee una conformacin especfica, que determina su funcin biolgica. Pero el hecho fundamental fue la aplicacin de los rayos X al anlisis de la estructura tridimensional del ADN. En 1953 Watson y Crick postularon una estructura de doble hlice para el ADN que sugiri un mecanismo sencillo por medio del cual la informacin gentica puede transferirse de la clula progenitora a la clula hija. La hiptesis de Watson y Crick fue pronto ampliada y extendida hasta llegar a lo que Crick denomin el dogma central de la gentica molecular, el cual establece que la informacin gentica fluye del ADN al ARN y de ste a las protenas; relacin frecuentemente simbolizada as:
ADN ARN protenas

El dogma central defini tres procesos principales de la preservacin y transmisin de la informacin gentica. 1. Rplica, es decir, la copia del ADN con formacin de molculas hijas idnticas. 2. Transcripcin, por el cual el mensaje gentico del ADN es transcripto en forma de ARN para ser llevado a los ribosomas. 3. Traduccin, por la cual el mensaje gentico es descifrado y convertido en el alfabeto de 20 letras de la estructura proteica. Evidencias de que el ADN es el material gentico Aunque el ADN se descubri en los ncleos celulares en 1.869, no se identific como portador directo de la informacin gentica hasta 1.943. Avery y Col hallaron que una cepa no virulenta de la bacteria Pneumococcus puede transformarse de modo hereditario, en una cepa virulenta por simple adicin de un
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ADN extrado de un neumococo virulento. Lo que sucede es que el ADN se incorpora covalentemente al ADN de la clula receptora donde se replica con la clula husped. De especial significacin son los experimentos de Hershey y Chase. Marcaron el ADN de las partculas vrales e incubaron con la clula husped mientras que la protena viral no. En 1955 Pauling mostr que en la anemia falciforme los glbulos rojos se presentan en forma de hoz debido a una alteracin de la molcula de hemoglobina. Lo que ocurra es que en la hemoglobina normal su cadena tiene un cido glutmico en posicin G, mientras que en la anemia falciforme tiene valina. Este hallazgo deja en claro algo fundamental: una mutacin puntual en el ADN puede determinar el cambio de un aminocido de la secuencia polipeptdica de una protena. ESTRUCTURA DEL ADN Se hicieron numerosos estudios tendientes a conocer la Estructura del ADN. En 1.938 Astbury observ que sometiendo al ADN al anlisis de difraccin de rayos X presentaba reflexiones que corresponden a un espaciado regular de 3,4 a lo largo del eje de la fibras. Si bien el significado de sta observacin no estaba bien clara, porque se saba que el ADN utilizado era impuro. Sin embargo, ms tarde Franklin y Wilkins obtuvieron datos ms precisos operando con fibras de ADN altamente purificadas y encontraron dos periodicidades de 3,4 y de 34 . En el periodo 1.949 1.953 Chargaff y Col explicaron mtodos cromatogrficos cuantitativos para la determinacin analtica de las 4 bases del ADN. De dichos estudios se obtuvieron las siguientes conclusiones: Las muestras de ADN aisladas de diferentes tejidos de una misma especie poseen igual composicin de bases. La composicin de bases del ADN vara de una especie a otra. La composicin de bases del ADN de una determinada especie no cambia con la edad, con el estado de nutricin, ni con los cambios ambientales. En todos los ADN examinados el nmero de restos de adenina es igual al de restos de timina (es decir: A = T); el nmero de restos guannicos es igual al de los citosnicos (G = C ). La equivalencia de bases observadas en el ADN plantearon la posibilidad de que existe un nivel de organizacin estructural de las molculas del ADN que sea compatible con ciertas equivalencias de bases, pero incompatibles con otras. Adems ya se pens en una conformacin tridimensional para el ADN. De esta manera el escenario ya estaba dispuesto para proponer la conformacin tridimensional del ADN. Es decir se contaba con tres elementos. 1. Tamao de las bases; 2. Periodicidades observadas; 3. Equivalencia de ciertas bases. El inters en el problema se acrecent ante la difcil interrogacin de como poda replicarse el ADN con tanta fidelidad. En 1.953 Watson y Crick postularon un modelo tridimensional preciso para la estructura del ADN, basado en los datos de rayos X de Franklin y Wilkins y en las
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equivalencias de bases observadas por Chargaff. Este modelo no solo explicaba las propiedades fsicas y qumicas del ADN, sino que sugera un mecanismo por medio del cual la informacin gentica poda replicarse con exactitud. El modelo estructural del ADN de Watson y Crick consiste en dos cadenas polinucleotdicas dextrohelicoidales, arrolladas a un mismo eje y constituyendo una doble hlice. Las bases pricas y pirimdicas de cada hebra se encuentran en el interior de la doble hlice. El aparejamiento de las bases apartadas por ambas hebras es tal que solamente ciertas bases encajan en el interior de la estructura de manera que puedan unirse unas a otras por puentes hidrgeno. Las bases son: A-T y G-C

Que son las parejas que muestran exacta equivalencia:

ncleo de AyG N N N ncleo de TyC N N

Si el par sera A - G seran demasiado grandes para poder encajar dentro de la doble hlice de estas dimensiones. Si la pareja fuera G - T las bases se encontraran muy distanciadas para poder formar enlaces hidrgeno estables.
A A G A T C A G T T C T A G T C

Adems los enlaces hidrgeno entre A G y C T son ms dbiles que A T y G C, o sea que la doble hlice implica aquellas parejas que poseen el mximo de estabilidad. Por qu las dos periodicidades observadas con los rayos X?. Se postul que la periodicidad de 3,4 se debe a que las bases estn apretadamente apiladas al eje y mantienen una distancia de 3,4 de centro a centro. En cada espira de la hlice hay 10 nucletidos y de una espira a otra hay 34 . Las bases hidrfobas estn en el interior de la hlice, los restos carbohidratos y los fosfatos que poseen carga elctrica estn expuestas al H2 O . As resulta que la doble hlice est estabilizada no slo por los puentes hidrgeno entre les bases complementarias sino tambin por interacciones hidrofbicas entre dichas bases apiladas. Las dos cadenas polinucletidas de la doble hlice no son idnticas ni en la composicin ni en la secuencia de bases. Ambas cadenas son complementarias una de la otra. Esta estructura conduce a un mecanismo por medio del cual la informacin gentica puede replicarse con precisin. Dado que las dos hebras son complementarias una de la otra, y contienen informacin gentica complementaria, se postul que durante la divisin celular la rplica del ADN podra ocurrir por separacin de las dos hebras, con lo que cada una hara de patrn especificador de la secuencia de bases de una nueva hebra complementaria sintetizada. EI resultado
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final de este proceso consistira en la formacin de dos molculas hijas de un ADN de doble hlice, cada una de las cuales contendra una de las hebras del progenitor.

REPLICACION DEL ADN De acuerdo al dogma central de la gentica molecular, qued establecido que:
ADN ARN protenas

O sea que ste dogma defini tres procesos fundamentales de los cuales el primero es el de REPLICA, es decir la "copia" del ADN con formacin de molculas hijas. Veremos como sucede ste proceso a nivel molecular. La caracterstica ms sorprendente de la hiptesis de Watson y Crick, desde el punto de vista gentico, en su postulado de que las dos hebras del ADN duplohelicoidales son complementarias.

La rplica de cada una de ellas conduce a dos molculas hijas de ADN; cada una contiene una hebra del ADN progenitor. Este proceso se denomina rplica semiconservadora. Pero Cmo pueden replicarse simultneamente las dos hebras del ADN de modo que se formen al mismo tiempo. ste mecanismo requiere tres enzimas: ADN - polimerasa dependiente del ADN ADN - ligasa Endodesoxiribonucleasa ADN polimerasa Cataliza la sntesis de enlaces internucletidos. Posee los siguientes requerimientos: 1). Presencia da ADN preformado 2). Presencia de los cuatro desoxiribonucletidos trifosforados, los mono y difosforados son inactivos. 3). Mg++ Qu papel desempea el ADN preformado? Se han propuesto dos alternativas: 1. Que acta como cebador, es decir, que al proporcionar un extremo o puntos de crecimiento, se pueden adicionar nuevos mononucletidos.
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hebra patrn

hebra cebadora

2. O bien podra ser utilizado como patrn sobre el cual la enzima podra construir una hebra complementaria al ADN preformado.

nd ATP nd GTP nd CTP nd TTP ADN preformado Mg++

d d d d

ADN | AMP | GMP | CMP | TMP

4 PPi

Teniendo en cuenta estos requerimientos la reaccin global sera as. Mecanismo de accin de la ADN Polimerasa Si partimos de una hebra cebadora de ADN o sea de un ADN preformado:
OH HO P O H H2C O H O HO P H2C OH O H H OH O O P OH H2C O H H OH H H Base OH O H H O P OH O PPi P P OH OH H H OH Base O H H O O H H O P H2C OH O H H Base H + H OH PPi Base Base

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Hay un ataque al tomo de fsforo alfa del nucletido trifosforado entrante y provoca el desplazamiento de su grupo pirofosfato, con formacin de enlace internucletido. El PPi formado es rpidamente hidrolizado por una pirofosfatasa por lo cual la reaccin es muy exergnica. La direccin de la sntesis es por lo tanto 5 --- 3'. ADN ligasa 1. Enlaza extremos de molculas de ADN produciendo formas circulares. Ej.: bacterias. 2. Cataliza la reparacin de roturas de una cadena de ADN.

Requerimientos de la ADN ligasa 1. Presencia de NAD que acta como fuente de grupos adenilo. 2. Una hebra intacta de ADN. Mecanismo de accin de la ADN ligasa

O Base 5' OH H 3' H Base O OH CH2 O P OH NAD

NMN

AMP

Dinucletido constitudo NMN y AMP

1. Enzima + NAD --------------- En - AMP + NMN. Se forma un complejo entre En y AMP y se forma NMN como producto secundario. 2. El grupo adenilo es transferido por la Enzima al extremo 5 fosfato. 3. El extremo 3' OH desplaza al grupo adenilo y forma el enlace fosfodister.

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OH O Base O CH2 O P OH O O P OH H2C Base O Adenina CH 2 O HO P O OH O

Base O

Base O

Mecanismo de replicacin Antes de hablar de la replicacin es importante acotar que la cadena de ADN recin sintetizada se prolonga en direccin opuesta a la cadena de ADN patrn, es decir, tiene una polaridad opuesta o antiparalela.

P T A cebadora 3' P 5' 3' P T A T T

3' 5' P 3' 3' 5' 5' 3'

Kornberg: postul que la rplica comienza con la produccin de una mella o una rotura en una hebra por accin de una endonucleasa. Unidades de MN adicionadas por la ADN polimerasa:

5' 3' 3' 5' 3'

5'

La ADN polimerasa se fija a dicha rotura y comienza a prolongar el extremo 3' unidades de mononuclotidos. El extremo 5' se desplaza de la estructura duplex. Se sugiere que el extremo 5'
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puede estar sujeto por adherencia a la membrana celular. La rplica continua durante cierto trecho mientras que el extremo 5' se va "pelando". La ADN polimerasa se desplaza de lugar, o salta, desde la hebra patrn intacta a la hebra mellada en el sitio donde se separan ambas hebras y comienza a adicionar unidades de mononucletidos utilizando como patrn la fibra mellada. La replicacin contina hasta que el extremo se ha replicado por completo y entonces la enzima se retira. La endonucleasa rompe en la horquilla la hebra formada y el proceso vuelve a repetirse con la ADN polimerasa, que adiciona nuevas unidades de mononucletidos. Los dos nuevos segmentos formados sobre la hebra patrn son unidos por la ADN ligasa y comienza un nuevo ciclo.

3'

5'

3'

5'

3'

5'

endonucleasa

ADN polimerasa

ADN ligasa

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TEMA XXV: LA TRASCRIPCION DE LA INFORMACION GENTICA ARN mensajero: teora y propiedades del mensajero. La polimerasa del ARN dependiente del ADN. Mecanismo de accin: unin, iniciacin, elongacin y terminacin de la trascripcin. La rplica del ARN.

Evidencias de que el ARN transporta la informacin gentica: El ARN m es un buen candidato para transportar la informacin por una serie de evidencias: 1. El ARN tiene una estructura semejante a las cadenas del ADN y sus bases nucleotdicas pueden formar puentes hidrogeno con las bases del ADN siguiendo las reglas de complementariedad de Watson y Crick. 2. El ARN puede contener y transmitir informacin gentica; sto lo demuestra el hecho de que algunos virus no contienen ADN y su ARN puede actuar como agente infeccioso. Ej., el virus del mosaico del tabaco que causa infecciones virales en las hojas de las plantas. 3. El ARN se sintetiza en el ncleo, pero los ribosomas que estn en el citoplasma, donde se realiza la sntesis proteica, contienen ms del 70% del ARN celular.

PROPIEDADES DEL ARN MENSAJERO 1. Recambio. En bacterias el ARN m tiene un activo metabolismo, se sintetiza y degrada rpidamente. Esta propiedad fue la clave de su aislamiento e identificacin. Sin embargo existen ARN muy estables Ej.: el ARN m de los reticulocitos. 2. Relacin entre la secuencia de bases del ADN y el ARN celular. El ARN m se sintetiza sobre una matriz de ADN o sea que el ARN m es el portador de la informacin. La enzima que cataliza esta sntesis es la ARN polimerasa dependiente del ADN.

Mecanismo de accin de la ARN polimerasa Para obtener esta enzima en forma pura, Richard Burgen realizaron una electroforesis en gel de poliacrilamida. As se pudo detectar 4 bandas por tincin de los polipptidos. Lo que interesaba saber era si los 4 polipptidos intervenan en la actividad de la enzima. Para ello eliminaron uno de los polipptidos que denominaron factor (sigma). La eliminacin de este factor cambi las propiedades de la enzima ya que perdi su capacidad de usar como matriz al ADN. La adicin de factor restauraba la propiedad de la enzima de usar ADN como matriz.
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Mecanismo de accin de la ARN polimerasa A. Unin de la ARN polimerasa al ADN:

unin reversible

unin estable:

reconoce al promotor

las hebras del ADN se separan

La ARN polimerasa se une reversiblemente al ADN en varios sitios de ste. Sin embargo cuando esta unin se hace en una regin especfica que es el gen promotor el factor reconoce la secuencia nucleotdica y estabiliza el complejo ADN-ARN polimerasa. Esta estabilizacin permite que la enzima inicie la separacin de las hebras de la doble hlice del ADN permitiendo la iniciacin de la trascripcin. B. Iniciacin de la trascripcin
A T T A G A C G P P P OH P P P T C T C T G A G A C G T A A T T A G A C G 3' OH OH 5' P P P T A C T C T G A G A C G T A

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A T Se forma el primer enlace internucletido

T A

C G

T A

G A C G P P P 5' P T A OH C

Una vez unida la enzima a un promotor en el ADN, se inicia la transcripcin por unin de dos nucletidos trifosforados a la enzima. En general todos los ARN comienzan a sintetizarse por ATP y GTP. Al tomar posicin los dos primeros sustratos, el OH 3' del nucletido trifosforado iniciador ataca el enlace fosfodister entre los fosfatos alfa y beta del segundo nucletido y se forma el primer enlace internuclotido. Elongacin de las cadenas nucleotdicas:
A T T A G A C G P P P P T A P C G P A OH T La enzima se desplaza por la hebra del ADN C T G A G A C G T A

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Cuando el producto de la elongacin llega a un tamao crtico el factor se libera. Las cadenas nucleotdicas crecen por adicin secuencial de ribonucletidos al extremo 3' del dinucletido iniciador. La entrada de los diferentes sustratos depende de la complementariedad con las bases de la hebra del ADN que sirve de matriz. Terminacin de la transcripcin:
1. secuencia terminadora reconocida por la enzima

2. factor de terminacin

Ro

ADN

ARN

enzima

Ocurre por medio de dos mecanismos: Terminacin codificada por una secuencia de ADN que es reconocido por la enzima. Por medio de un factor proteico adicional el cual tiene la propiedad de causar la terminacin de la trascripcin en sitios donde no funciona el primer mecanismo.

Conclusin: la clula resuelve el "problema geogrfico" transcribiendo la informacin gentica contenida en el ADN del ncleo en un ARN que acta como mensajero, pues lleva la informacin a los ribosomas citoplasmticos donde se realiza la sntesis proteica.

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TEMA XXVI: EL CODIGO GENETICO El codn: unidad de informacin, primeras ideas sobre la clave gentica. Universalidad de la clave gentica. Vamos a considerar dos cuestiones: 1. Cmo se traslada el lenguaje de cuatro letras de los cidos nucleicos al de veinte letras de las protenas? 2. Cul es la correspondencia entre la secuencia nucleotdica y la secuencia de aminocidos? Mediante consideraciones matemticas, pareca probable que cada aminocido fuera codificado por un nmero pequeo de nucletidos consecutivos de la cadena ADN. Puesto que el ADN contiene slo cuatro bases y las protenas contienen veinte aminocidos, es obvio que se requiere ms de un nucletido para codificar cada aminocido. Si se disponen los nucletidos en grupos de dos, rinden 4 2 16 combinaciones. Las 4 bases en combinaciones de 3, pueden codificar 4 3 64 aminocidos distintos. O sea que un cdigo de tripletes es utilizado para codificar aminocidos. Composicin de los Tripletes Los experimentos que se realizaron para conocer la composicin de los tripletes fueron utilizando polirribonucletidos sintticos como mensajeros de ribosomas aislados de E. Coli. Incubaron cido uridlico (poli - U) en una serie de tubos que contenan ribosomas de E. Coli privados de mensajero, adems de todo lo necesario para la sntesis proteica, incluyendo todos los aminocidos. Este estudio demostr que la cadena polipeptdica recin formada contena solamente fenilalanina. En consecuencia, sugirieron que el vocablo del cdigo para la fenilalanina era el triplete UUU. Por experimentos similares hallaron que el poli C codifica prolina, el poli A lisina, etc. Posteriormente prepararon polmeros de nucletidos variando la relacin cuantitativa de los distintos mononucletidos que permiti identificar la composicin de 50 vocablos del cdigo para los distintos aminocidos. Estos experimentos no slo permitieron establecer como se "deletrea" el vocablo del cdigo de cada aminocido, sino que permitieron comprobar que algunos aminocidos eran codificados por ms de un triplete. Por ejemplo:
fenilalanina es cofificada por serina es cofificada por UUU UCU UUC UCC UCA UCG

El triplete de bases nucleotdicas que se encuentran en el ARN m y que codifica un aminocido de denomina codn .

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Caractersticas generales del cdigo El cdigo aminocido es un cdigo degenerado, es decir que hay ms de un vocablo de codificacin para la mayora de los aminocidos. Otra caracterstica del cdigo gentico consiste en que no requiere seal indicadora del final de un codn y comienzo del siguiente. 3 de los 64 tripletes no codifican ninguno de los aminocidos y son: UAG UAA - UGA. Estos tripletes constituyen una seal de terminacin de las cadenas polipeptdicas. Universalidad del cdigo Los vocablos del cdigo aminocido son idnticos en el hombre, en virus y en bacterias, es decir, es universal. A esta conclusin se lleg luego de una serie de ensayos. Se compar 50 aminoacil - ARNt diferentes procedentes de especies muy distantes, y observaron sus respectivas capacidades para ser reconocidos por los codones aminocidos previamente establecidos de E. Coli. Para ello se ensay la capacidad de tales aminoacil - ARN t para unirse a ribosomas de E. Coli empleando sintticos y se hall que en todos los casos los aminoacil - ARN t respondan perfectamente a los codones de E. Coli unidos a los ribosomas de este microorganismo. Considerando conjuntamente este hallazgo sugieren que el lenguaje gentico es idntico en todas las especies.

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TEMA XXVII: LA TRADUCCION DE LA INFORMACION GENETICA Necesidad de una molcula adaptadora: el ARN de transferencia. El anticodn. Funcin de los ribosomas. El mecanismo de traduccin: iniciacin, elongacin, translocacin y terminacin.

Vamos a considerar ahora la tercera gran cuestin que plantea la continuidad gentica de los organismos vivos. Cmo se traslada la informacin gentica contenida en la secuencia nucletida del ARN m , de tal suerte que los aminocidos se engarcen formando una cadena polipeptdica con una secuencia aminocida especfica? Trataremos los mecanismos enzimticos por medio de los cuales se constituye la cadena polipeptdica, es decir, como se realiza la sntesis proteica. Adems veremos el funcionamiento de los ribosomas asegurando la adecuada transferencia de la informacin del ARN m , y el papel adaptador del ARN t . Estructura ribosmica Los ribosomas sometidos a condiciones especiales se disocian en dos subunidades 50 S y 30 S cada uno de los cuales contiene ARN y varias protenas.
contiene dos componentes 50 S ARN y 30 proteinas diferentes

30 S

contiene una molcula de ARN ribosomtico y 20 protenas diferentes

Estructura del ARN de transferencia ( ARN t) El ARN t , posee una conformacin tridimensional similar a una hoja de trbol de manera que presentan sus cadenas el mximo de aparejamiento intracatenario.
A | C | C Locus de enlace aminocido

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Anticodn (unin al ARNm)

Todas las molculas de ARN t tienen en un extremo la misma secuencia terminal C C A . El ltimo resto, el cido adenlico, es el locus que se esterifica al resto aminocido. Adems existe un triplete de bases que es distinto en todos los ARN t y representa el anticodn es decir, el triplete nucletido especifico complementario de los tripletes del codn del ARN m . La molcula de ARN t contiene otro locus de unin para la enzima activadora. Una caracterstica de la estructura es la presencia de bases secundarias adems de las normales A U G y C. La mayora son formas metiladas de las bases principales. El ARN t es solamente un "adaptador" de manera que puede ser adaptado al lenguaje de tripletes nucletidos del cdigo gentico. Estados de la sntesis proteica Primer estadio: activacin Los 20 AA se eterifican al ARN t correspondiente. Las enzimas que participan son: aminoacil- ARN t -sintetasas que tienen: a. tres locus de unin: o para el AA o para el ARN t o para el ATP b. son especficos: o para cada AA o para el correspondiente ARN t La reaccin tiene lugar en el citoplasma. Primera fase de activacin Se forma un producto intermedio unido a la enzima:
Mg++ ATP + AA cido amino acil adenlico + PPi

O H R C NH2 O P C OH + OH Adenina O P O P O CH2 O

H R C NH2

O C O

O P OH O CH2 + Adenina PPi

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Segunda fase de activacin Consiste en la transferencia del grupo aminoacilo del AMP al ARN t :
cido-aminoacil.adenlico + ARNt aminoacil - ARNt + cido adenlico

O sea que la reaccin global sera

AA + ARNt + ATP aminoacil - ARNt + AMP + PPi

Tenemos entonces cada AA con su correspondiente ARN t .

Segundo estado: ribosomal En ribosomas. Los ribosomas tienen que captar al ARN m y al ARN t
AA .

30 S

LP

LA

50 S

Los ribosomas tienen dos locus de unin. 1. El locus peptidlico: (LP) para el ARNm que tiene unido el AA iniciador de la sntesis que es la metionina, la cual tiene su grupo amino bloqueado por un grupo formilo con el objeto de: a. que el grupo amino no forme enlace peptdico. b. que el locus peptidlico slo acepte alARN t que tiene metionina.

2. El locus aminoaclico: que permite la entrada secuencial de los ARN t AA . El ribosoma para que puedan unirse el ARN m y el ARN t AA debe disociarse en sus dos subunidades. Participan en este proceso factores proteicos F1 F2 F3 (llamados tambin disociasaribosomal) y GTP. Estos factores permiten la disociacin de los ribosomas y adems la unin del ARN m en el lugar donde se inicia el mensaje.

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30 S

30 S

30 S

50 S AA AA

50 S

Tercer Estado: Elongacin La prolongacin de una cadena tiene efecto en tres fases principales: 1.- Los ribosomas con su ARN m , tienen unido en el LP el ARN t AA iniciador de la sntesis (metionina). En el estado de elongacin, al locus aminocido se une por su anticodn el ARN t AA de acuerdo al triplete de bases del codn. Este proceso requiere GTP y un factor T que es una protena que cataliza este proceso de elongacin.
LP LA

(metionina) AA

AA

2.- En la segunda fase se forma el enlace peptdico por reaccin entre el grupo amino del nuevo aminoacil - ARN t captado con el grupo carboxilo del AA ya existente en el LP.

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NH R CH C O O R

NH CH

LP
O C NH

HO

LP descargado

NH2 R CH C O O R C C O H O

LA

LA

ARNm

Para la formacin del nuevo enlace peptdico es necesario una enzima denominada peptidil-transferasa. El ARN t "descargado" que ya no lleva su AA, contina unido al LP. El peptidil ARN t recin alargado est unido al LA. 3.- En la tercera fase del ciclo de alargamiento el peptidil - ARN t se desplaza fsicamente desde el LA al LP y desaloja de este ltimo al sitio del ARN t descargado. Esta compleja reaccin de translocacin se cree que es resultado de un cambio de conformacin en el ribosoma, que tiene lugar a costa de la hidrlisis del GTP. Para esta fase se requiere una protena especifica denominada factor G. Simultneamente con la translocacin del peptidil - ARN t tiene lugar la del ARN m que desplaza un codn a lo largo del ribosoma.
O CH NH R C H C O O

LP

LA

El proceso se repite, es decir entrando ARN t codifica la terminacin.

AA al LA hasta que el ARN m

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Cuarto Estado: Terminacin de la cadena polipeptdica La terminacin de una cadena polipeptdica completa y su despegue del ribosoma est sealada en el ARN m por tres codones especiales de terminacin. La liberacin del polipeptidil- ARN t del ribosoma, es inducido por un factor de liberacin protico que est unido al ribosoma y provoca la hidrlisis del enlace ster entre el polipptido y el ARN t . El ribosoma 70 S se aparta del ARN m y queda libre. Cuando experimenta disociacin en sus subunidades 50 S y 30 S puede recomenzar un nuevo ciclo.-

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TEMA XXVIII: REGULACION DE LA SNTESIS PROTEICA Teora de Jacob y Monod: Regulacin transcripcional. Induccin. Represin. Las clulas vivas disponen de mecanismos que regulan la cantidad de protenas que se sintetizan. Estos mecanismos de regulacin fueron estudiados en clulas bacterianas y se observ que la cantidad de enzimas que se acumula en el medio depende de la naturaleza de los nutrientes. En base a todos estos estudios se distingui dos tipos de respuestas: De induccin enzimtica De represin enzimtica INDUCCION Si estamos en presencia de una induccin a la enzima que se induce a que se sintetice se denomina enzima inducible. Esta enzima inducible se encuentra en pequea cantidad en el medio, pero cuando se agrega un sustrato sobre el cual debe actuar su concentracin aumenta para transformar a ese sustrato en un metabolito que puede ser utilizado por la clula. Ej.: un tipo de E. coli usa como fuente de carbono a la glucosa. Si en el medio en lugar de colocar glucosa colocamos lactosa, la clula inmediatamente comienza a sintetizar -galactosidasa que desdobla la lactosa en galactosa y glucosa. Si volvemos a colocar glucosa, la enzima -galactosidasa deja de sintetizarse y alcanza un nivel bajo. La mayora de las enzimas inducibles catalizan las reacciones del catabolismo. Estas enzimas inducibles son diferentes a las enzimas constitutivas que se forman a velocidades constantes independientemente de la presencia del sustrato (por ej. las enzimas de la gliclisis). REPRESIN ENZIMATICA La clula tiene enzimas requeridas para la sntesis de los 20 aminocidos. Si agregamos al medio un aminocido, por ej. histidina, la enzima que le sintetizaba es reprimida y desaparece de la clula. Todas las enzimas inducibles estn codificadas por genes. En los genes hay locus que determinan la formacin de las enzimas. Un locus se denomina gen estructural, que es el que determina la secuencia de aminocidos de la enzima. El otro locus, llamado gen regulador, es interruptor, es decir, que est determinando si el gen estructural se transcribe o no. O sea que el gen estructural codifica una enzima que se sintetiza normalmente siempre que el gen regulador no reprima su sntesis.
Regulador

Estructural

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Cmo funciona el gen regulador tanto en la represin como en la induccin? Jacob y Monod formularon una hiptesis general respecto a la funcin de los genes estructural y regulador) en los 2 procesos. Induccin El gen regulador transcribe un ARN mensajero que codifica una protena denominada represor.
regulador ARNm

operador

estructural

represor

Este represor tiene un locus de unin especfico prximo al gen estructural. Este locus se denomina operador. Qu sucede en una induccin, es decir, cuando se agrega al medio un sustrato que debe degradarse? El sustrato, que sera el inductor, se combina con el represor formando un complejo inductor-represor inactivo, que no puede unirse al operador.

represor inductor

El gen estructural queda libre y comienza a transcribirse y por lo tanto se sintetiza la enzima. La unin represor-inductor es reversible, o sea que cuando se elimina el inductor la sntesis de la enzima que lo degrada es reprimida. Represin Si agregamos al medio un aminocido por ej. histidina, la clula no necesita utilizar las enzimas que lo sintetizan.
ARNm

regulador

operador

estructural

represor

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En este caso, la histidina se une al represor y forma un complejo represorcorrepresor que se combina al operador; el gen estructural no se transcribe y por lo tanto no se sintetiza histidina.

Regulacin coordinada Tambin existe un mecanismo de regulacin coordinada por el cual un grupo de enzimas puede ser reprimida o inducida por un slo represor o por un slo inductor. Por ejemplo, para sintetizar histidina se necesita un grupo de enzimas. Todas se encuentran codificadas en los genes ocupando locus vecinos.
operador z x a b

codifican las sntesis de histidina

Este grupo de genes relacionados constituyen un opern; o sea que el opern se encuentra codificando todas las enzimas que participan en la biosntesis de histidina. Cmo se reprime un opern completo actuando un represor? Cuando el represor se une al operador no se sintetiza ninguna de las enzimas del opern. Si se elimina el represar se sintetizan todas las enzimas que codifica el opern.

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BIBLIOGRAFIA

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