Universidad nacional Jorge Basadre Grohmann Basadre Grohman

Facultad de Ciencias de la Salud Escuela de Farmacia y Bioqumica

actividad antibacteriana del aceite esencial de eucalipto (eucaliptus globulus labill) sobre los principales patgenos del sistema urinario

C !S"# $royecto de %nvestigacin &"CE'(E# )*F +uan +os, C-angllio !oas ES( &%.'(E# +es/s 0amani Borda C"&%1"# 2334 5 67289
i

Proyecto de investigacin ESFB/FACS

.:"# 7to a;o

(.C'. < $E! 23=6
NDICE

INTRODUCIN..................................................................................................... iii CAPTU O I.......................................................................................................... ! P ANT"A#I"NTO D" PROB "#A........................................................................! CAPTU O II......................................................................................................... $ #ARCO T"RICO................................................................................................. $ CAPTU O III...................................................................................................... %% #"TODO OGA D" A IN&"'TIGACIN..............................................................%% Re(erencias Bi)liogr*(icas+................................................................................%, !e>erencia bibliogr?>ica*5@@@*@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@**@77

ii

Proyecto de investigacin ESFB/FACS

INTRODUCIN

El Eucalyptus globulus Labill, usualmente conocido como eucalipto com/n o blancoA es la especie m?s >recuentemente usada de este g,neroB a nivel mundial* .parece de >orma natural en el sur de .ustraliaB adem?s es cultivado en el sur de Europa y en .m,rica del sur* En el $er/B el ritmo de las plantaciones de eucalipto -a ido creciendo en los /ltimos a;osB siendo ,sta una especie >orestal con un enorme potencial en la actualidad (ClvareD et al*B 2333)* El eucalipto tiene gl?ndulas que segregan aceites esenciales en sus -oEasB los cuales producen su caracterstico olor y poseen componentes que pueden ser di>erenciados en productos qumicos de valor terap,utico* (ClvareD et al*B 2333) Es conocido el uso del aceite esencial para tratar en>ermedades respiratorias debido a su e>ecto eFpectorante y antiin>lamatorio (1isbert =446) sin embargo el aceite esencial de este recurso natural vegetal tambi,n posee propiedades antibiticasB antis,pticasB bactericidas y bacteriost?ticas sobre agentes que causan in>ecciones de las vas urinarias* El obEetivo de la presente investigacin es compilar in>ormacin acerca de la actividad antibacteriana del aceite esencial de Eucalyptus globulus Labill GeucaliptoG y su accin sobre los principales patgenos del sistema urinario*

iii

CAPTULO I PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA

1.1 Descripcin de la realidad pro le!"#ica.$

Ha in>eccin del tracto urinario es una de las in>ecciones m?s prevalentes en nuestro medio* Se estima que las in>ecciones urinarias son causa de aproFimadamente 9 millones de visitas a los m,dicosB = milln de visitas al departamento de emergencia y aproFimadamente =33 333 -ospitaliDaciones al a;o* Sumado a esto la prevalencia de uropatgenos resistentes a nosocomiales* 1 Es as que al presente se -ace necesaria la b/squeda de nuevos agentes antibacterianos y que meEor que los recursos naturales presentes en la biodiversidad peruanaB que poseen propiedades medicinales y ya -an sido utiliDados por los antiguos pobladores* (al es el caso del aceite esencial de Eucalyptus globulus Labill EucaliptoA que es usado para tratar en>ermedades respiratoriasB sin embargo es poco conocida la actividad antibacteriana del aceite de eucalipto sobre bacterias que coloniDan las vas urinarias* Es por esta raDn que la presente investigacin busca indagar acerca de la actividad antibacteriana del aceite esencial de eucalipto sobre patgenos del sistema urinario* antibiticosB en pacientes con in>eccin urinaria -a aumentado en los /ltimos a;os tanto en las adquiridas en la comunidad como en las

1.% Deli!i#acin de la in&es#i'acin.$

1.%.1 Deli!i#acin espacial Ha presente investigacin se llev a cabo en la ciudad de Hima 5 $er/*

Proyecto de investigacin ESFB/FACS

1.%.% Deli!i#acin #e!poral

El trabaEo se realiD durante el periodo comprendido entre los meses de +ulio a "ctubre del 23=2*

1.%.( Deli!i#acin social

El trabaEo est? dirigido a toda la poblacin peruana y mundial que se interese por conocer sobre la actividad antimicrobiana del aceite esencial de Eucalyptus globulus Labill eucalipto y su aplicacin en en>ermedades del sistema urinario*

1.( )or!*lacin del pro le!a.$ 1.(.1 Pro le!a Principal

IEl aceite esencial de Eucalyptus

globulus Labill eucalipto tiene actividad

antibacteriana sobre los principales patgenos del sistema urinarioJ

1.+ O ,e#i&o de la in&es#i'acin.$ 1.+.1 O ,e#i&o 'eneral &emostrar la actividad globulus Habill urinarioB como son# antibacteriana del aceite esencial del Esc-eric-ia coliB $roteus mirabilisB Eucalyptus y

eucalipto

sobre los principales patgenos del sistema KlebsiellaB

Stap-ylococcus aureus*

Proyecto de investigacin ESFB/FACS 1.+.% O ,e#i&os espec./icos-

&e>inir la concentracin mnima in-ibitoria (C0%) y concentracin mnima bactericida (C0B) del aceite esencial de Eucalyptus globulus Habill eucalipto sobre# Esc-eric-ia coliB $roteus mirabilisB KlebsiellaB y Stap-ylococcus aureus*

Establecer

una

Concentracin

mnima

in-ibitoria

.lternativa

una

Concentracin mnima bactericida .lternativa motivo del estudio*

para cada microorganismo

1.0 1ip#esis de la in&es#i'acin.$ 1ip#esis 'eneral El aceite esencial de Eucalyptus globulus Labill* eucalipto podra tener actividad antibacteriana sobre los principales patgenos de las vas urinariasB como son# Esc-eric-ia coliB $roteus mirabilisB KlebsiellaB y Stap-ylococcus aureus* 1ip#esis espec./icas El aceite de Eucalyptus globulus Labill* eucalipto tendra e>ecto

antibacteriano al presentar una concentracin mnima in-ibitoria (C0%) y una concentracin mnima bactericida (C0B) sobre# Esc-eric-ia coliB $roteus mirabilisB KlebsiellaB y Stap-ylococcus aureus* Se conseguira establecer una concentracin mnima in-ibitoria alternativa y una concentracin mnima bactericida alternativa en base a los estudios de investigacin revisados

Proyecto de investigacin ESFB/FACS 1.2 3*s#i/icacin e i!por#ancia de la in&es#i'acin.$ 1.2.1 3*s#i/icacin

no de los problemas que actualmente en>rentan los tratamientos m,dicos es la resistencia bacteriana ocasionada por el uso indiscriminado de antimicrobianosB para lo cual los productos de origen vegetal podran proporcionar una alternativa e>icaD >rente a este problema* .dem?s es necesario in>ormar a la poblacin acerca de la capacidad antimicrobiana del aceite esencial de Eucalyptus globulus Labill eucalipto sobre los principales agentes in>ecciosos de las vas urinariasB de manera que perciban a este aceite como una alternativa antimicrobiana urinarias* econmica y >actible para el tratamiento de patologas

1.2.% I!por#ancia

Como >uturos pro>esionales >armac,uticos

es nuestra obligacin dar a conocer las

bondades del aceite esencial de Eucaliptus globulus L. a la poblacin en generalB de manera que est,n advertidos acerca de sus propiedades antibacterianas sobre los principales patgenos de las vas urinariasB as como las precauciones que deben tener presentes en cuanto a su dosi>icacin y puedan -acer un uso racional y adecuado de dic-o aceite para tratar las a>ecciones urinarias*

Proyecto de investigacin ESFB/FACS CAPTULO II MARCO TERICO

%.1 An#eceden#es de la in&es#i'acin.$

T.#*lo- 0edicina tradicional en el $er/# .ctividad antimicrobiana in vitro de los aceites esenciales eFtrados de algunas plantas arom?ticas* A*#or- Hibertad .lDamoraB Hiliana 0oralesB Hourdes .rmasB 1ilma Fern?ndeD* Res*!enEn la presente investigacin se evalu la actividad antimicrobiana de los aceites esenciales de 8 plantas usadas en la medicina tradicional peruana entre ellas el Eucaliptus globulus Labilll* El aceite esencial obtenido por destilacin por arrastre de vaporB se en>rent albicans* Ha determinacin de la actividad antibacteriana se evalu por el m,todo de aromatograma de &ura>ourdB que consiste en introducir discos con la solucin impregnada de los aceites esenciales sobre el inculo de las bacterias y medir el tama;o de in-ibicin de crecimiento bacteriano consider?ndose como actividad nula si el -alo de in-ibicin era menor o igual a L mm* Sensibilidad lmite de 4 a =7 mmB media de =8 a =4 mm y sumamente sensible si era igual o superior a 23mm* Encontr?ndose que el aceite de Eucalipto tiene una sensibilidad lmite sobre la muestras de Stap-ylococcus aureus ya que el -alo de in-ibicin de crecimiento del microorganismo era de =6 mmA y en el caso de Candida albicans se encontr en =7 mm* 2 $or lo descrito en el presente estudio podemos in>erir que el aceite esencial de Eucalipto puede ser usado para tratar in>ecciones urinarias causados por Stap-ylococcus y tambi,n causadas por -ongos como es el caso de la Candida albicans* a $seudomona aeruginosaB Stap-ylococcus aureus y Candida

Proyecto de investigacin ESFB/FACS Ti#*lo- Evaluacin de la .ctividad .ntibacteriana in vitro de los EFtractos de Caesalpinia spinosa tara y Eucalyptus sp* eucalipto A*#or- Hiu B* MumbertoA Hengua N*B Huis .lbertoA Hen 0*B 1ladisA Ha (orre &*B CarlaA Muapaya O*B +os,A C-aucaB +os,* Res*!enEn el presente estudio se evalu in vitro la actividad antibacteriana de eFtractos de Caesalpinia spinosa PtaraP y Eucalyptus sp* PeucaliptoP utiliDando cepas bacterianas de Stap-ylococcus aureusB Bacillus subtilisB Esc-eric-ia coliB Klebsiella sp* y S-igella >leFneri* Se utiliD como solvente de eFtraccin una meDcla de alco-ol5acetona (=#=) y la actividad biolgica de los eFtractos obtenidos se evalu mediante la t,cnica de di>usin en disco* $ara evaluar la actividad antimicrobiana de los eFtractos vegetalesB las cepas bacterianas antes de su utiliDacin >ueron sembradas previamente en agar (ripticasa de Soya (27 -oras antes)* Huego se inocularon las cepas en tubos conteniendo 6m% de caldo (ripticasa de SoyaB por 2 -oras* Ha densidad bacteriana >ue aEustada aproFimadamente a =*8 F =3 L bacteriaQm% usando el tubo 'R = de la escala de 0ac Farland (3B8) sando un -isopo est,ril se inocularon placas de agar 0uller5Minton con cada cepa evaluada* Simult?neamente se prepararon discos de papel de >iltro (S-atman 68=) est,riles a los cuales se les adicion =8m% de los eFtractos* (odas las pruebas se -icieron por duplicado* &espu,sB utiliDando pinDas est,riles se colocaron los discos en la super>icie de la placa* Has placas >ueron incubadas a 69R C por 22 -oras* Huego de ello >ueron eFaminadas para determinar la >ormacin de -alos de in-ibicin* El eFtracto de Eucalyptus sp* PeucaliptoP produEo un -alo de in-ibicin de =3*8 mm sobre Stap-ylococcus aureus y un -alo de =6mm sobre bacillus subtilis* ( En base a la presente investigacin se asume que el eucalipto presenta antimicrobiana contra Stap-ylococcus aureus bacteria gran positiva en>ermedades de las vas urinarias. actividad

que causa

Proyecto de investigacin ESFB/FACS %.% Bases #ericas.$ A. In/eccin Urinaria.$ a.1 De/inicinHa in>eccin urinariaB in>eccin de orinaB o in>eccin del tracto urinario (%( )B es la eFistencia de g,rmenes patgenos en la orina por in>eccin de la uretraB la veEigaB el ri;n o la prstata* Hos sntomas que acompa;an a una in>eccin de orina son los que componen el sndrome miccionalB teniendo en cuenta que las in>ecciones de orina tambi,n pueden ser asintom?ticas* &esde el punto de vista microbiolgicoB cuando se detecta un crecimiento de =3*333 unidades >ormadoras de colonia por mililitro (u>cQml) en una muestra de orina bien recogidaB puede eFistir una in>eccin urinaria* + Ha gravedad de la in>eccin variar? de acuerdo a la agresividad que ostente el microorganismo intruso y por supuesto del estado inmunolgico del -u,spedB aunque claro tambi,n es plausible que el nivel de agresin de la especie eFterior que invade sea tan importante que ni siquiera un buen sistema inmunolgico pueda combatirlo* EFisten una enorme cantidad de in>ecciones que a>ectar?n particularmente a cada parte del organismo de un ser -umanoB en tantoB una de las in>ecciones bacterianas m?s comunes y por las cuales la gente m?s consulta y se somete a tratamiento es la in>eccin urinaria* 1ran parte de las bacterias que la ocasionan vienen del intestino gruesoB ingresando en la veEiga de manera ascendente tras un paso inicial por la uretraB coloniDando de este modo tanto la regin uretral como la peri uretral* Si bien el aparato urinario posee determinados mecanismos propios como ser el >luEo constante de orina que act/a por arrastreB para combatir la accin de las bacterias que ingresanB en algunas circunstanciasB las bacterias pueden vencer estas duras barreras provocando la in>lamacin de la DonaB la cual de acuerdo a la magnitud y localiDacin que ostente se materialiDar? en los siguientes casos clnicos# prostatitisB bacteriuria asintom?ticaB cistitis aguda y pielone>ritis aguda* Entre las principales causas de este tipo de in>eccin se cuentan alg/n tipo de obstruccinB tales como tumoresB c?lculos o quistesB que di>icultan el >luEo normal de la

Proyecto de investigacin ESFB/FACS orinaB la edadB siendo las personas mayores adultas las que m?s propensas se muestran a la mismaB la predisposicin gen,tica y la diabetes* En tantoB para una meEor deteccin y diagnstico de la mismaB los m,dicos solicitar?n al paciente que presente la sintomatologaB que se someta a un eFamen que se denomina urocultivo y que consiste en la toma de una muestra de orina en condiciones especialmente est,rilesB siendo la meEor la orina de la ma;anaB previa -igiene de los genitales* 0

a.% Clasi/icacin de las in/ecciones *rinarias.$ Se clasi>ican seg/n el nivel de compromiso clnico y anatmico en# asintom?tica (bacteriuria asintom?tico) y sintom?tica (cistitis y pielone>ritis)B siendo tambi,n denominadas como altas y baEas* 2

a.%.1 In/ecciones *rinarias asin#o!"#icas.$ Se -abla de ella cuando eFiste la presencia de m?s de =33*333 colonias de bacterias por milmetro de orina (urocultivo) en ausencia de signos y sntomas de in>eccin urinaria* Has bacterias aisladas tienden a ser de baEa patogenicidad y son >?cilmente eliminadas por los antibiticosA sin embargoB su tratamiento puede condicionar un alto nivel de recurrencia y recoloniDacin por cepas m?s virulentas queB al eliminar a la >lora protectoraB incrementaran la oportunidad de ad-erencias bacterianas como evento preliminar al desarrollo de la in>eccin urinaria (% )* .l ad-erirse las bacterias al tracto urinario se provoca la in>eccin* Ha presencia de cepas bacterianas en la va urinaria no siempre da;a el uroepitelio e incluso podran prevenir la invasin de otros g,rmenesB al >uncionar como una >orma de pro>ilaFis natural*2

a.%.% In/eccin *rinaria sin#o!"#ica*5

Proyecto de investigacin ESFB/FACS Es la presencia de m?s de =33*333 colonias de bacterias en = ml de orina asociado a sntomas de compromiso del tracto urinario baEo o alto* Es diagnosticada por cualquiera de los siguientes criterios $resencia de uno de los siguientes signos o sntomas# a) Fiebre (T 6LUC) b) (enesmo c) $olaquiuria d) &isuria o dolor suprap/bico e) Cultivo de orina con TV =38 FCQmH con no m?s de dos especies de organismos* >) $% !%. T =3 leucocitosQmH*

g) NisualiDacin de microorganismos en la tincin de 1ram* -) &os urocultivos con T =36 FCQmH del mismo germen* Has in>ecciones sintom?ticas las podemos clasi>icar en dos grupos# in>ecciones urinarias baEas (cistitis aguda) e in>ecciones urinarias altas (pielone>ritis aguda)*

a.%.( Cis#i#is.$ Cuando la veEigaB rgano del aparato urinario en >orma de globo que sirve para almacenar y eliminar la orina producida en los ri;onesB se in>lama aparece la cistitis siendo entonces la in>lamacin de la veEiga urinariaB causada casi siempre por una in>eccin producida por g,rmenes procedentes del aparato digestivo (recto) cuando se ponen en contacto con el aparato urinario* Ha mayora de las vecesB el cuerpo puede des-acerse de estas bacterias cuando se micciona* Sin embargoB algunas vecesB las bacterias pueden ad-erirse a la pared de la uretra o la veEiga o multiplicarse tan r?pido que algunas de ellas permanecen en la veEiga*

Proyecto de investigacin ESFB/FACS Se caracteriDa por la presencia de sndrome miccional# miccin >recuente (polaquiruria)B urgente y dolorosa (disuria)B sensacin permanente de ganas de orinar (tenesmo) y eliminacin de una peque;a cantidad de orina turbia*

a.%.+. Pielone/ri#is.$ " in>eccin urinaria alta es una in>eccin de las vas urinarias que -a alcanDado la pelvis renalB los c?lices y el par,nquima renal*

B. Principales !icroor'anis!os asociados a in/eccin *rinaria.$

Hos microorganismos implicados en la in>eccin urinaria no -an cambiado de >orma signi>icativa en los /ltimas dos d,cadasB permaneciendo la E* Coli como el principal patgeno* 0?s del 48W de las in>ecciones del tracto urinario son causadas por una /nica especie bacteriana* Hos microorganismos responsables de la in>eccin urinaria sintom?tica y asintom?tica son los mismos* Ha Esc-eric-ia coli se encuentra en el L3W de los casosB seguido en >recuencia por el $roteus mirabilis (7W)B Klebsiella (7W)B Enterobacter (6W)B Stap-ylococcus saprop-yticus (2W) y Streptococcos del grupo B (=W)* .lgunas bacterias gram positivas tambi,n -an sido asociadas con patologa del tracto urinarioB aunque de >orma menos >recuenteB como el Stap-ylococcus aureus 2

.1 Esc4eric4ia Coli.$

!2

Proyecto de investigacin ESFB/FACS Esc-eric-ia coli es el patgeno oportunista aislado con m?s >recuencia en las in>ecciones del tracto urinarioB >orma parte de la >amilia Enterobacteriaceae B est? integrada por bacilos 1ram negativos no esporuladosB mviles con >lagelos pertricos o inmvilesB aerobios5anaerobios >acultativosB capaces de crecer en agar 0acConXey y en medios simples con o sin agregado de 'aClB >ermentadores y oFidativos en medios con glucosa u otros carbo-idratosB catalasa positivosB oFidasa negativosB reductores de nitratos a nitritosB y poseedores de una proporcin 1YC de 64 a 84W en su &'.* Ha E* coli posee caractersticas que la -acen muy virulenta para el tracto urinarioB como son la presencia de pilio >imbrias tipo % que se unen a la manosa de las c,lulas epiteliales y que >avorece su ad-erencia al uroepitelioB antgeno K que protege a las bacterias de la >agocitosis por los leucocitosB -emolisina que >avorece la invasin tisular y da;a el epitelio tubularB la resistencia antimicrobiana a la actividad bactericida del suero y aerobactina que permite a la bacteria acumular -ierro para su replicacin*9

)i'*ra n51 Esc-eric-ia Coli* .% Pro#e*s Mira ilis $

!!

Proyecto de investigacin ESFB/FACS $roteus mirabilis es una bacteria 1ram5negativaB >acultativamente anaerbico* $roteus mirabilis causa el 43W de todas las in>ecciones por $roteus* 6 Es una bacteria rodeada de >lagelos en todo su cuerpo (peritrica) por lo que es eFtremadamente mvil y por lo tanto capaD de diseminarse r?pidamente por todo el ?rbol urinario* Es adem?s intensamente ure?sicaB >orma amonio de urea a alta velocidadB en 2 -oras un inoculo de =3 FCQml de $roteus puede elevar el pM urinario de a- la pronta a un valor cercano a L*3B ello ocasiona en la va urinaria precipitacin de estruvita (>os>ato amnico magn,sico) y de apatita (>os>ato c?lcico) y aparicin de litiasisB que ocurre en veEigaB prstata y ri;n*$osee adem?sB >imbrias de ad-erencia y tiene tendencia a ad-erirse meEor a las c,lulas renales * "tros >actores de virulencia son la -emolisina (la mayor parte de aislados de pielone>ritis son -emolticos* Ha -emolisina Mpm . de $roteus >actor citotFico que >acilita la invasin renal de $roteus* -a sido postulada como el

* )i'*ra n5% $roteus mirabilis FinalmenteB in>ecciones $roteus produce -ospitalarias* En una metalo proteasa que reconoce y activa la comunitariasB por motivos que

inmunoglobulina .= y .2* $or estos motivos $roteus mirabilis es m?s >recuente en in>ecciones desconocemos pero atribuimos a su ad-erencia al prepucioB es m?s >recuente en lactantes varones*

!-

Proyecto de investigacin ESFB/FACS Esta bacteria al ser sembrada en un agar para identi>icacin microbianaB sus colonias toman >orma de ondasB que son >?ciles de identi>icar* L .(. 7le siella.$ Se la asla >recuentemente de materias >ecales del -ombre y los animalesB pero tambi,n de aguasB vegetales y alimentos* Son bacilos 1ram negativos inmvilesB a menudo capsulados* Ha c?psula es de naturaleDa polisac?rida* Se trata de patgenos oportunistasB que pueden provocar diversos cuadros clnicos en el -ombre# in>ecciones urinariasB bacteriemiasB neumonasB in>ecciones -epatobiliaresB etc* n porcentaEe elevado de aislamientos de KlebsiellaB particularmente aquellos de in>ecciones nosocomialesB contienen pl?smidos de resistencia a los antibiticos* $uede ser resistencia a betalact?micosB aminoglucsidosB etc* Klebsiella eFpresa su virulencia urinaria por sus >imbrias de tipo = *Se asume que -asta el 98W de Klebsiellas urinarias eFpresan esta propiedad * 8

)i'*ra n5( Klebsiella sp* Ha presencia de c?psula es sin embargoB el >actor m?s importante de virulencia $resenta di>erentes variantes qumicos del polisac?rido capsular que permiten distinguir -asta 93 serotipos * &e los >actores de virulencia que se le atribuyen a

!.

Proyecto de investigacin ESFB/FACS Klebsiella B el polisac?rido capsular es de los m?s importantes ya que impide la accin de los anticuerpos (anti5")B importante mecanismo de>ensivo de la in>eccin urinaria por bacilos gram negativos*6 .09#ap4:lococc*s a*re*s.$ Has in>ecciones urinarias por Stap-ylococcus aureus son poco -abituales en la poblacin general y con >recuencia son secundarias a bacteriemias originadas en >ocos distantes (como la endocarditis)* 'o obstanteB los pacientes con sondas permanentes pueden presentar in>ecciones ascendentes del tracto urinario por S* aureus* 8

)i'*ra n5 aureus* C. O#ros !icroor'anis!os pa#'enos.$

+# Stap-ylococcus

Hos -ongos son una parte de la poblacin microbiana que puede contribuir como uropatgenos >/ngicos en las %( * En los /ltimos decenios las % por Candida levadura g,nero -a aumentado considerablemente* Ha salud del tracto urinario es est,ril asB la presencia de levaduras del g,nero Candida en la orina implica una variedad de situaciones clnicas)* Candiduria se puede demostrar como % sintom?ticas o asintom?ticasB la incidencia de las in>ecciones del tracto urinario causadas por levaduras es cuatro veces m?s com/n en muEeres que en -ombres* .dem?sB los resultados de di>erentes estudios -an indicado que las % en las muEeres son muy comunes 4 >/ngicas

!%

Proyecto de investigacin ESFB/FACS D. E*cal:p#*s 'lo *l*s La ill.$ d.1 Clasi/icacin #a;on!ica.$ 1< El Eucalyptus globulus Habill presenta la siguiente clasi>icacin taFonmica seg/n .dolp- Engler modi>icado por SouXoup +* !eino# Negetal &ivisin# .ngiospermae Clase# &ycotyledoneae Sub5clase# .rc-yclamideae "rden# 0yrtales Familia# 0yrtaceae 1,nero# Eucalyptus Especie# Eucalyptus globulus 'ombre cient>ico# Eucalyptus globulus Labill. 'ombre com/n# Eucalipto blancoB Eucalipto com/n o eucalipto aDul

!$

Proyecto de investigacin ESFB/FACS

)i'*ra n5 0 Eucalyptus globulus L. d.% Descripcin o#"nica.$ d.%.1Tronco&erec-oB pero poco redondoB muy gruesoB -asta m?s de 2m de di?metroB y con tendencia a eFperimentar una torsin espiral* d.%.% Cor#e=a$rimero de color blanquecinaB plateado aDulado 5 pruinosaB lisaB luegoB de color gris o pardo gris?ceaB lisaB que se desprende en grandes tiras longitudinalesB retorcidas y de>lecadasB que se mantienen colgando alg/n tiempo en los ?rboles* d.%.( Ra.=El sistema radical est? constituido por una raD pivotanteB que en terrenos sueltos puede alcanDar los 83 cm* de pro>undidadB en el primer a;o Bcreciendo despu,s m?s lentamente* Has races lateralesB que en un principio son poco desarrolladasB despu,s

!,

Proyecto de investigacin ESFB/FACS se eFtienden super>icialmenteB a veces a grandes distancias de su >uste* En suelos poco pro>undos todas las racesB se adaptan -aci,ndose someras*

d.%.+ 1o,asHas -oEas Euveniles son opuestasB s,silesB de base cordadaB de color gris5aDuladoB de L5=8 cm de longitud y 75L cm de anc-ura* Has adultas alternasB pecioladasB con la base cuneadaB linear5lanceoladasB de =8528 cm de longitudB con el ?pice acuminado* Ha teFtura es algo cori?cea y son de color verde oscuroB con la nerviacin marcada 11 Has -oEas adultas contiene aceite esencial en una concentracin entre =B8 5 6B8W en caso de Eucalyptus globulus* Este aceite se encuentra ubicado en los espacios o cavidades esquiDgenos B los cuales se >orman gracias a que las c,lulas se separan por disolucin de la laminilla media y por dilatacin de los espacios intercelulares* Esta secrecin es merocrina*
11

)i'*ra N5 2 Espacios o cavidades esquiDogenas que contienen aceite esencial de Eucalipto*

!/

Proyecto de investigacin ESFB/FACS

)i'*ra N5 8 %magen por 0icrogra>a de electrones de la cavidad secretora de la -oEa de Eucalipto El contenido de aceite esencial tiene un pico m?Fimo en las -oEas basales de los brotesB mientras que el contenido cineol aumenta con la edad de las -oEas y alcanDa su m?Fimo en las -oEas adultas de tallos ya ligni>icados*
1%

d.%.0 )loresFlores aFilaresB solitarias o en grupos de 256B de -asta 6 cm de di?metroB con numerosos estambres de color blanco* Florece en Septiembre5"ctubre* d.%.2 )r*#oFruto en c?psula campani>orme de color glauco y cubierta de un polvo blanquecinoB de =*752*7 cm de di?metro* Has semillas del eucalipto goma aDul son relativamente grandes para un eucalipto* May entre =L y 623 semillas por gramo de semillas y -olleEo o alrededor de 7Z3 semillas limpias por gramo* Has c?psulas liberan las semillas inmediatamente al alcanDar la madureD y las semillas son dispersadas por el viento* Ha distancia de dispersin calculada en base a una altura de 73 m con unos vientos de =3 Xm por -oraB >ue de solamente 23 m 6

!0

Proyecto de investigacin ESFB/FACS d.( Ori'en.$ Sus masas naturalesB est?n limitadasB a la costa meridional de .ustralia# en los Estados de 'ueva 1ales del Sur y Nictoria (en las Donas m?s >rasB viviendo entre los 69U y los 64U de latitud)B principalmente en los montes "t[ays y 1ippslandA y costas oriental y meridional de (asmaniaB entre los 7=U y 76U de latitud Sur* == d.+ 1a i#ad.$ El Eucalyptus globulus Habill viene a con>ormar una >uente de riqueDa >orestal debido a su crecimiento precoD y a su adaptacin a toda clase de suelo y clima en especial a la serrana del pas En el $er/ actualmente se cuenta con 86ZB863 -ect?reas de eucalipto* Se estima que eFiste actualmente =83B333 -ect?reas de estas plantaciones que est?n en edad de eFplotacinB de las cuales 8=B333 se encuentran ubicadas en CuscoB 2LB333 en .purmac y 29B333 en +unn*1( $ara lograr un desarrollo ptimo requiere de# .ltitud# 8335=833 m*s*n*m !,gimen de lluvias# invierno o verano Estacin seca# 6 meses no rigurosa (emperatura# 0edia m?Fima del mes m?s c?lido# =L526 C 0edia minina del mes de >rio# 75=2 CR Se desarrolla en un suelo areno5 arcilloso R

d.0 Me#odolo'.a de colec#a.$

!1

Proyecto de investigacin ESFB/FACS El meEor momento es por la ma;anaB antes del medioda y en da siempre soleado* Si lo -acemos muy temprano por la ma;ana el roco puede llegar a estropear las plantas debido a la -umedadB >actor muy des>avorable para su conservacin *.dem?s por la ma;ana temprano observaremos tienen las >lores cadasB en estado de letargo B no estando sus propiedades al =33 W *(ampoco es recomendable recolectarlas al medio da B especialmente con plantas arom?ticas ya que a esa -ora el calor es eFcesivo y muc-os de los aceites esenciales se volatiliDan* (ampoco es aconseEable recolectarlas en la tarde o a la cada del sol ya que las plantas est?n adormecidas quedando in-ibida su actividad productora* $odemos pues resumir que la meEor -ora para recolectar en general las plantas medicinales es entre las =3 y las == de la ma;ana y en da soleadoB -ora en que encontraremos con toda probabilidad las plantas al =33W*Si recolectamos en da nublado las propiedades son menoresB tardando mas en secarse y teniendo m?s -umedad* E.$ Acei#e esencial de e*calip#o.$ e.1 M>#odos de o #encin del acei#e esencial de e*calip#o.$ Hos aceites esenciales >luidos supercrticos 1+ Ha t,cnica de obtencin por arrastre de vapor se utiliDa a nivel industrial debido a su alto rendimientoB la pureDa del aceite obtenido y porque no requiere tecnologa so>isticada (0artneDB 233=)* pueden eFtraerse mediante varios m,todos# eFpresinB

destilacin con vapor de aguaB eFtraccin con solventes vol?tilesB en>lorado y con

e.% Des#ilacin por arras#re de &apor.$ Es una t,cnica que sirve >undamentalmente para separar sustancias insolubles en agua y literalmente vol?tilesB de otros productos no vol?tiles meDclados con ellas* El comportamiento de la destilacin de un sistema de dos >ases misciblesB donde cada lquido eEerce su propia presin de vapor y la suma de ambas es de la presin de operacinB y son independientes de las cantidades relativas de la meDcla* Estos

-2

Proyecto de investigacin ESFB/FACS -ec-os constituyen la base para la puri>icacin de sustancias por el arrastre de una corriente de vapor* EFisten varios compuestos org?nicos de punto de ebullicin relativamente alto que con agua co5destilan en una cantidad en peso lo su>icientemente grande para ser destilados con cierta rapideD por debaEo del punto de ebullicin del agua* Esto se debe a sus pesos moleculares relativamente elevados comparados con las del agua* 11

)i'*ra 6. Esquema del equipo de eFtraccin

e.%.1 Descripcin del proceso. continuacin se describir? el proceso al que debe ser sometido la droga antes de colocarla en el aparato de destilacin* e*2*=*= !ecoleccin

-!

Proyecto de investigacin ESFB/FACS Has plantas destinadas a la obtencin de aceites esencialesB se recolectan en primaveraB entre las =3 y == de la ma;ana y en da soleado* e*2*=*2* !ecepcin e %nspeccin Has plantas deben ser revisadas mor>olgicamenteB de tal modo que no se encuentre otro tipo eucalipto* e*2*=*6* $esado Huego de la inspeccin se pesa el material vegetal e*2*=*7* "reado Con la >inalidad de eliminar el agua presente en las plantas cortadas y as aumentar la e>iciencia de la operacin de destilacinA se realiDa un oreado de las mismas a la sombraB sobre catres con teEido de polipropilenoB pre>erentemente baEo tec-o en lugares ventilados* Has plantas no se deben deEar en arrumes por que se generan -ongosB los que trans>ieren un olor terrosoB mo-oso al aceite* e*2*=*8 $esado 2 Huego del oreado se pesa la matera prima para calcular el rendimiento de eFtraccin y p,rdida de agua con el oreado* e*2*=*Z* &estilacin Se introduce en el destilador la cantidad requerida de material vegetal teniendo la precaucin de que el material no quede muy suelto por que aumenta el consumo de energaB ni tampoco muy apretado por que disminuye el rendimiento del aceite* Huego se -ace pasar por medio de la masa vegetal vapor de aguaB que va llevando con sigo los compuestos vol?tiles que con>orman los aceites esencialesB a la salida del sistema de destilacin se encuentra un serpentn re>rigerante que -ace que la meDcla de vapor de agua y aceite esencial pasen de estado gaseoso a lquido*

--

Proyecto de investigacin ESFB/FACS Huego de esto se encuentra un separador de las dos >raccionesB y por medio de la di>erencia de densidadB estas se separan en el -idrolato y el aceite esencial* Con este procedimiento se obtienen lo que se conoce como aceite esencial crudo*

e*2*8* !e>inamiento $ara limpiar el aceite de impureDas se vierte el destilado poco a pocoB utiliDando un embudo provisto de >iltro de papel* Cuando el producto obtenido no re/ne toda la >inura requeridaB es necesario re>inar o depurar el aceite* $ara ello -ay que re5 destilar el producto al vaco utiliDando ?lcali para eliminar alde-dos y alco-ol de baEa concentracin para eliminar terpenosB compuestos que le otorgan olor o sabor desagradable al aceite esencial* Este proceso a la veD concentra el contenido de componentes importantes como el mentol y el cineol* Bruneton +* menciona que con el re>inamiento del aceite esencial de eucaliptoB el contenido de limoneno y p5cimeno pueden doblarseA y el aromadendrenoB el globulolB el transpinocarveol y alde-dos desaparecen en los aceites recti>icadosB perdi,ndose un ZW del aceite crudo* Has >racciones eliminadas pueden ser vendidas a otras industrias que consumen estos productos*
11

e.(. M>#odos )*nda!en#ales de An"lisis de Acei#es Esenciales 11 e*6*=* &eterminaciones Fsicas .specto Color "lor \ndice de re>raccin &esviacin ptica (poder rotatorio)

-.

Proyecto de investigacin ESFB/FACS Solubilidad en meDclas alco-ol5agua (alco-oles rebaEados)

e*6*2* &eterminaciones )umicas \ndices de saponi>icacin # L*4 5 23 \ndice de yodo# menor a 3B9 (,cnicas cromatogra>as# cromatogra>a liquida (HCB cromatogra>a Hquida de alta resolucin M$HC 0,todos espectroscpicos# ultravioleta gases asociado a masas 1C50S E.% Co!posicin )isico?*.!ica del Acei#e.$ Formula# C=3M=L" $eso molecular# =87*27 gQmol &ensidad# 3*4=3 < 3*46 gQml Solubilidad en agua# insoluble Solubilidad en etanol# =#L a 23UC (emperatura de ebullicin aproFimada# =99UC Color# amarillo claro "lor# penetrante !otacin ptica# Y8U a 54U \ndice de re>raccin# =*7Z65 =*7ZZ NBin>raroEo %!B cromatogra>a de

-%

Proyecto de investigacin ESFB/FACS

E.( Co!posicin ?*.!ica.$ a) =BL cineol (eucaliptol) Es el constituyente principal del aceite esencialB con una proporcin de 93 5 48W* El eucaliptol (=BL 5 Cineol)B es un aceite blancoB olorB alcan>oradoB monoterpenoide monociclicoB peso molecular =87B densidad 3*42=53*426B ebulle a =9Z UCB ndice de re>raccin =*78ZB insoluble en aguaB soluble en alco-olB cloro>ormoB ,terA es irritanteB eFpectoranteB antis,ptico y antibitico contraB E* coli y S* aureus 10

)i'*ra n5 @ Estructura del =BL cineol

-$

Proyecto de investigacin ESFB/FACS

)i'*ra n51< Estructura tridimensional de =BL cineol

b) $ineno# Es un terpenoB de dos ismeros de pineno* Se encuentra aproFimadamente 9*=Z W de ]<pineno en el aceite esencial de la -oEa de Eucalyptus globulus Habill y =*=3 W de b5pineno* El ]5pineno es lquidoB punto de ebullicin =88UCB densidad 3*L842B ndice de re>raccin =*7ZZ7B insoluble en aguaB soluble en alco-olB cloro>ormo*10

)i'*ra n511 Estructura de ]5 $ineno#

c) (erpinenos# Hos terpinenos son un grupo de ismeros de -idrocarburos que se clasi>ican como terpenos*El aceite de eucalipto contiene aproFimadamente 3*== W de ]5(erpineno y =*=Z W de ^5(erpineno

-,

Proyecto de investigacin ESFB/FACS

)i'*ra n51% Estructura de ismeros de terpineno d) ]5(erpinol# Se encuentra en una concentracin aproFimada de 3*=7W

)i'*ra n51( Estructura de ]5(erpinol

e) 0irceno# 0irceno o _5mircenoB es un compuesto org?nico oleo>nico natural* Se clasi>ica como un -idrocarburoB pero con m?s precisin como un monoterpeno *Se encuentra en una concentracin de =B28W

-/

Proyecto de investigacin ESFB/FACS

)i'*ra n51+ Estructura de 0irceno

>) Butiralde-ido# Sustancia oFigenada =Z

CM65CM25CM25CM"
)i'*ra n510 Estructura de Butiralde-ido

g) Naleralde-ido# Sustancia oFigenada =Z

CM 5CM 5CM 5CM 5CM" 6 2 2 2

)i'*ra n512 Estructura de Naleralde-ido

-0

Proyecto de investigacin ESFB/FACS

Has principales eFigencias en el mercado medicinal son un elevado contenido de cineol y la ausencia de cantidades apreciables de >elandreno y alde-dos*@

E.+.$Propiedades a#ri *idas al acei#e esencial. Entre las propiedades del aceite de Eucalipto se encuentran# .nalg,sicoB antirreum?ticoB antiin>lamatorioB antis,pticoB antiespasmdicoB antiviralB bactericidaB cicatriDanteB descongestivoB desodoranteB depurativoB diur,ticoB eFpectoranteB >ebr>ugoB -ipogluc,micoB insecticidaB rube>acienteB estimulante y verm>ugo*=9 $articularmente e>icaD con la gripeB in>ecciones de gargantaB tosB condiciones catarralesB sinusitisB asma y tuberculosis* El aceite esencial podra ser antis,ptico respiratorioB anti-elmnticoB bals?micoB eFpectorante e -ipoglic,mico* $uede menguar los e>ectos dolorosos de las migra;as y se dice que es /til en el tratamiento de la escarlatinaB la disenteraB las >iebres ti>oideasB la di>teria y la malariaB as como con la varicela* .ct/a bien en el sistema genito5urinarioA /til con problemas tales como cistitis y la diarrea* $arece disolver los c?lculos biliaresB y se -a empleado en el tratamiento de la ne>ritisB la gonorrea y la diabetes* Se dice que es e>icaD contra las -emorragias* $uede causar alg/n alivio al reumatismoB y se -a a>irmado su e>iciencia a este e>ecto en combinacin con limn y Eunpero* Es posible que tambi,n resulte /til en trastornos y molestias musculares de car?cter general y con las neuralgias (dolores nerviosos)B as como con la piorrea* .parentemente /til en erupciones cono el -erpes y e>icaD con las quemadurasB se dice que previene el desarrollo bacteriano y la subsiguiente >ormacin de pusB contribuyendo a la >ormacin de un nuevo teEido* (ambi,n parece obrar bien ante cortesB -eridasB ulceras y condiciones in>lamatorias

-1

Proyecto de investigacin ESFB/FACS $arece disolver los c?lculos biliaresB y se -a empleado en el tratamiento de la ne>ritisB la gonorrea y la diabetes* Se dice que es e>icaD contra las -emorragias* $uede causar alg/n alivio al reumatismoB y se -a a>irmado su e>iciencia a este e>ecto en combinacin con limn y Eunpero* =9

e.0 Ac#i&idad an#i ac#eriana.$ Se -a postulado que la actividad antibacteriana se debe a que en el interior de la c,lula microbianaB el aceite esencial oFida gradualmente el oFgeno proveniente del medio ambienteB produci,ndose metabolitos tFicos tales como el in superFido y el perFido de -idrgeno los cuales desnaturaliDan la membrana citoplasm?ticaB amino?cidos y protenas causando letalidad de los microorganismos (NillarB =444 y Fi>e et alB =44L)* El =BL cineol es capaD de inducir la produccin de compuestos tFicos de "2 act/a sobre la membrana citoplasm?ticaB espec>icamente a nivel de la coenDima aB uniendo los grupos sul>idrilos libres entre coenDimas >ormando enlaces disul>urosB que impiden su normal >uncionamiento en los procesos de Fido reduccin y en la produccin de energa requerida para el transporte activo de nutrientes -acia el interior de la c,lula (NalseciaB =444) 16 ). M>#odos para de#er!inar la ac#i&idad an#i ac#eriana Ha actividad de los antimicrobianos (antibiticos y quimioter?picos) debe ser evaluada in vitro para obtener la in>ormacin que permitir? decir si un microorganismo es susceptible o resistente a determinado producto*

&os son los procedimientos empleados para conocer ,sta in>ormacinB el m,todo del tubo dilucin y el del disco di>usin en agarB a ,ste /ltimo se le denomina# antibiograma*

.2

Proyecto de investigacin ESFB/FACS Ha actividad antimicrobiana in vitro determina a* Ha potencia de un agente antibacteriano en solucin b* Su concentracin en los lquidos del cuerpo o en los teEidos c* Ha sensibilidad de un microorganismo a concentraciones conocidas del medicamento 1@

).1 Medicin de la ac#i&idad an#i!icro iana Esta se determina mediante los m,todos de dilucin o di>usinB utiliDando un microorganismo est?ndar y una cantidad conocida del antimicrobiano* $ara ello se utiliDan las pruebas de dilucin en tubos y el m,todo de di>usin* $rueba de dilucin# En ,ste ensayo se incorporan cantidades conocidas de antimicrobianos en medios lquidosB se inoculan despu,s con las bacterias en prueba y se incuban* El punto >inal se toma cuando la cantidad de sustancias antimicrobiana es capaD de in-ibir el crecimiento o de matar a las bacterias en prueba* Se obtiene un resultado cuantitativoB destacando dos caractersticas importantes#` 5 Ha Concentracin 0nima %n-ibitoria (C0%) que se de>ine como la mnima concentracin de antimicrobiano (en agQmH) que in-ibe el crecimiento visible de un microorganismo despu,s de 27 -oras de incubacin a 69RC* Ha C0% se -a establecido como Pgold StandardP >rente a otros m,todos que eval/an susceptibilidad antimicrobianaA adem?s de con>irmar resistencias inusualesB da respuestas de>initivas cuando el resultado obtenido por otros m,todos es indeterminado*

.!

Proyecto de investigacin ESFB/FACS 5 Ha Concentracin 0nima Bactericida (C0B)B se de>ine como la mnima concentracin de antimicrobiano que elimina a m?s del 44B4W de los microorganismos viables despu,s de un tiempo determinado de incubacin (generalmente 27 -oras) 0,todo de di>usin` $reparacin del inculo* Ha t,cnica del antibiograma slo es aplicable a especies bacterianas en cultivo puro* $or ello previamente se proceder?B si es precisoB a -acer un aislamiento en placa* 1@

A. )ar!acolo'.a e;peri!en#al del acei#e esencial de e*calip#o.$

A.1 Es#*dio de la Uni&ersidad Ca#lica de 9an#a Mar.a$ %<<0- =3 n estudio llevado a cabo en la universidad Catlica de Santa 0ara B evalu el e>ecto in vitro del Eucalyptus globulus Habill (eucalipto) sobre Stap-ylococcus aureusB Esc-eric-ia coliB Klebsiella pneumoniaeB S-igella >leFneri B$roteus vulgaris $seudomona aeruginosa* $ara el presente estudio se utiliDaron -oEas de Eucalyptus globulus Habill (eucalipto)B las cuales >ueron recolectadas manualmente (6*Z33 gramos) B a las 4 am en las tierras de cultivo de la avenida paisaEista SocabayaB en el departamento de .requipa* Huego se procedi a colocarlas en una bolsa de papel para evitar su deterioro y para una meEor conservacinB se les limpio adecuadamente para desec-ar impureDasA luego las -oEas se trasladaron a una -abitacin con buena ventilacin y temperatura ambiente sin eFponerlas a la luD directaB y se procedi a colocarlas sobe un papel sin sobreponerlasB este m,todo se desarrolla -asta la sequedad completa de la -oEa* El material desecado se procedi a triturar en un morteroB seguidamente se peso las -oEasB para la posterior eFtraccin del aceite (833 gramos)

.-

Proyecto de investigacin ESFB/FACS El material vegetal se someti al m,todo de destilacin por arrastre de vaporB obteni,ndose un rendimiento de 3B88 W* El aceite esencial obtenido se almaceno en >rasco de vidrio ?mbarB para el respectivo an?lisis >sico qumico* $ara el an?lisis microbiolgico las cepas est?ndar .(CC >ueron# Stap-ylococcus aureus .(CC 28426B Esc-eric-ia coli .(CC 28422 B Klebsiella pneumoniae =336= B$roteus vulgaris .(CC =66=8 BS-igella >leFneri $seudomona aeruginosa 1oyenec-e en la ciudad de .requipa .(CC y .(CC =2322

.(CC 29L86B las cuales se obtuvieron en el Mospital

De#er!inacin de la concen#racin !.ni!a in4i i#oriaSe realiDo por el m,todo de dilucin en caldo* En primer lugar se preparo el diluyente al =WB para lo cual se agrego 7B483 ul de agua destilada y se les agrega 83 ul del dimetil sul>oFido (diluyente puro)* . continuacin se prepara la solucin madreB utiliDando como diluyente del aceite de eucalipto al dimetilsul>oFido al =W* Se obtiene la solucin madre en una proporcin de =#7B es decir = ml de aceite esencial y 7ml de diluyente al =WB despu,s se enrasa con agua destilada a =3 ml en una >iola y se procede a enrasar* Se toma separadamente las colonias anteriormente incubadas en placas petri B para posteriormente ser diluidas en 8ml de caldo peptonado -asta alcanDar la turbideD equivalente a 3*8 de 0ac FarlandB si la turbideD es mayor se le agrega mas caldo y si la turbideD es menor se le agrega mas colonias -asta que se equivalente a la escala de 0ac Farland ((ubo nR8) . continuacin se prepara Z series de =2 tubos est,riles B y se les agrega a todos los tubos =ml de caldo peptona B al primer tubo de cada serie se le agrega =B3 ml de solucin madre del aceite esencial de Eucalyptus globulus HabillB se agita bien el tubo y seguidamente se eFtrae =B3 ml para luego ser agregado al segundo tuboB agitar bien y as sucesivamente a los dem?s tubos -asta el tubo n R =3 del que se

..

Proyecto de investigacin ESFB/FACS desec-a =B3 mlB luego se agregan 3B= ml del inoculo a cada tubo* %nculo de cada bacteria* El tubo nR== se tomo como control positivo y nR=2 el control negativo* (odas las series se incuban a 69 RC por 27 -oras *(ranscurrido el tiempo de incubacin se apreciara la turbideD del contenido de los tubo para as poder observar el punto de rupturaB que es el tubo lipidiado y el tubo turbio* Se considera la C%0 a la cantidad que se encuentra en el tubo que no presenta turbideD* Huego de determinar la concentracin mnima in-ibitoria se procedi a sembrar a todos los tubos que no presentaron turbideD en .gar 0uller MiltonB seguidamente se lleva a la estu>a a una temperatura de 69R por 7L -orasB pasado el tiempo se observar? en cu?l de los tubos sembrados no -ubo crecimiento siendo la cantidad mnima bactericida (C0B) entre el tubo que no -ubo crecimiento y en el que si -ubo crecimiento*

.%

Proyecto de investigacin ESFB/FACS

)i'*ra n5 18# &eterminacin de la concentracin mnima in-ibitoria y concentracin mnima bactericida para cada cepa en estudio

TABLA N51

.$

Proyecto de investigacin ESFB/FACS Ac#i&idad an#i!icro iana del acei#e esencial de E. 'lo *l*s e;presada co!o Concen#racin !.ni!a in4i i#oria CCMID : concen#racin !.ni!a ac#ericida CCMBD

ACEITE DE EUCALIPTO MICROORAANI9MO CMI E. coli ATCC %0@%% Pro#e*s !ira ilis ATCC 1((10 7le siella pne*!onia ATCC 1<<(1 9. a*re*s ATCC %0@%( %B@1 (B1( 0B61 2B%0 0B61 0B61 C!'E!lD CMB 2B%0 2B%0

.,

Proyecto de investigacin ESFB/FACS )*en#e- 1utierreD Naldivia !anul>o *0amani !oman Silmar* E>ecto in vitro del Eucaliptus globulus Habill (eucalipto) sobre St-apylococcus aureusB Esc-eric-ia coliB Klebsiella pneumoniaeB $roteus mirabilisB S-igella >leFneri aeruginosa B niversidad Catlica Santa 0ara * .requipa52338 y $seudomona

).% Es#*dio de la Uni&ersidad de Mon#ene'ro$%<11n estudio llevado a cabo en la niversidad de 0ontenegro5Serbia evalu la

actividad antimicrobiana del aceite esencial de Eucalyptus 1lobulus Habil contra =9 microorganismosB incluyendo bacterias que causan intoFicacin alimentaria y deterioro -umano* En un principio las -oEas >ueron recogidas desde un punto /nico* Has -oEas >ueron secadas al aire en la sombra a temperatura ambiente y se almacenaron en bolsas de papel de doble capa en una -abitacinB protegido de la luD directaB -asta an?lisis adicional* Ha identidad de la planta de especmenes >ue con>irmada en el &epartamento de BiologaB de la niversidad de 0ontenegro

El agua inicial contenido en las -oEas de -ierba se encontr que era de =2B9W ([ Q [ el material vegetal se moli en un molino de ca>, yB despu,s permanecieron en una bolsa de polipropileno con cierre -erm,tico y se almacen compuestos vol?tiles* Huego el material vegetal (23 g) se someti a -idrodestilacin en un aparato Clevenger durante 2 - seg/n la Farmacopea %N Ougoslava* El aceite obtenido se sec sobre sul>ato de sodio an-idroB se midi y se verti en recipientes -erm,ticamente cerrados de vidrio oscuroB luego se almacen en un a L R C durante un m?Fimo de 6 das antes de utiliDarseB con el >in de evitar las p,rdidas de los

./

Proyecto de investigacin ESFB/FACS congelador a 57 R C -asta que se analiDaron por Cromatogra>a de gases5acoplada a espectroscopia de masas (1C50S) Con el >in de evaluar la actividad antimicrobiana del aceite esencial de E. globulus, se utiliDaron# como cepas de re>erencia Staphylococcus aureus .(CC 8426B Escherichia coli .(CC 28422B Pseudomonas aeruginosa .(CC B y Candida albicans .(CC A adem?s el aislado de, Pseudomonas aeruginosa, Klebsiella pneumoniae, Proteus mirabilis, Streptococcus pyogenes, Morganella morganii, Providencia stuartii, Enterobacter cloacae, !reundii,y Salmonella in!antis cinetobacter baumannii, Citrobacter

De#er!inacin de la CMI : CMB.$ $ara determinar la concentracin mnima in-ibitoria (C0%) y la mnima bactericida concentracin (C0B) se utiliD el m,todo de micro dilucin en caldo Ou et al* (2337)* (odas las pruebas se realiDaron en caldo 0ueller Minton suplementado con ([een L3 a una concentracin >inal de 3B8W (v Q v)* BrevementeB diluciones dobles seriadas del aceite se prepararon en una placa de microtitulacin de 4Z pocillos que oscil entre 3B34 mg Q ml a 28B33 mg Q ml* Se a;adieron para cada pocillo=3 uH de solucin indicadora resaDurina (preparada por disolucin de un comprimido de 2935mg en 73 ml de agua destilada est,ril) y 63 uH de caldo 0ueller Minton FinalmenteB =3 uH de suspensin bacteriana (=3 para lograr una concentracin de =3 CF
7 Z

FC Q ml) se a;adi a cada pocillo

Q ml*

&os columnas en cada placa se utiliDaron como controles# una columna con un antibitico de amplio espectro como control positivo (amyXacine)B y una columna que contiene metanol como un control negativo*

.0

Proyecto de investigacin ESFB/FACS Has placas >ueron envueltas sin apretar con papel >ilm para que las bacterias no se des-idraten* El plateado se prepararon por triplicadoB y luego >ueron colocados en una incubadora a 69 R C durante =L527 -oras* El cambio de color se evalu entonces visualmente* Ha concentracin m?s baEa a la que el cambio de color ocurri >ue tomada como el valor C0%* El promedio de 6 valores se calcul para proporcionar el C0% y C0B*

Ha C0% se de>ine como la concentracin m?s baEa del aceite esencial en que el microorganismo no demuestra el crecimiento visible* El crecimiento de microorganismos se indica mediante turbideD* Ha C0B se de>ini completamente muerto* $ara evaluar la actividad antimicrobiana de Candida .lbicansB se prepararon soluciones madre en agua para nistatina y en metanol para aceite* Ha dilucin >inal >ue preparado en medio !$0% =Z73B
6

como la

concentracin m?s baEa del aceite esencial en que el microorganismo se incub

aEustado

pM

9B3

con

3*=Z80

morp-olenepropane5tampn de ?cido sul>nicoB en el intervalo de 3B34 mg Q ml a 28 mg Q ml y el tama;o del inculo de =3 incubaron en el aire ambiente a 68 R C* Ha C0% se determino visualmente despu,s de 7L - de incubacinB como la CF Q ml* Ha BandeEas de microdilucin se

concentracin m?s baEa del medicamento que no caus ning/n crecimiento detectable* Finalmente se -allo el promedio de 6 valores y se logro calcular el C0% y la C0B para el aceite de prueba*

.1

Proyecto de investigacin ESFB/FACS

TABLA N5% Ac#i&idad an#i!icro iana del acei#e esencial de E. 'lo *l*s e;presada co!o Concen#racin !.ni!a in4i i#oria CCMID : concen#racin !.ni!a ac#ericida CCMBD

%2

Proyecto de investigacin ESFB/FACS

F MICROORAANI9MO

ACEITE DE EUCALIPTO C!'E!lD CMI CMB <.<@ 1.08 2.%0 <.16

E. coli ATCC %0@%% Pro#e*s !ira ilis Gle siella pne*!oniae 9#ap4:lococc*s a*re*s ATCC %0@%( C. al icans ATCC 1<%(1 En#ero ac#eria

<.<@ <.(2 1.08 <.<@

<.(2 <.8%

<.(2 <.8%

%!

Proyecto de investigacin ESFB/FACS )*en#e- &amEanovic5NratnicaB B* E>ecto antimicrobiano de los aceites esenciales aislados de
Eucalyptus globulus Habill* desde 0ontenegro* En# !evista C-eca de Ciencias de la .limentacin < bE%* !ep/blica C-eca* Biblioteca .grcola y .limentariaB %nstituto de Economa .grcola y de la %n>ormacin* Nolumen 2L (6)

$odemos apreciar que la concentracin mnima in-ibitoria C0% oscil entre 3B34 mg Q ml y =B89 mg Q mlB con la menor actividad para Xlebsiella pneumoniae (=B89 mg Q ml)B mientras que la actividad m?s alta se observ contra S. aureus, E. coli, y S. pyogenes (3B34 mg Q ml)* El CB0 m?s baEo >ue de 3B34 mg Q ml para E. coli y S. pyogenes, mientras ". pneumoniae tuvo el mayor 0BC de ZB28 mg Q ml* Estos resultados con>irman el uso potencial del aceite esencial del Eucalyptus globulus L* en la in>ecciosas*
23

industria

>armac,uticaB el cual puede ser /til como agente

antimicrobiano natural para el tratamiento de numerosas las en>ermedades

A. To;icolo'.a del acei#e esencial de e*calip#o.$ El aceite esencial no es tFico* Sin embargoB altas dosis del aceite son irritantes producen convulsinB delirioB di>icultad respiratoriaB gastroenteritis y -ematuria Hos datos sobre las muertes causadas por el consumo de aceite de eucalipto en los seres -umanos no son compatiblesB se -a producido casos de muerte despu,s de el consumo de tan slo 758 mlB mientras que otras personas se -an en>ermado y se -an recuperado despu,s de consumir =235223 ml de aceite* Basado en estudios con roedoresB la administracin oral &H83 (la dosis por va oral consumida que es letal para el 83W de los animales) para el aceite de eucalipto es muy alta 7*77gQXg por Xilogramo de peso (BS) para ratas y la &H83 es menor cuando slo se utiliDa =BL5cineol 2*7LgQXg (BS) para las ratas* Ha &H83 por va cut?nea para los coneEos es mayor que 8gQXg BS*

%-

Proyecto de investigacin ESFB/FACS El aceite por va subcut?nea en ratones -embras gestantes (=68 mgQXg) durante la organog,nesis (Z5=8 das) no provoca embriotoFicidad ni >etotoFicidad*
2=

El aceite de eucalipto no se cree que es teratog,nico o que pueda a contaminar la lec-e* Sin embargoB algunos estudios -an indicado que el citronelal y >elandrenoB que se puede encontrar en algunos Eucalyptus spp. B son d,biles mutagenicos * Ha* Food and &rug .dministration de los EE* -a aprobado el uso de aceite de

eucalipto y =BL5cineol (eucaliptol) para el consumo -umano* El ConseEo de Europa tambi,n -a aprobado el uso del aceite como aditivo para la alimentacin -umana (a un nivel de =8 ppm)* En FranciaB las in>usiones de E. globulus -oEas pueden ser registrados como productos para el tratamiento de a>ecciones bronquiales benignas -umanos sin estudios toFicolgicos*22 %.( De/inicin de #>r!inos "sicos Inoc*lacin- Ha inoculacin o siembra es poner en contacto los microorganismos o la muestra Bacteriolgica con los medios de cultivo* Uroc*l#i&o- Siembra de un medio de cultivo con una peque;a cantidad de orina eFtrada as,pticamente* Tenes!o- deseo continuoB doloroso e ine>icaD de orinar Pola?*i*ria- Frecuencia eFagerada de las micciones que no coincide necesariamente con el aumento del volumen total de orina Dis*ria- EFpulsin di>cilB dolorosa e incompleta de la orina* )i! rias- ConEunto de >ilamentos o ap,ndices >ili>ormes cortos que rodean algunas bacterias gramnegativas* Ac#i&idad *re"sica- Capacidad de aumentar el $M

%.

Proyecto de investigacin ESFB/FACS Ci#o#;ico- )ue posee la capacidad de destruir c,lulasB como la que poseen los macr>agos o los lin>ocitos K* )e r./*'o- $ropiedad de una sustancia o planta medicinal que sirve para -acer baEar la >iebre* R* e/acien#e- )ue provoca el enroEecimiento de la piel o de las mucosas con las que entra en contactoB en especial a trav,s de la dilatacin de los capilares* An#i4el!.n#ico- &cese del >?rmaco que es capaD de eFpulsar o matar los gusanos intestinales* (ambi,n se denomina verm>ugo*

CAPTULO III METODOLOAA DE LA INHE9TIAACIN

(.1 DiseIo de la in&es#i'acin.$

(.1.1 Tipo de in&es#i'acinEste trabaEo in>ormacin* Es del tipo esencial &escriptivaB porque est? orientada a evaluar los e>ectos del aceite es una investigacin $ura ya que parte de un marco terico y

permanece en ,lB su >inalidad es >ormular nuevas teoras mediante la recoleccin de

sobre un determinado grupo de bacterias y describir la concentracin

in-ibitoria y bactericida*

(.1.% M>#odo%nductivoB recoleccin de in>ormacin

%%

Proyecto de investigacin ESFB/FACS (.% Po lacin : !*es#reo de la in&es#i'acin.$ 0arco poblacional# $lanta de Eucalyptus globulus Labill Eucalipto

(.( Haria les e indicadores.$ Nariable independiente# Nariable nR =# Concentracin mnima in-ibitoria (C0%) Nariable nR 2# Concentracin mnima bactericida (C0B)

%ndicadores# mgQml

(.+ T>cnicas e ins#r*!en#os de recoleccin de da#os.$ (.+.1 T>cnicas- !ecopilacin de datos* (.+.% Ins#r*!en#osCompilacin y revisin de >uentes primarias de in>ormacin# tesisB monogra>asA para establecer posteriores conclusiones*

%$

Proyecto de investigacin ESFB/FACS

Re/erencias Bi lio'r"/icas-

=*5 CarranDa 0arco .* !*B !odrgueD M &iana*B &aD F +es/s* Etiologa y resistencia bacteriana de las in>ecciones urinarias* !evista Sociedad $eruana 0edicina %nterna 2336*Nolumen =Z(37) *$?g* Z 5 =3 2*5 Hibertad .lDamoraB Hiliana 0oralesB Hourdes .rmasB 1ilma Fern?ndeD *0edicina tradicional en el $er/# .ctividad antimicrobiana in vitro de los aceites esenciales eFtrados de algunas plantas arom?ticas* !evista# .nales de la >acultad de 0edicina* 0ayor de San 0arcos* Nolumen Z2(32) $?g* =8Z5=Z= 6*5Naldevenito S* +uan $ablo* %n>eccin urinaria recurrente en la muEer* !ev* C-ilena %n>ectologia* 233LA Nolumen 28(7)# $ag*2ZL529Z* 7*5 0uder !!B Brennen CB !i-s +& et al* %solation o> Stap-ylococcus .ureus >rom t-e rinary (ract# .ssociation o> %solation [it- Symptomatic 72(=)*$ag*7Z583* 8*5 1utierreD Naldivia !anul>o *0amani !oman Silmar* E>ecto in vitro del Eucaliptus globulus Habill (eucalipto) sobre Stap-ylococcus aureusB Esc-eric-ia coliB Klebsiella pneumoniaeB $roteus vulgarisB S-igella >leFneri y $seudomona aeruginosaB Catlica Santa 0ara* .requipa52338 niversidad rinary (ract %n>ection and Subsequent Stap-ylococcal Bacteremia* Clinical %n>ectious &iseases 233Z Nolumen niversidad

%,

Proyecto de investigacin ESFB/FACS Z*5 C%&E *233Z 9*5 !olando )uert ClvareD* .ceites Esenciales &e Eucalipto* !evista Cubana Farmacia Nolumen 68 (=)2334* $ag*24568* L*5 &amEanovic5NratnicaB B* E>ecto antimicrobiano de los aceites esenciales aislados de Eucalyptus globulus Habill* desde 0ontenegro* En# !evista C-eca de Ciencias de la .limentacin < bE%* !ep/blica C-eca* Biblioteca .grcola y .limentariaB %nstituto de Economa .grcola y de la %n>ormacin* Nolumen 2L (6) $ag* 29952L7* *Centro de investigacin y documentacin del eucalipto* niversidad de Muelva

%/