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DETERMINAO DO ESPECTRO DE ABSORO DOS PIGMENTOS DOS CLOROPLASTOS

INTRODUO

As folhas absorvem mais fortemente as radiaes das faixas do azul-violeta e do amarelo-vermelho, mas transmitem ou refletem quase toda a radiao da faixa do verde. Os pigmentos dos cloroplastos so os responsveis por essa absoro. Os ftons da radiao absorvida iro excitar as molculas de clorofilas ou carotenides nos tilacides dos cloroplastos. Os pigmentos fotossintticos podem ser purificados e, com o auxlio de um colormetro ou espectrofotmetro, possvel determinar suas absorvncias relativas nos diferentes comprimentos de onda, o que possibilita construir um "espectro de absoro". Quando se estuda o efeito da luz de diferentes comprimentos de onda (usando quantidades no saturantes) num processo, como a fotossntese, obtm-se um "espectro de ao". O espectro de ao comparado com o espectro de absoro de um dado pigmento ajuda a elucidar a possvel participao desse pigmento no processo em estudo.
OBJETIVO

Determinar o espectro de absoro dos pigmentos dos cloroplastdios.


MATERIAL

- Extrato cetnico de pigmentos de cloroplastos - Extrato de carotenides - Acetona pura - Colormetro ou espectrofotmetro
PROCEDIMENTO

Utilizando extrato cetnico de pigmentos foliares, determine a absorvncia nos comprimentos de onda disponveis no colormetro ou espectrofotmetro. Caso o extrato esteja muito concentrado, dilua-o com acetona. Use a acetona pura para ajustar o zero de absorvncia (ou 100% de transmitncia).

Figura 1. Esquerda - Extrato cetnico de pigmentos foliares. Direita - Espectrofotmetro Construa um grfico e coloque na abscissa os comprimentos de onda e, na ordenada, as respectivas absorvncias. Da mesma forma, determine o espectro de absoro de uma preparao de carotenides e compare com o espectro anterior.

COMENTRIOS

Os picos do espectro de ao da luz na fotossntese e os dos espectros de absoro da luz pela clorofila tm padro semelhante, evidenciando que a clorofila o pigmento mais importante na recepo da luz na fotossntese (Figura 2). A absoro da luz pela clorofila ocorre com intensidade mxima nas faixas de comprimento de onda de 450 e 700 nm, que corresponde luz azul e vermelha, respectivamente. O espectro de ao da fotossntese no corresponde rigorosamente ao espectro de absoro da luz pelas clorofilas (Figura 3). Considerando o fenmeno fotossntese em termos gerais, a resposta luz vermelha maior do que luz azul. Isso se explica porque os carotenides (xantofila, licopeno e caroteno) absorvem intensamente certas radiaes de forma mais eficiente que as clorofilas, transferindo depois a elas parte da energia absorvida.

Figura 2. Espectro de ao da fotossntese e espectro de absoro dos pigmentos dos cloroplastos


QUESTES

1. Quais so as faixas de comprimentos de onda em que os extratos de pigmentos dos cloroplastos mais absorvem? 2. Por que a absorbncia menor na regio da luz verde? 3. Os carotenides apresentam espectro de absoro semelhante ao das clorofilas? 4 Quais so os comprimentos de onda mais absorvidos pelos carotenides? 5. Para quantificar as clorofilas a e b de um extrato cetnico ou de pigmentos por meio de um fotocolormetro, podem-se utilizar comprimentos de onda na faixa da luz azul? E da luz vermelha? 6. Qual o princpio bsico do funcionamento de um colormetro (ou espectrofotmetro)?