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Reltorio Bioquimica - Reaes Coradas, Cromatografia Em Papel e Eletroforese De Protenas e Aminocidos

Universidade Estadual Paulista Jlio de Mesquita Fillho Departamento de Bioqumica e Tecnologia Qumica

Introduo
Aminocidos so monmeros das estruturas conhecidas como protenas. Existem 20 aminocidos fornecedores, que so divididos em diferentes grupos segundo sua carga em pH 7,0. A estrutura que compe os aminocidos um grupo amina, um grupo carboxila, um hidrognio e um grupo R (que diferencia cada um dos 20 aminocidos) ligados um carbono . Protena uma cadeia polipeptdica formada a partir de resduos de aminocidos em ligaes peptdicas (formada de uma desidratao proveniente da reao do grupo amina e do grupo carboxila). H quatro diferentes classificaes estruturais para as protenas: primria, secundria, terciria e quaternria, cada qual com uma caracterstica especfica que a define. A fim de identificar os aminocidos provenientes de amostras analisadas no laboratrio, foram utilizadas trs tcnicas distintas:

* Reaes Coradas * Cromatografia em papel * Eletroforese

As reaes coradas so reaes que especificam as caractersticas nicas de cada um dos aminocidos e de seus grupos funcionais, sendo ela guiada pelos diferentes grupos qumicos encontrados neles. A cromatografia, por sua vez, consiste no mtodo de separao, na qual constituintes da amostra so divididos em duas fases, uma estacionria e outra mvel. J a eletroforese analisa os diferentes PIs (pontos isoeltricos) dos aminocidos, em um determinado pH, a partir da migrao de ons em um campo eltrico.

Materiais e Mtodos
Foram utilizadas para a identificao na amostra quatro: Tcnicas de reaes com

ninidrina e biureto, teste para aminocidos sulfurados, reaes de xantoprotena e de Millon, reaes por precipitado de cido fosfotungustico, reaes de Pauly (para a identificao de histidina), reaes de Sakaguchi (para a identificao de arginina), cromatografia e eletroforese. E os materiais utilizados para tais experimentos foram:

* Amostras de ovoalbumina, glicina, prolina, histidina, gua destilada e amostra; * Tubos de ensaio; * Pipeta; * cidos; * Banho-maria; * Capilares; * Folha de Cromatografia; * Cubas para Eletroforese; * Cuba de solvente.

Resultados Experimentais
Na primeira parte dos experimentos de identificao, realizados dia 20 de maro, foram executas uma srie de reaes coradas de aminocidos e protenas, com o objetivo de determinar a presena de possveis aminocidos na amostra. Segue abaixo os resultados obtidos:

Em reaes gerais de aminocidos e protenas, observaram-se reaes da ninidrina e da biureta.

A) Reaos da Ninidrina 1. Soluo de colorao azul com pedaos brancos 2. Soluo de colorao azul escuro 3. Soluo laranja 4. Soluo azul escuro 5. Soluo incolor 6. Soluo roxa Conclumos, portanto que no h a presena de protena na amostra. B) Reao do Biureto 1. Soluo violeta 2. Soluo azul 3. Soluo azul 4. Soluo azul

Observao: O tom azulado se deve ao Cu (cobre) Em reaes especficas, foram realizados testes para aminocidos sulfurados e aminocidos aromticos.

A) Teste para aminocidos sulfurados 1. Soluo de colorao marrom acinzentado 2. Soluo incolor 3. Soluo cinza 4. Soluo cinza 5. Soluo incolor 6. Soluo incolor B) Reao Xantoproteca (para aminocidos aromticos) 1. Soluo cor de gema 2. Soluo laranja amarronzado 3. Soluo laranja avermelhado 4. Soluo incolor 5. Soluo incolor C) Reao de Millon 1. Soluo rosa com precipitado 2. Soluo vinho com precipitado branco 3. Soluo bege com precipitado 4. Soluo incolor 5. Soluo incolor Em reaes para aminocidos bsicos (lisina, arginina, histidina), foram executados experimentos de precipitao com cido fosfotungustico, reao de Pauly e reao de Sakaguchi. A) Reao de precipitao com cido fosfotungustico 1. Soluo pastosa de colorao amarelada 2. Soluo branca 3. Soluo branca 4. Soluo branca 5. Soluo incolor 6. Soluo incolor

As reaes de Pauly e de Sakaguchi no foram realizadas porque j era de conhecimento do grupo que em nossa amostra no havia a presena de nenhum dos aminocidos a serem testados (histidina, lisina ou arginina). A partir dos resultados obtidos nas reaes coradas, nota-se que em todos os experimentos realizados, o teste deu negativo. Em outras palavras conclumos que atravs deste mtodo no foi possvel diagnosticar a presena de nenhum aminocido na amostra. Partimos ento para a segunda parte dos testes de identificao, realizados no dia 27 de maro, em que os testes de cromatografia e eletroforese nos possibilitaram uma maior abrangncia na identificao dos aminocidos, uma vez que somente a partir de

reaes coradas no foi possvel afirmar sobre a composio da amostra. Nesse sentido, a cromatografia foi o mtodo de identificao mais eficiente, uma vez que foi possvel observar claramente a distribuio das fases (estacionria e mvel) e determinar que em nossa amostra X existe a presena de cido glutmico, valina e leucina. Cromatografia em papel No teste de eletroforese s foi possvel notar o deslocamento do cido glutmico, uma vez que classificados como apolares, a valina e a leucina, permanecem imveis se inseridos em um campo eltrico. Leucina Valina cido Glutmico