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Introduccin

En el presente informe de laboratorio de microbiologa se explica la tincin gran para la identificacin de las bacterias tanto gram positivas como las gram negativas. La tincin comprende una serie de pasos previos necesarios, antes de la observacin de los microorganismos con el microscopio. Tambin se llev a cabo el estudio del microscopio y sus partes principales, asi como su correcta manipulacin, sobre todo el uso del revolver para cambiar de lente objetivo con la finalidad de aumentar o reducir el aumento. Finalmente se hace la observacin de las distintas formas bacterianas con el microscopio. Los microorganismos fueron obtenidos todos de la muestra de mucosa bucal de los estudiantes del aula.

Marco terico

1. Medio de cultivo: Un medio de cultivo intenta el crecimiento y reproduccin in vitro de las bacterias, para observar sus propiedades y conseguir un mejor estudio bioqumico e inmunolgico, al contar con material en cantidad suficiente. Por ello constare de algunas propiedades (pH adecuado, sales, nutrientes, condicione de aero-anaerobiosis, etc.), que sern las ms idneas para la bacteria que deseamos estudiar y se citan en cada una de ellas en particular, en la bacteriologa sistemtica. 2. Tipos de medio de cultivo:

Los medios de cultivo se dividen por su finalidad en: medios de enriquecimiento que tratan de aumentar el nmero de bacteria existentes, si consideramos que se encuentran en cantidad muy exigua, a la vez que inhiben la flora de asociacin acompaante y de aislamiento (que tienen por fin conseguir una colonia o clon, es decir, grupo de bacterias procedentes de una sola, con todas sus propiedades); los dos primeros son principalmente lquidos y los segundos, slidos. 3. Medios selectivos y diferenciales: Los medios selectivos son aquellos que poseen algn componente que permite o no le crecimiento de una especie bacteriana, carcter de importancias para su identificacin. Los diferenciales, aquellos que las diversas especies que hay que testar alteran de forma distinta, por lo que suelen llevar indicadores (sustancias que varan su coloracin segn el pH del medio) u otros ndices de reacciones qumicas definidas. Ambos medios selectivos o diferenciales pueden ser lquidos o slidos. El objetivo clsico del aislamiento es la separacin de

los microorganismos en grupos, que puedan identificarse siguiendo los principios de la microbiologa.

Desarrollo de la Prctica
Objetivo: Aprender las caractersticas de las colonias de las diferentes especies bacterianas de inters en salud y el control de calidad en el laboratorio microbiolgico.

Mtodos:

Cultivo de bacterias en medios generales, selectivos y diferenciales slidos y lquidos.

Materiales y equipos:

Placas petri Tubos de ensayo 13x100mm Mechero con alcohol Mango de siembra Gradillas p/tubos de 16x150mm Agar nutritivo Caldo nutritivo Desinfectante Asa de siembra Aguja de siembra Mango para asa de siembra

Papel kraft Fosforos

I.

Procedimiento Experimental:

1. Preparacin del rea de trabajo: Desocupamos el rea de trabajo y hacemos limpieza y

desinfeccin con el desinfectante.

2. Preparacin de los medios de cultivo

Obtencin de la muestra: En primer lugar se realiza el raspado de la mucosa bucal de un compaero con un hisopo largo de madera. sta se adhiere a la superficie de una lmina portaobjeto, el primer tercio de sta.

Frotis: Consiste primero en realizar un extendido de la muestra, utilizando el asa de siembra. En segundo lugar se realiza la fijacin con calor, durante 20 segundos, a menos de 40C, para lo cual se utiliza el mechero de alcohol.

Coloracin: - Se utiliza el colorante primario que es el cristal violeta, se aplican dos gotas sobre la muestra, y se espera un minuto. - Se enjuaga con agua destilada. - Se aplica el mordiente, que son dos gotas de Lugol. Se espera un minuto. - Se enjuaga con agua destilada.

- Se realiza la decoloracin con alcohol:acetona 1:1. Se aplican varias gotas de esta hasta decolorar completamente. - Se enjuaga con agua destilada. - Se utiliza el colorante de contraste: dos gotas de Safranina, y esperamos durante 30 segundos. - Se enjuaga con agua destilada. - Dejamos secar antes de su observacin.

Uso del Microscopio:

Reconocemos las partes del microscopio ptico, as como sus cuidados y uso durante el estudio de especies bacterianas. Se explic las clases de lentes: lente ocular (10x) que corresponde a nuestros ojos. Y los lentes objetivos, que corresponden a la lmina portaobjeto. Los lentes objetivos generalmente son cuatro: 4x, 10x, 40x y 100x. Cada lente objetivo le corresponde un color, asi tenemos que: - 4x: rojo - 10x: amarillo - 40x: azul - 100x: blanco (lente de inmersin)

Para obtener el aumento se multiplica el lente ocular por el lente objetivo. As tenemos que si usamos el lente objetivo 10x tendramos un aumento final de 100x. Si el lente objetivo es 100x, el aumento ser de 1000x. Finalmente, si vamos a utiliza el objetivo de 100x, es necesario usar aceite de inmersin.

Observacin en el microscopio:

Primero observamos con un aumento de 100x y luego a 1000x (con aceite inmersin)

100x

1000x

1000x

Referencias Biblogrficas

1. Laboratorio de Microbiologia: Tincin Gram: labmicrofarmaciaulat.blogspot.com/p/tincion-de-gram_20.html 2. Bacterias y metodologa de estudio: www.slideshare.net/cebas37/bacterias-y-mtodos-de-estudio-presentation 3. Tcnicas de tincin: fundamento. www.microinmuno.qb.fcen.uba.ar/SeminarioTinciones.htm 4. Tincin de Gram: http://es.scribd.com/doc/43696269/Tincion-de-gram-Introduccion-desarrollo-einterpretacion-de-resultados-Practica-2