Compendio prcticas laboratorio Bioloxa e Xeoloxa

David Casado Bravo - CPI As Revoltas - Cabana de Bergantios

ndice ndice .......................................................................................................................................... 2 2 - XERALIDADES................................................................................................................... 3 2.1 MATERIAL BSICO DE LABORATORIO.............................................................. 3 2.2 TRABALLAR CON SEGURIDADE NO LABORATORIO...................................... 4 2.3 MANEJO Y USO DEL MICROSCOPIO PTICO COMPUESTO ........................... 6 2.3 PREPARACIN DE COLORANTES....................................................................... 10 3 - RECOECEMENTO DE BIOMOLCULAS.................................................................. 12 3.1.- Identificacin de glcidos con poder reductor ......................................................... 12 3. 2.- Identificacin de polisacridos: identificacin de almidn mediante la prueba del Lugol................................................................................................................................. 13 3.3.- Identificacin de lpidos. Reaccin de saponificacin. ............................................ 14 3.4.- Identificacin de protenas mediante la reaccin el Biuret ...................................... 15 3.5.- Actividades enzimticas: especificidad y desnaturalizacin por cambios de pH y temperatura ....................................................................................................................... 18 4 - OBSERVACIN MICROSCPICA ................................................................................. 20 4.1 OBSERVACIN MICROORGANISMOS EN GOTA DE AUGA.......................... 20 4.2 OBSERVACIN DE UN TEJIDO VEGETAL: TEJIDO EPIDRMICO DE CEBOLLA........................................................................................................................ 28 4.3 OBSERVACIN MICROSCPICA DE UN TEJIDO VEGETAL: TEJIDO EPIDRMICO DEL PUERRO ........................................................................................ 30 4.4 OBSERVACIN DE CLULAS VEGETALES: CLULAS DE LA PULPA DE TOMATE ......................................................................................................................... 32 4.5 MITOSIS EN CLULAS DE RAZ DE CEBOLLA ................................................ 34 4.6 OBSERVACIN DE CLULAS DO EPITELIO BUCAL ...................................... 36 5 - ADN .................................................................................................................................... 38 5.1 EXTRACCIN DO ADN .......................................................................................... 38 6 - A MATERIA....................................................................................................................... 41 6.1 O mtodo cientfico e a densidade.............................................................................. 41 6.2 Os cambios de estado ................................................................................................. 43 7 - ROCHAS E MINERAIS..................................................................................................... 45 7.1 RECOECEMENTO DALGUNHAS ROCHAS CUNHA SINXELA CLAVE DICOTMICA................................................................................................................. 45 8 - REINO VEXETAL ............................................................................................................. 46 8.1 - RECOECEMENTO DE RBORES CON CLAVES DICOTMICAS SINXELAS....................................................................................................................... 46 9 - REINO ANIMAL................................................................................................................ 47 9.1 - CLASIFICACIN DE ANIMAIS CON CLAVES DICOTMICAS SINXELAS 47

2 - XERALIDADES

2.1 MATERIAL BSICO DE LABORATORIO

2.2 TRABALLAR CON SEGURIDADE NO LABORATORIO

COMO TRABALLAR: Permanece sentado no teu sitio salvo que se indique o contrario A norma xeral "Est prohibido tocar todo", salvo o material necesario para a realizacin da prctica. Non actes ata non escoitar as indicacins do profesor e ter lido as instrucins da prctica O laboratorio debe quedar recollido: o . Cando o abandones deber estar na mesma situacin en que o atopaste. o Fxate ben na colocacin de todos os obxectos antes de usalos HAI QUE TENER COIDADO CON ..... As conducins e os aparellos elctricos. Nunca os manipules nin os toques coas mans molladas, xa que a auga non destilada ao posur minerais disolvidos boa condutora da corrente elctrica As conducins de gas e os chisqueiros. Se non se utilizan , deben estar pechados. Non acendas os chisqueiros preto de materiais inflamables. O material de vidro: o Cando debas quentar un recipiente de vidro, non o collas coas mans. Usa as pinzas para suxeitalo e retiralo do lume. o Cando quentes unha substancia nun tubo de ensaio, mantn o tubo suxeito coas pinzas e en certo ngulo. Nunca mires directamente ao interior do tubo pola sa boca nin a dirixas cara un compaeiro. Os reactivos qumicos perigosos. Segundo a normativa do Consello de Europa, as etiquetas destes produtos deben inclur: o Smbolos de perigosidade.

o O risco especfico do reactivo (por exemplo"provoca corrosins graves") o As normas de seguridade que se deben adoptar ( por exemplo "manter nun recipiente hermeticamente pechado")

HAI QUE SER PRECABIDO E RESPONSABLE No laboratorio preciso extremar a orde e limpeza para evitar na medida do posible calquera tipo de accidente. Utiliza recipientes apropiados para tirar: vidros rotos, residuos de metais ou as substancias qumicas que non uses. Non pipetees nunca unha substancia qumica coa boca, xa que podes inxerila accidentalmente ou respirar os vapores que desprenden. Ademais con frecuencia, estas substancias son txicas ou corrosivas. Non deixes destapados os frascos nin aspires o seu contido. Moitas substancias lquidas (alcohol, ter, cloroformo, amonaco...) emiten vapores txicos. Usa gafas protectoras sempre que manipules substancias quentes ou custicas para non queimarte os ollos se se producen salpicaduras. Le sempre con atencin as etiquetas dos frascos dos reactivos qumicos. Non dirixas cara os teus compaeiros os tubos de ensaio ou o instrumental capaces de expulsar gases ou lquidos. Cando uses o material de vidro: o Antes de usalo verifica que non presenta gretas o Grdao no seu sitio cando non o uses para evitar que se rompa. Non vertas substancias qumicas polo desaugadoiro. No caso contrario sempre co fagas deixa correr auga en abundancia.

ACTIVIDADE COECEMENTO DO LABORATORIO: FICHA TCNICA: Coecemento do laboratorio OBXECTIVOS: Coecemento e uso do laboratorio Establecer as normas bsicas de funcionamento e seguridade no laboratorio 1 ESO NIVEL O material bsico do laboratorio MATERIAIS

Tras mostrar ao alumnado o laboratorio, o alumnado traballando en grupo recolleran no seu caderno: 1. Normas bsicas de seguridade no laboratorio 2. Debuxo, nome e uso do material bsico do laboratorio (no caso dos instrumentos de medida incluirn a sa precisin) 3. Primeiros auxilios en caso de accidente Un representante de cada grupo ler o seu traballo o resto das clase facndose unha nova posta en comn. A continuacin repartirase en grupos para facer murais para colgalos en lugar visible.

2.3 MANEJO Y USO DEL MICROSCOPIO PTICO COMPUESTO

Partes de un microscopio ptico

PARTES DE UN MICROSCOPIO PTICO

Sistema iluminacin: o FOCO: Fuente de iluminacin que dirige los rayos luminosos hacia el condensador. o CONDENSADOR: Lente que concentra los rayos luminosos sobre la preparacin. o DIAFRAGMA: Regula la cantidad de luz que entra en el condensador. Sistema ptico o OBJETIVO: Lentes intercambiables situadas en el revolver (cerca de la preparacin). Amplan la imagen de sta. o OCULAR: Lente situada cerca del ojo del observador. Ampla la imagen del objetivo.

Los aumentos totales de un microscopio se obtienen de multiplicar los aumentos del ocular por los aumentos del objetivo, cada uno de los cuales lleva impreso el nmero de aumentos que proporciona (x5, x10, x15...)
Sistema mecnico o SOPORTE: Mantiene la parte ptica. Tiene dos partes: el pie o base y el brazo. o PLATINA: Lugar donde se deposita la preparacin. o CABEZAL: Contiene los sistemas de lentes oculares. Puede ser monocular, binocular, .. o REVLVER: Contiene los sistemas de lentes objetivos. Permite, al girar, cambiar los objetivos. o TORNILLOS DE ENFOQUE: Macromtrico que aproxima el enfoque y micromtrico que consigue el enfoque correcto.

PREPARACIN DE LAS MUESTRAS Para observar cualquier muestra, primero hay que prepararla. Para realizar la preparacin , se sita la muestra sobre una pieza de cristal, llamada portaobjetos.

Salvo algunas preparaciones vegetales en las que poseen abundantes pigmentos, la mayora de las preparaciones se vern transparentes, por lo que se facilitar su visin mediante la realizacin de una tincin. Las mas usadas son: Hematoxilina eosina: como tincin de contraste para observar tejidos. La eosina, cida tie el citoplasma (bsico) de rojo y la hematoxilina que es bsica, tie el ncleo (cido) de violeta Tinciones vitales: como rojo neutro o azul de metileno muy diluidos para observar la actividad de microorganismos vivos. Un vez situada la muestra sobre el portaobjetos y teida si es el caso, se cubre con otra pieza de menor tamao y cristal ms fino denominada cubreobjetos.

MANEJO DEL MICROSCOPIO PTICO

1. Colocar el objetivo de menor aumento en posicin de empleo y bajar la platina completamente. Si el microscopio se recogi correctamente en el uso anterior, ya debera estar en esas condiciones. 2. Colocar la preparacin sobre la platina sujetndola con las pinzas metlicas. 3. Comenzar la observacin con el objetivo de 4x (ya est en posicin) o colocar el de 10 aumentos (10x) si la preparacin es de bacterias. 4. Para realizar el enfoque: a. Acercar al mximo la lente del objetivo a la preparacin, empleando el tornillo macromtrico. Esto debe hacerse mirando directamente y no a travs del ocular, ya que se corre el riesgo de incrustar el objetivo en la preparacin pudindose daar alguno de ellos o ambos. b. Mirando, ahora s, a travs de los oculares, ir separando lentamente el objetivo de la preparacin con el macromtrico y, cuando se observe algo ntida la muestra, girar el micromtrico hasta obtener un enfoque fino. 5. Pasar al siguiente objetivo. La imagen debera estar ya casi enfocada y suele ser suficiente con mover un poco el micromtrico para lograr el enfoque fino. Si al cambiar de objetivo se perdi por completo la imagen, es preferible volver a enfocar con el objetivo anterior y repetir la operacin desde el paso 3. El objetivo de 40x enfoca a muy poca distancia de la preparacin y por ello es fcil que ocurran dos tipos de percances: incrustarlo en la preparacin si se descuidan las precauciones anteriores y mancharlo con aceite de inmersin si se observa una preparacin que ya se enfoc con el objetivo de inmersin. 6. Empleo del objetivo de inmersin 100x: a. Bajar totalmente la platina.

b. Subir totalmente el condensador para ver claramente el crculo de luz que nos indica la zona que se va a visualizar y donde habr que echar el aceite. c. Girar el revlver hacia el objetivo de inmersin dejndolo a medio camino entre ste y el de x40. d. Colocar una gota mnima de aceite de inmersin sobre el crculo de luz. e. Terminar de girar suavemente el revlver hasta la posicin del objetivo de inmersin. f. Mirando directamente al objetivo, subir la platina lentamente hasta que la lente toca la gota de aceite. En ese momento se nota como si la gota ascendiera y se adosara a la lente. g. Enfocar cuidadosamente con el micromtrico. La distancia de trabajo entre el objetivo de inmersin y la preparacin es mnima, aun menor que con el de 40x por lo que el riesgo de accidente es muy grande. h. Una vez se haya puesto aceite de inmersin sobre la preparacin, ya no se puede volver a usar el objetivo 40x sobre esa zona, pues se manchara de aceite. Por tanto, si desea enfocar otro campo, hay que bajar la platina y repetir la operacin desde el paso 3. i. Una vez finalizada la observacin de la preparacin se baja la platina y se coloca el objetivo de menor aumento girando el revlver. En este momento ya se puede retirar la preparacin de la platina. Nunca se debe retirar con el objetivo de inmersin en posicin de observacin. j. Limpiar el objetivo de inmersin con cuidado empleando un papel especial para ptica. Comprobar tambin que el objetivo 40x est perfectamente limpio.

MANTENIMIENTO Y PRECAUCIONES
1. Al finalizar el trabajo, hay que dejar puesto el objetivo de menor aumento en posicin de observacin, asegurarse de que la parte mecnica de la platina no sobresale del borde de la misma y dejarlo cubierto con su funda. 2. Cuando no se est utilizando el microscopio, hay que mantenerlo cubierto con su funda para evitar que se ensucien y daen las lentes. Si no se va a usar de forma prolongada, se debe guardar en su caja dentro de un armario para protegerlo del polvo. 3. 4. 5. Nunca hay que tocar las lentes con las manos. Si se ensucian, limpiarlas muy suavemente con un papel de filtro o, mejor, con un papel de ptica. No dejar el portaobjetos puesto sobre la platina si no se est utilizando el microscopio. Despus de utilizar el objetivo de inmersin, hay que limpiar el aceite que queda en el objetivo con pauelos especiales para ptica o con papel de filtro (menos recomendable). En cualquier caso se pasar el papel por la lente en un solo sentido y con suavidad. Si el aceite ha llegado a secarse y pegarse en el objetivo, hay que limpiarlo con una mezcla de alcohol-acetona (7:3) o xilol. No hay que abusar de este tipo de limpieza, porque si se aplican estos disolventes en exceso se pueden daar las lentes y su sujecin. 6. No forzar nunca los tornillos giratorios del microscopio (macromtrico, micromtrico, platina, revlver y condensador).

7.

El cambio de objetivo se hace girando el revlver y dirigiendo siempre la mirada a la preparacin para prevenir el roce de la lente con la muestra. No cambiar nunca de objetivo agarrndolo por el tubo del mismo ni hacerlo mientras se est observando a travs del ocular.

8. 9.

Mantener seca y limpia la platina del microscopio. Si se derrama sobre ella algn lquido, secarlo con un pao. Si se mancha de aceite, limpiarla con un pao humedecido en xilol. Es conveniente limpiar y revisar siempre los microscopios al finalizar la sesin prctica y, al acabar el curso, encargar a un tcnico un ajuste y revisin general de los mismos.

2.3 PREPARACIN DE COLORANTES

1. Acido-Alcohol: (decolorante para tincin Ziehl-Neelsen) o cido clorhdrico concentrado ..........................................................3 ml o Etanol 95% ....................................................................................97 ml 2. Azul de metileno: Colorante de contraste para tincin de flagelos. o Azul de metileno................................................................................1 g o Agua destilada...............................................................................100 ml 3. Azul de metileno de Loeffler: Tinciones simples. o Solucin de hidrxido potsico al 1%.................................................1 ml o Azul de metileno, sol. saturada en etanol al 95%...............................30 ml o Agua destilada...............................................................................100 ml 4. Colorante para esporas: o Solucin acuosa saturada de verde malaquita 5. Colorante para flagelos de Leifson: o Solucin A Fucsina bsica .........................................................................1,2 g Etanol 95%.............................................................................100 ml o Solucin B cido tnico................................................................................3 g Agua destilada.........................................................................100 ml o Solucin C Cloruro sdico..........................................................................1,5 g Agua destilada.........................................................................100 ml Para preparar la solucin de uso, se mezclan cantidades iguales de las soluciones A, B y C y se guarda en frasco cerrado hermticamente en la nevera donde es estable durante varias semanas. 6. Cristal violeta: Para tincin Gram y tincin simple. o Cristal violeta (violeta de genciana)....................................................0,5 g o Agua destilada.................................................................................100 ml 7. Eosina: Colorante cido para tincin de citoplasma. o Eosina...............................................................................................0,3 g o cido actico glacial......................................................................0,025 ml o Agua destilada...................................................................................100 ml 8. Fucsina diluida: Para tincin Gram y tincin simple. o Fucsina fenicada de Ziehl-Neelsen......................................................10 ml o Agua destilada.................................................................................100 ml 9. Fucsina fenicada de Ziehl-Neelsen: Para tincin cido-alcohol resistente. o Fucsina bsica......................................................................................1 g o Etanol 95%........................................................................................10 ml o Fenol 5% en solucin acuosa............................................................100 ml 10. Hematoxilina: Colorante bsico para tincin de ncleos celulares. o Hematoxilina.........................................................................................2 g o Agua destilada......................................................................................1 l 11. Lactofenol: Para preparaciones microscpicas en fresco de mohos. o cido lctico.....................................................................................100 ml o Fenol................................................................................................100 g o Glicerol.............................................................................................200 ml o Agua.................................................................................................100 ml 12. Lactofenol al Azul Algodn: Para preparaciones en fresco y tinciones de mohos. o Solucin de azul algodn Sol. saturada de azul algodn (azul anilina soluble)......................10 ml 10

Glicerol.....................................................................................10 ml Agua.........................................................................................80 ml Mezclar esta solucin con lactofenol a partes iguales 13. Lugol: Solucin de yodo para tincin Gram. o Yodo...................................................................................................1 g o Yoduro potsico..................................................................................2 g o Agua destilada.................................................................................300 ml 14. Orcena A: Tincin de cromosomas. o Orcena................................................................................................2 g o cido actico.....................................................................................45,8 ml o cido clorhdrico 1 mol/l......................................................................8,3 ml o Agua..................................................................................................45,8 ml 15. Orcena B: Tincin de cromosomas. o Orcena................................................................................................2 g o cido actico.....................................................................................55 ml o Agua..................................................................................................55 ml 16. Safranina: Colorante de contraste para tincin Gram (preferible a la fucsina) y esporas. o Safranina.........................................................................................0,25 g o Agua destilada..................................................................................100 m 17. Sudn III: Tincin especfica de grasas. o Alcohol etlico...................................................................................100 ml o Sudn III...................................................................................hasta saturacin 18. Verde de metilo actico: Igual composicin que la eosina (N 7)

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3 - RECOECEMENTO DE BIOMOLCULAS En esta prctica se realizarn reacciones qumicas y pruebas caractersticas para identificar la presencia de una o varias biomolculas en una mezcla y para cuantificar alguna de ellas. Finalmente, se estudiarn algunas actividades enzimticas.

3.1.- Identificacin de glcidos con poder reductor

Todos los monosacridos y los disacridos con enlace monocarbonilo, cuando se encuentran en solucin a pH alcalino, tienen la capacidad de reducir otros compuestos. Esta capacidad reside en las caractersticas del grupo carbonilo (C anomrico en formas cicladas) libre. Esta propiedad, y por tanto, la presencia de un azcar reductor, se pone de manifiesto mediante la reaccin de FEHLING. El reactivo de Fehling consta de : -Fehling A: CuSO4 disuelto en H2O -Fehling B: NaOH y tartrato Na-K disuletos en agua

Fundamento de la reaccin: En medio alcalino, el cobre procedente del CuSO4 se encuentra en forma de hidrxido cprico, y se forma la correspondiente sal Na2SO4. Cuando el ladrillo). Cu(OH)2 (de color azul) se calienta en presencia de un compuesto reductor se forma xido cuproso (de color rojo
+Calor +R

CuSO4

NaOH

Cu(OH)2 (azul)

Cu2O (rojo ladrillo)

Si hay un compuesto reductor, el Cu cambia su estado de oxidacin de (2+ a 1+), lo que se evidencia por el cambio de color. Prctica Sobre la mesa hay dos soluciones de glcidos: GLCIDO I y GLCIDO II. Hay que determinar si son reductores. Mtodo: 1. Poner en un tubo de ensayo 2 mL de glcido I y en otro tubo 2mL de glcido II. 2. Aadir a cada tubo 0.5 mL de Fehling A y 0.5 mL de Fehling B. 3. Calentar a la llama. Cuestiones 1. Cal o cales son los azcares reductores? 2. Quin se oxida y quin se reduce en la reaccin? 3. Para qu sirven el tartrato Na-K y el calor? 4. Que resultado dara la reaccin de Fehling con glucosa? y con sacarosa? 12

3. 2.- Identificacin de polisacridos: identificacin de almidn mediante la prueba del Lugol

En solucin acuosa, la amilosa forma estructuras helicoidales lineales y la amilopectina ramificadas, gracias a la formacin de puentes de H entre los grupos OH de la glucosa y las molculas de H2O. Si a una dislucin de almidn de le aade I, esta toma un color azul intenso. Esta caracterstica es especfica del almidn, debido a su estructura, y se debe a la adsorcin del I por las cadenas helicoidales, especialmente de la amilosa. Por tanto no es una reaccin qumica, sino una interaccin fsica reversible por mtodos fsicos. Esto se puede comprobar fcilmente, pues al calentar la mezcla, el color azul desaparece, y al enfriarla vuelve a aparecer.

Prctica Sobre la mesa hay dos soluciones, solucin 1 y solucin 2. Hay que identificar cul de ellas tiene almidn.

Mtodo: 1. Poner en un tubo de ensayo 2 mL de la solucin 1 y en otro 2 mL de la solucin 2. 2. Aadir a cada uno de los tubos de ensayo 1 gota de Lugol (solucin acuosa de iodo y ioduro potsico). Observar el resultado. Para comprobar que es una interaccin fsica 1. Calentar a la llama el tubo que contiene almidn (teido de azul con I), hasta que desaparezca el color azul. 2. Enfriar en el grifo y observar la aparicin de nuevo de color azul.

Cuestiones 1. Cul de los dos soluciones contiene almidn? 2. El almidn dara positiva la reaccin de Fehling? 3. La celulosa dara positiva la prueba del Lugol? 4. El azul que aparece tras calentar y enfriar es igual de intenso? Por qu?

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3.3.- Identificacin de lpidos. Reaccin de saponificacin.

La presencia de un lpido se puede detectar fcilmente por su insolubilidad en agua. Adems, se puede detectar si un lpido es saponificable, mediante la reaccin de saponificacin, o formacin de jabn. Los steres de cidos grasos sufren hidrlisis en presencia de un agente alcalino. Esta hidrlisis conduce a la liberacin del alcohol y a la formacin de sales de cido graso o jabones:
CH2 O CO R 1 CH O CO R 2 CH2 O CO R 3
Triglicrido

CH2OH + 3NaOH CHOH CH2OH

Glicerina

R1COO-Na + R2COO-Na R3COO-Na

Sales sdicas de ac. grasos (JABN)

Prctica Sobre la mesa hay un frasco con aceite y un lcali (NaOH). Se trata de saber si en el aceite existen lpidos saponificables. Mtodo 1. Aadir aceite (sin pipetearlo) a un tubo de ensayo, hasta una altura de aproximadamente 1 cm. 2. Aadir 2 mL de NaOH al 20% (p/v) en agua. 3. Agitar enrgicamente. 4. Calentar al bao Mara y observar qu ocurre? Cuestiones 1. Existen lpidos saponificables en el frasco de aceite? 2. A qu corresponde cada fase de las que aparecen en el tubo? 3. Por qu se da esa disposicin de fases? 4. Cmo se prepara la NaOH al 20% en agua?

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3.4.- Identificacin de protenas mediante la reaccin el Biuret

La presencia de protenas en una mezcla se puede determinar mediante la reaccin del Biuret. El reactivo de Biuret contiene CuSO4 en solucin acuosa alcalina (gracias a la presencia de NaOH o KOH). La reaccin se basa en la formacin de un compuesto de color violeta, debido a la formacin de un complejo de coordinacin entre los iones Cu2+ y los pares de electrones no compartidos del nitrgeno que forma parte de los enlaces peptdicos.
O C HN R CH Cu2+ O C HN R CH C O NH HC R C O NH HC R

La reaccin debe su nombre al biuret, una molcula formada a partir de dos de urea (H2NCO-NH-CO-NH2), que es la ms sencilla que da positiva esta reaccin, comn a todos los compuestos que tengan dos o ms enlaces peptdicos consecutivos en sus molculas.

Espectrofotometra. Principios bsicos A diferencia de las pruebas realizadas anteriormente, la reaccin de Biuret es cuantificable, es decir, a mayor concentracin de protenas, mayor intensidad de color violeta. Esta reacciones, en las que el color formado es proporcional a la cantidad de sustancia se llaman reacciones colorimtricas. Midiendo la intensidad de color se podra conocer la concentracin de la sustancia que lo produce. Para ello se aplican tcnicas fotomtricas, empleando un aparato llamado colormetro (si mide slo un determinado color) o espectrofotmetro (si realiza una medida de todo el espectro de colores). La luz es parte de la radiacin electromagntica, que se propaga de forma ondulatoria. Las distintas radiaciones luminosas (los distintos colores) se diferencian unas de otras por sus longitudes de onda () (distancia entre la cresta de una onda y la siguiente), que se mide en nm. La luz visible engloba las radiaciones comprendidas entre 380-750 nm, que corresponden a los colores del arcoiris, de tal forma que cada color corresponde a una radiacin con una especfica. El espectrofotmetro dispone de una lmpara que emite luz monocromtica, de una longitud de onda determinada, que incide y atraviesa la muestra coloreada a medir, y de un detector, que medir la 15

cantidad de luz que no es absorbida por la muestra. Para cada sustancia determinada, se utilizar la radiacin de longitud de onda a la que absorba ms cantidad de luz. Su funcionamiento de basa en la ley de Beer-Lambert: la fraccin de luz incidente que es absorbida por una solucin es proporcional a la concentracin de soluto y al espesor de la sustancia atravesada por la luz. La relacin entre la luz incidente (I0) y la reflejada (I) dar una idea de la cantidad de radiacin que ha sido absorbida por la muestra. Es lo que se denomina Absorbancia (Abs) o Densidad ptica (DO)

La Ley de Beer-Lambert se formula como Abs (DO) = x C x l Siendo el coeficiente de extincin molar (especfico para cada sustancia a una y en unas condiciones determinadas) (M-1 cm-1), C la concentracin de la muestra a medir (M), y l el espesor de la muestra. La mayora de los espectrofotmetros utilizan cubetas para la muestra de 1 cm de espesor, por lo que l se puede ignorar. As, la concentracin desconocida de la sustancia coloreada ser C = Abs / Prctica Sobre la mesa hay una solucin de protenas. Se trata de detrerminar la concentracin de dicha solucin mediante la reaccin del Biuret y el espectrofotmetro. Mtodo 1. Realizacin de una recta patrn. Puesto que se desconoce el coeficiente de extincin molar () de las protenas coloreadas con el reactivo del Biuret, se proceder a construir una curva (en este caso recta) patrn, midiendo la Abs de soluciones con concentraciones conocidas de protena, para, sobre ella interpolar el valor de Abs de la solucin problema y determinar su concentracin. Para ello, se dispone de una solucin de 10 mg.mL-1 de ovoalbmina. A partir de ella se realizarn diluciones conocidas aplicando la frmula

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Ci xVi = Cf x Vf Ci = concentracin de la solucin madre inicial Vi = volumen a tomar de la solucin madre inicial Cf = concentracin final de la solucin a preparar Vf = volumen total final de la solucin a preparar En 4 tubos de ensayo se preparan , a partir de la solucin madre (Ci = 10 mg.mL-1) las soluciones de la tabla Tubo Blanco 1 2 3 Cf 0 mg.mL-1 2 mg.mL-1 5 mg.mL-1 10 mg.mL-1 Vi 0 mL 0,2 mL 0,5 mL 1 mL Agua 1 mL 0,8 mL 0,5 mL 0 mL Vf 1mL 1mL 1mL 1mL

Adems se prepara un tubo con 1 ml de la solucin problema cuya concentracin se quiere conocer Problema X 1 mL (sol. problema) 0 mL 1 mL

2. Aadir a cada tubo 2 mL de reactivo del Biuret, agitar y dejar reposar 20 min. 3. Transcurrido este tiempo, se mide la DO u Abs en el espectrofotmetro, de la siguiente manera a) Seleccionar la longitud de onda de 570 nm (mxima Abs para la reaccin del Biuret) b) Poner en la cubeta del espectrofotmetro el contenido del tubo Blanco, secarla y limpiarla bien por fuera e introducirla en el espectrofotmetro c) Se ajusta la lectura a 0 de Abs d) Se devuelve el contenido al tubo original y se mide la Abs de las soluciones de los otros tubos, comenzando por el de menor concentracin. e) Limpiar con agua la cubeta, secarla por fuera y medir la Abs del tubo Problema 4. Con las medidas obtenidas de los tubos 1 a 3 y el blanco (Abs = 0), se construye una recta en papel milimetrado, representando las concentraciones en el eje de abcisas y las Abs en el de ordenadas. 5. Interpolar la Abs de la protena problema en la grfica y calcular su concentracin. Cuestiones 1. Cul es la concentracin de protenas de la muestra problema? 2. Se podra determinar la concentracin de cualquier muestra de protenas con esta recta patrn? 3. Los aminocidos y los dipptidos daran positiva la reaccin del Biuret? 4. Servira esta reaccin para determinar protenas en orina? 17

3.5.- Actividades enzimticas: especificidad y desnaturalizacin por cambios de pH y temperatura

Prctica 3.5.1. Especificidad de la invertasa

La invertasa o sacarasa hidroliza el enlace entre los C 1-2 de la sacarosa, liberando glucosa y fructosa libres. La enzima slo rompe este tipo de enlace glucosdico y no otros. Mtodo 1. Preparar 3 tubos de ensayo con los siguientes reactivos:

TUBO 1 1mL solucin de sacarosa 1mL solucin de invertasa

TUBO 2 1mL solucin de sacarosa 1mL H2O

TUBO 3 1mL solucin de almidn 1mL solucin de invertasa

2. Agitar los tubos y dejarlos reposar 15 min para que transcurra la reaccin enzimtica. 3. Realizar la reaccin de Fehling a cada tubo.

Cuestiones 1. En qu tubo/s da positiva la reaccin de Fehling?En cul/es negativa?Por qu? 2. Qu demuestran el tubo 2 y el tubo 3 respectivamente?

Prctica 3.5.2. Desnaturalizacin a pH cido de la amilasa

Las enzimas tienen un pH ptimo de actuacin. Cambios de pH desnaturalizan la protena y, por tanto, inhiben la actividad enzimtica. La amilasa es una de las enzimas encargadas de la digestin del almidn, concretamente hidroliza enlaces 1-4 entre molculas de -glucosa. Es una enzima que se encuentra a lo largo de todo el tracto digestivo de los mamferos, y que tambin la producen las glndulas salivares.

Mtodo 1. Preparar 2 tubos de ensayo con los siguientes reactivos : TUBO 1 Amilasa (escupir un poco de saliva) 2 gotas de H2O TUBO 2 Amilasa (escupir un poco de saliva) 2 gotas de HCL 1N

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2. Agitar los tubos y esperar 5 min. 3. Aadir 1 mL de solucin de almidn a cada tubo. 4. Agitar los tubos y dejarlos reposar 10 min para que transcurra la reaccin enzimtica. 5. Realizar la prueba del Lugol a cada tubo.

Cuestiones 1. En qu tubo/s da positiva la prueba del lugol?En cul/es negativa?Por qu?

Prctica 3.5.3. Desnaturalizacin de la catalasa por calor

Las enzimas tienen una temperatura ptima de actuacin. La catalasa se encuentra en todos los tejidos vivos, donde descompone el H2O2 en H2O y O2, que al ser gas, en solucin acuosa se desprende en forma de burbujas. Por tanto, al aadir agua oxigenada a un tejido vivo, la deteccin de desprendimiento de oxgeno gas, indicar actividad catalasa. En la mesa hay dos platos con trozos de patata. En uno de ellos, la patata ha sido previamente cocida.

Mtodo 1. Introducir en sendos tubos de ensayo un trozo de patata de cada plato. 2. Aadir 1 mL de H202. Cuestiones 1. Cal es el plato que contiene la patata cocida? 2. Qu indica la falta de desprendimiento de O2 al aadir H202 a dicha patata?

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4 - OBSERVACIN MICROSCPICA

4.1 OBSERVACIN MICROORGANISMOS EN GOTA DE AUGA

FICHA TCNICA: Observacin microorganismos en gota de auga OBXECTIVOS: Manexo do microscopio Coecer a biodiversidade ESO, 1 Bach dependendo como se plantexe a prctica dende unha NIVEL prctica inicial para aprender a usar o microscopio ata realizar unha clasificacin sistemtica da biodiversidade atopada nunha gota de auga Microscopio Auga doce de distintas MATERIAIS procedencias(preferentemente Portaobjetos Cubreobjetos estancada) Pipetas Colorante vital: Vermello Neutro por exemplo

Introduccin Dentro de una gota de agua procedente de estanques o charcas, se puede observar la gran diversidad existente en el mundo de los seres vivos. Los organismos ms comunes pertenecen a alguno de los grupos siguientes : 1.-Cianobacterias (Cianofceas). Son organismos procariotas fotosintticos, adems del pigmento clorofila presentan ficocianina, los cuales no estn en cloroplastos, puesto que se trata de clulas procariotas. Las clulas de las cianofceas se pueden presentar aisladas o reunidas en rosarios de mayor o menor nmero de clulas. No se trata, sin embargo, de organismos pluricelulares. Entre otras podemos citar los gneros: Oscillatoria, Spirulina, Nostoc, etc.

2.- Protozoos. Son unicelulares y se pueden subdividir en tres tipos, atendiendo al modo de locomocin que predomina. 2.1. Fitomastigforos. Se mueven por flagelos. 2.2. Rizpodos, tambin llamados sarcodinos. Se mueven por pseudpodos. Un ejemplo comn es la Amoeba.

2.3. Ciliforos. Se mueven por cilios y se alimentan a travs de vacuolas digestivas. Por ejemplo:Paramecium que es mvil y Vorticella que es fijo, con pednculo contrctil.

3.- Algas. Son organismos eucariotas vegetales unicelulares o pluricelulares ms o menos complejos. Las ms comunes en el agua dulce pertenecen a alguno de los siguientes grupos, que se clasifican, sobretodo, atendiendo al color que proporciona la combinacin de sus pigmentos. 3.1. Algas verdes: pueden ser unicelulares o pluricelulares, con una gran diversidad de formas, tamaos, estructuras, etc. Por ejemplo: Euglena, Cosmarium, Closterium, Pediastrum, Spirogyra, Zygnema. 3.2. Algas pardo-amarillentas: destacan principalmente las diatomeas que son unicelulares y presentan un caparazn estriado de slice, formado por dos piezas que encajan entre s como si fueran una caja y su tapa. Tienen el pigmento feofena que les da el color pardo-amarillento. Son muy variadas en forma y tamao. 4.- Metazoos. Son animales pluricelulares, con rganos muy diferenciados. Muy abundantes en las aguas dulces y marinas, al formar gran parte del plancton animal o zooplancton. Son un factor 20

primordial en la alimentacin de larvas acuticas de muchos animales, as como de numerosos peces. Se pueden clasificar en los siguientes grupos: 4.1 Rotferos: animales microscpicos cuya porcin anterior de su organismo est bordeada por una doble corona ciliada, que emplea para desplazarse y producir corrientes de agua que llevan las partculas alimenticias hacia la boca. (Philodina). 4.2. Cladceros, llamadas corrientemente pulgas de agua. Son pequeos crustceos que viven flotando y nadando en las algas. Tienen un caparazn de quitina, transparente. El patalear continuo del animal tiene como misin oxigenar su sangre. Presenta dos pares de antenas, de los cuales el primero, es pequeo y tiene una funcin sensitiva y el segundo, constituye los verdaderos rganos propulsores. Existen muchas especies y son muy corrientes en aguas dulces de charcas, estanques y lagos. (Daphnia). 4.3. Coppodos: son tambin pequeos animales crustceos, de forma ovoide, con caparazn de quitina y dividido en cefalotrax y abdomen. Este ltimo presenta cerda y largas espinas plumosas que sirven como rganos de sustentacin en medio lquido. Tienen tambin un par de antenas, formadas por varios segmentos que actan como apndices nadadores. El gnero ms frecuente y abundante es Cyclops. 4.4 Anlidos: normalmente en los sedimentos del agua de estanques, arroyos podemos encontrar diminutos gusanos de color rojo que pertenecen al gnero Tubifex formado por ms de 13 especies 4.5 Larvas de insectos:
Los quironmidos (Chironomidae) son una familia de dpteros de distribucin mundial. Muchas especies se parecen a los mosquitos de la familia Culicidae pero las alas no tienen escamas y las piezas bucales no son alargadas como las de los mosquitos. Es una familia muy grande con ms de 5.000 especies descritas. Los machos se distinguen fcilmente por sus antenas plumosas. A los adultos a veces se los llama moscas de los lagos o moscas de la arena. Las larvas se encuentran en muchos ambientes acuticos o semi acuticos incluyendo huecos en troncos de rboles, material vegetal en descomposicin, suelo, aguas cloacales y recipientes artificiales. Las larvas de algunas especies son de color rojo brillante debido a la presencia de hemoglobina, que es muy poco comn entre los insectos Tambin son importantes como especies indicadoras. Su presencia, ausencia y las cantidades presentes pueden indicar las condiciones de contaminacin de masas acuticas.

Mtodo y Observacin Se coloca una gota de agua sobre un portaobjetos y se pone encima un cubreobjetos, teniendo cuidado de que no se formen burbujas de aire. Se observa al microscopio, primero con el objetivo de menor aumento y una vez localizado algn microorganismo se utilizan otros objetivos de mayor aumento para verlo con detalle. ACTIVIDADES
Aprender a manexar o microscopio:

1. 2. 3. 4.

Move despacio a palanca que abre e pecha o diafragma, que sucede? Move a palanca do condensador lentamente e describe no teu caderno o que observas Calcula os aumentos aos que ests observando a mostra Realiza unha tincin engacindo a mostra unha gota de Vermello neutro

Clasificacin da biodiversidade:

1. Identifica coa axuda de diferentes esquemas os organismos 2. Relaciona a presenza dos distintos organismos coa calidade da auga, contrasta com outros parmetros qumicos e fsicos..

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GALERA IMAXES CIANOBACTERIAS

Oscillatoria sp

Spirulina sp

Nostoc sp PROTOZOOS

Amoeba sp

Paramecium

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Vorticella ALGAS

Euglena

Cosmarium

Costerium

Pediastrum,

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Spirogyra,.

Zygnema

Diatomeas METAZOOS

Rotferos

Daphnia sp

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Coppodo ANLIDOS

Tubifex sp LARVAS INSECTOS

Chironomidae

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FICHA ACTIVIDADE OBSERVACIN MICROORGANISMOS EN GOTA DE AUGA NOME: Data: ACTIVIDADES 1. Ao comezar a observacin e para rematar o revolver deber estar co obxectivo de ................. 2. Move amodo o dispositivo que abre e pecha o diafragma, que sucede? 3. Move o mando do condensador lentamente e describe no teu caderno o que observas CURSO:

4. Por que a preparacin a observar nun microscopio ten que ser moi fina?
Clasificacin da biodiversidade:

5. Identifica coa axuda de diferentes esquemas os microorganismos que observes:

Aumentos: .. Organismo: ... Grupo taxonmico .... Modo vida

Aumentos: .. Organismo: ... Grupo taxonmico .... Modo vida

Aumentos: .. Organismo: ... Grupo taxonmico .... Modo vida

Aumentos: .. Organismo: ... Grupo taxonmico .... Modo vida

6. Relaciona a presenza dos distintos organismos coa calidade da auga, contrasta con outros parmetros qumicos e fsicos.. 27

4.2 OBSERVACIN DE UN TEJIDO VEGETAL: TEJIDO EPIDRMICO DE CEBOLLA

MATERIAL
Microscopio Portaobjetos Cubreobjetos Cubeta Agujas enmangadas Pinzas Escalpelo Verde de metilo actico o azul de metileno Cuentagotas Cebolla

TCNICA
1. Separar una de las hojas interna de la cebolla y desprender la tenue membrana que est adherida por su cara inferior cncava. 2. Depositar el fragmento de membrana en un porta con unas gotas de agua. Pon el porta sobre la cubeta de tincin para que caiga en ella el agua y los colorantes. Si es preciso, estirar el trozo de epidermis con ayuda de dos agujas enmangadas. 3. Escurrir el agua, aadir una gotas de verde de metilo actico (o azul de metileno) sobre la membrana y dejar actuar durante 5 minutos aproximadamente. No debe secarse la epidermis por falta de colorante o por evaporacin del mismo! 4. Con el cuentagotas baar la epidermis con agua abundante hasta que no suelte colorante. 5. Colocar sobre la preparacin un cubreobjetos evitando que se formen burbujas y llevarla al microscopio. 6. Observa la preparacin a distintos aumentos, empezando por el ms bajo. Identifica las distintas clulas del tejido epidrmico y las de las hojas del bulbo de cebolla. Membrana Ncleo Citoplasma

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OBSERVACIN MICROSCPICA DE UN TEJIDO VEGETAL: TEJIDO EPIDRMICO DE CEBOLLA NOMBRE: OBSERVACIONES CURSO:

Aumento Total ____________

Aumento Total ____________

Aumento Total ____________

CONCLUSIONES

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4.3 OBSERVACIN MICROSCPICA DE UN TEJIDO VEGETAL: TEJIDO EPIDRMICO DEL PUERRO

MATERIAL
Microscopio Portaobjetos Cubreobjetos Cuentagotas con agua Agujas enmangadas Pinzas Escalpelo Un puerro

TCNICA
1. Retira una parte pequea de la epidermis de la hoja de puerro y llvala sobre un porta en el que habrs colocado dos o tres gotas de agua. Ten la precaucin de que sea una capa incolora y de que est perfectamente extendida. 2. Pon el cubre y examina la preparacin al microscopio. 3. Identifica en tu preparacin la estructura de las clulas que aparecen en el esquema.

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OBSERVACIN MICROSCPICA DE UN TEJIDO VEGETAL: TEJIDO EPIDRMICO DEL PUERRO NOMBRE: CURSO:

OBSERVACIONES

Aumento Total ____________

Aumento Total ____________

CUESTIONES 1. Qu son los estomas?

2. Cul es su funcin?

3. Poseen cloroplastos alguna de las clulas epidrmicas?

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4.4 OBSERVACIN DE CLULAS VEGETALES: CLULAS DE LA PULPA DE TOMATE

MATERIAL
Microscopio Portaobjetos Cubreobjetos Escalpelo Pinzas Tomate

TCNICA
4. Utilizando un escalpelo, corta en dos mitades el tomate. 5. Obtn, ayudndote de unas pinzas, un trozo de pulpa de tomate de la zona indicada en la figura de unos 2mm de grosor. 6. Depostalo en el centro de un portaobjetos sin poner agua. 7. Coloca encima un cubreobjetos y comprime suavemente con los dedos hasta obtener un completo aplastamiento del fragmento de pulpa de tomate. 8. Lleva la preparacin a la platina del microscopio y realiza una observacin con pequeos aumentos. Selecciona el mejor grupo de clulas y pasa a mayores aumentos. 9. Identifica los distintos orgnulos celulares visibles y dibuja lo que observes en el apartado observaciones.

Vacuola

Nucleo Cromoplasto

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OBSERVACIN DE CLULAS VEGETALES: CLULAS DE LA PULPA DE TOMATE NOMBRE: OBSERVACIONES CURSO:

Aumento Total ____________

Aumento Total ____________

Aumento Total ____________

CONCLUSIONES

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4.5 MITOSIS EN CLULAS DE RAZ DE CEBOLLA

FICHA TCNICA: Mitose en clulas de raz de cebola OBXECTIVOS: Observar en clulas e diferenciar as distintas fases da mitose Manexo do microscopio Traballo no laboratorio 4 ESO, 1 Bach NIVEL Microscopio Palillos Frasco lavador MATERIAIS Portaobjetos Mechero de alcohol Cubreobjetos Tijeras Lanceta estril Papel de filtro Cubeta de tincin Vaso de precipitados Aguja enmangada Vidrio de reloj Pinzas Orcena A Orcena B

TCNICA 1. Llenar un vaso de precipitados con agua y colocar un bulbo de cebolla sujeto con dos o tres palillos de manera que la parte inferior quede inmersa en el agua. Al cabo de 3-4 das aparecern numerosas raicillas en crecimiento de unos 3 o 4 cm de longitud. (favoreceremos la salida de las races si retiramos las capas ms externas del bulbo secas) 2. Cortar con las tijeras unos 2-3 mm del extremos de las raicillas y depositarlo en un vidrio de reloj en el que se han vertido 2-3 ml de orcena A. 3. Calentar suavemente el vidrio de reloj a la llama del mechero durante unos 8 minutos, evitando la ebullicin, hasta la emisin de vapores tenues. (Ojo! Si se somete ademasiada temperatura se extropear la muestra, para evitar esto puede agarrarse el vidrio con la mano, si no se aguanta la temperatura con la mano es que lo estamos calentando demasiado) 4. Con las pinzas tomar uno de los pices o extremos de las raicillas y colocarla sobre un portaobjetos, aadir una gota de orcena B y dejar actuar durante 1 minuto. 5. Colocar el cubreobjetos con mucho cuidado sobre la raz. Con el mango de una aguja enmangada dar unos golpecitos sobre el cubre sin romperlo de modo que la raz quede extendida. 6. Sobre la preparacin colocar unas tiras de papel de filtro, 5 o 6. Poner el dedo pulgar sobre el papel de filtro en la zona del cubreobjetos y hacer una suave presin, evitando que el cubre resbale. Si la preparacin est bien asentada no hay peligro de rotura por mucha presin que se realice. 7. Observar al microscopio. OBSERVACIN MICROSCPICA Se realizar a fuertes aumentos. La orcena A reblandece las membranas celulares y la B completa el proceso de tincin. Con la presin sobre el porta de la preparacin se logra una extensin y difusin de las clulas del meristemo de la cebolla. La preparacin presenta el aspecto de una dispersin de clulas por todo el campo que abarca el microscopio. Se observan clulas en diversas fases o estados de divisin celular. Se ven los cromosomas teidos de morado por la orcena. El aspecto reticulado as como el mayor tamao de algunos ncleos corresponde a las clulas que se encontraban en los procesos iniciales de la divisin mittica.

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FICHA ACTIVIDADE MITOSE EN CLULAS DE RAZ DE CEBOLA NOME: Data: ACTIVIDADES 1. Realiza un debuxo das diferentes clulas observadas , indica en que fase estn e sinala a cantos
aumentos se puideron recoecer

CURSO:

2. En que fase da mitose se contan mellor os cromosomas?Por que? Cantos cromosomas cres que ten a
especie observada?

3. Puideches ver os nuclolos? En que fase?

4. Explica por que para observar clulas en mitose en vexetais se utilizan clulas da zona terminal das
raicias.

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4.6 OBSERVACIN DE CLULAS DO EPITELIO BUCAL

O tecido que recobre a cavidade bucal nos seres humanos un epitelio formado por clulas que son planas, unidas unhas a outras e que recobren, desta forma, a superficie do interior da boca. Trtase dun epitelio de revestimento OBXECTIVOS: FICHA TCNICA: Manexo do microscopio Observacin directa das nosas propias clulas epiteliais que se atopan na mucosa bucal

NIVEL MATERIAIS

Microscopio Portaobxectos Cubreobxectos Agulla enmangada Placa de Petri

Frasco lavador Acendedor Azul de metileno Torunda algodn

PROCEDEMENTO Raspa suavemente coa torunda de algodn a cara interna das meixelas. Observars que se acumula unha pequena cantidade de substancia abrancazada. Coloca unha gota de auga sobre un portaobxectos e deposita sobre ela a cantidade de materia que extraches antes. Utiliza agora a agulla enmangadapara realizar un frotis, dicir, realiza unha extensin da mostra tomada sobre a superficie do portaobxectos utilizando ese instrumento de laboratorio. A continuacin realiza pases da preparacin sobre a chama dun acendedor coidadosamente. Non debe quentarse rapidamente. Coloca o frotis sobre a metade dunha placa de Petri e engade unhas gotas de azul de metileno. Deixa actuar o colorante durante un par de minutos e retira o sobrante utilizando o frasco lavador. Coloca o cobreobxectos sobre a mostra e obsrvao polo microscopio.

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FICHA ACTIVIDADE OBSERVACIN DE CLULAS DO EPITELIO BUCAL NOME: Data: ACTIVIDADES 1. Realiza un debuxo das diferentes clulas observadas indicando os aumentos aos que fixeches a
observacin.

CURSO:

Aumentos: ..

Aumentos: ..

2. Que estruturas podes recoecer na clula epitelial?

3. Ten algo que ver a funcin que realiza este tecido coa forma das clulas que observas no
microscopio?

4. Por que cres que se utilizou o azul de metileno?

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5 - ADN

5.1 EXTRACCIN DO ADN

OBXECTIVOS: FICHA TCNICA: Extraccin do ADN Demostrar que o ADN non unha molcula "distante" Aplicar certos fenmenos fsicos e qumicos como a plasmolise celular e a precipitacin de molculas ao volverse insolubles. 1 BACH Auga Alcohol 96 Varia fina Vasos plstico transparente Culleres Tubo ensaio Lavalouzas Cloruro de sodio (Sal comn) Matraz erlenmeyer

NIVEL MATERIAIS

O cido dexorribonucleico, o ADN constite o material xentico dos organismos . No teu ADN esta contida toda a ta informacin xentica. Utilizando unha simple tcnica podes extraelo facilmente: Mtodo: 1 Preparacin do material: Para empezar prepararemos todo o material necesario. Ademais nun matraz erlenmeyer prepararemos unha disolucin de lavalouza ao 25% en auga (O mesturaremos de forma suave evitando a formacin de espuma). A cantidade necesaria por alumno/a moi pequena (uns 10 ml aproximadamente) polo que pdese facer a disolucin por grupos. 2 - Obtencin do ADN: Poemos unha cullerada de auga no vaso de plstico. Con esa auga enxaugamos fortemente a boca durante mis ou menos 1 minuto e devolvmola ao vaso. 2 - Extraccin do ADN: A partir da mostra do vaso enchemos 1/3 de tubo de ensaio como mximo Engadimos un volume de auga (1/4 do volume do lquido contido aproximadamente) e axitamos de forma circular A continuacin engadimos unha cantidade similar engadida de auga pero agora coa disolucin de lavalouza e axitamos novamente de forma circular e suave evitando a formacin de espuma.. Mediante estes 2 pasos teremos xa extrado o ADN. O seguinte paso ser facer visible o ADN para o cal agregamos unha cullerada pequena de cloruro sdico, e volvemos a axitar. Unha vez disolto o sal engadimos agora moi lentamente alcohol pola parede do vaso aproximadamente a mesma cantidade que de mostra (de maneira que non se mesture coa disolucin acuosa). O alcohol deber formar unha fase na parte superior do tubo (importante non axitar para que non se mesture coa auga) Deixar en repouso. Aos 15 minutos a separacin optima, o ADN concentrouse e visible, xa que forma uns fos longos de cor branca. Se queremos conservar as mostras de ADN s temos que recoller con moito coidado as febras de ADN coa punta da varia, introducilo nun tubo de ensaio, engadirlle unhas gotas de alcohol e pechalo para evitar a contaminacin.

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FICHA ACTIVIDADE EXTRACCIN DO TEU ADN NOME: Data: ACTIVIDADES 1. De onde obts o ADN nesta experiencia? CURSO:

2. Cal a funcin da auga? (Lembra os fenmenos de smose)

3. Cal a funcin do deterxente? (Pensa que tipo de molculas e capaz de arrastrar). Que outras macromolculas necesario que o lavalouza desnaturalice para que o ADN se desenvolva?

4. Por que engadimos cloruro sdico e alcohol. Pensa que tras engadir estas 2 substancias as febras de ADN fanse visibles

5. Cres que a mostra que conseguiches pura ou est mesturada con algunha outra molcula?

6. Que cantidade de ADN obtiveches?

7. Puideches observar que as mostras de ADN que obtiveches ten a forma de longas febras
abrancazadas. Podes tirar algunha conclusin deste feito?

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ACLARACINS PARA O PROFESOR Canto mis tempo e maior intensidade enxauguemos a boca obteremos maior cantidade de clulas epiteliais de descamacin da mucosa bucal Anda que coa disolucin de lavalouza xa se producira a rotura das membranas, sase primeiro a auga soa para matizar que esta por si soa rompe as membranas celulares e nucleares por plasmolise. A concentracin salina da clula maior (hipertnica) con respecto a da auga (hipotnica). Estas diferenzas de concentracins fan que a auga ingrese masivamente ao interior da clula facendo que se rompan as sas membranas, incluso a nuclear.O deterxente colabora posteriormente para asegurar esta destrucin e arrastrar a bicapa lipdica. Desta maneira o ADN xunto a protenas e restos celulares queda en solucin na auga. Funcion CL Na e alcohol: O ADN ten cargas elctricas negativas (debido os grupos fosfato presente na parte externa da estrutura da molcula). Ao agregar o sal as cargas positivas dos ins de sodio son atrados cara as cargas negativas do ADN, neutralizando a carga elctrica do ADN. Isto permite s molculas de ADN xuntaerse en vez de repelerse. Para separar o ADN doutras molculas agregamos o alcohol facendo que precipite o ADN debido a que menos soluble en alcohol que en auga. Ambas substancias fan que precipite e forme agregados sendo visible a simple vista. As outras molculas de menor tamao como carbohidratos e aminocidos permanecen disoltas no alcohol e na auga non facndose visibles. O ADN que estamos vendo procede de miles de clulas obtidas da boca, e polo tanto millns de xenes.

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6 - A MATERIA

6.1 O mtodo cientfico e a densidade

FICHA TCNICA: O mtodo cientfico e a densidade Comprender o concepto de densixade mediante a experimentacin prctica Traballar mediante o mtodo cientfico Coecemento e uso do material laboratorio Aprender a medir masa e volumes de distintos obxectos 1 ESO Balanza Auga Aceite Cortiza ou poliexpan [ poliestireno expandido (EPS)]
Caixas estancas (estilo botes tipo Kinder) Slidos irregulares: rocha, canica...

OBXECTIVOS:

NIVEL MATERIAIS

Traballaremos os seguintes aspectos: - O mtodo cientfico - Coecemento e uso do material laboratorio Como medir volumes: o Lquidos: probetas, buretas, vasos graduados e pipetas para volumes moi pequenos. A sensibilidade destes recipientes o volume existente entre 2 divisins consecutivas e a capacidade o volume mximo que se pode medir con eles) o Slidos regulares: por simple medicin das sas dimensins e aplicacin da frmula matemtica en funcin do corpo xeomtrico. o Slidos irregulares: Mediante unha probeta ou vaso graduado. En 1 lugar mdese un volume determinado de auga V1 , e introducimos o slido cuxo volume queremos calcular na probeta ou vaso graduado. O nivel da auga ascender ata ocupar un novo volume V2 . a diferenza entre ambas medidas corresponde ao volume do slido somerxido.

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O mtodo cientfico e a densidade

Imos realizar varios experimentos seguindo o mtodo cientfico: O mtodo cientfico o mtodo utilizado nas investigacins cientficas para establecer unha teora ou comprobar algunha hiptese ou suposicin O mtodo cientfico debe seguir os seguintes pasos:

Partiremos sempre dalgunha dbida sobre algn feito que chamaremos incgnita
1. Estableceremos unha posible explicacin incgnita de forma terica, o que chamamos a hiptese 2. A parte fundamental do mtodo cientfico a realizacin dunha experiencia prctica para comprobar que a hiptese correcta. Deberemos por tanto realizar un experimento para valorar a hiptese (debemos intentar reproducir normalmente no laboratorio unha situacin que sirva para comprobar que a nosa hiptese certa) 3. Obteremos uns resultados do experimento 4. Por ltimo a partir dos resultados sacaremos unha conclusin, que pode validar ou non a nosa hiptese. Nalgns casos os resultados non nos permiten sacar unha conclusin e deberemos repetir ou arredista o experimento.

Para actuar como un investigador recollers no teu caderno os seguintes apartados

1. 2. 3. 4. Nome da prctica Incgnita Hiptese: que teora pensas que podera explicar a incgnita que tes Experimento: no que indicars os seguintes subapartados: a. Material: material que utilizas no experimento b. Mtodo: que pasos segues para realizar o experimento 5. Resultados 6. Conclusin

PRCTICA 1: A DENSIDADE DA MATERIA

INCGNITA: a densidade unha propiedade especfica da materia? HIPTESE: a densidade unha propiedade especfica da materia caracterstica de cada substancia que relaciona o seu volume coa masa. EXPERIMENTO: Calcula a densidade de distintos materiais: auga, aceite, cortiza (corcho) e unhas bolas (canicas) Demostra ademais que distintas masas ou volumes dunha mesma substancia teen a mesma densidade

PRCTICA 2: POR QUE FROTAN CERTAS SUBSTANCIAS NA AUGA?

INCGNITA: De que depende cun corpo flote na auga? HIPTESE: Non depende nin da masa nin do volume, depende da densidade. Como sabemos a densidade das substancias calculadas no experimento 1. Imos a realizar un hiptese de como quedaran estas substancias ao botalas nun matraz erlenmeyer (Debuxa no teu caderno como sera) EXPERIMENTO: Agora podes realizar o experimento no matraz e ver se coincide coa hiptese de que a flotabilidade depende das densidades. Fabrica un barco cunha caixa estanca calcula cal ser a masa mxima que poder ter para non afundirse e proba se acertaches.

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6.2 Os cambios de estado

6.2.1 Os cambios de estado

OBXECTIVOS: NIVEL MATERIAIS FICHA TCNICA: Os cambios de estado Recoecer que a materia pode atoparse tanto en estado lquido , slido e gasoso 1 ESO Xeo Matraz erlemmeyer Chisqueiro Bunsen, de alcohol ou similar

1. 2. 3. 4.

Verte auga en 2 matraces grandes ata encher 1/4 da sa capacidade Quenta un dos matraces. Cando a auga estea fervendo apaga o chisqueiro. Coloca un cubio de xeo na boca de cada matraz Espera un tempo e observa que ocorre (No que quentamos a auga o vapor de auga condensarase sobre o vidro aparecendo pingas de auga sobre ela) 5. Describe os cambios que aprecies en cada recipiente. Cal dos 2 matraces contn auga nos 3 estados? 6. Basendote na teora cintica responde as seguintes cuestins: a. Cando a auga lquida cambia a gas, que cres que ocorre coas partculas que a constiten? Razoa a ta resposta. b. De que estn feitas as burbullas formadas ao ferver a auga? c. Por que empanouse un dos matraces? d. Por que aparece unha nube nun dos matraces?De que est formada?

6.2.2 Os cambios de estado e o volume

OBXECTIVOS: NIVEL MATERIAIS FICHA TCNICA: Os cambios de estado e o volume Recoecer que ao cambiar o estado da materia vara o seu volume e por tanto a sa densidade 1 ESO Conxelador Recipiente de cristal con tapa Aceite Balanza

1. Verte aceite nun recipiente de cristal que poidas pechar. Psao e anota a sa masa 2. A continuacin marca cun rotulador o volume que acada o lquido e introduce o recipiente no conxelador ata que o aceite se solidifique. 3. Unha vez conxelado volve a pesalo e anota a sa masa (seca moi ben o recipiente antes de facelo). Compara a continuacin as masas obtidas e o volume que ocupa agora o aceite conxelado respecto o que ocupaba en estado lquido 4. Responde a. Variou a masa do aceite ao cambiar de estado?E o volume? b. En que estado ocupa o aceite maior volume? 5. Deixa que o aceite conxelado se funda a temperatura ambiente durante certo tempo. Observa a posicin que ocupa a cara lquida que se vai formando e responde: a. Flota o aceite slido sobre o lquido? b. En que estado cres que maior a densidade do aceite? 43

6.2.3 Separacin de mesturas

OBXECTIVOS: NIVEL MATERIAIS FICHA TCNICA: Separacin de mesturas Coecemento e uso do material laboratorio Coecer as distintas tcnicas de separacin de mesturas 1 ESO Funil decantacin Funil Papel filtro Vaso precipitados Imn Peneira Chisqueiro bunsen de alcohol ou similar Columna destilacin Auga Alcohol Aceite Limaduras de ferro, alfinetes ou similares Arxila, grava e area Sulfato de cobre ou cloruro sdico Caf modo

Presentarase ao alumnado distintas mesturas e debern expor como separar cada mestura. A continuacin se explicar a tcnica idnea e realizarn ditos mtodos: Separacin de auga e aceite no funil de decantacin por distinta densidade Separacin de auga e caf modo por filtracin cun funil e papel de filtro Separacin de limaduras de ferro de area mediante un imn Separacin mediante unha peneira unha mestura de grava, area e arxila Separar mediante unha cristalizacin auga dunha sal (sulfato de cobre ou cloruro sdico), para acelerar a evaporacin do lquido e que cristalice a sal, quentaremos a disolucin ata o punto de ebulicin ata evaporarse case todo o lquido. O lquido recollido nun cristalizador ou placa de petri e o deixamos arrefriar e repousar para que se produza a cristalizacin Separaremos 2 ou mais lquidos solubles entre si mediante unha columna de destilacin. Cando a disolucin quntase e comeza a ferver os lquidos se separan porque posen distintos puntos de ebulicin. O lquido cun punto de ebulicin mais baixo evaprase antes, os vapores recllense no tubo refrixerante, onde se arrefran e volven a condensarse, co que pasan de novo a estado lquido. Este lquido que se denomina destilado recllese de novo nun vaso colector.

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7 - ROCHAS E MINERAIS

7.1 RECOECEMENTO DALGUNHAS ROCHAS CUNHA SINXELA CLAVE DICOTMICA

FICHA TCNICA: Recoecemento dalgunhas rochas cunha sinxela clave dicotmica OBXECTIVOS: Recoecemento das rochas segundo as sas propiedades Uso de claves dicotmicas 1 ESO NIVEL Granito MATERIAIS Basalto Lousa ("pizarra") Micacita Gneis Mrmore Pedra de gra ("arenisca") Sal xema Hulla Arxila Conglomerado

ACTIVIDADE Identifica as rochas expostas seguindo en orde os pasos que aparecen nesta clave de identificacin, observando determinadas caractersticas das rochas que poden apreciarse a simple vista:
1. Ten aspecto heteroxneo formada por un mosaico de minerais:
a. b. a. b. a. b. a. b. Si, diferncianse distintos compoentes a simple vista Pasa ao n 2. Non, o seu aspecto e homoxneo, pasa ao n 4 Si: pasa ao n 3. Non: est formado por cantos ou gravas dentro dunha matriz, entn un conglomerado Si, o gneis : Non, os cristais son mais pequenos e non seguen unha estrutura bandeada, entn o granito Si: Trtase de pedra de gra. Non: Pasa a 5

2. A rocha est formada por un mosaico de cristais distintos: 3. Presenta grandes cristais dispostos en bandas anchas: 4. Est formada por graos similares area, observables a simple vista, e presenta un tacto moi spero: 5. Ten cor escura cristais moi pequenos e as veces pose orificios producidas ao atrapar gas ao arrefriarse rapidamente o magma que a formou:
a. b. a. b. a. b. a. b. a. b. Si: basalto Non: pasa ao 6 Si: pasa ao n 7 Non: pasa ao n 8 Si: a lousa Non, similar a lousa pero presenta cristais de mica que lle dan un aspecto brillante, a micacita. Si: mrmore Non: ten un aspecto pouco compacto, pasa ao n 9 Si: a sal xema. Non: pasa ao 10

6. Obsrvanse lminas ou bandas na rocha: 7. Presenta lminas finas, aspecto homoxneo e sen brillo: 8. A rocha ten un aspecto compacto, cor clara formada por cristais do mesmo mineral: 9. Ten cor clara e sabor salgado: 10. Non se distinguen os minerais que a compoen, presenta tacto suave, cor terroso e raiase con facilidade.
a. b. Si: arxila Non, de cor negra con aspecto de carbn, a hulla

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8 - REINO VEXETAL

8.1 - RECOECEMENTO DE RBORES CON CLAVES DICOTMICAS SINXELAS

FICHA TCNICA: Recoecemento dalgunhas rbores cunha sinxela clave dicotmica OBXECTIVOS: Recoecemento dalgunhas rbores segundo as sas follas Uso de claves dicotmicas 1 ESO NIVEL MATERIAIS

Para identificar as rbores da ta contorna, necesario que observes primeiro con detemento as follas e que utilices despois unha clave dicotmica como a que tes a continuacin. Na observacin das follas debers prestar atencin as seguintes caractersticas: Follas aciculares: con forma de agulla, como no caso dos pieiros. Follas en verticilos: nacen do mesmo nivel do talo, como nos xenebreiros ("enebros") Follas escamudas: teen forma de escamas, como no ciprs. 1. Follas aciculares ..................................................................... pasa ao n 2 Follas non aciculares .............................................................. pasa ao n 6 2. Follas solitarias arredor da rama ............................................ Abeto Follas agrupadas .................................................................... pasa ao n 3 3. Follas en verticilos de tres ..................................................... Xenebreiro ("Enebro") Follas reunidas en grupos por unha vaina .............................. pasa ao n 4 4. Follas reunidas de dos en dos ................................................ pasa ao n 5 Follas reunidas en feixes de 10-15 agullas ............................. Cedro 5. Follas de 3 - 6 cm de largo .................................................... Pieiro silvestre Follas de 10 - 20 cm de longo ............................................... Pieiro de pins ("pionero") 6. Follas escamudas ....................................................................Ciprs Follas non escamudas .............................................................pasa ao n 7 7. Follas simples ........................................................................ pasa a o n 8 Follas compostas ................................................................... pasa ao n 14 8. Nerviacin pinnada ............................................................... pasa ao n 9 Nerviacin palmada .............................................................. pasa ao n 13 9. Folla asimtrica na base ........................................................ Olmo Folla simtrica na base .......................................................... pasa ao n 10 10. Limbo de borde enteiro ....................................................... Eucalipto Limbo de borde non enteiro ................................................. pasa ao n 11 11. Limbo de borde dentado ou serrado ..................................... pasa ao n 12 Limbo de borde lobulado ...................................................... Carballo ("Roble") 12. Follas estreitas (miden o dobre de largo que de ancho) ..................... Salgueiro (Sauce) Follas non estritas.................................................................. pasa ao n 15 13. Limbo dividido en 5 lbulos con puntas afiadas ............................ Pltano de sombra Limbo dividido en 5 lbulos profundos con puntas redondeadas ...... Figueira ("Higuera") 14. Nerviacin pinnada ................................................................ Fresno Nerviacin palmada ...............................................................Castieiro de Indias 15. Follas ovoides ........................................................................ Castieiro Follas romboidais ou triangulares ......................................... lamo negro ou chopo

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9 - REINO ANIMAL

9.1 - CLASIFICACIN DE ANIMAIS CON CLAVES DICOTMICAS SINXELAS

FICHA TCNICA: Clasificacin dalgns animais cunha sinxela clave dicotmica OBXECTIVOS: Clasificacin dos principais grupos de animais Uso de claves dicotmicas 1 ESO NIVEL Imaxes de animais MATERIAIS

Observa as fotografas e utiliza a clave dicotmica para identificar o tipo ou clase que pertence cada animal. 1. Ten columna vertebral? Si ..................................................................... Tipo cordados: pasa ao n 7 Non ................................................................. pasa ao n 2 2. Ten forma de saco? Si ..................................................................... pasa ao n 3 Non ................................................................. pasa ao n 4 3. O corpo do animal presenta poros? Si .................................................................... Tipo porferos Non .................................................................Tipo Cnidarios 4. Ten un dermoesqueleto con espias? Si ..................................................................... Tipo equinodermos Non ................................................................. pasa ao n 5 5. Ten un exoesqueleto articulado? Si ..................................................................... Tipo artrpodos Non ................................................................. pasa ao n 6 6. Ten un corpo brando segmentado? Si ..................................................................... Tipo anlidos Non ................................................................. Tipo moluscos 7. O corpo do animal presenta pelo? Si ..................................................................... Clase mamferos Non ................................................................. pasa ao n 8 8. Ten plumas? Si .....................................................................Clase aves Non ................................................................. pasa ao n 9 9. Ten aletas? Si ..................................................................... Calse peces Non ................................................................. pasa ao n 10 10. Ten escamas? Si ..................................................................... Clase rptiles Non ................................................................. Clase anfibios

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