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Imunologia

Eduardo Antunes Martins

Imunologia
UNIDADE I
CAPTULO 5

CLULAS DO SISTEMA IMUNE


Para o correto entendimento do sistema imune e suas funes necessrio conhecer todas as clulas imunes e suas origens. Isso permite entender as respostas imunes inata (clulas em geral) e adaptativa (linhagem linfoide). O estudo ser dividido da seguinte maneira: inicialmente uma diviso das clulas de acordo com suas origens (progenitores linfoides e mieloides), diviso de acordo com suas funes (na imunidade inata e adaptativa), anlise de cada uma das clulas, especificaes em relao aos linfcitos T e B (criao, maturao e interao entre eles e as outras clulas). Os seguintes objetivos devem ser alcanados: Divises das clulas do sistema imune; Especificao de todas as clulas; Interao entre os linfcitos e as diversas clulas do sistema imune e do organismo.

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Basicamente existem dois tipos de respostas imunes distintas: inata (ou natural) e adaptativa. A primeira define-se como aquela que est presente antes mesmo de entrar em contato com o antgeno. J a ltima definida como conjunto de mecanismos existentes no organismo que somente so ativados depois do contato com o agente agressor. Dentre suas diferenas podemos citar: a inata mais inespecfica, pois ela j apresenta um nmero e tipos especficos e pr-estipulados de receptores para substncias comuns a diversos antgenos (geralmente polissacardeos, protenas, enzimas, compostos das membranas); apresenta efetividade limitada, pelos mesmos motivos; a durao da adaptativa muito maior, em decorrncia da criao de clulas de memria (ver a frente); as clulas constituintes so diferentes. Apesar de todas as diferenas citadas existem inmeras semelhanas. Na realidade, essa diviso meramente educacional, sendo que na imunologia avanada distino dos processos imunolgicos impossvel. Mesmo com o assunto sendo tratado de maneira simplificada pode-se perceber como veremos no decorrer dos captulos, que h intensa relao entre os constituintes das duas imunidades (alguns at podem pertencer as duas). Alm disso, um ponto de extrema importncia que esses dois tipos de RI tenham: a tolerncia ao prprio organismo, que inclusive uma das premissas bsicas da resposta imune. Existem quatro premissas bsicas para as respostas imunes, que so: Reconhecimento imunolgico: o sistema deve reconhecer o antgeno, ou seja, a presena de uma infeco deve ser detectada; Funes imune efetoras: deve ocorrer resposta imune correta e condizente ao estmulo. Essa pode ser de trs tipos: destruio do antgeno, ativao de outros sistemas ou diminuio da progresso da infeco; Regulao imune: o sistema imune deve ser capaz de discernir o que proveniente do corpo e o que um antgeno (quando danificado gera as doenas autoimunes); Memria imunolgica: mais relacionada a resposta adaptativa, que visa uma melhor resposta em infeces futuras.

Clulas Componentes Conceitos Gerais As clulas do sistema imune so denominadas leuccitos (leukos=branco), pois so clulas brancas do sangue. O nmero de leuccitos por milmetro de sangue no adulto normal de 5.000 a 10.000. Ao nascimento, o sangue da criana contm 20.000 leuccitos/mm de sangue e vai decrescendo com a vida e aos 12 anos atinge a faixa do adulto. Isso ocorre porque a criana ainda no tem as barreiras naturais do organismo completamente desenvolvidas, tendo mais facilidades de contrair infeces de diversas naturezas. Por essa razo necessrio que haja uma populao de leuccitos maior para a proteo da criana. Denomina-se leucocitose o fenmeno em que o nmero destas clulas sobe acima de 10.000/mm de sangue e leucopenia quando desce abaixo de 2.000/mm de sangue. Na leucemia (cncer de leuccitos) encontramos mais de 100 mil leuccitos/mm de sangue. As clulas derivadas exclusivamente da medula so nomeadas de acordo com a sua colorao pelo corante universal hematoxilina-eosina. So eles os leuccitos granulcitos: neutrfilos; eosinfilos e basfilos. A hematoxilina um corante bsico e a eosina um corante cido. Os leuccitos eosinfilos tem afinidade pela eosina ,ou seja, tem afinidade por corante cido (tambm chamado de leuccito acidfilo) e o basfilo tem afinidade pela hematoxilina, que um corante bsico, ento chamado basfilo. As clulas acidfilas se coram em vermelho e as basfilas em azul escuro. J os neutrfilos ou polimorfonucleares so corados por corante neutros, ou seja, de pH=7. Os linfcitos so agranulcitos (quer dizer, sem grnulos no citoplasma), que so indentificveis pela microscopia ptica pelo sua imensa massa nuclear que toma quase todo o citoplasma. So clulas indiferenciadas entre si pela microscopia ptica, entretanto podem ser diferenciadas pelas tcnicas imunocitoqumicas que detectam o CD (cluster differenciation) possvel saber que tipo de linfcito est se observando. Os linfcitos so divididos em linfcitos T, linfcitos B e linfcitos NK, sendo o LT responsvel principalmente pelo auxlio ao sistema imune e resposta imune celular, o linfcito B responsvel pela resposta imune humoral (com detalhes do captulo 5) e os linfcitos NK pela resposta imune inespecfica. Os LT e os LB produzem resposta imune especfica, pois ambos so estimulados a partir de eptopos de antgeno especfico. Neste caso formaro populaes monoclonais especficas para atacar o antgeno em questo.

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Cap. 5 Clulas do Sistema Imune

Figura 1 Esquema representando as principais clulas do sistema imune.

Temos ainda as clulas do sistema monoctico fagocitrio (SMF) antigamente conhecido por sistema retculoendotelial). Estas clulas so especialistas em fagocitose e apresentao de antgeno ao exrcito do sistema imune. So elas : macrfagos alveolares, micrglia, clulas de Kuppfer, clulas dendrticas, clulas de Langehans e macrfagos em geral.

Tabela 1 Tipos de macrfagos, junto com suas localizaes e funes.

Naturalmente, as clulas pertencentes a diviso natural esto localizadas em todas as regies do organismo. J os linfcitos, salvo em situaes de infeces, esto confinados nos tecidos linfoides.

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Tecidos Linfoides So classificados em duas categorias: Primrios ou centrais: responsveis pelo desenvolvimento e maturao de linfcitos (alm da produo em alguns casos de outras clulas do sistema imune). So eles: o Fgado fetal; o Medula ssea; o Timo. Secundrios ou perifricos: propiciam um ambiente adequado para correta interao entre as clulas e os antgenos. So eles: o Linfonodos; o Bao; o Tecidos linfoides associados a mucosas (MALT).

Timo Situado no mediastino ntero-superior e na parte inferior do pescoo, o local de maturao dos linfcitos T imaturos. um rgo linfide achatado, e mais ativo durante a infncia. Revestido por uma Figura 2 Representao de todos rgos linfoides. cpsula de tecido conjuntivo frouxo, da qual se irradiam para o dentro do parnquima do rgo pequenos septos interlobulares contendo vasos sanguneos. O parnquima tmico dividido em duas zonas distintas, um crtex externo, intensamente basfilo, e uma medula interna eosinfila. Numerosos pequenos ramos da artria torcica interna e da artria tireoidiana inferior entram no timo atravs septos interlobulares, se ramificando na juno corticomedular para suprir o crtex e a medula. Vnulas ps-capilares na regio corticomedular tm um endotlio cbico especializado semelhante ao das vnulas de endotlio alto dos linfonodos, o qual permite a passagem de linfcito para dentro e fora do timo. As drenagens venosa e linftica seguem o curso do suprimento arterial; no existem vasos linfticos aferentes. Fibras simpticas e parassimpticas derivadas da cadeia simptica e dos nervos frnicos, respectivamente, acompanham os vasos sanguneos dentro do timo. O crtex tmico est carregado de clulas T maduras e em maturao. Estas sofrem subseqente maturao medida que se movem do crtex externo em direo medula. Na juno corticomedular encontra-se alguns macrfagos fracamente corados. Pequenos capilares revestidos por clulas endoteliais achatadas invadem o crtex a partir da cpsula. Na medula tmica o componente epitelial mais abundante. Clulas reticulares epiteliais tm ncleos grandes e palidamente corados. Uma caracterstica particular da medula apresentao do corpsculo de Hassall, estrutura lamelada que participam na fase final da maturao da clula T. Na medula tambm encontrado um tipo de clula apresentadora de antgenos, conhecida como clula interdigitante tmica, que apresenta auto-antgenos para clulas T em maturao e as auto-reativas so destrudas por apoptose. Isto conhecido como deleo clonal ou seleo negativa.

Figura 3 Processo de maturao de linfcitos no timo.

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Cap. 5 Clulas do Sistema Imune


Medula ssea As clulas hemopoeticas do fgado fetal e medula ssea dos adultos originam diretamente os linf. B. Um microambiente de direfenciao estabelecido e mantido por clulas estromais da medula ssea (rede de clulas epiteliais). Cada micorambiente destinado produo de um tipo celular especfico. As clulas estromais, alm de fornecer molculas de adeso e da matriz extracelular, sintetizam tambm numerosas citocinas essenciais da hematopoese. A medula ssea contm clulas T maduras (atuando assim tambm como rgo linfide secundrio). Bao O bao um grande rgo linfide situado na parte superior esquerda do abdome. Recebe um rico suprimento sanguneo atravs de uma nica artria, a artria esplnica, e drenada por uma nica veia esplnica para dentro de sistema porta heptico. O bao executa a mesma funo para o sangue que os linfonodos executam para a linfa. constitudo de polpa branca e polpa vermelha. A primeira consiste em agregados linfides, e a segunda perfaz a maior parte do rgo e um tecido altamente vascularizado. O bao possui uma delgada cpsula externa fibroelstica, da qual se estendem trabculas para dentro do parnquima. O estroma constitudo por clulas e fibras reticulares que sustentam o parnquima. Sendo assim, temos: Polpa Branca: Tecido Linfide ao redor da arterola central (conhecido como bainha linfide periarteriolarPALS). A bainha linfide periarteriolar contm reas de clulas T e engloba folculos ao redor da arterola central contendo clulas B. Polpa Vermelha: Consiste de sinusides e cordes celulares. Nela ocorre a hemocaterese (destruio de plaquetas e eritrcitos envelhecidos). As arterolas centrais circundadas pela PALS se abrem livremente nos cordes da polpa vermelha e a as plaquetas e hemcias velhas so fagocitadas por macrfagos. A polpa branca circundada por uma zona marginal que contm macrfagos, APCs (clulas apresentadoras de antgenos), linf. B e NK. No bao, os linfcitos adentram a polpa branca na zona marginal e passam para os sinusides da polpa vermelha de onde saem pela veia esplnica.

Figura 4 Localizao do bao e sua estrutura interna.

Linfonodos Os linfonodos elaboram resposta imune contra antgenos circulantes na linfa (absorvida pelos vasos linfticos que so presentes em todo o organismo, exceto no crebro, globos oculares, cavidades medulares, cartilagens e placenta). Assim, basicamente os linfonodos filtram antgenos e fludos intersticiais da linfa. Do mesmo modo que o bao, os linfonodos so circundados por uma cpsula fibrosa. Os linfonodos tm formato de rim e possuem um hilo no seu lado convexo. A linfa chega aos linfonodos pelos vasos aferentes no lado cncavo e penetra no seio subcapsular, o qual revestido de macrfagos. Em seguida, a linfa atravessa o crtex, paracrtex e medula (nesta ordem) e sai do linfonodo pelo hilo nos vasos eferentes. Abaixo da cpsula, encontra-se o seio subcapsular, que contem fagcitos. J o crtex, que envolto pelo seio subcapsular, rico em linf. B, pois contm folculos primrios e secundrios. Os folculos linfides do estruturas que podem desaparecer e formar-se em diferentes locais no transcorrer do tempo. Existem dois tipos de folculos:

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Primrios Contm clulas B em repouso maduras, que so virgens ( ou seja, no foram desafiadas contra antgenos ainda). Secundrios Tambm conhecidos como centro germinativos, possuem principalmente linf. B de memria originados de outros linf B que foram ativados por determinado antgeno. As clulas B em proliferao no centro germinativo tambm sofrem um processo de maturao por afinidade, em que os linf B respondem mais avidamente ao antgeno.

Entre o crtex e a medula, encontra-se o paracrtex, que contem linf. T associados a APCs. Os linfcitos circulantes chegam aos linfonodos atravs das vnulas especializadas do endotlio alto (HEV) no paracrtex. Basicamente, a massa de tecido linfoide presente nos linfonodos se concentram no crtex e paracrtex. Sob o paracrtex localiza-se a medula, a qual possui linfcitos T, B, plasmcitos e macrfagos. Na medida em que a linfa circula pelos linfonodos, a partir dos vasos linfticos aferentes para eferentes, os antgenos so removidos pelas clulas fagocitrias e transportados para o tecido linfoide do linfonodo. Os linfcitos deixam o linfonodo somente atravs do vaso linftico eferente presente no hilo. J a circulao sangunea do linfonodo entra e sai pelo hilo.
Figura 5 Estrutura interna de um linfonodo em relao sua capacidade de criar um microambiente para o contato clula:antgeno.

MALT No encapsulado e encontrado na lmina prpria e submucosa dos tratos gastrointestinal, geniturinrio e respiratrio na forma de agregados difusos ou ndulos solitrios ou agregados com centros germinativos (folculos secundrios). Na parede intestinal, h tecido linfide difuso e placas de Peyer no ileo inferior, para as quais h um transporte eficiente de antgenos realizado por clulas epiteliais M.

Figura 6 Corte histolgico mostrando placas de Peyer (seta).

Circulao Linfocitria A migrao dos linfcitos para os tecidos e linfonodos se d pelas clulas endoteliais especializadas das vnulas ps-capilares (HEV) e saem pelos vasos linfticos eferentes, passando da para grupos de linfonodos maiores e da para o ducto torcico, sendo a linfa ento coletada pela veia subclvica esquerda. Uma exceo disto ocorre no bao, pois neste rgo os linfcitos no s entram, mas tambm saem atravs da corrente sangnea. Nos linfonodos, as HEV so encontradas principalmente no paracrtex. As clulas que revestem as HEV so endoteliais cubides que expressam mlculas de adeso (E-selectina, P-selectina, ICAM-1, VCAM-1) e podem ser ativadas por meio de citocinas (ex: IFN-, Il-1, TNF).

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Cap. 5 Clulas do Sistema Imune


Nos locais que esto ocorrendo inflamao, onde normalmente no existem HEV, as clulas endoteliais so ativadas e passam a permitir a passagem dos leuccitos, compartilhando assim com caractersticas das HEV. Dessa forma, o endotlio participa ativamente nas respostas inflamatrias, permitindo a diapedese e modulando a ao dos leuccitos envolvidos no processo. Quando expostas s citocinas (ex: Il-1, TNF-, IFN-) ou mediadores qumicos, as clulas endoteliais tornam-se ativadas e passam a ter adeso aumentada a neutrfilos, moncitos e outras clulas circulantes. Este aumento na adeso importante pois atrai leuccitos para o tecido afetado. Com base nisto, percebe-se que a inflamao atua constituindo um rgo linfide lbil em determinada regio, afim de o organismo poder assim estabelecer uma resposta aos agentes nocivos (permitindo, por exemplo, que os leuccitos fagocitem bactrias, degradem tecidos necrticos ou antgenos estranhos). Expor antgenos a um grande nmero de linfcitos num microambiente adequado dos rgos linfides secundrios. Isso importante j que as clulas linfides so monoespecficas e existe apenas um numero finito de linfcitos capazes de reconhecer um determinado antgeno. Quando um antgeno adentra num animal j sensibilizado, h diminuio do fluxo linfocitrio, permitindo que estes leuccitos antgeno-especficos fiquem retidos nos linfonodos drenando a fonte de antgenos.

Figura 7 Representao da recirculao de linfcitos.

Funes e Morfologia Celular As principais clulas efetoras da imunidade inata so: macrfagos, neutrfilos, clulas dendrticas e clulas Natural Killer - NK. Fagocitose, liberao de mediadores inflamatrios, ativao de protenas do sistema complemento, bem como sntese de protenas de fase aguda, citocinas e quimiocinas so os principais mecanismos na imunidade inata. Esses mecanismos so ativados por estmulos especficos, representados por estruturas moleculares de ocorrncia ubqua em micro-organismos, mas que no ocorrem na espcie humana. Molculas tais como lipopolissacardeos, resduos de manose e cidos teicoicos, comumente encontradas na superfcie de microorganismos, constituem Padres Moleculares Associados a Patgenos (PAMPs) e ativam a resposta imune inata, por interao com diferentes receptores conhecidos como Receptores de Reconhecimento de Padres (RRP), dentre os quais a famlia dos receptores Toll-like (TLRs). Essa interao semelhante complementaridade entre antgeno e anticorpo ou entre antgeno e receptor de linfcitos T (TCR), mas, nesse caso, no h diversidade nem capacidade adaptativa para a gerao de novos receptores ou reconhecimento de novos padres moleculares que no aqueles j programados no cdigo gentico.

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Tabela 2 Diviso das clulas do sistema imune de acordo com suas funes.

Entre os vrios RRPs envolvidos em opsonizao, ativao de complemento e fagocitose, os TLRs se destacam por seu papel central na ligao a patgenos e iniciao da resposta inflamatria. Esses receptores esto presentes principalmente em macrfagos, neutrfilos e clulas dendrticas (DCs). Atualmente, 11 diferentes TLRs j foram identificados, alguns localizados na membrana celular, outros no interior das clulas. Outros receptores presentes em fagcitos, com importante papel na resposta imune, so aqueles para fraes do complemento, citocinas, interleucinas e imunoglobulinas (tipo FcR). Em contraposio resposta inata, a resposta imune adaptativa depende da ativao de clulas especializadas, os linfcitos, e das molculas solveis por eles produzidas. As principais caractersticas da resposta Figura 8 Diferentes tipos de RRPs, assim como a maneira na qual adquirida so: especificidade e diversidade de a ligao se estabelece. reconhecimento, memria, especializao de resposta, autolimitao e tolerncia a componentes do prprio organismo. Embora as principais clulas envolvidas na resposta imune adquirida sejam os linfcitos, as clulas apresentadoras de antgenos (APCs) desempenham papel fundamental em sua ativao, apresentando antgenos associados a molculas do complexo de histocompatibilidade principal (MHC, major histocompatibility complex) para os linfcitos T (LT). Neutrfilos So clulas polimorfonucleares (PMN), ou seja, possuem um ncleo bilobulado, trilobulado ou pentalobulado. A presenas deste lbulos nucleares ajuda na identificao destas clulas na microscopia ptica. Estes lbulos so interligados por cromatina . A cromatina nuclear dos neutrfilos estando frouxa indica que a clula jovem, e se estiver condensada indica clula antiga. Um pequeno apndice aparece ao lado do ncleo de neutrfilos de pessoas do sexo feminino. Este apndice a manifestao visual da cromatina sexual (cromossomo X).

Figura 9 Representao de um neutrfilo ( esquerda) e seu aspecto em cortes histolgicos ( direita).

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So os leuccitos mais populosos do sangue, fazendo parte de aproximadamente 65% dos leuccitos do sangue. Eles so os principais fagcitos do sangue e participam da reao inflamatria, sendo sensveis a agentes quimiotxicos liberados pelos mastcitos, basfilos e complemento*. Agentes quimiotxicos so substncias que atraem os neutrfilos at o local, ajudando no movimento em direo ao agente agressor. A leucocitose de neutrfilos pode indicar uma infeco bacteriana, visto que este leuccitos participam da fagocitose de bactrias e so altamente estimulados numa infeco deste tipo, que chamado no de desvio esquerda no estudo do hemograma. Os neutrfilos so clulas piognicas, ou seja, do o aspecto purulento nas inflamaes, aquele lquido leitoso do pus. O pus formado por substncias bacterianas, bactrias mortas, sangue, m as principalmente por neutrfilos que morreram em combate. Eles possuem receptores de superfcie denominados LFA-1( presente tambm em macrfagos ) , que uma molcula de adeso, se ligando ao ICAM-1 dos endotlios, que se refere ao receptor de neutrfilos nos vasos. Ao se ligar ao endotlio, o neutrfilo realiza a diapedese, que o processo no qual o neutrfilo atravessa os pros do endotlio dilatado em entra no tecido. O endotlio se dilata pela presena de vasodilatadores como histamina, prostaglandina E2, prostaciclina e componete C5a do complemento. Os neutrfilos possuem em sua membrana receptores para o componente C3b do complemento . O C3b estimula a fagocitose pelos neutrfilos e o componente C5a um importante quimiotxico para eles, aumentando tambm o seu metabolismo. O C3b gerada pela fixao do complemento e quando liberada na reao se liga ao receptor de superfcie do neutrfilo fazendo opsionizao, ou seja, ajuda na ingesto do material pelos fagcitos. Os neutrfilos ainda possuem receptores da frao FC das IgGs chamadas de FCgamaR. Estas imunoglobulinas IgG (neste caso so opsoninas) envolvem o material a ser fagocitado e se liga a este receptor de superfcie, ocorrendo a emisso de pseudpodes e englobamento da partcula. O citoplasma destes granulcitos neutrfilos rico em grnulos especficos (que se coram por corantes neutros), mas tambm possuem grnulos azurfilos que no so especficos para eles. Os grnulos azurfilos contm fosfatase cida , mieloperoxidase, protenas bsicas e glicosaminas sulfatadas ( se coram em prpura pela colorao de Romanowsky). J os grnulos especficos contm fosfatase alcalina, colagenase, lactoferrina e lisozima. A mieloperoxidase (MPO) uma enzima que compem o sistema perxido de hidrognio-MPO-hialida. Este o sistema mais eficiente e mais importante anti-microbiana presente no grnulos azurfilos dos neutrfilos. O mecanismo de ao dela se baseia no seguinte: O neutrfilo sintetiza perxido de hidrognio por ao da enzima superxido desmutase (SOD) a partir de 2 molculas de superxido. A MPO converte o perxido de hidrognio em presena de uma hialida como o cloreto(Cl-) em HOCl-, que um poderosssimo oxidante.Isto mata a bactria por oxidar sua membrana plasmtica e criar ligao moleculares prejudiciais ( faz unio dos radicais sulfidrila dos aminocidos cistena das protenas superficiais). Devemos destacar aqui uma doena denominada doena granulomatosa crnica da infncia (DGC), que se Tabela 3 Hidrolases e oxidantes dos lisossomas dos caracteriza por defeito nos genes que codificam a MPO. No leuccitos. havendo a MPO, a criana fica muito vulnervel a infeces oportunistas e recidivantes. A lisozima presente nos fagcitos em geral, hidrolisa (quebra) a parede de bactrias gram-positivas principalmente. Este enzima hidrolisa a ligao entre a cadeia de cido N-acetil-murmico e o N-acetil-glucosamina da parede celular (camadas de peptidoglicana*). A lactoferrina um ligante do ferro, que importantssimo para a vida e desenvolvimento da bactria. Quando a lactoferrina liberada no meio por exocitose, ela se liga a todo o ferro que encontra no caminho e mata a bactria de fome, pois ela no tem ferro para ingerir. Essa lactoferrina tambm encontrada na saliva humana.

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A APB (protena bactericida de aumento da permeabilidade) uma substncia altamente catinica que altera a permeabilidade da membrana plasmtica das bactrias (que altamente aninica) e as mata por osmose (entrada excessiva de lquido). Colagenase digere o colgeno nos tecidos, e responsvel por criar o abcesso presente na inflamaes purulentas ( furnculo p. exemplo). Isso ocorre por que no pus esto presentes quantidade enorme de neutrfilos mortos que tiveram suas membrana plasmticas rompidas, o que liberou para o meio as suas enzimas, incluindo a colagenase. As enzimas hidrolticas em geral necessitam de um pH ideal entre 4 e 5.Essas enzimas hidrolticas descritas acima esto presentes nos lisossomas dos neutrfilos na forma inativa pois o pH est alto. Quando se fundem ao fagossoma formando o fagolissoma , o pH abaixa e ativa as enzimas, que vo agir sobre as bactrias presentes do fagossoma e fazer a digesto.

Figura 10 Formao do fagolisossoma e as reaes envolvidas na destruio do antgeno.

Eosinfilos Os eosinfilos so leuccitos granulcitos presentes na sangue em pequena quantidade. encontrado fazendo parte de aproximadamente 3% dos leuccitos do sangue. binucleado e seu citoplama possuem grnulos especficos que se coram pela eosina (acidfilos), que so lisossomas, sendo ricos em fosfatases cidas. As nucleases presentes so as ribonucleases e as desoxiribonucleades que digerem o RNA e o DNA, respectivamente. Funcionalmente esta clula capaz de fagocitar bactrias ou qualquer outro material estranho. Mas a sua principal funo no a fagocitose, mas sim a exocitose da PBM (protena bsica maior). Esta protena rica em arginina (aminocido bsico) e contribui muito para a acidofilia ( ou eosinofilia) dos grnulos desta clula, pois substncias bsicas tem afinidade por substncias cidas. Ela txica para parasitas de humanos e causam a sua morte. Se o sangue do indivduo estiver com a taxa de eosinfilos alta (leucocitose eosinoflica) um grande indicador de infeco parasitria. Um exemplo a infeco por Schistossoma mansoni, no qual a grande eosinofilia confirma a suspeita clnica e ajuda no diagnstico. Os eosinfilos tambm esto muito presentes em reaes alrgicas do organismo. Isto ocorre porque o basfilo ou o mastcito, estimulado na reao alrgica, libera o ECF-A ( fator quimiotxico dos eosinfilos na anafilaxia) ou seja, um fator que atrai e dirige os eosinfilos at o local da alergia. O eosinfilo chega ao local da reao para resolver a reao (inibir) atravs da liberao de histaminase e aril sulfatase B que destrem a histamina e o SRS-A respectivamente,

Figura 11 Representao de um eosinfilo ( esquerda) e seu aspecto em preparaes histolgicas ( direita).

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que so produtos inflamatrios liberados pelos mastcitos ou basfilos sensibilizados. Basfilos Os basfilos so granulcitos encontrados no sangue em pequena quantidade, variando entre 0 a 1% dos leuccitos. Esta clula grande, com ncleo volumoso, geralmente em forma de S e possui grnulos grandes no citoplasma. Os basfilos tem funo semelhante ao dos mastcitos. Possui aos mesmos mediadores nos seus lisossomas, e possui tambm receptores de IgE. Participa de reaes alrgicas da mesma forma que os mastcitos. A diferena bsica entre oa basfilos e os mastcitos est no fato de os basfilos serem encontrados no sangue ( no tpico do tec. conjuntivo) e da estrutura morfolgica. A origem tambm diferente, como se pode observar no captulo I referente a leucocitopoese. A sua participao no choque anafiltico (sistmico) maior que o mastcitos, pois os basfilos so clulas que realmente esto presentes no sangue, e liberam os mediadores para a circulao.

Figura 12 - Representao de um basfilo ( esquerda) e seu aspecto em preparaes histolgicas ( direita).

Mastcitos Os mastcitos so clulas do tecido conjuntivo, originado a partir de clulas mesenquimatosas (clulas de grande potncia de diferenciao que d origem as clulas do tecido conjuntivo). Possui citoplasma rico em grnulos de colorao azul pelo HE (basfilos). A principal funo dos mastcitos armazenar potentes mediadores qumicos da inflamao, como a histamina, heparina, ECF-A (fator quimiotxico dos eosinfilos), SRS-A , serotonina e fatores quimiotxicos dos neutrfilos. Esta clula no tem significado no sangue, sendo uma clula prpria do tecido conjuntivo. Ela participa de reaes alrgicas (de hipersensibilidade), na qual chama os leuccitos at o local e cria uma vasodilatao. a principal clula responsvel pelo famoso choque anafiltico. O Processo de ativao da desgranu-lao (exocitose) se baseia na sensibilizao destas clulas (mastcitos), que ocorre em indivduos com uma predisposio gentica na maioria dos casos. Esta sensibilizao ocorre da seguinte forma: o primeiro contato com o alrgeno (substncia irritante que causa a alergia) estimula a produo de IgE especficas que se unem aos receptores de superfcie dos mastcitos, pois estes so rico em receptores de IgE. No segundo contanto, as IgE ligadas ao mastcito se ligam ao alrgeno e desencadeia a liberao de todos os mediadores inflamatrios. Com isso a histamina causa uma vasodilatao, a heparina anticoagulante, o ECF-A chama os eosinfilos e a fator quimiotxico dos neutrfilos chama os neutrfilos ao local. O SRS-A (slow reacting substance of anaphilaxis) traduzindo significa substncia de reao lenta da anafilaxia e tem como efeito produzir contrao lenta da musculatura lisa. Esta contrao da musculatura lisa importante quando essa reao anafiltica ocorre no pulmo (devido inalao do antgeno) e leva a uma broncoconstrico (asma alrgica).A histamina tambm contribui muito na asma devido a presena de receptores histaminrgicos H2 que causam broncocontrico. Sobre mecanismo de liberao dos mediadores o que ocorre, de um modo mais detalhado, a ativao da adenil ciclase pelo receptor de IgE estimulado. A adenil ciclase quebra o ATP em AMPc, que vai ativar uma enzima chamada de protena quinase A, que vai fosforilar filamentos contrteis do citoplasma. O AMPc tambm proprociona a maior entrada de ons de clcio (Ca++), que favorece a contrao das miofibrilas. Essa contrao do citoplasma carreia as vesculas cheias de mediadores para a membrana plasmtica realizando a exocitose.

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Outro meio de causar a ativao da desgranulao dos mastcitos, porm sem a participao da IgE a ligao dos componentes C3a, C4a e C5a do complemento e de IL-3 com receptores de superfcie. Os componentes do complemento so liberadas na ativao da via clssica e a IL-3 liberada por linfcito T ativados.Essas substncias so conhecidas como anafilotoxinas pois podem desencadear a reao anafiltica. O efeito da reao anafiltico no paciente se manifesta clinicamente no local onde houve o contato com o alrgeno. Por exemplo, se for na conjuntiva dos olhos, ocorrer uma conjuntivite alrgica, no intestino uma diarrria e vmitos, na pele ocorre edema angioneurtico e erupo maculo-papular. A urticria resulta de antgenos que foram absovidos pelo trato intestinal e que vo causar alergia na pele. Esses casos podem ser tratados com hidrocortisona ou antihistamnicos. Foi descoberto que o interferon gama ( produzido por linfcitos T helper-1) pode inibir o processo de secreo de IgE pelos plasmcitos, podendo assim impedir a desgranulao dos mastcitos. importante que saibamos os efeitos sistmicos do choque anafiltico, que ocorre quando o antgeno inoculado na circulao sangnea do paciente. Este antgeno pode ser a penicilina, ou peonha de algum inseto (abelha) e etc. A histamina liberada em grande quantidade no sangue o principal responsvel pelo efeitos sistmicos do choque anafiltico: taquicardia (efeito direto de receptores H2 no corao ou pelo efeito reflexo baroceptor pela queda da presso arterial), hipotenso arterial grave devido a intensa vasodilatao. Ocorrem ainda edema de glote (laringe) e efeitos gastrintestinais (diarria, vmitos...). Esse choque sistmico pode levar a morte por colapso circulatrio e deve ser tratado imediatamente com administrao de adrenalina, pois o antagonista fisiolgico da histamina. A reao anafiltica tambm chamada de reao de hipersensibilidade tipo I.

Figura 13 - - Esta figura ilustra a ao dos mastcitos na reao de hispersensibilidade tipo I ou anafiltica. O alrgeno no seu primeiro contato estimulou a resposta imune humoral, fazendo com que os plasmctios produzissem as IgE especficas para o alrgeno. As IgE se ligam aos mastcitos, fazendo-os ficar sensibilizados. No segundo contato, o alrgeno se liga ao mastcito sensibilizadoe faz com que ele libere os mediadores da inflamao. O ECF-A o quimitxico dos eosinfilos. Estes chegam ao local e liberam o seu contedo lisossmico. Este contedo contem susbtncias que vo hidrolisar(destruir) a histamina e o SRS-A liberado pelos mastcitos. A histamina o principal vasodilatador, levando a graves consequncias para o indivduo.

Moncitos/Macrfagos Os moncitos esto presentes no sangue, constituindo-se de 3 a 8 % dos leuccitos circulantes. O macrfagos no esto circulando no sangue, so clulas que aparecem no tecido conjuntivo ou no parnquima de algum rgo, e originado a partir dos moncitos, que migraram at o local (veja captulo I). Os moncitos tem ncleo ovide, ou em forma de rim e o citoplasma basfilo, com grnulos azurfilos. diferente do macrfago, que uma clula grande, amebide com retculo endoplasmtico rugoso e complexo de Golgi desenvolvidos.

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Figura 14 Diferenciao de moncitos em macrfagos nos tecidos.

O moncito tambm participa da formao dos granulomas na inflamao crnica granulomatosa. Eles se fundem em formam as clulas gigantes de Langhans. Estas clulas multinucleadas gigantes tem grande capacidade fagocitria, e engloba partculas maiores, como fungos (paracoccidiodes, coccidioides, blastomyces etc.) e tambm bactrias (Treponema pallidum, Mycobacterium tuberculosis e M. leprae). No granuloma, os macrfagos (originados dos moncitos do sangue) se modificam e viram clulas epiteliides, com grande atividade secretora e pouca atividade fagoctica. Elas secretam enzimas hidroltica que vo matar o ser estranho que est no granuloma. Estas enzimas tambm causam necrose no centro desses granulomas, como por exemplo, a necrose caseosa encontrada na tuberculose.

Figura 15 Formao de granuloma.

Os moncitos tambm formam os osteoclastos presente no tecido conjuntivo sseo. Estes osteoclastos so clulas que digerem a hidroxiapatita dos ssos e com isso liberam clcio e fosfato para o sangue. Ficam estacionadas dentro de cavidades denominadas lacunas de Howship. Sua atividade regulada pelo paratormnio, que estimula sua atividade. Quando o clcio do sangue cai abaixo de um limiar, as glndulas paratireides liberam este hormnio. Os macrfagos so clulas de altssimo poder fagocitrio. O interferon gama* produzido por linfcitos T helper estimula a fuso dos lisossomas com o fagossoma para que haja a digesto intracelular. Este fato importante para entender diversas doenas como a leishmaniose difusa e a hansenase lepromatosa . Estes fagcitos possuem diversas enzimas hidrolticas em seus lisossomas.Ele no possui a mieloperoxidase, mas mata as bactrias por liberao de radicais derivados do oxignio, como o superxido, radical hidroxila e o perxido de hidrognio ( H2O2). Estes vo oxidar as membranas das celulares da bactria e formar pontes dissulfeto entre os

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aminocidos cistena de diversas protenas estruturais da bactria, o que leva a morte da mesma. Entretanto, a bactria pode possuir alguma enzima que degrada a H2O2, como a catalase presente no Staphilococcus aureus. A catalase nesse caso um mecanismo de defesa da bactria, pois destri o perxido de hidrognio.

Figura 16 Relao entre a imunidade inata e adaptativa dependente dos macrfagos.

Possui funes de extrema importncia para o sistema imune: Apresentador de antgenos: Os macrfagos so clulas que vo fagocitar a antgeno e digerlo no fagolisossoma. Porm os seus eptopos* so levados at a superfcie da clula e apresentado ao linfcito T ou ao linfcito B. Ao mesmo tempo ele sintetiza o MHC-classe II que se combinar com o linfcito T. Este ir estimular todo o sistema imune do organismo e convocar as clulas para o ataque. Limpador : Os macrfagos so clulas que chegam para fazer a limpeza de um tecido que necrosou, ou que inflamou. Eles fagocitam restos celulares, clulas mortas, protenas estranhas, calo sseo que se formou numa fratura, tecido de cicatrizao exuberante etc. Aps esta limpeza, os fibroblastos ativos ( no caso de uma necrose) vo ao local e preenchem o espao com colgeno. Produtor de interleucinas: O macrfago o principal produtor da interleucina I (IL-1). Ele produz a IL-1 quando fagocita organismos invasores (micrbios), que d o alarme para o sistema imune. Esta citocina estimula linfcitos T helper at o local da infeco, onde sero apresentados aos eptopos nos macrfagos. Alm disso a IL-1 estimula a expanso clonal dos LThelper e dos linfcitos B especficos contra os eptopos (lembre-se: eptopos so molculas especficas dos antgeno que capaz de criar uma populao de clulas especfica para combat-lo) A IL-1 responsvel pela febre nas infeces e inflamaes que ocorrem no corpo. Ela vai ao hipotlamo, nos ncleos suprapticos e estimula a produo de prostaglandinas, que ativam o sistema de elevao da temperatura. Estes ncleos ativados vo fazer com que os vasos sangneos da pele se contraem. Com isso a pele retm o calor do corpo, fazendo-o esquentar. O suor que aparece na febre indica melhora, pois os vasos da pele se dilatam e as glndulas sudorparas esto em funcionamento, liberando gua, com isso mandando o calor para o meio externo. A IL-1 tambm estimula a ciclo-oxigenase no metabolismo do ac. aracdnico, aumentando a produo de prostaglandinas pelos leuccitos , que vai contribuir para a inflamao e dor (lembre-se que as prostaglandinas participam do mecanismo da dor). Alm disso a IL-1 estimula a sntese de protenas de adeso leucocitria nos endotlios (como a ICAM-1) e facilita a adeso dos leuccitos para realizar a diapedese. Outras funes da IL-1 se referem aos estmulos para maturao dos leuccitos, descrito no captulo 1. Os macrfagos so resposveis pelo sistema monoctico fagocitrio (SMF), pois vem da maturao dos moncitos que chegam pelo sangue. Existem clulas que so morfologicamente diferentes dos macrfagos, mas tem a mesma funo, e provm dos moncitos da mesma forma, sendo, ento parte do SMF. So eles: Moncito sanguneo - circulante no sangue; Micrglia - SNC;

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Clulas de Kuppfer - fgado; Macrfagos alveolares - pulmo; Clulas dendrticas - regio subcortical dos linfonodos; Mesangio intraglomerular - glomrulo de Malpighi renal; Macrfagos sinusais dos bao - cordes de billroth da polpa vermelha do bao. Macrfagos das serosas - peritnio, pericrdio e pleura; Clulas de Langehans - pele;

Os macrfagos ou clulas de Langehans da pele quando inativados, viram histicitos. Estes reduzem as suas organelas e diminuem o seu metabolismo ficando como um vegetal. Os histicitos so responsveis pela formao da tatuagem, onde seu citoplasma fica cheio de pigmentos fagocitados. Os macrfagos possuem receptores de superfcie ( ou marcadores) que so chamados de RC1 e FC-gamaR O RC1 o receptor que se interage com o componente C3b do complemento. A interao deste C3b com o RC1 estimula a fagocitose dos macrfagos (opsionizao). J o FC-gamaR o receptor de IgG para a sua frao FC cuja interao causa opsionizao, estimulando a fagocitose (englobamento pela emisso de pseudpodes). Estes receptores descritos acima so importantes, pois a bactria ou outros agentes estranhos costumam estar envolvidos de IgG e de componentes do complemento como o C3b. Outro receptor encontrado nos macrfagos o LFA-1 que responsvel pela adeso ao endotlio capilar (semelhante aos neutrfilos) Um destaque deve ser dado para as clulas dendrticas dos linfonodos. Estes no expressam o MHC-classe II, apenas o RC1 e o FC-gamaR e mantm interaes de apresentao do antgeno aos LB dos linfonodos. Clulas Dendrticas As clulas dendrticas, especializadas na captura e apresentao de antgenos para os linfcitos, so consideradas uma ponte entre a imunidade inata e a adaptativa, por serem atradas e ativadas por elementos da resposta inata e viabilizarem a sensibilizao de LT da resposta imune adaptativa. Residem em tecidos perifricos, como pele, fgado e intestino, onde capturam antgenos e se tornam ativadas, migrando para os linfonodos regionais, nos quais processam e apresentam antgenos proteicos ou lipdicos aos LTs. DCs imaturas so altamente eficientes na captura de antgenos, enquanto as maduras so muito eficientes na apresentao. Os antgenos capturados so processados dentro da clula e apresentados em sua superfcie, inseridos em molculas do MHC. Em geral, antgenos proteicos so apresentados por molculas MHCs clssicas (de classes I e II) que estimulam LT. Antgenos lipdicos so apresentados por molculas MHCs no clssicas como CD1 e estimulam principalmente LT e clulas NK/T. Durante sua vida til, as DCs imaturas migram da medula ssea pela corrente sangunea, atingindo tecidos perifricos como a pele, onde se tornam residentes (clulas de Langerhans). Um aspecto curioso que as DCs so as primeiras clulas a chegar a um stio infeccioso, precedendo at mesmo os neutrfilos. Aps o contato com o antgeno, as DCs se tornam ativadas e migram pelos vasos linfticos at os rgos linfoides secundrios. Podem receber sinais de maturao a partir de clulas NK, NK/T e LT, de molculas proinflamatrias, como citocinas, prostaglandinas e interferons e dos PAMPs. As DCs retm o antgeno nos rgos linfoides por perodos extensos, o que pode contribuir para a memria imunolgica. Essas clulas orquestram a migrao de outros tipos de clulas imunes dentro dos linfonodos via secreo de quimiocinas e regulam a diferenciao, a maturao e a funo de LT de modo contato-dependente e por secreo de fatores solveis, sendo, portanto, fundamentais para o incio e a coordenao da resposta imunolgica adquirida. H duas vias de diferenciao das DCs a partir de um progenitor comum. A via mieloide gera DCs mieloides (mDCs), entre os quais esto as clulas de Langerhans, as principais DCs na pele e as DCs intersticiais encontradas em outros tecidos. A outra via de diferenciao gera as DCs plasmocitoides (pDCs), que predominam no sangue perifrico e secretam grandes quantidades de interferon tipo I (IFN-/) na vigncia de infeces virais. As pDCs tm receptores citoplasmticos capazes de responder a RNA (TLRs 7 e 8) e DNA (TLR9), enquanto as mDCs expressam preferencialmente receptores de superfcie para PAMPs, como peptidoglicanos (TLR2) e lipopolissacardeos (TLR4). As DCs so decisivas para a determinao da ativao e do tipo de imunidade mediada pelos LTs. Em geral, DCs imaturas so tolerognicas, enquanto DCs maduras so imunoestimuladoras. Entretanto, em alguns contextos, DCs maduras podem expandir a populao de LTs reguladores. A induo de tolerncia ou resposta imune depende do conjunto de sinais recebidos pelas DCs, tais como ativao de TLRs e citocinas presentes no meio. As DCs podem coordenar respostas dos LBs via ativao de LT ou diretamente, por substncias solveis como o INF-.

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Figura 17 Apresentao de antgenos pela clula dendrtica (APC profissional).

Clulas NK As clulas Natural Killer (NK) tm origem na medula ssea, a partir de um progenitor comum aos LTs, constituindo de 5% a 20% das clulas mononucleares do sangue. So uma importante linha de defesa inespecfica, reconhecendo e lisando clulas infectadas por vrus, bactrias e protozorios, bem como clulas tumorais. Ademais, recrutam neutrfilos e macrfagos, ativam DCs e linfcitos T e B. A expanso e a ativao das NKs so estimuladas pela IL-15, produzida por macrfagos, e pela IL-12, indutor potente da produo de IFN- e ao citoltica. Uma vez ativadas, as NKs lisam clulas infectadas e tumorais e secretam citocinas pro-inflamatrias (IL-1, IL-2 e principalmente IFN-). A citlise mediada pelas NKs ocorre pela ao das enzimas perforinas, que criam poros na membrana das clulasalvo, e granzimas, que penetram nas clulas, desencadeando morte celular por apoptose. As clulas NKs apresentam receptores de ativao e de inibio, e o balano entre os sinais gerados por eles determina sua ativao. Uma classe de receptores pertence superfamlia das imunoglobulinas (KIR), enquanto a outra pertence famlia das lectinas tipo-C. No homem, h 14 receptores KIR, oito inibidores e seis ativadores. Os receptores de inibio reconhecem molculas MHC de classe I prprias, expressas na superfcie de todas as clulas nucleadas. De modo geral, h dominncia dos receptores de inibio, impedindo a lise das clulas normais do hospedeiro, que expressam molculas de MHC de classe I. Clulas infectadas, especialmente por vrus, e clulas tumorais Figura 18 - Relaes realizadas pelas clulas NK. frequentemente apresentam baixa expresso das protenas de MHC classe I, tornando-se vulnerveis ao das NK. A capacidade tumoricida das NKs aumentada por citocinas como interferons e interleucinas (IL-2 e IL-12). Outra ao efetora das NKs a destruio de clulas revestidas por anticorpos IgG, via receptores Fc (FcRIII ou CD16), pelo mecanismo de citotoxicidade celular dependente de anticorpos (ADCC).

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Linfcitos B Os LB so inicialmente produzidos no saco vitelino, posteriormente, durante a vida fetal, no fgado e finalmente na medula ssea. As clulas que vo se diferenciar em LB permanecem na medula ssea durante sua maturao e os LB maduros deixam a medula e entram na circulao, migrando para os rgos linfoides secundrios. As molculas responsveis pelo reconhecimento de antgenos nos LB so as imunoglobulinas de membrana, IgM e IgD. Estas so a contrapartida dos receptores de linfcitos T (TCR) e por analogia so denominadas receptores de linfcitos B (BCR) em alguns contextos. Maturao A maturao dos linfcitos B tem incio a partir das clulas pr-B que expressam trs genes, TdT, RAG1 e RAG2, que comandam a recombinao gnica necessria para a produo de imunoglobulinas. A montagem da cadeia pesada se inicia com a combinao aleatria de um segmento D e um Figura 20 Caractersticas da formao e ao dos linfcitos J, que a seguir se unem a um segmento V, definindo a B. especificidade de reconhecimento do anticorpo que ser formado, independentemente da poro constante que far parte da cadeia completa. Essa cadeia pesada se associa a uma cadeia invarivel e expressa na superfcie como um pr-BCR, juntamente com as molculas assessrias Ig e Ig. Em seguida ocorre o rearranjo da cadeia leve k e, na falha desta, da cadeia . Cad a LB apresenta, portanto, um nico tipo de cadeia leve associado cadeia pesada. O sucesso na expresso de uma IgM completa na superfcie do LB leva progresso da maturao com subsequente produo de IgD de membrana. importante ressaltar que todo rearranjo gnico ocorre no incio da maturao do LB, no estgio pr-B, ainda na medula ssea, e de modo totalmente independente de qualquer contato com antgeno.O processo combinatrio dos diferentes segmentos que compem as pores variveis das cadeias pesadas e leves e as diferentes possibilidades de associao entre elas resultam em cerca de 1011 especificidades diferentes de reconhecimento pelas imunoglobulinas. A fim de restringir esse repertrio, mecanismos de seleo positiva e negativa atuam durante a maturao dos LB. Na seleo positiva, os LB imaturos expressando molculas funcionais de Ig de membrana recebem sinais de sobrevivncia para prosseguir a maturao. No processo de seleo negativa, os LB imaturos, ainda na medula ssea, que reconhecem antgenos prprios com alta afinidade sofrem apoptose ou entram em um processo denominado edio de receptor, no qual os genes RAG so novamente ativados e outra combinao V-J de cadeia leve gerada em substituio anterior, auto-reativa. Os estgios de maturao dos LB so caracterizados por um padro especfico de expresso de genes de imunoglobulinas e de outras protenas de membrana que servem como marcadores fenotpicos desses estgios de desenvolvimento. Essas molculas de superfcie cumprem funes especficas importantes nas diferentes fases de maturao do LB. A existncia de anticorpos monoclonais especficos para cada um desses marcadores permite que sejam feitos estudos sobre a distribuio e a dinmica da linhagem

Figura 21 Fases da maturao dos linfcitos B.

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de LB. Ademais, monoclonais contra algumas dessas molculas de superfcie tambm podem ser utilizados com finalidade teraputica, atingindo determinadas subpopulaes de clulas da linhagem B. Ativao dos Linfcitos B Os LB so responsveis pela imunidade humoral que se caracteriza pela produo e liberao de anticorpos capazes de neutralizar, ou at mesmo destruir, os antgenos (Ag) contra os quais foram gerados. Para tal, os LB devem ser ativados, o que acarreta um processo de proliferao e diferenciao, que culmina na gerao de plasmcitos com produo de imunoglobulinas com alta afinidade para o eptopo antignico que originou a resposta. Para ativao, preciso que o BCR ligue-se a um eptopo antignico, o que desencadeia uma sequncia de eventos intracelulares. Alm do reconhecimento do antgeno, a ativao dos LB depende tambm de um segundo sinal ativador. O complexo do receptor de LB (BCR) inclui, alm da imunoglobulina de membrana, duas cadeias peptdicas, Ig e Ig, que tm funo de dar incio sinalizao intracelular aps o encontro com o antgeno. As molculas Ig e Ig contm motivos de ativao (ITAMs) que so fosforilados aps ligao do antgeno ao complexo BCR, e ativam fatores que promovem a transcrio de genes envolvidos na proliferao e diferenciao dos LB. Os LB funcionam tambm como clulas apresentadoras de antgeno, aps interiorizarem e processarem o Ag ligado ao receptor de superfcie (BCR). Os peptdeos gerados pelo processamento so expressos na membrana dos LB ligados s molculas do complexo maior de histocompatibilidade (MHC) classe II, para apresentao aos Figura 22 Aspectos morfolgicos e funcionais do LTCD4+ (auxiliares). A interao do complexo peptdeo/MHC classe II BCR. com o receptor de LT (TCR) inicia uma cadeia de eventos que levam os LT auxiliares expanso clonal e produo de citocinas que estimulam a proliferao e diferenciao dos LB. Protenas do complemento tambm fornecem sinais secundrios para ativao por meio do receptor para o fragmento C3d, denominado CR2 ou CD21, expresso na superfcie dos LB. O CD21 forma um complexo com outras duas protenas de membrana, CD19 e CD81, permitindo o reconhecimento simultneo do C3d e do antgeno pelo BCR. Esta ligao promove o incio da cascata de sinalizao de ambos os receptores, gerando uma resposta muito maior se comparada resposta do antgeno no ligado molcula C3d. A possibilidade da ligao C3d/CR2 atuar como o segundo sinal para a ativao dos LB garante o desencadeamento da resposta frente a microorganismos e antgenos que ativam o complemento. Esse tambm um mecanismo de amplificao da resposta imune humoral, uma vez que anticorpos capazes de ativar o complemento vo resultar em maior estmulo dos LB. Recentemente tem sido destacado o potencial dos LB em desempenhar suas funes aps ativao de outros receptores relacionados resposta imune inata, tais como os Toll-Like Receptors (TLRs). Foi demonstrado que os LB expressam a maioria dos TLRs, tais como TLR-2, TLR-3, TLR-5 TLR-7 e TLR-9, respondendo a uma enorme variedade de ligantes que podem ser proteicos, polissacardicos, lipdicos e outros. A resposta dos LB a antgenos peptdicos requer a ajuda dos LT auxiliares e esses antgenos so, por isso, denominados "antgenos T dependentes". Muitos antgenos no proteicos, com eptopos repetitivos, no necessitam da cooperao dos LT e so denominados "antgenos T independentes". Tipos de Respostas As respostas primrias e secundrias dos anticorpos para os antgenos proteicos diferem qualitativa e quantitativamente. Resposta Primria O primeiro contato com um antgeno, por exposio natural ou vacinao, leva ativao de LB virgens, que se diferenciam em plasmcitos produtores de anticorpos e em clulas de memria, resultando na produo de

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anticorpos especficos contra o antgeno indutor. Aps o incio da resposta, observa-se uma fase de aumento exponencial dos nveis de anticorpos, seguida por uma fase denominada plat, na qual os nveis no se alteram. Segue-se a ltima fase da resposta primria, a fase de declnio, na qual ocorre uma diminuio progressiva dos anticorpos especficos circulantes. Resposta Secundria Ao entrar em contato com o antgeno pela segunda vez, j existe uma populao de LB capazes de reconhecer esse antgeno devido expanso clonal e clulas de memria geradas na resposta primria. A resposta secundria difere da primria nos seguintes aspectos: a dose de antgeno necessria para induzir a resposta menor; a fase de latncia mais curta e a fase exponencial mais acentuada; a produo de anticorpos mais rpida e so atingidos nveis mais elevados; a fase de plat alcanada mais rapidamente e mais duradoura e a fase de declnio mais lenta e persistente. A magnitude da resposta secundria depende tambm do intervalo de tempo desde o contato inicial com o antgeno. A resposta ser menor se o intervalo for muito curto ou muito longo. Se for muito curto, os anticorpos ainda presentes formam complexos Ag/Ac que so rapidamente eliminados; se for muito longo, possvel que as clulas de memria tenham diminudo gradualmente com o tempo, embora a capacidade para deflagrar uma resposta secundria possa persistir por meses ou anos. O perodo timo para a induo de resposta secundria logo aps a queda do nvel de anticorpos da resposta primria abaixo dos limites de deteco. Nos dois tipos de resposta, primria e secundria, h a produo dos istipos IgM e IgG, porm, na resposta primria IgM a principal Ig e a produo de IgG menor e mais tardia. Na resposta secundria, a IgG a imunoglobulina predominante. Nas duas respostas, a concentrao de IgM srica diminui rapidamente de maneira que, aps uma ou duas semanas, observa-se queda acentuada enquanto a produo de IgG persistente. Vale a pena enfatizar que os testes imunoenzimticos muito sensveis podem registrar nveis baixos ou residuais de IgM por meses em alguns casos.

Figura 23 Cronologia das respostas linfocitrias.

Clulas B reguladoras O conceito de LB reguladores (BREGS) foi introduzido por Bhan e Mizoguchi11 a partir de estudo com camundongos LB deficientes (B-) cruzados com camundongos que no expressavam TCR (TCR -/-) e desenvolviam espontaneamente colite crnica. Os camundongos duplamente afetados (B-/TCR-/-) apresentaram doena mais precocemente e inflamao mais exacerbada do que animais TCR -/-, mas que tinham LB. De modo surpreendente foi comprovado que, naquele modelo experimental, era possvel minimizar o efeito da colite no grupo B-/TCR-/-, pela administrao de imunoglobulinas purificadas e de autoanticorpos anticlulas epiteliais colnicas. A melhora observada foi acompanhada de aumento no clearance de clulas apoptticas favorecido pelos autoanticorpos produzidos pelos LBREGS.

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Outros estudos em modelos experimentais comprovaram a existncia de clulas com capacidade imunomoduladora no pool de LB que, em um ambiente cronicamente inflamado, se diferenciam em um fentipo com alta expresso de CD1d, capacidade de produo de IL-10 e habilidade para suprimir a resposta inflamatria. Os LBREGS dependem de interao antignica e estimulao via molcula CD40L e B7, mas, uma vez ativadas, produzem IL-10 e TGF- suprimindo a ativao e diferenciao de LTCD4+, LTCD8+ e clulas NK/T, inibem a ativao de clulas dendrticas e estimulam a diferenciao de LT reguladores. Mediante contato dos LBREGS com LT virgens h inibio da ativao do LT e da diferenciao em TH1 O estudo dos LBREGS em modelos animais deixa claro o papel regulador dessas clulas nas diferentes enfermidades. A comprovao da existncia dessas clulas no homem ser de grande relevncia para a compreenso das doenas autoimunes. Mais do que entender a diversidade de efeitos das citocinas antiinflamatrias que asseguram as funes dos LBREGS, o seu estudo refora as evidncias da produo de autoanticorpos de modo fisiolgico com finalidade protetora. Subtipos Especiais de Linfcitos B Alm do LB convencional (B2) existem outros subtipos de LB como os B1 e os LB da zona marginal (MZ-B) do bao, que atuam como verdadeiras sentinelas em stios anatmicos especficos como: cavidade peritoneal, cavidade pleural e zona perifrica do bao, respectivamente. Estes subtipos assemelham-se muito aos linfcitos T e aos linfcitos NK/T por sua localizao em regies especficas e funo efetora com a utilizao de receptores altamente conservados, mas capazes de reconhecer uma variedade limitada de patgenos. Ambos os subtipos exercem tanto as funes de clulas da imunidade inata como da resposta adaptativa. Por pertenceram aos dois tipos de resposta, provavelmente essas clulas representam uma forma primitiva e conservada de imunidade. Linfcitos B1 Os LB1 constituem uma subpopulao distinta dos LB convencionais (B2). Possuem forte capacidade autorrenovadora e so encontrados principalmente na cavidade pleural, peritoneal e em menor quantidade no bao. So responsveis pela produo da maior parte das IgM naturais e tambm da maioria dos anticorpos de classe IgM, incluindo anticorpos contra LT, dsDNA, eritrcitos e anticorpos que reconhecem constituintes bacterianos comuns. Tem sido sugerido que os LB1 representam uma relquia evolutiva originada de uma linhagem primitiva da imunidade inata que se tornou uma clula linfoide do sistema adaptativo, mas ainda mantm muitas caractersticas de uma clula do sistema inato. Os LB1 parecem representar a primeira linha de defesa contra infeces sistmicas por vrus e bactrias e so de fundamental importncia para o equilbrio homeosttico do organismo. Produzem anticorpos polirreativos e de baixa afinidade, importantes para remoo de clulas envelhecidas e/ou que sofreram estresse celular e proteo contra o desenvolvimento de doenas autoimunes e arterosclerose. Os LB1 expressam baixos nveis dos marcadores B220/ CD45R, CD19, Mac-1 e IgD de superfcie, altos nveis de IgM de superfcie e so subdivididos em 2 grupos principais: B1a e B1b. Os LB1a expressam a molcula CD5 de superfcie em nveis intermedirios, enquanto os LB1b so CD5- e capazes de diferenciao em clulas com caractersticas mielomonocticas com funo e morfologia semelhante ao macrfago. Foi verificado que a secreo de IL-10 pelos LB1 modula a atividade fagoctica do macrfago in vitro, e a apresentao de antgenos na presena de IL-10 induz tolerncia ou diferenciao de LT em clulas supressoras, indicando um possvel papel imunomodulador dessa populao celular. Linfcitos B da zona marginal As principais populaes de LB efetoras do bao so os LB da zona marginal (MZ-B) e os LB foliculares (FCB). Os MZ-B so populaes especializadas de LB localizadas na regio perifrica ou marginal do bao, regio denominada sinusoide esplnico. Neste stio esto localizados tambm os macrfagos da zona marginal que junto com os MZ-B representam a primeira linha de defesa rpida, contra antgenos particulados da corrente sangunea. No entanto, fenotipicamente, estes linfcitos so muito semelhantes aos LB convencionais, sendo classificadas tambm no grupo LB2. Os FC-B, localizados nos folculos linfoides, atuam em um estgio mais avanado da resposta adquirida, gerando LB de memria e plasmcitos por meio da resposta humoral T dependente comentada anteriormente nesta reviso. Os MZ-B, assim como os LB1, possuem um repertrio de reconhecimento antignico limitado, normalmente autorreativo. Mas, ainda que autorreativos, eles so tambm polirreativos, com especificidade importante tanto para

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remoo de restos celulares, como para o reconhecimento de antgenos bacterianos e virais. Outra caracterstica importante destas clulas a propriedade que elas tm de gerar as chamadas respostas humorais T independentes, ou seja, podem responder avidamente a estmulos antignicos e se diferenciarem em clulas secretoras de anticorpos sem a necessidade de auxilio de LT. Juntos, MZ-B e LB1 fazem parte das chamadas repostas de memria natural, pois geram rapidamente clulas efetoras nos estgios iniciais da resposta imune. Linfcitos T As clulas pr-T entram no crtex tmico pelas artrias e durante o processo de seleo e maturao migram em direo medula, de onde saem para a circulao. O processo de maturao dos LT envolve a expresso de um receptor de clulas T (TCR) funcional e dos co-receptores CD4 e/ou CD8. Os LT s reconhecem antgenos processados, apresentados por molculas de MHC na superfcie de uma clula apresentadora de antgeno. O TCR expresso na membrana dos LT em associao com um complexo denominado CD3, composto por cinco diferentes protenas da famlia das imunoglobulinas. O TCR responsvel pelo reconhecimento do complexo peptdeo-molcula de MHC, e o CD3, pela sinalizao celular subsequente. TCR O TCR formado por duas cadeias peptdicas da superfamlia das imunoglobulinas, com uma regio varivel e uma regio constante, formadas a partir de segmentos gnicos que durante a maturao dos LT sofrem recombinao de forma semelhante do BCR. Em cerca de 95% dos LT circulantes o TCR formado pelas cadeias e . Uma pequena porcentagem de LT apresenta TCR composto por cadeias e . As cadeias e so formadas pela combinao de trs tipos de segmentos (V, J e C) e as cadeias e , quatro tipos (V, D, J e C). H ~70 diferen tes segmentos V, 60 J e 1 nico C. Para a cadeia , h ~50 V seguidos de dois conjuntos compostos de 1 D, 6 -7 j e 1 C. Nas cadeias e a variabilidade menor. A grande diversidade de repertrio dos LT maduros gerada pelo processo de recombinao somtica na qual um dado gene V, entre os diversos possveis, liga-se a um dado gene J ou combinao DJ. A diversidade de repertrio potencial dos LT algo em torno de 10. A recombinao entre os diferentes segmentos mediada por enzimas expressas apenas durante a fase de Figura 24 Semelhana entre os Ac e os TCRs. maturao dos linfcitos. Maturao de Linfcitos T O processo de maturao dos LT ocorre em etapas sequenciais que envolvem a recombinao somtica e expresso do TCR, proliferao das clulas, expresso dos co-receptores CD4 e CD8 e seleo positiva e negativa induzida por apresentao de antgenos prprios por clulas do estroma tmico. Inicialmente ocorre o rearranjo dos genes da cadeia do TCR e, em seguida, da cadeia . Os timcitos, ou linfcitos imaturos, comeam a expressar baixos nveis de CD4 e CD8 na superfcie, sendo, portanto, duplo-positivos. Nesta fase, os timcitos migram em direo medula tmica e entram em contato com Ag prprios apresentados pelas clulas epiteliais do estroma tmico. Apenas aqueles que se ligam ao complexo MHC/Ag com afinidade adequada recebem estmulo para sobreviver (seleo positiva). Os timcitos cujo TCR no apresenta afinidade pelo MHC prprio sofrem apoptose pela falta de estmulo (morte por negligncia). A interao com molculas MHC de classe I ou II determina a diferenciao do timcito em LT CD8+ ou CD4+, respectivamente. Continuando a maturao, os timcitos que sobreviveram seleo positiva e expressam apenas CD4 ou CD8 entram em contato na medula com clulas dendrticas e macrfagos, clulas apresentadoras de antgenos (APCs) extremamente eficientes, que apresentam Ag prprios associados ao MHC. Os timcitos imaturos que interagem com muita afinidade com esses complexos morrem por apoptose (seleo negativa). As clulas que sobrevivem tornamse LT maduros, prontos para deixarem o timo e exercerem suas funes na periferia. Apenas cerca de 5% das clulas que entram no timo tornam-se LT maduros. Este processo de educao tmica visa garantir que os LT circulantes sejam tolerantes aos Ag prprios, mas capazes de reconhecer Ag estranhos ao organismo quando apresentados pelo MHC prprio. Entretanto, os

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mecanismos centrais de tolerncia no so absolutos uma vez que LT autorreativos podem ser encontrados na periferia. Entre outros mecanismos de regulao perifrica, destacam-se diferentes populaes de LT reguladores que atuam na periferia impedindo o desenvolvimento de autoimunidade.

Figura 25 Representao da maturao dos linfcitos B, muito semelhantes a maturao do linfcito T.

Linfcitos Efetores Existem diversos subtipos de LT efetores. Classicamente os dois principais subtipos so os auxiliares (Th) e os citotxicos, que apresentam um receptor TCR e as molculas correceptoras, CD4 ou CD8, respectivamente. Os LT CD4 (Th) so responsveis por orquestrar outras clulas da resposta imune na erradicao patgenos e so tambm muito importantes na ativao dos LB, macrfagos ou mesmo LT CD8. Os LT CD8 esto envolvidos principalmente nas respostas antivirais e possuem tambm atividade antitumoral. Ambos os subtipos apresentam papel muito importante no controle de patgenos intracelulares. Outros subtipos de LT efetores, encontrados especialmente nas barreiras de mucosa e na pele, so os LT . Essas clulas so importantes nas respo stas imunes contra antgenos comumente encontrados nesses stios anatmicos e representam um elo entre a resposta imune inata e adaptativa. Linfcitos T CD4 Auxiliares (Th) Os LTh so subdivididos funcionalmente pelo padro de citocinas que produzem. Durante o estmulo fornecido por uma APC, um linfcito precursor Th0 pode se tornar um linfcito Th1, Th2 ou Th17, na dependncia do ambiente de citocinas presente. Embora morfologicamente indistinguveis essas clulas apresentam distintos padres de citocinas secretadas e, consequentemente, diferentes respostas efetoras. Linfcitos Th1 Os LTh1 produzem grandes quantidades de IL-2, que induz proliferao de LT (incluindo os prprios LTCD4 de maneira autcrina) e tambm induz a proliferao e aumenta a capacidade citotxica dos LT CD8. A outra citocina produzida em grandes quantidades pelos LTh1 o INF-, uma citocina muito importante na ativao de macrfagos infectados com patgenos intracelulares como micobactrias, protozorios e fungos, que apresenta tambm um papel relevante na ativao de LT CD8. Os pacientes com sndrome de imunodeficincia em que o receptor de INF- est ausente sofrem de infeces graves por micobactrias. Existe um ciclo de retroalimentao positiva na ao do INF- sobre outros LThO, induzindo sua polarizao para a via de diferenciao Th1 e inibindo a via Th2. A resposta Th1 essencial para o controle de patgenos intracelulares, sendo possvel que contribua para a patognese de doenas reumticas autoimunes como artrite reumatoide (AR) e esclerose mltipla (EM). Entretanto, nos ltimos anos, uma nova subpopulao de LT, os LTh17, tem sido responsabilizada pelo processo fisiopatolgico dessas enfermidades.

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Linfcitos Th2 A segunda populao Th muito importante nas respostas imunes humorais o LTh2, que produz IL-4, IL-5, IL-6 e IL-10, favorecendo a produo de 18 anticorpos. As respostas Th2 esto associadas com as doenas alrgicas e infeces por helmintos, uma vez que a IL-4 induz a troca de classe de imunoglobulinas nos linfcitos B para IgE e a IL-5 induz a produo e ativao de eosinfilos. De forma anloga ao INF-, a IL4 tambm promove retroalimentao positiva para a via Th2 e suprime a via Th1. Em situaes de hipersensibilidade imediata, como nas doenas alrgicas, a terapia visa a dessensibilizao imune Th2 e induo de respostas Th1 alrgeno-especficas. J em doenas sabidamente causadas por LTh1, as citocinas Th2 tm sido consideradas protetoras, portanto a busca pela alterao no padro de resposta imune de Th1 para Th2 tem sido muito estudada, visando a melhora ou o restabelecimento da tolerncia imunolgica. Entretanto, este paradigma bipolar tem sido reformulado recentemente em funo do reconhecimento de novos subtipos de LT, principalmente as clulas Th17. Linfcitos Th17 Os LTh17 representam um novo subtipo de LT efetores importantes na proteo contra infeco por microorganismos extracelulares. Foram originalmente descritos em modelos experimentais de doenas autoimunes como encefalite autoimune e artrite induzida por colgeno, que antes se acreditava serem mediadas predominantemente por clulas Th1. Esta nova via de diferenciao Th comeou a ser elucidada com a descoberta da citocina IL-23 que, juntamente com IL-1 e IL-6, pode levar ao desenvolvimento de doenas autoimunes em modelos murinos por seu importante papel pr-inflamatrio e indutor da diferenciao e ativao de LTh17. Os LTh17 produzem citocinas IL-22, IL-26 e citocinas da famlia IL-17. As citocinas da famlia IL-17 so potentes indutoras da inflamao, induzindo infiltrao celular e produo de outras citocinas prinflamatrias. A produo desregulada de IL-17 est associada a vrias condies autoimunes, como: esclerose mltipla, doena intestinal inflamatria, psorase e lpus. Em pacientes com artrite reumatoide, nveis aumentados de IL-17 foram encontrados na sinvia, onde atua como um importante fator na ativao dos osteoclastos e

Figura 26 Representao dos tipos de linfcitos existentes.

reabsoro ssea. A via de diferenciao Th17 antagonizada pelas citocinas Th1 e Th2 e, em alguns modelos experimentais de autoimunidade causada por LTh17, as citocinas Th1 e Th2 tm se mostrado protetoras. A exata compreenso dos mecanismos de polarizao Th em humanos fundamental para um melhor entendimento dos mecanismos fisiopatolgicos das doenas inflamatrias crnicas e para o possvel desenvolvimento de formas mais eficazes de imunoterapia.

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Linfcitos T Citotxicos (CTL) Os LT CD8 reconhecem antgenos intracitoplasmticos apresentados por molculas MHC de classe I, que so expressas por praticamente todas as clulas nucleadas. Clulas infectadas por vrus e clulas tumorais normalmente so reconhecidas pelos LT CD8. Aps adeso s clulas alvo apresentando um antgeno associado ao MHC e coestmulo adequado, os LT CD8 proliferam e, em um encontro subsequente, podem eliminar por citotoxicidade qualquer clula que apresente esse antgeno especifico, independente da presena de molculas coestimulatrias. Os LT CD8 induzem a via de morte celular programada (apoptose) na clula alvo pela ao de perforinas e granzimas e tambm podem levar apoptose pela expresso do receptor Fas L (CD95) que interage com a molcula Fas nas clulas alvo. Linfcitos Uma pequena populao de LT perifricos possui TCR com diversidade limitada, composto por cadeias . Essas clulas so comumente encontradas nas primeiras linhas de defesa do organismo, como as barreiras mucosas e a pele, onde atuam como verdadeiras sentinelas de reconhecimento de padres moleculares, reconhecendo e apresentando antgenos, respondendo a eles e contribuindo tambm para ativao e proliferao de clulas do sistema imune. Essas clulas diferem dos LT , pois seu TCR pode reconhecer ant genos mesmo na ausncia de apresentao pela molcula de MHC, sendo ento consideradas verdadeiras sentinelas do organismo. Os LT apresentam tambm memria imunolgica, respondendo mais vigorosamente em um segundo encontro antignico. Os LT exercem suas funes efetoras de maneiras variadas, podendo, por exemplo, apresentar citotoxicidade (caracterstica primria de LTCD8). Estudos teraputicos tm explorado esta caracterstica citotxica contra antgenos tumorais. Os LT exercem tambm funo auxili adora liberando citocinas como INF- (Th1) ou IL-4 (Th2), podendo inclusive atuar como APCs eficientes, pois possuem alta capacidade de apresentar antgenos aos LT, mediando sua ativao e proliferao. Os LT so tambm capazes de ativar clulas dendr ticas e LB, ampliando assim tanto a resposta imune celular como humoral. Os LT trazem tona a discusso de um dos dogmas contemporneos da imunologia, a diviso do sistema imune em sistema inato e adaptativo. O sistema imune inato responde rapidamente ao reconhecer padres moleculares derivados de patgenos e capaz de induzir repostas imunes adaptativas pela liberao de citocinas e apresentao de antgenos. Em contraste, a reposta adaptativa age lentamente em um encontro antignico inicial, mas desenvolve memria imunolgica e responde rpida e vigorosamente em um encontro subsequente. Os LT podem ser includos em ambos os braos da resposta imune, uma vez que exercem tanto as funes de clulas da imunidade inata como da resposta adaptativa. Sua participao nos dois tipos de resposta sugere que essas clulas representam uma forma primitiva e conservada de imunidade. Linfcitos T Reguladores Vrias evidncias demonstram a importncia das diferentes populaes de LT reguladores na manuteno da autotolerncia imunolgica e no controle das respostas autoimunes. Assim, h grande interesse no estudo dessas clulas e de sua potencial aplicao no tratamento das doenas autoimunes. As clulas com funo imunorreguladora apresentam como caracterstica bsica a capacidade de produo de citocinas imunossupressoras, como IL-4, IL-10 e TGF-. Atuam em uma complexa rede de mecanismos reguladores destinados a assegurar a modulao das respostas imunolgicas frente aos diversos antgenos provenientes de agentes infecciosos, tumores, aloantgenos, autoantgenos e alrgenos. Entre os LT com funo + + reguladora esto os LT reguladores de ocorrncia natural (TREGS CD4 CD25 ), descritos por Sakaguchi et al (1995), os LTR1 que produzem IL-10 e suprimem o desenvolvimento de algumas respostas de LT in vivo, e os LTh3, capazes de impedir o desenvolvimento de enfermidades autoimunes mediante a produo de TGF-. Outros LT com funo + + + + reguladora so os LT , clulas CD8 Qa-1 , os LT CD8 CD28 (CD8 TR), as clulas NK/T e os LT duplo-negativos. Linfcitos T REGULADORES DE OCORRNCIA NATURAL - TREGs As clulas TREGS representam 5 a 10% do total de LT CD4 no sangue perifrico, podendo tambm ser isoladas diretamente do timo. As T REGS presentes no timo so clulas naive que, quando saem para a periferia, se tornam ativadas, adquirindo fentipo de memria. As TREGS apresentam altos nveis de CD25 (CD25 ou CD25 ) e expressam CD45RO, CD62L, CD122, HLA-DR, CD69, CD71 e o receptor para TNF induzido por glicocorticoides (GITR) entre outros. Expressam tambm o fator de transcrio Foxp3, encontrado predominantemente nas T REGS tmicas e perifricas, que parece ter grande
HIGH BRIGHT +

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importncia no desenvolvimento e funo das TREGS tanto em camundongos quanto em humanos. Pacientes com mutao no gene FOXP3 apresentam a sndrome denominada IPEX (Desregulao imune, Poliendocrinopatia, Enteropatia, Sndrome ligada ao X), um distrbio autoimune que afeta mltiplos rgos com desenvolvimento de alergia e doena inflamatria intestinal. Aparentemente esses pacientes tm comprometimento no desenvolvimento das TREGS e consequente defeito na funo supressora, levando a um estado de hiperativao de LT, que se tornam reativos contra autoantgenos, bactrias comensais do intestino ou antgenos ambientais incuos, desenvolvendo poliendocrinopatia autoimune, doena inflamatria intestinal ou alergia, respectivamente. H interesse no estudo dos LT reguladores por sua funo chave na manuteno dos mecanismos de autotolerncia e regulao da resposta imune. Alm dos distrbios autoimunes associados ausncia/deficincia de sua funo, existe interesse no seu estudo em situaes de exacerbao da resposta imunitria como nos transplantes, na doena do enxerto versus hospedeiro (GVHD), nos processos alrgicos e outras condies. Nessas situaes, uma abordagem teraputica seria estimular o nmero e a funo dessas clulas a partir da administrao de frmacos, citocinas, molculas coestimulatrias ou outros elementos que potencialmente atinjam esta finalidade. Linfcitos T Reguladores Duplo Negativos A maioria dos LTCD3+ TCR expressam tambm molculas CD4 ou CD8. Entretanto, uma nova subpopulao de LT reguladores com receptor TCR mas CD4 CD8 foi descrita por Strober et al, em 1989. Os LT duplo-negativos naturais perifricos com atividade supressora, denominados clulas T REG DN constituem uma subpopulao de clulas presentes em tecidos linfoides e no linfoides. Existem em pequeno nmero, representando 1% - 2% dos LT perifricos em humanos, podendo estar aumentados em algumas doenas autoimunes. As T REG DN produzem predominantemente INF-, TNF- e pequena quantidade de TGF- e so capazes de suprimir a reposta imune alognica e xenognica mediada por LT CD4+ e CD8+, assim como a resposta a antgenos prprios. O estmulo dos LTREG DN por antgenos especficos atravs do TCR importante para o desenvolvimento da atividade reguladora. Os LTREG DN so capazes de adquirir alopeptdeos a partir de complexos peptdeo-MHC de APCs e apresentar esses peptdeos na sua superfcie. Essa apresentao permite a interao especfica dos LT REG DN com LT efetores reativos ao aloantgeno, que aps esse contato progridem para morte celular, Similarmente aos LTREGs CD4+CD25+, a supresso pelos LTREG DN tambm requer o contato clula-clula. Na sndrome linfoproliferativa autoimune (ALPS) tipo Ia, os pacientes tm um acmulo de LT CD3+TCR DN na periferia como resultado de um defeito de apoptose. Acredita-se que o aumento do nmero de clulas DN nesses casos se deva perda das molculas CD4 e CD8 pelos LT senescentes que falham em morrer por apoptose. Neste caso especfico no h evidncia de que essas clulas tenham atividade reguladora.
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Dados recentes indicam que os LT REG DN podem estar aumentados em algumas doenas autoimunes, talvez como uma tentativa de controlar as clulas efetoras. A completa caracterizao dos LT REG DN humanos poder ter implicaes importantes no entendimento e tratamento de doenas autoimunes e na rejeio de transplantes. Linfcitos T Reguladores CD8+CD28As clulas caracterizadas imunofenotipicamente como CD8 CD28 reconhecem especificamente antgenos expressos principalmente por APCs em associao ao MHC de classe I, mas no so ativadas por carecerem do receptor CD28. Ao invs, suprimem a resposta proliferativa de LTCD4+ aloreativas nas imediaes. Este efeito supressor no mediado por citocinas, mas requer a interao clula-clula entre LTh CD4+, LT supressores + CD8 CD28 e APCs apresentando antgenos alogeneicos. O mecanismo de ao das clulas reguladoras CD8 CD28 no est completamente esclarecido e poucos estudos tm caracterizado a funo dessas clulas regulatrias in vitro. Clulas NK/T Praticamente todas as clulas que expressam TCR so restritas ao MHC, ou seja, reconhecem o antgeno apenas em associao a molculas do MHC prprio, e expressam co-receptores CD4 ou CD8. Uma pequena populao de LT expressa marcadores encontrados em clulas NK e so conhecidas como clulas NK/T, que parecem tambm ter papel importante na regulao da resposta imune. As clulas NK/T apresentam expresso de TCR com cadeias de diversidade limitada. Esse TCR reconhece lipdeos ligados a molculas no-polimrficas, denominadas CD1 e semelhantes ao MHC da classe I.
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As clulas NK/T parecem surgir do mesmo precursor que origina LT convencionais, mas so selecionadas positivamente aps interaes de alta avidez com glicolipdeos associados a molculas CD1d expressas por clulas epiteliais ou medulares do tecido tmico. Apesar do repertrio limitado, as clulas NK/T apresentam duas estratgias diferentes no reconhecimento de patgenos. A primeira, observada no reconhecimento de bactrias Gram-negativas, ocorre pela sinalizao de receptores do tipo Toll (TLR) pelo LPS. A segunda ocorre pelo reconhecimento especfico de glicosilceramidas presentes na parede celular bacteriana, apresentadas por CD1d. Essa ltima via de sinalizao assegura o reconhecimento de patgenos que no apresentam ligantes para TLRs em sua parede celular. Devido ao reconhecimento de glicolipdios conservados, tanto endgenos (iGbeta3) quanto exgenos, essas clulas esto envolvidas em respostas alrgicas, inflamatrias, tumorais e na autoimunidade, alm de participarem da regulao da resposta imune. Reaes Inflamatrias Em uma resposta inflamatria aguda, ou seja, inflamao aguda ocorre dois tipos de reaes que definem todas as variveis dessa resposta e sua exteriorizao do ponto de vista clnico (tanto do ponto de vista de sinais e sintomas como nos prprios sinais cardinais da inflamao). Essas respostas so definidas como vasculares e celulares. As reaes vasculares podem ser definidas em trs etapas: alteraes do fluxo e calibre, aumento da permeabilidade dos vasos e remodelao do sistema linftico. As alteraes do fluxo so causadas pelos seguintes mecanismos: vasodilatao por meio da ao de mediadores (histamina e NO) o que aumenta o fluxo sanguneo causando calor e rubor na regio; aumenta da permeabilidade, com posterior extravasamento de substncias; perda de fludos pelo transporte citado e consequente acmulo de hemcias na regio, culminando com uma estase sangunea (mais tumor, calor e rubor); a estase estimula e melhora as reaes celulares leucocitrias. O aumento da permeabilidade resulta de: contrao das clulas endoteliais por meio de mediadores qumicos (histamina); injria endotelial, resultando em necrose endotelial e desprendimento, por meio de injrias graves (por exemplo, queimadura) e pela destruio direta pelos neutrfilos; aumento na transcitose, com estimulao de organelas vesiculovaculares. As modificaes nos sistemas linfticos so geradas por meio da liberao de fatores de crescimento por clulas da regio inflamada, principalmente VEGF, que tem como funo diminuir o acmulo de lquido intersticial. As reaes celulares so dividas em: recrutamento, reconhecimento e remoo, sendo que todos esto relacionados aos linfcitos e neutrfilos. O recrutamento dividido em: marginao (a lentificao do fluxo sanguneo causa mudana da concentrao de leuccitos para a regio marginal, Figura 27 Reaes que ocorrem na microcirculao e nos vasos em geral em favorecendo a interao entre receptores e a clula); rolamento (inflamao uma inflamao aguda. causa aumento da expresso de molculas de adeso, as chamadas selectinas. Existem trs tipos de selectinas, E, L e P, que esto distribudos de modo diferente nas clulas. Ela promove uma ligao fraca que por sua vez diminui a velocidade da clula promovendo assim sua adeso posterior); adeso (por meio das integrinas, promovendo uma adeso mais forte ao endotlio e favorecendo a diapedese); diapedese (quimiocinas criam gradiente qumica que favorece passagem dos linfcitos por entre as clulas endoteliais. Vrias molculas participam do processo, como membros da superfamlia Ig ,PECAM-1 ou CD31, e molculas juncionais. Aps atravessar, atravessam membrana basal por colagenases e se movimentam por gradiente quimiottico. No tecido a enzima CD44 usada para fixar o leuccito na MEC); quimiotaxia (passagem de linfcitos para o tecido necessrio. As substncias que favorecem essa movimentao so: citocinas, complemento, LTB4 e peptdeos que contem um aminocido terminal N-formilmetionina e alguns lipdeos).

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Figura 28 Reaes celulares na inflamao aguda.

Aps o recrutamento deve ocorrer o reconhecimento. Essa etapa depende de uma srie de protenas receptoras, entre elas: Toll (TLRs): Receptores associados a cinases, os ligantes so produtos microbianos e sua ativao estimula produo de citocinas e microbicidas; Acoplados a protena G: Reconhece peptdeos bacterianos, quimiocinas, produtos do complemento e mediadores lipdicos. Induz a quimiotaxia e a produo de substncias microbicidas; Para Opsoninas: Receptores nos leuccitos, que reconhecem anticorpos (regio Fc), protenas do complemento e lectinas. Essa ligao induz a fagocitose; Para Citocinas: Reconhecem citocinas liberadas por outros agentes imunes. O IFN-gama o principal ativador de macrfagos.

Figura 29 Receptores envolvidos na resposta inflamatria.

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Esse reconhecimento promove a ativao leucocitria. Aps essa ativao diversas vias so iniciadas e levam aos processos de fagocitose e morte intracelular, os principais meios de eliminao dos micrbios e tecidos mortos. Entre os mecanismos de morte mais importantes est a fagocitose. Esse processo envolve trs etapas: Reconhecimento: ocorre por trs tipos de receptores na membrana dos fagcitos: Receptores de Manose que reconhecem estruturas da PC de bactrias, Receptores Scavenger (limpadores) que reconhecem LDL oxidada e alguns micrbios, e Receptores para opsoninas que so ativados por opsoninas (como a IgG). Englobamento: Aps a ligao da partcula ao receptor ocorre a emisso de pseudpodes que a envolvem formando um fagossoma intracelular. Morte e degradao: O fagossomo formado se funde a lisossomos, se tornando fagolisossomo, dentro do qual ocorre a morte e degradao dos micrbios e clulas necrticas. Essa morte causada por: Espcies Reativas de Oxignio, Espcies Reativas de Nitrognio e outras enzimas (elastase, defensina, arginina, catelicidina, lisozima e lactoferrina). Todas essas substncias esto nos lisossomos que se fundem ao fagossomo.

Figura 30 Fagocitose seus processos dentro da clula.

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