Cintica qumica

Para la reaccin N
2
O
4
(g) 2 NO
2
(g) , la velocidad de formacin de NO
2
, en cierto intervalo de tiempo,
vale 0,004 mol L
1
s
1
. Cunto vale, en ese intervalo, la velocidad de desaparicin de N
2
O
4
?

Dada la estequiometra de la reaccin, por cada mol de N
2
O
4
que desaparece, se forman 2 mol de NO
2
.

Es decir: [NO
2
] = 2 [N
2
O
4
]

[N
2
O
4
] 1 [NO
2

] 1 1 1 1 1 1

Por tanto, v
desap. (N2O4 ) = =

=
v
apar. (NO2 )
=


(0,004 mol L s ) = 0,002 mol L s .
t 2 t

2 2




1 la leja es una disolucin de hipoclorito de sodio, NaClO, en agua. Se descompone segn:
3 NaClO (aq) 2 NaCl (aq) + NaClO
3
(aq)

A temperatura ambiente, la reaccin es muy lenta, pero cuando se calienta a 80 C, la velocidad de
formacin de NaCl es de 2,8 mol L
1
min
1
. Calcula la velocidad de desaparicin de NaClO y la
velocidad nica de reaccin.

De acuerdo con la estequiometra de la reaccin, se forman 2 mol de NaCl por cada 3 mol de NaClO que
desaparecen. Es decir,
[NaCl] =
2

[NaClO]

3

Por tanto:


v
desaparicin NaClO
=

[NaClO]
=
3 [NaCl]
=
3

v
aparicin NaCl
=

3
2,8 (mol L

1
min

1
) = 4,2 mol L

1
min

1


t 2

2

t 2

La velocidad nica de reaccin es:



1 [NaClO]

1 [NaCl]

1 1

1 1

1

v =

=

= 4,2 (mol L min ) = 1,4 mol L min

3 t 2 t 3



2 La azida de sodio, NaN3, se utiliza en los airbags. Aunque es estable a temperatura ambiente, por
en-cima de los 275 C, se descompone segn la reaccin:
3
2

N
2
(g)

La reaccin es tan rpida que en 40 milisegundos se descompone un mol de NaN3, produciendo unos
35 L de gas N2, que infla la bolsa del airbag. Calcula la velocidad media de aparicin de nitrgeno.

Expresada en litros de nitrgeno producidos por segundo, la velocidad de aparicin de N2 resulta:
v
aparicin N
2

=
V
N

2
=
35 (L)
= 875 L s

1

t
4 10

2

(s)




3 Algunos fuegos artificiales emiten una luz muy brillante debido a la combustin de magnesio metlico.
Tiene importancia el tamao de las piezas de magnesio utilizadas? Qu ocurrira si se
utilizaran pie-zas grandes?

Si las piezas de magnesio fueran muy grandes, el rea superficial en contacto con el oxgeno sera muy
pequea y, en consecuencia, la velocidad de la reaccin de combustin sera demasiado pequea, por lo que
no se observara emisin de luz.







4 El N2O, conocido como gas de la risa, es inestable y se descompone en sus elementos:
2 N
2
O (g) 2 N
2
(g) + O
2
(g)

Dado que el N
2
O proporciona un mol de O
2
por cada 2 moles de N
2
; mientras que el aire solo proporcio-
na un mol de O
2
por cada 4 moles de N
2
, una vela arde brillantemente en su seno. Sin embargo, como ya
observ J. Priestly en 1771, un ratn no puede vivir en este gas. Explica por qu.

A temperatura ambiente, la velocidad de descomposicin de N2 O en N2 (g) y O2 (g) es extremadamente baja.
Por tanto, la cantidad de oxgeno presente en un recipiente lleno de N2O es despreciable.

5 El azcar se oxida en las clulas del cuerpo a 37 C. Sin embargo, fuera del cuerpo, dicha reaccin
solo ocurre a temperaturas superiores a 600 C. Cmo se puede explicar esta diferencia?

La energa de activacin, Ea, de la reaccin de oxidacin de la glucosa es muy alta. Por ello, en ausencia de un
catalizador, se necesitan temperaturas muy altas para que transcurra a una velocidad apreciable. Sin embargo,
en presencia de un catalizador adecuado que proporcione un camino de reaccin con una energa de activacin
baja, Ea

, la reaccin transcurre a un velocidad alta incluso a la temperatura baja del cuerpo humano.



6 La hemoglobina (Hb) en la sangre se une al oxgeno formando oxihemoglobina (HbO2), que
transporta el oxgeno a los tejidos del cuerpo. La reaccin correspondiente:
Hb (aq) + O
2
(aq) HbO
2
(aq)

es de primer orden con respecto a la hemoglobina y de primer orden con respecto al oxgeno disuelto,
con una constante de velocidad igual a 410
7
L mol
1
s
1
. Calcula la velocidad inicial con la que la
hemoglobina se unir al oxgeno si la concentracin de hemoglobina es 2,510
9
mol L
1
y la de oxgeno
es 4,010
5
mol L
1
.
La reaccin es de primer orden respecto a ambos reactivos, por lo que la ley de velocidad es: v = k [Hb][O
2

] Sustituyendo los valores dados de las concentraciones y de la constante de velocidad, se obtiene:
v = k [Hb][O
2
] = 4 10
7
(L mol

1
s

1
) 2,5 10

9
(molL

1
) 4,0 10

5
(mol L

1
) = 4 10

6
molL

1
s

1



7 La ley de velocidad determinada experimentalmente para cierta reaccin es: v = k [A]
2
[B] . Explica
qu pasa con la velocidad de dicha reaccin cuando:
a) Se triplica la concentracin de A.

b) Se reduce a la mitad la concentracin de A.

c) Se duplica la concentracin de B.

Segn la ecuacin de velocidad determinada experimentalmente, la velocidad es proporcional al cuadrado de la
concentracin del reactivo A. Por tanto,

a) Si triplicamos la concentracin de A, manteniendo constante la de B, la velocidad se multiplica por 3
2
= 9.

| 1 |
2
1

b) Si la concentracin de A se reduce a la mitad, la velocidad se multiplica por | = , esto es, la velocidad

2 4

\ .

se reduce a la cuarta parte.
La velocidad es directamente proporcional a la concentracin del reactivo B. Por tanto,

c) Si duplicamos la concentracin de B, manteniendo constante la de A, la velocidad se duplica.







8 Entre las sustancias utilizadas en la guerra qumica, el fosgeno (COCl
2
) es el responsable del
mayor nmero de muertes. Se produce a partir del CO y Cl2:
CO (g) + Cl
2
(g) COCl
2
(g)

a) Determina la ley de velocidad para la reaccin a partir de los datos de la tabla.

Concentracin inicial (mol L
1
) Velocidad inicial de formacin
[CO] [Cl2] de COCl2 (mol L
1
s
1
)
0,12 0,20 0,121
0,24 0,20 0,241
0,24 0,40 0,682


b) Calcula la constante de velocidad, k.

a) En principio, esperamos que la ley de velocidad sea de la forma:

v = k [CO]
m
[Cl
2
]
n


Dividiendo el valor de la velocidad, v2, de la experiencia 2 por el correspondiente a la experiencia 1, v1:
v
2
k [CO]
m
2
[Cl
2
]
n
2 0,241 k (0,24)
m
(0,20)
n
| 0,24 |
m

m


= m n ; = m n ; 2 = | ; 2 = 2 ; m = 1 (orden 1 respecto a CO)

v

0,121 0,12

1
k [CO] [Cl ] k (0,12) (0,20) \ .
1 2 1


Dividiendo el valor de la velocidad, v3, de la experiencia 3 por el correspondiente a la experiencia 2, v2:
v
3
k [CO]
m
3
[Cl
2

]
n
3 0,682 k (0,24)(0,40)
n
| 0,40 |
n

n 3 3


= m n ; = n ; 2,83 = | ; 2,83 = 2 ; n =

(orden
2
respecto a Cl2)

v

0,241 0,20 2

2
k [CO]
2
[Cl ]
2
k (0,24)(0,20) \ .

2


La ley de velocidad es:
v = k [CO][Cl
2
]
3

2


b) Despejando k, y sustituyendo los datos de cualquier experiencia:
v
1
0,121(molL

1
s

1
)
3 2 3 2

1
k =

=

= 11L mol s

[CO]
3 2 1
) 0,20
3 2 1 3 2
[Cl ] 0,12 (molL (mol L )
1 2 1


9 Uno de los principales irritantes oculares del esmog es el formaldehdo, CH2O, que se forma en
la reaccin:
C
2
H
4
(g) + O
3
(g) 2 CH
2
O (g) +
2
1
O
2
(g)

a) Determina la ley de velocidad para la reaccin.

b) Determina la constante de velocidad, k.

c) Calcula la velocidad de reaccin cuando [C2H4] y [O3] son ambas 3,0 10
7
mol L
1
.

Concentracin inicial (mol L
1
) Velocidad inicial de formacin
[C2H4] [O3] de CH2O (mol L
1
s
1
)
0,5 10
7
1,0 10
8
1,0 10
12

1,5 10
7
1,0 10
8
3,0 10
12

1,0 10
7
2,0 10
8
4,0 10
12












a) En principio, esperamos que la ley de velocidad sea de la forma: v = k [C
2
H
4
]
m
[O
3
]
n


Dividiendo el valor de la velocidad, v2, de la experiencia 2 por el correspondiente a la experiencia 1, v1, y de
acuerdo con la ley de velocidad, resulta:
v
2
k [C
2
H
4

]
m
2
[O
3
]
n
2
3,0 10

12
k (1,5 10

7
)
m
(1,0 10

8
)
n

| 1,5 |
m

m


=

m

n ; 12
=


; 3 = | ; 3 = 3 ; m = 1 . Orden 1 en C2H4.

v

[O 1,0 10 k (0,5 10
7 m
10
8 n
0,5

1
k [C H ] ] ) (1,0 ) \ .
2 4 1 3 1


Dividiendo el valor de la velocidad de la experiencia 3, v3, por el correspondiente a la experiencia 1, v1, y de
acuerdo con la ley de velocidad, resulta:
v
3

=
k [C
2
H
4
]
m
3 [O
3
]
n
3
4,0 10

12
k (1,0 10

7
)(2,0 10

8
)
n

n n



m

n ;

=

; 4 = 2 2 ; 2 = 2 ; n = 1 . Orden 1 en el reactivo O3.

v

[O 1,0 10
12
k (0,5 10
7
)(1,0 10
8 n
1
k [C H ] ] )
2 4 1 3 1

Por tanto, la ley de velocidad es: v = k [C
2
H
4
][O
3
] .

b) Despejando k, y sustituyendo los datos de cualquier experiencia:

k =
v
1

=
1,0 10

12
(molL

1
s

1
)
= 2,0 10
3
mol

1
L s

1

[C
2
H
4
]
1
[O
3
]
1
0,5 10

7
(molL

1
) 1,0 10

8
(mol L

1
)




c) Sustituyendo en la ecuacin cintica: v = k [C
2
H
4
][O
3
]; v = 2 10
3
(3 10

7
)
2
= 1,8 10

10
molL

1
s

1



10 La siguiente reaccin est implicada en la formacin del esmog que contamina el aire:
NO (g) + O
3
(g) NO
2
(g) + O
2
(g)

Se ha comprobado que esta reaccin es de primer orden con respecto a ambos reactivos, el ozono y el
NO, y su constante de velocidad es 1,2 10
7
L mol
1
s
1
.
Calcula la concentracin de NO
2
formada por segundo en un aire contaminado en el cual la concen-
tracin de O
3
es 1,6 10
8
mol L
1
, y la de NO, 2,6 10
8
mol L
1
.

Dado que la reaccin es de primer orden con respecto a los dos reactivos, la ecuacin de velocidad viene dada
por la expresin:
v = k [NO][O
3

] Sustituyendo los valores en la ley de velocidad, se obtiene:

v = k [NO][O
3
]; v = 1,2 10
7
(mol

1
L s

1
) 2,6 10

8
(molL

1
) 1,6 10

8
(molL

1
) = 5,0 10

9
molL

1
s

1



11 Cuando se estudian reacciones gaseosas, tales como las que ocurren en la atmsfera, los qumicos
sue-len expresar la velocidad en trminos de presin.

a) Cmo se expresa la ley general de velocidad en trminos de presin?

b) Si una velocidad de reaccin tiene unidades de torr s
-1
, cules son las unidades de k para una
reaccin de primer orden? Y para una de segundo orden?

a) Sustituyendo en la ley de velocidad las concentraciones de los reactivos, elevadas a su orden de reaccin
respectivo, por sus presiones parciales, se obtiene la expresin:
v = k (p
A
)
m
(p
B
)
n

b) Para una reaccin de primer orden, v = k p . Despejando la constante de velocidad, resulta: k =
v
. En
p



v unidades
torr s

1

1


consecuencia, las unidades de k, cuando la presin se mide en torr, son: k = torr = s

p

Para una reaccin de segundo orden, v = k p
2
. Despejando la constante de velocidad, resulta: k =
v
. As,
p
2



v unidades torr s

1
1 1

las unidades de k, cuando la presin se mide en torr, son: k =



torr
2
=

torr

s

p
2






12 La ley de velocidad para la reaccin global:
2 NO
2
Cl (g) 2 NO
2
(g) + Cl
2
(g)

es de primer orden en el cloruro de nitrilo: v = k [NO
2
Cl] . Explica por qu su mecanismo no puede ser
la simple reaccin elemental 2 NO
2
Cl (g) 2 NO
2
(g) + Cl
2
(g) .

En una reaccin elemental, los exponentes de la ley de velocidad coinciden con los coeficientes de la
ecuacin correspondiente a la etapa elemental; es decir, el orden de la reaccin coincide con la mole-
cularidad. Por tanto, si la reaccin dada fuese elemental, la ley de velocidad debera ser:
v = k [NO
2
]
2


Es decir, la reaccin debera ser de segundo orden. Dado que la ecuacin de velocidad experimental es de
primer orden, la reaccin no puede ser elemental.

13 El bromuro de nitrilo se descompone en dixido de nitrgeno y bromo:
2 NO
2
Br (g) 2 NO
2
(g) + Br
2
(g)

El mecanismo propuesto es:
(1) NO
2
Br (g) NO
2
(g) + Br (g) (lenta)
(2) NO
2
Br (g) + Br (g) NO
2
(g) + Br
2
(g) (rpida)

Escribe la ley de velocidad predicha para este mecanismo.

La etapa ms lenta del mecanismo es la determinante de la velocidad. En este caso, por tanto, la velocidad
viene determinada por la etapa primera. Como las etapas de un mecanismo son reacciones elementales, la
molecularidad de una etapa coincide con el orden. Por tanto, la ley de velocidad de la reaccin dada es:
v = k [NO
2
Br]


14 Los envenenadores han utilizado mucho las sales de talio (I), para deshacerse de sus vctimas,
tanto en la realidad como en la ficcin. En disolucin acuosa, el ion cerio (IV) oxida al talio (I).
Los pasos elementales, en presencia de Mn (II) son:

Ce
4+
+ Mn
2+
Ce
3+
+ Mn
3+
(lenta)
Ce
4+
+ Mn
3+
Ce
3+
+ Mn
4+
(rpida)
Tl
+
+ Mn
4+
Tl
3+
+ Mn
2+
(rpida)
a) Escribe la ecuacin de la reaccin qumica global.

b) Identifica el catalizador y los intermediarios.

c) Qu distingue a un catalizador de un intermediario?

d) Deduce la ley de velocidad.

a) Sumando las tres etapas de que consta el mecanismo, la reaccin global de la reaccin resulta:

Tl
+
+ 2 Ce
4+
Tl
3+
+ 2 Ce
3+


b) El ion Mn
2+
acta como catalizador. Los iones Mn
3+
y Mn
4+
son intermediarios de reaccin.
c) Un catalizador se consume en una etapa del mecanismo y se regenera en una etapa posterior. Un
intermediario de reaccin se produce en una etapa y se consume en otra etapa posterior.

d) La primera etapa del mecanismo, por ser la ms lenta, determina la velocidad de la reaccin. Por tanto, y
dado que las etapas son reacciones elementales, la ley de velocidad es:

v = k [Ce
4+
][Mn
2+
]



15 Un mecanismo posible para la descomposicin del perxido de hidrgeno en disolucin acuosa es:

H
2
O
2
(aq) + Br

(aq) BrO

(aq) + H
2
O (l)
H
2
O
2
(aq) + BrO

(aq) Br

(aq) + H
2
O (l) + O
2
(g)
Cul es la ecuacin de la reaccin global? Qu especie est actuando como un catalizador? Hay
algn intermediario de la reaccin?

Sumando las dos etapas de que consta el mecanismo, la reaccin global de la reaccin resulta:
2 H
2
O
2
(aq) H
2
O (l) + O
2
(g)

El Br

acta como catalizador, ya que se consume en una etapa del mecanismo y se regenera en otra posterior.
El BrO

es un intermediario de la reaccin, ya que se produce en una etapa y se consume en otra posterior.

16 La reaccin entre el ozono y el dixido de nitrgeno
2 NO
2
(g) + O
3
(g) N
2
O
5
(g) + O
2
(g)

tiene la ley de velocidad experimental v = k [NO
2
][O
3
] . Durante la reaccin se ha podido detectar la
presencia de NO
3
como especie intermedia. Propn un mecanismo factible para la reaccin.

Para que el mecanismo sea compatible con la ley de velocidad experimental, la etapa lenta debe ser un proceso
bimolecular que implique la colisin de una molcula de NO2 con otra de O3. Un mecanismo posible es:
Etapa 1: NO
2
(g) + O
3
(g) NO
3
(g) + O
2
(g) (lenta)
Etapa 2: NO
2
(g) + NO
3
(g) N
2
O
5
(g) (rpida)
Es importante resaltar que la ley de velocidad deducida a partir del mecanismo propuesto debe coincidir con la
ley de velocidad observada, pero esto no prueba que el mecanismo propuesto sea el correcto: puede ocurrir que
algn otro mecanismo conduzca a la misma ecuacin de velocidad. Los datos cinticos pueden apoyar un
mecanismo y descartar otros; nunca probar que un mecanismo dado es el correcto.


17 La sntesis de la urea, (NH2)2CO, por calentamiento del cianato de amonio, NH4OCN, disuelto en
agua:
NH
4
OCN (NH
2
)
2
CO

realizada en 1828, se considera un hito en la historia de la Qumica. Un mecanismo propuesto es:
(1) NH
+
+ OCN

k
1

NH + HOCN (rpida, en equilibrio)

4 3

k
1

(2)
k2

NH
3
+ HOCN (NH
2
)
2
CO (lenta)

Cul es la ley de velocidad predicha para este mecanismo? (En equilibrio significa que la velocidad de
la reaccin directa es igual a la de la reaccin inversa.)

La velocidad de la reaccin viene determinada por la etapa 2, ya que es el paso lento del mecanismo. Por tanto:
v = k
2
[NH
3
][HOCN]

Como el NH3 y el HOCN son intermediarios de la reaccin, debemos expresar sus concentraciones en trminos
de las concentraciones de los reactivos. La velocidad de la etapa 1, en el sentido de izquierda a derecha, es:
v
1
= k
1
[NH
+
4
][OCN

]

Y la velocidad de la reaccin en el sentido de derecha a izquierda, viene dada por la
expresin: v1
= k1
[NH
3
][HOCN]
Dado que la etapa 1 alcanza el equilibrio, la velocidad debe ser la misma en los dos sentidos ( v
1
= v1
):
+
] = k [NH ][HOCN] [NH ][HOCN] =
k
1
[NH
4
+
][OCN

]
k [NH ][OCN
14 13 3
k
1


Sustituyendo en la expresin de velocidad anterior, se obtiene: v =
k
2
k
1 +

[NH ][OCN ]

k
1
4





CATLISIS

1 Indica, razonadamente, cul o cules de las afirmaciones siguientes sobre catalizadores son
ciertas:

a) Un catalizador heterogneo acta mediante la unin de una o ms de las molculas que sufren la
reaccin a la superficie del catalizador.

b) Las enzimas son protenas que se encuentran de forma natural en los sistemas biolgicos y que
actan en ellos como un catalizador.

c) Un catalizador cambia la va de una reaccin de modo que la reaccin se hace ms exotrmica.

a) Cierto. El mecanismo ms comn de la catlisis heterognea se basa en la adsorcin de las molculas
reaccionantes (generalmente, gases) en la superficie del catalizador (generalmente, un slido).

b) Cierto. Se denominan enzimas a los catalizadores de las reacciones que tienen lugar en los sistemas
biolgicos, siendo protenas desde el punto de vista qumico.

c) Falso. La presencia de un catalizador positivo suministra un camino de reaccin con una energa de
activacin menor, lo que se traduce en un aumento de la velocidad de reaccin. El catalizador aumenta
tanto la velocidad de la reaccin directa como la de la reaccin inversa, de modo que el estado de
equilibrio se alcanza antes, pero las magnitudes termodinmicas, tales como H, no se ven afectadas.


2 Dos reacciones tienen idnticos valores de la energa de activacin, Ea. Asegura esto que las
dos reacciones tengan el mismo valor de la constante de velocidad, k, cuando se lleven a cabo a
la misma temperatura?


E
a
No, ya que, de acuerdo con la ecuacin de Arrhenius, k = A e
R T
, la constante de velocidad, k, depende de
la energa de activacin y de la temperatura y, adems, del parmetro A (factor de frecuencia).


3 Considerando que se necesita muy poca energa para convertir el grafito en diamante, cmo se
explica la gran dificultad para conseguir dicha conversin?

La energa de activacin es muy alta, lo que se traduce en una velocidad de reaccin muy pequea.


4 Una manzana magullada se pudre, a temperatura ambiente (20 C), en aproximadamente 4 das.
Si se mantiene refrigerada a 0 C, la misma extensin de putrefaccin ocurre en 16 das. Cul
es la energa de activacin para la reaccin de putrefaccin?
Dato. R = 8,314 J K
-1
mol
-1


De acuerdo con la ecuacin de Arrhenius:

E
a
k = A e
R T


Tomando logaritmos neperianos, nos queda:

lnk = ln A
E
a

R T

Si utilizamos los subndices 1 y
respectivamente, y dado que A, Ea y

2 para referirnos a las dos temperaturas dadas, 0 C y 20 C, R son
constantes, obtenemos:
lnk
1
= ln A
E
a

lnk
2
= ln A
E
a


R T
1
R T
2



Restando las dos ecuaciones anteriores, resulta:

E
a
| E
a
| k
2
E
a
| 1 1 |
lnk

lnk

=



| ln

=

|
R T R T k

T T

2 1 |
1
R

|
2 \ 1 . \ 1 2 .





Las velocidades son proporcionales a los valores de la constante de velocidad. Por otra parte, la velocidad de
una reaccin es inversamente proporcional al tiempo que tarda en producirse. En consecuencia:

k 2
=
v 2
=
4 (das

1
)
= 4



k
1
v
1
16 (das

1
)




E
a

|
1

1
|
E
a


4

1


|
ln 4 =





|
=


2,5 10 (K )
8,314 (Jmol
1
K
1
273 (K)

8,314 (Jmol
1
K
1
)

) \ 293(K) .

E
a
= 4,60 10
4
Jmol

1
= 46 kJmol

1



En la ecuacin de Arrhenius, la temperatura debe expresarse en la escala absoluta (es decir, en grados Kelvin).


5 Las enzimas del hgado catalizan un gran nmero de reacciones que degradan sustancias txicas.
Por qu factor cambia la velocidad de una reaccin de detoxificacin para la cual las enzimas del hgado
disminuyen su energa de activacin en 18 kJ a 37 C?
Dato. R = 8,314 J K
-1
mol
-1


Utilicemos el smbolo prima (') para referirnos a los valores correspondientes a la reaccin catalizada. La velo-
cidad de reaccin, v, es proporcional a la constante de velocidad, k, de la ecuacin de Arrhenius:

E



a
E
a
E
v
=
k
=

A e
R T

a

= e
R T


Ea

v k
A e

R T



De acuerdo con el enunciado, la energa de activacin de la reaccin catalizada por las enzimas del hgado es 18
kJ mol
1
menos que la de la energa sin catalizar, es decir, E E = 18 kJmol

1
para una temperatura T = 310 K.
a a
Sustituyendo valores en la ecuacin anterior, se obtiene:

E

E
18 000 (Jmol

1
)

k

a a


=

e
8,314 (JK

1
mol

1
)310 (K )
=

1,1
10
3

= e R T

k


Es decir, la velocidad de la reaccin catalizada es 1,1 10
3
veces mayor que la de la reaccin sin catalizar.


6 A 20 C, la leche fresca (no pasteurizada) se agria en 9 horas, pero si se mantiene en la nevera a 5
C, tarda en estropearse 48 horas. Calcula la energa de activacin para el proceso de deterioro de
la leche fresca.
Dato. R = 8,314 J K
-1
mol
-1


E
a
De acuerdo con la ecuacin de Arrhenius, k = A e
R T
.
Tomando logaritmos neperianos, nos queda: lnk = ln A
E
a

R T

Utilizamos los subndices 1 y 2 para referirnos a las dos temperaturas dadas, 5 C y 20 C, respectivamente:
lnk
1
= ln A
E
a

lnk
2
= ln A
E
a


R T
1
R T
2



E
a
| E
a
| k
2
E
a
| 1 1 |
lnk

lnk

=



| ln

=

|

R T R T k

T T

2 1 |
1
R

|
2 \ 1 . \ 1 2 .

Las velocidades son proporcionales a los valores de la constante de velocidad. Por otra parte, la velocidad de
una reaccin es inversamente proporcional al tiempo que tarda en producirse. En consecuencia:

k
2
v
2
9 (h

1
)
48 | 48 | E
a
| 1

1 |
= 7,6 10
4
Jmol

1
= 76 kJmol

1

= =

= ; ln | =

| ; E
a


1

1 1

k
1
v
1
48 (h ) 9 \ 9 . 8,314 (Jmol K

278 (K)
|
) \ 293 (K) .





7 Se ha estudiado la hidrlisis de la urea catalizada por la enzima ureasa:

H
2
N CO NH
2
+ H
2
O
ureasa
2 NH
3
+ CO
2


y se ha observado que, a 21 C, la energa de activacin para la reaccin catalizada y sin catalizar es,
respectivamente, 43,9 y 134 kJ mol
-1
. En qu factor aumenta la ureasa la velocidad de hidrlisis de la
urea?
Dato. R = 8,314 J K
-1
mol
-1


Con el smbolo prima (') definimos los valores correspondientes a la reaccin catalizada. Como la velocidad
de reaccin, v, es proporcional a la constante de velocidad, k, de la ecuacin de Arrhenius, se obtiene:
E



a
E
a
E
v
=
k
=
A e
R T
a

= e
R T



Ea

v k
A e

R T



De acuerdo con el enunciado, la diferencia de energa de activacin de la reaccin catalizada y de la reaccin
sin catalizar es E
a
E = 134 000 (kJmol

1
) 43 900 (kJmol

1
) para una temperatura T = 294 K. Sustituyendo

a
valores en la ecuacin anterior, se obtiene:

E
a
E
134 000 (Jmol

1
) 43 900 (Jmol

1
)

k
a
8,314 (JK

1
mol

1
)294 (K )

16 R T
k = e = e = 1,0 10

Es decir, la velocidad de la reaccin catalizada es 10
16
veces mayor que la de la reaccin sin catalizar.


8 La energa de activacin para la descomposicin del perxido de hidrgeno:
2 H
2
O
2
(aq) 2 H
2
O (l) + O
2
(g)

es 42 kJ mol
-1
; en cambio, cuando la reaccin est catalizada por la enzima catalasa, vale 7,0 kJ mol
-1
.
Calcula a qu temperatura la velocidad de la reaccin sin catalizar es igual a la velocidad de la
reaccin, a 20 C, catalizada por la catalasa. Se supone que el factor de frecuencia es el mismo en
ambos casos.

De acuerdo con la ecuacin de Arrhenius, a 20 C:


E
a, cat

E
a, cat

k
cat, 293 K
=

A e


R T
= A e R(293 K )
La constante de velocidad de la reaccin sin catalizar es:



E
a, no cat

k
no cat, T
= A e
R T
.




Las velocidades sern iguales cuando las constantes de equilibrio sean iguales. Por tanto:

E
a, cat
E
a, no cat E
a, cat
E
a, no cat
k
cat, 293 K
=

k
no cat, T

A e

= A e

R(293 K )
R T

=


293 (K) T



Despejando T y sustituyendo los valores de la energa de activacin para la reaccin catalizada y sin catalizar:
T

=

293 (K)

E
a, no cat
=

293 (K)
42 (kJmol

1
)
=

1,8

10
3
K

7,0 (kJmol

1
)



E
a, cat
9 Muchas reacciones que implican catlisis heterognea son de orden cero. Un ejemplo es la
descom-posicin de la fosfina (PH3, un gas muy txico utilizado como fumigante) en presencia de
tungsteno, a presin suficientemente alta:
4 PH
3
(g)
W
P
4
(g) + 6 H
2
(g)

Cmo puede explicarse que la velocidad de la reaccin no dependa en absoluto de la concentracin de
la sustancia que se descompone?

En la catlisis heterognea, la velocidad est determinada por el rea de la superficie del catalizador, y no por las
concentraciones o presiones de los reactivos.

10 Dos reacciones similares tienen la misma constante de velocidad a 25 C, pero a 35 C, una de las
reacciones tiene una constante de velocidad mayor que la otra.

a) Da una explicacin a este hecho.

b) Cul de las dos reacciones tiene una energa de activacin ms alta?

a) La constante de velocidad depende de varios factores: el factor de frecuencia (A), la energa de activacin
(Ea) y la temperatura (T), de acuerdo con la ecuacin de Arrhenius, k = A e

E
a


R T .


E
a1
E
a2

A 25 C, k
1
= k
2
A
1
e
R T
= A
2
e
R T
; pero esto no requiere que A1 = A2 ni que Ea1 = Ea2, de modo que a

E
a1
E
a2

una T distinta de 25 C la coincidencia casual de k1 = k2 ya no se produce: A
1
e

R T

A2

e

R T


b) Tomando logaritmos neperianos, la ecuacin de Arrhenius puede escribirse como: lnk = ln A
E
a
| 1 |


|

R

\ T .

| 1 |
es una lnea recta, de
Esta expresin indica que la grfica obtenida al representar ln k frente a

|


\ T .

pendiente
E
R
a
, lo que revela que cuanto mayor sea la energa de activacin, Ea, ms sensible es la cons-

tante de velocidad, k, a los cambios de temperatura. As, de las dos reacciones dadas, la de mayor energa
de activacin experimentar un mayor aumento de la constante k al elevar la temperatura.


11 El perxido de benzolo, la sustancia ms utilizada contra el acn, se descompone siguiendo una
cintica de primer orden con una semivida de 9,810
3
das cuando se refrigera. En cunto tiempo
pierde el 5% de su potencia?

La ecuacin integrada de velocidad para una reaccin de primer orden es: [A] = [A]
0
e

k t
,
donde la constante de velocidad, k, est relacionada con la semivida, t
1/2
, por la expresin:
k

=

ln 2

t
1 2
Se pierde el 5% de potencia cuando la concentracin de perxido de benzolo haya disminuido un 5%, es decir,
cuando su concentracin sea un 95% de la inicial: [A] = 0,95 [A]
0
.
Sustituyendo en la ecuacin integrada de velocidad, se tiene: [A] = 0,95 [A] = [A] e

k t
0,95 = e

k t


0 0

Tomando logaritmos y expresando k en funcin de la semivida: ln 0,95 = k t

t

=

ln 0,95
=

ln 0,95
t



k ln 2
1 2


Sustituyendo el valor dado de la semivida, resulta: t =
ln 0,95
t
1 2
=
ln 0,95 9,8 10
3
(das) = 7,3 10
2
das

ln 2 ln 2








12 Un bioqumico estudia la descomposicin del insecticida DDT en el suelo y encuentra que decae
en una reaccin de primer orden, con una semivida de 12 aos.

Cunto tiempo debe transcurrir para que el DDT en una muestra del suelo disminuya desde 550
ppbm a 20 ppbm? (ppbm significa partes por billn en masa.)

La ecuacin integrada de velocidad para una reaccin de primer orden es: [A] = [A]
0
e

k t


Despejando el tiempo y expresando la constante de velocidad, k, en funcin de la semivida, t1/2, resulta:

| [A] |

k t

t

=

ln[A]
0

ln[A]

=

ln
0
|


[A]

ln[A] = ln[A]
\ .
=

0
k

k




|[A]
0
| | 550 |

ln
[A]
| ln |
\ .
t
1 2
; t =
\ 20 .
12 (aos) = 57 aos

ln 2 ln 2





13 La aspirina se descompone en el cuerpo en un proceso de primer orden. La semivida de la
aspirina en personas adultas es de 3,7 horas. Calcula cunta aspirina permanece en el torrente
sanguneo des-pus de 24 horas, a partir de una dosis de 160 mg.

Puesto que la masa es proporcional a la concentracin, la ecuacin integrada de velocidad para una reaccin
de primer orden, [A] = [A]
0
e

k t
, puede expresarse en trminos de masa como: m = m
0
e

k t
.

| ln2 |

| t

t |
Expresando la constante de velocidad, k, en funcin de la semivida, t1/2, resulta: m = m e
\
1 2 .
0

Sustituyendo valores, se obtiene: m = 160 (mg) e

| ln2 |

24 (h)
= 1,78 mg


\

.
|


3,7 (h)



14 El cisplatino, Pt(NH
3
)
2
Cl
2
, utilizado en quimioterapia, reacciona con el agua:

Pt(NH
3
)
2
Cl
2
+ H
2
O [Pt(NH
3
)
2
(H
2
O)Cl]
+
+ Cl

Supn que la concentracin de cisplatino en el torrente sanguneo de un paciente es 4,7310
4
mol L
-
1
. Calcula cul ser la concentracin 24 horas ms tarde, sabiendo que la reaccin es de primer orden
con k = 1,87 10
3
min
1
.
La ecuacin integrada de velocidad para una reaccin de primer orden es: [A] = [A]
0
e

k t


Sustituyendo valores, se obtiene: [A] = 4,73 10

4
(mol L

1
) e

1,87

10

3

(min

1)

24

60(min)
= 3,20 10

5
mol L

1



15 El yodo131 se utiliza para tratar tumores en el tiroides. Su semivida es de 8,1 das. Si un
paciente ingiere una muestra que contiene 5,00 mg de I131, cunto tiempo ser necesario
para que solo que-de el 25% de este istopo en el paciente?

Puesto que la masa es proporcional a la concentracin, la ecuacin integrada de velocidad para una reaccin
de primer orden, [A] = [A]
0
e

k t
, puede expresarse en trminos de masa como: m = m
0
e

k t
.

Despejando t en la ecuacin anterior y expresando la constante k en funcin de la semivida, t1/2, se obtiene:

|m
0
|



k t

t

=

lnm
0

lnm

ln |
lnm = lnm
0
=
\ m .
=
k


k




|m |

ln 0 |
\ m .
t

ln 2
1 2


Sustituyendo el valor de la semivida del I131, el tiempo para el cual m = 0,25 m0, es decir, el tiempo para el
cual la masa se ha reducido a un 25% del valor inicial, resulta:
|m | |
m
0
|


ln
0 ln |
t =
\

m .
|

t
1 2
= \

0,25 m0 .
|

8,1(das) = 16,2 das

ln 2


ln 2










16 La descomposicin del
14
C es de primer orden y su semivida vale 5770 aos. Mientras vive una
planta o un animal, tiene una cantidad constante de
14
C en sus molculas. Cuando el organismo
muere, el conte-nido de
14
C disminuye por descomposicin radiactiva, y puede estimarse la edad
de un organismo antiguo midiendo el contenido residual de
14
C.
Si se encontr que el contenido de
14
C de una rama de ciprs obtenida en la tumba de Sneferu, un rey del
Antiguo Egipto, era el 52,9% del correspondiente a los rboles vivos, cul es la edad de la rama?

La ecuacin integrada de velocidad para una reaccin de primer orden en trminos de masa es:

m = m
0
e

k t


Despejando t en la ecuacin anterior y expresando la constante k en funcin de la semivida, t1/2, se obtiene:

|m |


lnm
0
lnm
ln 0 |
lnm = lnm
0
k t t = =
\ m .
=
k

k




|m |

ln 0 |
\ m .
t

ln 2
1 2


Sustituyendo el valor de la semivida del C14, el tiempo para el cual m = 0,529 m0, resulta:

|m | | m
0
|


ln
0
|
ln |

m

0,529 m
0

|
t =
\ .
t
1 2
=
\ .
5770 (aos) = 5301 aos
ln 2

ln 2






17 La semivida, t1/2, de una reaccin de segundo orden es inversamente proporcional a la
concentracin de reactivo. Para la reaccin orden A Productos, que es de segundo orden, t1/2 es
64,0 s cuando [A]0 es 0,78 mol L
-1
. Calcula el tiempo necesario para que la concentracin de A
disminuya a:
a) Un cuarto de su valor inicial.

b) Un dieciseisavo de su valor inicial.

a) Como la semivida, t1/2, de una reaccin de segundo orden es inversamente proporcional a la concentracin
de reactivo, si denominamos t1/2 al valor de la semivida cuando la concentracin es [A]0, entonces, cuando la
concentracin es
[A]
n
0
, la semivida es n t1/2. As, por ejemplo, cuando la concentracin es
[A]
2
0
, la
semivida es 2 t1/2; cuando la concentracin es
[A]
4
0
, la semivida es 4 t1/2, cuando la concentracin es
[A]
8
0
, la semivida es 8 t1/2, etc.

En consecuencia:

t = t
1 2
[A]
0
t = 2 t
1 2
[A]
0
t = 4 t
1 2
[A]
0
t = 8 t
1 2
[A]
0

[A]
0








2 4 8 16


Por tanto, la concentracin de A se reduce a un cuarto de su valor inicial al cabo de:

t = t
1

2
+ 2 t
1 2
= 3 t
1

2
= 3 64 (s) = 192 s

b) La concentracin de A se reduce a un dieciseisavo de su valor inicial (es decir, a
[A
16
]
0
), al cabo de:

t = t
1 2
+ 2 t
1 2
+ 4 t
1 2
+ 8 t
1 2
= 15 t
1 2
= 15 64 (s) = 960 s













18 Una licenciada en Qumica encuentra que el amonaco se descompone en sus elementos en un
proce-
so de primer orden y obtiene los siguientes datos.

Tiempo (s) 0 1,000 2,000
[NH3] (mol L
1
) 4,000 3,986 3,974
a) Determina la constante de velocidad por mtodos grficos.
b) Halla la semivida de la descomposicin del amonaco.

a) La ecuacin integrada de velocidad para una reaccin de primer orden es:

[A] = [A]
0
e

k t


Tomando logaritmos neperianos en la expresin anterior, resulta:

ln[A] = ln[A]
0
k t

Esta ltima ecuacin indica que la representacin de la concentracin de amonaco frente al tiempo da
una lnea recta cuya pendiente es igual a la constante de velocidad cambiada de signo.


ln[NH
3
]

1,386

1,383
Pendiente =
_
k


1,380




1,000 2,000 3,000 t(s)



La pendiente de la grfica es 3,0 10
3
s
1
. Por tanto, k = 3 10

3
s

1
.


b) La semivida de la descomposicin del amonaco es:

t
1 2
=
ln 2
=
ln 2
= 2,3 10
2
s
3,0 10

3
(s

1
)


k



(Aunque los datos experimentales se dan con cuatro cifras significativas, el nmero de cifras signifi-
cativas de los resultados viene limitado por el procedimiento grfico: depende de la resolucin de las
escalas utilizadas en el dibujo de los ejes.)






















19 Una de las reacciones implicadas en la destruccin del ozono en la estratosfera es:
NO (g) + O
3
(g) NO
2
(g) + O
2
(g)

Para esta reaccin en fase gaseosa, el factor de frecuencia es 6,31 10
8
L mol
1
s
1
, y la energa de
activa-cin, 10 kJ mol
-1
.
a) Calcula la constante de velocidad a 370 K.

b) Suponiendo que se trata de una reaccin elemental, calcula la velocidad de reaccin a 370 K
si: [NO] = 0,0010 molL

1
y [O
3
]= 0,00050 molL

1
.

a) Sustituyendo los valores dados en la ecuacin de Arrhenius:

k = A e

E
a

= 6,31 10
8
(L mol

1
s

1
) e

1,010
4
(Jmol

1
)


8,314 (Jmol

1
K

1
)370(K ) = 2,4 10
7
L mol

1
s

1

R T


b) Si se supone que la reaccin es elemental, la molecularidad coincide con el orden de reaccin. Por tanto, la
reaccin es de primer orden con respecto a los dos reactivos, de manera que la ecuacin de velocidad viene
dada por la expresin:
v = k [NO][O
3
]

Sustituyendo los valores en la ley de velocidad, se obtiene:
v = k [NO][O
3
] = 2,4 10
7
(L mol

1
s

1
) 0,0010 (molL

1
) 0,00050 (molL

1
) = 12 molL

1
s

1



20 El cloruro de sulfurilo, SO
2
Cl
2
, se utiliza en la fabricacin del clorofenol (un antisptico comn). En
la descomposicin del SO
2
Cl
2
, a cierta temperatura, se obtuvieron los datos siguientes:

Concentracin inicial Velocidad inicial de
de SO2Cl2 (mol L
-1
) formacin de SO2Cl2 (mol L
-1
s
-1
)
0,100 2,2 10
6

0,200 4,4 10
6

0,300 6,6 10
6


a) Cul es la ley de velocidad para esta reaccin?

b) Calcula la constante de velocidad.

c) Determina el orden de la reaccin.

a) La ecuacin de velocidad, en principio, tiene la forma: v = k [SO
2
Cl
2
]
n


Dividiendo el valor de la velocidad, v2, de la experiencia 2 por el correspondiente a la experiencia 1, v1, y
de acuerdo con la ley de velocidad:
v
2
k [SO
2
Cl
2
]
n
2
4,4 10

6
k (0,200)
n

n



=
k [SO Cl ]
n
; =
k (0,100)
n
; 2

=

2 ; n

=

1
. Orden 1 en el reactivo nico SO
2
Cl
2
. v
1
2,2 10

6


2 2 1


El mismo resultado se obtiene comparando los datos correspondientes a la experiencia 3, con los de la
experiencia 2, o los de la experiencia 1. La ley de velocidad resulta: v = k [SO
2
Cl
2
] .

b) Despejando el valor de k en la ley de velocidad anterior, y sustituyendo los datos de una cualquiera de
las experiencias, se obtiene:
k =
v
1

=
2,2 10

6
(molL

1
s

1
)
= 2,2 10

5
s

1

[SO
2
Cl
2
]
1
0,100 (mol

1
L

1
)




c) Puesto que el exponente al que est elevada la concentracin del reactivo nico, SO2Cl2, en la ley de
velocidad es 1, la reaccin es de primer orden.




21 La semejanza entre el ICl y el Br2 es tan grande que priv al famoso qumico Justus von Liebig
de la fama del descubrimiento del elemento bromo. En 1815, Liebig obtuvo Br2 y lo guard en un
frasco al que puso la etiqueta ICl. A 200 C, el I Cl reacciona con el hidrgeno:
2 ICl (g) + H
2
(g) I
2
(g) + 2 HCl (g)

Sabiendo que esta reaccin es de segundo orden (total):
a) Escribe posibles expresiones para su ley de velocidad.

b) Cmo se podra determinar cul de las expresiones anteriores corresponde a la verdadera ley
de velocidad?

c) Razona si la reaccin anterior puede ser elemental.

a) Entre las posibles expresiones de la ley de velocidad, que corresponden a una reaccin de segundo
orden, podemos escribir:

v = k [ICl] [H
2
]

v = k [ICl]
2


v = k [H
2
]
2


b) Para decidir cul es la expresin correcta de la ley de velocidad, se debe medir experimentalmente la
velocidad de reaccin para diferentes valores de las concentraciones de los reactivos.

c) En una reaccin elemental, los exponentes de la ley de velocidad coinciden con los coeficientes de la
ecuacin correspondiente a la etapa elemental; es decir, el orden de la reaccin coincide con la mole-
cularidad. Por tanto, si la reaccin dada fuese elemental, la ley de velocidad debera ser:

v = k [ICl]
2
[H
2
]

Es decir, la reaccin debera ser de tercer orden. Dado que se sabe que esta reaccin es de segundo
orden, la reaccin no puede ser elemental.


22 La descomposicin de la urea en HCl 0,1 mol L
-1
ocurre de acuerdo con la reaccin:
H N CO NH + H O 2 NH
+
+ CO
2

2 2 2 4 3
La constante de velocidad para esta reaccin de primer orden se midi en funcin de la temperatura:

Experimento T (C) k (min
-1
)
1 61,05 0,713 10
5

2 71,25 2,77 10
5



Calcula la energa de activacin y el factor de frecuencia, A, para esta reaccin.

De acuerdo con la ecuacin de Arrhenius:

E
a
k = A e
R T


Tomando logaritmos neperianos, nos queda:

lnk = ln A
E
a

R T








Si utilizamos los subndices 1 y 2 para referirnos a las dos temperaturas dadas, 61,05 C y 71,25 C, respec-
tivamente, y dado que A, Ea y R son constantes, obtenemos:

lnk
1
= ln A

E
a


R T
1





lnk
2
= ln A
E
a



R T
2




Restando las dos ecuaciones anteriores, resulta:


|
E
a

| |
E
a

|
E
a

|
E
a

|
k
2

|
1 1
|
E
a
(T
2
T
1
)
| | | Ea |
lnk
2
lnk
1
=

ln A

|

ln A

| =

| ln
k


=
R
| = R T T

R T R T R T R T
1
T T

\ 2 . \ 1 . 2 \ 1 . \ 1 2 . 1 2


Despejando Ea y sustituyendo valores, se obtiene:

R T T
k
8,314 (JK

1
mol

1
) 334,20 (K) 344,40 (K) 2,77 10

5
(min

1
)
10
5
Jmol

1

Ea =
1 2
ln 2 = ln

= 1,27

(T
2
T
1
)

10,20 (K)
0,713 10

5
(min

1
)

k
1



Es decir, la energa de activacin es: Ea = 127 kJ mol
1


Despejando el factor de frecuencia, A, en la ecuacin de Arrhenius, y sustituyendo los valores correspondientes
al experimento 1, resulta:

E
a
127 000 (Jmol

1
)


1 8,314 (Jmol

1
K

1
)334,20(K ) 14 1 12 1
A = k e
R T
= 0,713 (min ) e min s

= 5,05 10 = 8,42 10


El mismo valor para A se obtiene utilizando los valores de k y T correspondientes al segundo experimento.



Cintica enzimtica.

1. Separacin de protenas.
Para Separar las protenas por medio de electroforesis es necesario usar un soporte que permita que las
molculas separadas no se mezclen nuevamente y puedan identificarse mediante alguna tcnina de revelado,
como puede ser la tincin con azul ce Coomasie. Para ello se emplean soportes como la Agarosa y la
Acrilamida/bisacrilamida. En el caso de las portenas, el soporte mas conveniente es este ltimo. La malla del gel
permite que las molculas al avanzar, empujadas en el campo elctrico, gracias a su carga elctrica, sean
"frenadas" en funcin de su tamao y forma. De modo que la electroforesis en gel permite separar molculas
mediante un acombinacin de su carga y de su masa.
Ahora, debido a que queremos separar las subunidades, debemos debilitar las interacciones covalentes y no
covalentes que las mantienen unidas, tales como los punetes de disulfuro, las interacciones hidrofbicas, los
puentes de hidrgenos, las interaciones inicas y las llamadas fuerzas de Van der Walls. Para ello basta con
agragar un detergente, que reemplaza las interacciones hidrofbicas protena-protena, por interacciones
detergente-protena, al hacer esto, expone al solvente gran parte del interior de la protena y esto permite que se
formen puentes de hidrgeno con el agua y que se solvaten los grupos cargados. Para romper los puentes de
disulfuro que pudiesen existir, es necesario reducir estos enlaces para formar dos sulfhidrilos. Los compuestos
tales como el 2-mercaptoetanol (2ME), el 2,3-dimercaptopropanol (BAL), el dithioeritritol (DTE), el dithitreitol
(DTT), y el Tris (2-carboxietil) fosfito (TCEP), son reductores que pueden emplearse bajo diferentes condiciones,
siendo el primero el ms dbil (se emplea en caliente) y el ltimo el ms fuerte. En estas condiciones, la carga
negativa del SDS hace casi uniforme la relacin carga/masa de las protenas, de modo que la separacin
depende casi enteramente del tamao y la forma.

En resumen, necesitamos Acrfialmida/biscarilamida, Azul de Coomasie, 2-mercaptoetanol y SDS.
b) Para partir una cadena polipeptdica en fragmentos pueden emplearse mtodos qumicos o mtodos
enzimticos, que pueden romper enlaces peptdicos en los que participan aminocidos especficos. Entre los
primeros est el Bromuo de ciangeno (CNBr) y entre los segundos se encuentras las endoproteinasas como la
quimotrispsina.
c) Si desaemos digerir una cadena hasta aminocidos para luego determinar la composicin de la misma,
podemos emplear HCL 6N @ 90 oC, lo que a lo largo de varias horas (24-72h) resultar en una ruptura completa
de los enlaces peptdicos que forman el pptido. Los aminocidos pueden analizarse separandolos mediante
cromatografa de fase reversa (HPLC), cromatografa de intercambio inico cromatografa de capa fina. Los
picos de aminocidos pueden detectarse mecdiante su reaccin con el reactivo de ninhidrina. Para evitar que los
grupos SH se oxiden a disulfuros, y dificulten la digestin, se emplea cido perfrmico para oxidarlos a cido
cisteico o iodoacetamina, para formar el derivado S-alqulico correspondiente.
d) Finalmente, si lo que se desea es determinar la secuencia de aminocidos de la protena, debe emplearse un
mtodo que permita digerir uno a uno los aminciods. Esto puede hacerse mediante la degradacin de EDMAN,
que emplea el fenilisotiocianato y determina las feniltiohidantoinas de los aminocidos en el extremo
aminoterminal, como l pptido digerido es ahora un aminocido ms corto, al repetirse el proceso se determina
el segundo aminocido y as sucesivamente.


2. En la electroforesis desnaturalizante, el logaritmo del peso molecular observa una relacin
aproximadamente lineal (negativa) con la mobilidad relativa.
Haciendouna grfica semilogartmica del peso de los marcadores vs. su mobilidad relativa, se puede interpolar el
valor del peso molecular de la lisozima, que segn se ve en la figra siguiente es de 26 KDa.






3. En este problema se nos pide completar la tabla de purificacin aadiendo las columnas de
actividad especfica, las veces de purificacin y el rendimiento obtenido en cada paso. Aqu, hay que
ver que significan las dos columnas que nos dan y que informacin se nos pide.
Primero, la columna de "actividad total" expresa cuanta de la enzima que se desea purificar est presente en
cada paso; la segunda columna expresa cuantas protenas de entre el total de ellas, la que nos interesa includa,
estn siendo recobradas con cada paso de purificacin.
Es evidente que deseamos obtener lo ms posible de la acetilcolinesterasa, al tiempo que recobremos tan pocas
de las otras protenas como sea posible. As, la actividad especfica es el cociente entre la actividad total y la
cantidad total de protena presente en esa preparacin. Este valor ser mayor si se recupera ms
acetilcolinesterasa y menos de otras protenas. Para la acetilcolinesterasa 100% pura, este valor alcanzar un
nmero constante, ya que al no haber contaminantes ya no ser posible eliminar protena sin que desaparezca la
actividad correspondiente a la enzima perdida. El valor se obtiene smplemente dividiendo el valor de la celda en
la columna 1 por el valor de la columna 2 correspondiente a la misma fila (vease la tabla ms abajo).
Luego, para calcular las veces de purificacin, bastar considerar que entre ms pura est la protena, mayor su
actividad especfica, de manera que si dividimos la actividad especfica recuperada en cada paso por la que
encontramos en la preparacin original, sabremos cuantas veces se ha enriquecido nuestra preparacin en
colinesterasa, con respecto a otras portenas. Es decir dividimos el valor de cada celda en la columna 3 de la
tabla inferior, por el valor de la primera celda en esa misma columna, evidentemente el valor de la primera fila
ser igual a la unidad, porque ah la enzima conserva la pureza correspondiente al extracto original, puesto que
no ha sido tratada.
Finalmente, la ltima columna corresponde al rendimiento, es decir cuanto del compenente que se intenta
purificar se est recobrando en cada paso, aqu basta referirnos a la actividad total recuperada de la columna 1,
ya que este es el valor que cuantifica componente deseado. As, expreando el valor de cada una de estas celdas
como porcentaje del valor presente en el extracto crudo (es decir la fila 1 de esta columna), se genera la columna
5.
Paso de purificacin
Actividad total
(mol/min)
Protena total
(g)
Actividad especfica
mol/(min mg)
Veces de
purificacin
Rendimiento
(%)
Homogenizado de tejido fresco. 556.7 33340 1.67 1 100
Precipitacin con (NH4)2SO4 556.7 1070 52.03 31.16 100
DEAE-celulosa 289.5 124 233.47 139.82 52
concentracin y dalisis 278.4 115 242.09 144.98 50.01
sephadex-G200 233.8 56 417.5 250.04 42
Cellex-P (intercambio catinico) 139.2 55.4 251.26 150.48 25
DEAE-celulosa 89.1 11.3 788.5 472.22 16.01
DEAE-sephadex 66.8 11.1 601.8 360.41 12
cromatografa de afinidad 46.8 4.8 975 583.91 8.41
b y c) Al analizar la tabla se observa que hay varios pasos en los que se obtiene un rendimiento razonable con
respecto al paso anterior y adems hay una ganacia en la veces de purificacin. En particular, La precipitacin
con sulfato de amonio mejora la pureza 31 veces y nos d un rendimiento del 100%, la DEAE celullosa permite
incrmentar la pureza, aunque se pierde bastante actividad. La concentracin y dilisis es un paso que no aade
nada, pero tampoco se pierde la protena y que es necesario para poder aplicar la muestra a la siguiente
columna. El paso de filtacin en gel por sephadex G200 mejora la pureza y mantiene un buen rendimiento. El
paso de intercambio catinico siguiente, es malo, porque se pierde bastante actividad y se recupera con menos
pureza de la que se tena. La siguiente cromatografa repite el paso de DEAE-cellulosa, que a pesar de todo
representa una mejora con respeto a la protena obtenida del paso de filtracin, sin embargo, otro paso de ms
intercambio aninico (DEAE-suphadex, mismo grupo qumico, diferente soporte inerte) no mejora ms la pureza,
sino que incluso hay cierta pperdida de pureza y de actividad. Finalmente, el paso de cromatografa de afinidad si
es bueno, ya que se recupera una protena 900 veces ms pura que la original y el rendimento pasa tan slo de
12 a 8.4 %, es decir casi 60% de lo aplicado a este ltimo paso. En resumen, sera conveniente eliminar los
pasos de Cellex-P y DEAE-sephadex (letra magenta, fondo amarillo), con lo cual, en teora, sera posible obtener
una protena de pureza semejante, con menos trabajo y con una mejora en el rendimiento final.



4. La respuesta a este problema se puede dar a partir de la siguiente consideracin: En un campo
electrofortico las molculas nativas de protena se moveran en hacia el electrodo de cargo opuesta
a la propia, de modo que se elegimos un pH con intermedio entre el punto isoelctrico de ambas
protenas, cada una se mover hacia un polo diferente, aquella con un pI inferior al pH poseer carga
negativa y se mover hacia el nodo (polo positivo) y aquella con el pI superior al pH tendr carga
negativa y se mover al ctodo (polo negativo). De este modo, al moverse en direcciones opuestas,
la separacin ser ptima. En el tercer caso, como se trata de 3 protenas, podemos elegir un pH
igual al pI de la que tenga un valor intermedio, entonces, una se mover hacia el ctodo, otra hacia el
nodo y la de pI intermedio no se mover.
a) Seroalbmina pI 4.5 y Hemoglobina pI 6.8, pH recomendado 5.65
b) Mioglobina pI 7 y Quimotripsingeno pI 9.6, pH recomendado 8.3
c) Ovoalbmina pI 4.5 , Seroalbmina pI 4.9 y Ureasa pI 5, pH recomendable 4.9. En relidad esta es un pregunta
capciosa, ya que debido a la cercana entre los puntos isoelctricos de la seroalbmina y la ureasa, esta seran
muy difciles de separar, pero el valor ptimo para el pH seguira siendo 4.9.


5. En la cromatografa de exclusin molecular, las protenas son separadas en funcin de su peso
molecular. Las molculas de mayor tamao son excludas de la resina y son eludas con poco
volumen, pero las de menor peso molecular son retenidas y se requiere de mayor volumen de
eluyente para lavarlas.
Por tanto el orde de elucin, comenzando por la que eluyen primero sera: Miosina (525), catalasa
(222), seroalbmina (69), quimotripsingeno (23), Mioglobina (17), citocromo c (13). El nmeor entre parntesis
indica el peso molecular el miles de daltons.


6. Este problema se puede resolver de manera semejante al problema 2, ya que el logaritmo del peso
molecular vara linealmente (pero en forma negativa) con el volumen de elucin. El resultado se
muestra en la figura siguiente, en la que se v que la Lisozima posee un peso molecular aproximado
de 24 KDa en su forma nativa.


7. En este problema se nos pide analizar como progresa la inactivacin de una enzima en el tiempo.
Aqu, la ciclohexanodiona (CHD) es un reactivo que modifica qumicamente con la enzima y el
producto de esta reaccin es una protena que pierde su actividad enzimtica original. Por tanto, en
este experimento, la enzima es un reactante y su actividad enzimtica es el recurso metodolgico
que sirve para evaluar la concentracin remanente de protena no modificada por la CHD, en cada
uno de los tiempos muestreados.
Se puede determinar si la reaccin qumica es de primer orden, o se encuentra en condiciones tales que
progresa como si lo fuese (aunque estrctamente no lo sea); ello gracias a que la reacciones con cintica de
primer orden (o de pseudoprimer orden) muestran una relacin lineal entre el logaritmo natural de la
concentracin de reactante remanente y el tiempo transcurrido. De modo que, si obtenemos los logartmos de los
valores de concentracin de la enzima remanente (no importa que se trate de un porcentaje) resultan las
siguientes grficas.


La figura superior muestra la grfica logartmica, en la que se puede observar que ambos conjuntos de puntos
describen razonablemente una recta, no as en la grfica directa de [E] vs. tiempo (panel inferior). Este resultado
indica que la inactivacin observada sigue una cintica de primer orden con respecto a la concentracin de
enzima en la condiciones empleadas. Las pendientes de estas lneas son numricamente iguales a las
constantes de primer orden, o de pseudoprimerorden, pero con signo negativo, de modo que basta cambiar el
signo para determinar el valor de las constantes buscadas.
Note que ambas rectas presentan pendientes muy distintas, esto significa que la concentracin de CHD si tiene
un efecto sobre la velocidad de la reaccin annque, en las condiciones experimentales empleadas, este efecto
no se manifiesta en los 120 minutos que dura el experimento; posblemente porque este reactivo se encuentra en
gran exceso. Sin embargo, una expresin correcta para la velocidad de la reaccin debera incluir ambos
reactantes y la ley de velocidad indicara que el orden de reaccin es superior a 1 (uno para la enzima y no
sabemos exactamente cuanto para la CHD).
Finalmente, el recuadro en la figura superior muestra que las constantes aparentes calculadas varan linealmente
con la cantidad de CHD empleada en el experimento y la lnea cruza el punto x,y (0,0). Esto nos indica que el
orden de reaccin para la CHD es tambin de 1 y la pendiente de esta grfica nos indica el valor de la constante
de 2o orden. y la expresin final para la velocidad sera:
v= k2 [CHD][E], en donde k2= 0.026 mM
-1
min
-1
= 0.43 M
-1
s
-1
.

En condiciones en las que [CHD] es mucho mayor que [E], la enzima se agota sin que la [CHD] disminuya
apreciablemente. Esto es muy frecuente en la inactivacin de enzimas, ya que la concentracin de protena
apenas alcanza los cientos de mg/mL, lo que para una molcula de 10000 gr/mol de PM (si se trata de na
protena pequea) o ms, representa concentraciones inferiores a 10
-5
M. Por su parte el agente qumico suele
agragarse en concentraciones superiores a 10
-4
M, es decir 10 veces por encima como mnimo.
Concencuentemente, el cambio en concentracin de reactante rramente rebaza el 10% a lo largo de la
incubacin.
8. Para resolver este problema es necesario observar que la absorbencia registrada representa la
desaparicin del NADH, que es el sustrato de la reaccin. En este caso la estequimetra de la
reaccin implica que por cada evento de reaccin, una molcula de NADH desaparece y, por tanto, lo
que necesitamos hacer para calcular la velocidad es determinar el Cambio de absorbencia del NADH
por unidad de tiempo, para luego convertirlo a cambio de concentracin de NADH mediante la ley de
Lambert-Beer:
A = e c l Dc = DA/(e l)
de donde se sigue que
DA = e Dc l Dc/Dt = (DA/Dt)/(e l)
Si graficamos la absorbencia contra el tiempo transcurrido, la pendiente de la curva descrita por la grfica ser
(y2-y1)/(x2-x1) = DA/Dt. La que en este caso ser numricamente negativa (por tratarse de la desaparicin de un
producto). Sin embargo, podremos notar en la figura inmediata inferior, que la relacin no describe una recta
perfecta, por lo que es necesario considerar tan slo el periodo inicial, en el que las concentraciones de sustratos
y productos no han cambiado apreciablemente y, por tanto, los punto se aproximan razonablemente a una recta.

As, con una pendiente inicial de -0.3297 Uabs/min y una longitud para el paso de luz de la celda del
espectrofotmetro de 1 cm (l) se obtiene una velocidad de desaparicin de NADH de 5.310
-5
M min
-1
, lo que en
3 mL del volumen de cubeta representa (5.310
-5
mol L
-1
min
-1
) (310
-3
L) = (1.5910
-7
mol min
-1
).
Las unidades internacionales (UI) de actividad enzimtica son mmoles de producto formado o reactante
consumido por minuto, de modo que si 1 mol equivale a 10
6
mmol, la velocidad ser (v = 1.5910
-1
mmol min
-1
)
0.159 UI.
Finalmente, la actividad especfica es l actividad enzimtica dividida por la concentracin de protena, es
decir a.e. = 0.159 UI/35 ng, pero debido a que la concentracin de protena suele expresarse en mg: a.e. = 0.159
UI / 3510
-6
mg = 4543 UI/mg de protena.




9. En este problema se nos pide determinar grficamente la relacin entre la velocidad de la reaccin
catalizada, vs. la cantidad de solucin de protena aadida al ensayo y luego se nos pide calcular el
cociente de la velocidad ( actividad de la enzima) y la cantidad de solucin deprotena aadida al
ensayo. Los resultados de tal representacin se muentran en la siguiente figura:

En el panel inferior, apreciamos que la velocidad aumenta linealmente con la concentracin de protena, esto es
lo que cabra esperar, debido a que, si tomamos como referencia la ecuacin de Michaelis-Menten, notaremos
que la velocidad es proporcional a la Velocidad mxima y a su vez la Vmax es proporcional a la concentracin
total de enzima aadida, i.e.:

Dado que en cada una de las dos series de determinaciones la concentracin de sustrato se mantuvo constante,
el factor kCAT S / (KM + S) se mantiene constante y, por tanto, podemos decir que mientras se emple la misma
concentracin de sustrato en todas las medidas, v = constante ET. Consecuentemente, cuando se grafica el
cociente v/[E] el resultado es una constante (vease panel superior de la figura anterior), mientras la
concentracin de sustrato no sea modificada.
Lo anterior significa que la velocidad de una reaccin enzimtica es proporcional a la concentracin de enzima, lo
que constituye la base terica de las mediciones de actividad enzimtica como una estimacin de la cantidad de
esta enzima presente en un fludo biolgico. Este principio tiene, por ejemplo, mucha importancia en la prctica
clnica, ya que nos permite determinar alteraciones en los niveles de diversas enzimas, que pueden relacionarse
a diversos estados patolgicos. Tambin es importante en aplicaciones en la industria de alimentos, ya que
permite evaluar la cantidad de ciertas enzimas presentes en los alimentos, cuya actividad puede ser indeseable,
o bien, puede ser aadida ex professo para modificar las propiedades de los preparados alimenticios. Todo ello,
mediante un ensayo enzimtico, generalmente sencillo, que tan slo requiere como condicin que la

concentracin de sustrato empleada, as como otras condiciones (pH, temperatura, etc.), sean estandarizadas
adecuadamente.


10. En este problema se nos d el valor de la velocidad como funcin de la cantidad de sustrato aadido
a tres diferentes niveles de concentracin de enzima. El valor de Vmax y Km puede calcularse a
partir de estos datos de diversas maneras. La manera directa, aunque no muy precisa, consiste en
graficar los datos y estimar el valor de Vmax a partir del valor al que tiende la velocidad cuando la
concentracin de sustrato es muy elevada.
Como en realidad este valor es el lmite superior de la curva, pero esta se aproxima indefinidamente a l sin
llegar a tocarlo, estimar este techo resulta un poco impreciso. Con el valor obtenido, es posible calcular el valor
de la Km, ya que este representa la concentracin de sustrato a la que 50% de los sitios activos de la enzima
estn ocupados con sustrato y 50% estn vacos. En estas condiciones, la velocidad observada deber ser igual
a la Vmax/2. (vase panel A de la figura que sigue a este prrafo). Como se describi en el problema anterior,
aumentar la concentracin de enzima resulta en un incremento en la Vmax, ya que v = VMAXET. Por tanto, las
tres curva son semejantes en su forma, pero a mayor cantidad de enzima tenemos curvas ms elevadas. Como
es de esperar, cuando dividimos la velocidad por la concentracin de protena empleada, la tres curvas se
superponen (ver panel B de la figura), dado que aqu la velocidad ya slo depender de la concentracin de
sustrato. Esta es una manera comn de representar las curvas de saturacin por su sustrato de las reaccines
enzimticas, ya que no su forma es la misma sin importar cuanta enzima se emple en el experimento.

Los pneles de la derecha en la figura anterior (C,D) son representaciones de Linewaver-Burk, en esta
representacin se grafica 1/velocidad vs. 1/[sustrato], por lo que tambin se le conoce como la grfica de dobles
recprocos. Los valores de 1/v frente a la 1/S describen una lnea recta, cuya pendiente es numricamente igual
a KM/VMAX y que intesecta al eje "Y" en un valor numrico igual a 1/VMAX y si la recta se prolonga a travs del
cuarto cuadrante intersecta al eje "X" en un valor numrico igual a -1/KM. En la figura, el panel derecho inferior
(C) muestra que la KM es independiente de la concentracin de enzima aadida. Esto puede deducirse del hecho
de que la concentracin de enzima es casi siempre mucho menor que la de l sustrato (vease problema 1), por lo
que la cantidad de sustrato requerida para ocupar el 50% de los sitios activos slo depende de la afinidad relativa
entre la enzima y el sustrato, propiedad que no cambia con la concentracin total de enzima. Esto mismo puede
deducirse de la ecuacin de Michaelis-Menten, ya que en ella, la concentracin de ET y la de sustrato no son
interdependientes. El panel superior dereho (D) reitera que al dividir la velocidad por la concentracin de enzima
empleada las tres lneas se superponen.

Si ahora graficamos velocidad mxima obtenida contra la cantidad de enzima aadida en mmol, asumiendo que
cada molcula de enzima posee un slo sitio activo, la pendiente de la grfica ser:

Este valor nos dice que una molcula de enzima es capz de convertir 33300 molculas de sustrato a poducto
por segundo y es equivalente a la actividad especfica de una enzima pura (VMAX/[Protena]), excepto por la
unidades empleadas. Dado que para determinar este ltimo nmero no necesitamos una estimacin exacta del
peso molecular de la enzima, no del nmero de sitios activos por molcula de protena, este valor es el ms
frecuentemente reportado en diversas tablas de parmentros cinticos y propiedades de enzimas. Sin embargo,
cuando la preparacin no es pura el denominador de este conciente ser mayor, debido a la contribucin de los
contaminantes a la cantidad total de protena, en consecuencia, la actividad especfica disminuir. De este modo,
la actividad especfica es un buen indicador del grado de pureza de una preparacin enzimtica.





11. En este problema se nos pide determinar la actividad como fraccin de la VMAX para la enzima
invertasa, la manera ms simple de proceder es reordenar la ecuacin de Michalis y Menten como
sigue:

Lo que nos indica que se alcanza el 33% de la VMAX, como VMAX = kCAT ET , se tiene vel = 175 min
-1
2.5 10
-
6
mmol 0.33 = una actividad de 0.00146 mmol min
-1
. Ahora, segn lo abtenido arriba, para obtener un 95 % de
la VMAX bastar con que S/(KM + S) = 0.95, de donde al despejar S tendremos S= KM 0.95/(1-0.95) = 19 KM. Lo
que significa que habr que aadir 19 x 0.5 mM = 9.5 mM de sacarosa para que la actividad alcance este valor.
Este problema sugiere que la cantidad de sustrato es uno de los factores importantes a considerar cuando se
desea emplear una enzima para aplicaciones inductriales. En otras palabras, si el producto a tratar, que en este
caso podra ser un almibar hecho a base de sacarosa, posee un cancentracin de sustrato muy baja, o sea que
nuestro jarabe est muy diludo, deberemos aadr mucha ms enzima, puesto que sta estara trabajando muy
por debajo de su capacidad mxima. Por otro lado, una alternativa para ahorrar enzima, sera tratar el jarabe
concentrado y luego aadir el agua y los otros componentes de su almibar, para tener el producto final.

12. calcular la energa de activacin de Arhenius
para ello, el procedimiento ms sencillo es el obtener una grafca de Log(k) vs. 1/T (absoluta) y la pendiente de
esta grafica ser igual a -Ea/R (siendo R la constante universal de los gases). En este caso no tenemos el valor
de k, sino tan slo el valor de la velocidad de reaccin. Sin embargo, la pendiente de una grfica de Arhenius es:

Ello gracias a que la velocidad es proporcional a la concentracin de reactante (v = k R) y asumiendo que sta
no se modific durante el experimento. Lo que significa que para efectos del clculo de la pendiente y de la

energa de Activacin, es equivalente graficar la k o la velocidad directamente, siempre que las mediciones se
hallan realizado con un cantidad constante de reactante.

La fugura anterior muestra la grfica directa de velocidad vs. Temperatura, la que muestra que la velocidad de la
reaccin crece exponencialmente con la temperatura. Tambin es claro, que en el caso de la reaccin catalizada,
no se observa una cada en el rango de temperatura empleado, lo que nos dice que no se presenta
desnaturalizacin trmica de la protena y, por ello, es posible emplear todos los puntos para construir el grafico
de Arhenius, mismo que se muestra a la derecha de la figura anterior. Note que para realizar esta igura las
temperaturas fueron primero convertidas a temperaturas absolutas en
o
K.
De la pendiente de la grfica y sabiendo que R=1.987 cal mol
-1

o
K
-1
se obtienen los valores para la energa de
Activacin de la reaccin catalizada por la enzima y en ausencia de catalizador, ya queEA = pendiente -1 R.
Aqu se puede ver que la energa de activacin de la reaccin catalizada por la enzima es cerca de 8 veces
menor que la de la reaccin en ausencia de enzima. Lo que confirma que las enzimas actan reduciendo el
tamao de esta barrera enegtica.


13. Este es un problema en el que lo que tenemos que hacer es muy semejante a lo que hicimos en el
problema anterior. Aqu sin embargo hay que determinar que datos debemos usar. Dado que la
grfica de Arhenius implica la relacin entre Log(k) vs 1/T absoluta, y k es una constante de
velocidad, debemos identificar aqu la constante de velocidad relacionada con el proceso de
catlisis, esta el la kCAT.
La KM como puede verse, tambin puede ser modificada por la temperatura, debido a que su valor es una
relacin de varias constantes de velocidad (vease la definicin de KM en la deduccin de la ecuacin de
Michaelis y Menten), por tanto, al cambiar la temperatura las constantes de velocidad cambin y esto afecta el
valor de KM. Esto es lgico, ya que la temperatura tambin puede afectar la unin del sustrato a la protena y este
proceso se refleja en el valor de KM.
Ahora, en adicin a lo anterior, se puede identificar en la siguiente figura que a las temperaturas ms altas se
observa un claro efecto de desnaturacin de la protena y por tanto una caida en la catlisis. Dado que la energa

de activacin que deseamos medir es la del proceso cataltico, debemos considerar slamente los puntos que
reflejan el efecto de la temperatura sobre la reaccin catalizada y no acusan an efectos sobre la reaccin
qumica paralela de desnaturalizacin de la protena:

En la grfica de la derecha, se puede ver la recta que se obtiene en el grfico Ln(k) vs 1/T, del que se deduce
una energa de activacin de 1.96 Kcal/mol. Ntese como clramente el punto que corresponde a la mayor
temperatura no cae sobre la recta. Esto debido a que este punto presenta una mezcla de los efectos de la
temperatura sobre la velocidad de catlisis y sobre la velocidad de desnaturalizacin de la protena.


14. determinar el valor del pKa del grupo involucrado en la respuesta de la enzima frente al pH.


Esta curva es equivalente a una curva de titulacin como las que se ven cuando se aade base a un cido debil
en solucin y se siguen los cambio de pH, slo que aqu, en lugar de equivalentes de base aadida, lo que
estamos modificando el el pH y observando los equivalentes de enzima activa presentes. Dado que el intervalo
de pH empleado no es muy extremo, es de esperarse que la cada en la actividad hacia el pH de 6, se reflejo de
que la mayora de la enzima no est en su forma inica catalticamente competente, por lo que no manifiesta su
actividad, pero es improbable que est irreversiblemente desnaturalizada. En cualquier caso, para estar
completamente seguros de este hecho, habra que hacer un experimento distinto, en el que la enzima se
incubara a los diferentes pH durante un cierto intervalo de tiempo y luego se regresara al pH de 8.5-9 (en donde
tiene su mxima actividad de acuerdo con la curva anterior) y se medira cuanta de la enzima puede recuperarse
despus del tratmiento. Este experimento nos dara la misma actividada a todos los pH's en los que la enzima es
estable y reportara bajas de la actividad en las regiones en las que el pH desnaturaliza a una fraccin de la
protena en forma irreversible.
a) A partir de la curva dibujada, se puede ver que el punto de inflexin de la curva es paroximadamente de 6.7, lo
que se da a un valor de activida de aproximadamente la mitad del mximo observado a un pH entre 8.5 y 9.
b) Lo anterior nos indica que podra tratarse de algn aminocido como la histidina. Menos probables, pero no se
pueden descartar, seran los carboxilatos de Asp y Glu o el grupo SH de una cistena libre (es decir que no est
formando puente de disulfuro. Aunque los pKa de los grupos R de estos ltimos 3 aminocidos en su forma libre
se encuentran relativamente alejados de 7 (4.7 para los carboxilatos y 8 para el tiol), en el interior de las
protenas y especialmente en el sitio activo de las enzimas, se pueden observar desviaciones impertantes de los
pKa, causadas por las caractersticas de polaridad del sitio activo, que son casi seimpre muy diferentes a las del
medio acuoso puro.
c) Fnalmente, la lnea punteada de la figura anteror indica de manera aproximada lo que se espera observar a
valores de pH mucho ms alcalinos. En esas condiciones, la desprotonacin masiva de muchos aminocidos, es
decir casi todas las histidinas, los tioles y la gran mayora de lisinas, as como muchas argininas, perdern su
carga positiva provocando la desestabilizacin de numerosos puentes de sal en la protena, con lo que la
estructura se ver severamente afectada. Consicuentemente, se espera a que un pH superior a 10 u 11, la
actividad comenzar a desiminuir abruptamente y para un pH de 12 o 13 la enzima presentar una actividad
nula. Esto es casi siempre cierto, pero cabe aclarar que algunas protenas de bacterias alcaloflicas y que se
encuentran en medios extremos pueden soportar pH cercanos a 14 sin perdida de la actividad.



15. parte a. graficar los valores de velocidad frente a la concentracin de sustrato para las series
obtenidas sin y con las distintas concentraciones del inhibidor. Esto se muestra en la figura que
sigue, en el panel inferior izquierdo. Aunque es posible estimar los valores de Km y Vmax (en
ausencia del inhibidor) y los valores de las constantes aparentes en presencia del inhbibidor en esta
figura, el estimado ser difcil de hacer, debido a que la Vmax es una valor lmite que debe
extrapolarse y el valor de Km debe estimarse una vez que se conoce la Vmax, lo que significa que un
mal estimado de Vmax dar un mal estimado de Km.
Una manera sencilla de resolver este problema es realizar la grfica que se presenta en el lado izquierdo de la
figura, la representacin de 1/v vs. 1/s propuesta por Linewaver & Burk permite, unindo los puntos con una
recta, determinar los valores de 1/Vmax a partir de la intercepcin con el eje ordenado y -1/Km a partir de la
intercepcin de la recta extrapolada al eje de las abscisas. Aunque existen otras formas de graficar estos datos
que pueden ser ms convenientes desde el punto de vista del estimado numrico obtenido, esta es la ms
extendida en la literatura.
a) A partir de la representacin mostrada en el panel derecho de la figura, puede tambin determinarse el tipo de
inhibidor que se tiene, que en este caso es acompetitivo (tambin llamadoincompetitivo), dado que las rectas
que unen cada una de las series de puntos son paralelas. Note que aqu de poco sirve emplear un anlisis de
regresin lineal, dado que los errores experimentales provocan que las rectas obtenidas por regresin no
presenten la misma pendiente. En estos casos, una vez que se ha decidido que los puntos realmente
representan rectas paralelas, lo mejor es tomar una regla y trazar todas las recta paralelas buscando que el
conjunto de lneas realmente describan, tan cercnamente como sea posible, el conjunto de puntos
experimentales.
b) Aqu, el nico valor de Vmax para la enzima es el determinado en ausencia del inhibidor (O). Es decir 1/Vmax
= 0.965 (mmol
-1
min mg prot) Vmax = 1.04 (mmol

min
-1
mg prot
-1
). Los valores obtenidos con las otras rectas
representan tan slo parmetros cinticos aparentes cuyo valor refleja las alteraciones impuestas sobre la
actividad enzimtica por la presencia del inhibidor. Km se determina por consiguiente del valor de la intercepcin
con las absisas de esta misma recta i.e. -1/Km = -2.4 mM
-1
Km = -1/-2.4 mM = 0.417 mM de p-nitrofenilfosfato.
Esto significa que cuando la concentracin de p-nitrofenilfosfato en el medio de reaccin (al pH y temperatura
empleados en este experimentos) alcanzan 0.417 mM, el 50% de los sitios activos de la enzima se encontrarn
saturados y por tanto la actividad der igual a la mitad de la mxima que puede observarse en dichas
condiciones.


c) Finalmente, dado que los inhibidores acompetitivos afectan al valor de la intercepcin con la ordenada de la
grfica de (1/v,1/s), los valores de este parmetro pueden emplearse para calcular grficamente el valor de Ki sin
recurrir al lgebra. Para ello, basta graficar estos valores frente a la concentracin de inhibidor empleada en cada
serie de determinaciones, lo que se muestra en el panel izquierdo superior. Aqu, se unen los puntos con una
recta y se extrapolan al eje de las absisas, el punto de crte es numricamente igual a -Ki = -20.47 mM Ki =
20.47 mM de bromolevamisol. Note que el primer punto de la grfica representa el valor de la intercepcin
cuando la concentracin de inhibidor el cero, es decir, este punto es numricamente igual a 1/Vmax.
parte b. a) La solucin de este problema es muy semejante a la descrita para el problema anterior, de manera
que no abundaremos en los detalles. Aqu, el patrn del grfico de Lineweaver-Burk es claramente no paralelo,
sin embargo, habr que dterminar si las rectas se cortan en un punto sobre el eje de las ordenadas, o sobre un
punto en el segundo o tercer cuadrante. La distincin entre ambos casos debe hacerse nuevamente al observar
todo el conjunto de puntos y el empleo de la regresin lineal aporta poco para una eleccin adecuada del
conjunto de rectas y del punto de corte entre ellas. En el caso presente es claro que el mejor patrn es un
abanico de rectas que se cortan en el eje de las ordenadas, por lo que puede decirse con facilida que el inhibidor
es competitivo. Note que a pesar de tener la misma Vmax, las curva de la grfica directa no dan la apariencia
de tener la misma asntatota. Esto se debe a que en cada una de las series de experimentos, al estar una
concentracin de inhibidor distinta presente, se alcanza un grado de saturacin distinta de la enzima y por ello es
muy difcil decidir si todas las rectas, dada una concentracion de sustrato suficientemente alta, alacanzarn el
mismo techo. Esto recalca la dificultad de emplear la representacin directa para el clculo grafico de los valores
de Vmax y Km. Sin embargo, con la ayuda de un programa de regresin no lineal, es posible determinar un
estimad de Km y Vmax a partir de esta representacin, cuyo valor constituye un mejor estimado que el obtenido
por cualquiera de los mtodos grficos descritos en la literatura, salvo quiz una excepcin (ref).
b) los valores de Vmax y Km se obtiene de la serie realizada en ausencia de inhibidor (O); aqu, Vmax = 1/0.38
(mmol

min
-1
mg prot
-1
) = 2.63 (mmol

min
-1
mg prot
-1
) y -1/Km = -0.51 mM
-1
Km = -1/-0.51 mM = 1.95 mM de
glutamato.

c) Finalmente, el valor de Ki puede obtenerse ahora del efecto que el inhibidor produce sobre la pendiente de la
grfica de Linewaver-Burk (que en ausencia de inhibidor es numricamente igual a Km/Vmax). De nuevo, si se
grafica el valor de estas pendientes frente a la concentracin de inhibidor empleada (panel superior izquierdo). El
valor obtenido para Ki es ahora 2.38 mM de 2-hidroxisuccinato. Es importante recalcar que cuando las rectas no
se cortan en el eje "Y" como en este caso, esto significar que el inhibidor ( no competitivo) producir
alteraciones en los valores de la pendiente y de los interceptos con la ordenada del grfico (1/v, 1/s), por tanto
aqu se podrn obtener dos valores de Ki (usualmente llamados Kiu y Kic, respectivamente). Lo que representa
una medida inversa de la fuerza con la que el inhibidor se une a la enzima cuando esta tiene su sitio activo vaco

(Kic) o de la fuerza de unin a la enzima con el sitio activo ocupado (Kiu), por ello es que se obtienen dos valores
de Ki. Si todas las rectas se cortasen en un punto sobre el eje "X", esto significara que Kiu y Kic son
numricmente idnticos, pero esta coincidencia no es el caso ms comn.


16. En este problema se presenta un caso comn en la investigacin farmacolgica. Se trata de buscar
un inhibidor que sea efectivo contra una enzima que resulta vital para un microorganimo y, por tanto,
nos puede servir para defendernos de l. Lo primero que observamos, es que en lugar de hacer
medidas a diferentes concentraciones de sustrato en presencia y ausencia del activador, aqu se
realizaron determinaciones de la actividad a una u otra concentracin fija de sustrato y con
cantidades crecientes del inhibidor.
a) Para identificar el tipo de inhibidor que acta, se pueden emplear diversas estrategias, por ejemplo, se pueden
ordenar los datos de manera que se tienen dos valores de velocidad y dos concentraciones de sustrato para
diferentes concentraciones de inhibidor. Esto es lo que se hizo en la figura inferior (panel B). Ntese que si
trazaraos rectas estas cruzaran hacia el lado negativo del eje. Dado que las medidas de actividad se realizan sin
aadir producto, una velocidad negativa carece de sentido, porque tendra que generarse sustrato en lugar de
desaparecer y si no hay producto - de dnde puede aparecer sustrato?
El resultado anterior nos indica que la cintica de esta enzima no es michaelina (hiperblica), por lo que no
podemos trazar rectas, sino que debera mos trazar curvas en esta figura. Por lo que lo nico que podemos decir
del tipo de inhibicin con estos datos es que podra ser complejo y que se necesita ms informacin para
determinarlo.

b) Respecto al valor de I50, las curvas y los valores correspondiente se muestran en la figura inmediata superior,
panel A. Como puede observarse el valor de I50 decrese cuando hay menor cantidad de sustrato. El valor de I50
nos indica cuanto inhibidor requerimos para inhibir la actividad de la enzima a la mitad en una cierta condicin.

Es evidente que el resultado nos dice que si hay ms sustrato disponible el inhibidor ser menos efectivo y refleja
la existencia de un componente competitivo en la inhibicin, lo que no significa que la inhibicin sea realmente
competitiva.
c) Como puede verse, si otros inhibidores se quisieran comparar con este, primero habra que asumir que el
mecanismo de inhibicin es el mismo. Esto suele hacerse en la investigacin farmacolgica, ya que a menudo
los compuestos a ensayar son iguales en su estructura qumica, excepto por uno o dos substituyentes. En
segundo trmino, los valores de I50 tendrn que haber sido determinados con la enzima ensayada en
condiciones idnticas, excepto por la adicin del inhibidor en estudio. Por ello, la respuesta a la pregunta que se
plantea en el problema es NO - no es posible compara los valores puesto que no fueron medidos bajo las
mismas condiciones
Cintica microbiana

1. Un sustrato S se transforma por una enzima, y la velocidad de desaparicin se mide cada 30 seg.
durante 3 min. Se prepar en tubos de ensayo una serie de seis tubos con 1.5 g de enzima (peso
mol 30,000) aadindose un mismo volumen de disolucin de sustrato a distintas concentraciones.
Los resultados estn resumidos en la tabla. Cules son las velocidades iniciales para cada tubo con
distinta concentracin de sustrato?

Tiempo (min) Sustrato transformado (mol)

0
S
1
S
2
S
3
S
4
S
5
S
0.5 0.0 0.49 0.71 1.10 1.36 1.45
1 0.1 1.05 1.52 2.24 2.74 3.00
1.5 0.2 1.66 2.36 3.48 - -
2.0 0.3 2.23 3.18 - - -
2.5 0.4 2.81 4.00 - - -
3 0.5 3.40 - - - -
Conc. Inicial
(moles ml
-1
)
0.0 2.32 4.55 12.66 38.50 200.00

Corregir cada lectura sustrayendo el cambio aparente en la disolucin testigo (
0
S) en el tiempo
correspondiente.


1
S
2
S
3
S
4
S
5
S

0.4
9
0.7
1 1.1
1.3
6
1.4
5
0.9
5
1.4
2
2.1
4
2.6
4
2.9
0
1.4
6
2.1
6
3.2
8 - -
1.9
3
2.8
8 - - -
2.4
1 3.6 - - -
2.9 - - - -

recta para cada serie de puntos.




De esta figura determinar la velocidad de sustrato transformado por minuto para cada concentracin de sustrato
en el tramo lineal de cada curva. Estos valores sern las pendientes de las porciones lineales y sern tambin
las velocidades iniciales.

[
1
S] 2.32 x 10
-3
M
1
V= 0.95 mol min
-1
[
2
S] 4.55 x 10
-3
M
2
V= 1.44 mol min
-1
[
3
S] 12.66 x 10
-3
M
3
V= 2.31 mol min
-1
[
4
S] 38.50 x 10
-3
M
4
V= 2.64 mol min
-1
[
5
S] 200.00 x 10
-3
M
5
V= 2.90 mol min
-1

Estos valores se representan unos frente a otros








Tiempo (minutos)
Su
str
at
o
tra
ns
for
m
ad
o
(
m
ol)
1
S

2
S

3
S

4
S

5
S

Conc. Sustrato (M x 10
3
)
Velo
cida
d
inici
al
(m
ol
min
-
1
)

v
0
= V
mx
[S]
K
m
+ [S]


2. Utilizando la ecuacin de Micaelis-Menten, calcular el cambio en la [S] necesaria para aumentar la
velocidad de una reaccin del 10 al 90 % de la velocidad mxima.

Poniendo v0 = 0,1 Vmx

Entonces [S] = 0,1
Km + [S]

[S] = (Km + [S]) . 0,1

[S] = 0,1 Km + 0,1 [S]

[S] - 0,1 [S] = 0,1 Km

0,9 [S] = 0,1 Km

9 [S] = Km


Es decir, [S] = Km / 9


Poniendo v0 = 0,9 Vmax encontramos que [S] = 9 Km,

entonces [S]90% = 9 Km = 81
[S]10% Km/9

Es decir, se debe aumentar la [S] 81 veces.

3. Las velocidades iniciales a varias concentraciones de sustrato para una reaccin catalizada por una
enzima hipottica son:
[S] (moles/l) V (moles/min)
5x10
-2
0.25
5x10
-3
0.25
5x10
-4
0.25
5x10
-5
0.20
5x10
-6
0.071
5x10
-7
0.0096

a) Cul es la velocidad mxima para esta reaccin?
b) Por qu la velocidad inicial permanece constante a una [S] mayor de 5x10
-4
M
c) Cul es la concentracin de enzima libre para una [S] de 5x10
-4
M?
d) Cul es la Km de la enzima?
e) Calcular la velocidad inicial para [S]=1x10
-6
y [S]=1x10
-1
f) Calcular la concentracin de producto formado en los cinco primeros minutos de reaccin utilizando 10 ml de
una disolucin de sustrato 2x10
-3
M.

a) Vmax = 0.25 mol/min, ya que por encima de [S] de 5x10
-4
no aumenta.
b) Porque todos los enzimas est ocupados transformando un sustrato.
c) Cero, todos los enzimas ocupados, a esa [S] se da la Vmax.
d) Empleando la ecuacin de Michaelis, utilizando la velocidad 0.20, 0.070 0.0096 y sus correspondientes [S],
como sabemos la Vmax, obtenemos una Km 0 1,25 x 10
-5
moles/l.
e) Sabiendo la Km y Vmax, aplicamos Michaelis utilizando esas [S], y
obtenemos: V = 0,018 mol/min y V = 0,25 mol/min.
f) A [2x10
-3
] la V = Vmax = 0,25 mol/min. En 5 min 0,25 x 5 = 1,25 mol. Tenemos 10 ml de sustrato, luego 1,25
mol / 10
-2
l = 1,25 x 10
2
mol/l

4. Se estudi la actividad de la enzima ureasa, que cataliza la reaccin:
CO(NH2)2+H2O CO2+2NH2
en funcin de la concentracin de urea, con los resultados siguientes:

Concentracin de urea (mmoles dm
-3
) 30 60 100 150 250 400

0.00 0.01 0.02 0.03 0.04
0.00
0.06
0.12
0.18
0.24
0.30
1
/
V
i
n
i
c
i
a
l

(
m
g

m
i
n

m
m
o
l
e
s
-
1
)
1/[urea] (dm
3
mmoles
-1
)
V inicial (mmoles urea consumidos min
-1
mg enzima
-1
) 3,37 5,53 7,42 8,94 10,70 12,04

Cules son los valores de Km y Vmx para esta reaccin?

Los datos se ordenan en la forma adecuada para una grfica lineal (por ejemplo, 1/Vinicial frente a 1/[S], aunque
existen otras formas de linealizar que no son motivo de nuestro estudio). La grfica de la doble inversa se indica
en la Figura. De la grfica se puede calcular que Km es 105 mmoles dm
-3
y la Vmx es 15,2 mmoles urea
consumidos mg
-1
min
-1
. Observar la distribucin de los puntos y tener presente cuando se eligen los valores
adecuados para la concentracin de sustrato al planificar un experimento.
















Ejemplo resuelto de acuerdo con el mtodo de doble inversa o de Lineweaver-Burk.







5. Se investig el efecto de un inhibidor I sobre la velocidad de una reaccin catalizada
enzimticamente sobre un solo sustrato, obtenindose los siguientes resultados

Concentracin de sustrato
(mmol L
-1
)
Concentracin del inhibidor
(mmol L
-1
)
0 0.5 1.0

-1

min
-1
)
0.05
0.10
0.20
0.40
0.50
0.33 0.20 0.14
0.50 0.33 0.25
0.67 0.50 0.40
0.80 0.67 0.57
0.83 0.71 0.63

A) De que manera acta el inhibidor? B) Obtngase los valores para Vmx, y Km.

















0
1
2
3
4
5
6
7
8
-15 -10 -5 0 5 10 15 20 25
1/[S]
0
[(mmol L
-1
)
-1
]
1
/
v
0

(

m
o
l

L

-
1

m
i
n
-
1
)
[I ] 0 (mmol L-1)
[I ] 0,5 (mmol L-1)
[I ] 1,0 (mmol L-1)
A) en funcin de 1/[S]0 para cada
concentracin del inhibidor.





















Grfica de Lineweaver-Burk del efecto de un inhibidor

A partir de la grfica se puede observar que la pendiente de las curvas se modifica con los cambios en la
concentracin del inhibidor pero no la interseccin Vmax). Por ello los datos anteriores indican
que el inhibidor I est actuando como un inhibidor competitivo.

B) se puede estimar Vmax= 1
-1
min
-1
) y de la interseccin con el eje 1/[S]0
los valores de Km=0,1 (mmol L
-1
) sin ihnhibidor, Km=0,2(mmol L
-1
) con 0.5(mmol L
-1
) de inhibidor y Km=0,3
(mmol L
-1
) con 1(mmol L
-1
)


6. A partir de los siguientes datos de una reaccin enzimtica, determinar de que manera est actuando
el inhibidor. Determinar la Km y la velocidad mxima.
[S] mM g producto/h g producto/h
(sin inhibidor) (6 mM inhibidor)
2 139 88
3 179 121
4 213 149
10 313 257
15 370 313

Se calculan los inversos de [S] y de v, producto sin inhibidor y producto con inhibidor y se representa. Sin
inhibidor: Vmax = 0,5x10
3
g/h y Km = 5 mM. Con inhibidor: Vmax es la misma y Km=9 mM.


7. Calcular qu velocidad se obtendr en una reaccin enzimtica si la velocidad mxima es igual a 100
y la concentracin de sustrato es a) 10 Km b) Km/3.
Sol.: a) 91 %; b) 25%

8. Una enzima cuya Km es 2,4 10
-4
M se ensaya con una concentracin de sustrato de 210
-7
M. Si la
velocidad media para esta reaccin con una concentracin de sustrato de 510
-2
M fue 0.128
mmoles/min, calcular la velocidad inicial en el caso anterior.
Sol.: 0.107 mol/min

9. Se detect actividad de una determinada enzima en extractos de hgado y cerebro. Para dilucidar si
la actividad detectada era atribuible a la misma enzima presente en ambos rganos, o a especies
distintas de la enzima propias de cada rgano, se llevaron a cabo estudios cinticos con distintos
sustratos. Uno de los sustratos, ensayado siempre bajo idnticas condiciones en 1 ml de volumen
1
0
0.5
-1/K
m
1/V
mx

5 6 7 8 9
0,000
0,002
0,004
0,006
0,008
0,010
K
m

(
M
)
pH
total incluyendo 0,1 ml de extractos de cada rgano, result ser transformado a las siguientes
velocidades iniciales:

Hgado Cerebro
1 0,14 0,085
2 0,23 0,14
5 0,39 0,23
10 0,50 0,30
Den las caractersticas de la enzima que puedan ser determinadas a partir de estos datos, y mustrese cules de
ellas son de inters en relacin con la cuestin de la identidad de las dos enzimas.
Sol.: los valores de Km son los mismos

10. La fructosa difosfatasa (que cataliza la hidrlisis de la fructosa difosfato a fructosa-6-fosfato y
fosfato) es inhibida por AMP. Los siguientes datos se obtuvieron a partir de un estudio de la enzima
del hgado de rata:
FDP ( moles ml
-1
)
4 6 10 20 40
AMP ( moles ml
-1
) Velocidad inicial ( moles ml
-1
min
-1
)

0 0,059 0,076 0,101 0,125 0,150
8 0,034 0,043 0,056 0,071 0,083
Comentar estos resultados en relacin a las constantes cinticas en cada caso.
moles ml
-1
; Vmx sin inhibidor 0.185 moles ml
-1
min
-1
; Vmx con inhibidor 0.102 moles ml
-
1
min
-1

Problema 11:
11. Una determinada enzima cataliza la reaccin A
B. Se ha observado previamente que la Vmx de
esta reaccin no vara dentro de un rango de pH
Por otra parte, la Km vara segn se muestra en
esta figura:
El ensayo fue realizado en presencia de 0,01 M
bufferes. Qu velocidad inicial se esperara para pH
5.5 y 8? Explique.










12. Habindose conseguido aislar de Salmonella typhimurium una enzima (E) que cataliza la reaccin
AP, se decidi hacer un estudio estructural y cintico de dicha enzima:

[A] mM 1,00 0,55 0,25 0,20
V(mmol P/ min) 1,00 0,71 0,50 0,41
V (nmol P/min) con J 0,66 0,41 0,25 0,20
donde J es un inhibidor de E cuya influencia como tal se quiere estudiar. [J] = 0,25mM.
a) Calcular la Km de la enzima estudiada para A, y Vmax para la transformacin A--P en presencia de E.
b) Que tipo de inhibidor es J?
c) Cul sera el efecto sobre la Vmax de la enzima, un aumento de la concentracin de J?

Se calcula siguiendo el mismo procedimiento que el problema 4
a) Vmax = Vmax = 1.66 mmol P/min
b) KM = 0.5 mM
c) KM = 1.25 mM (con inhibidor) (Inhibicin Competitiva)

13. La cintica de una enzima viene determinada como funcin de la concentracin de sustrato en
presencia y ausencia del inhibidor I.

[S], Mx10
-5
0.3 0.5 1.0 3.0 9.0
V(mol/min) sin inhibidor 10.4 14.5 22.5 33.8 40.5
V(mol/min) con inhibidor 10
-4
M 2.1 2.9 4.5 6.8 8.1

a) Calcular la Km y la Vmax en presencia y ausencia de inhibidor
b) Que tipo de inhibidor es?

Se calcula siguiendo el mismo procedimiento que el problema 4
a) Vmax = 50 mol/min
b) Vmax = 9.5 mol/min
c) KM = 1.1x10
-5
M
d) Inh. No Competitiva