Leccin 11.

CROMATOGRAFIA DE GASES
Gas portador Sistemas de inyeccin Horno Columnas Detectores Factores que influyen en las separaciones Aplicaciones cualitativas y cuantitativas

resolucin de problemas: industria, medicina, biologa, medioambiente, etc. desarrollo espectacular anlisis de rutina y control en gran variedad de reas

Gran poder de resolucin de compuestos orgnicos voltiles

Labilidad trmica de los solutos

(estables a la t requerida para su volatilizacin)

volatiliza Muestra c o l u m n a

Gas inerte

FM

Lquido no voltil
que recubre el interior de la columna o un soporte slido finamente dividido

FE Partculas slidas (CGS)

no interacciona con las molculas del analito, sino que su nica funcin es la de transportar al analito

(CGL)

Los analitos deben volatilizarse en la FM y deben interaccionar con la FE: disolverse o adsorberse en ella Los compuestos menos voltiles pasan ms tiempo en la FE y tardan ms tiempo en eluirse

Carrier gas/ Varian 3350 Gas Computer Controls for Chromatograph Method and Output Regulator

GC Flow Controller Cilindro de gas portador con un sistema de control de gas Portal de inyeccin de la muestra
Proporciona el gas inerte (He o N) a una velocidad de flujo controlada: tR reproducibles y disminuir el ruido del detector Un pequeo volumen de muestra, diluida con un disolvente voltil, se inyecta en la corriente de gas portador y rpidamente es volatilizada de forma que est presente un tapn de molculas Tubo de acero inoxidable, vidrio, slice fundida o tefln. Capilares (la FE recubre el interior de la columna)

Two Stage Tank Regulator

Columna
Empacadas (rellenas de pequeas partculas de soporte recubiertas de una delgada pelcula de FE lquida)

Dilute Solution Pure Sample

10 l Syringe

Horno

Se mantiene a una temperatura suficientemente alta para volatilizar una porcin de molculas de la muestra. La temperatura se puede mantener constante (condiciones isotermas) o puede aumentar durante el desarrollo cromatogrfico (t programada) Genera una seal elctrica proporcional a la concentracin de analito en el gas portador eluido en cualquier instante. Proporciona el tR y el rea total de cada componente medido.

Injector Detector

Column in Oven

Detector

Sistema de registro y tratamiento de datos

Enter from Injector

Exit to Detector

Packed Column installed in Oven Compartment.

Control Panel sets Separation Method

Su funcin es transportar los componentes voltiles de la muestra a travs de la columna. Normalmente se utiliza He o N2, tambin Ar, H2: debe ser barato debe ser inerte, de alta pureza, y no reaccionar ni con la muestra ni con la FE debe ser compatible con el detector, i.e., permitir una respuesta adecuada del mismo Su eleccin influye sobre la eficacia y tiempo de anlisis

La fuente de gas lleva asociado

reguladores de presin para el control del flujo: las presiones de entrada de 1-4 atm; i.e., caudales de 25-150 mL/min. Conducciones Medidores de caudal: pompas de jabn

Debe permitir la introduccin de una amplia variedad de muestras, incluyendo gases, lquidos y slidos, y su inyeccin rpida y cuantitativa en la corriente de gas portador.

Gases

Jeringas de cierre hermtico Vlvulas muestreadoras de gases microjeringas (0,1-10 L) e inyeccin a travs
de un disco delgado de goma de silicona (septum) tras el que se encuentra una cmara

Lquidos

de vaporizacin. Tcnica de espacio de cabeza (lquidos

voltiles) consiste en la inyeccin de una muestra gaseosa que se toma de la fase vapor de un vial donde se encuentra un lquido problema a una t determinada

Columnas capilares: Tcnicas especiales:

menor capacidad de muestra y velocidad de flujo que las de relleno

Divisor de flujo (split/splitless) Split: forma de reducir el volumen de muestra (0,1-10% del volumen inyectado) No adecuado para trazas Splitless 80% de la muestra entra en columna Muestras que pueden descomponerse al ser calentadas

Inyeccin on column

Slidos

Disolverlos Jeringa especial (poco reproducible)

Derivatizacin: compuestos de baja presin de vapor

Tubos de acero inoxidable, vidrio o tefln; L: 2-4 m;i: 2-4 mm Rellenas de forma compacta de partculas de un soporte: slido uniforme, finamente dividido, recubierto de una delgada pelcula (0,05-1m) de FE lquida enrolladas en espiral de 15 cm de dimetro Soporte slido Diatomeas (Chromosorb: A, G, P, W, T)

partculas pequeas, esfricas y uniformes buena resistencia mecnica amplia superficie especfica (1 m2/g) inerte a altas temperaturas Tamao de partcula: limitado 60-80 mesh (250-170 m) o 80-100 mesh (170-149 m) Presiones < 50 psi

Tubos capilares abiertos de vidrio, acero inoxidable o slice fundida; L: 15-100 m; i: 100-700 m Diseo mas estrecho y largo que las de relleno proporciona: mayor resolucin menor tiempo de anlisis mayor sensibilidad menor cantidad de muestra Diseos comunes de las columnas capilares: pared recubierta (WCOT): recubierta de una pelcula delgada y uniforme de FE lquida en la pared interna de la columna soporte recubierto (SCOT): un soporte slido (slice o almina) est unido a la pared interna de la columna (mayor rea superficial), y se recubre de FE lquida.
Permite analizar muestras ms grandes (anlisis de trazas) Mayor factor de retencin lo que mejora la resolucin

Fases lquidas
Baja volatilidad a la t de trabajo Estabilidad trmica

Propiedades

Inercia qumica Adecuadas caractersticas de disolvente (los valores de Ky de los solutos estn dentro de un intervalo adecuado

Seleccin del disolvente como FE es crtica para conseguir una separacin normas cualitativas para hacer la eleccin los semejantes se disuelven mutuamente la mejor FE se determina experimentalmente en el laboratorio Grosor de la pelcula: 0,1-5 m Afecta a las propiedades de retencin y capacidad de la columna

capa porosa: partculas de FE slida se unen a la pared

Injector T=0

Flow of Mobile Phase

Detector

T=10

T=20

Most Interaction with Stationary Phase Least

a.) Eddy diffusion a process that leads to peak (band) broadening due to the presence of multiple flow paths through a packed column.

Why Do Bands Spread?

a. Eddy diffusion b. Mobile phase mass transfer c. Stagnant mobile phase mass transfer d. Stationary phase mass transfer e. Longitudinal diffusion
As solute molecules travel through the column, some arrive at the end sooner then others simply due to the different path traveled around the support particles in the column that result in different travel distances. Longer path arrives at end of column after (1).

b.) Mobile phase mass transfer a process of peak broadening caused by the presence of different flow profile within channels or between particles of the support in the column.

c.) Stagnant mobile phase mass transfer band-broadening due to differences in the rate of diffusion of the solute molecules between the mobile phase outside the pores of the support (flowing mobile phase) to the mobile phase within the pores of the support (stagnant mobile phase).

A solute in the center of the channel moves more quickly than solute at the edges, it will tend to reach the end of the channel first leading to bandbroadening

Since a solute does not travel down the column when it is in the stagnant mobile phase, it spends a longer time in the column than solute that remains in the flowing mobile phase.

The degree of band-broadening due to eddy diffusion and mobile phase mass transfer depends mainly on: 1) the size of the packing material 2) the diffusion rate of the solute The degree of band-broadening due to stagnant mobile phase mass transfer depends on: 1) the size, shape and pore structure of the packing material 2) the diffusion and retention of the solute 3) the flow-rate of the solute through the column

d.) Stationary phase mass transfer band-broadening due to the movement of solute between the stagnant phase and the stationary phase.

e.) Longitudinal diffusion band-broadening due to the diffusion of the solute along the length of the column in the flowing mobile phase.

The degree of band-broadening due to longitudinal diffusion depends on: 1) the diffusion of the solute 2) the flow-rate of the solute through the column

Since different solute molecules spend different lengths of time in the stationary phase, they also spend different amounts of time on the column, giving rise to bandbroadening.

The degree of band-broadening due to stationary phase mass transfer depends on: 1) the retention and diffusion of the solute 2) the flow-rate of the solute through the column 3) the kinetics of interaction between the solute and the stationary phase

A is the multipath effect. In any real column, the packing will not be uniform in size or disposition. This causes some molecules in the mobile phase to take a longer path widening peaks. This is independent of flow velocity. B describes molecular diffusion. Even though there is a net pressure on the mobile phase, the component still diffuses the longer it is in the column. This is why this term is coupled with the inverse of the flow velocity C is the resistance to mass transfer. If the molecule cannot equilibrate between the two phases, separation does not occur. Sometimes too high of a flow velocity will increase this term, as pressure may force a component onto the stationary phase.

Columna se sita en un horno termostatizado para que: la separacin se pueda realizar a t reproducible pueda variar dentro de un amplio intervalo de temperaturas Dos modalidades de trabajo analisis isotrmico: t cte anlisis a t programada: aumento de la t con el tiempo Mezclas de analitos con punto de ebullicin muy distintos Influye sobre el equilibrio de distribucin: un aumento de la t aumenta la presin de vapor de los componentes, mucho ms que su solubilidad en la FE Hornos: pequeos, de forma cbica y con circulacin de aire

Dispositivo cuya misin es poner de manifiesto el paso de los analitos originando una seal elctrica, que debidamente amplificada, es registrada o enviada al microprocesador. Mide de forma continua una propiedad fsica o qumica del gas que circula a su travs indica el momento en que pasa un soluto; i.e., los tiempos de retencin genera una seal elctrica proporcional a la concentracin

CARACTERSTICAS 1. Respuesta lineal: amplio rango de concentraciones 2. Buena estabilidad y reproducibilidad: perodos prolongados 3. Respuesta uniforme: semejante para una variedad de compuestos 4. Adecuada sensibilidad: para trazas 5. Selectividad: para muestras complejas 6. Amplio intervalo de t de trabajo: 20 -400C 7. Alta fiabilidad y manejo sencillo

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This is the retention time in minutes

All GC conditions are set up for this experiment

The integrator handles calculation of the area under each peak and giving a relative % of each component

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Capacidad de una sustancia para transportar el calor desde una zona caliente a otra fra. A mayor conductividad trmica ms rpidamente se transporta el calor. TCD es un filamento de W, Pt, Au calentado elctricamente (material cuya resistencia elctrica aumenta cuando aumenta la t) Cuando slo llega gas portador, la resistencia es cte y la seal de salida tambin. Cuando emerge un soluto disminuye la conductividad trmica de la corriente de gas si la molcula de soluto es mayor que la de gas portador se mueve ms lentamente y conduce menos el calor la velocidad a la cual el filamento se enfra por el gas decrece proporcionalmente; el filamento est ms caliente, su resistencia aumenta, y se observa un cambio en la seal de salida

El detector responde a cambios en la conductividad trmica del flujo de gas

Las conductividades trmicas de soluto y gas portador deben ser lo ms diferentes posibles H, y He tienen conductividades trmicas ms altas (decrece al aumentar el PF) 6-10 veces mayores que las de la mayora de los compuestos orgnicos

sencillos baratos fcil de manejar

no destructivos poco selectivos poco sensible

Mide el descenso de corriente producido entre dos electrodos entre los que se sita una chapa de material radioactivo (63Ni, 3H) Esta placa emite partculas que ioniza al gas originando un flujo de electrones que producen una corriente pequea y cte. Cuando pasa un soluto cuyas molculas pueden captar electrones (grupos funcionales electronegativos) se produce un descenso de la corriente que se amplifica y se registra respuesta selectiva, y sensible a las molculas que contienen grupos como halgenos, perxidos, quinonas, y nitro; en cambio, no es sensible a grupos como aminas, alcoholes e hidrocarburos. deteccin y determinacin de insecticidas clorados. no alteran la muestra de manera significativa su intervalo lineal de respuesta normalmente se limita a unos dos rdenes de magnitud.

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Gas Chromatography-Mass Spectrometry (GC-MS)

Gas Chromatography-Mass Spectrometry (GC-MS)

Autosampler

Injection port Gas chromatography oven (containing column)

Autosampler

Injection port Gas chromatography oven (containing column)

Mass Spectrometer

Mass Spectrometer

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Gas Chromatography-Mass Spectrometry (GC-MS)

Gas Chromatography-Mass Spectrometry (GC-MS)

Gas Chromatography-Mass Spectrometry (GC-MS)

Gas Chromatography-Mass Spectrometry (GC-MS)

150 0C

120 0C

Helium

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Gas Chromatography-Mass Spectrometry (GC-MS)

Gas Chromatography-Mass Spectrometry (GC-MS)

150 0C

150 0C

120 0C

150 0C

Gas Chromatography-Mass Spectrometry (GC-MS)

Gas Chromatography-Mass Spectrometry (GC-MS)

150 0C

150 0C

150 0C

180 0C

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Gas Chromatography-Mass Spectrometry (GC-MS)

Gas Chromatography-Mass Spectrometry (GC-MS)

150 0C

150 0C

200 0C

250 0C

Gas Chromatography-Mass Spectrometry (GC-MS)

Gas Chromatography-Mass Spectrometry (GC-MS)

150 0C

150 0C

300 0C

120 0C

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Gas Chromatography-Mass Spectrometry (GC-MS)

Gas Chromatography-Mass Spectrometry (GC-MS)

150 0C

150 0C

120 0C

120 0C

Gas Chromatography-Mass Spectrometry (GC-MS)

Electron-Impact Ionisation mass spectrometry

detector 150 0C

Quadrupoles
Analyte from capillary column

120 0C e-

Kevin Mills

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Electron-Impact Fragmentation Spectra (fingerprint pattern)

Abundance Scan 2243 (40.878 min): 00112210.D 458 255 4500

4000

3500

3000

75

2500

213

2000

107 55

1500

145

1000 311 196 275 230 329

353 173 128

500

386 441

0 60 80 100120140160180200220240260280300320340360380400420440460 m/z-->

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