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U Un ni iv ve er rs si id da ad de e F Fe ed de er ra al l d de e P Pe er rn na am mb bu uc co o

C Ce en nt tr ro o d de e C Ci i n nc ci ia as s B Bi io ol l g gi ic ca as s
P Pr ro og gr ra am ma a d de e P P s s- -g gr ra ad du ua a o o e em m Gentica
Nvel Mestrado










Relacionamento gentico de espcies do gnero
Philodendron (Araceae, Monocotyledoneae) atravs
do marcador DAF (DNA Amplification
Fingerprinting).




Isaac Farias Cansano



Recife, Maro de 2008
U Un ni iv ve er rs si id da ad de e F Fe ed de er ra al l d de e P Pe er rn na am mb bu uc co o
C Ce en nt tr ro o d de e C Ci i n nc ci ia as s B Bi io ol l g gi ic ca as s
P Pr ro og gr ra am ma a d de e P P s s- -g gr ra ad du ua a o o e em m Gentica
Nvel Mestrado



Relacionamento gentico de espcies do gnero
Philodendron (Araceae, Monocotyledoneae) atravs
da tcnica de DAF (DNA Amplification
Fingerprinting).



Dissertao apresentada ao Programa de Ps-graduao em
Gentica da Universidade Federal de Pernambuco, como parte
dos requisitos necessrios para obteno do grau de Mestre em
Gentica.








Recife, Maro de 2008

A Al lu un no o: : I Is sa aa ac c F Fa ar ri ia as s C Ca an ns sa an n o o
O Or ri ie en nt ta ad do or ra a: : D Dr r
a a
A An na a M Ma ar ri ia a B Be en nk ko o- -I Is se ep pp po on n, ,
D De ep pt to o. . d de e G Ge en n t ti ic ca a, , C Ce en nt tr ro o d de e C Ci i n nc ci ia as s B Bi io ol l g gi ic ca as s, ,
U UF FP PE E. .
2





























Cansano, Isaac Farias.
Relacionamento gentico de espcies do gnero Philodendron (Araceae,
Monocotyledoneae) atravs da tcnica de DAF (DNA Amplification
Fingerprinting). / Isaac Farias Cansano. Recife: O Autor, 2008.

77 folhas : il., fig. tab. map

Dissertao (mestrado) Universidade Federal de Pernambuco. CCB.
Gentica, 2008.

Inclui bibliografia e anexo.

1. Philodendron Floresta Amaznica 2. Meconostigma 3. DNA Amplification
Fingerprinting (DAF) I. Ttulo.

582.547.1 CDU (2.ed.) UFPE
584.64 CDD (22.ed.) CCB 2008- 112



3

3


Aos meus pais:
Antonio Teles Cansano e Ana Farias Cansano.



4
AGRADECIMENTOS

Primeiramente agradeo a Deus, por tudo que acontece e aconteceu na minha vida.
Aos meus pais, Antonio Teles Cansano e Ana Farias Cansano, que so minhas
estrelas referenciais e nos quais me espelho a cada dia. Eles plantaram sinceridade, paz,
dignidade, sensibilidade e sabedoria. Por todos os momentos, juntos ou separadamente, mesmo
com motivos de fora maior, souberam colocar na hora certa palavras de pacincia, ajuda,
fraternidade, carinho e um grande amor, sendo os nicos que sabem o que significa este
sentimento. Pelos momentos rduos e conflitantes da minha vida, onde souberam usar
perfeitamente as palavras, seja para me confortar, seja para alertar-me sobre minha vida. A meus
pais, deixo os mais sinceros e eternos agradecimentos por todos os momentos proporcionados em
todas as fases da minha vida, passando pela infncia, adolescncia e a fase adulta.
Aos meus irmos, Romero e Janaina, pelo apoio, fora e incentivo dados durante esta
caminhada.
minha orientadora Profa. Dra. Ana Maria Benko-Iseppon, pela orientao, pela
confiana, exemplo de dedicao e momentos de aprendizagem, os quais foram determinantes na
execuo deste trabalho e para minha ascenso, tanto pessoal como tambm profissional. Dedico
a ela toda minha gratido.
Aos amigos, mestrandos, doutorandos e companheiros de bancada Diego Sotero, Geyner
Alves, Alberto Vincus, Amaro e Maria Luciene, pela amizade, companheirismo, respeito,
admirao, colaboraes, incentivos, parcerias, momentos de descontraes tanto no laboratrio
como em diversos locais. Minha eterna saudade a todos.
Ao super e inesquecvel amigo Dr. Mrio Correia, pelo seu companheirismo,
transparncia, profissionalismo, sinceridade e sensibilidade; pelos ensinamentos terico-prticos,
discusses, troca de idias e apoio; como tambm no poderia esquecer de 2004, em pleno
carnaval, quando ele se prontificou a me ajudar e me orientou com plena firmeza e satisfao. A
voc dedico no s minha eterna gratido, mas tambm tudo o que aconteceu em minha estada
em Recife, pois voc soube me ajudar em momentos decisivos em toda minha vida profissional
nesta cidade, lembranas que ficaro guardados enquanto viver.
Aos demais amigos e companheiros que fizeram ou ainda fazem parte do Laboratrio de
Gentica e Biotecnologia Vegetal, como Graduandos Analice, Thais Cavalcanti eSantelmo
Selmo, Karla Camila e Rodrigo, como a graduada Kenia Lucena, das Mestrandas ou j
Mestres Ana Carolina, Nina Mota, Hayana Azevedo, Luis Carlos Bellarmino e Lidiane
Amorim e aos do Doutorado em Gentica e Cincias Biolgicas como Ebenezer Bernardes,
5
Kyria Bortoletti, Ronaldo Nali e Pedranne Barbosa pelos momentos de trabalho ou de
divertimento, vocs sempre ficaro na minha memria.
tcnica de laboratrio Claudete Marques e aos estagirios Diego Valrio e Derovil
Santos, pelos auxlios, companheirismo e dedicao no que fazem, em que, com certeza, faro
muita falta.
Aos professores que lecionam no programa de Ps-graduao em Gentica, pela
participao na minha formao profissional.
Ao Prof. Dr. Reginaldo de Carvalho, por sua ateno, sinceridade, companheirismo e
amizade.
Profa. Dr. Ana Christina Vidal (Depto. de Gentica UFPE), pelos auxlios,
esclarecimentos prestados em momentos muito oportunos, participao e amizade.
Aos colegas do Mestrado/2006, pelos timos momentos vividos juntos, em especial aos
amigos Carlos J os Saldanha e Neto Costa Ferreira, pelo companheirismo em situaes boas ou
rduas.
Ao Departamento de Gentica da UFPE, que disps de toda a infra-estrutura para que
este trabalho fosse realizado. Aos funcionrios, tcnicos e ao todo corpo docente, meus sinceros
agradecimentos. Em especial Dona Zizi e a Romildo, pessoas da mais inteira confiana e
dedicao em seus devidos trabalhos.
Coordenao de Aperfeioamento de Pessoal de Nvel Superior - CAPES por
viabilizar a realizao deste trabalho, concedendo uma bolsa de Mestrado.
Smia Rgia, pelo apoio e ajuda dada para a realizao deste trabalho.
A todos os amigos, familiares e ex-professores que colaboram de alguma forma para que
este sonho se concretizasse. Em especial, Silvnia Belo, Milena Cruz, Felipe, Riquinho, Paulinho
Alecrim e seus respectivos pais, Anderson Lssio, Moacyr Neto, Fbio e Fernando Santana,
Felipe Silva, Maria do Carmo, Luisinho L., Alisson e Domingos Svio Farias, Tibucio Alves,
Estemar Velho e Profs. Henrique Douglas e Vicente Milito. A vocs deixo um forte abrao.







6
SUMRIO
Pg
DEDICATRIA 4
AGRADECIMENTOS 5
SUMRIO 7
LISTA DE FIGURAS 9
LISTA DE TABELAS 10
LISTA DE ABREVIATURAS 11
RESUMO 13
ABSTRACT 14
1. INTRODUO 15
2. REVISO DA LITERATURA 17
2.1 Amaznia: Biodiversidade e Delimitao Geogrfica 17
2.1.1 Reserva Florestal Adolpho Ducke 18
2.1.1.1- Caractersticas Gerais 19
2.1.2 Floresta Nacional do Caxiuan e a Estao Cientfica Ferreira Penna 20
2.1.2.1 Caractersticas Gerais 20
2.2 Breve Histrico da Famlia Araceae 22
2.2.1- Histria do Gnero Philodendron 22
2.3 Taxonomia e Botnica de Araceae 25
2.3.1 Taxonomia e Botnica dePhilodendron 27
2.4 Importncia Econmica 29
2.5 Marcadores Moleculares em Vegetais 31
2.5.1. Anlise de Marcadores e Gerao de Dendrogramas 33
2.6 Marcadores Moleculares em Araceae 34
3 REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS 37
7
4 MANUSCRITO DE ARTIGO CIENTFICO: 44
Folha de Rosto 46
Resumo 47
Introduo 48
Materiais e Mtodos 49
Resultados e Discusso 53
Referncias Bibliogrficas 61
5 CONCLUSES GERAIS 69
6 ABSTRACT 70
7 ANEXOS 71
7.1 - Instrues para Autores - Botanical Journal of the Linnean Society 72

















8
LISTA DE FIGURAS


Reviso Bibliogrfica


Figura 1 Mapa destacando os Estados brasileiros que constituem a Amaznia Legal. 17
Figura 2 Foto satlite da Reserva Florestal Adolpho Ducke, localizada na periferia de
Manaus, coordenadas 02 53 de latitude S e 59 58 de longitude W.
19

Artigo Cientfico


Figura 1 Perfil de um gel de DAF utilizando os primers P15-1, OPJ -19, OPD-6 e OPK-4 em
8 acessos de Philodendron, Monstera e Dieffenbachia coletados das regies da
Amaznia e Mata Atlntica Brasileira.
62
Figura 2 Dendrograma gerado com base na seleo de primers. A anlise foi feita pelo
mtodo UPGMA utilizando o programa MEGA 4 verso para Windows. Legendas:
G1 e G2: espcies do gnero Philodendron; GE: Grupo externo: Dienffenbachia e
Monstera.
62
Figura 3 Perfil de um gel de DAF utilizando o primer OPL-14 em 35 acessos de
Philodendron, Monstera, Dieffenbachia e Scaphispata coletados das regies da
Amaznia e Mata Atlntica Brasileira.
63
Figura 4 Dendrograma gerado com Neighbour-J oining pelo programa MEGA 4 verso para
Windows usando mtodo DAF com 12 primers. Legendas: C: Clado, Sc: Subclado e Sg:
Subgnero. GE1 e GE2: Grupos externos formados pelos Gneros Dieffenbachia,
Monstera e Scaphispata representados pelos nmeros (1, 2, 3, 4 e 5). G1 e G2: Grupos 1 e
2 formados pelo gnero Philodendron, formando clados representados pelas letras
maisculas (A, B, C, D, E, F, G, H, I, J , L, M, e N) e subclados representados pelas letras
minsculas (a, a
1
, b, b
1
, c, c
1
, d, d
1
, e, e
1
, f, f
1
, g
1
, h
1
, i
1
, j
1
). Sg1: Subgnero Philodendron;
Sg2: Subgnero Mecanostigma. A barra significa: escala de diversidade gentica. Fonte dos
nmeros cromossmicos ocorrentes no gnero: Correia-da-Silva, et al. (2007) e * Mayo
(apud Peterson, 1989).
64








9
LISTA DE TABELAS


Artigo Cientfico
Tabela 1
Material vegetal utilizado na anlise molecular com DAF, incluindo local de coleta
e nmero de acesso. Todas as espcies foram coletadas no Brasil e atualmente
esto sendo cultivadas na Universidade Federal de Pernambuco. Ordem
taxonmica dividida em gnero e subgnero. Numerao na coluna de ordem em
relao figura 3. Abreviao: P.=Philodendron Schott; D.= Dieffenbachia.
Fontes dos nmeros cromossmicos ocorrentes no gnero: Correia-da-Silva, et al.
(2007) e *Mayo (apud Peterson, 1989).


65


Tabela 2
Primers utilizados na seleo, incluindo seqncia e quantidade de bandas
produzidas. Nmero de bandas especficas (intraespecfico, interespecfico e
intergenrico) quanto ao nvel (monomorfismo e polimorfismo). Primers
sintetizados pela Operon Tecnologies.

66

Tabela 3
Primers selecionados para anlise das 32 amostras selecionadas para este estudo,
incluindo referncia e seqncia dos mesmos. Anlise feita a nvel de
polimorfismos dentro do gnero Philodendron e os demais gneros.
67











10
LISTA DE ABREVIATURAS









AFLP Amplified Fragment Length Polymorphism (Polimorfismo de
comprimento de fragmentos amplificados)
AM Amaznia
A-T Adenina-Timina
ca. Cerca de
CTAB Cetyl-trimethyl-amoniumbromide (brometo de cetil-trimetilamnio)
DAF DNA Amplification Fingerprinting (Amplificao de fingerprinting de DNA)
DNA Deoxyribonucleic Acid (cido Desoxirribonucleico)
dNTP Dinucleotdeo trifosfato
ECFPn Estao Cientfica Ferreira Penna
G-C Guanina-Citosina
IBAMA Instituto Brasileiro do Meio Ambiente e dos Recursos Naturais Renovveis
INPA

Instituto Nacional de Pesquisas da Amaznia
kg Quilograma
Km
2
Quilmetro quadrado
m Metros
MCT Ministrio da Cincia e Tecnologia
ME Minimal Evolution
MEGA 4 Molecular Evolutionary Genetics Analysis (Version 4.0)
mg Miligrama
MgCl
2
Cloreto de Magnsio
mL Mililitros
mM milimolar
MP Mxima Parcimnia
MPEG Museu Paraense Emlio Goeldi
ng Nanogramas
NJ Neighbor-joining
NTSys Numerical Taxonomy And Multivariate Analysis System
OTU Operational Taxonomic Unity (Unidade Taxonmica Operacional)
PA Par
pb Pares de bases
11
PCR Polymerase Chain Reaction (Reao polimerase em cadeia)
RAPD Random Amplified Polymorphic DNA (Polimorfismo de DNA
amplificado ao Acaso).
RFLP Restriction fragment length polymorphism (Polimorfismo de
comnprimento de fragmentos de restrio)
RNA Ribonucleic Acid
Taq Thermophylus aquaticus
UFPE Universidade Federal de Pernambuco
UPGMA Unwheited Pair Group Method with Arithmetic Mean
VNTR Variable Number of Tandem Repeats (Nmero Varivel de Repeties
em Tandem)
g Micrograma
L microlitro
M micromolar
2n Nmero cromossmico diplide




























12
RESUMO




O gnero Philodendron (Araceae) apresenta destacada importncia no apenas devido a seu
contingente populacional, mas tambm pela ampla utilizao ornamental, devido beleza e
diversidade de formas e cores de suas folhagens. Conta com aproximadamente 600 espcies j
registradas, distribuindo-se endemicamente nas Amricas e apresentando grande diversidade na
regio Amaznica na Mata Atlntica, onde os exemplares do presente estudo foram coletados.
Marcadores DAF (DNA Amplification Fingerprinting) so teis na gerao de polimorfismos
especialmente em nvel intra e interespecfico, sendo informativos em anlises de diversidade
gentica. No presente trabalhos 37 primers foram avaliados em uma amostragem inicial incluindo
seis espcies de Philodendron (dois acessos de P. megalophyllum, e um acesso de cada espcie: P.
imbe, P. ornatum, P. pedatum e P. sphalerum), bem como em dois txons testados como grupo
externo: Dieffenbachia elegans e Monstera dubia. A partir desta seleo, 12 iniciadores decmeros
foram selecionados como mais informativos. Em uma avaliao mais abrangente usando-se os
primers selecionados, foram avaliados membros de 26 acessos de 18 espcies de Philodendron,
comparados a representantes de Dieffenbachia (2 spp.) Monstera (3 spp.) e Scaphispatha (1 spp.).
Todas as espcies de Philodendron estudadas pertencem ao subgnero Philodendron, com exceo
de P. goeldi e P. solimoesense do sbg. Meconostigma. No total 1108 bandas polimrficas foram
includas na matriz de dados para a gerao do dendrograma usando o mtodo de Neighbour-J oining
(bootstrap de 1000 replicaes, programa MEGA 4). O dendrograma foi associado a nmeros
cromossmicos das espcies analisadas, permitindo uma avaliao comparativa de tendncias
cariotpicas luz dos grupamentos gerados pelos marcadores DAF. Espcies com 2n=32 agruparam-
se no dendrograma, enquanto espcies com 2n=30 e 34 uniram-se em um clado separado.
Consideraes adicionais sobre as relaes reveladas no presente trabalho com relao ao sbg.
Philodendron so tambm discutidas.


Palavras-chave: Philodendron, Meconostigma, DNA Amplification Fingerprinting, Floresta
Amaznica, Mata Atlntica.

Email: isaac.farias@gmail.com


13
ABSTRACT


The genus Philodendron (Araceae) presents highlighted importance not only due to its populational
abundance, but also because of its ornamental use, resulting from the diversity of its leaves shapes
and colors. Counts with about 600 registered species, endemic in the Americas and with substantial
diversity in the Amazon and Atlantic forests, where the presently studied material has been
collected. DAF (DNA Amplification Fingerprinting) markers are useful to generate polymorphisms
especially at intra- and interspecific levels, very informative in genetic diversity evaluation. The
present work evaluated 35 primers in an initial sample including six Philodendron genotypes (two
populations of P. megalophyllum, and a single population of each species: P. imbe, P. ornatum, P.
pedatum and P. sphalerum), as well as two taxa, here tested as outgroups: Dieffenbachia elegans and
Monstera dubia. After the selection step 12 decamers more informative primers were selected. In a
most comprehensive evaluation using the selected primers, 26 populations out of 18 Philodendron
species were analyzed, as compared with genotypes of Dieffenbachia (2 spp.) Monstera (3 spp.) and
Scaphispatha (1 sp.), as outgroup candidates. All Philodendron species belonged to the large (and
controversial) subgenus Philodendron, with exception of P. goeldi and P. solimoesense of sbg.
Meconostigma. A total of 1108 polymorphic bands have been included in the data matrix for the
generation of a dendrogram using Neighbour-J oining (bootstrap with 1000 replications, program
MEGA 4). The generated dendrogram was associated with chromosome numbers of the analyzed
species, permitting a comparative evaluation of caryological trends besides genetics relationships
revealed by DAF. In general species with 2n=32 grouped together, while species with 2n=30 and 34
grouped in a separate clade. Further relationships revealed in the present work regarding the sbg.
Philodendron are also discussed.



Key-words: Philodendron, Meconostigma, DNA Amplification Fingerprinting, Amazon rainforest,
Atlantic forest.

Email: isaac.farias@gmail.com







14
1. INTRODUO


A famlia das Araceae J uss. pertence classe das monocotiledneas, estimando-se que
compreenda 105 gneros e 3.500 espcies. Sua distribuio mostra-se predominantemente tropical;
entretanto, a famlia ocorre em todos os continentes, exceto na Antrtida (Heywood, 1993; Mayo, et
al., 1997).
No Brasil, a famlia est representada por 30 gneros e 402 espcies, representando mais de
um tero de todos os gneros da famlia (Mayo e Barroso, 1997). Vrios membros da famlia
Araceae so valorizados por suas folhagens ornamentais ou por suas inflorescncias exticas,
destacando-se os gneros Anthurium Schott, Philodendron Schott e Monstera Adans. Ocorrem
naturalmente em locais quentes e midos, sombreados ou abertos, ou ainda como epfitas em
florestas tropicais. Menos freqentemente, observa-se tambm a existncia de plantas rupculas, que
crescem sobre rochas, como no caso de algumas espcies de Philodendron e Anthurium, ou ainda
aquticas, como o gnero Pistia L. (J oly, 1975; Heywood, 1993).
O gnero destaca-se por sua significativa importncia ecolgica, diversidade de hbitos e
pela presena em diferentes ecossistemas, bem como pelo potencial ornamental. O Brasil se
sobressai como o pas com o maior nmero de espcies, com relevncia destacada na floresta
Amaznica e na Mata Atlntica, embora espcies bem adaptadas estejam presentes tambm no
cerrado e nos campos rupestres.
O gnero Philodendron pertence subfamlia Philodendroideae, tribo Philodendreae (Mayo,
1990), sendo um dos mais importantes da famlia Araceae, no s pelo contingente populacional,
mas tambm pela ampla utilizao paisagstica, devido beleza de sua folhagem. Conta com
aproximadamente 600 espcies j registradas (Mayo et al., 1997), distribuindo-se endemicamente
nas Amricas. Atualmente o gnero dividido em trs subgneros: Philodendron, Pteromischum e
Meconostigma, apresentando caractersticas morfolgicas, anatmicas e biogeogrficas prprias
(Mayo, 1988). O surgimento de diversas espcies novas, encontradas em estudos de populaes
brasileiras (Nadruz, 1995), reflete a carncia de novas pesquisas no sentido de melhorar o
conhecimento da diversidade do gnero, elucidando tambm vrias lacunas existentes em algumas
regies. Alm disso, existe uma grande carncia de estudos genticos visando elucidar os processos
evolutivos e adaptativos que regem os ecossistemas que envolvem a floresta Amaznica e o domnio
da Mata Atlntica.
Estudos moleculares tm sido pouco conduzidos na famlia Araceae, principalmente em
gneros neotropicais, como o caso de Philodendron, devido ao baixo nmero de populaes
coletadas, carncia de taxonomistas e tambm por dificuldades no isolamento de DNA genmico de
15
boa qualidade, especialmente devido presena de compostos fenlicos e polissacardeos
contaminantes.
O presente estudo visou caracterizar geneticamente espcies nativas do gnero Philodendron
ocorrentes na Amaznia brasileira, incluindo populaes da Amaznia Oriental (Floresta Nacional
do Caxiuan, Melgao, PA), da Amaznia Central/Ocidental (Reserva Florestal Adolpho Ducke,
Manaus, AM), como tambm da regio Nordeste Brasileira (bioma Mata Atlntica) atravs da
gerao de marcadores dominantes do tipo DAF (DNA Amplification Fingerprinting).
Comparaes entre os dados obtidos e dados citogenticos (nmeros cromossmicos), bem
como informaes sobre as classificaes propostas para as espcies analisadas so discutidas,
visando fornecer subsdios para um melhor entendimento da diversidade e das relaes
infragenricas deste importante gnero.
16
2. REVISO DA LITERATURA

2.1. Amaznia: Biodiversidade e Delimitao Geogrfica

A Amaznia, localizada ao norte da Amrica do Sul, ocupa uma rea total de mais de 6,5
milhes de quilmetros quadrados, fazendo parte do territrio de nove pases: Brasil, Venezuela,
Colmbia, Peru, Bolvia, Equador, Suriname, Guiana e Guiana Francesa. Cerca de 85% da regio,
no entanto, fica em territrio brasileiro, onde ocupa mais de 5 milhes de quilmetros quadrados,
aproximadamente 61% da rea do pas (Figura 1). Sua populao, entretanto, corresponde a menos
de 10% do total de habitantes do Brasil e sua densidade demogrfica detentora de 3,2
habitantes/km
2
. S a Amaznia brasileira sete vezes maior que a Frana e corresponde a 32 pases
da Europa Ocidental. A ilha de Maraj, que fica na embocadura do rio, maior que alguns pases
como a Sua, a Holanda ou a Blgica. (Wikipdia, 2007).
Em termos administrativos brasileiros, a regio chamada Amaznia Legal (Figura 1)
composta dos seguintes estados: Acre, Amap, Amazonas, Par, Rondnia, Roraima, alm de parte
dos estados de Mato Grosso, Tocantins e Maranho (Wikipdia, 2007).

Figura 1. Mapa ilustrando os Estados brasileiros que constituem a Amaznia Legal. Fonte: SIVAM.

Esta regio possui mais de 200 espcies diferentes de rvores por hectare, possuindo tambm
1.400 tipos de peixes, 1.300 pssaros e 300 de mamferos, totalizando mais de 2 milhes de espcies,
a Amaznia representa um tero de toda a rea de florestas tropicais do mundo, sendo essencial para
o clima e a diversidade biolgica do planeta (SIVAM, 2006).
Trata-se da maior bacia de gua doce do planeta, considerada uma das maiores riquezas do
sculo XXI, devido ao aumento populacional e escassez de fontes hdricas e minerais. Detm a
maior fonte natural no mundo para produtos farmacuticos e bioqumicos, sendo tambm detentora
de 1/3 do total da rea de florestas tropicais do planeta.
17
Contm ainda aproximadamente 30% da biodiversidade da Terra; dispondo de jazidas
minerais de metais nobres dos mais variados tipos, acumulando recursos da ordem de US$ 1,6
trilhes. Destacam-se trs tipos de vegetao na Amaznia Legal: (a) floresta ombrfila densa
(floresta tropical pluvial); (b) disjunes da campinarana (campinas) e (c) uma disjuno da savana
estpica (campo do alto do rio Surumu), rea com intensa ao antrpica (SIVAM, 2006).
A "mata de terra-firme", de acordo a imagens espaciais, possui um arqutipo heterogneo
relativo sua florstica e morfologia. Padres de distribuio geogrfica comum a vrias espcies,
definem provncias fitogeogrficas distintas. Assim, existem grandes divergncias entre a
composio florstica da Amaznia Oriental e Ocidental e, dentro de cada uma dessas reas, entre o
norte e o sul do divisor formado pelos rios Solimes e Amazonas (Ribeiro et al., 1999). Algumas
reas, como a regio de Manaus, destacam-se por apresentar grande nmero de espcies endmicas
(Correia-da-Silva et al., 2007).


2.1.1. Reserva Florestal Adolpho Ducke

A Reserva Florestal Ducke, formada por uma rea de 100 km
2
(10 x 10 km), pertence ao
Instituto Nacional de Pesquisas da Amaznia (INPA) desde 1963. No incio da dcada de 50 foram
feitas as primeiras coletas botnicas no local. At 1972 a rea foi destinada a experimentos
silviculturais e foram executados plantios de espcies com importncia econmica, ocupando menos
de 2% da rea total. Posteriormente, a rea foi declarada Reserva Biolgica, mantendo-se a cobertura
vegetal intacta. Devido proximidade com Manaus, a rea constitui-se atualmente em uma das reas
da floresta amaznica mais prspera em estudos das mais diversas linhas. As pesquisas, no entanto,
ficaram concentradas na poro noroeste da Reserva, numa rea correspondente a 1/5 da rea total
(Ribeiro et al., 1999).

A reserva leva o nome de um dos maiores defensores da regio, o pesquisador Adolpho
Ducke. Nasceu em Trieste em 1876. Em 1899 comeou a trabalhar na Amaznia como entomlogo
no Museu Emlio Goeldi, ento Museu Paraense, empenhando-se posteriormente a pesquisar
Botnica. Trabalhou principalmente na Amaznia, excursionando por todas as regies. Publicou 180
artigos e monografias, dedicando-se principalmente ao estudo de Leguminosae. Descreveu 900
espcies e 50 gneros. Permaneceu no Museu Paraense at 1918, colaborando com outras
instituies como J ardim Botnico do Rio de J aneiro e Instituto Agronmico do Norte. Foi um dos
maiores conhecedores da flora amaznica. Em 1954, no final da carreira, sugeriu ao INPA a criao
18
de uma Reserva, expressando sua preocupao com a preservao da floresta amaznica. Morreu em
Fortaleza em 1959 (Lima, 2005).


2.1.1.1. Caractersticas Gerais

Atualmente a floresta da Reserva Ducke apresenta-se pouco alterada. At 1991, as alteraes
na paisagem visveis a partir de imagens de satlite, representavam apenas 5% da rea total (figura
2). Com o decorrer dos anos a cidade chegou aos limites Sul e Oeste da Reserva, hoje adjacente ao
bairro Cidade de Deus. Apenas no limite Leste a Reserva continua ligada floresta contnua. Os
principais problemas de extrativismo e invaso foram minimizados com a construo em 1994/95 de
uma cerca nos limites Sul e Oeste e por uma fiscalizao mais rgida. A caa uma atividade
bastante intensa e constitui um dos principais problemas (Ribeiro et al., 1999).

Figura 2. Foto satlite da Reserva Florestal Adolpho Ducke, localizada na periferia de Manaus, coordenadas 02 53 de
latitude S e 59 58 de longitude W. Fonte: INPE (Instituto Nacional de Pesquisas Espaciais).

A paisagem predominante na Reserva do tipo colinosa. A altitude latitudinal entre os plats
originais e as reas mais baixas de aproximadamente 80 m. Os plats so formados por solos
argilosos de sedimentos mais antigos. Nos baixios, ocorrem solos arenosos e mais recentes, os quais
seriam antigas praias e fundo de lagos, possivelmente remanescentes da poca interglacial quando o
Rio Negro estava a poucos metros acima do nvel atual (Ribeiro et al., 1999).
Atualmente a Reserva destinada apenas para pesquisa e o acesso controlado. Autorizaes
para visita ou atividades de pesquisa devem ser feitas junto a Coordenao de Suporte das Estaes e
Reservas do INPA, alm dos rgos fiscalizadores das esferas municipal, estadual e federal. A
19
topografia do dossel no local da Reserva suavemente saliente, com ondulaes de mais ou menos
10 m de profundidade e que ocorrem a intervalos de aproximadamente 300 m. Cerca de 75% desta
coberta por floresta natural e o relevo no topo do dossel sinuoso, devido ao crescimento diferencial
da vegetao. Foram catalogados at o momento 12 gneros pertencentes famlia Araceae, os quais
compreendem 55 espcies, no mbito da Reserva (Ribeiro et al., 1999).


2.1.2. A Floresta Nacional do Caxiuan e a Estao Cientfica Ferreira Penna


A Flona do Caxiuan localiza-se no interflvio entre o Tocantins e o Xingu, na Amaznia
Oriental, no municpio de Melgao (Par), a oeste de Belm. Fica a 400 quilmetros da capital
Belm. O levantamento mais recente indicou que a regio abriga 29 famlias com 206 membros que
sobrevivem da agricultura, pesca, coleta de castanha, extrao de leos naturais e produo de um
rico artesanato com influncia indgena (Lisboa e Ferraz, 1999).
A Estao Cientfica Ferreira Penna possui uma base fsica de 3.000 m
2
em 33.000 hectares
da Floresta Nacional de Caxiuan. Foi inaugurada em 1993, com a finalidade de apoiar programas
de pesquisa de curto, mdio e longo prazo, do Museu Goeldi e da comunidade cientfica nacional e
internacional (Lisboa e Ferraz, 1999).
De acordo com o Museu Goeldi, trata-se de uma rea preservada, possuindo alguns dos
ecossistemas naturais mais representativos da regio amaznica, como a floresta de terra firme,
igap e vrzea. Inmeros projetos de pesquisa esto em desenvolvimento na estao, que tambm
apia teses de mestrado, doutorado, cursos de campo, seminrios e visitas orientadas (Lisboa e
Ferraz, 1999).

2.1.2.1. Caractersticas Gerais

Considerada como um dos ambientes naturais mais bem conservados, e com sua baixa
densidade demogrfica determinados pelo isolamento da criao da Floresta Nacional de Caxiuan
na dcada de 60, conjuntamente com uma alta biodiversidade local, resultaram na influncia do
Museu na escolha de Caxiuan. Seus limites demogrficos so, ao Norte, o divisor de gua entre as
bacias do rio Caxiuan e do rio Amazonas, ao Sul, o rio Caxiuan, a leste, a baia de Caxiuan e o
igarap Laranjal e a Oeste o igarap Grande. Seus rios so de guas negras, ricos em plantas
aquticas (Lisboa e Ferraz, 1999).
20
A floresta de terra firme o ambiente mais extenso e diverso, ocupando cerca de 85% da
rea. Cresce sobre latossolos amarelos de origem terciria, com textura argilo-arenosa, cidos,
profundos e oligotrficos. Em estudos realizados recentemente na rea, foi registrado que o hbito
arbreo quase completamente predominante sobre as demais formas da vida vegetal. A biomassa
da floresta de terra firme densa, com volume de madeira de acima de 200 m
3
/ha e a rea basal
maior que 20 m
2
por hectare, quando se inclui somente rvores com DAP (dimetro da altura do
peito) com valores aproximados a 10 cm. Nas reas de segmento secundrio, a matria orgnica
agregada por unidade de rea positivamente relacionada ao tempo decorrido da sucesso (Lisboa e
Ferraz, 1999).
O sub-bosque da floresta de terra firme sombreado com passagem de pouca luz direta, exceto
nas frestas existentes entre copas e nas clareiras naturais formada por queda de rvores. Na
vegetao secundria recente, o estrato inferior bem iluminado. De acordo com Sioli (1951), a
floresta de vrzea localiza-se na bacia de Caxiuan, contudo esta no tpica do esturio amaznico,
pois as guas apresentam baixo teor de sedimentos. Entretanto, seu solo hidromrfico com
considervel teor de argila de aluvio, depositada em pocas anteriores, quando a baa de Caxiuan
detinha uma ligao com o canal norte do rio Amazonas. Nas florestas inundveis, a vrzea, que
cresce sobre solos de aluvio quaternrio ricos em nutrientes, apresenta biomassa vegetal maior
quando comparada ao igap (Lisboa e Ferraz, 1999).
A floresta de igap relativamente baixa e de menor estrutura comparado floresta de terra
firme. Cresce sobre solos hidromficos, tambm de origem terciria, cida e pobre em nutrientes,
devido principalmente ausncia de sedimentos nas guas escuras dos rios da bacia de Caxiuan. A
biomassa de igap inferior quela registrada para as florestas de terra firme e vrzea (Lisboa e
Ferraz, 1999).
A vegetao savanide recorda a paisagem dos campos de Maraj, dominada pelo estrato
herbceo contnuo onde se destacam as gramneas. Acredita-se que esta rea seja relictual de leito de
rio e baas, testemunhas da poca quando os canais que drenavam do Amazonas ainda estavam em
atividade. Seu solo, a exemplo da vrzea e da paloevrzea, hidromrfico e argiloso, de origem
quartenria (Lisboa e Ferraz, 1999).
J a paleovrzea, apresenta uma vegetao mais alta do que na citada anteriormente, com
solo hidromrfico. A misticidade da flora grandiosa, contando com elementos de floresta de vrzea
e de terra firme. Atualmente sofre influncia nfima de inundao distando, em mdia, cerca de 300
m da margem da baa de Caxiuan (Lisboa e Ferraz, 1999).


21
2.2. Breve Histrico da Famlia Araceae

O nome Araceae vem de "arum", derivado diretamente do grego antigo "aron", que significa
colheita ou produtos do campo. No que diz respeito s arceas, este conceito pode estar relacionado
s espcies comestveis como "taioba" e "inhame". Registros macrofsseis mostram claramente que
espcies pertencentes s Araceae j se apresentavam diferenciadas e com caracteres derivados desde
o incio do Tercirio. Pelo menos dois gneros atuais (Philodendron e Peltandra Rafin.) so
reportados desde o Eoceno (Grayum, 1990). Outros seis gneros (Pistia L., Arisaema Mart.,
Lysichiton Schott, Stenospermation Schott, Orontium L. e Calla L.) foram citados por Gregor e
Bogner (1984), sendo conhecidos de uma poca no especfica do Tercirio. Crepet (1978) sugeriu
que as Araceae dispersaram-se provavelmente a partir do supercontinente Pangia onde se
encontravam bem estabelecidas, onde a seguir colonizaram os trpicos da sia e da frica no final
dos perodos Cretceo ou Paleoceno. Embora apresente uma classificao sustentada, a famlia
Araceae necessita de anlises das mais diversas reas das cincias botnicas, no que diz respeito
sua complexa organizao em nvel de populaes e espcies.
A maioria das arceas desenvolve-se preferencialmente em lugares midos e sombreados.
Incluem espcies terrestres eretas, rastejantes, trepadeiras e epfitas de florestas tropicais, variando
de pequenos indivduos a espcies de porte arbustivo (Mayo, et al., 1997). Nas regies frias e secas,
os espcimes tendem a ser tuberosos com dormncia peridica, protegendo-se das temperaturas
baixas. Em outras regies de seca, perdem todas as partes areas durante vrios meses do ano.
Muitas dessas espcies crescem em florestas ou capoeiras, adaptando-se em reas sombreadas e em
abrigo de pedras, em paredes ou prximo gua. Diversas espcies podem ser aquticas e semi-
aquticas, sendo as ltimas so refitas (que vivem em gua corrente ou brejo).
O estado do Amazonas possui atualmente a maior diversidade de Araceae, com 20 gneros e
120 espcies, onde 68 espcies so pertencentes ao gnero Philodendron, de acordo com Mayo, et
al. (1995).








22
2.2.1. Histrico do Gnero Philodendron

A histria deste gnero inicia-se com a primeira descrio publicada, em 1829, apresentada
de forma sucinta em um jornal austraco, pouco conhecido, chamado: Wiener Zeitschrift fr Kunst,
Literatur, Theater und Mode (Mayo 1990a). Schott, em seu manuscrito, preocupou-se com a
separao de dois novos gneros de Araceae, Philodendron e Syngonium Schott, este ltimo
atualmente denominado Caladium Vent. (Coelho, 2000).
Este novo conceito genrico de Schott destacou-se definitivamente como o mais importante
avano histrico na sistemtica da famlia Araceae. Alguns anos depois, mais precisamente em 1832,
Schott focou seu trabalho em um novo sistema da famlia publicado no Meletemata Botanica. Neste
trabalho o autor apresentou conjuntamente o primeiro esquema infragenrico para o gnero
Philodendron, fundamentando-se exclusivamente em caracteres florais, inserindo duas seces
monoespecficas (Meconostigma e Sphincterostigma), caracterizadas pela arquitetura do estigma.
Posteriormente as duas sees foram agrupadas por Engler dentro do subgnero Meconostigma
(Coelho, 2000). Somente 10 espcies de Philodendron foram representadas no manuscrito, tendo o
autor publicado um trabalho mais completo 24 anos mais tarde (Schott, 1856 apud Coelho, 2000).
Em 1837, o historiador e botnico austraco Stephan Endlicher publicou um tratamento de
Philodendron usando como base o grupo Meletemata de Schott (1856), divergindo apenas pela
incluso de uma descrio mais detalhada do gnero. Kunth, em 1841, publicou a primeira
classificao do gnero que tratou das espcies separadamente. Seus taxa infragenricos e seus
caracteres diagnsticos permaneceram inalterados em relao ao tratamento dado a Meletemata por
Schott. Embora ele tenha includo espcies que foram mais tarde transferidas para o subgnero
Pteromischum, o relato de Kunth foi preponderante para uma classificao minuciosa de espcies
que posteriormente foram classificadas em seus respectivos subgneros (Meconostigma,
Philodendron e Pteromischum) (Coelho, 2000).
A Synopsis Aroidearum compreendeu a primeira reviso completa de Schott (1856) em nvel
especfico, trabalho que pretendia cobrir todo gnero, embora no tenha sado do primeiro volume.
Na poca, muito mais espcies de Philodendron dos trpicos do Novo Mundo foram descritas das
colees enviadas para a Europa. Em Synopsis foram descritas 99 espcies, nmero trs vezes maior
que o relatado por Kunth apud Coelho, 2000. A classificao final foi publicada no Prodromus
Systematis Aroidearum (Schott, 1860), incluindo um inigualvel arquivo de descries e ilustraes
(cerca de 4400 ilustraes a lpis e aquarela, incluindo 208 espcies de Philodendron) para diversos
estudiosos, sendo til at os dias atuais. As ilustraes coloridas foram feitas usando plantas
23
cultivadas no J ardim Imperial do Palcio de Schnbrunn, Viena, estando entre as mais belas
ilustraes botnicas conhecidas (Coelho, 2000).
A primeira classificao de Engler do gnero Philodendron foi publicada em 1878, em um
trabalho mais complexo de arceas que foi escrito para a Flora Brasiliensis, onde o autor sumarizou
o gnero juntamente ao relato sucinto das espcies brasileiras (Coelho, 2000). Entretanto, este autor
descreveu poucas novas espcies em sua publicao, incluindo cerca de 86% das espcies
previamente reconhecidas por Schott (1860 apud Coelho, 2000).
Em 1879, Engler publicou um segundo manuscrito do gnero para o Prodromus de Alphonse
de Candolle. Porm, esse tratamento apenas incluiu quatro espcies novas adicionais. Em sua
terceira reviso publicada 20 anos mais tarde (Engler (1899 apud Coelho 2000)), o autor incluiu
mais espcies novas, especialmente oriundas da Colmbia, Equador e Amrica Central, onde
explorao botnica estava mais ativa, resultando em um crescimento para 167 representantes
(Coelho, 2000).
J em 1913, a reviso de Krause publicada na grande srie de monografias de Engler intitulada
Das Pflanzenreich, no alterou significativamente a classificao de Engler, embora tenha
acrescentado espcies novas, totalizando 222. A importncia de seu trabalho deveu-se praticidade
de suas ilustraes. A base da classificao se mantm desde o relato de Schott em, com cerca de 20
grupos de espcies conhecidos pela combinao de alguns poucos caracteres. Desde o trabalho de
Krause, nenhum outro esforo foi feito para sumarizar dados sistematicamente dentro de uma nova
classificao para o gnero. Entretanto, diversos estudos tm sido feitos e um elevado nmero de
informaes tem se acumulado desde aquela poca. Novos levantamentos de espcies de muitos
pases neotropicais tm sido realizados, geralmente, no contexto de uma flora regional ou nacional
(Coelho, 2000).
Nas ltimas dcadas verificou-se um aumento expressivo do interesse pelo gnero. Mayo
(1986b, 1988, 1989, 1990 e 1991) realizou um detalhado estudo da anatomia da inflorescncia,
corroborando a delimitao do subgnero Meconostigma e confirmando o subgnero Philodendron
como um txon bem definido e propondo uma nova nomenclatura infragenrica para o gnero.
Grayum e Croat (J ardim Botnico do Missouri) avaliaram alguns subgneros de
Philodendron, tendo o primeiro autor trabalhado com o subgnero Pteromischum enquanto o
segundo tratou das espcies da Amrica Central (Mayo, 1990).
Uma das mais importantes contribuies para a delimitao atual do gnero foi dada por
G.S. Bunting (1975, 1980, 1984, 1986, 1987 e 1988), refletindo seu interesse especial em
Philodendron por mais de 20 anos. Seu trabalho envolveu muitos aspectos, incluindo nomenclatura,
cultivo, anatomia vegetativa, bem como taxonomia. Novos dados tm sido levantados sobre diversos
24
aspectos da biologia de Philodendron em reas como botnica, sistemtica e evoluo (Mayo,
1986b).

2.3. Taxonomia e Botnica da famlia Araceae


Desde 1920, com a obra de Engler e Krause, que vem ocorrendo modificaes de
nomenclatura das subfamlias de Araceae. Os recentes trabalhos como o de Grayum (1990), inserem
Monsteroideae em Pothoideae, Philodendroideae em Calloideae, Pistioideae em Aroideae e
conservam Lasioideae e Colocasioideae. Baseados em caracteres morfo-anatmicos French et al.
(1995) e Mayo (1997) incluram Colocasioideae e Philodendroideae em subfamlias distintas,
juntamente com outras sete: Gymnostachydoideae, Orontioideae, Pothoideae, Monsteroideae,
Lasioideae, Calloideae e Aroideae. Um dos recentes trabalhos compilados de dados anatmicos foi
de Keating (2004), o qual props uma recente classificao para a famlia, decrescendo uma nova
subfamlia: Schismatoglottidoideae e mantendo Gymnostachydoideae, Orontioideae, Pothoideae,
Lasioideae, Calloideae, Philodendroideae, Lemnoideae e Aroideae como subfamlias distintas.
A maior diversidade do gnero Philodendron foi observada na regio amaznica, a noroeste
da Amrica do Sul, incluindo parte do Brasil, Colmbia, Venezuela e Equador (Mayo, 1989). O
gnero importante pela sua presena em uma ampla diversidade de habitats, ocorrendo
principalmente em florestas tropicais midas, brejos e afloramentos rochosos, embora cresa
tambm em regies semi-ridas (Mayo, 1988).
As Araceae apresentam caractersticas peculiares no que tange sua inflorescncia,
especialmente na espdice, associada a uma brctea, como tambm a espata, flores pequenas,
actinomorfas, sem bractolas, gineceu, gamocarpelar, fruto baga e uma outra caracterstica marcante
na famlia de taninos, presentes nas suas vistosas folhas (Grayum, 1990).
Existem diversas espcies de Philodendron com hbito epiftico, adaptao que se deve
principalmente presena de razes adventcias, que servem de fixao ao substrato, geralmente
rvores. Vrias espcies desenvolvem ainda razes pendentes que atingem o cho, os chamados
cips.
De acordo com Madison (1977) e Mayo (1986b), o hbito mais freqente do gnero o
hemiepifitismo lianescente. As espcies do subgnero Pteromischum so quase que exclusivamente
hemiepfitas lianescentes, ou seja, embora a planta germine no solo, o caule ir se desenvolver sobre
troncos de rvores fixando-se por meio de razes adventcias, como ocorre em P. platypodum e P.
surinamense. A despeito da prevalncia de hemiepfitas, observa-se no subgnero Philodendron uma
ampla variao de hbitos, incluindo alm de hemiepfitas, tambm plantas terrestres e terrestres
25
rizomatosas, embora existam espcies epfitas verdadeiras, que crescem em rvores, sem nenhum
contato com o solo, como no caso de P. insigne, P. melinonii e P. pulchrum.
No subgnero Meconostigma, muitas espcies apresentam hbito arborescente, como P.
goeldi. Entretanto observa-se um carter hemiepfitico primrio, que de acordo com Putz & Holbook
(1986 apud Croat, 1994), consistem em plantas que germinam em rvores sem o contato primrio
com o solo, mas quando chegam fase adulta so ligadas ao solo por meio de razes alimentadoras.
Exemplos de representantes que possuem este tipo de raiz incluem P. billietiae, P. hylaeae, P.
megalophyllum e P. goeldi, sendo esta ltima bastante distinta das demais por possuir lenticelas,
caracterstica imprescindvel para a deteco do indivduo no campo atravs das razes, pois a planta
habita as copas de grandes rvores (Soares, 1996).
A famlia tambm apresenta uma grande diversidade fenotpica e heteroblastia (diferena das
fases de desenvolvimento incidindo na morfologia caulinar e foliar), ou seja, plantas jovens podem
originar folhas com formas diferentes das encontradas na fase adulta (Croat, 1988).
As inflorescncias dos membros de Philodendron Schott apresentam pednculo
relativamente curto, espdice com inflorescncia monica, possuindo flores femininas na poro
basal e masculina frteis na poro superior, em diversas espcies separadas por uma zona de flores
masculinas estreis (Mayo, 1991). Na poro apical das flores masculinas observam-se flores
estaminadas, as quais se intercalam entre flores estreis, portadoras de estamindios, formando uma
zona masculina estril intermediria, embora uma zona estril apical, formada por flores estreis no
pice da espdice tambm possa ser observada (Soares, 1996).
A espata um rgo atrativo especializado, que protege o desenvolvimento das flores da
espdice, desempenhando um importante papel na biologia da polinizao. O entren entre a espata
e a espdice (estpite da espdice) geralmente muito curto ou ausente, enquanto o pednculo o
entren entre a espata e a ltima folha do ramo ou catafilo muito maior. A inflorescncia ainda
inclui uma grande variao de odores encontrados em diferentes gneros, padres de cores,
especialmente na espata, observando-se uma relativa persistncia (de regies diferentes) da espata
(Mayo, et al., 1997; Bown, 2000).
Pohl (1932b apud Mayo, et al., 1997) e Mayo (1986a e 1989), realizaram estudos no gnero
Philodendron, os quais evidenciaram a existncia de adaptaes do tecido da espata, secreo de
resina atravs de vrios tipos de canais na espata e na espdice, bem como, uma larga variao na
estrutura do androceu e gineceu.
Na formao dos frutos, a espata fecha firmemente em torno das flores e fica intacta para
proteg-los at seu amadurecimento. Os frutos so do tipo baga com uma a muitas sementes. As
26
bagas so coloridas (creme, vermelho ou laranja), exceto em P. goeldi que apresenta bagas brancas.
Sementes no subgnero Meconostigma s vezes possuem sarcotesta ou funculo arilado ou ambos.
As sementes de Philodendron destacam-se por serem as menores da famlia sugerindo-se que
possam aderir-se em seus dispersores (Bown, 1988). Quando completamente formadas, as sementes
muitas vezes apresentam-se envolvidas por uma polpa mucilaginosa, indicando que a planta estaria
prxima do seu ciclo de disperso. Muitos pssaros so atrados pelas cores vibrantes das flores e
frutos, no s em Philodendron, mas tambm em outros gneros da famlia Araceae (Mayo, 1997).
Muitas espcies de Philodendron possuem fragrncias que exalam aromas associados aos
hbitos dos polinizadores, em geral besouros pertencentes s famlias Rutelinae e Dynastinae.
Diferentes insetos podem visit-las, o que nem sempre implica em polinizao (Coelho, 2000).
Geralmente a polinizao ocorre em duas noites subseqentes. Na primeira a espata
desabrocha e as flores femininas so expostas. A espata fecha levemente aps a primeira noite, mas
no o bastante para prender completamente os insetos. Entretanto, dezenas de besouros podem ser
encontrados no tubo da espata aps a primeira noite de sua abertura. J na segunda noite, a
fragrncia e o calor so produzidos novamente, quando o plen liberado. Nesse estgio os estigmas
no esto mais receptivos, levando polinizao preferencialmente cruzada. Logo aps a liberao
do plen na segunda noite, os besouros so atrados por fragrncias que so exaladas atravs de um
aumento de temperatura provocado pela oxidao de lipdios (Mayo, 1991), atraindo-os para a
regio superior da inflorescncia, coincidindo com o processo de fechamento da espata que ocorre
antes da sada dos besouros para novas visitas.


2.3.1. Taxonomia e Botnica de Philodendron

O gnero Philodendron o segundo maior gnero da famlia Araceae, estimando-se que inclua
de 350 (Bunting, 1986; Mayo, 1986) at 400 espcies (Coelho, 2000). Apresenta uma rea de
distribuio essencialmente neotropical, atingindo o seu limite meridional na regio do Rio la Plata.
Distribui-se em trs subgneros: Meconostigma, Pteromischum ePhilodendron. O subgnero
Meconostigma inclui cerca de 15 espcies, muitas delas presentes no Brasil, as quais so adaptadas a
ambientes abertos. A caracterstica principal do subgnero a presena de uma zona estril na
espdice (Mayo, 1986b). O subgnero Pteromischum, compreende cerca de 75 espcies, ocorrendo
desde o Mxico at o noroeste da Amrica do Sul, caracterizando-se pela morfologia do caule
(composto de unidades simpodiais com muitas folhas), lmina foliar simples e bainha foliar
comprida. J o subgnero Philodendron, detentor de 10 sees e 11 subsees compreende o maior
27
nmero de espcies do gnero. Ao contrrio de Pteromischum, a morfologia do caule composta por
unidades simpodiais de uma nica folha e de uma inflorescncia com uma zona estril, entre as
zonas masculina e feminina, que mais curta do que a zona masculina. Estes dois ltimos
subgneros apresentam geralmente hbito epiftico e hemiepiftico (Coelho, 2000).
Membros do subgnero Philodendron, alm dos hbitos anteriormente descritos, podem ser
tambm terrestres ou at rizomatosos, embora predominem as hemiepfitas (Mayo, 1986b). Este
subgnero possui ramos flageliformes, que deslocam o meristema no espao buscando melhores
condies para o seu desenvolvimento (Blanc, 1980; Coelho, 2000), crescendo verticalmente sobre o
tronco da hospedeira, como por exemplo, em P. linnaei e P. fragrantissimum, ou crescendo
lateralmente, como no caso da P. platypodum.
Espcies do gnero possuem em geral, folhas numerosas, pequenas a gigantes, profilos de caules
maduros marcescentes e decduos ou persistentes e membranceos ou decompostos at uma rede
fibrosa. Pecolo geralmente verrucoso ou coberto com protuberncias do tipo escamas, s vezes
geniculado no pice; bainha longa com lgula curta em folhas monopodiais de todos os subgneros e
em folhas simpodiais no subgnero Pteromischum, entretanto nos subgneros Philodendron e
Meconostigma a bainha muito curta e quase imperceptvel.
As inflorescncias apresentam pednculo geralmente mais curto que o pecolo, cilndrico ou
subcilndrico. Espata ereta, persistente, decdua aps o amadurecimento dos frutos (raramente aps a
antese), geralmente grossa e constrita entre tubo e lmina; tubo ventricoso, frequentemente de
colorao internamente prpura ou vermelha; lmina com parcial ou completa abertura na antese;
espdice sssil e estipitada, denominada zona feminina, geralmente mais curta que a zona masculina
frtil, constituda por estames frteis, localizada no pice da espdice e separada por uma zona estril
intermediria, composta de estamindios e em geral mais curta do que a zona masculina frtil.
As flores so unissexuais e nuas com flores masculinas apresentando dois a seis estames,
prismticos a obpiramidais, raramente alongados e finos (subg. Meconostigma), anteras ssseis a
subssseis, tea elipside oblonga, alongada, deiscncia por curta fenda lateral ou por poro
subapical. A flor feminina composta de apenas um gineceu ovide, subcilndrico, cilndrico, ou
obovide, ovrio com dois a 47 lculos, vulos com um a 50 por lculo, geralmente hemiantropos,
funculo com ou sem tricomas. O estilete to largo quanto o ovrio, s vezes lobado, estigma
discide, globoso, s vezes lobado. Fruto com uma baga, subcilndrica a obovide, geralmente
vermelha, amarela, branca ou vermelho-alaranjada. Sementes numerosas, variando muito em
tamanho e endosperma abundante (Soares, 1996; Coelho, 2000; Temponi et al., 2005).
Alguns estudos tm sido realizados no intuito de classificar detalhadamente o gnero
Philodendron, principalmente investigando aspectos morfolgicos. Mayo (1986, 1986b, 1988, 1989,
28
1990, 1991, 1995, 1997) foi um dos maiores investigadores do grupo (e da famlia), conseguindo
elucidar diversos questionamentos, contribuindo para um melhor entendimento de Philodendron e de
outros gneros.
No Brasil destacam-se trabalhos como o de Soares (1996) que estudou taxonomicamente
espcies ocorrentes no estado do Amazonas atravs de caracteres morfo-anatmicos, encontrando
oito sees com 26 espcies distribudas nos trs subgneros. Em outro estudo Coelho (2000)
analisou morfologicamente espcies do gnero ocorrentes na Reserva Ecolgica de Maca de Cima,
classificando-as em dois subgneros (Philodendron e Pteromischum), encontrando cinco novas
espcies na regio, adicionadas a outras cinco espcies anteriormente reportadas. Tambm merece
meno o trabalho de Sakuragui (2001), que estudou a seo Calostigma ocorrente no Brasil,
definindo padres de distribuio geogrfica associados a aspectos morfolgicos do grupo estudado,
estabelecendo espcies de distribuio ampla ou restrita, bem como plantas endmicas de algumas
regies brasileiras.


2.4. Importncia Econmica

A famlia Araceae possui diversos aspectos que fazem com que seja muito importante
economicamente. O inhame (espcie Colocasia esculenta (L.) Schott.), usado como matria prima
na alimentao humana, muito consumido em regies tropicais do mundo todo, tratando-se da
espcie de maior importncia econmica no grupo. Outro tubrculo muito consumido na sia, o
taro, inclui cultivares e hbridos de diferentes Colocasia Schott e Alocasia, tratando-se da principal
Araceae submetida a programas de melhoramento para cultivo em larga escala (Ochiai et al.,1997).
O gnero neotropical Xanthosoma tambm contm espcies comestveis importantes, sendo
amplamente cultivadas devido s suas folhas e tubrculos ricos em amido, normalmente consumidos
aps o cozimento (Mayo et al., 1997; Bown, 2000).
O inhame-gigante (Alocasia sp.) foi amplamente usado na alimentao animal no sculo
19, apresentando, porm, pouco uso como fonte de alimentao humana. Os tubrculos ricos em
amido do inhame-de-elefante (Amorphophallus sp.) so comumente usados como alimento na
sia Tropical, especialmente na ndia, onde a espcie amplamente cultivada. No Mxico as
infrutescncias maduras e frescas de costela-de-ado (Monstera deliciosa Liebm.) so consumidas
e usadas para aromatizar sorvetes, apresentando um sabor que lembra o de abacaxi. As sementes de
espcies dos gneros Typhonodorum e Montrichardia so registradas como alimentos dos nativos de
29
Madagascar e da Amrica do Sul Tropical, respectivamente, depois de cozidas ou tostadas (Mayo et
al., 1997; Bown, 2000).
Como ornamentais destacam-se tambm os gneros Caladium, Dieffenbachia, Monstera,
Spathiphyllum Schott & Endl. e Syngonium, ocorrendo naturalmente em locais quentes e midos,
sombreados ou abertos, ou ainda como epfitas em florestas tropicais (J oly, 1975; Heywood, 1993).
Espcies do gnero Philodendron tm sido tradicionalmente utilizadas para fins ornamentais,
principalmente porque apresentam folhagens vistosas e por serem capazes de resistir a baixos nveis
de luminosidade, proporcionando vrios usos em paisagismo.
Algumas espcies de Philodendron tm uso medicinal, como o caso da P. ochrostemon,
usada no tratamento de bronquite crnica e aguda, aplicada como pasta medicamentosa ou em
banhos dirios com a gua do cozimento das folhas. A decoco tambm usada como uma
compressa para edemas, articulaes reumticas e lceras. A seiva espremida das folhas serve como
um lubrificante. J a espcie P. imbe Schott, ocorrente na Amaznia, muito utilizada para
tratamentos reumticos (Plowman, 1969), como tambm lceras. Croat (1994) cita algumas outras
espcies usadas na medicina popular, como P. cuneatum (Engl., 1885), usada pelos ndios Taiwano
do Rio Kananar (Colmbia) como antiinflamatrio da pele, bem como P. fragrantissimum (W.J .
Hook) G. Don e P. pedatum (Hook.) Kunth. Os ndios Kubeo (Colmbia) utilizam a espata de P.
insigne Schott em rituais amorosos (Schultes & Raffauf - apud Croat, 1994). A espcie P. hylaeae
Bunting foi reportada pelo seu uso nos tratamentos de combate a vermes, triturando as folhas e
pecolos, que so adicionadas farinha de mandioca. J P. megalophyllum Schott, usualmente
chamadas pelos ndios Waorani da Guiana Francesa pelo nome de co-me, usada como antdoto
contra picadas de cobra (Soares, 1996).
Muitos gneros da famlia Araceae possuem um grau de toxicidade elevado que pode causar
irritabilidade quando em contato com o ser humano. O prprio inhame possui uma irritante toxina
que pode irritar a pele, caso no seja cozido. Por serem conhecidas como plantas perigosas, certas
espcies so cultivadas por populaes tradicionais com o intuito de espantar foras negativas
(Lisboa e Ferraz, 1999).
O gnero Philodendron tambm apresenta algumas espcies bastante nocivas, as quais so
causadoras de dermatites, como o caso de P. scandens K. Koch & Sello, P. angustisectum Engl., P.
erubescens C. Cock & Augustin e P. radiatum Schott (Reffstrup et al., 1982; Reffstrup & Boll,
1985).
Um exame mais acurado de compostos de Araceae foi publicado por Williams, et al. (1981),
que investigaram proantocinidinas, cido cinmico, antocianinas e flavonides de Araceae. De
30
acordo com a anlise, procianidinas ocorrem em nveis proporcionais nos taxa investigados enquanto
C-glicoflavonas so flavonides caractersticos presentes em folhas da famlia como um todo.



2.5. Marcadores Moleculares em Vegetais

O advento de tcnicas bioqumicas e moleculares, baseadas na anlise de polimorfismos de
enzimas e mais tarde de fragmentos de DNA, permitiram, em um curto perodo de tempo, a
disseminao do uso de marcadores moleculares no estudo dos aspectos bsicos de gentica vegetal.
A utilizao destas informaes moleculares na anlise de diversidade gentica e de relacionamentos
filogenticos com acessos no domesticados de germoplasma tem o potencial de facilitar o
monitoramento e a ampliao da base da gentica de populaes (Milach et al., 1998).
Marcadores moleculares so caractersticas de macromolculas que diferenciam dois ou mais
indivduos ou txons. Tratam-se de molculas como DNA ou protenas que podem representar uma
regio ou regies do genoma ligadas a alguma caracterstica incluindo-se aquelas de interesse
agronmico. Caractersticas morfolgicas e agronmicas tm a desvantagem de serem influenciadas
por fatores ambientais, podendo no representar a real similaridade ou diferena entre os indivduos.
Por outro lado, marcadores genticos representam estritamente a variao gentica, no sofrendo
influncia ambiental (Weising et al., 2004).
Adicionalmente, o desenvolvimento de tecnologias de marcadores de DNA representou um
grande avano quando comparado anlise isoenzimtica, uma vez que acessa caractersticas
genticas informativas do ponto de vista evolutivo, sem influncia de mecanismos fisiolgicos ou do
meio ambiente, gerando um nmero quase ilimitado de polimorfismos (Benko-Iseppon, 2001).
Do ponto de vista da gentica conservativa, dependendo do tipo de marcador molecular
utilizado, podem-se observar taxas de evoluo e/ou substituio diferentes, de modo que, usando
anlises criteriosas para a escolha do marcador, pode-se elucidar questes relativas identificao de
espcies ou formulao de hipteses filogenticas em grupos supra-especficos (Sol-Cava, 2001).
Entre os marcadores mais usados figura o RAPD (Random Amplified Polymorphic DNA) que
usa iniciadores (primers) curtos, em geral decmeros, sendo amplamente usados para diversas
aplicaes. J as tcnicas de DAF (DNA Amplification Fingerprinting) e STMS (Sequence Tagged
Microsatellite Site), tambm amplamente usadas em espcies vegetais, mostraram-se como
marcadores altamente eficientes na gerao de polimorfismos em gro de bico (Cicer arietinum),
apesar da estreita base gentica desta cultura (Winter et al., 2000).
31
Caetano-Anolls et al. (1991a,b) desenvolveram o mtodo DAF utilizando primers de 5 a 15
nucleotdeos, sendo que o comprimento timo encontrado foi de oito nucleotdeos, tamanho este que
gerou resultados que superaram a eficincia do RAPD, onde os polimorfismos no foram
reprodutveis com este mesmo nmero de bases.
Esta metodologia tem sido empregada em diversas culturas vegetais, sendo considerada uma
poderosa ferramenta na identificao individual, avaliao do grau de parentesco entre indivduos,
estudo da variabilidade gentica e na construo de mapas de ligao (Caetano-Anolls et al., 1991).
Em 1993, o citado autor e seus colaboradores obtiveram, por exemplo, informaes eficientes de
amplificaes geradas usando primers com apenas cinco bases (5-meros) em soja. Esta tcnica
destaca-se como vantajosa sobre o mtodo de RAPD, uma vez que gera um grande nmero de
bandas polimrficas com boa reprodutibilidade, independentemente do tamanho dos primers
(Benko-Iseppon et al., 2003).
A tcnica de DAF tem sido usada em diversos organismos, como em Crawford (2006) que a
aplicou para identificar o gene MCF-7 no cromossomo 12, presente em linhagens de clulas
epiteliais mamrias humanas normais e ausente em linhagens de clulas cancerosas humanas,
identificando a ocorrncia de uma deleo em clulas neoplsicas.
J em microorganismos, o DAF tem sido usado tambm como uma metodologia eficiente
para gerao de polimorfismos para anlises de filogenia molecular (Babalola, 2003). Em fungos
Baird et al. (2006) obtiveram um melhor resultado quando os mplicons de DAF foram submetidos a
uma reamplificao pelo mtodo de ASAP (Arbitrary Signatures from Amplification Profiles), uma
vez que os produtos gerados inicialmente no conseguiam diferenciar uma espcie da outra, o que
foi solucionado com a reamplificao.
Estas tcnicas moleculares tm sido bastante utilizadas em plantas cultivadas; no entanto,
existe uma grande carncia no que tange s plantas nativas, devido aos altos custos, dificuldade de
acesso ao material, bem como a dificuldade de estocagem do mesmo at o momento da anlise ex
situ. Existem, porm, alguns trabalhos com espcies nativas. Por exemplo, Pereira et al. (2004)
avaliaram os efeitos da adaptao de plantas arbreas do cerrado a uma condio de estresse,
resultante da presena de metais txicos no solo atravs da metodologia de RAPD. Os pesquisadores
observaram uma menor diversidade nas populaes em ambientes estressantes comparativamente
quelas ocorrentes em situaes ambientais normais, sugerindo um possvel efeito fundador
associado deriva gentica. Por outro lado, sugeriu-se que semelhanas entre os grupos de
populaes remontariam a uma ainda existente ligao entre os grupos atravs de fluxo gnico.
Oliveira et al. (2007), caracterizaram a diversidade gentica em 116 acessos nativos e
cultivados de Aa (Euterpe oleracea Mart.) usando RAPD, revelando ampla diversidade entre os
32
acessos, uma vez que o nmero de polimorfismos foi elevado (263). A anlise revelou distino de
alguns acessos da mesma populao, sugerindo assim a decorrncia de cruzamentos aparentados ou
autofecundaes (Souza, 2002), ressaltando a forte reduo de tamanhos de aaizeiros devido
explorao de palmito e devastao de milhares de indivduos da espcie em estudo.



2.5.1. Anlise de Marcadores e Gerao de Dendrogramas

Apesar dos vrios mtodos de anlise, dos perfis de polimorfismos e sua converso em
fenogramas, a metodologia de UPGMA (Unweighted Paired Group Method Aritmhmetic Average)
tem sido uma dos mais utilizadas em plantas cultivadas (Alcochete, 2005). Diversos mtodos tm
sido aplicados para analisar dados com RAPD e DAF, usando-se os coeficientes de Nei e Li (1979),
de J accard (1908) ou ainda de Simple Match (Duarte et al., 1999; Kosman e Leonard, 2005).
Adicionalmente, os mtodos de agrupamento mais conhecidos na literatura para matrizes de
distncia tem sido UPGMA de Sneath e Sokal (1973) e Neighbor-joining (NJ ) de Saitou e Nei
(1987). Embora esses mtodos sejam projetados para produzir rvores nicas (Nei, 1987; Saitou e
Nei, 1987), os mesmos podem s vezes derivar mais de uma forma para os mesmos dados, o que
depende muito da maneira (ordem) como so incorporados na planilha (Bayer, 1985; Kovach, 1993).
A partir de unidades taxonmicas operacionais (OTUs), podem ser construdos fenogramas.
Entretanto este mtodo tambm utilizado para construo de rvores filogenticas, desde que as
taxas de evoluo sejam constantes entre diferentes linhagens (distncia relativamente linear entre a
distncia evolutiva e o tempo de divergncia) (Bayer, 1985).
Embora existam muitos programas disponveis para realizar anlises filogenticas ou de
relao gentica entre graus de proximidade, alguns softwares so mais aplicados a depender do tipo
de dados alimentados. Tanto o NTSYS (Rohlf, 1997), quanto o PHYLIP (Felsentein, 2003) como o
MEGA 4 (Sudhir et al., 2007), podem ser utilizados para os fins citados. Este ltimo (MEGA,
Molecular Evolucionary Genetics Analysis) permite inferncias filogenticas e fenticas, bem como
estudos de padro de duplicao de genes dentro de famlias multignicas. O MEGA contm duas
anlises de reconstruo filogentica, distncia-base e mxima parcimnia (MP). Alm disso, inclui
tambm os mtodos UPGMA, NJ e Minima Evoluo (ME), os quais servem para inferir sobre
filogenias utilizando matrizes de distncias (Sudhir et al., 2007).


33
2.6. Marcadores Moleculares em Araceae

Ainda so restritos os trabalhos realizados com angiospermas nativas do Brasil incluindo a
aplicao de metodologias moleculares, com a maioria dos estudos restritos a espcies cultivadas ou
de interesse econmico (Benko-Iseppon, 2001).
Em se tratando das Araceae, a maioria das anlises incluindo caracteres moleculares referem-
se a padres de restrio de DNA de cloroplasto ou ao seqenciamento de segmentos rbcL desta
organela. Estas abordagens so muito teis para estudos macrotaxonmicos, porm nem sempre so
informativas em nvel intergenrico, sendo por vezes pouco informativas em nvel interespecfico e
interpopulacional, devido alta conservao das seqncias de cloroplasto que apresentam herana
materna e no sofrem recombinao (Hillis et al.,1996).
Uma anlise cladstica usando seqenciamento de segmentos rbcL foi feita em Ariflorae por
French et al. (1995) situando o gnero Anubias Schott como um grupo irmo de Homalomena,
Furtadoa M. Hotta e Philodendron, enquanto Montrichardia emergiu como um grupo-irmo destes
quatro gneros. Estes resultados levaram Grayum (1996) a sugerir que as Homalomeninae
constituiriam um grupo parafiltico.
Metodologias como RFLP (Restriction Fragment Length Polymorphism) e RAPD (Random
Amplified Polymorphism DNA) tm sido usadas em estudos moleculares para fins de melhoramento,
comparando espcies nativas e cultivares do gnero Colocasia e Alocasia, para aplicao no pr-
melhoramento visando incrementos na produo de tubrculos no J apo e na China (Ochiai et
al.,1997; 2000; 2001).
Loh et al. (2000) analisaram por meio de AFLP a diferenciao de espcies de Caladium (C.
humboldii e C. lindenii), como tambm a diversidade gentica entre os gneros Caladium, Hapaline,
Alocasia e Protarum. De acordo com tratamentos morfolgicos, a espcie C. humboldii possui
padres cromossmicos de C. bicolor, entretanto, as anlises moleculares feitas pelos pesquisadores
evidenciaram que existe grande divergncia interespecfica, bem como a inexistncia de
transferncia horizontal entre as espcies. Por outro lado, o estudo intergenrico corroborou dados de
estudos anteriormente realizados (French et al., 1995; Mayo et al., 1997), onde as tribos Caladieae e
Colocasieae foram agrupadas em txons distintos.
Buldewo e J aueerally-Fakim (2002) procederam ao isolamento e limpeza de DNA da espcie A.
andreanum, com o intuito de melhorar a qualidade do DNA para utilizao em amplificaes por
PCR, incluindo RAPD, AFLP e Microssatlites, com amostras livres de contaminantes comuns em
extraes de Araceae, como polissacardeos e polifenis. Foram testados trs protocolos, porm, o
DNA de melhor qualidade foi obtido a partir do tecido da espata, superior quando comparado s
34
extraes a partir de folhas. Os autores chegaram concluso que o tecido da espata apresenta
menor quantidade de contaminantes, principalmente quando comparado aos resultados de
quantificao e qualificao em gel de agarose, podendo-se observar arrastes de degradao de DNA
de folha, possivelmente provocados pela ao de compostos secundrios, presentes em grandes
quantidades, e precipitados juntamente com o DNA genmico durante os procedimentos de
isolamento.
Tam (2002) pesquisando a subfamlia Monsteroideae, composta de quatro tribos
(Spathiphylleae Engl., Anadendreae Bogner & French., Heteropsideae Engl. e Monstereae Engl.),
utilizando o marcador AFLP, observou que os gneros de Monstereae, de Heteropsideae e de
Anadendreae formaram um grupo monofiltico. Estudos preliminares feitos pelo pesquisador
demonstraram uma incapacidade de distinguir a taxonomia das Monsteroideae, especialmente na
tribo Monstereae. O mesmo ressaltou que no foi possvel indicar uma filogenia confivel para o
grupo ou compreender totalmente as relaes intergenricas devido insuficincia dos dados.
Tam et al. (2004) realizaram um estudo sobre a filogenia intergenrica e infrafamiliar da
subfamlia Monsteroideae com auxlio de seqncias de trnL-F de cloroplastos. O objetivo da
pesquisa foi esclarecer vrias questes sobre as relaes filogenticas entre as espcies estudadas at
ento no estabelecidas. O trabalho ressaltou direcionamentos filogenticos feitos a partir da
subfamlia, utilizando um agrupamento de grupos externos, como Rhaphindofora. A partir das
anlises dos clados mostrados pela rvore do trnL-F, as subfamlias Gymnostachydoideae e
Orontioideae devem ser tratadas como uma nica subfamlia, tal como em Pothoideae e
Monsteroideae, como sugerido por Grayum (1990) e French et al. (1995). Algumas questes
precisam ser averiguadas, como o relacionamento de alguns grupos estabelecidos nesse estudo,
embora o ordenamento preliminar da tribo corrobore a abordagem dos taxonomistas.
Woloszynska et al. (2004) sugeriram que ocorreu transferncia horizontal do gene trnA de
cloroplasto de uma monocotilednea para a mitocndria de um ancestral de Phaseolus vulgaris L.,
evidenciando neste trabalho uma similaridade entre a seqncia desta espcie e a de P. scandens.
Chen et al. (2004), realizaram a primeira investigao molecular para identificar a relao
gentica entre espcies e cultivares do gnero Aglaonema Schott (Araceae) usando o marcador
AFLP. Foram utilizadas 60 amostras de Aglaonema, sendo 54 cultivares, uma duplicata de A.
communtatum e cinco outros gneros de Araceae. Os resultados revelaram grupos geneticamente
similares, mostrando-se teis na identificao de germoplasma do gnero, para fins de conservao e
desenvolvimento de novas cultivares.
Nowbuth et al. (2005) analisaram a variao gentica entre 24 cultivares de Anthurium
atravs da tcnica de RAPD, identificando um baixo nvel de variabilidade gentica, sugerindo a
35
ocorrncia de eroso gentica entre os acessos analisados devido a sucessivos cruzamentos para
gerao de variedades comercialmente melhoradas. Embora que essa baixa variabilidade seja
limitante, os autores destacaram que a mesma seria crucial para o sucesso da produo de flores
ornamentais usando gentipos deste gnero.
Nie et al. (2006), analisaram a subfamlia Orontioideae atravs de seqncias de cloroplastos
(trnL-F e ndh-F), no intuito de reconhecer padres evolutivos e estimar o tempo de divergncia entre
linhagens selecionadas do hemisfrio norte. A subfamlia foi considerada monofiltica, corroborando
estudos anteriormente realizados (Mayo et al., 1997). Utilizando mtodos Bayesianos, os
pesquisadores estimaram, por exemplo, que o gnero Orontium divergiu entre 30 e 40 milhes de
anos do complexo Symplocarpus-Lysichiton.
Gonalves et al. (2007), reconstruram a filogenia da tribo Sparthicapeae baseando-se em
dados moleculares de cloroplastos (matK e ndh-F) e morfolgicos (histo-anatmicos), com o
objetivo de avaliar a taxonomia do grupo e descrever sua histria biogeogrfica na Amrica do Sul.
Os resultados comprovaram que Dieffenbachia e Bognera pertencem tribo citada, confirmando
estudos anteriores que indicavam sua condio monofiltica, como os realizados com cloroplastos
(French et al., 1995) e com anlises de morfologia cromossmica (Mayo et al., 1995). No entanto, os
autores discordaram da proposta de Mayo et al. (1997) de que os gneros citados fossem separados
em duas tribos (Dieffenbachieae e Spathicarpeae).
A tribo Sparthicapeae distribui-se em regies com perodos de secas da Amrica do Sul, tais
como o Chaco (Paraguai e Argentina) e a caatinga Brasileira (Nordeste do Brasil). Os resultados de
Gonalves et al. (2007) indicaram dois eventos de colonizao da tribo nas Cordilheiras dos Andes,
propondo-se que inicialmente a evoluo da tribo se deu neste local, povoando posteriormente o
centro andino, da Argentina ao Peru e dispersando-se posteriormente em direo ao Brasil, chegando
Mata Atlntica. O surgimento da tribo na floresta Amaznica teria ocorrido pela diversificao de
Dieffenbachia, gnero detentor da maior diversidade de espcies na regio (Croat, 2004), com D.
humillis sendo considerada a espcie mais basal (Gonalves et al., 2007).








36
3. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS

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43










MANUSCRITO DE ARTIGO CIENTFICO










44

Manuscrito de Artigo




































Diversidade e relaes genticas em espcies brasileiras de
Philodendron (Araceae) reveladas por DAF
(DNA Amplification Fingerprinting)

Genetic Diversity and relationships in Brazilian Philodendron (Araceae) species revealed by
DAF (DNA Amplification Fingerprinting)



A ser submetido ao Botanical Journal of the Linnean Society
45
Ttulo
Diversidade e relaes genticas em espcies brasileiras de
Philodendron (Araceae) reveladas por DAF (DNA Amplification
Fingerprinting)


Autores

ISAAC FARIAS CANSANO
1
, MARIO CORREIA DA SILVA
1
, MARIA DE LOURDES
DA COSTA SOARES
2
E ANA MARIA BENKO-ISEPPON
1

1
Universidade Federal de Pernambuco, Laboratrio de Gentica Vegetal e Biotecnologia,
Departamento de Gentica, Centro de Cincias Biolgicas, Recife, Pernambuco, Brasil.

2
INPA - Instituto Nacional de Pesquisa da Amaznia, Departamento de Botnica, Manaus,
Amazonas, Brasil.




Ttulo resumido:
Genetic Diversity in Brazilian Philodendron
46
Resumo

O gnero Philodendron (Araceae) inclui cerca de 600 espcies, distribuindo-se
endemicamente nas Amricas e apresentando grande diversidade na Amaznia e na Mata
Atlntica, onde os exemplares do presente estudo foram coletados. Marcadores DAF (DNA
Amplification Fingerprinting) so teis na gerao de polimorfismos em nvel intra e
interespecfico, sendo informativos em anlises de diversidade gentica. No presente trabalho
12 primers foram selecionados na avaliao de indivduos de 26 acessos de 18 espcies de
Philodendron, comparados a representantes de Dieffenbachia (2 spp.) Monstera (3 spp.) e
Scaphispatha (1 sp.). Todas as espcies de Philodendron estudadas pertenceram ao subgnero
Philodendron, com exceo de P. goeldi e P. solimoesense do subg. Meconostigma. 1108
bandas polimrficas foram includas na matriz de dados para a gerao de uma rvore usando
o mtodo de neighbour-joining, gerando clados com valores de bootstrap consistentes entre
os Philodendron (>85%). Espcies do subg. Meconostigma agruparam-se em um ramo com
espcies do subg. Philodendron. Uma associao do dendrograma a nmeros cromossmicos
disponveis para as espcies analisadas, permitiu identificar agrupamentos de espcies com
2n=32 e 2n=34 em mais de um subramo, indicando que disploidias possam ser eventos
recorrentes no gnero. As relaes reveladas no presente trabalho com relao aos txons que
compem os dois subgneros de Philodendron so tambm discutidas.


Palavras chave: Meconostigma - Dieffenbachia - Monstera - Scaphispatha Floresta
Amaznica Mata Atlntica Nmeros cromossmicos.

47
Introduo

O gnero neotropical Philodendron Schott um dos mais importantes da famlia
Araceae J uss. no apenas por ser o segundo maior da famlia, mas tambm por seu importante
valor comercial na floricultura, devido beleza de suas folhagens (Coelho, 2000; Goaverts et
al., 2002). Sua distribuio geogrfica bem diversificada, abrangendo principalmente reas
midas tropicais, como tambm brejos e at regies semi-ridas (Mayo, 1988). O Brasil
destaca-se como o pas detentor do maior nmero de espcies, com grande relevncia para a
Floresta Amaznica e a Mata Atlntica.
O gnero dividido em trs subgneros: Philodendron, Pteromischum e
Meconostigma, principalmente devido a caracteres da morfologia floral, embora apresentem
caractersticas morfolgicas, anatmicas e biogeogrficas prprias. O subgnero com maior
representao de espcies Philodendron, seguido por Pteromischum e Meconostigma, o
menor de todos (Mayo, 1988).
O habitat do gnero quase que exclusivamente epiftico, devido presena de razes
adventcias que servem de fixao ao substrato, geralmente rvores. Entretanto, existem
espcies do subgnero Pteromischum que apresentam hbito hemiepiftico lianescente. J o
subgnero Philodendron apresenta uma ampla variao de hbitos, ocorrendo espcies
terrestres, aquticas e at rizomatosas, embora o hemipifitismo seja predominante. No
subgnero Meconostigma, muitas espcies apresentam hbito arborescente, como P. goeldii.
Entretanto, observa-se um carter hemiepiftico primrio, por incluir plantas que germinam
em rvores sem o contato primrio com o solo, mas que na fase adulta so ligadas ao solo por
meio de razes (Madison, 1977; Mayo, 1986).
Existem diversos estudos relacionados aos gneros da Famlia Araceae bem como o
gnero Philodendron, principalmente com pesquisas taxo-morfolgicas, entretanto existe
48
ainda uma grande carncia em estudos genticos neste gnero, uma vez que marcadores de
DNA poderiam elucidar diversos questionamentos a respeito de sua diversidade molecular.
O marcador molecular DAF (DNA Amplification Fingerprinting) tm sido amplamente
utilizado na anlise de diversidade em vegetais, principalmente por apresentar um potencial
na gerao de polimorfismos (Simon et al., 2007), sendo tambm utilizado em estudos de
mapeamento gentico, possuindo uma boa reprodutibilidade quando comparado ao RAPD
(Winter et al., 2000; Benko-Iseppon et al., 2003). A tcnica baseia-se na utilizao de primers
(iniciadores) aleatrios em uma maior concentrao em relao a uma menor quantidade de
DNA molde, uma das caractersticas principais que a diferencia do RAPD (Caetano-Anolls
et al., 1991a, b; Simon et al., 2007).
O presente trabalho teve como objetivo avaliar a diversidade gentica entre 32 acessos
selecionados entre espcies dos gneros Philodendron, Monstera Adanson, Scaphispata
Schott e Dieffenbachia Schott, atravs de marcadores DAF avaliando a relao gentica entre
os taxa e populaes estudados.


Materiais e Mtodos

Material Vegetal
As espcies selecionadas para o estudo foram coletadas em seu ambiente natural em
reas visitadas pelo grupo, incluindo a Mata Amaznica, mais precisamente na Floresta
Nacional de Caxiuan (Melgao, PA), na Reserva Florestal Adolpho Ducke (Manaus-AM) e
em uma mata urbana na Mata de Moju (Belm, PA), como tambm fragmentos de Mata
Atlntica do Nordeste Brasileiro, como a Reserva de Gurja (Recife-PE). Os nomes das
espcies com seus respectivos autores e locais de coleta esto listados na tabela 1.
49
Todas as espcies analisadas fazem parte da coleo viva de Araceae do LGBV
(Laboratrio de Gentica e Biotecnologia Vegetal, UFPE, Recife, Pernambuco, Brasil), sendo
a maioria dos exemplares tem sido mantida em cultivo em casa de vegetao. As coletas
foram realizadas pelo pesquisador Correia-da-Silva, M (Amaznia e Nordeste), sendo
identificadas pela pesquisadora Soares, M. L. (INPA), sendo que ambos os pesquisadores
foram licenciados pelos rgos federais competentes (MCT/MMA/IBAMA-DF) para
realizao das mesmas. Alm de espcimes cultivados, exsicatas de todo material coletado
encontram-se depositadas no Herbrio INPA.

Extrao, quantificao e limpeza do DNA genmico
O isolamento do DNA genmico foi feito usando entre 2,0 a 2,5 g de folhas frescas ou
pontas de razes areas, seguindo o protocolo descrito por Weising et al. (2004), com
pequenas modificaes no que tange s propores entre tampo e massa de tecido para o
protocolo Maxi-Prep, como descrevemos a seguir. Os tecidos foram macerados na presena
de N
2
lquido, sendo em seguida transferidos para tubos de 50 mL contendo 12 mL do tampo
CTAB 2% (brometo de cetil-trimetilamnio; Tris-HCl; EDTA) previamente incubados a 60C
por no mnimo 30 min. Foi feita uma lavagem com clorofrmio-lcool isoamlico (10 mL)
numa proporo de 24:1, centrifugando a 4.000 rpm por 20 min temperatura ambiente,
sempre recuperado o sobrenadante para tubos autoclavados. No tubo contendo o sobrenadante
recuperado no passo anterior, foram acrescentados 7 mL de isopropanol temperatura
ambiente, onde se misturou cuidadosamente por inverso, ficando em repouso por alguns
minutos na mesma temperatura. Na seqncia, centrifugou-se a 5.000 rpm por 20 min a 4 C
e, aps esse processo, o sobrenadante foi descartado e acrescentados 10 mL de etanol 70%,
invertendo-se lentamente o tubo por algumas vezes. Recentrifugou-se a 5.000 rpm por 20 min
a 4 C e descartou-se o lcool, onde os pellets foram secados em cmara de fluxo. Aps
50
secagem, os pellets foram ressuspensos em 500 L de Tris HCl a 10 mM ficando no mnimo
12 h na geladeira. A limpeza do RNA foi feita com 0,5 L/mL de RNAse a 10 mM/uL,
incubando a 37 C em banho-maria por 30 minutos. A quantificao do DNA foi realizada
pelo mtodo comparativo em gel de agarose a 1,2% corado com 1,5 L de brometo de etdio
(20 mg/mL) para cada 100 mL de gel, usando-se como referncia diferentes concentraes do
marcador padro DNA de fago (20, 50, 100, 200 e 400 g/L).

Gerao de Fingerprinting de DNA
A anlise de Fingerprinting ocorreu atravs da metodologia de DAF (DNA
amplification fingerprinting) usando-se primers aleatrios, incluindo 37 primers, sendo um
octmero, 35 decmeros e um 15-mero (Tabela 2). As reaes de DAF ocorreram conforme
descrito por Winter et al. (2000), utilizando-se 0,1 g de DNA total, 1,5 L de tampo de
PCR 10x, 2,5 mM MgCl
2
, 1 mM da mistura de dNTPs, 1 L de primer a 50 mM e 0,1 U de
Taq polimerase (Fermentas), ajustando-se o volume final para 15 L com H
2
O bidestilada
estril. A amplificao da reao de PCR ocorreu em termociclador eppendorf, com 2 min de
desnaturao inicial a 95C, seguidos de 40 ciclos compostos de trs etapas: desnaturao de
15 seg a 95 C; anelamento de 1 min a 35 C e alongamento por 2 min a 72 C. Ao final dos
40 ciclos a reao foi completada com um alongamento final de 2 min a 72 C, permanecendo
a 4 C at seu processamento. O produto da reao foi submetido eletroforese em gel de
Agarose concentrao de 1,8% tambm corado com brometo de etdio, sendo o produto da
amplificao posteriormente visualizado e fotografado com cmera integrada Sony Cybershot
(5,0 Mp) em transluminador ultravioleta.



51
Seleo dos iniciadores
A partir de 37 primers (Tabela 2) foram realizadas amplificaes atravs de PCR
(Polymerase Chain Reaction) pela metodologia de DAF anteriormente descrita, utilizando-se
oito espcies de famlia Araceae, sendo cinco do gnero Philodendron (dois acessos de P.
megalophyllum, e um exemplar de cada espcie P. pedatum, P. orntaum, P. imbe e P.
sphalerum, bem como de taxa selecionados como representantes do grupo-externo: gnero
Dieffembachia (D. elegans) e Monstera (M. dubia)). Uma amplificao de DAF encontra-se
apresentada na Figura 1. O objetivo principal desta etapa foi de avaliar o grau de
polimorfismo entre as amostras selecionadas e analisar a diversidade nos nveis
intraespecifco, interespecfico e intergenrico, uma vez que os primers mais informativos
seriam utilizados na amostragem total.

Anlise da amostragem com os primers selecionados
No total 12 iniciadores considerados mais informativos (10 bandas amplificadas na
proporo primer/amostras) para aplicar amostragem completa (listada na Tabela 1),
composta por 32 acessos, sendo 26 do gnero Philodendron, trs do gnero Monstera, dois
representantes do gnero Dieffenbachia e um do gnero Scaphispata (Tabela 3). Os
procedimentos e condies para realizao das reaes de DAF foram idnticos ao descrito no
tpico da gerao de polimorfismos anteriormente para a seleo de primers. O nmero de
bandas obtidas (referentes ao nmero de marcadores gerados) encontra-se anotado na Tabela
3 para melhor avaliao do poder de gerao de polimorfismos de cada primer usado.




52
Anlise dos dados e gerao da matriz de dados

Desenhou-se uma matriz de dados binrios a partir da anlise dos polimorfismos
gerados pelas reaes de DAF e baseada em bandas presentes, sendo A equivalentes s
bandas presentes e C s ausentes, procedimento utilizado para o programa MEGA 4, usando-
se os primers selecionados. Dados duvidosos foram designados por ? sendo excludos da
anlise. A matriz de similaridade gentica gerada foi analisada e agrupada pelo programa
MEGA verso 4 para Windows (Kumar et al., 2007) utilizando o mtodo neighbour-joining,
com bootstrap de 1000 replicaes. Nmeros cromossmicos integrados ao cladograma foram
compilados de Correia da Silva et al. (in prep).


Resultados e Discusso

Anlise dos polimorfismos na etapa de seleo
Foram testados 37 primers randmicos, os quais amplificaram 1228 bandas, das quais
291 foram polimrficas (ca. 23,7%). Dentre estas bandas, 74 foram geradas
intraespecificamente com base em dois acessos de P. megalophyllum (ARA036-CX1/2), com
mdia de 8,62 bandas/primer. Em nvel interespecfico, 122 polimorfismos foram gerados a
partir das espcies de P. imbe (ARA001-CX), P. orntaum (ARA027-RD), P. pedatum
(ARA005-PE) e P. sphalerum (ARA039-RD), perfazendo uma mdia de 17,08
bandas/primer. Por outro lado, comparando intergenericamente, as espcies D. elegans
(ARA028-CX) e M. dubia (ARA076-CX), revelaram 95 amplicons, correspondendo a 7,1
bandas/primer (Tabela 2).
53
Os resultados obtidos aps a seleo de primers revelaram um grau de polimorfismo
satisfatrio, entre as seis espcies selecionadas de Araceae (dois acessos de P.
megalophyllum, um acesso de cada uma das espcies P. orntaum, P. imbe, P. sphalerum e P.
pedatum, como tambm D. elegans e M. dubia). Tais resultados apontaram tambm,
conforme dendrograma gerado (Figura 2), que o gnero Monstera (grupo externo) despontou
na fase de seleo como o grupo mais prximo de Philodendron, em detrimento de
Dieffenbachia. A despeito disso, Mayo et al. (1997), classificam Dieffenbachia como sendo
o segundo mais prximo de Philodendron, aps Montrichardia, posicionando Monstera em
outra subfamlia, sendo assim um grupo bem mais distante. Tal discrepncia pode ser
justificada pelo fato de haver poucos representantes do grupo analisado (no caso, espcies do
gnero Philodendron) na etapa de seleo de primers, tornando uma avaliao criteriosa do
grupo externo menos informativa do que aquela obtida com a amostragem completa. Tal
suposio foi reforada pela anlise envolvendo todos os txons selecionados, onde
Dieffenbachia ocupou uma posio mais prxima de Philodendron, confirmando as
proposies da taxonomia clssica.
Durante a seleo, o iniciador que mais amplificou foi o L-5 com 67 bandas, enquanto
que D-7 foi o que amplificou menos, com 13 bandas (Tabela 2). O primer mais informativo
foi R370-9 amplificando 19 bandas polimrficas (7,2% do total das bandas polimficas),
enquanto o primer D-5 apresentou o menor nmero de amplicons polimrficos (trs),
correspondendo somente a 1,4% (Tabela 2).
Foi realizada uma anlise entre o total de bandas amplificadas em relao ao conjunto
de primers selecionados, observando-se que a amostra 1 (comparao intraespecfica) da
espcie P. megalophyllum (subclado 2a), apresentou o maior nmero de bandas polimrficas
(183, cerca de 57% do total das amplificaes entre os dois acessos). J entre as espcies P.
megalophyllum, P. orntaum, P. imbe, P. sphalerum e P. pedatum (comparao
54
interespecfica) o nmero de bandas polimrficas foi de 122, onde P. pedatum apresentou
185 bandas amplificadas. Quando comparados os polimorfismos entre as espcies D.
elegans, M. dubia e as espcies de Philodendron, observou-se que os dois acessos (grupos
externos) apresentaram 269 bandas polimrficas, representando 21,9% do total amplificado
(Tabela 2).
O nmero significativo de polimorfismos observado entre os grupos confirma o
potencial do marcador DAF na anlise de diversidade, tendo sido importante a etapa de
seleo dos 12 primers mais informativos, que na seqncia foram aplicados num
experimento envolvendo uma amostragem mais ampla, com 26 acessos do gnero
Philodendron, seis de Dieffenbachia, trs de Monstera e um de Scaphispata, possibilitando
identificar relaes de similaridade gentica entre os indivduos.

Gerao de amplicons a partir de primers selecionados

Com o uso de 12 iniciadores selecionados em 32 acessos foram obtidas 2.055 bandas.
O primer com maior amplificao em nmero de bandas foi o L-5, com 238 bandas, o qual
perfez 11,35% do total geral das bandas, enquanto que o G-06 foi o menos representativo,
com apenas 118 bandas (5,63% do total amplificado). Em relao exclusivamente ao gnero
Philodendron, o primer com maior polimorfismo foi o W-13, com 94 bandas, perfazendo
11,57%, e o menos polimrfico foi o O-19 com somente 40 bandas com 4,93% do total.
(Tabela 3).
Em relao ao nvel intraespecfico, o primer mais polimrfico foi tambm o W-13
com 24 bandas, enquanto que, o menos informativo foi o K-4, com apenas sete bandas, com
um percentual de 16,42% do total de bandas comparados neste nvel. No entanto, quando foi
analisado interespecificamente, o primer que resultou em mais bandas polimficas foi o L-
55
14, com 72 bandas, e o O-19 com a menor quantidade de polimorfismos, mais precisamente
32 bandas, com um percentual de 56,86% das espcies analisadas, perfazendo 73,28% das
bandas do gnero Philodendron em relao a toda a amostra de anlise. Por outro lado, em
uma avaliao intra e intergenrica, o L-14 foi o mais polimrfico com 11 e 28 bandas, e o
O-19 foi menos polimrfico com uma e 12 bandas, chegando a 5,95% e 20,76% do total de
bandas encontradas, respectivamente.
A anlise feita em todas as amostras em relao ao nmero de amplicons, a espcie
que apresentou maior nmero de bandas foi o acesso 20 (P. megalophyllum) (Figura 3), com
um total de 78 bandas amplificadas (3,3% do total geral), considerando os 12 primers
utilizados. Por outro lado, a amostra 32 (D. elegans) revelou o menor nmero de bandas
amplificadas (42), totalizando 1,65% quando comparadas com as demais amostras.

Diversidade Gentica entre os gentipos

O dendrograma incluindo as 32 amostras (Figura 4), gerado pelo programa MEGA,
revelou relaes entre os acessos, gerando um grande ramo (6) incluindo todas as espcies do
gnero Philodendron (com quatro grupos aqui designados como G1, G2, G3 e G4) e
ramificaes basais (1 a 5) incluindo os txons do grupo externo (GE). No que tange ao grupo
dos Philodendron quatro ramos (A, B, C e D), referem-se aos grupamentos indicados por G1,
G2, G3 e G4, onde se formaram 16 subramos, dividindo-se em subramos ascendentes e
descendentes (Figura 4).
Em nvel interespecfico, todas as espcies de Philodendron agruparam-se no ramo 6,
com bootstrap de 97%, confirmando tratar-se de um grupo taxonomicamente coeso. Por sua
vez, este grupo formou quatro subgrupos (subclados A, B, C e D). Consistente com as
informaes taxonmicas, indivduos de diferentes populaes da mesma espcie agruparam-
56
se, como no caso de P. pedatum (3 acessos, Pernambuco, Par e Amazonas, subramo A1) e
P. linnaei (2 acessos Pernambuco e Par, subramo D1). Alm disso, como esperado,
diferentes indivduos da mesma populao ou de populaes do mesmo estado tambm se
agruparam com altos valores de bootstrap (Figura 4), como o caso de P. imbe (Par,
subramo A1), P. melinonni (Par, A2), P. elaphoglosoides (Amazonas, B2), P. squamiferum
(Par, D1), P. hylaeae (Amazonas, D4), P. megalophyllum (Par, D4) e D. elegans (Par,
5).
O grupo G1 apresentou valor significativo de bootstrap (99% em A), ramificando-se
em dois outros ramos (A1e A2) agrupando acessos de P. pedatum e P. imbe formados por
quatro subramos A1 e A1, respectivamente. O ramo H foi formado exclusivamente pela
espcie P. melinonni (A2) e seus sub-ramos A2e A2. A espcie P. melinonni apresenta
ocorrncia restrita Mata Amaznica, apresentando hbito epiftico. O acesso 004-PA foi
coletado em uma outra rea de mata (Moju) impactada por fragmentos urbanos, alm de
apresentar entre outras diferenas, divergncias morfolgicas no tamanho foliar e mculas ao
longo do pecolo. Curiosamente a mesma distino ocorreu para a espcie P. pedatum (001-
PA), tambm coletada na citada mata, apresentando hbito epiftico, separou-se das
populaes 001-RD (Reserva Ducke, Amazonas) e 005-PE (Pernambuco). Contudo, neste
ltimo caso no se observou qualquer contraste morfolgico entre as mesmas (Figura 4).
O grupo aqui designado como G2 formado pelo ramo B agrupou dois subramos B1 e
B2, unindo P. fragantissimum (sect. Macrolonchium Engl.) e P. elaphoglosoides (sect.
Oligospermium Engl.). Apesar de representar apenas uma populao no presente estudo, P.
fragantissimum (009-RD) de ampla ocorrncia, tendo sido coletada por todo Brasil (Soares,
et al., 1996). Apresenta uma acentuada heterofilia quando jovem e hbito semi-epiftico em
todas as reas de ocorrncia. Enquanto que P. elaphoglosoides (058-RD e 065-RD) apresenta
ocorrncia restrita Amaznia, tratando-se de plantas com aspectos mais rsticos, caules e
57
ramos acinzentados, de difcil cultivo fora do seu habitat natural, com folhas pequenas, porm
de tamanhos estabilizados.
O Grupo G3 formado pelo ramo C com a espcie P. ornatum (027-RD, seo
Polyspermium Engl.), formou um ramo isolado das demais espcies, tratando-se segundo
Correia-da Silva, et al. (2007) de espcie com uma arquitetura diferenciada, com heterofilia
marcante, pigmentao avermelhada na extremidade posterior do pecolo, sendo este
recoberto de tecido com caractersticas aveludadas, tendo sido coletada apenas na Regio
Ocidental da Amaznia. Tal posicionamento configurou a referida espcie como a mais
ancestral em relao aos outros gentipos. Estudos citogenticos revelaram que a espcie
possui 2n=34 cromossomos (nmero considerado ancestral para o gnero), alm de
diferenciao nos padres de bandeamento cromossmicos, como padres de condensao,
entre esta e as demais do gnero Philodendron (Correia-da-Silva, et al. 2007).
Por ltimo, o grupo G4 constituiu-se do ramo D, quatro subramos mais ascendentes
(D1, D2, D3 e D4) e quatro descendentes (D1, D1, D4 e D4). Tais ramos esto
compostos por 13 acessos, com sete espcies pertencentes ao subgnero Philodendron e duas
do subgnero Meconostigma (P. goeldi e P. solimoensense).
Dentro do G4, o subramo D1 incluiu dois acessos de P. squamiferum (D1) e duas de
P. linnaei (D1). As duas primeiras formaram um subgrupo isolado e distante do grupo de
sua seo (Schyzophyllum, e). J as outras duas populaes (D1) esto unidas, mesmo tendo
sido coletadas em regies distantes.
O subramo D2 uniu espcies (P. solimoesense coletada na Amaznia Oriental e P.
sagitifoilum - coletada na Amrica Central) do subgnero Meconostigma e Philodendron,
respectivamente, confirmando a proximidade gentica existente entre os subgneros de acordo
com Gauthier et al. (2008). Estas espcies pertencem a regies distantes, embora a base
gentica entre elas se mostrasse conservada. Por outro lado, a espcie P. goeldii(subg.
58
Meconostigma, D3) formou um ramo isolado das demais do mesmo subgnero do subramo
D2. Esta espcie difere das demais do citado subgnero devido sua distribuio foliar em
roseta, caracterstica peculiar entre as espcies do subgnero Philodendron.
Por outro lado, o ramo D4 foi formado por dois subramos D4 e D4, com a espcie
P. hylaeae representada por dois acessos. As espcies agrupadas em D4 (P. panchyphyllum,
P. megalophyllum e P. sphalerum) pertencem ao subgnero Philodendron e mesma seo
taxonmica (Oligospermium Engl.). Alm disso, P. megalophyllum e P. sphalerum ocorrem
em matas de baixios ou formaes de plats, enquanto P. panchyphyllum apresenta-se
endmica do Nordeste Brasileiro (Lenis, Chapada da Diamantina, BA), habitando
ambientes rupcolos em campos rupestres (Figura 4).
Em relao ao nvel cromossmico, o grupo G1 observa-se espcies de trs sees: P.
pedatum (sect. Schizophyllum Schott), P. imbe (sect. Oligospermium Engl.) e P. melinoni
(sect. Macrolonchium Engl.), sendo as duas primeiras espcies com 2n=32 cromossomos e a
ltima com 2n=30. O grupo G2 prevalece o caritipo 2n=32. O G3 encontrou-se o padro
2n=34. J no grupo G4 predominou o nmero cromossmico 2n=34, embora P. sphalerum
(D4) apresente 2n=32.
Um dado curioso que o super-ramo D, composto por nove espcies, pertencentes aos
subgneros Philodendron e Meconostigma (G4) agrupou a maioria das espcies com 2n=32
cromossomos (aproximadamente 55%), enquanto que as espcies com 2n=34 (P.
megalophyllum e P. panchyphyllum) representaram aproximadamente apenas 45%,
possivelmente, corroborando a proposio de Correia-da-Silva, et al. (2007), o qual sugere
que durante o processo evolutivo do subg. Philodendron as espcies provavelmente sofreram
isolamento pelo fenmeno de disploidia decrescente (2n=34, 32 e 30). Por outro lado, o G1,
G2 e G3 apresentaram um maior equilbrio em relao aos nmeros cromossmicos, embora
o nmero 2n=32 tenha sido o mais freqente (quatro espcies), com 2n=30 e 34 ocorra em
59
apenas uma espcie, respectivamente (Figura 4). No geral, os grupamentos indicam que a
disploidia teria ocorrido independentemente em mais de um ramo no gnero Philodendron.
Os grupos externos testados (GE) incluram os gneros Monstera, Scaphispata e
Dieffenbachia (clados 1 a 3, 4 e 5), respectivamente, posicionando-se basalmente em relao
ao gnero Philodendon. Porm, o gnero Monstera, curiosamente, subdividiu-se em trs
ramos individualizados, nos quais se observa certa coerncia, uma vez que so espcies
diferentes (M. obliqua, M. dubia e Monstera sp.) procedentes de ambientes distintos.
Enquanto que, os gneros Dieffenbachia e Scaphispata posicionaram-se mais diretamente
ligados a Philodendron. Neste sentido, os resultados em nvel intergenrico corroboraram a
mais recente classificao taxonmica das Araceae (Mayo et al., 1997) e com o tipo de
filogenia obtida nos estudos realizados com os marcadores moleculares AFLP (Tam et al.,
2004).
Finalmente, consideramos que o marcador DAF mostrou-se suficientemente
informativo no que diz respeito ao ndice de polimorfismo, informando bons nveis
intraespecificos, interespecficos como tambm intra e intergenricos. Apesar da existncia de
alguns estudos genticos envolvendo o gnero Philodendron, so necessrios estudos mais
aprofundados envolvendo fatores abiticos e biticos para se ter um melhor conhecimento
deste gnero, principalmente envolvendo relaes biogeogrficas como estudos ecolgicos de
espcies, a fim de revelar questes adaptativas da planta imposio dada por algum estresse
ambiental. Com isso, os marcadores moleculares podem elucidar diversos questionamentos
filogenticos, auxiliando no melhor entendimento deste gnero.




60
Agradecimentos

Agradecemos ao Ministrio da Cincia de Tecnologia - MCT, atravs do Museu
Paraense Emlio Goeldi MPEG e Instituto de Pesquisa da Amaznia INPA, pelo apoio para
as coletas, ao Conselho Nacional de Desenvolvimento Cientfico e Tecnolgico CNPq e
Coordenao de Aperfeioamento de Pessoal de Nvel Superior CAPES, pelo suporte dado
execuo deste trabalho.



Referncias

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fusarium wilt races 4 and 5. Theoretical and Applied Genetics 101: 1155-1163

62


1
2
3 4
Figura 1: Perfil de gis de DAF utilizando os primers: (1): P15-1, (2): OPJ-19, (3): OPD-6 e (4): OPK-4 em 8
acessos de Philodendron, Monstera e Dieffenbachia coletados das regies da Amaznia e Mata Atlntica Brasileira.




Ara028-CX D. elegans
Ara076-CX M. dubia
Ara027-RD P. ornatum
Ara005-PE P. pedatum
Ara036-CX P megalophyllum1
Ara036-CX P megalophyllum2
Ara039-RD P. sphalerum
Ara001-CX P.imbe
17
12
15
18
12 clado 1
clado 2
Subclado2b
Subclado2a
GE
G1
G2

Figura 2: Dendrograma gerado com base na matriz gerada pela etapa de seleo de primers. A anlise
foi feita pelo mtodo de neighbour joining, utilizando o programa MEGA 4 verso para Windows.
Legendas: G1e G2: espcies do gnero Philodendron; GE: Grupo externo: Dienffenbachia e Monstera.

63


Figura 3: Perfil de um gel de DAF utilizando o primer OPL-14 em 32 acessos de Philodendron,
Monstera, Dieffenbachia e Scaphispata coletados das regies da Amaznia e Mata Atlntica
Brasileira. Acessos especificados na Tabela 1.





64

Figura 4. Dendrograma gerado pela anlise de neighbour-joining usando polimorfismos de DAF com 12 primers. Legendas: GE:
Grupos externos formados pelos gneros Dieffenbachia, Monstera e Scaphispata representados pelos nmeros (1, 2, 3, 4 e 5).
G1, G2, G3 e G4: Grupos 1, 2, 3 e 4 formados pelos acessos do gnero Philodendron, formando ramos representados pelas
letras A, B, C e D e subramos representados pelas letras A1, A1, A1 , A2, A2, A2 , B1, B2, C, D1, D1, D1 , D2, D3, D4, D4 e
D4. Sg1: Subgnero Philodendron; Sg2: Subgnero Meconostigma. A barra significa: escala de diversidade gentica. * Fonte
dos nmeros cromossmicos ocorrentes no gnero: Correia-da-Silva, et al. (2007) e Mayo (apud Peterson, 1989).

Legenda das Sees:
Schyzophyllum
Oligospermium
Macrolonchium
Polyspermium
Baursia
Subg. Meconostigma
Macrobelium
Tritomophyllum
6
A
B
C
A1
A2
A1
A2
B1
B2
A1
A2
G1
G2
G3
D
D1
D2
D3
D4
D1
D1
D4
D4
G4

Sg.1
Sg.1
Sg.1
Sg.2
65

Tabela 1. Material vegetal utilizado na anlise molecular com DAF, incluindo local de coleta e nmero de acesso. Todas as espcies foram coletadas no Brasil,
encontrando-se atualmente em cultivo na Universidade Federal de Pernambuco. Ordem taxonmica dividida em gnero e subgnero. Numerao na coluna de ordem em
relao figura 3. Abreviao: P.= Philodendron Schott; D.=Dieffenbachia; M =Monstera. Fonte dos nmeros cromossmicos ocorrentes no gnero: Correia-da-Silva, et
al. (2007) e * Mayo (apud Peterson, 1989).
Gnero/Subgnero Seo Taxonmica Ordem Espcies 2n Local de Coleta Amostra
P. sbg. Meconostigma - 27 P. goeldi Barroso 28-48* Reserva de Adolpho Ducke, Manaus, Amazonas Ara019-RD
- 28 P. solimoesense A. C. Smith 32 Floresta Nacional de Caxiuan, Melgao, Par Ara046-CX

Baursia Reichb
24 P. linnaei Kunth. 32 Floresta Amaznica, Belm , Par Ara003-PA
23 P. linnaei Kunth. 32 Mata Atlntica, Recife, Pernambuco Ara042-PE

MacrobeliumSchott
29 P. sagitifoliumLiebm 28-48* Amrica Central Ara005-AC

MacrolonchiumEngl.
7 P. fragratissimumKunth 32 Reserva de Adolpho Ducke, Manaus, Amazonas Ara009-RD
10 P. melinonii Brong. Ex Regel 32 Floresta Nacional de Caxiuan, Melgao, Par Ara002-CX-1
11 P. melinonii Brong. Ex Regel 32 Floresta Nacional de Caxiuan, Melgao, Par Ara002-CX-2
8 P. melinonii Brong. Ex Regel 32 Floresta Nacional de Caxiuan, Melgao, Par Ara004-PA
9 P. melinonii Brong. Ex Regel 32 Floresta Nacional de Caxiuan, Melgao, Par Ara035-CX

Oligospermium Engl.
17 P. elaphoglosoides Schott 32 Reserva de Adolpho Ducke, Manaus, Amazonas Ara058-RD


18 P. elaphoglosoides Schott 32 Reserva de Adolpho Ducke, Manaus, Amazonas Ara065-RD
15 P. imbe schott 32 Floresta Nacional de Caxiuan, Melgao, Par Ara001-CX-1
16 P. imbe Schott 32 Floresta Nacional de Caxiuan, Melgao, Par Ara001-CX-2
19 P. megalopphyllumSchott 34 Floresta Nacional de Caxiuan, Melgao, Par Ara036-CX-1
20 P. megalopphyllumSchott 34 Floresta Nacional de Caxiuan, Melgao, Par Ara036-CX-2
21 P. panchyphyllumK. Krause 34 Mata Atlntica, Chapada Diamantina, Bahia Ara1106-NE
22 P. sphalerumSchott 32 Reserva de Adolpho Ducke, Manaus, Amazonas Ara039-RD

PolyspermiumEngl.
6 P. orntaumSchott 34 Reserva de Adolpho Ducke, Manaus, Amazonas Ara027-RD

SchizophyllumSchott
12 P. pedatum(W. J. Hooker)Kunth 32 Floresta Amaznica, Belm , Par Ara001-PA
13 P. pedatum(W. J. Hooker)Kunth 32 Reserva de Adolpho Ducke, Manaus, Amazonas Ara001-RD
P. sbg. Philodendron 14 P. pedatum(W. J. Hooker)Kunth 32 Mata Atlntica, Recife, Pernambuco Ara005-PE
30 P. squamiferumPoepp. & Endl. 32 Floresta Nacional de Caxiuan, Melgao, Par Ara067-CX-1
31 P. squamiferumPoepp. & Endl. 32 Floresta Nacional de Caxiuan, Melgao, Par Ara067-CX-2

TritomophyllumSchott
25 P. hylaeae Bunting. 32 Reserva de Adolpho Ducke, Manaus, Amazonas Ara075-RD-1
26 P. hylaeae Bunting. 32 Reserva de Adolpho Ducke, Manaus, Amazonas Ara075-RD-2
Dieffenbachia - 2 D. elegans Schott 34,68* Floresta Nacional de Caxiuan, Melgao, Par Ara028-CX-1
- 32 D. elegans Schott 34,68* Floresta Nacional de Caxiuan, Melgao, Par Ara028-CX-2
Monstera - 5 Monstera sp3. 60(24-70)* Mata Atlntica, Recife, Pernambuco Ara031-PE
- 3 M. dubia Adanson 60(24-70)* Floresta Nacional de Caxiuan, Melgao, Par Ara076-CX
- 4 M. obliqua Adanson 60(24-70)* Reserva de Adolpho Ducke, Manaus, Amazonas Ara084-RD
Scaphispta - 1 Scaphispata sp. Schott 28* Floresta Nacional de Caxiuan, Melgao, Par Ara072-CX
66
Tabela 2. Primers utilizados na seleo, incluindo seqncia e quantidade de bandas produzidas. Nmero de bandas especficas (intraespecfico,
interespecfico e intergenrico) quanto ao nvel (monomorfismo e polimorfismo).
Qtde. Referncia dos Seqncia do Quantidade Intra-especficas Interespecficas Intergenricas %
Primers Primer de Bandas a b c d das
por Primer Polim. Monom. Polim. Monom. Polim. Monom. Bandas
1 L-5 ACGCAGGCAC 67 0 20 5 30 1 11 5,5
2 N-6 GAGACGCACA 63 3 8 4 30 2 16 5,1
3 B-07 GGTGACGCAG 62 0 16 2 35 7 2 5,0
4 15_12 AGGTCTTGGGTAGGC 55 0 16 6 25 3 5 4,5
5 R470-10 CGCAGACCTC 54 5 10 5 27 1 3 4,4
6 D-08 GTGTGCCCCA 53 4 9 2 23 3 12 4,3
7 R370-9 CGCACTCGTC 52 6 6 5 19 8 8 4,2
8 H-03 AGACGTCCAC 51 4 8 3 19 1 13 4,2
9 P15-1 GGAAGCCAAC 49 3 16 3 23 2 2 4,0
10 J-19 GAGCACCACT 47 2 10 3 23 4 5 3,8
11 J-16 CCACACTACC 44 5 10 4 16 5 4 3,6
12 U03-1 CTATGCCGAC 43 1 12 3 15 6 6 3,5
13 B-05 TGCGCCCTTC 40 3 8 2 20 1 5 3,3
14 O-19 GGTGCACGTT 40 7 8 3 15 2 5 3,3
15 G-12 CAGCTCACGA 39 3 2 5 18 4 7 3,2
16 G-06 GTGCCTAACC 38 3 6 5 12 6 6 3,1
17 D-5 TGAGCGGACA 35 1 10 2 17 0 5 2,9
18 N-5 ACTGAACGCC 34 0 10 5 14 3 2 2,8
19 K-4 CCGCCCAAAC 33 3 4 2 17 0 7 2,7
20 W-13 CACAGCGACA 33 5 6 4 8 6 3 2,7
21 R160-9 CGTCGTTACC 32 3 4 7 9 3 6 2,6
22 R260-10 GACCGACACG 32 0 12 6 11 0 3 2,6
23 G-08 TCACGTCCAC 30 1 4 8 10 4 3 2,4
24 N-11 TCGCCGCAAA 30 0 8 5 13 0 2 2,4
25 R460-2 GCAGGATACG 30 0 6 4 10 1 8 2,4
26 H-5 AGTGGTCCCC 29 1 4 2 13 1 8 2,4
27 J-12 TCGCCGTGGT 27 2 2 2 11 6 4 2,2
28 M-6X CTGGGCAACT 26 3 4 4 5 5 5 2,1
29 H-18 GAATCGGCCA 24 3 2 6 4 5 0 2,0
30 E-6 AAGACCCCTC 23 2 2 3 11 3 2 1,9
31 D-7 TTGGCACGGG 13 1 2 2 7 2 0 1,1
32 B-11 GTAGACCCGT 0 0 0 0 0 0 0 0,0
33 C-03 GGGGGTCTTT 0 0 0 0 0 0 0 0,0
34 E-07 AGATGCAGCC 0 0 0 0 0 0 0 0,0
35 E-18 GGACTGCAGA 0 0 0 0 0 0 0 0,0
36 E-19 ACGGCGTATG 0 0 0 0 0 0 0 0,0
37 8_15 CTGATGAC 0 0 0 0 0 0 0 0,0
Totais - - 1228 74,0 245 122 510 95 168 -
67
68
Tabela 3. Primers selecionados para anlise das 32 amostras selecionadas para este estudo, incluindo nome e seqncia dos mesmos. Anlise feita a nvel de polimorfismos
dentro do gnero Philodendron e entre os gneros Dieffenbachia, Monstera e Scaphispata.
Primer Polimorfismos
N Nome Seqncia Intraespecfico Interespecfico total Intragenrico Intergenrico Total de Total
5'3' Philodendron polimorfismo de bandas
1 G-06 GTGCCTAACC 15 35 50 4 22 76 118
2 G-12 CAGCTCACGA 10 51 61 6 18 85 120
3 O-19 GGTGCACGTT 8 32 40 1 12 53 200
4 J-16 CCACACTACC 17 65 82 4 24 110 171
5 J-19 GAGCACCACT 21 41 62 8 8 78 134
6 K-4 CCGCCCAAAC 7 38 45 4 15 64 138
7 K-14 CCCGCTACAC 22 51 73 6 16 95 122
8 L-5 ACGCAGGCAC 18 62 80 5 27 112 238
9 L-14 GTGACAGGCT 20 72 92 11 28 131 229
10 N-6 GAGACGCACA 8 64 72 3 22 97 235
11 N-11 TCGCCGCAAA 12 49 61 7 19 87 141
12 W-13 CACAGCGACA 24 70 94 7 19 120 209
182 630 812 66 230 1108 2055
% 16,42 56,86 73,28 5,95 20,76 53,91
Concluses

1. Dentre os txons candidatos a grupo-externo, aqueles pertencentes ao gnero
Dieffenbachia apresentaram-se mais relacionados ao gnero Philodendron,
corroborando suposies da taxonomia morfolgica.
2. Dentre as espcies analisadas, P. ornatum assumiu uma posio basal, podendo
tornar-se um marcador evolutivo importante do grupo Philodendron, devido s suas
caractersticas morfolgicas e cariolgicas, sugerindo uma possvel ancestralidade
dentro do gnero.
3. O dendrograma gerado revelou caractersticas peculiares, em alguns casos, unindo
espcies da mesma seo taxonmica que apresentam hbitos variados, mas
tambm separando espcies classificadas na mesma seo, sugerindo que alguns
grupamentos podem ser artificiais.
4. Espcies de Philodendron com nmeros cromossmicos diferentes, com
predominncia para 2n=32 e 2n=34 agruparam-se em mais de um clado, sugerindo
a ocorrncia de mais de um evento de disploidia na evoluo do grupo.
5. O marcador DAF revelou que os txons de Philodendron aqui analisados
constituem um grupo monofiltico, mostrando-se suficientemente polimrfico em
nvel interespecfico e intergenrico, enquanto o agrupamento de populaes da
mesma espcie em populaes inclusive de regies diferentes confirma o carter
evolutivamente informativo deste marcador.
6. A aplicao desta tcnica no apenas serve de base para o entendimento sobre as
relaes genticas deste gnero, como tambm pode auxiliar na elucidao de
diversos questionamentos na famlia ou em outras plantas nativas, uma vez que este
marcador foi bastante til no estudo da diversidade gentica nas espcies em
estudo.



69

Abstract

The genus Philodendron (Araceae) is an important element of tropical forests, including
about 600 registered species endemic in the Americas and with substantial diversity in the
Amazon and Atlantic forests, where the presently studied species have been collected.
DAF (DNA Amplification Fingerprinting) markers are useful to generate polymorphisms
especially at low taxonomic levels (within genera and among related genera). The present
work 12 selected primers were able to reveal screenable polymorphisms for the evaluation
of individuals out of 26 populations of 18 Philodendron species, as compared with
Dieffenbachia (2 spp.) Monstera (3 spp.) and Scaphispatha (1 sp.). Most Philodendron
species belonged to the large (and controversial) subgenus Philodendron, with exception of
P. goeldi and P. solimoesense of sbg. Meconostigma. A total of 291 polymorphic bands
have been included in the data matrix for the generation of a dendrogram using neighbour-
joining analysis was able to unite all Philodendron species with consistent bootstrap value
(>85%). The generated dendrogram was associated with chromosome numbers of the
analyzed species, permitting a comparative evaluation of cytological trends. In general
species with 2n=32 grouped together, while species with 2n=30 and 34 grouped in a
separate clade. Further relationships revealed in the present work regarding the sbg.
Philodendron are also discussed. Members of subg. Meconostigma grouped in a clade
together with species of subg. Philodendron. An association of taxonomic entities in the
dendrogram with chromosome numbers permitted the identification of species with 2n=32
and 2n=34 chromosomes in more than one clade, indicating that disploidy may be
recurrent in the genus evolution. The revealed relationships regarding the analyzed taxa are
also discussed.
Key-words: Meconostigma - Dieffenbachia - Monstera - Scaphispatha Amazon
rainforest, Atlantic forest chromosome numbers.
70












7. ANEXOS











71









8.1 INSTRUES PARA AUTORES

Revista
Botanical Journal of the Linnean Society
Print ISSN: 0024-4074
London, England















72
INSTRUCTIONS FOR AUTHORS
The Linnean Society publishes four periodicals: the Biological, Botanical and Zoological
Journals, and The Linnean, the Society's newsletter and proceedings.
The Botanical Journal of the Linnean Society publishes original papers on systematic and
evolutionary botany and comparative studies of both living and fossil plants. Review
papers are also welcomed which integrate fields such as cytology, morphogenesis,
palynology and phytochemistry into a taxonomic framework. The J ournal will publish
new taxa as part of larger monographic revisions.
Submissions to the Botanical Journal are now made on-line using Manuscript Central. To
submit to the journal go to http://mc.manuscriptcentral.com/botjls. If this is the first time
you have used the system you will be asked to register by clicking on 'create an account'.
Full instructions on making your submission are provided. You should receive an
acknowledgement within a few minutes. Thereafter, the system will keep you informed of
the process of your submission through refereeing, any revisions that are required, and a
final decision.
Manuscripts submitted by other methods will not be considered.
Copyright assignment
Authors will be required to assign copyright in their paper to the Linnean Society of
London. Copyright assignment is a condition of publication and papers will not be passed
to the publisher for production unless copyright has been assigned. Authors can click
here to download a copy of the copyright assignment form. Please include it when
submitting a manuscript. (Please note where work is carried out by an author in their
capacity as an employee of a Company, it may be the case that copyright is held by the
Company. In this case it is important to ensure that someone with suitable authority within
that Company signs the Copyright Assignment Form, and that you tick box B. UK
government employees should tick box B, noting that the title of the copyright holder is
'Crown copyright'. Employees of the US federal government should tick box C.)
OnlineOpen
OnlineOpen is a pay-to-publish service from Blackwell that offers authors whose papers
are accepted for publication the opportunity to pay up-front for their manuscript to become
open access (i.e. free for all to view and download) via the Blackwell Synergy website.
Each OnlineOpen article will be subject to a one-off fee of 1300 (equivalent to $2600) to
be met by or on behalf of the Author in advance of publication. Upon online publication,
the article (both full-text and PDF versions) will be available to all for viewing and
download free of charge. The print version of the article will also be branded as
OnlineOpen and will draw attention to the fact that the paper can be downloaded for free
via the Blackwell Synergy service.
Any authors wishing to send their paper OnlineOpen must complete the combined payment
and copyright licence form available here (Please note this form is for use with
OnlineOpen material ONLY.)
Once complete this form should be sent to the Editorial Office along with the rest of the
manuscript materials at the time of acceptance or as soon as possible after that (preferably
within 24 hours to avoid any delays in processing). Prior to acceptance there is no
requirement to inform an Editorial Office that you intend to publish your paper
OnlineOpen if you do not wish to.
The copyright statement for OnlineOpen authors will read:
[date] The Author(s)J ournal compilation [date] The Linnean Society of London,
Botanical Journal of the Linnean Society




73
Author material archive policy
All original hardcopy artwork will be returned to authors after publication. Please note
that, unless specifically requested, Blackwell Publishing will dispose of all electronic
material and remaining hardcopy two months after publication. If you require the
return of any of this material, you must inform the editorial office upon submission.
Offprints
A PDF offprint of the online published article will be provided free of charge to the
corresponding author, and may be distributed subject to the Publisher's terms and
conditions. Paper offprints of the printed published article may be purchased if ordered via
the method stipulated on the instructions that will accompany the proofs.
Manuscript preparation
Authors should aim to communicate ideas and information clearly and concisely, in
language suitable for the moderate specialist. Papers in languages other than English are
not accepted unless invited. When a paper has joint authorship, one author must accept
responsibility for all correspondence; the full postal address, telephone and fax numbers,
and e-mail address of the author who is to check proofs should be provided. Although the
Society does not specify the length of manuscripts, it is suggested that authors preparing
long texts (20 000 words or more, including references, etc.) should consult the Editor
before considering submission. Please submit your manuscript in an editable format
such as .doc or .rtf. If you submit your manuscript in a non-editable format such as
PDF, this will slow the progress of your paper as we will have to contact you to
request an editable copy.
Papers should conform to the following general layout:
Title page
This should include title, authors, institutions and a short running title. The title should be
concise but informative, and where appropriate should include mention of family or higher
taxon in the form: 'Taxonomy of the oak, Quercus (Fagaceae)'. A subtitle may be included,
but papers in numbered series are not accepted. Names of new taxa should not be given in
titles.
Abstract
This must be on a separate page. The abstract is of great importance as it may be
reproduced elsewhere, and is all that many may see of your work. It should be about 100-
200 words long and should summarize the paper in a form that is intelligible in conjunction
with the title. It should not include references. The abstract should be followed by up to ten
keywords additional to those in the title (alphabetically arranged and separated by
hyphens) identifying the subject matter for retrieval systems.
Subject matter
The paper should be divided into sections under short headings. Except in systematic
hierarchies, the hierarchy of headings should not exceed three. Authors submitting papers
to the Botanical J ournal should consult Authors of Plant Names edited by R.K. Brummitt
and C.E. Powell (Royal Botanic Gardens, Kew, 1992; ISBN 947-643-44-3).. Names of
genera and species should be printed in italic or underlined to indicate italic; do not
underline suprageneric taxon names. Cite the author of species on first mention. Use SI
units, and the appropriate symbols (mm, not millimetre; m, not micron., s, not sec; Myr
for million years). Use the negative index (m
-1
, l
-1
, h
-1
) except in cases such as "per plant").
Avoid elaborate tables of original or derived data, long lists of species, etc.; if such data are
absolutely essential, consider including them as appendices or as online-only
supplementary material. Avoid footnotes, and keep cross references by page to an absolute
minimum.
References
We recommend the use of a tool such as EndNote or Reference Manager for reference
management and formatting.
74
EndNote reference styles can be searched for here: http://www.endnote.com/support/
enstyles.asp
Reference Manager reference styles can be searched for
here:http://www.refman.com/support/
rmstyles.asp
In the text, give references in the following forms: "Stork (1988) said", "Stork (1988: 331)"
where it is desired to refer to a specific page, and "(Rapport, 1983)" where giving reference
simply as authority for a statement. Note that names of joint authors are connected by "&"
in the text. When papers are by three authors, use all names on the first mention and
thereafter abbreviate to the first name et al. For papers by four or more authors, use et al.
throughout.
The list of references must include all publications cited in the text and only these. Prior to
submission, make certain that all references in the text agree with those in the references
section, and that spelling is consistent throughout. In the list of references, titles of
periodicals must be given in full, not abbreviated. For books, give the title, place of
publication, name of publisher (if after 1930), and indication of edition if not the first. In
papers with half-tones, plate or figure citations are required only if they fall outside the
pagination of the reference cited. References should conform as exactly as possible to one
of these four styles, according to the type of publication cited.
Burr FA, Evert RF. 1982. A cytochemical study of the wound-healing proteins in
Bryopsis hypnoides. Cytobios 6: 199-215.
Gould SJ. 1989. Wonderful life: the Burgess Shale and the nature of history. New York:
W.W. Norton.
Dow MM, Cheverud JM, Rhoads J, Friedlaender J. 1987b. Statistical comparison of
biological and cultural/history variation. In: Friedlaender J , Howells WW, Rhoads J , eds.
Solomon Islands project: health, human biology, and cultural change. New York: Oxford
University Press, 265-281.
Gay HJ. 1990. The ant association and structural rhizome modifications of the far eastern
fern genus Lecanopteris (Polypodiaceae). Unpublished D. Phil. Thesis, Oxford University.
Other citations such as papers "in press" may appear on the list but not papers "submitted",
"in review" or "in preparation". These may be cited in the text as "unpubl. data". A
personal communication may be cited in the text but not in the reference list. Please give
the initials and surnames for all authors of personal communications and unpublished data.
In the case of taxonomic reviews, authors are requested to include full references for
taxonomic authorities.
Give foreign language references in ordinary English alphabetic form (but copy accents in
French, German, Spanish, etc.), if necessary transliterating in accordance with a recognized
scheme. For the Cyrillic alphabet use British Standard BS 2979 (1958). If only a published
translation has been consulted, cite the translation, not the original. Add translations not
supplied by the author of the reference in square brackets.
Tables
Keep these as simple as possible, with few horizontal and, preferably, no vertical rules.
When assembling complex tables and data matrices, bear the dimensions of the printed
page (225 x 168 mm) in mind; reducing typesize to accommodate a multiplicity of
columns will affect legibility.
Illustrations
These normally include (1) half-tones reproduced from photographs, (2) black and white
figures reproduced from drawings and (3) diagrams. Use one consecutive set of Arabic
numbers for all illustrations (do not separate "Plates" and "Text-figures" - treat all as
"Figures"). Figures should be numbered in the order in which they are cited in the text. Use
upper case letters for subdivisions (e.g. Figure 1A-D) of figures; all other lettering should
be lower case.
75
1. Half-tones reproduced from photographs
Increasingly, authors' original images are captured digitally rather than by conventional
film photography. In these cases, please use settings on your equipment for the highest
possible image quality (minimum 300dpi).
Desktop technology now allows authors to prepare plates by scanning photographic
originals and then labelling them using graphics programs such as Adobe Illustrator. These
are acceptable provided:
1. Resolution is a minimum of 300 dpi at the final required image size. The
labelling and any line drawings in a composite figure should be added in
vector format. If any labelling or line drawings are embedded in the file
then the resolution must be a minimum of 800 dpi. Please note that vector
format labelling will give the best results for the online version of your
paper.
2. Colour images are supplied in CMYK rather than RGB mode.
3. Electronic files are saved uncompressed as TIFF or EPS files.
In the case that it is not possible to provide electronic versions, please supply photographic
prints with labelling applied to a transparent overlay or to a photocopy.
Grouping and mounting: when grouping photographs, aim to make the dimensions of the
group (including guttering of 2 mm between each picture) as close as possible to the page
dimensions of 168 225 mm, thereby optimizing use of the available space. Remember
that grouping photographs of varied contrast can result in poor reproduction. If supplied as
photographic prints, the group should be mounted on thin card. Take care to keep the
surface of the prints clean and free of adhesive. Always provide overlays to protect the
photographs from damage.
Lettering and numbering: If supplied as photogarphic prints, letters and numbers should be
applied in the form of dry-transfer ("Letraset") letters, numbers, arrows and scale bars, but
not measurements (values), to transparent overlays in the required positions, rather than to
the photographs themselves; this helps to avoid making pressure marks on the delicate
surface of the prints, and facilitates relabelling, should this be required. Alternatively,
pencilled instructions can be indicated on duplicates or photocopies marked "FOR
LABELLING ONLY". Self-adhesive labels should be avoided, but if they are used, they
should not be attached directly to either photographs or overlays, but to photocopies, to
indicate where they are to be positioned. Labelling will be inserted electronically by the
typesetter in due course.
Colour: Online-only colour in figures is free of charge, however it is essential in these
cases that the figure legends apply equally well to both printed greyscale and online colour
versions, and do not specifically refer to the colour. Alternatively you can opt for paid full
colour (see the Colour Work Agreement Form here), covering the full cost of reproduction,
such that colour is used both in the hardcopy and online. In this case, legends may make
reference to colour if necessary, such as for a key. If your paper is accepted and you have
opted for paid full colour, we will need a completed Colour Work Agreement
Form. Colour illustrations will be published free of charge provided that the colour is
deemed essential by the Editor for interpretation of the figure.
2. Black and white figures reproduced from drawings
These should be scanned at a minimum resolution of 800 dpi and supplied in TIFF format.
Please note that J PEG, Powerpoint and doc files are not suitable for publication. If is is not
possible to provide electronic versions, the figures supplied should be in black ink on white
card or paper. Lines must be clean and heavy enough to stand reduction; drawings should
be no more than twice page size. The maximum dimensions of published figures are 168
225 mm. Scale bars are the most satisfactory way of indicating magnification. Take
account of proposed reduction when lettering drawings; if you cannot provide competent
lettering, it may be pencilled in on a photocopy.
76
3. Diagrams
In most instances the author's electronic versions of diagrams are used and may be re-
labelled to conform to journal style. These should be supplied as vector format
Encapsulated PostScript (EPS) files. Please note that diagrams or graphs will not reproduce
well in the online version of your paper unless they are in vector format due to low
maximum screen resolution.
Type legends for Figures in numerical order on a separate sheet. Where a "key" is required
for abbreviations used in more than one Figure, this should be included as a section of the
main text.
Authors whose manuscripts contain large phylogenies, and who feel that these cannot be
represented well in the standard page format, may opt to pay for fold-out pages as part of
their article (see the Fold-Out Agreement Form here). Please note that fold-out pages will
be included only with the Editor's agreement.
Authors wishing to use illustrations already published must obtain written
permission from the copyright holder before submitting the manuscript.
Authors may, in the first instance, submit good xerox or photographic copies of
figures rather than the originals.
Detailed instructions on preparing illustrations in electronic form are available here.
Authors may be charged for alterations at proof stage (other than printer's errors) if they
are numerous.
Supplementary Material
Authors wishing to submit material to be hosted as online supplementary material should
consult the author guidelines here. Authors should note that the Editor may suggest that
figures, tables, and lists not deemed necessary for the understanding of the paper should be
published online as supplementary material.
Please follow these guidelines carefully:
Include all parts of the text of the paper in a single .doc or .rtf file. The ideal
sequence is: (1) Header (running heads; correspondence; title; authors; addresses;
abstract; additional keywords, etc.). (2) Body of article. (3) Acknowledgements.
(4) References. (5) Figure Legends. (6) Tables (for each table, the legend should
be placed before the body of the table). (7) Appendices.
Include all figure legends, and tables with their legends if available.
Do not embed figures in the text file
Do not use the carriage return (enter) at the end of lines within a paragraph.
Turn the hyphenation option off.
Specify any special characters used to represent non-keyboard characters.
Take care not to use l (ell) for 1 (one), O (capital o) for 0 (zero) or (German
esszett) for (beta).
Copyright
Authors receiving requests for permission to reproduce work published by the Linnean
Society should contact Blackwell Publishing for advice.
Pre-submission English-language editing
Authors for whom English is a second language may choose to have their manuscript
professionally edited before submission to improve the English. A list of independent
suppliers of editing services can be found here. All services are paid for and arranged by
the author, and use of one of these services does not guarantee acceptance or preference for
publication.


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