Tercer Cuatrimestre

Asignatura:

Actividad 5. Prctica 1: Cuantificacin de glucosa en mermeladas

Alumna

Facilitador

Yucatn a enero 2014

MARCO TERICO Una mermelada corresponde a una mezcla de fruta entera, trozada o molida, con una misma cantidad de azcar (sacarosa, granulada), que ha sido calentada y evaporada hasta alcanzar una concentracin de azcar equivalentes a los 65 Brix. La adicin de azcar ms ciertas sustancias de las frutas producen la consistencia de gel que conforma la textura de las mermeladas y jaleas. Para lograr esto es necesario que exista un nivel de acidez y un porcentaje de azcar adecuados. Para determinar la concentracin de glucosa en mermelada es necesario hidrolizar las molculas de sacarosa en glucosa y fructosa en presencia de cido 3,5-dinitrosaliclico (DNSA) generando una coloracin rojo-marrn.

OBJETIVOS Determinar la concentracin de glucosa en una muestra de mermelada.

DESARROLLO

Material Matraz aforado Pipeteas

Equipo Balanza Bao de agua

Reactivos Muestras de mermelada DNSA (cido 3,5-

dinitrosaliclico) Matraz Erlenmeyer Embudo Papel filtro Espectrofotmetro cido sulfrico H2SO4 Solucin de NaOH Tartrato potasio Tubos de ensaye de sodio y

Preparacin del reactivo DNSA (cido 3,5-dinitrosaliclico) Disuelvan 10 g de DNSA en 200 ml de NaOH 2.0M. Calienten la disolucin y mezclen perfectamente. Disuelvan 300 g de tratrato de sodio y potasio en 500 ml de agua (estabilizante de color). Mezclen ambas disoluciones, agiten y enrasen a 1.0 l con agua destilada.

Cuantificacin de azcares totales 1. Pesen 1.0 g de mermelada en un matraz Erlenmeyer y aadan 10 ml de H2SO4 2M. 2. Calienten en bao de agua hirviendo durante 20 minutos 3. Dejen enfriar y aadan con mucho cuidado 12 ml de NaOH al 10% p/v 4. Agiten y filtren a un matraz aforado de 100 ml y enrasen con agua destilada. 5. Transfieraan 10 ml de la disolucin de la mermelada a otro matraz aforado de 100 ml y enrasar con agua destilada.

Cuantificacin de azcares reductores 1. Pesen 3.0 g de mermelada en un matraz Erlenmeyer y aadan 50 ml de agua destilada. 2. Calienten y agiten durante 10 minutos 3. Filtren a un matraz aforado de 100 ml y enrasen con agua destilada. 4. Transfieran 10 ml de la a otro matraz aforado de 100 ml y enrasar con agua destilada.

ANLISIS DE LOS RESULTADOS

Obtencin de la curva de calibracin

1. Preparen la solucin estndar de glucosa (15 mg/ml): pesen 1.5 g de glucosa en un matraz aforado de 100 ml y enrasen con agua destilada. 2. Etiqueten 5 matraces aforados de 100 ml con las letras A, B, C, D y E. 3. En cada matraz transfieran los volmenes de solucin estndar de glucosa y agua destilada de acuerdo a la siguiente tabla:

Matraz Volumen de solucin estndar de glucosa (ml) Volumen de agua destilada (ml) Concentracin de glucosa (mg/ml)

A 2

B 3

C 6

D 8

E 10

98 0.3

97 0.45

94 0.9

92 1.2

90 1.5

1. Etiqueten y llenen seis tubos de muestra tal y como se muestra en la siguiente tabla:

Nmero de la muestra Solucin estndar de glucosa (matraz) Volumen de solucin estndar de glucosa (ml) Volumen de reactivo DNSA (ml) Volumen de agua destilada (ml)

Blanco N/A

1 A

2 B

3 C

4 D

5 E

1 3

1 2

1 2

1 2

1 2

1 2

2. Calienten los tubos en agua hirviendo durante 5 minutos. 3. Dejen enfriar los tubos y aadan 6 ml de agua destilada a cada tubo. 4. Midan la transmitancia de cada uno de los tubos a 430 nm en el espectrofotmetro.

Concentracin de glucosa (mg/ml)

Transmitancia (lectura Spektra, T%) del

Absorbancia (A)

Absorbancia especfica de la glucosa Ablanco) (A

0 (Blanco) 0.30 0.45 0.90 1.20 1.50

27.54 23.44 20.04 18.21 15.13 14.45

0.56 0.63 0.69 0.74 0.82 0.84

0 0.07 0.13 0.18 0.26 0.28

8.

Grafiquen los valores de absorbancia vs. Concentracin, para obtener la curva

de calibracin.

Curva de Calibracin de Glucosa

0.3500 0.3000 0.2500 Absorbancia 0.2000 0.1500 0.1000 0.0500 0.0000 0 0.5 1 1.5 2 Concentracin de Glucosa (mg/mL) y = 0.1717x + 0.0346 R = 0.9614

Medidas de las muestras de mermelada 1. Coloquen 1 ml de la disolucin de mermelada, 1 ml del reactivo de DNSA y 2 ml de agua destilada en un tubo de ensayo. 2. Calienten los tubos en agua hirviendo, durante 5 minutos. 3. Dejen enfriar los tubos y aadan 6 ml de agua destilada a cada tubo . 4. Determinen la transmitancia de cada tobo en el espectrofotmetro a 430 nm. 5. Los valores obtenidos para las muestras fueron los siguientes:

Muestra

Transmitancia (lectura Spektra, T%) del

Absorbancia (A)

Absorbancia especfica de la glucosa (A Ablanco)

1 2

18.6 21.3

0.73 0.67

0.17 0.11

6. Con la ayuda de la curva estndar, determinen la concentracin de glucosa en las muestras. Utilizando la ecuacin de la grfica despejando x

Sustituimos la absorbancia para cada muestra y obtenemos valores de concentracin para las muestras, resultados en la siguiente tabla:

Absorbancia especfica de la Concentraci Transmitancia(lectur Muestra 1 2 a del Spektra, T%) 18.6 21.3 Absorbancia (A) 0.73 0.67 glucosa (A Ablanco) 0.17 0.11 n de glucosa (mg/ml) 0.79 0.44

1. Finalmente determinen la concentracin de glucosa por gramo de mermelada, no olviden considerar las diluciones de cada una de las muestras. a) Considerando que para obtener la concentracin de la muestra se aplica la siguiente frmula:

Donde: C Pm Fd = = = Concentracin de la muestra expresado en mg/mL Peso de la muestra expresado en mg Factor de dilucin de la muestra (mL)

b) El factor de dilucin de la muestra de mermelada de acuerdo a la preparacin para la cuantificacin de azcares totales es: Peso de la muestra: 1 g Volumen de primer aforo: 100 mL Volumen de alcuota: 10 mL Volumen final de aforo: 100 mL

c) Despejando Pm y sustituyendo para cada muestra:

La concentracin de glucosa por gramo para la muestra 1 es de 0.79 g y para la muestra 2 es de 0.44 g.

CONCLUSIONES En esta prctica se observ la utilizacin correcta del espectrofotmetro como mtodo instrumental para determinar la concentracin de azcares en una sustancia orgnica.

REFERENCIAS Skoog Douglas, Anlisis Instrumental, Mxico, 2000, Ed Interamericana Daniel C. Harris; Anlisis Qumico Cuantitativo, 1999.Ed. Revert