ANATOMA FUNCIONAL DEL SISTEMA INMUNITARIO Clulas del sistema inmunitario Todas las clulas del sistema inmunitario

proceden de clulas primordiales pluripotentes a travs de dos lneas principales de diferenciacin. a) LNEA LINFOIDE. Produce los linfocitos T y B, ambos con Rc de superficie para Ags. Existe adems una tercera poblacin de clulas (TPC) o clulas nulas, que no tienen los Rc tpicos y son citotxicas. b) LNEA MIELOIDE: Conduce a la formacin de monocitos, macrfagos y granulocitos. Hay adems otras clulas auxiliares como las clulas presentadoras de Ag (CPA), plaquetas que intervienen en la coagulacin e inflamacin y mastocitos. Clulas linfoides. Los linfocitos se producen en los rganos linfoides primarios (timo y mdula sea) a un ritmo de 109/da. Algunas de estas clulas emigran a los rganos linfoides secundarios (bazo, ganglios linfticos, amgdalas y tejido linfoide no encapsulado). En el adulto hay unas 1022 clulas (2% del peso total del cuerpo). Estas clulas son el 20% de los leucocitos totales. Heterogeneidad morfolgica Los linfocitos son heterogneos en cuanto al tamao, morfologa, relacin N/C, grado de tincin citoplasmtica y presencia de grnulos azurfilos. Al microscopio ptico y con tincin GIEMSA se distinguen dos tipos de clulas en reposo: a) Linfocitos pequeos (sin grnulos azurfilos y relacin N/C alta). Los LT en reposo presentan dos patrones morfolgicos: - Patrn no granular: la mayor parte de los LTh y LTc presentan cuerpos de Gall (acumulaciones de lisosomas primarias asociados a gotitas lipdicas). - Patrn granular: 10% de LTh y 35% de LTc/s presentan morfologa linfocitaria granulosa (LGL) con lisosomas primarios dispersos por el citoplasma y un aparato de Golgi bien desarrollado. Los grnulos son electrodensos y peroxidasa negativo. b) Linfocitos granulares grandes o LGL (con grnulos azurfilos y relacin N/C baja). Son las TCP (la mayora) y algunos LT que tienen un nmero alto de grnulos. En los tejidos tienen morfologa dendrtica. c) Linfocitos B: en reposo no muestran cuerpos de Gall y su citoplasma est ocupado por lisosomas aislados y dispersos; en los LB activados hay sntesis de RER. d) Clulas NK: junto con LT TCR-1+ y algunos LTc, se caracterizan por poseer morfologa LGL, aunque un nmero ms elevado de grnulos azurfilos. 2.1.1.2. MARCADORES. Los linfocitos y otros leucocitos, as como sus precursores hematopoyticos, presentan patrones caractersticos de molculas de superficie, que pueden ser aprovechadas como marcadores para distinguir y caracterizar distintas poblaciones celulares. Son molculas que pueden utilizarse para identificar a las poblaciones celulares con el uso de Ac monoclonales especficos marcados con una sustancia fluorescente. El termino CD (cluster of differentiation designacin de agrupamiento) se usa para la denominacin de marcadores. Se pone CD seguido de un nmero. Si no se est seguro se pone una w delante del nmero (por ejemplo, CDw38). Hay varios tipos de marcadores: - Marcadores de linaje: caractersticos de cada linaje. Ej: CD3 es marcador de LT. - Marcadores de maduracin: expresados en distintos estadios de diferenciacin celular. Ej: CD1 es marcador de LT del timo y CD5 de periferia. - Marcadores de activacin: aparecen slo despus que la clula quede activada por algn estmulo. Ej: Rc de IL-2 es marcador de LT perifricos activados; los linfocitos CD3+ se dividen en dos subtipos, segn las isoformas de CD45: las clulas CD45RA+( clulas vrgenes) y las clulas CD45RO+ (clulas de memoria).

Marcadores superficie CD2 CD3 CD4 CD8 CD19 CD16 CD56 CD57 CD11b CD18 Ig CD45 CD5 HLA-II HLA-I

de

Linfocito B +++ +++ +++ +/+++ +++

Linfocito T CD4+ +++ +++ +++ + +++ +++ +++ +++

Linfocito T CD8+ +++ +++ +++ + +++ +++ +++ +++

Clula NK +++ +/+++ +++ +++ ++ ++ +++ ++

2.1.2. CLULAS T. Los linfocitos T son clulas que maduran en el timo, aunque se cree que existen mecanismos de maduracin extratmicos de localizacin perifrica (piel, mucosa intestinal). Durante la embriognesis, es el hgado el principal productor de clulas T. Durante las ultimas semanas de Vida fetal, est funcin pasa a la mdula sea, que produce clulas que se dirigen al timo, donde se producen linfocitos T. El primer marcador usado para identificar los linfocitos T fue el CD2, implicado en la formacin de rosetas por unin a los eritrocitos de carnero. En la actualidad se usa el receptor de las clulas T (TCR), del que se conocen dos tipos: TCR-1 (a/b) y TCR-2 (g/d). Ambos TCR aparecen unidos a CD3 (transmisor de la seal). 2.1.2.1. . TCR-2/CD3 Son la mayora de los linfocitos (85-95%). Los CD4+ predominan 2:1 sobre los CD8+ en sangre perifrica. a) CD4+/MHC-II: son los linfocitos LTh y reconocen al Ag asociado a MHC-II. A microscopio, la mayora muestran el llamado corpsculo de Gall (un grupo de lisosomas primario junto con gotitas de lpidos). Segn el patrn funcional de secrecin de citocinas, se distinguen dos clones de LTh: - LTh1 (secretan IL-2 e IFN-gamma): median en la actividad citotxica y en la inflamacin local; son importantes en la inmunidad celular y defensa contra parsitos intracelulares. - LTh2 (secretan IL-4, IL-5, IL-6 e IL-10): estimulan la inmunidad humoral, produccin de Ac y son importantes en la lucha contra parsitos extracelulares. - Tambin hay un bajo porcentaje de CD4+ que expresa marcadores de NK, pero no producen IL-2 y no proliferan en respuesta a Ag y mitgenos. b) CD8+/MHC-I: son los LTc y LTc/s. Un 65% de ellas poseen cuerpo de Gall. Reconocen el Ag expuesto en molculas MHC-I de clulas propias infectadas con virus o cancerosas, lo cual, junto con las seales adecuadas de citoquinas, provoca la activacin y proliferacin clonal, con diferenciacin a linfocitos T citolticos (CTL), que matan extracelularmente a las clulas propias enfermas. 2.1.2.2. . TCR-1/CD3 Son clulas de una primitiva poblacin citotxica (5-15% de los linfocitos totales) que opera en los lugares de entrada de los grmenes (mucosas). Otros marcadores son CD7, CD2, CD56. - CD4-/CD8-: linfocitos intraepiteliales (IEL) no activados y de sangre perifrica. - CD4-/CD8+: linfocitos intraepiteliales activados de mucosas y con actividad citotxica.

Las TCR-1/CD3+ se desarrollan a partir de precursores procedentes del hgado, los cuales abandonan el hgado y acaban de madurar en rganos perifricos (nicos clulas conocidas que maduran fuera de los rganos linfoides primarios). Estas clulas pueden tener actividad NK y, tras un cultivo de 24 horas con IL-2, pueden generar LAK. No son circulantes, sino que se localizan en ciertos epitelios (por ejemplo, los linfocitos intraepiteliales del intestino). Parece que estn especializados en reconocer ciertos patgenos (por ejemplo, micobacterias), que tienden a entrar por las mucosas. 2.1.3. CLULAS B. Son clulas de vida media corta y de morfologa no granular. Son el 5-15% de los linfocitos circulantes y se definen clsicamente por la expresin constitutiva de Ig en su membrana, que estn insertadas por un fragmento hidrfobo en el extremo C-terminal. Este Rc antignico de las clulas B (BcR) est formado por un heterodmero Ig-b Ig-a unidos por puentes disulfuro e implicados en la transduccin de seales al interior celular. Reconocen al antgeno en forma soluble. Tiene una estructura parecida a la IgM, pero se diferencia de esta en las regiones transmembrana e intracitoplasmtica. Estas Ig se detectan con Ac fluorescentes (la tincin en fri con Ac fluorescentes forma un anillo, crculo o parcheado). En los mamferos, los linfocitos B se diferencian en la mdula sea, mientras que en las aves lo hacen en la bursa o bolsa de Fabricio. La generacin de linfocitos B maduros se puede dividir en dos fases: - Fase inicial independiente del Ag. - Fase antgeno dependiente que culmina con la transicin al estado de clula plasmtica secretora de Ac. En ausencia de estmulo antignico, estos linfocitos B maduros vrgenes mueren por apoptosis al cabo de unos pocos das. Si, en cambio, se une por su BCR al Ag complementario especfico (y con la ayuda de seales de macrfagos y clulas T), se pone en marcha la seleccin y proliferacin clonal, que termina (al cabo de 4-5 das) con la diferenciacin de dos subpoblaciones: una de clulas plasmticas secretoras de Ac, y otra de clulas B de memoria (cebadas). Las clulas plasmticas carecen de Ig de membrana, son mayores y con ms proporcin de citoplasma que las B de las que proceden, su RE est muy desarrollado. Secretan gran cantidad de Ac con la misma especificidad antignica que la de las mIg de la clula B original. No circulan por la sangre ni por los vasos linfticos, sino que se localizan en los rganos linfoides secundarios y los lugares de la respuesta inmunolgica. Viven unos pocos das; al ser clulas en fase de diferenciacin terminal, carecen de capacidad mittica, y mueren por apoptosis. Los linfocitos B cebados de memoria pueden vivir en reposo durante largos perodos (ms de 20 o 30 aos). Cuando se exponen al Ag especfico, dan una respuesta inmunitaria ms rpida, ms intensa, y con mayor afinidad. Su aspecto es similar al de los linfocitos B vrgenes. La mayora de los LB humanos en sangre expresan simultneamente IgM e IgD en su membrana. Algunas clulas expresan IgG, IgA o IgE de superficie, adems de otros marcadores de linfocitos: - MHC-II (HLA-DP, DQ, DR): importante para la presentacin de Ag a los LT CD4+. - Hay Rc de complemento de C3b (CR1) y C3d (CR2) que estn implicados en la activacin y asentamiento linfocitario. El CR2 es el Rc del VEB. - Rc de IgG (CD32), CD19, CD20 y CD22. - CD5 en LB productores de autoAc (clulas B1 en contraposicin al resto de LB, que son B2). Tambin se encuentra en las clulas proliferantes de la leucemia linfoctica crnica (LLC). ACTIVACIN LINFOCITARIA. UNIN A UN Ag. Los LT y LB se activan cuando se unen a un Ag para el que son especficos, en presencia de clulas accesorias. Los linfocitos vrgenes en reposo proliferan y maduran hasta convertirse en clulas efectoras y de memoria (seleccin clonal a travs del reconocimiento antignico), en los rganos linfoides secundarios. Las clulas de memoria recirculan a travs del tejido corporal, linfa y sangre. EFECTOS DE LA ACTIVACIN LINFOCITARIA.

Los linfocitos estimulados evolucionan hacia el ciclo celular y maduracin a linfoblasto (aumenta la basofilia y el volumen celular): a) Blasto T: son clulas grandes, con citoplasma que contiene los orgnulos tpicos. Los blastos pueden ser agranulares o granulares segn la presencia o ausencia de grnulos electrodensos (todos los clones de LTh y LTc son granulares en el hombre). b) Blastos B: maduran hacia la diferenciacin para dar: - Clulas plasmticas (con aparato secretor desarrollado) que tienen un citoplasma basfilo y nuclolo excntrico. Estas clulas rara vez estn en sangre (0.1%) y s en tejidos y rganos linfoides secundarios. Cada clula es productora de Ac de una sola especificidad y clase de Ig. - Clulas de memoria (linfocitos pequeos) que se encuentran en los centros germinales (centrocitos) y recirculando por linfa y sangre. EN LA RESPUESTA INMUNE NATURAL. A) Actividad fagoctica: Los fagocitos engullen (fagocitan) partculas extraas (microorganismos y macromolculas extraas), clulas propias lesionadas o muertas y restos celulares. El fagocito se ve atrado por quimiotaxis, se adhiere por receptores al microorganismo o partcula extraa, con lo que se activa la membrana del fagocito, emitiendo pseudpodos (basados en el sistema contrctil de actina-miosina), que finalmente se fusionan, cerrndose y crendose una vescula membranosa que engloba al antgeno, denominada fagosoma. La destruccin intracelular de la partcula extraa comienza con la entrada del fagosoma en la ruta endoctica: el fagosoma se fusiona con los grnulos, para formar el fagolisosoma. El contenido vertido de los grnulos, junto con otras actividades del macrfago, supone una batera de mecanismos microbicidas y microbiostticos, adems de enzimas hidrolticas que digieren las macromolculas. El material de desecho se elimina por exocitosis. Este sera el mecanismo fagoctico bsico, pero dicho mecanismo primitivo se ve mejorado (unas 4.000 veces) por medio de otros componentes del sistema inmune: se trata de un conjunto de molculas, denominadas opsoninas, que recubren al microorganismo, y que sirven de vnculo de unin entre la partcula invasora y el fagocito. Como ejemplo de opsoninas se cuentan la IgG (para la que el fagocito posee el receptor Fcg R) y el componente C3b del complemento (para el que el fagocito dispone del receptor CR1). B) Actividad antimicrobiana: La actividad antimicrobiana viene dada por dos vas: C) Produccin de citoquinas. Los macrfagos producen citoquinas que atraen a otras clulas, sobre todo a PMN neutrfilos. Dichas citoquinas son las responsables de muchos de los efectos sistmicos de la inflamacin (p. ej., la fiebre). Tambin producen factores para fibroblastos y clulas endoteliales, que promueven la reparacin de los tejidos daados. Granulocitos (PMN). Los granulocitos se producen en la mdula sea (80 millones/min). Una vez formado, el granulocito no abandona la mdula sea, sino que permanece unos 3 das, constituyendo el pool de reserva. El tiempo de estancia en sangre es de 6-10 horas y la mitad de ellos estn adheridos a la pared de los vasos. Despus de la salida de los capilares, los granulocitos tienen una vida media corta de 3-5 das. Representan el 60-70% de los leucocitos sanguneos totales. No son especficas de un Ag y desempean un papel importante en la inflamacin y en la barrera inespecfica de proteccin contra microorganismos. Las formas maduras tienen el ncleo multilobulado y gran cantidad de grnulos que sirven para clasificarlas.

NEUTRFILOS (90%). Los grnulos son neutrfilos (afinidad por colorantes neutros).

Los agentes quimiotcticos son C5a, C3a, productos de degradacin del sistema fibrinoltico y generador de cininas, productos de secrecin de linfocitos, plaquetas y ciertas bacterias. Poseen tres tipos de grnulos:

Estas sustancias son capaces de destruir los microorganismos que son fagocitados y tambin pueden ser secretadas al medio cuando la partcula no puede ser fagocitada (ADCC e HPS III). EOSINFILOS. Son leucocitos PMN que se localizan en sangre y tejidos. En las personas normales, su concentracin en sangre es de 100-7000/mm3 y aumenta hasta 100 veces ms en procesos alrgicos, parasitosis, inflamaciones crnicas, inmunoterapia del cncer y SIDA. Estn directamente implicados en los procesos alrgicos de tipo asmtico y en reacciones frente a parsitos.

BASFILOS Y MASTOCITOS. Ambos tipos celulares poseen Rc de alta afinidad de IgE en la superficie celular. La unin del Rc con inmunocomplejos provoca la desgranulacin de mediadores que producen la reaccin de HPS I.

a) Los basfilos son menos del 0.5% de los leucocitos circulantes y se caracterizan por la presencia de grnulos de color azul violeta intenso. Se encuentran en sangre y linfa. Son clulas polinucleares y membrana plasmtica lisa. b) Los mastocitos son clulas que se encuentran en los tejidos, muy parecidas a los basfilos que proceden tambin de la mdula sea. Son clulas mononucleadas y membrana plasmtica con numerosas prolongaciones. Existen dos clases de mastocitos: - Mastocitos asociados a las mucosas (MMC): dependen de LT - Mastocitos asociados a tejido conjuntivo y epitelios (CTMC): independientes de los LT. Los grnulos de estos dos tipos celulares contienen heparina, ECF-A histamina y serotonina. Tambin pueden sintetizar SRS-A. Para que se produzca la liberacin de estos mediadores se tienen que entrecruzar por lo menos dos Rc de IgE con IgE y el alergeno.

El basfilo parece ser un tipo celular diferente a las clulas cebadas. As, el basfilo madura en mdula sea y circula en sangre como clula diferenciada y slo pasa a tejidos cuando se produce un estmulo inflamatorio. Los mastocitos proceden de un precursor distinto a los basfilos en medula sea; viajan por sangre en forma inmadura y pasan a los tejidos, donde maduran.

CLULAS DE LA TERCERA POBLACIN (TPC) O CLULAS NULAS. - Representan el 15-20% de los linfocitos sanguneos. - La mayora (no todos) son linfocitos granulares grandes (LGL), con mayor proporcin de citoplasma que los linfocitos T o B. - Poseen mitocondrias y ribosomas libres, pero poco REr. Exhiben gran A. de G. Lo que ms destaca a microscopio es la existencia de unos grnulos azurfilos densos a los electrones, delimitados por membrana. - Poseen dos tipos de funciones: accin citotxica y accin reguladora del sistema inmune a travs de las citoquinas que producen. - A diferencia de otros linfocitos, carecen de especificidad y de memoria, por lo que forman parte del sistema de inmunidad natural o inespecfico. - Sus marcadores distintivos son CD16 y CD57, pero carecen de marcadores de los linfocitos del sistema especfico. - Su maduracin es extratmica. - Son clulas que carecen de Rc de Ag convencionales (TCR-/CD3- e Ig-). Las TPC pueden distinguirse segn su funcin en: a) Clulas NK: destruyen algunas clulas tumorales infectadas por virus (son clulas con actividad agresora natural). b) Clulas K: citotoxicidad celular dependientes de Ac (ADCC). c) Clulas LAK: proceden de las clulas NK tras cultivarlas 24 horas con IL-2. Las TPC liberan IFN-gamma y otras citocinas que son importantes en la regulacin de la hematopoyesis y la respuesta inmunitaria.