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Sntese e Aplicao de Nanotubos de

Carbono em Biotecnologia
Edelma Eleto da Silva
Maro 2007
EDELMA ELETO DA SILVA
Sntese e Aplicao de Nanotubos de Carbono em
Biotecnologia.
Belo Horizonte 2007
Universidade Federal de Minas Gerais - UFMG
Sntese e Aplicao de Nanotubos de Carbono em
Biotecnologia.
Tese apresentada ao Departamento de
Ps Graduao de Fsica da Universidade
Federal de Minas Gerais em preenchimento
parcial dos requisitos para obteno do grau
de Doutor em Fsica.
Orientador: Prof. Luiz Orlando Ladeira.
Co-orientador: Prof. Rodrigo G. Lacerda
Belo Horizonte 2007
A minha famlia
e aos meus Orientadores
Agradecimentos
Sou imensamente grata ao professor Luiz Orlando Ladeira, pelos valiosssimos
ensinamentos, a excelente orientao, as grandiosas idias, a invejvel empolgao
destinada a este trabalho, e principalmente ao companheirismo durante toda minha estada na
UFMG.
Gostaria de agradecer ao professor Rodrigo Gribel Lacerda, que desde sua chegada
fez crescer, de maneira surpreendente, as atividades de pesquisa dentro do Laboratrio de
Nanomateriais, com muitos alunos, colaboraes interdisciplinares e interinstitucionais, sem
esquecer da pacincia e dedicao dada a todos. Ao professor Andr S. Ferlauto que me
auxiliou desde as primeiras snteses via CVD at na reviso desta tese. Ao Srgio Oliveira,
que me ajudou a crescer como pesquisadora e pessoa, sendo professor, conselheiro,
entusiasta e amigo.
Meus sinceros agradecimentos aos professores e respectivos orientados que abriram
as portas de seus laboratrios, contribuindo assim para a realizao deste trabalho.
Obrigada de corao a minha famlia pela amizade, carinho, amor e dedicao que
me propuseram no decorrer de toda a minha vida.
N
A O
N I S
C O M P O S I T O S
T P O E
U L S C
B A I
C A R B O N O D
S T O
E S
S
vii
Tese Doutorado Edelma Eleto da Silva
Resumo
A possibilidade de reconstituio dos tecidos sseos nos incentivou a buscar novos
materiais para a formao de um compsito que fosse biocompatvel, biofuncional e que
possussem as principais caractersticas fsicas de um arcabouo de crescimento de tecidos.
Por exemplo, a mistura de nanotubos de carbono com outros materiais como polmeros
podem gerar compsitos inteligentes com novas propriedades eltricas e mecnicas. Apesar
do uso de polmeros ter aumentado enormemente nas ltimas dcadas, este ainda tem seu
uso muito limitado na rea biomdica devido a sua baixa biocompatibilidade. Uma
alternativa vivel para substituio destes polmeros a utilizao do colgeno, que uma
biomolcula que se estrutura em forma de uma matriz altamente porosa. Baseados nesta
caracterstica e nas possveis variaes estruturais que podem ser causadas pelos NTC ao se
incorporar nesta matriz, comeamos a desenvolver esse trabalho que envolve aspectos de
pesquisa e desenvolvimento na rea de biotecnologia. Nesta tese iremos trabalhar com dois
sistemas nanomtricos de grande importncia: o colgeno, que uma seqncia de
molculas de aminocidos; e o NTC, que um conjunto de tomos de carbono ordenados
nanoscopicamente em forma de tubos, visando modificar, melhorar e criar novas aplicaes
nas reas de reconstruo de tecido e biointegrao.
O objetivo principal deste estudo a construo de estruturas que possam ser
colocadas em substituio a perdas de tecido, de modo a prover suporte para o meio
extracelular, bem como permitir que clulas hospedeiras recriem um novo tecido natural.
Para que este objetivo fosse alcanado foi necessria uma grande quantidade de NTC e
conseqentemente, o desenvolvimento do crescimento destas estruturas em larga escala.
Como primeiro passo de desenvolvimento deste trabalho, realizamos estudos de sntese em
larga escala de NTC via deposio qumica na fase vapor (CVD). Na segunda parte de deste
projeto, realizamos o estudo da incorporao de NTC em matrizes biodegradveis
(colgeno) para promover a formao do biocompsito colgeno: NTC. O biocompsito,
sofreu alteraes em sua resistncia mecnica tornando-se muito superior a matriz de
colgeno puro, o que torna vivel a utilizao dos mesmos para reparos de imperfeies
sseas. Isto foi possvel devido as caractersticas morfolgicas superiores que possibilitaram
uma reao tecidual favorvel, uma maior estabilidade qumica dos componentes, e um
maior estmulo a atividade celular na formao da matriz ssea e promovendo a
osteointegrao este material.
viii
Tese Doutorado Edelma Eleto da Silva
Abstract
Recent advances on bone tissue engineering led us to search new materials that are
biocompatible, with different active bio functions and characteristics which are similar to
real growth tissues. Recently, it has been demonstrated that new composites with improved
mechanical and electrical properties can be created by the introduction of small amounts of
carbon nanotubes (CNT) into other matrizes (like polymers). However, in spite of the
considerable amount of studied performed in polymers in these last decades, its low degree
of biocompatibility has hindered its wide use in biomedicine. An alternative and interesting
material for a composite would be the use of collagen. Collagen is biomolecule that has
highly porosity matrix. Based on this characteristic, we propose to develop a new
biomaterial composed by a mixture of collagen and carbon nanotubes. This new
biocomposite is a scaffold that can have important implications in a wide range of
biotechnology areas. This material has the potential to substitute biological structures, to
allow a more effective tissue regeneration, restitution and physical properties. Additionally,
the focus of the work involves two nanometer size systems of great interest: the collagen
which is a sequence of aminoacids and the NTC that is composed by atoms of carbon in the
forms of tubes.
The main focus of present thesis was to develop new structures that can be used for
tissue regeneration, support for cellular growth, and to permit host cells to create new
tissue. Firstly, a large scale synthesis method to grow carbon nanotubos was developed via
chemical vapor deposition (CVD). Secondly, we studied the incorporation of CNT into the
scaffold (collagen) to form biocomposite. It was verified that the biocomposite had
improved mechanical properties when compared with the pure collagen scaffold. We
showed improvements in the mechanic resistance of the biocomposite when compared to the
pure collagen. This material has also proved to repair a bone imperfection and indicated to
have a rapid adherence to the wound area when implanted. This was possible due to the
enhanced morphologic characteristics of the composite and due to its low toxicity that can
be favorable for tissue reaction and to improve cellular activity in the form of a bone
scaffold.
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Tese Doutorado Edelma Eleto da Silva
Sumrio
Lista de figuras ........................................................................................... ii
Lista de tabelas ......................................................................................... vii
1. Introduo ............................................................................................ 1
1.1. Nanotubos de carbono ...................................................................................... 4
1.2. Colgeno .......................................................................................................... 6
1.3. Compsitos. ...................................................................................................... 9
1.4. Biocompsitos. ............................................................................................... 10
2. Nanotubos de carbono obtidos via deposio qumica na fase vapor 13
2.1. Processo de sntese. ........................................................................................ 14
2.2. Preparo do catalisador para deposio qumica na fase vapor ......................... 16
2.3. Caracterizao do catalisador ........................................................................ 18
2.4. Caracterizao dos nanotubos de carbono via deposio qumica na fase vapor25
3. Nanotubos de carbono obtidos via sntese por Arco Eltrico ............ 37
3.1. Processo de sntese. ........................................................................................ 38
3.2. Caracterizao dos nanotubos de carbono via arco eltrico. ............................ 41
4. Purificao dos Nanotubos de carbono .............................................. 43
4.1. Purificao dos Nanotubos de carbono via deposio qumica na fase vapor .... 45
4.2. Purificao de Nanotubos de carbono via arco eltrico.................................... 51
5. Funcionalizao dos Nanotubos de carbono ...................................... 57
5.1. Nanotubos de carbono funcionalizados. ........................................................... 58
Alendronato de sdio .............................................................................................. 64
Solubilidade de nanotubos de carbono funcionalizados em soluo aquosa. .............. 69
6. Compsito de NTC e colgeno............................................................ 71
6.1. Extrao do colgeno e produo do compsito............................................... 72
6.2. Anlise trmica............................................................................................... 79
ii
Tese Doutorado Edelma Eleto da Silva
6.3. Ensaio de Trao............................................................................................ 81
6.4. Hidratao dos compsitos ............................................................................. 86
6.5. Hipteses de interaes .................................................................................. 90
7. Induo de crescimento de Hidroxiapatita sobre nanoestruturas. .... 95
7.1. Teste de biomineralizao de Hidroxiapatita in vitro ...................................... 98
7.2. Teste de Biomineralizao de Hidroxiapatita in vivo..................................... 111
8. Concluso ..........................................................................................118
A. Anexo .............................................................................................120
1. Caracterizaes utilizadas ................................................................................ 120
1.1. Microscopia de fora atmica. ...................................................................... 120
1.2. Microscopia eletrnica de varredura. ............................................................ 120
1.3. Espectroscopia Raman .................................................................................. 121
1.4. Anlise termogravimtrica ............................................................................ 122
1.5. Espectroscopia de Absoro de Iinfravermelho (modo transmisso). ............. 122
1.6. Microscopia eletrnica de transmisso .......................................................... 123
1.7. Preparao de amostra para medida de solubilidade. .................................... 123
9. Referncias Bibliograficas ................................................................124
ii
Tese Doutorado Edelma Eleto da Silva
Lista de figuras
Figura 1-1: Tipos de nanotubos de carbono monocamada segundo orientao de suas
redes cristalinas (a) nanotubos armchair (5,5), (b) nanotubos zigzag (9,0) e
(c) nanotubos quiral (10,5 )
[]
. .................................................................. 5
Figura 1-2: Exemplos de vetores quirais possveis. Os crculos maiores indicam
nanotubos metlicos, enquanto os crculos menores, nanotubos
semicondutores. ...................................................................................... 6
Figura 1-3: Estrutura do colgeno a) cadeias de tripleto presente nas matrizes de
colgeno b) tropocolgeno c) hlice tripla
[]
............................................ 8
Figura 2-1: Desenho esquemtico do sistema de crescimento de nanotubos de
carbono por CVD.................................................................................. 15
Figura 2-2: Curva de perda de massa por aquecimento durante a calcinao usando
analise termogravimtrica. .................................................................... 19
Figura 2-3: Isoterma de absoro e dessoro de hidrognio no catalisador
Fe:Mo/MgO com variao molar de MgO. ............................................. 20
Figura 2-4: Espectros Mssbauer a temperatura ambiente do catalisador Fe:Mo/MgO
tratado termicamente em diferentes temperaturas em atmosfera de argnio.
As linhas cinza continuas so associadas fase Fe
1-x
Mg
x
O; as linhas cinza
pontilhadas esto associadas a dois tipos de fase da magnetita e a linha
pontilhada preta associada fase Fe
1-x
Mo
x
O
y
. .................................... 22
Figura 2-5: reas relativas dos sub-espectros das trs fases obsedavas nos espectros
Mssbauer a temperatura ambiente: fase xido de ferro magnsio
(retngulos); Fe
3
O
4
(Tringulos) e Fe
1-x
Mo
x
O
y
(estrelas) ....................... 23
Figura 2-6: Difratogramas de raios-X das amostras tratadas termicamente em
diferentes temperaturas sob atmosfera de argnio. ................................. 24
Figura 2-7: Imagens de MEV de amostras de NTC crescidos sobre Fe:Mo/MgO
utilizando diferentes temperaturas de sntese: (a) 500C, (b) 600C, (c)
700C, (d) 800C, (e) 900C, e (f) 1000C. ........................................... 26
Figura 2-8: MET de NTC em snteses temperatura de a) 700
o
C e b) 900
o
C .......... 26
Figura 2-9: Espectro Raman de NTC (b) Regio da banda G e (a) RBM (usando
comprimento de onda 514,5nm) ............................................................ 28
iii
Tese Doutorado Edelma Eleto da Silva
Figura 2-10: Mostra a dependncia da temperatura com o rendimento do processo de
produo de NTC em funo da temperatura para a concentrao de
F:Mo/MgO 1,0: 0,35 :8,6..................................................................... 29
Figura 2-11: Foto a) catalisador espalhado sobre o barquinho e b) barquinho aps
processo de sntese de NTC para comparao visual entre volumes. ....... 30
Figura 2-12: Rendimento da sntese de NTC (a) comparao entre concentrao do
catalisador e rendimentos (b) dependncia da temperatura com o
rendimento............................................................................................ 31
Figura 2-13: Imagem de microscopia eletrnica de varredura onde so indicadas
nanopartculas de xido de magnsio..................................................... 33
Figura 2-14 Os espectros Mssbauer de transmisso, obtidos temperatura ambiente,
do catalisador sem qualquer tratamento trmico e das amostras de
nanotubos de carbono crescidos a 500, 600, 775 e 900
o
C. A linha continua
em cinza claro est associada fase Fe
1-x
Mg
x
O. A linha continua em cinza
est associada fase Fe
1-x
O
x
,as linhas pontilhadas cinza esto associadas
carbeto e as em preto esto associadas soluo slida -Fe(C). ............ 34
Figura 2-15: rea espectral das fases do nanotubos de carbono para diferentes
temperaturas ......................................................................................... 35
Figura 3-1: Desenho esquemtico de um sistema de sntese por arco eltrico.......... 39
Figura 3-2: Foto da parte interna da cmara aps deposio de NTC, usando
catalisador C/Ni/Y 550 Torr em atmosfera de hlio e com 100 A e 17 V.
............................................................................................................. 41
Figura 3-3: NTPS sintetizado via arco eltrico a) 3 imagens de MEV, b) 3 imagens
de MET................................................................................................. 42
Figura 3-4: Espectro Raman realizado com laser 514nm. ....................................... 43
Figura 4-1: Curva de TG e DTA referente a queima de NTC a) no purificados e b)
purificados em nanotubos sintetizados via CVD. ................................... 48
Figura 4-2 MEV de NTC e NTC purificado............................................................ 49
Figura 4-3: MET de NTC sintetizados via CVD a) no purificados e b) purificado . 50
Figura 4-4: Espectro Raman de NTC sintetizado via CVD...................................... 50
Figura 4-5: Curvas TG e DTG da decomposio trmica dos NTC a) no purificados
e b) purificados. As setas indicam o eixo de referencia para cada curva . 54
iv
Tese Doutorado Edelma Eleto da Silva
Figura 4-6: Seqncia de trs imagens MEV de comparativos (a) NTC purificados e
(b) no purificados ................................................................................ 55
Figura 4-7: Seqncia de trs imagens MET de NTC sintetizados via arco eltrico (a)
no purificados na primeira linha e (b) purificado na segunda linha ....... 56
Figura 4-8: Espectroscopia Raman de NTC sintetizado via arco eltrico e deste NTC
purificado. ............................................................................................ 56
Figura 5-1:esquema de um Nanotubo de carbono carboxilado. ............................... 59
Figura 5-2: Espectro IR de NTC carboxilado (a seta indica o pico caracterstico da
vibrao -OH do grupo COOH em ~1740cm
-1
) ...................................... 60
Figura 5-3: Termograma dos nanotubos de carbono carboxilados. As setas indicam o
eixo de referncia para cada curva. ........................................................ 61
figura 5-4: AFM dos NTC COOH em substrato de Si onde so mostrados topografia,
insero na parte superior esquerda da imagem indicando regio de corte
para medida de altura descrita a direita da mesma.................................. 62
Figura 5-5: Solubilizao instantnea dos NTC funcionalizados com carboxila
ilustrada sobre uma escala em segundos. ............................................... 63
Figura 5-6: Seqncia de duas imagens MEV de NTC COOH. ............................... 63
Figura 5-7: Espectroscopia Raman de NTC funcionalizados com carboxila (a) regio
das Bandas D e G (b) Regio do RBM. .................................................. 64
Figura 5-8: AFM de NTC bifosfonados sobre substrato de silcio onde so mostrados
topografia, insero na parte superior esquerda da imagem indicando
regio de corte para medida de altura descrita a direita da mesma. ......... 66
Figura 5-9: Espectro IR do NTC funcionalizado com Alendronato de sdio............ 67
Figura 5-10: Espectroscopia Raman de NTC funcionalizados com alendronato. ...... 68
Figura 5-11: Grfico de comparao de solubilidade entre diversos NTC. .............. 70
figura 6-1: Compsito Colgeno: NTC fabricado no laboratrio............................. 72
Figura 6-2: Seqncia de duas imagens de Micrografias da estrutura morfolgica de
colgeno produzidos de a) tendes de ovelha, b) e o compsito originado
deste colgeno, c) colgeno produzidos de caudas de rato e d) compsito
originado este colgeno, e respectivas ampliaes. ................................ 77
Figura 6-3: Espectro IR do compsito de colgeno com 4% de NTC e colgeno puro
obtidos por ATR ................................................................................... 78
Figura 6-4: Espectro Raman do compsito de colgeno com 4% de NTC................ 79
v
Tese Doutorado Edelma Eleto da Silva
Figura 6-5: Anlise trmica de estruturas de compsito e colgeno a) de cauda de
rato e b) de tendo de carneiro. ............................................................. 81
Figura 6-6: Exemplo das curvas de tenso versus elongao de filmes colgeno e
compsito.(a) colgeno de rato (b) colgeno de rato .............................. 83
Figura 6-7: Distribuio de tenso de ruptura para duas amostragens de colgeno. . 86
Figura 6-8: Comparativo entre a hidratao de colgeno e compsito em forma de
filme e de suporte 3D. ........................................................................... 88
Figura 6-9: Imagem para comparao de densidade qualitativa............................... 88
Figura 6-10: Solubilizao de compsitos com diferentes concentraes de nanotubos
de carbono observados diariamente, esquerda compsito com 4% de
NTC-COOH e a direita com 0,2% de NTC-COOH. O nmero escrito em
cada figura corresponde ao nmero de dias decorridos desde a imerso do
material na soluo fisiolgica. ............................................................. 89
Figura 6-11: Possibilidades de arranjos de colgeno em NTC. ................................ 93
Figura 6-12: Fragmento de uma hlice do colgeno (seqncia de protenas) ligada ao
NTC
[]
. .................................................................................................. 93
Figura 7-1: Imagens comparativas de HAp sobre substrato de Si, mostrando a
mineralizao a) soluo fisiolgica b) soluo molar. .......................... 99
Figura 7-2: Materiais expostos a soluo fisiolgica de Ca
2+
e PO
4
3-
A) NTC, B)
Compsito expostos por 1 semana e C) Nanotubo de carbono e D)
compsito expostos por 4 semanas. ......................................................100
Figura 7-3: Difratograma de Raios-X de HAp sobre substrato amorfo com soluo
molar. ..................................................................................................101
Figura 7-4: Mineralizao sobre NTC-COOH .......................................................102
Figura 7-5: Difratograma de raio-X sobre NTC.....................................................103
Figura 7-6: Comparao de formao de HAp sobre substrato de Si linha a) sem
agitao e linha b) sob agitao com as respectivas ampliaes. ...........104
Figura 7-7: Comparao morfolgica de HAp em a) colgeno imerso por 1semana e
c) colgeno imerso h 4 semanas e b) compsito imerso a 1semana d)
compsito imerso por 1 semana............................................................106
Figura 7-8: Difrao de raio-X das matrizes de a)colgeno e b) compsito. ...........107
Figura 7-9: Espectro na regio do infravermelho para estrutura do colgeno e do
compsito. ...........................................................................................108
vi
Tese Doutorado Edelma Eleto da Silva
Figura 7-10: Desenho esquemtico da relao entre a interface do compsito de HAp
e Colgeno
206.
......................................................................................110
Figura 7-11: Desenho esquemtico da relao entre a interface do NTC e da HAp. 110
Figura 7-12: Passos da cirurgia em fmur de co. .................................................112
Figura 7-13: Radiografias para acompanhamento de reestruturao ssea. a e b
primeiro dia, c e d trinta dias aps a cirurgia. .......................................114
Figura 7-14: Fotomicrografias das regies implantadas com a) controle b) colgeno
c) compsito COOH - As setas menores indicam a rea de ossificao, as
setas maiores indicam os limites do defeito sseo, As setas brancas
indicam o colgeno:nanotubo carboxilado, a rea delimitada indica o
tecido conjuntivo com intenso infiltrado inflamatrio. ..........................116
vii
Tese Doutorado Edelma Eleto da Silva
Lista de tabelas
Tabela 2-1: Catalisador Fe:Mo/MgO com variao molar de MgO comparao de
volume absorvido, dimetro dos poros e rea superficial. .................... 20
Tabela 6-2 Tenso na ruptura (MPa), e mdulo elstico (MPa) para colgenos,
compsitos e outras matrizes polimricas. ........................................... 85
1
Tese Doutorado Edelma Eleto da Silva
1. Introduo
Em 1959, no Encontro da Sociedade Americana de Fsica no Caltech, Richard
Feynman instigou a curiosidade dos pesquisadores em sua palestra There`s plenty of
room at the bottom abordando perspectivas da miniaturizao. Ele profetizou o
incio de uma nova maneira de pensar os processos e construo de estruturas
moleculares, invertendo a direo usual da formao de dispositivos. Sua idia
propunha construir: dispositivos ou estruturas funcionais a partir das molculas ou
entidades supramoleculares, ou seja, dos constituintes bsicos da matria no lugar da
abordagem convencional da escala macro em direo ao micro (miniaturizao).
Os materiais e dispositivos produzidos em escala menores apresentam
propriedades fsico-qumicas exticas devido ao aparecimento de efeitos qunticos
[1,
2]
, reduo de tamanho e aumento da rea interfacial, abrindo uma oportunidade
enorme criatividade humana em vrios segmentos da cincia e tecnologia.
Entre os materiais criados pelo homem usados em nanotecnologia esto uma
classe de materiais nanoestruturados de carbono, tais como: fullerenos sintetizados
em 1985
[3]
e os nanotubos de carbono descobertos por Ijima em 1991
[4]
.
Tais materiais de carbono, hoje apresentam um grande interesse de pesquisa
em fsica da matria condensada, bem como em outras reas de conhecimento como
qumica
[5,6]
, cincia, engenharia de materiais
[7]
, eletrnica
[8, 9, 10]
, biomateriais
[11]
e
medicina
[12]
. Nos ltimos anos, a pesquisa envolvendo os nanotubos de carbono
(NTC) se tornou extremamente ampla e diversificada abrindo novos campos de
estudo e grandes perspectivas de aplicao em todas as reas acima mencionadas com
um carter altamente multidisciplinar, permeando grande parte do conhecimento.
Existe na literatura atual uma vasta bibliografia a respeito das propriedades
fsicas, eletrnicas e mecnicas dos NTC
[13, 14, 15]
. Os NTC podem ser considerados
como sistemas unidimensionais e dependendo de seu raio e simetria (ou quiralidade),
podem se comportar como um metal ou semicondutor
[16]
. Devido a forte ligao
covalente de seus tomos, os NTC possuem uma alta condutividade trmica e uma
grande resistncia mecnica a trao. Os NTC podem ser sintetizados com uma nica
parede (NTPS) ou com paredes mltiplas (NTPM)
[17]
.
Atualmente, o potencial de aplicaes dos NTC imenso devido as suas
propriedades fsicas e qumicas, tais como grande rea superficial e excelentes
2
Tese Doutorado Edelma Eleto da Silva
propriedades termomecnicas, as quais possibilitam a aplicao em sensores, filtro
sem membranas e tambm na criao de novos biomateriais como compsitos para a
engenharia de reconstruo de tecidos
[18]
.
A mistura de NTC com outros materiais como polmeros pode gerar
compsitos inteligentes com novas propriedades eltricas, trmicas e mecnicas
[19]
Devido a estas mudanas fsicas, o uso de compsitos na rea biomdica, tem
aumentado enormemente nas ltimas dcadas. Com a incorporao de nanoestruturas
em matrizes biolgicas e biopolmeros
[20, 21]
. O estudo destas estruturas visa o
desenvolvimento de novos biomateriais baseados em compsitos utilizando NTC e
biopolmeros. Nesta tese em especial, tem como objeto de estudo a criao de um
biocompsito resultante da mistura de NTC a colgeno tipo I visando modificar e
melhorar as propriedades fsico-qumicas do colgeno para que possa ser utilizado
nas reas de reconstruo de tecidos e biointegrao em especial como um agente de
osteoregenerao.
Desta forma, o estudo deste compsito constitudo de colgeno e nanotubos de
carbono envolvem aspectos de pesquisa e desenvolvimento na rea de biotecnologia.
Este compsito nanoestruturado tem como objetivo, a substituio de estruturas
biolgicas, permitindo sua regenerao, restaurao e manuteno da sua funo
atravs da interao destes dois sistemas nanomtricos de grande importncia: o
colgeno, que uma seqncia de molculas de aminocidos e o NTC, que um
conjunto de tomos de carbono ordenados nanoscopicamente em forma de tubos.
O objetivo principal deste estudo a construo de estruturas que possam ser
utilizadas em substituio a perdas de tecido, de modo a prover suporte para o meio
extracelular, bem como permitir que clulas hospedeiras recriem um novo tecido
natural.
Este tipo de estudo pode ser efetuado graas ao desenvolvimento da
implantologia, que tem dado incentivo s pesquisas em biomateriais, e buscam o
entendimento das reaes que ocorrem na interface tecido-implante. Inicialmente, os
implantes eram feitos com a utilizao de materiais inertes como aos inoxidveis e
alumina. A partir dos anos 70, Per-Ingvar Brnemark introduziu o conceito de
osteointegrao como sendo a ligao direta, estrutural e funcional entre osso
ordenado e vivo e a superfcie de um implante sujeito a cargas funcionais
[22]
.
Com a introduo desse conceito, as pesquisas passaram a ser concentradas
3
Tese Doutorado Edelma Eleto da Silva
em materiais e projetos, visando acelerar a osteointegrao, ou seja, diminuir o
tempo necessrio para a reposio ssea. Isto , o biomaterial sempre deve permitir
um crescimento sustentado do osso vizinho, promovendo contato direto entre o osso
e o material, para que ocorra o fenmeno da osteointegrao. Um exemplo de
biomaterial que vem sendo estudado com este foco a mistura de hidroxiapatita e
colgeno
[23]
.
Como a principal fase mineral encontrada no tecido sseo a hidroxiapatita
(HAp). H um grande interesse em utiliz-la como um biomaterial ora por sua alta
biocompatibilidade, ora por sua similaridade ao tecido sseo
[24]
. J o colgeno,
encontrado no organismo de vrias formas, uma delas o colgeno tipo I que est
presente nos tendes e atua no tecido sseo como matriz primria de sustentao.
Sendo assim, ele pode ser usado como arcabouo de HAp por ser um agente de unio
biocompatvel e reabsorvvel, responsvel pela preveno da migrao das partculas
de HAp at sua incorporao no tecido, favorecendo a integrao ssea.
Vrias tcnicas de avaliao da adequao de um novo material para
aplicaes biomdicas tm sido desenvolvidas em uma tentativa de simular do
desempenho do material aps sua insero no corpo humano. Essas tcnicas
compreendem testes in vitro e in vivo. Para testes in vitro, so utilizados
normalmente testes de bioatividade em lquido corporal simulado e estudos em
cultura de clulas. Os estudos em cultura de clulas normalmente compreendem
testes de citotoxicidade
[25]
, medies bioqumicas de atividade celular, avaliao de
proliferao, crescimento e morfologia celular. Durante o desenvolvimento deste
estudo, a manipulao de materiais biolgicos e os procedimentos necessrios para
test-los foram realizados em colaborao com professores do Instituto de Cincias
Biolgicas da UFMG, que se mostraram altamente interessados neste trabalho. Vale
ento ressaltar o carter multidisciplinar do presente trabalho e agradecer as
colaboraes externas e disponibilizao de seus laboratrios, indispensveis para
sua realizao.
Porm, antes de serem fabricados os compsitos, foi realizado o estudo e
desenvolvimento das matrias primas para a fabricao do compsito. Para isto, a
primeira etapa da tese foi dedicada ao estudo experimental que compreendia a busca
pelo catalisador ideal para produo de NTC, o desenvolvimento de procedimentos
para viabilizar a produo em larga escala, a promoo de mudanas superficiais
4
Tese Doutorado Edelma Eleto da Silva
destes NTC para permitir a utilizao dos mesmos no desenvolvimento de um novo
compsito, utilizando colgeno, e a sua posterior aplicao.
1.1. Nanotubos de carbono
Os NTC so formas metaestveis de carbono resultante do enrolamento de um
plano de tomos de carbono em hibridizao sp
2
na forma de um cilindro com
dimetro tpico da ordem de nanmetros (nm) e comprimento na ordem de 3-10 m.
Com dimetro na ordem de 1 nm, efeitos qunticos de confinamento levam este
material a ser considerado um sistema unidimensional e suas propriedades
eletrnicas dependentes de sua estrutura, ou seja, seu raio e simetria (ou
quiralidade)
[13]
. Eles podem se comportar como um metal ou semicondutor. A forte
ligao covalente de seus tomos proporciona aos nanotubos de carbono
caractersticas de um material com alta resistncia mecnica, e uma alta
condutividade trmica e eltrica. Alm disso, este material possui grande inrcia
qumica, fundamental, para o seu uso em aplicaes biotecnolgicas e bioqumicas
[14]
.
Este material se apresenta em duas formas distintas, a saber:
1. Nanotubos de carbono com parede simples (NTPS) formado de uma
nica folha de grafeno enrolada em vrias direes em relao aos
hexgonos de carbono (helicidade) com dimetro e as propriedades
eletrnicas dependentes.
2. nanotubos de carbono com paredes mltiplas (NTPM) formado de duas
ou mais folhas de grafeno enroladas concentricamente com helicidade
aleatria caracterstica de estruturas turbostrticas.
A maioria das propriedades dos NTPS depende do seu dimetro e ngulo
quiral, relacionado com helicidade. Estes dois parmetros, dimetro e helicidade,
so cristalograficamente definidos por dois ndices (n,m) conhecidos como ndices de
Hamada
[26]
. Um nanotubo de carbono de parede simples pode ser construdo por uma
folha de grafite enrolada de tal forma, que coincidam dois stios cristalograficamente
equivalentes de sua rede hexagonal. Os NTC podem ser chamados
armchair,zigzag ou quiral. Na figura 1-1 so mostrados os trs tipos de tubos
mencionados.
5
Tese Doutorado Edelma Eleto da Silva
Figura 1-1: Tipos de nanotubos de carbono monocamada segundo orientao de suas
redes cristalinas (a) nanotubos armchair (5,5), (b) nanotubos zigzag (9,0) e (c) nanotubos
quiral (10,5 )
[
27
]
.
Uma vez que a relao entre o comprimento e o dimetro dos nanotubos
grande, o movimento de eltrons fica confinado ao longo do comprimento do tubo.
Com isto, os NTC mais finos podem ser considerados como fios qunticos,
mostrando densidades de estados eletrnicos unidimensionais com singularidades de
Van Hover, acima e abaixo do nvel de Fermi, E
F
.
Em termos dos ndices (n,m), um nanotubo metlico quando n-m mltiplo
de 3, em caso contrrio semicondutor
[28, 29]
. Todos os nanotubos armchair so
metlicos, enquanto que os zigzag e quiral podem ser metlicos ou
semicondutores.
Na figura 1-2 est representada uma parte dos vetores quirais que geram todos
os nanotubos possveis, onde 1/3 deles so metlicos, isto , o conjunto de seus
estados permitidos inclui o nvel de Fermi, e 2/3, semicondutores. Isso acontece
devido simetria hexagonal da estrutura da lmina de grafeno.
6
Tese Doutorado Edelma Eleto da Silva
Figura 1-2: Exemplos de vetores quirais possveis. Os crculos maiores indicam
nanotubos metlicos, enquanto os crculos menores, nanotubos semicondutores.
O tipo de conduo determinado pelo subconjunto de estados eletrnicos
permitidos nos nanotubos de carbono. Se o nvel de Fermi da grafite estiver contido
no subconjunto de estados permitidos, tem-se um nanotubo de carbono metlico, caso
contrrio tem-se um nanotubo de carbono semicondutor.
Nos semicondutores, a conduo eletrnica s possvel quando se fornece a
energia necessria para que um eltron da banda de valncia possa atravessar a faixa
de energia proibida entre ela e a banda de conduo. O tamanho em energia dessa
zona proibida, ou gap, varia conforme o material. Nos nanotubos, o tamanho do
gap de energia depende do dimetro dos mesmos
[30]
.
Conforme exposto acima, os nanotubos podem se comportar tanto como um
metal, quanto como um semicondutor
[16]
. Nos semicondutores, a conduo s
possvel quando se fornece a energia necessria para que um eltron da banda de
valncia possa atravessar a faixa de energia proibida entre ela e a banda de conduo.
Como nos nanotubos de carbono o tamanho em energia da faixa proibida depende do
seu dimetro a principio possuem propriedades eletrnicas ajustveis algo impossvel
com os materiais semicondutores conhecidos
Nos nanotubos multicamadas, a situao bem mais complexa, uma vez que
cada nanotubo de carbono monocamada que o compe pode ser enrolado de uma
maneira diferente, alternando-se a nanotubos metlicos e semicondutores.
1.2. Colgeno
Os colgenos constituem uma das famlias de biomolculas (protenas) mais
7
Tese Doutorado Edelma Eleto da Silva
abundantes nos tecidos, havendo pelo menos 20 tipos de cadeias proticas que se
combinam para produzir formas diferentes com propriedades mecnicas e
bioqumicas diferenciadas e adequadas especificidade dos tecidos
[31, 32]
.
Na estrutura do colgeno se entrelaam mais de 10 mil triplas hlices de
longos polipeptdios formando uma grande diversidade de molculas de colgeno
atualmente conhecidas. Nos tecidos duros, o colgeno funciona como um suporte
para a deposio mineral. Nos tecidos moles ele forma uma matriz onde se alojam
vrias substncias e clulas. Ele atua na manuteno da forma e da integridade dos
tecidos. O colgeno est presente em: glndulas, rgos internos, vasos sangneos e
linfticos, paredes celulares, ossos, pele, ligamentos, tendes, crnea, cristalino
ocular, cartilagens, meniscos, discos intervertebrais e plasma sangneo.
A sua estrutura primria caracterizada pela repetio do tripleto Glicina
(gly) 33%, Prolina (Pro) 12% e Hidroxiprolina (Hypro) 11%, como mostrado na
Figura 1-3. Este arranjo molecular apresenta grande resistncia trao e so rgidas
[33]
.
Sua estrutura molecular consiste em seqncias primrias de protenas, o que
causa diferenas entre os diversos tipos de colgeno. O colgeno pode ter hlice rica
em prolinas, hlice rica em glicinas, etc. Estas protenas so fatores importantes na
formao de fibras de colgeno de estrutura de ordem superior.
Nesta tese estudamos a formao de compsito utilizando o colgeno tipo I
que um colgeno fibrilar formado por trs cadeias polipeptdicas (alfa), Estas
cadeias se organizam em uma conformao trplice hlice, sendo denominada de
procolgeno.
O colgeno originado no retculo endoplasmtico onde ocorre hidroxilao
dos aminocidos prolina e lisina da molcula, alm da glicosilao de resduos
hidroxilisil nas cadeias em formao. Tanto no incio quanto no final da molcula de
procolgeno existem expanses polipeptdicas no-helicoidais, sendo denominadas
peptdeos de registro.
Ao sair do meio intracelular, ocorre clivagem das extenses, deixando
funcionalmente a rea central (tropocolgeno), permitindo que as molculas se
organizem em arranjos lineares formando filamentos longos. Esta macromolcula
linear semiflexvel possui comprimento aproximado de 300 nm e 1,5 nm dimetro e
sua massa molecular mdia 300.000 Da
[31]
. As trs cadeias polipeptdicas se
8
Tese Doutorado Edelma Eleto da Silva
dispem em duas cadeias iguais com 1.055 resduos de aminocidos e uma cadeia
diferenciada com 1.029 resduos de aminocidos ligadas entre si por ligaes tipo
ponte de hidrognio e interaes eletrostticas.
Figura 1-3: Estrutura do colgeno a) cadeias de tripleto presente nas matrizes de
colgeno b) tropocolgeno c) hlice tripla
[
33]
Outros tipos de colgeno promovem elasticidade e resistncia pele,
msculos, tendes, meniscos, ligamentos, veias, vasos e artrias, etc. Nos tecidos
duros como os ossos, o colgeno funciona como um suporte para a deposio
mineral. Outra funo importante do colgeno a sua atuao na agregao,
aderncia e ativao das plaquetas. Age ainda como fator do mecanismo intrnseco
para o sangue coagular
[34]
.
Devido a estas caractersticas, o uso de suportes biodegradveis na rea de
engenharia tem aumentado consideravelmente, baseado no fato de que polmeros
naturais, formadores da matriz orgnica, interagem com receptores especficos na
superfcie celular e participam ativamente dos processos reguladores da expresso
9
Tese Doutorado Edelma Eleto da Silva
fenotpica da clula. Portanto, o colgeno promove a manuteno morfolgica e
remodelagem dos tecidos
[33]
.
A partir do colgeno possvel obter novos biomateriais incorporando a ele
NTC, por exemplo. Estes materiais derivados de misturas so denominados
compsitos.
1.3. Compsitos.
Os materiais nos quais so feitos os compsitos so usualmente classificados
como fase dispersa e matriz. O material matriz proporciona estrutura ao compsito
mantendo a fase dispersa em sua posio relativa, sendo que esta, proporciona
variao das propriedades mecnicas, eletromagnticas ou qumicas do compsito
como um todo. Como exemplo de compsitos podemos citar: misturas de metais e
polmeros, metais e cermicas, polmeros e cermicas, NTC e polmeros ou
biomateriais.
A combinao das propriedades fsicas dos NTC com as dos polmeros
biocompatveis abrem um novo campo em direo a uma nova gerao de engenharia
de tecidos. Uma vez que a mistura de materiais possibilita alteraes de suas
propriedades fsicas, tais como condutividade trmica e eltrica, de modo a imitar as
condies qumicas e fsicas existentes no meio biolgico natural. possibilitado a
utilizao destes como suporte para crescimento celular e a reconstruo de tecidos
naturais.
Embora o uso de polmeros tenha aumentado enormemente nas ltimas
dcadas, seu uso na rea biomdica muito limitado devido, geralmente, a sua baixa
biocompatibilidade. Polmeros usados em aplicaes mdicas so agrupados em duas
categorias: os bioestveis e os biodegradveis. Os bioestveis so materiais de vida
longa, permitindo seu uso em implantes de longa durao tais como, vasos
sanguneos, vlvulas cardacas e juntas sseas. Por outro lado, os biodegradveis so
usados em implantes temporrios e usualmente decompem em molculas menores
sendo metabolizadas ou excretadas pelo corpo. Implantes utilizando colgeno como
biomaterial hospedeiro podem ser classificados nesta segunda categoria. Seu uso
limitado devido sua baixa resistncia mecnica. Entretanto, com a incorporao de
NTC , a sua resistncia mecnica pode ser muito melhorada uma vez que tais nano
estruturas possuem resistncia mecnica 100 vezes maior que o ao e 1/6 mais leves.
10
Tese Doutorado Edelma Eleto da Silva
Alm do aumento da resistncia mecnica, os NTC possuem alta condutividade
trmica e eltrica (6000 siemens/cm), flexibilidade, alta superfcie especfica (1000 a
1600 m
2
/g) e biocompatibilidade, que os tornam um material ideal para a criao de
biocompsitos biodegradveis.
O compsito produzido por colgeno e NTC original. No incio de nossas
pesquisas nenhum artigo sobre compsito usavam ao mesmo tempo colgeno e NTC.
1.4. Biocompsitos.
Pesquisas que visam substituio de tecido sseo, e o conhecimento das
propriedades, deste tecido e do material nele empregado, so vastamente realizadas
desde a obteno da base cientfica do implante sseo.
As substituies dos tecidos sseos tm incentivado, de uma forma geral,
pesquisas em busca de novos materiais tambm denominados biomateriais. Alguns
fatores so fundamentais nas caractersticas dos biomateriais, como morfologia,
dimenso, distribuio de poros e propriedades mecnicas.
A regulamentao de produtos para a engenharia de tecidos, como, por
exemplo, os suportes porosos para implantes so normalizados pelas normas ASTM e
por rgos governamentais de pases como Canad, Japo e EUA (LLOYD-EVANS,
2004). A norma ASTM F1185-03, por sua vez padroniza a composio da
hidroxiapatita para implantes cirrgicos. Os materiais para uso em engenharia de
tecido sseo podem ser cermicos, tais como fosfatos de clcio, vidro bioativo,
vidro-cermico, alumina e zircnia; polimricos (naturais ou sintticos) como o
quitosana, cido (poli)ltico (PLA) e cido (poli) gliclico (PGA); metlicos, como
titnio, ao inox e ainda outros compsitos
[35]
.
Estes materiais devem ter as seguintes caractersticas: permitir a adeso e o
crescimento celular; nenhum componente ou produto de sua degradao pode
provocar reaes inflamatrias ou de toxicidade; devem ter forma tridimensional; sua
porosidade deve proporcionar grande rea superficial para interao entre a clula e o
suporte; devem ter espao para regenerao superficial da matriz extracelular e
possibilitar difuso durante a cultura in vivo e taxa de regenerao ajustvel para
combinar com a taxa de regenerao do tecido de interesse
[36]
.
Os biomateriais regulamentados so aplicados em diversas situaes como
relatado no trabalho de Sakina Sharmin Khan sobre regenerao de cartilagem
11
Tese Doutorado Edelma Eleto da Silva
baseada em nanocompsitos com nanotubos de carbono
[37]
. Este trabalho tem como
objetivo, o desenvolvimento e caracterizao de um compsito em nanoescala
contendo PLA reforado com NTC. Ele tem funo de suporte para cartilagem como
um osso no campo de engenharia de tecidos. O nanocompsito tem uma estrutura
nica composta por matriz de PLA em forma de nanofibras, Este material
caracterizado por sua grande rea superficial em uma pequena poro do mesmo (10
3
m
2
/g) e pela alta porosidade, que produzida por processo de eletrospinning com o
emaranhamento das fibras. A porosidade deste material ideal para migrao de
clulas e transporte de nutrientes, podendo ser controlvel. Estudos in vitro
mostraram que as nanofibras de PLA com NTC promovem o crescimento celular sem
danos visveis proliferao celular pela presena dos NTC. Eles concluram que o
NTC no um material nocivo cell friendl em relao s clulas. Foi observado
tambm, neste trabalho, que a rugosidade do compsito diminui com o aumento de
NTC, por outro lado, as fibras sem NTC so muito planas. As propriedades
mecnicas das fibras emaranhadas crescem com o aumento percentual de NTC.
O trabalho de Naguib
[38]
relata vrias aplicaes de NTC combinados com
matrizes para biomateriais, incluindo polmeros, compsitos como epxi,
termoplsticos, gels, poli (metil metacrilato) (PMMA), poly acrilontrila (PAN) e
alguns outros polmeros. Os NTC tambm podem ser includos em matrizes
cermicas como alumina (Al
2
O
3
), slica (SiO
x
) e carbeto de silcio (SiC) ou matrizes
metlicas, como nquel (Ni), titnio (Ti) e alumnio (Al) para produzir compsitos.
Ele coloca como maior problema para a utilizao destes compsitos a disperso dos
NTC. Realmente, vrios grupos estudam a disperso dos NTC e pouco se sabe sobre
as interaes que ocorrem durante a disperso. A tese discute tambm sobre o
alinhamento dos NTC nestas matrizes. Este alinhamento conseguido por dois
processos:
1
o
. Via electrospinning, no qual um fluxo contnuo de soluo de PVA: NTC
produzido pela ruptura da tenso superficial entre o lquido e o ar induzida por um
gradiente de campo eltrico. As gotas de soluo polimrica saem da ponta de tubos
capilares por meio de uma fora eltrica gerada entre a fonte de polmero (tubo
capilar) e o alvo (placa plana de Cu), onde uma alta diferena de potencial
aplicada. O campo eltrico aplicado tambm induz um alinhamento dos NTC
paralelos direo do fluxo. Este processo de alta eficincia na produo de
12
Tese Doutorado Edelma Eleto da Silva
nanofibras, alm de proporcionar o alinhamento dos NTC paralelos direo axial da
fibra.
2
o
. O alinhamento feito por uma espcie de spray que expele o polmero
misturado ao NTC que se funde ao ser ejetado. Neste caso, uma disperso de
nanotubos feita em soluo aquosa com lcool polivinlico (PVA) ou cido poli-
lctico gluclico (PLGA), e injetada com micro-seringas em clorofrmio. Desta
forma, os nanotubos tendem a se alinhar e coagulam junto com o PVA ou PLGA,
formando microfibras.
Baseado nestes estudos e em outros que sero posteriormente citados,
estudamos a incorporao de NTC em colgeno e sua aplicabilidade em
biotecnologia.
13
Tese Doutorado Edelma Eleto da Silva
2. Nanotubos de carbono obtidos via deposio qumica na fase
vapor
O CVD tem sido utilizado desde a dcada de cinqenta
[39, 40]
para produo
de fibras de carbono.
[41]
Endo et al.
[42]
publicou em 1993, um artigo sobre
crescimento de nanotubos por pirlise de benzeno 1100
o
C. Jos Yacamn
[43]
no
mesmo ano produziu nanotubos de paredes mltiplas utilizando acetileno 700
o
C.
Em ambos os casos foram utilizadas partculas de ferro para catalisar o crescimento
de nanotubos. Mais tarde, os nanotubos de parede mltiplas comearam a ser
produzidos com etileno, metano entre outros hidrocarbonetos
[44, 45]
.
H. Da
[46]
produziu os primeiros nanotubos de paredes simples em CVD em
1996, utilizando CO 1200
o
C catalisado por partculas de Mo. Com o
aperfeioamento do processo, estes nanotubos foram produzidos utilizando benzeno
[47]
, acetileno
[48]
, etileno
[49]
e metano
[50]
e diversos catalisadores cermicos.
As principais variveis necessrias para o crescimento de nanotubos de
carbono so: a quantidade de hidrocarbonetos e catalisadores e a temperatura de
termodecomposio destes hidrocarbonetos. As experincias, de um modo geral,
mostram que em baixa temperatura (600-900
o
C) so sintetizados nanotubos de
paredes mltiplas e a altas temperaturas (900-1200
o
C) nanotubos de paredes
simples.
O processo de sntese de nanotubos via CVD podem ser divididos em trs
categorias, a saber: catalisadores suportados em substratos,
[51, 52, 53]
catalisadores
embebidos em matrizes cermicas
[54]
e outros que o crescimento ocorre por mudana
de fase do gs (HiPCo) com alta presso de trabalho
[55]
. Estes mtodos envolvem um
catalisador que colocado no interior do reator e aquecido, enquanto dois ou mais
tipos de gases alimentam o reator. Entre os gases utilizados esto: o hidrognio
utilizado para reduzir partculas metlicas; metano, etileno e ou outros
hidrocarbonetos para fornecer o carbono precursor dos nanotubos de carbono; e o
argnio como carreador dos outros gases.
Os catalisadores mais usados so os metais de transio como Fe, Ni e Co ou
seus xidos, na forma de nanopartculas com dimetro inferior a 20 nm. Estes so
submetidos a um ambiente rico em carbono a uma temperatura entre 600-1200C. As
14
Tese Doutorado Edelma Eleto da Silva
nanopartculas metlicas absorvem o carbono e se tornam saturadas, ocorrendo ento
precipitao do carbono na forma de tubo.
Estes catalisadores podem ser dispersos sobre um substrato plano, como um
substrato de silcio, ou sobre algum material inerte e de grande rea superficial,
preferencialmente ou produzir uma soluo slida entre xidos de metais de
transio (Fe,Ni,Co)
[56, 57]
e xidos cermicos estveis termicamente
[58, 59]
. Desta
maneira, o metal catalisador fica homogeneamente disperso e diludo na matriz
cermica. Ambas as tcnicas possibilitam a sntese dos NTC para confeco de
diferentes materiais como, por exemplo, emissores de eltrons, sensores de gases e
sensores biolgicos, pontas para microscpio de fora atmica (AFM) e, compsitos
quando combinados a outros materiais, como polmeros e fibras.
Entretanto, os maiores desafios no estudo e explorao de tais aplicaes
tecnolgicas acima citadas est em manipular os nanotubos de carbono de maneira
isolada. Em geral, os mtodos de sntese de NTC geram amostras complexas, com
amplas distribuies de dimetro e quiralidade e diferentes teores de impurezas
diversas, como carbono amorfo, suporte cermico, carbetos metlicos e
nanopartculas metlicas.
2.1. Processo de sntese.
O processo de deposio qumica na fase vapor (CVD) foi o principal mtodo
utilizado para produo de NTC na primeira etapa deste trabalho. O objetivo dessa
etapa era gerar um processo de produo em larga escala com o emprego de uma
matriz cermica como suporte cataltico. O desenvolvimento deste processo
demandou grande esforo e dedicao, ora na busca do catalisador ora na otimizao
dos parmetros, como fluxo de gases, temperatura e tempo de sntese.
O processo de CVD para sntese de NTC funciona basicamente via a
termodecomposio ou pirlise de hidrocarbonetos leves (metano, etileno, acetileno,
etc.) como agentes precursores de carbono. Esta termodecomposio feita sob
atmosfera controlada utilizando, principalmente, gases inertes como agente de
controle do ambiente de crescimento e transporte dos subprodutos de reao. O
sistema CVD constitudo basicamente de um forno tubular com controladores de
temperatura e de vazo dos gases envolvidos no processo, o qual est ilustrado
esquematicamente na figura 2-1. Em geral, os processos de crescimento de NTC por
15
Tese Doutorado Edelma Eleto da Silva
CVD ocorrem presso atmosfrica e a reao de sntese catalisada com a
utilizao de metais de transio em forma de nanopartculas ancoradas em um
suporte metal-xido termicamente estvel. A funo do catalisador promover o
progresso de catlise heterognea, isto , promover uma seletividade na reao de
pirlise de modo que ela ocorra preferencialmente na superfcie destas
nanopartculas.
A partir do esquema apresentado na figura 2-1, pode-se idealizar o seguinte
mecanismo para a formao dos NTC:
1. o hidrocarboneto adsorvido e dissociado na superfcie metlica com
formao de tomos de carbono adsorvidos;
2. estes tomos de carbono podem dissolver-se e difundir-se atravs do metal,
precipitando em regies de crescimento preferencial, como as fronteiras de
gro ou as interfaces entre o metal e o suporte. Desta forma, as partculas
metlicas so destacadas da superfcie e transportadas com os filamentos em
crescimento, enquanto que a superfcie ativa continua disponvel para a
reao, j que o carbono no se acumula sobre ela;
3. tambm possvel a nucleao na superfcie, conduzindo formao de filmes
de carbono que efetivamente desativam o catalisador, o qual denominado
carbono encapsulante.
Figura 2-1: Desenho esquemtico do sistema de crescimento de nanotubos de carbono
por CVD
16
Tese Doutorado Edelma Eleto da Silva
Para a sntese de NTC em nosso laboratrio, foi utilizado um sistema de CVD
comercial
[60]
. Tal sistema consiste de um tubo de quartzo, posicionado dentro de um
forno tubular, com controle automatizado, via computador, de temperatura que pode
variar entre 40 e 1000C e do fluxo de gases dentro do reator (tubo de quartzo).
Quatro linhas de gs independentes esto disponveis e os gases utilizados so
metano, etileno, hidrognio, amnia e argnio. Este sistema bastante verstil,
simples e eficiente, permitindo a produo de amostras de tima qualidade e com alta
reprodutibilidade.
O processo de sntese de NTC estudado consiste dos seguintes passos:
- aquecimento do catalisador em atmosfera de argnio at a temperatura
desejada;
- injeo de gs etileno (C
2
H
4
) com fluxo inferior a 40 sccm por um tempo
mnimo de 25 min;
- resfriamento em atmosfera de argnio.
importante destacar que, do processo de sntese de NTC resulta uma mistura
composta de catalisador com partculas metlicas, NTC e outras formas de carbono,
como grafite e /ou carbono amorfo. Alm disso, podem-se obter estruturas de NTC
diferenciadas em NTPS e NTPM variando as condies de sntese, como
temperatura, taxa de aquecimento e atmosfera.
2.2. Preparo do catalisador para deposio qumica na fase vapor
Uma das rotas mais adotadas para o preparo de catalisadores a utilizao de
materiais mesoporosos, como xidos refratrios do tipo Al
2
O
3
, como suporte para as
nanopartculas dos metais catalisadores
[61]
. O catalisador metlico pode ser
introduzido no sistema de crescimento diretamente na fase de vapor (como ferroceno
[62]
), na forma de filmes finos em substratos
[63]
, na forma de nanopartculas, ou
embutido em uma matriz cermica porosa (como SiO
2
, Al
2
O
3
, MgO, etc.)
[64, 65]
. Esta
ltima a mais apropriada para produo em grande escala de NTC.
J foram investigadas combinaes extensas de catalisadores metlicos e
suportes catalticos para a produo em larga escala de NTC, na ordem de
gramas/deposio
[66, 67, 68]
. Recentemente, a utilizao MgO como suporte cataltico
tem sido alvo de uma ateno particular
[69, 70, 71]
. A vantagem principal de MgO
que este pode ser removido facilmente atravs de solues cidas "fracas", diludas
17
Tese Doutorado Edelma Eleto da Silva
[72]
, ao invs de solues de cido fluordrico concentrado necessrias para remover o
Al
2
O
3
e o SiO
2
, os suportes mais comuns. Este fato importante, pois simplifica
enormemente os processos de purificao usados na remoo destes materiais sem
afetar a qualidade dos NTC gerados, em processos posteriores sntese.
Neste trabalho, foram testados vrios suportes catalticos, tais como
microesferas de slica, Al
2
O
3
mesoporoso, micro esferas mesoporosas de CaCO
3
e
MgO, ancorando nanopartculas de Fe:Mo. Os suportes catalticos acima citados,
exceto o MgO, geram NTC com eficincia da ordem de 10-20% de rendimento total,
no sendo satisfatrias para processos de larga escala e, portanto, fora da meta
proposta no presente trabalho.
Descrevo a seguir, os resultados obtidos com o crescimento de NTC obtidos
com catalisador de Fe:Mo em suporte de MgO.
O p catalisador foi produzido a partir de soluo aquosa de compostos
contendo Ferro III, obtido pela dissoluo de nitrato ou sulfato de ferro com
molaridade varivel na presena de MgO em disperso. Aps um perodo de
agitao, a mistura foi seca em uma estufa e o p resultante foi calcinado a uma
temperatura de 500C para a eliminao dos subprodutos indesejados com nitratos,
sulfatos, etc. Em alguns casos, alm do metal de transio, que o catalisador
propriamente dito, foi adicionado, tambm, o molibdnio em forma de xido, com o
intuito de aumentar a atividade cataltica. O papel do molibdnio reduzir a energia
interfacial vapor-slido em sistemas xidos, de modo a diminuir o tamanho da
nanopartculas de xido de ferro alm de aumentar sua disperso sobre suporte xido
[73]
. Utilizando MgO como suporte, foram feitas duas sries de experimentos, nas
quais se investigou a influncia da temperatura no suporte cataltico e a influncia da
concentrao do suporte cataltico e da temperatura de sntese na eficincia da
produo de NTC.
Na srie sobre a influncia da temperatura no suporte cataltico foi feito o
aquecimento do catalisador por 15 min utilizando atmosfera de Ar com fluxo de 2000
sccm.
No estudo da influncia da concentrao do suporte cataltico e da temperatura
de sntese de NTC, sobre o catalisador, foram realizados experimentos com fluxo de
gases constante utilizando uma proporo de mistura igual [C
2
H
4
]:[Ar]=35:2000
sccm.
18
Tese Doutorado Edelma Eleto da Silva
A composio molar inicial do catalisador foi de Fe:Mo/MgO = 1,0:0,35:11,5.
O procedimento de manufatura do catalisador foi igualmente repetido em todos os
experimentos de sntese que, basicamente, consiste em:
1. Os reagentes nitrato de ferro, xido de molibdnio e xido de magnsio so
misturados em composio molar pr-estabelecida;
2. A soluo catalisadora levada estufa por, aproximadamente, 12h ou at que
esteja totalmente seca;
3. O p descompactado atravs de moagem mecnica com uso de grau e
cadinho;
4. O catalisador levado ao forno com temperatura de 500
o
C por 2 horas para
sua calcinao, eliminando vapores nitrosos e orgnicos que possam estar
presentes na sntese;
5. Aps esfriar, o p catalisador novamente descompactado por moagem
mecnica e conservado em recipiente bem fechado, em lugar seco e fresco
para uso futuro.
O catalisador feito com suporte cataltico de xido de Magnsio sintetizado
mostrou sua excelncia pela adequada distribuio de partculas metlicas e por ser
facilmente extrado dos NTC por ataque qumico em bases ou cidos fracos, o que
no prejudica a estrutura dos mesmos. Ainda neste captulo, veremos sua eficincia
na produo em larga escala de nanotubos de carbono via CVD.
2.3. Caracterizao do catalisador
O catalisador tem importante papel na qualidade e no rendimento da produo
dos NTC, pois a sua formao depende, fortemente, do mtodo de introduo do
metal no suporte e da sua distribuio no mesmo. Praticamente, todas as referncias
j citadas na preparao de catalisadores mostram preparaes por impregnao, co-
precipitao e troca inica, mtodos clssicos tambm realizados nos nossos
experimentos.
O catalisador de Fe:Mo/MgO sintetizado a partir de compostos como, por
exemplo, nitratos de ferro, que no fazem parte do catalisador. Estes elementos, aps
a sntese, devem ser retirados da mistura cataltica atravs de calcinao. Com a
calcinao, so extradas da mistura cataltica inicial impurezas, como nitratos e
outras substncias, como molibdnio livre e gua adsorvida. Na figura 2-2 podemos
19
Tese Doutorado Edelma Eleto da Silva
observar a curva de decomposio trmica do catalisador com concentrao Fe-
Mo/MgO=1,0:0,35:11,5.
100 200 300 400 500 600 700
0,6
0,8
1,0
m
a
s
s
a
(
m
g
)
temperatura (
o
C)
Figura 2-2: Curva de perda de massa por aquecimento durante a calcinao usando
analise termogravimtrica.
Nesta curva podemos observar que a 350
o
C h a maior perda de massa, onde
so liberados gases nitrosos e outras impurezas volteis nesta temperatura. A partir
desta temperatura, o material se encontra calcinado e com maior estabilidade devido
ausncia de impurezas acima citadas. O catalisador foi feito em quatro
concentraes molares distintas Fe:Mo/MgO: 1,0:0,35:11,5; 1,0:0,35:8,6;
1,0:0,35:5,8 e 1,0:0,35:0.
A anlise BET, ilustrada pela figura 2-3, mostra isotermas tipo II as quais
identificam poros de formato regular em slidos mesoporosos e macroporosos com
histerese tipo H1. O volume de gs adsorvido est em torno de 5 cc/g aumentando
suavemente com elevao na quantidade de MgO. O volume mximo de gs
adsorvido em torno de 37,25 cc/g e aumenta para 73,05 cc/g e para 77,75 cc/g com
o acrscimo de suporte cataltico. Isto indica que a porosidade diminui com o
aumento de metais catalisadores impregnados no suporte de MgO.
20
Tese Doutorado Edelma Eleto da Silva
0,0 0,2 0,4 0,6 0,8 1,0 1,2
0
10
20
30
40
50
60
70
80
37,250
73,050
77,750
Isoterma (absoro/dessoro)
Presso relativa(P/Po)
v
o
l
u
m
e

a
b
s
o
r
v
i
d
o
(
c
c
/
g
)
absoro 1,0:0,35:11,5 -Fe-Mo/MgO
dessoro 1,0:0,35:11,5 -Fe-Mo/MgO
absoro 1,0:0,35:8,6 -Fe-Mo/MgO
dessoro 1,0:0,35:8,6 -Fe-Mo/MgO
absoro 1,0:0,35:5,8 -Fe-Mo/MgO
dessoro 1,0:0,35:5,8 -Fe-Mo/MgO
Figura 2-3: Isoterma de absoro e dessoro de hidrognio no catalisador Fe:Mo/MgO
com variao molar de MgO.
Nesta mesma anlise, possvel estimar tambm a rea superficial e a
porosidade do material analisado. Observa-se na Tabela 2-1 uma grande variao da
rea superficial. Com o aumento da quantidade de metais catalisadores a rea
superficial diminui. Isto j era esperado devido diminuio da capacidade mxima
de adsoro, como foi verificado nas isotermas da adsoro dos mesmos sistemas.
Tabela 2-1: Catalisador Fe:Mo/MgO com variao molar de MgO comparao de
volume absorvido, dimetro dos poros e rea superficial.
Catalisador
Fe:Mo/MgO
Volume absorvido BET
(cc/g)
Dimetro
poro (A)
rea superficial (m
2
/g)
1,0:0,35:11,5 77,8 168 28,5
1,0:0,35:8,6 73,1 215 21,0
1,0:0,35:5,8 37,3 210 10,9
Nesta mesma tabela, (Tabela 2-1) podemos verificar um aumento do raio
21
Tese Doutorado Edelma Eleto da Silva
mdio de poros em funo do aumento da concentrao de metais no catalisador.
Este resultado, associado diminuio do volume de poros, observado nas isotermas
de adsoro, indicam a ocorrncia de processos de coalescncia entre poros de menor
dimetro, para a formao de poros maiores. Observa-se que a quantidade destes
poros diminui com o aumento de metais. Este efeito no to claro comparando as
amostras Fe:Mo/MgO 1,0:0,35:8,6 e Fe:Mo/MgO 1,0:0,35:5,8. Esta variao
estrutural, em funo da temperatura, causa drsticas variaes na sntese dos NTC,
como poder ser vista na prxima seo, onde sero utilizados o catalisador com
concentrao molar Fe:Mo/MgO 1,0:0,35:5,8. Este catalisador foi escolhido por
apresentar melhor rendimento durante as snteses.
Para estabelecer as variaes decorrentes da mudana de temperatura na
estrutura do catalisador, j calcinado, foram realizados alguns experimentos
indicadores de fases estruturais, como difrao de raios-X e espectroscopia
Mssbauer.
A figura 2-4 mostra os espectros Mssbauer de transmisso, obtidos
temperatura ambiente, do p catalisador Fe:Mo/MgO tratado termicamente entre 500
e 900
o
C, por 15 minutos, sob atmosfera de argnio. Este experimento foi feito para
tentar simular como o catalisador estaria logo antes do incio do crescimento, isto ,
logo antes da introduo do etileno para o incio da sntese.
22
Tese Doutorado Edelma Eleto da Silva
-12-10 -8 -6 -4 -2 0 2 4 6 8 10 12
0,96
0,98
1,00
900
0
C
Velocity (mm/s)
0,96
0,98
1,00
775
0
C
0,95
1,00
750
0
C
0,90
0,95
1,00
700
0
C
R
e
l
a
t
i
v
e

T
r
a
n
s
m
i
s
s
i
o
n
0,90
0,95
1,00
600
0
C
0,90
0,95
1,00
500
0
C
Figura 2-4: Espectros Mssbauer a temperatura ambiente do catalisador Fe:Mo/MgO
tratado termicamente em diferentes temperaturas em atmosfera de argnio. As linhas cinza
continuas so associadas fase Fe
1-x
Mg
x
O; as linhas cinza pontilhadas esto associadas a dois
tipos de fase da magnetita e a linha pontilhada preta associada fase Fe
1-x
Mo
x
O
y
.
Os espectros Mssbauer dos catalisadores, aps serem aquecidos em atmosfera
inerte a 500, 600 e 700
o
C, mostram um dubleto correspondente a stios de Fe
3+
na
soluo slida Fe
1-x
Mg
x
O
[74]
. Para as amostras tratadas a 750 e 775
o
C, alm destes
dubleto, aparecem dois sextetos melhor definidos na amostra tratada a 900
o
C. Estes
so associados aos stios tetradrico e octadrico da ferrita de magnsio (MgFe
2
O
4
),
respectivamente
[75, 76, 77
]. No espectro da amostra tratada a 900
o
C foram ajustados
dois dubletos, o primeiro j citado e um segundo associado fase Fe
1-x
Mo
x
O
y77
.
Foram calculadas tambm as reas espectrais, as quais se referem s quantidades
relativas de cada fase identificada nos espectros. Estas apresentam forte dependncia
Velocidade mm/s
T
r
a
n
s
m
i
s
s

o

R
e
l
a
t
i
v
a

23
Tese Doutorado Edelma Eleto da Silva
com a temperatura, como mostrado na figura 2-5.
500 600 700 800 900
0
20
40
60
80
100
B
C
D

A
r
e
a

r
e
l
a
t
i
v
a

(
%
)
Temperatura(
o
C)
Fe
1-x
Mg
x
O
y
Fe
1-x
Mo
x
O
y
Mg Fe
2
O
4
Figura 2-5: reas relativas dos sub-espectros das trs fases obsedavas nos espectros
Mssbauer a temperatura ambiente: fase xido de ferro magnsio (retngulos); Fe
3
O
4
(Tringulos) e Fe
1-x
Mo
x
O
y
(estrelas)
interessante notar que as reas espectrais das fases Fe
1-x
Mg
x
O e MgFe
2
O
4
entre 500 e 750
o
C no apresentam alteraes significativas. Por outro lado, entre 750
e 900
o
C, a rea espectral da soluo slida Fe
1-x
Mg
x
O decresce rapidamente,
indicando a decomposio do catalisador e conseqente liberao de ferro para o
sistema. Ao mesmo tempo, o rpido crescimento da rea espectral da magnetita, entre
750 e 775
o
C, sugere que grande parte (~90%) do ferro liberado est sendo consumida
na formao da MgFe
2
O
4
. O restante do ferro livre (~5% de rea relativa) forma a
fase Fe
1-x
Mo
x
O
y
.
24
Tese Doutorado Edelma Eleto da Silva
30 35 40 45 50
Fe
1-x
Mg
x
O
Fe
1-x
Mg
x
O
Mg Fe
2
O
4
500
o
C
600
o
C
700
o
C
750
o
C
775
o
C
900
o
C
2O (graus)
I
n
t
e
n
s
i
d
a
d
e

(
u
.
a
.
)
Figura 2-6: Difratogramas de raios-X das amostras tratadas termicamente em
diferentes temperaturas sob atmosfera de argnio.
Esses resultados so confirmados por difrao de raios-X (figura 2-6), onde
podemos perceber que com tratamento trmico 700
o
C aparecem picos de difrao
referentes fase MgFe
2
O
4
, os quais se intensificam a 900
o
C. As duas tcnicas
utilizadas mostram o aparecimento da fase MgFe
2
O
4
durante o tratamento trmico, e
a existncia das fases Fe
1-x
Mg
x
O e MgFe
2
O
4
, a partir de 700
o
C.
25
Tese Doutorado Edelma Eleto da Silva
2.4. Caracterizao dos nanotubos de carbono via deposio qumica
na fase vapor
Neste captulo, discutiremos as diferenas estruturais baseadas no catalisador
descrito na seo anterior. Uma vez que, ele apresenta diferenciaes com a
modificao de tratamento trmico.
As imagens de microscopia eletrnica de varredura, mostradas na figura 2-7,
mostram o efeito da temperatura no processo de crescimento dos NTC em relao a
sua morfologia. Pode-se observar que para as amostras produzidas com temperatura
inferior a 600C no existem vestgios de NTC [figura 2-7 (a)] e para T=600C
somente poucos NTC so observados [figura 2-7 (b)]. No caso das temperaturas de
sntese entre 700 e 1000C [figura 2-7 (c-f)], a morfologia das amostras muito
semelhante, com a presena de uma grande quantidade de NTC espalhados por toda
amostra.
26
Tese Doutorado Edelma Eleto da Silva
Figura 2-7: Imagens de MEV de amostras de NTC crescidos sobre Fe:Mo/MgO
utilizando diferentes temperaturas de sntese: (a) 500C, (b) 600C, (c) 700C, (d)
800C, (e) 900C, e (f) 1000C.
A semelhana entre a morfologia dos NTC em parte devida resoluo
limitada do MEV, no correspondendo semelhana estrutural. As amostras podem
ser melhor estudadas por MET. Esta tcnica permite distino entre NTPS e NTPM,
como pode ser visto na figura 2-8. Esta figura mostra imagens de MET de amostras
preparadas com temperaturas distintas (a) T=700
o
C e (b) 900
o
C.
Figura 2-8: MET de NTC em snteses temperatura de a) 700
o
C e b) 900
o
C
As imagens de MET indicam que para temperaturas de sntese inferiores a
750C so formados, preferencialmente, nanotubos de parede mltipla, no entanto,
para temperatura T >800C ocorre uma preferncia de crescimento de nanotubos de
parede nica. Na regio em torno de 750
o
C, ocorre transio entre a formao de
27
Tese Doutorado Edelma Eleto da Silva
NTPM para NTPS. Alm disso, as imagens de MET revelam a ausncia de carbono
amorfo nas amostras crescidas com temperatura maiores do que 725C. Esta
seletividade entre a produo de NTPM e NTPS em funo da temperatura j foi
observada em alguns trabalhos de sntese de NTC sobre substrato
[78, 79]
.
Para avaliar a qualidade dos NTC utilizamos a espectroscopia Raman, que
pode identificar subprodutos de carbono (carbono amorfo, grafite) e a prpria
estrutura deste material. A figura 2-9 revela o espectro Raman dos nanotubos de
carbono preparados a 900C. O espectro na figura 2-9 (b) inclui a regio de bandas
de energia da desordem (D) e da grafite (G). bem conhecido que a banda D
centrada em ~1350 cm
-1
est relacionada com a presena de carbono amorfo ou
defeitos estruturais no nanotubo de carbono
[80, 81, 82]
. Sabe-se tambm que a banda G
corresponde ao modo de vibrao tangencial da grafite (E
2g
) que est ativo tanto no
NTPS quanto no NTPM. A intensidade relativa entre as intensidades das bandas D e
G podem ser utilizadas como indcio da presena de carbono amorfo e ou defeito
estrutural nos nanotubos de carbono.
No caso dos nanotubos de carbono produzidos com temperatura 900C, a
baixa razo entre as intensidades entre as bandas G e D indicam uma quantidade
nfima de carbono amorfo ou defeito estrutural na amostra de nanotubos de parede
nica. Os dimetros dos nanotubos de carbono so inferidos a partir da regio de
baixas freqncias no espectro Raman, onde os modos de respirao radial (RBM)
so observados, a freqncia destes modos vibracionais est relacionada com o
dimetro dos nanotubos de carbono. Sendo assim, para diferentes simetrias dos
nanotubos de carbono, (zigzag (n,0), armchair (n,n), e quiral (n,m)) vale a seguinte
relao:
1
232
( ) 6, 5
( )
cm
d nm
v

= +
Onde a freqncia dos modos de respirao radial (
v
) inversamente
proporcional ao dimetro (d) de todos os nanotubos de carbono
[83, 84]
. O espectro
Raman na regio de baixa freqncia, mostrado na figura 2-9 (a), apresenta picos
correspondentes ao modo de respirao radial (RBM) que aponta a presena de
nanotubos de carbono com paredes simples
[82]
. Devido relao inversa entre a
freqncia do modo RBM e o dimetro dos NTC, em nosso caso, os nanotubos e
carbono possuem dimetro na faixa de ~1-1,4 nm.
28
Tese Doutorado Edelma Eleto da Silva
Amostras de NTC produzidos com temperatura inferior 750
o
C apresentam
banda D mais larga e no apresenta picos na regio de baixas freqncias (RBM),
confirmando a presena de NTPM.
1200 1400 1600 1800
banda D
T=600C
700C
800C
900C
1000C
I
n
t
e
n
s
i
d
a
d
e

n
o
r
m
a
l
i
s
a
d
a

(
a
.
u
.
)
freqncia Raman (cm
-1
)
banda G
100 200 300 400 500
RBM
T=900C
Figura 2-9: Espectro Raman de NTC (b) Regio da banda G e (a) RBM (usando
comprimento de onda 514,5nm)
Outro dado importante que podemos extrair da espectroscopia Raman o fator
de qualidade. Este fator foi de suma importncia para decidirmos quais NTC
deveriam ser sintetizados em larga escala para possveis funcionalizaes e
aplicaes, como em sensores, compsitos ou outras aplicaes. Esse fator definido
como a razo de intensidade integrada das bandas D e G nos nanotubos de carbono.
Ele caracteriza o nvel de desordem do material fornecendo o chamado parmetro de
qualidade
Q
e reflete aproximadamente a proporo de nanotubos perfeitos numa
determinada amostra.
29
Tese Doutorado Edelma Eleto da Silva
( )
1
( )
I D
Q
I G
=
A figura 2-10 mostra o fator de qualidade para os NTC produzidos em
diversas temperaturas, onde podemos observar que ela cresce at temperaturas abaixo
de 900
o
C e decresce em temperaturas maiores que 900
o
C. O maior fator de
qualidade est em volta de 0,9 e referem-se aos NTC sintetizado 900
o
C, produzido
com o catalisador de maior rentabilidade identificado na figura 2-12 (a) como
Fe:Mo:MgO 1,0:0,35:8,6M.
600 700 800 900 1000
0,2
0,4
0,6
0,8
1,0
CVD Temperatura(
o
C)
Q
Figura 2-10: Mostra a dependncia da temperatura com o rendimento do processo de
produo de NTC em funo da temperatura para a concentrao de F:Mo/MgO 1,0: 0,35 :8,6
Os resultados mostrados neste captulo foram obtidos aps vrios processos de
produo de nanotubos de carbono utilizando uma quantidade inicial de 100 mg do
catalisador. A fim de obter quantidades maiores de NTC em um nico processo, este
mtodo de sntese foi otimizado para larga escala de produo, com intuito de gerar
1,5-5 g de nanotubos de carbono por processo. O p catalisador foi espalhado
finamente sobre um barco de 15 x 3 cm
2
, sendo a variao da temperatura sobre esta
rea menor que 50 C, diferena insuficiente para induzir uma variao significativa
na morfologia material. Aumentando o tempo de deposio de 25 para 60 minutos, a
eficincia de sntese permaneceu a mesma. Como ilustrao do processo a figura 2-
11 mostra a aparncia do recipiente de deposio barquinho antes e depois do
processo a 900
o
C.
30
Tese Doutorado Edelma Eleto da Silva
Figura 2-11: Foto a) catalisador espalhado sobre o barquinho e b) barquinho aps
processo de sntese de NTC para comparao visual entre volumes.
Atravs da figura 2-12 (a) podemos verificar que, para porcentagens
diferenciadas do catalisador no suporte cataltico, a caracterstica do rendimento
semelhante. Ao considerar as variaes de temperatura, independente da
concentrao de metais catalisadores, o maior rendimento obtido pelo processo de
sntese 775
o
C. Na figura 2-12 (b) podemos verificar que, em snteses realizadas em
baixa temperatura, so formados principalmente NTPM. J as snteses realizadas com
temperaturas mais elevadas NTPS so preferencialmente formados. Estes dados
podem ser confirmados na figura 2-7, onde vemos as estruturas tubulares de carbono,
com paredes mltiplas na Figura 2-7 (a) e paredes simples na figura 2-7(b).
O rendimento definido pela razo %
total catalisador
metais
m m
CNT
m

= , onde
total
m a
massa total aps a sntese,
catalisador
m a massa do catalisador antes da sntese (suporte
cataltico e metais catalisadores) e
metais
m a massa dos metais catalisadores
incorporados no suporte cataltico
[85]
.
31
Tese Doutorado Edelma Eleto da Silva
600
700
725
750
775
900
1000
rendimento1:0,5:11,5M
0
100
200
300
400
500
600
700
800
R
e
n
d
i
m
e
n
t
Temperatura
Produo de CNT em Fe-Mo/MgO
rendimento 1:0,5:11,5 M
rendimento 1:0,5:8,6 M
500 600 700 800 900 1000
0
200
400
600
800
SWNT
R
e
n
d
i
m
e
n
t
o

(
%
)
Temperatura (C)
MWNT
Figura 2-12: Rendimento da sntese de NTC (a) comparao entre concentrao do
catalisador e rendimentos (b) dependncia da temperatura com o rendimento
32
Tese Doutorado Edelma Eleto da Silva
Esta diferena ocorre, principalmente, por causa do tamanho das
nanopartculas das diferentes fases do catalisador. Em nosso processo de sntese, o
acrscimo da temperatura implica na elevao da taxa de decomposio do etileno, o
que explica o aumento de rendimento para a faixa de 600-800C. Por outro lado, na
faixa de 800-1000C, o aumento na taxa de decomposio resulta no recobrimento
das nanopartculas (NPs) por uma camada de carbono amorfo, reduzindo a atividade
cataltica das mesmas
[86]
.
Um fato interessante que, justamente na temperatura onde ocorrem a
transio da produo de nanotubos de paredes mltiplas para nanotubos de paredes
nicas (T=750-775C), observa-se o rendimento mximo comparando a todos os
processos. Para temperaturas em torno de 800
o
C, o rendimento do processo diminui
consideravelmente. A relao entre a reduo da taxa de crescimento e a transio de
NTPM para NTPS crescidos com aumento da temperatura foi discutido por Geohegan
et al. atravs de medidas in-situ das taxas de crescimento de NTPM verticalmente
alinhado em substratos cobertos com os catalisadores em forma de filmes finos
[87]
.
Com o aumento da temperatura, o rendimento na produo de nanotubos
tambm aumenta indicando que a atividade do catalisador tem dependncia trmica.
Recentemente, este efeito tambm foi observado sobre substratos onde foram
sintetizados NTPM
[88, 89]
. Em outros estudos, como os de Lacerda
[90]
, sobre NTC
usando catalisadores em forma de filmes finos esta transio entre crescimentos de
NTPM para NTPS com o aumento da temperatura foi tambm observada. Neste
estudo,
[90]
o catalisador usado a base de multicamadas de Al e Fe e o crescimento
de NTPS com temperatura elevada est associado formao de uma camada rugosa
de xido de alumnio que induz uma reduo no tamanho das nanopartculas de ferro
no catalisador. O tamanho destas partculas ativa stios de nucleao e os nanotubos
de parede simples ou mltiplas so formados. Em nosso caso, um mecanismo similar
ocorre. Se a concentrao do xido de ferro no p dos catalisadores for mantida
baixa, o aumento na temperatura favorecer a reduo dos xidos do ferro e haver
uma homogeneidade de partculas envoltas ao MgO e, conseqentemente, as
partculas de Fe com pequenos dimetros sero formadas
[91]
. Na figura 2-13
possvel observar nanopartculas de MgO sobre o NTC sintetizado.
33
Tese Doutorado Edelma Eleto da Silva
Figura 2-13: Imagem de microscopia eletrnica de varredura onde so indicadas
nanopartculas de xido de magnsio
Alm disto, a presena do molibidnio no catalisador favorece tambm a
estabilizao das partculas de pequeno dimetro do Fe
[91]
. O rendimento medido,
em termos do percentual total de NTC, na amostra ao final do processo de
crescimento, entre 700 e 800
o
C, foi maior do que aquele acima de 800
o
C. Se
considerarmos que os NTPM crescidos at 775
o
C tm em mdia quatro paredes
concntricas, como observado por MET na figura 2-8, podemos sugerir que o
rendimento do processo na formao de NTPM (abaixo de 775
o
C) e de NTPS (acima
de 775
o
C) foi, de certa forma, similar.
Se observarmos as figuras 2-10 e 2-5, o mximo de rendimento no
crescimento de NTPM (~750
o
C) e de NTPS (775-800
o
C) coincide com,
respectivamente, o incio e o aumento abrupto da formao da fase MgFe
2
O
4
no
sistema.
34
Tese Doutorado Edelma Eleto da Silva
-6 -4 -2 0 2 4 6
0,98
1,00
900
o
C
0,990
0,995
1,000
Velocidade (mm/s)
775
o
C
T
r
a
n
s
m
i
s
s

o

R
e
l
a
t
i
v
a
0,98
1,00
600
o
C
0,99
1,00
500
o
C
0,90
0,95
1,00
Catalisador
Figura 2-14 Os espectros Mssbauer de transmisso, obtidos temperatura ambiente,
do catalisador sem qualquer tratamento trmico e das amostras de nanotubos de carbono
crescidos a 500, 600, 775 e 900
o
C. A linha continua em cinza claro est associada fase Fe
1-
x
Mg
x
O. A linha continua em cinza est associada fase Fe
1-x
O
x
,as linhas pontilhadas cinza
esto associadas carbeto e as em preto esto associadas soluo slida -Fe(C).
Os espectros Mssbauer de transmisso, obtidos temperatura ambiente, do
catalisador sem qualquer tratamento trmico e das amostras de nanotubos de carbono
crescidos a 500, 600, 775 e 900
o
C so mostrados na figura 2-14. O espectro do p
catalisador (1
a
espectro) foi ajustado com um dubleto e um desdobramento
quadrupolar correspondentes a uma soluo slida Fe
1-x
Mg
x
O
[92]
. J o espectro da
amostra de nanotubos de carbono crescida a 500
o
C apresenta um segundo dubleto
correspondente fase Fe
1-x
O
x
,
[93, 94]
alm daquele referente fase Fe
1-x
Mo
x
O
y
,
indicando o incio da decomposio do catalisador. Mesmo uma anlise bastante
35
Tese Doutorado Edelma Eleto da Silva
criteriosa desse espectro no mostrou nenhuma fase relacionada a um composto de
ferro contendo carbono. Finalmente, os espectros das amostras contendo nanotubos
(600 900
o
C) foram ajustados com um conjunto de trs dubletos associados s fases
no magnticas Fe
1-x
Mg
x
O
y
[93, 94]
; Fe
1-x
O
x
[92]
e a soluo slida -Fe(C)
[93, 94]
; e
dois conjuntos de sextetos associados s fases magnticas Fe
3
C e Fe
x
C
y
[93, 94]
. As
reas relativas, correspondentes s cinco fases identificadas, so mostrados na figura
2-15.
De acordo com a figura 2-15, a introduo de uma fonte de carbono ativa
reaes secundrias sobre o p catalisador. 600
o
C, onde a formao de nanotubos
bastante pequena, a fase carbeto predominante. A formao de carbetos foi vista
como limitador da atividade de catalisadores contendo ferro na sntese de nanotubos
de carbono, como reportado por Coquay e Cols
[95]
. O rendimento da formao de
nanotubos mximo (775
o
C) quando a fase Fe
1-x
O
y
passa a ser predominante e a
formao da soluo slida -Fe(C) passa por um mximo. Nesta mesma temperatura
ocorre a transio da formao de NTPM para NTPS e simultaneamente a fuso do
MoO
2
.
500 600 700 800 900 1000
0
20
40
60
80
100
Fe
x
C
y
Fe(C)
Fe
1-x
O
x
Fe
1-x
Mg
x
O
y
A
r
e
a

r
e
l
a
t
i
v
a

(
%
)
Temperatura (
0
C)
Figura 2-15: rea espectral das fases do nanotubos de carbono para diferentes
temperaturas
Como observado por diferentes autores
[96, 97]
, a distribuio de tamanho das
partculas catalisadoras um fator determinante no crescimento dos tubos e na
formao de tubos com paredes mltiplas ou simples. De forma bem geral, partculas
catalisadoras maiores formam NTPM, enquanto as menores formam NTPS. Assim, de
acordo com o que foi observado na figura 2-15, a 750
o
C aproximadamente 85% do
36
Tese Doutorado Edelma Eleto da Silva
Fe no sistema ainda est na fase Fe
1-x
Mg
x
O
y
e aproximadamente 15% se separa na
fase MgFe
2
O
4
, sendo esta talvez a fase responsvel pela formao do nanotubo de
carbono. Como nessa temperatura so formados, preferencialmente, NTPM, a
liberao do ferro se daria, provavelmente, pela segregao da fase MgFe
2
O
4
,
formando ilhas ou aglomerados menores na superfcie de um cluster maior da fase
Fe
1-x
Mg
x
O. A partcula catalisadora seria, neste caso, relativamente maior e
composta de pequenos stios ativos de Fe segregados ainda suportados pela matriz
cermica. A partir de 775
o
C, o surgimento da fase MgFe
2
O
4
, conforme ilustrados na
figura 2-5 e na figura 2-6 induz a formao de partculas relativamente menores e
favorece a formao do NTPS. Os mecanismos responsveis por este fenmeno ainda
no so bem conhecidos.
Em resumo, em um nico processo ns podemos gerar at 5,0g de material
com NTPS (em T=900C) ou com NTPM (em T=750C). Ou seja, aps ter removido
o p do recipiente de deposio e submet-lo ao processo de purificao, teremos
entre 1,1 e 2,5g de nanotubos de carbono. O processo de deposio qumica na fase
vapor com catalisador de Fe:Mo/MgO possui grande eficincia para produo de
NTPS ou NTPM. A anlise Mssbauer do catalisador indica que o catalisador sofre
mudanas de fases conforme a variao da temperatura. Os NTC so catalisados a
partir da fase Fe
1-x
Mg
x
O
y
que, com o efeito da temperatura durante a sntese, se
dissocia em nanopartculas de Fe, MgO e a fase MgFe
2
O
4
sendo que, partculas
maiores do que 20 nm, no apresentam eficiencia catalitica na sintese de NTC. Este
resultado viabiliza a produo de compsitos e outras aplicaes. No entanto, para
que sejam realmente efetivas as aplicaes dos NTC, processos de purificao se
fazem necessrios para retirada de suporte cataltico e de metais catalisadores
residuais.
37
Tese Doutorado Edelma Eleto da Silva
3. Nanotubos de carbono obtidos via sntese por Arco Eltrico
Os primeiros nanotubos de carbono de paredes mltiplas foram observados em
1991 por Iijima
[98]
. Dois anos mais tarde, Iijima
[99]
e Bethune
[100]
publicaram
simultaneamente a sntese dos nanotubos de parede simples
[101]
em pequenas
quantidades. Em 1996, com o desenvolvimento de processos de sntese realizados por
Smalley e seus colaboradores na Rice University a pesquisa relacionada a produo e
aplicao dos NTC ganharam impulso que resultou na descoberta das propriedades
dos NTC
[102, 103]
. No ano de 1996, vrios grupos de pesquisa na rea mediram as
principais propriedades fsicas dos nanotubos de carbono executando estudos por
microscopia
[104]
e espectroscopia.
[105]
Desde a descoberta dos NTC, diversos processos de sntese foram
desenvolvidos, sendo os principais a descarga eletrica entre eletrodos de grafite
[106]
e por Deposio Qumica da Fase Vapor (CVD)
[107 ,108 ,109]
.
O mtodo de sntese de nanotubos de carbono por arco eltrico, baseia-se em
uma descarga de arco eltrico gerado entre dois eletrodos de grafite em uma
atmosfera de hlio ou argnio
[110]
. Um dos eletrodos (nodo) preenchido com
partculas metlicas catalisadoras de metais de transio principalmente Fe, Ni, Co
ou das combinaes entre estes metais. As altas temperaturas entre os eletrodos
permitem a sublimao do carbono formando-se os NTC.
O mtodo de arco eltrico, apesar de sua flexibilidade de difcil
compreenso, no que diz respeito ao que acontece no plasma de arco e na no
mecanismo de produo do NTC. Segundo Ando possvel produzir NTC de paredes
mltiplas em cmaras com diversos ambientes gasosos (He, Ar, e CH
4)
e com
eletrodos de puro grafite
[111]
. Nestes primeiros estudos verificou-se que o ambiente
com gs CH
4
era o melhor para a formao NTPM com alta cristalinidade e poucas
nanopartculas de carbono
[112]
. A sntese de NTPM em ambiente de gs CH
4
foi
analisada antes e depois do arco e revelou que a decomposio trmica de CH
4
do
gs a seguinte: 2CH
4
C
2
H
2
+3 H
2.
Apartir deste resultado, eletrodos de grafite
evaporados no arco eltrico em puro gs de hidrognio induz reaes qumicas entre
o carbono e o hidrognio produzindo NTC de alta cristalinidade.
[113, 111, 114]
38
Tese Doutorado Edelma Eleto da Silva
A produo massiva do nanotubos de parede simples por arco eltrico foi
publicada por Journet et al
[115]
atravs do uso de catalisador bimetalico de Ni -Y em
atmosfera de He. Este mtodo foi efetivamente modificado utilizando inclinaes
diferenciadas dos eletrodos
[116]
, e outros elementos metlicos como Fe em ambiente
de argnio
[117]
. Com a investigao de uma diversidade de catalisadores (Ni, Co, Fe,
Pt, Pd, etc.)
[118]
verificou-se que a maior eficincia na produo adivinha do
catalisador bimetlico Ni-Co e alm disto, verificou-se que a adio de enxofre
proporcionava maior eficincia de catalise
[119, 120]
. Muitas destas modificaes
foram feitas para tentar facilitar a purificao dos nanotubos. Estes ltimos so
facilmente purificados por aquecimento em ar a 420C e banho em meio acido HCl.
Vale lembrar que os nanotubos de parede simples no so formados nas
mesmas condies que os nanotubos de paredes mltiplas. Estes ltimos ficam
depositados sobre o eletrodo enquanto os primeiros se depositam na cmara
[121]
Apesar de em ambas as snteses os eletrodos se sublimarem de forma similar.
3.1. Processo de sntese.
A sntese por arco eltrico a tcnica mais utilizada para produzir nanotubos
de carbono, assim como fullerenos
[122]
. O mtodo baseia-se em uma descarga de
arco eltrico gerado entre dois eletrodos de grafite em uma atmosfera de hlio ou
argnio
[122]
. Este mtodo derivou-se do sistema de vaporizao de um eletrodo de
grafite pelo seu aquecimento resistivo, o qual foi desenvolvido em 1990 pelo grupo
de Krtschmer e colaboradores
[123]
.
O processo de arco eltrico consiste na montagem de eletrodos de grafite em
uma cmara em atmosfera inerte (hlio) baixa presso. As pontas dos eletrodos so
aproximadas at, cerca de 1 a 2 mm de distncia e uma diferena de potencial
eltrico aplicada entre eles. Quando distncia entre os eletrodos se torna
suficientemente pequena, ocorre a formao de um arco eltrico entre os eletrodos,
ionizando o gs ao redor do arco e gerando um plasma ao redor dos eletrodos. A
figura 3-1 mostra um modelo simplificado de uma cmara de arco eltrico com seus
principais componentes indicados.
39
Tese Doutorado Edelma Eleto da Silva
Figura 3-1: Desenho esquemtico de um sistema de sntese por arco eltrico.
A quantidade e qualidade dos nanotubos formados dependem, principalmente,
da mistura de metal catalisador e carbono. Os resultados variam de um autor para
outro, j que as condies experimentais dependem de vrios parmetros, tais como
concentrao do metal
[124]
, presso do gs inerte, natureza do gs
[125]
, corrente
eltrica e geometria do sistema utilizado para a sntese.
A tcnica de deposio via arco eltrico muito eficiente e relativamente
simples, porm apresenta um problema que impede sua utilizao contnua para a
queima de grandes quantidades de grafite e conseqente gerao de uma maior massa
de NTC. Este problema est relacionado formao de um depsito de carbono
graftico (tipo tubostrtico) sobre o ctodo, que cresce durante o processo de sntese
[126]
. Este depsito apresenta propriedades eltricas muito diferentes das apresentadas
pelos eletrodos, impedindo que o arco eltrico se mantenha estvel e com as mesmas
condies do incio da sntese.
Neste trabalho, utilizou-se uma modificao de um sistema Czochralski de
crescimento de cristais, que consiste em uma cmara de ao de atmosfera controlada,
com sistema de refrigerao das paredes, capaz de suportar uma grande amplitude de
presses, entre 10
-6
e 10
4
Torr. Dois eletrodos de grafite de alta pureza so montados
no interior da cmara, sendo que o nodo dopado com metais catalisadores, como
Ni/Y e Co/Ni, em um sistema acoplado a um motor de passo que permite alterar
40
Tese Doutorado Edelma Eleto da Silva
continuamente distncia entre os eletrodos. Os eletrodos so ligados externamente
a uma fonte de tenso DC de 30 kW (Saban Eletric Corp.) que opera entre 0 e 35 V
com correntes at 1500 A. Uma janela ptica protegida com um vidro escuro
bloqueador de radiao UV utilizada para acompanhar o processo. Aps o
fechamento da cmara, realiza-se uma purga da atmosfera para remoo de oxignio
e outros possveis contaminantes. A cmara evacuada at 10
-2
Torr e preenchida
com hlio, em uma presso entre 500 e 550 Torr. O processo de sntese ocorre com a
aplicao de um potencial de cerca de 25 V entre os eletrodos, que so aproximados
at uma distncia de cerca de 2 mm entre as pontas. No momento em que os
eletrodos se aproximam o suficiente para que seja possvel a formao de um arco
eltrico entre eles, o potencial cai para cerca de 23 V e a corrente estabiliza-se em
100 A. Estas condies de diferena de potencial e corrente eltrica foram otimizadas
em funo da qualidade e quantidade de NTC produzidos e mantidas fixas em todos
os processos. Atravs do controle da corrente eltrica e da presso, possvel
modificar o tamanho da regio de plasma e o fluxo de gs na regio de interface. O
correto ajuste destes parmetros torna energeticamente favorvel a formao de
NTC. Aps todo o anodo ser desgastado o processo interrompido e a presso
interna da cmara igualada externa. A cmara ento aberta e a fuligem gerada
pelo processo recolhida das superfcies da cmara, seguindo para a etapa de
purificao
[127]
. A figura 3-2 mostra uma foto da parte interna da cmara aps uma
deposio em nosso laboratrio. Pode-se perceber a formao de uma espcie de
manta e grande quantidade de p aderido parede da cmara que, aqui, denominamos
fuligem gerada pelo processo de sntese.
41
Tese Doutorado Edelma Eleto da Silva
Figura 3-2: Foto da parte interna da cmara aps deposio de NTC, usando
catalisador C/Ni/Y 550 Torr em atmosfera de hlio e com 100 A e 17 V.
Em geral, o eletrodo de grafite preparado com metais catalisadores e aps a
reao de eroso do anodo observa-se, no catodo, um espesso depsito que contm
nanopartculas grafticas, metal catalisador encapsulado por carbono, alm de uma
grande quantidade de fuligem rica em NTC. Este material composto,
aproximadamente, por 50% de NTC, 10% de metais catalisadores e 40% de partculas
grafticas e carbono amorfo.
3.2. Caracterizao dos nanotubos de carbono via arco eltrico.
Nesta parte, sero mostrados os resultados obtidos a partir das amostras de
NTC sintetizados, via arco eltrico com catalisador de Ni/Co/C cuja composio
molar 0,5% Ni, 0,5% Co em relao ao carbono. As anlises das amostras de
nanotubos por microscopia eletrnica de varredura e de transmisso revelam a
presena de grande quantidade de estruturas tubulares em feixes, assim como formas
grafticas irregulares e carbono amorfo. A amostra gerada na cmara do reator de
arco eltrico caracterizada pela predominncia de nanotubos de parede nica.
Na figura 3-3, so mostradas imagens de MET e MEV, revelando aspectos
morfolgicos da amostra. A figura 3-3 apresenta uma srie de trs imagens, onde na
ltima observam-se feixes de nanotubos de parede nica recobertos por uma grande
42
Tese Doutorado Edelma Eleto da Silva
poro de material amorfo. Na segunda imagem vem-se, mais claramente, outros
feixes sem essa camada de carbono amorfo, assim como na primeira imagem. Os
tubos tm alguns mcrons de comprimento e dimetros em torno de 1,4 nm. A figura
3-3 (a) mostra uma srie de trs imagens, onde na superfcie dos NTC de todas as
imagens, vistas por MEV, aparecem feixes emaranhados que podem ser identificados
como feixes NTPS e pores de impurezas.
Figura 3-3: NTPS sintetizado via arco eltrico a) 3 imagens de MEV, b) 3 imagens de
MET
As amostras NTC so caracterizadas por conterem, predominantemente,
formas tubulares, que apresentam dimetros da mesma ordem, como pode ser
comprovado pela tcnica de espectroscopia Raman. Esta tcnica indica que os NTPS
apresentam poucos defeitos estruturais e, apesar das pores de impurezas, mostradas
nas imagens de MEV e MET, a rea e intensidade da banda D muito pequena
comparada rea da banda G o que resulta um fator de qualidade de 0,94, como pode
ser visto na figura 3-4. Os NTC sintetizados apresentam um modo intenso de
vibrao, em torno de 180 cm
-1
para o laser com energia 1,4 eV. Este resultado
indica a presena de nanotubos de carbono com dimetro mdio de 1,4 nm, tambm
43
Tese Doutorado Edelma Eleto da Silva
confirmado atravs da tcnica de microscopia de fora atmica.
300 600 900 1200 1500 1800
I
n
t
e
n
s
i
d
a
d
e
(
u
.
a
.
)
Freqencia Cm
-1
Figura 3-4: Espectro Raman realizado com laser 514nm.
Em sntese, estes NTC se apresentam em feixes, com impurezas e com poucos
defeitos estruturais, indicados pela baixssima intensidade da banda D e a banda G,
intensa e estreita. A sntese dos NTC por arco eltrico resulta NTPS com dimetro
de, aproximadamente, 1,4 nm, de alto fator de qualidade, poucos defeitos estruturais,
como mostrado no espectro Raman, porm, com grande quantidade de partculas
amorfas.
Descreveremos nas prximas sesses a purificao e funcionalizao dos
nanotubos de carbono onde foram utilizados NTC, sintetizados em CVD e tambm
NTC produzidos via arco eltrico.
4. Purificao dos Nanotubos de carbono
Grande parte das aplicaes dos nanotubos de carbono requer a sua
purificao. Os nanotubos de carbono contem impurezas, as quais so constitudos
principalmente por carbono amorfo, metais catalisadores, suporte cataltico.
A purificao de NTC basicamente feita atravs de uma oxidao trmica
seletiva que elimina o carbono amorfo e refluxo em ambiente cido para eliminao
44
Tese Doutorado Edelma Eleto da Silva
de metais catalisadores. Os procedimentos de purificao so acompanhados por
tratamentos trmicos a altas temperaturas, ultrasonificao, ultracentrifugao e a
microfiltrao.
Por causa da diversidade de tcnicas cada pesquisador faz combinaes
diversas para obter o melhor resultado em sua purificao.
O tratamento por oxidao dos nanotubos de carbono utilizado para retirar
impurezas como carbono amorfo e outras formas de carbono ou limpar as superfcies
dos metais catalisadores
[128]
. A principal desvantagem desta tcnica que junto com
as impurezas os nanotubos de carbono tambm podem sofrer oxidao. Porm como
as impurezas so estruturas mais frgeis, elas oxidam com maior facilidade, isto ,
menor temperatura ou menor concentrao de agentes reativos necessrios para
oxidar os NTC
[129, 130]
e a eficincia do mtodo depende do tempo de oxidao, da
quantidade de impurezas, da temperatura utilizada e do agente oxidante.
[131]
.
Quando a temperatura regulada em torno de 400
o
C os NTC no so
oxidados rapidamente, permitindo a oxidao seletiva das impurezas pela ao do
oxignio e da temperatura
[132, 133, 134, 135]
. A ao de agentes oxidativos como H
2
O
2
e
H
2
SO
4
[131]
permite a limpeza da superfcie dos metais catalisadores e por vezes, sua
oxidao.
O tratamento cido, em geral, remove os metais catalisadores desde que o
metal esteja exposto oxidao, isto , o metal no pode estar coberto com carbono.
Os efeitos oxidativos sobre os NTC ou partculas de carbono so muito pequenos
quando o tratamento cido feito usando o cido ntrico
[136, 137]
e ou o cido
clordrico
[138, 139]
em temperatura ambiente.
O tratamento trmico a alta temperatura em ambiente controlado utilizado
para sublimar o carbono grafite e os fullerenos. Quando o tratamento trmico
realizado sob alta temperatura vcuo
[140]
, possvel remover as nanopartculas
metalicas por evaporao. Alm disto, os nanotubos que passam por este processo
so rearranjados atomicamente, eliminando os seus defeitos estruturais
[141, 142, 136]
.
A tcnica de ultrasonificao pode separar partculas atravs de vibraes
ultrasonicas. Os aglomerados de partculas so forcadas a vibrar promovendo uma
disperso. Que ficar estvel se for adicionado aos nanotubos algum tipo de
sulfactante, solvente ou outros reagentes.
45
Tese Doutorado Edelma Eleto da Silva
Os solventes influenciam a estabilidade da disperso dos nanotubos em
soluo. Sendo que, em solventes como o lcool, partculas dispersas tm pouca
estabilidade e em solventes como DMF elas apresentam maior estabilidade.
[143, 144,
145]
.
A micro filtrao baseada na separao de partculas por tamanho. Os NTC e
as nanopartculas so filtradas e as partculas menores como catalisadores, metais e
nanopartculas passam pelo filtro. Usualmente estas filtraes so feitas em
membranas de teflon sob vcuo, para facilitar o processo. Ficando sob o filtro os
nanotubos de carbono.
[146, 147]
.
4.1. Purificao dos Nanotubos de carbono via deposio qumica na
fase vapor
A obteno de NTC de alta pureza muito importante para algumas aplicaes
devido s caractersticas nocivas dos catalisadores e partculas de carbono nas
misturas com outros materiais ou em diferentes tipos de experimentaes fsicas.
Por exemplo, para aplicaes biolgicas, o catalisador pode provocar o
encadeamento de reaes que aumentam a toxicidade. Desta forma, para utilizarmos
estes NTC, desenvolvemos processos de purificao utilizando vias qumicas e
fsicas. A maioria dos processos de purificao encontrada na literatura resulta em
NTC com pureza da ordem de 90-96%. Entretanto, a eficincia da purificao ainda
muito baixa
[148]
.
O processo de purificao, cujo resultado mostrou grande eficincia na
remoo de impurezas e alto rendimento para os NTC sintetizados via CVD,
produzidos a partir de catalisador com suporte de MgO, encontra-se descrito abaixo:
1. Etapa de oxidao trmica:
- os produtos de sntese so colocados dentro de um forno com
temperatura em torno de 400
o
C por 2 horas sem controle
atmosfrico;
ou
- colocado em um forno de microondas domstico com potncia
mdia da ordem de 1 kW por 15 minutos;
Ambos os procedimentos visam eliminao do carbono amorfo
presente via uma oxidao preferencial.
46
Tese Doutorado Edelma Eleto da Silva
2. Etapa de remoo do suporte cataltico o produto anterior dissolvido em
uma soluo de NaOH 0,2 M 65
o
C por 24h sob agitao magntica;
3. Etapa de eliminao de resduos - o produto anterior filtrado (filtro
vcuo com membrana de 0,2 m) e lavado para retirar o NaOH e resduos
solveis gerados no ataque qumico anterior. A eliminao dos resduos
considerada finalizada quando o pH da soluo que passa pelo filtro est em
torno de 6 e 7;
4. Etapa de eliminao de partculas de carbono o produto anterior
recolocado dentro de um forno e levado a uma temperatura de 400
o
C sob um
fluxo de vapor de gua por 24 horas;
5. Etapa de eliminao de partculas metlicas o produto anterior
submetido a um ataque qumico de HCl 6M por 12 horas a temperatura
ambiente;
6. Etapa de filtrao final - o produto anterior filtrado e lavado novamente
at atingir pH 7.
Esta seqncia de purificao pode ser esquematizada desta forma:
Os processos de purificao utilizados foram baseados na combinao de
vrias tcnicas. Os NTC produzidos via CVD e via arco eltrico por possurem
caractersticas de sntese diferenciada tambm possuem tcnicas diferentes de
purificao, com ataques qumicos diferentes para cada uma delas.
A caracterizao dos NTC purificados foi viabilizada pela utilizao da
tcnica TG e foram feitas comparaes dos NTC antes e depois desta etapa.
A figura 4-1(a) mostra a curva termogravimtrica da amostra de nanotubos de
carbono preparado 900
o
C. Neste resultado observa-se uma perda de massa na faixa
de 350-380
o
C que corresponde a oxidao de carbono amorfo. A ausncia de perda
de massa nesta faixa, nas amostras sem e com purificao, permite concluir a
47
Tese Doutorado Edelma Eleto da Silva
ausncia de carbono amorfo neste processo de sntese. Com este resultado, a primeira
etapa de purificao acima descrita pode ser evitada diminuindo o tempo e custo de
purificao do material produzido
[149]
. A principal perda de massa que acontece a
550
o
C causada pela oxidao do NTC. Em torno de 600
o
C, a curva de TG estabiliza
com 55% de massa. Esta massa corresponde a quantidade de catalisador restante,
(MgO, Fe e Mo) ou de impurezas.
Como sabido, a principal vantagem de usar MgO como catalisador a
facilidade de remov-lo utilizando cidos como HCl, cido fosfrico ou bases como
NaOH. Desta forma, utilizando o processo descrito acima purificamos este material e
sua curva termogravimtrica pode ser observada na figura 4-1(a).
0 200 400 600 800 1000
0
20
40
60
80
100
Temperatura (C)
P
e
r
d
a

d
e

m
a
s
s
a

(
%
)
50%
-4
-2
0
2
4
6
8
10
D
T
A
48
Tese Doutorado Edelma Eleto da Silva
0 400 800
0
20
40
60
80
100
Temperatura (C)
P
e
r
d
a

d
e

m
a
s
s
a

(
%
)
4,5%
6
0
2
-4
-2
0
D
T
A
Figura 4-1: Curva de TG e DTA referente a queima de NTC a) no purificados e b)
purificados em nanotubos sintetizados via CVD.
Na curva de TG dos NTC sintetizados via CVD no h mudanas no que
corresponde a oxidao de NTC. A figura 4-1 (b) mostra que os NTC que antes da
purificao os NTC apresentam que apresentavam uma perda de massa de 50,0%,
aps a sua purificao apresenta uma queda brusca de perda de massa em torno de
550
o
C resultante da oxidao dos NTC e um resduo de massa 0,5%.
O resduo final, em regio de temperatura maior que 600
o
C, indica a presena
de impurezas no removidas pelo processo de purificao acima descrito, chegando a
uma pureza final de, aproximadamente, 95%. A eliminao completa de resduos por
processos de purificao envolvendo oxidao trmica e ataque qumico no so
efetivos na eliminao dos 5% de impurezas ainda presentes. Este resduo
constitudo, basicamente, de nanopartculas de metal catalisador dentro dos NTC
e/ou carbetos metlicos cuja eliminao extremamente complexa. A eliminao
completa deste resduo foi obtida submetendo as amostras de nanotubo de carbono de
95% de pureza a um tratamento trmico sob alto vcuo (10
-6
Torr) em temperatura de
1000
o
C por 92 horas.
As mudanas nas caractersticas morfolgicas antes e depois da purificao,
visualizadas por microscopia eletrnica no so claramente notadas. Na figura 4-2(a)
podemos visualizar os NTC no purificados. Nesta amostra possvel observar feixes
49
Tese Doutorado Edelma Eleto da Silva
de nanotubos, onde estes se encontram mais separados, sem emaranhados e com
grandes comprimentos. Na figura 4-2(b) podemos visualizar NTC purificados, onde
possvel observar uma grande quantidade de feixes emaranhados de difcil separao
visual.
Figura 4-2 MEV de NTC e NTC purificado
A microscopia de transmisso tambm evidncia esta caracterstica. A
presena de partculas nos NTC no purificados bem maior do que nos NTC
purificados. As imagens mostradas na figura 4-3 representam de uma forma geral as
caractersticas destes NTC. Eles se encontram em feixes e possvel observar que
possuem tanto nanotubos de parede nica quanto de paredes mltiplas. Na ltima
imagem da srie de NTC purificados podemos verificar uma grande distribuio de
NTPS. As setas na figura 4-3 indicam a posio das nanopartculas.
50
Tese Doutorado Edelma Eleto da Silva
Figura 4-3: MET de NTC sintetizados via CVD a) no purificados e b) purificado
A anlise desse material por espectroscopia Raman, ilustrada pela figura 4-4
mostra trs espectros. Os espectros dos NTC por CVD possuem trs freqncias bem
definidas no modo de respirao radial. Quando estes NTC so purificados (figura 4-
4 CVD purificado) com tratamento trmico e ataque com cido clordrico, o modo de
maior freqncia desaparece, este fato pode indicar que a purificao pode ser
destrutiva para nanotubos de menor dimetro. Alm disto, ainda possvel observar
o aumento relativo da banda D, comparada banda G do NTC antes de qualquer
tratamento. A purificao com cido ntrico provoca a funcionalizao dos NTC
(figura 4-4 CVD funcionalizado), onde os NTC adquirem uma mudana estrutural
visualizada pelo alto grau de desordem indicado pelo aumento da banda D.
200 300 400 1200 1400 1600 1800
CVD Funcionalizado
CVD Purificado
I
n
t
e
n
s
i
d
a
d
e

u
.
a
.
Freqncia Raman (cm
-1
)
CVD
Figura 4-4: Espectro Raman de NTC sintetizado via CVD
51
Tese Doutorado Edelma Eleto da Silva
Atravs da relao I
d
/I
g
verificamos que o fator de qualidade decresce
abruptamente para ataques qumicos mais agressivos. Neste caso, o NTC no
purificado iniciou o processo de tratamento com um fator de qualidade igual a 0,86.
Com o tratamento usando cido clordrico este fator teve uma reduo de 13,28% e
com o tratamento utilizando cido ntrico 120
o
C o fator reduziu em 29,84% .
Atravs destes resultados verificamos que os mtodos de purificao so
eficientes, deixando na amostra apenas 4% de impurezas, a anlise dos resduos
indicam que este material formado basicamente de carbetos, material este de difcil
eliminao por meios qumicos ou fsicos. Este trabalho teve a colaborao das
professoras Clascdia Aparecida Furtado e Adelina Pinheiro dos Santos do CDTN.
Elas abraaram este trabalho com grande dedicao, mostrando procedimentos
viveis para eliminao de impurezas encontradas no NTC e fazendo anlises de
caracterizao a cada passo do processo.
4.2. Purificao de Nanotubos de carbono via arco eltrico
Os NTC produzidos por arco eltrico depois de sintetizados necessitam de
purificao para retirar as impurezas. Para isto, desenvolvemos dois processos em
quatro estgios cada um, a saber:
1. Oxidao:
- Primeiro, a fuligem aquecida em microondas domstico com
potncia mdia da ordem de 1 kW, durante 5 minutos com 4
repeties sucessivas. Este processo promove a oxidao seletiva do
carbono amorfo que recobre NTC e partculas metlicas
[150]
;
ou
- os produtos da sntese so colocados dentro de um forno com
temperatura em torno de 400
o
C por 2 horas, sob ao do oxignio
atmosfrico.
2. Eliminao de partculas metlicas:
- o produto anterior submetido a um ataque qumico de HCl 6M por
12 horas;
ou
- O produto anterior submetido a um refluxo de cido ntrico 3M
aquecido a 120
o
C por 48h.
52
Tese Doutorado Edelma Eleto da Silva
3. Filtrao final - o produto anterior filtrado em filtro Millipore 0,4 m de
PTFE e lavado novamente at atingir pH 7.
4. Secagem - Os NTC so colocados em estufa a 60
o
C durante
aproximadamente 24h.
Os processos descritos acima so assim esquematizados:
O processo de eliminao de partculas utilizando cido ntrico, alm de
purificar os NTC tambm os funcionaliza promovendo a ligao de grupos
carboxlicos a suas paredes.
No procedimento de filtragem primeiramente, a amostra dispersa e agitada
segundo esquemas mencionados acima. Essa suspenso ento colocada no sistema
de filtrao composta de um Erlemeyer acoplado a um funil de 35 mm de dimetro,
30 ml em volume, com microfiltro de vidro com poros de dimetros entre 10 e 16
m, segundo dados do fabricante. A filtragem auxiliada por presso diferencial. Em
seguida, os resduos remanescentes no filtro so recolhidos e suspensos em gua.
Finalmente, o material suspenso e filtrado novamente em gua, sendo, por ltimo,
deixado em forno a 100C, por 1 dia, para secar. O resultado um material em forma
de fuligem ou pequenos aglomerados pretos e duros. Apesar de todas as etapas de
purificao, partculas de catalisadores metlicos permanecem na amostra final como
pode ser visto nas micrografias MEV da figura 4.3.
O mtodo quantitativo usado para avaliar a pureza dos NTC a
termogravimetria, usada para quantificar de modo global a quantidade relativa de
NTC, carbono amorfo e material cataltico (metal e suporte cermico) existente na
amostra
[151, 152, 153]
.
Os NTC produzidos por arco eltrico foram caracterizados, antes e aps sua
purificao, por microscopia eletrnica de varredura, microscopia eletrnica de
transmisso, espectroscopia Raman e TG.
A figura 4.5 mostram curvas TG e DTG da decomposio trmica dos NTC
purificados (figura 4-5a) e no purificados (figura 4-5b) embora, no seja possvel,
53
Tese Doutorado Edelma Eleto da Silva
por meio da curva TG, observar claramente a decomposio dos NTC, pois os efeitos
de degradao trmica se sobrepem. A curva DTG mostra algumas separaes de
mximos de decomposio. Portanto, a melhor forma para se relacionar o efeito do
tipo de material decomposto, carbono amorfo, nanotubos, metais, nanopartculas
atravs do DTG. A perda de massa nas amostras analisadas comeam por volta de
350
o
C em ambos os NTC e terminou por volta de 800
o
C para os NTC purificados e
por volta de 900
o
C para os NTC no purificados. Cada variao de perda de massa
corresponde a um tipo de degradao. Alguns trabalhos sugerem que 450
o
C so
oxidadas as nanopartculas e carbono amorfo e em temperaturas mais elevadas ~550-
800
o
C so oxidados os NTC, acima desta temperatura, possivelmente, degradam
partculas metlicas que foram expostas com a oxidao do carbono amorfo.
[154, 155]
.
0 200 400 600 800 1000
0
20
40
60
80
100
Temperatura (C)
P
e
r
d
a

d
e

m
a
s
s
a

(
%
)
25%
-0,4
0,0
0,4
0,8
D
T
A
54
Tese Doutorado Edelma Eleto da Silva
0 200 400 600 800 1000
0
20
40
60
80
100
Temperatura (C)
P
e
r
d
a

d
e

m
a
s
s
a

(
%
)
1,5%
0,0
0,2
0,4
0,6
0,8
1,0
D
T
A
Figura 4-5: Curvas TG e DTG da decomposio trmica dos NTC a) no purificados e
b) purificados. As setas indicam o eixo de referencia para cada curva
A purificao dos NTC utilizando o processo de purificao descrito no incio
do captulo, com oxidao e ataque cido, deixam os NTC com aproximadamente
99% de pureza. Porm, experimentalmente, temos uma variao neste fator de
pureza, em mdia conseguimos obter amostras de NTC com pureza mdia em torno
de 96%.
As mudanas nas caractersticas morfolgicas, antes e depois da purificao,
visualizadas por microscopia eletrnica, so claramente notadas. Na figura 4-6 (a)
podemos visualizar, nas seqncias de imagens, NTC no purificados. Nesta amostra
possvel observar vrias partculas sobrepondo os feixes de nanotubos. Estes feixes,
ora no podem ser visualizados facilmente devido s partculas, ora se apresentam
em grandes regies sem partculas. Na figura 4-6 (b) podemos visualizar NTC
purificados. Nesta amostra possvel observar uma grande quantidade de feixes de
NTC emaranhados, sem a presena considervel de partculas.
55
Tese Doutorado Edelma Eleto da Silva
Figura 4-6: Seqncia de trs imagens MEV de comparativos (a) NTC purificados e (b)
no purificados
A microscopia eletrnica de transmisso tambm evidencia o grau de pureza
das amostras. A presena de partculas nos NTC no purificados bem maior do que
nos NTC purificados. As imagens mostradas na figura 4-7 representam, de uma
forma geral, as caractersticas destes NTC, os quais se organizam em feixes de
NTPS. Na insero da figura 4-7 (b) so mostrados os NTC purificados com as
extremidades abertas em um feixe de aproximadamente oito NTC. Esta uma
imagem representativa e difcil de ser visualizada nas condies usuais de preparao
de amostras.
56
Tese Doutorado Edelma Eleto da Silva
Figura 4-7: Seqncia de trs imagens MET de NTC sintetizados via arco eltrico (a)
no purificados na primeira linha e (b) purificado na segunda linha
A espectroscopia Raman indica a existncia de NTC de parede simples com
dimetro, em torno de 1,4 nm, em ambas as amostras. Este fato mostra que o
processo de purificao no destrutivo, isto , as etapas de purificao no
promovem a eliminao de tubos com dimetros diferenciados, preservando a
integridade dos NTPS.
A figura 4-8 mostra os espectros Raman para uma amostra antes e depois de
sua purificao. Podemos observar que os espectros so idnticos preservando os
modos RBM, bandas D e G.
0 600 1200 1800
NTC- purificado
NTC
I
n
t
e
n
s
i
d
a
d
e

(
u
.
a
)
Freqncia (Cm
-1
)
Figura 4-8: Espectroscopia Raman de NTC sintetizado via arco eltrico e deste NTC
purificado.
Claramente a purificao dos NTC no afetou a sua qualidade. O fator de
57
Tese Doutorado Edelma Eleto da Silva
qualidade sofreu um decrscimo de 4%, valor desprezvel, dentro do erro estatstico
para uma mesma amostragem.
De forma geral, atravs da purificao, foram obtidos NTC com no mnimo
96% de pureza. Quando comparados os NTC sintetizados, via CVD e via arco
eltrico, verificamos que os processos so mais eficientes para os de arco eltrico. Os
NTC produzidos por arco eltrico so em geral, mais homogneos em relao ao
dimetro e nmero de parede dos NTC. Estes NTC, devido a sua excelncia, foram
utilizados para todas as aplicaes, deste as funcionalizaes at a formao de
novos materiais como compsitos e demais estudos realizados.
5. Funcionalizao dos Nanotubos de carbono
Os primeiros experimentos de funcionalizao de nanotubos tiveram incio com a
utilizao de flor em NTCPS realizados por Smalley e seus de colaboradores
[156,
157]
. As possibilidades de funcionalizao dos nanotubos de carbono esto sendo
vastamente estudadas tanto em seu aspecto terico quanto experimental, envolvendo
adsoro de tomos ou molculas,
[158, 159]
dopagens dos tubos,
[160, 161, 162]
deformaes estruturais,
[163, 164]
adsoro de grupos qumicos,
[165, 166, 167, 168, 169]
e
macromolculas biolgicas.
[170, 171, 172, 173, 174]
.
A funcionalizao de nanotubos de carbono atravs de mtodos qumicos tem sido
vista como uma forma de introduzir os nanotubos de carbono na nanotecnologia
aplicada. Os nanotubos funcionalizados podem ter suas propriedades eletrnicas e
mecnicas alteradas possibilitando seu uso em compsitos, sensores, dispositivos
eletrnicos entre outros. A funcionalizao pode proporcionar a interao dos
nanotubos com macromolculas orgnicas, polmeros, semicondutores e substncias
orgnicas.
As funcionalizaes podem ocorrer de duas formas distintas, a saber: Interao
covalente e no covalente, a primeira o resultado de ligao qumica de grupos
funcionais ao carbono da parede do NTC e o segundo a imobilizao de compostos
qumicos por interaes fracas tipo de Van der Walls.
Como os nanotubos de carbono possuem superfcies com alta estabilidade
qumica, poucas molculas podem reagir diretamente com sua estrutura. Sendo assim
so necessrias solues altamente reativas para realizar uma ligao covalente nos
nanotubos de carbono.
[175]
58
Tese Doutorado Edelma Eleto da Silva
Existem atualmente, vrias de rotas qumicas usadas para funcionalizar os NTC.
Como por exemplo, a funcionalizao covalente com grupos carboxlicos,
[176, 177,
178]
, seguindo rotas de refluxo, com cidos ntrico e sulfrico.
Neste tipo de funcionalizao, o tomo de carbono do grupo COOH se liga
covalentemente com o carbono dos nanotubos. Um segundo passo de reao
intermediaria , em geral utiliza da troca do grupo OH da carboxila por um grupo
halognio tambm chamado grupo abandonador que ao ser removido permite a
incorporao de outras molculas ou grupos qumicos.
A funcionalizao no-covalente permite a imobilizao de molculas anfiflicas
parede dos NTC promovendo sua disperso em solventes de media ou alta
polaridade. Nestas funcionalizaes a parte hidrofbica da molcula interage com a
superfcie dos nanotubos permanecendo livre a parte hidroflica que como resultado
permite a disperso aquosa dos NTC importante para aplicaes biolgicas.
[179, 180,
181]
A imobilizao no covalente de seqncias de oligonucleotdeos tem sido
utilizada para aplicaes na rea de biosensores,
[182]
transporte intracelular
[183]
e
produo de matrizes de liberao controlada de drogas e biocompositos. Outra
aplicao importante da disperso aquosa tem sido empregado para separao de
nanotubos por tamanho.
[184]
5.1. Nanotubos de carbono funcionalizados.
Neste trabalho foram investigadas duas rotas de funcionalizao qumica de
NTC visando aplicaes biolgicas. A primeira que consiste basicamente na ligao
covalente do grupo carboxila a parede do NTC por oxidao induzida por refluxo em
cido ntrico concentrado
[185, 186]
e a segunda que consiste da ligao do alendronato
de sdio a carboxila da parede do tubo via processo de grupo abandonador j descrito
anteriormente. Ambas as funcionalizaes foram desenvolvidas de modo a permitir a
produo de um biocompsito utilizando colgeno tipo I e NTC. A ligao do
alendronato de sdio a parede do NTC tem como objetivo induzir a formao de
hidroxiapatita e promover osteognese.
Carboxilao:
A carboxilao feita atravs de refluxo dos nanotubos de carbono em cido
ntrico. Os nanotubos carboxilados podem ser obtidos atravs de duas rotas distintas
59
Tese Doutorado Edelma Eleto da Silva
envolvendo NTC purificados e no purificados. Os NTC foram submetidos aos
seguintes procedimentos:
ou
Para ambos os procedimentos, devem ser utilizados 40mL de cido ntrico 3M
para cada grama de NTC.
ou
Provavelmente, esta ligao acontece, como ilustrado na figura 5-1, nas
extremidades e na parede do tubo.
Figura 5-1:esquema de um Nanotubo de carbono carboxilado.
Aps o procedimento de carboxilao via refluxo em cido ntrico segue uma
etapa de remoo do cido atravs da separao dos NTC e solvente por
ultracentrifugao. Este processo consiste em sucessivas lavagens dos NTC com gua
DI at que o pH da soluo atinja o valor pH 5. Nesta faixa de pH os NTC comeam
a se tornar bem dispersos na soluo aquosa mesmo aps ultracentrifugao
prolongada de 10
4
RPM por 15 min. Depois de inmeras lavagens ficam precipitados
somente os NTC no funcionalizados e pequenas partculas que no foram retiradas
durante a purificao. Nas primeiras centrifugaes, a soluo tem um tom um pouco
amarelado, que corresponde soluo de cido ntrico oxidada, durante a suspenso
60
Tese Doutorado Edelma Eleto da Silva
a soluo torna-se acinzentada e no final do processo, ela fica translcida.
Este mtodo, alm de adicionar grupos funcionais, tambm incrementa a
purificao dos NTC. Se houver necessidade, para quaisquer aplicaes, de utilizao
dos NTC de alta pureza sem grupos funcionais adsorvidos, a funcionalizao pode
ser revertida atravs de tratamento trmico, colocando os nanotubos de carbono
carboxilados a 400
o
C em vcuo mecnico. Aps este procedimento os NTC no
ficam mais suspensos em gua.
Anlises de espectroscopia na regio do infravermelho foram realizadas para
identificar possveis funcionalizaes nos NTC aps processo de carboxilao.
conhecido que os grupos funcionais se ligam s regies mais reativas dos NTC. Estas
regies esto localizadas nas extremidades do tubo ou/e em defeitos estruturais na
parede do mesmo.
4000 3500 3000 2500 2000 1500 1000 500
Nmero de onda (Cm
-1
)
T
r
a
n
s
m
i
t

n
c
i
a

(
u
.
a
.
)
Figura 5-2: Espectro IR de NTC carboxilado (a seta indica o pico caracterstico da
vibrao -OH do grupo COOH em ~1740cm
-1
)
No espectro da regio do infravermelho (figura 5-2) podemos visualizar o
espectro referente aos NTC carboxilados onde esto indicados os modos vibracionais
dos grupos funcionais. O espectro infravermelho dos NTC-COOH mostram vibraes
referentes ao estiramento C=O da carboxila, (~1730 cm
-1
), modo normal de vibrao
dos NTC referentes ligao C=C ou ligao C=O (~1580 cm
-1
) e deformao OH
(~1250cm
-1
~1070cm
-1
).
61
Tese Doutorado Edelma Eleto da Silva
0 200 400 600 800 1000
0
20
40
60
80
100
Temperatura (C)
P
e
r
d
a

d
e

m
a
s
s
a

(
%
)
1,2%
0,0
0,2
0,4
0,6
0,8
D
T
A
Figura 5-3: Termograma dos nanotubos de carbono carboxilados. As setas indicam o
eixo de referncia para cada curva.
A curva termogravimtrica ilustrada pela figura 5-3 mostra duas curvas, uma
relativa perda de massa e outra referente anlise trmica diferencial. A analise
trmica diferencial indica a presena de duas importantes perdas de massa. A
primeira centrada em 286
o
C referente perda dos grupos carboxilas e a segunda em
550
o
C referente perda de massa de carbono. Como a rea sob a curva dm/dt
proporcional massa perdida durante a queima, podemos calcular a razo de
carbonos ligados carboxila. Uma vez que os percentuais de perda de massa so
75,8% e 9,7% para o C e o COOH, respectivamente verificamos que existem
1,7x10
23
stios de nucleao de COOH em 1 g de NTC.
A imagens de AFM (figura 5-4), para estas amostras de NTC-COOH
mostram que estes NTC apresentam comprimento mdio entre 2 e 3m com uma
distribuio larga de comprimentos, pois, possvel perceber alguns NTC com
comprimento muito pequeno, na ordem de 200 nm. Pela anlise de perfil podemos
verificar que estes NTC esto dispostos em pequenos feixes de 4,5 nm o que indica
feixes com aproximadamente trs NTC.
62
Tese Doutorado Edelma Eleto da Silva
figura 5-4: AFM dos NTC COOH em substrato de Si onde so mostrados topografia,
insero na parte superior esquerda da imagem indicando regio de corte para medida de
altura descrita a direita da mesma.
Um fato interessante que, mesmo com maior interao dos NTC
funcionalizados, eles tm a propriedade de disperso, isto , quando estes NTC so
adicionados em solventes como gua ou tampes, parte dele precipitada e parte
dele solubiliza, como pode ser observado na figura 5-5. Dentro do limite de
concentrao para saturao, pelo menos 50% de sua massa dispersa
instantaneamente. Os NTC que decantam devem ser resuspensos com ultra-som por,
no mnimo, 3 minutos.
63
Tese Doutorado Edelma Eleto da Silva
Figura 5-5: Solubilizao instantnea dos NTC funcionalizados com carboxila ilustrada
sobre uma escala em segundos.
A mudana na morfologia dos feixes de nanotubos, aps o procedimento de
funcionalizao foi observada por microscopia eletrnica de varredura. Os NTC em
parte se organizam em feixes e em parte se aglomeram. Os NTC com maior
comprimento devem interagir mais fortemente um com os outros, devido a menor
densidade de grupos funcionais adsorvidos na extremidade e corpo dos mesmos,
tendo como conseqncia a intensificao das interaes entre os NTC, que se
organizam em forma de feixes. Como pode ser visto na figura 5-6.
Figura 5-6: Seqncia de duas imagens MEV de NTC COOH.
64
Tese Doutorado Edelma Eleto da Silva
A espectroscopia Raman mostrada na figura 5-7 apresenta algumas diferenas
entre o material funcionalizado e o no funcionalizado, principalmente, com relao
intensidade da banda D. Podemos verificar que o fator de qualidade sofreu uma
variao de 21% porm, no percebido alargamento na banda G. A frequncia do
RBM indica a presena de tubos com dimetro entre 1,2 e 1,5 nm.
1100 1200 1300 1400 1500 1600 1700 1800 1900
Purificado
Funcionalizado
I
n
t
e
n
s
i
d
a
d
e
(
u
.
a
.
)
Freqncia (cm
-1
)
I
d
/I
g(func)
= 0,33
I
d
/I
g(purif)
= 0,15
100 200 300 400
Purificado
Funcionalizado
I
n
t
e
n
s
i
d
a
d
e
(
u
.
a
.
)
Freqncia (cm
-1
)
Figura 5-7: Espectroscopia Raman de NTC funcionalizados com carboxila (a) regio
das Bandas D e G (b) Regio do RBM.
A carboxilao dos NTC teve xito, conclumos ento que temos um mtodo
confivel de funcionalizao. Em mdia 3,4% dos carbonos existentes na estrutura do
NTC esto com uma molcula de COOH ligada. Esta quantidade de molculas
ligadas ao NTC suficiente para deix-lo suspenso em soluo aquosa por tempo
indeterminado, sendo que estas esto ligadas tanto nas extremidades do NTC quanto
em seu corpo. A disperso aquosa de NTC-COOH mais antiga data de 3 anos e no
apresenta material precipitado.
Alendronato de sdio
Esta funcionalizao uma das que causou maior expectativa por causa das
aplicaes possveis destes NTC funcionalizados como precursor de cristalizao de
HAp. O Alendronato de sdio o principal componente de medicamentos para
osteoporose e outras desordens sseas. Ele um frmaco pertencente ao grupo de
compostos denominados bifosfonados sendo o responsvel pela inibio especfica
da reabsoro ssea mediada por osteoclastos. O mecanismo de ao dos
bifosfonados pode estar relacionado capacidade de se fixarem na matriz ssea,
65
Tese Doutorado Edelma Eleto da Silva
sendo assimilados pelos osteoclastos. Com esta especificidade podem-se utilizar
estes nanotubos em compsitos implantveis para serem usados em fraturas ou outras
desordens sseas que necessitam de enxerto.
A funcionalizao com alendronato de sdio tambm realizado atravs de
vrias etapas. Este processo foi baseado no artigo de Bin Zhao e colaboradores
[187]
,
onde feita uma funcionalizao com poly-(m-aminobenzene sulfonic acid)(PABS).
Para realizar esta funcionalizao foi adicionado 12 mg de NTC em 20 mL de
dimetilformamida (DMF) e levada ao ultra-som por 30 minutos. A temperatura desta
soluo foi resfriada a 0
o
C sob atmosfera de nitrognio. Posteriormente, 0,4 mL de
cloreto de tionila foi adicionado a esta soluo e mantida sobre agitao constante. A
temperatura foi ento elevada a 70
o
C para remover o cloreto de tionila sob atmosfera
de oxignio e como ltima etapa, foi dissolvido o alendronato de sdio em DMF e
adicionado soluo inicial. Esta mistura foi mantida em refluxo a 120
o
C por 5 dias.
Esta soluo foi finalmente lavada com lcool etlico e gua deionizada. Podemos
descrever esta funcionalizao de forma simples atravs do esquema abaixo:
De acordo com a imagem de AFM para estas amostras, ilustradas pela figura
5-8, pode-se concluir que os NTC fosfonados apresentam comprimento que variam
de centenas de nanmetros a alguns micrmetros. NTC curtos so tambm
observados na imagem de AFM e provavelmente se originam devido a agressividade
e longa durao do processo de funcionalizao utilizado. Pode-se ainda perceber
que os nanotubos longos, mesmo dispersos, se organizam em pequenos feixes de dois
a trs NTC, e os NTC curtos apresentam-se de forma isolada.
66
Tese Doutorado Edelma Eleto da Silva
Figura 5-8: AFM de NTC bifosfonados sobre substrato de silcio onde so mostrados
topografia, insero na parte superior esquerda da imagem indicando regio de corte para
medida de altura descrita a direita da mesma.
No espectro de infravermelho (figura 5-9) podemos visualizar os principais
modos vibracionais do alendronato de sdio ligados aos NTC. So eles: os modos de
estiramento C=C (~1640 cm
-1
at 1580 cm
-1
), P-C (~1440-1280 cm
-1
referente
estiramento C - P=O), -POH( ~2700-2560 cm
-1
e 1040-900 cm
-1
) e P-O (~1200-900
cm
-1
) forte e o estiramento livre - P=O (~1300- 1250 cm
-1
).
67
Tese Doutorado Edelma Eleto da Silva
4000 3500 3000 2500 2000 1500 1000 500
T
r
a
n
s
m
i
t

n
c
i
a

(
u
.
a
.
)
Nmero de onda (cm
-1
)
Figura 5-9: Espectro IR do NTC funcionalizado com Alendronato de sdio
Provavelmente, a ligao do alendronato ocorre covalentemente, pois durante
a funcionalizao utilizado o cloreto de tionila que se liga a carboxila adicionando
um tomo de cloro a este grupo, como ele um bom abandonador, o fosfato o
substitui na ligao.
A anlise por espectroscopia Raman mostra na figura 5-10 que os espectros
dos NTC funcionalizados com alendronato de sdio apresentam algumas diferenas.
s baixas freqncias, o modo de respirao radial no pode ser mais observado. No
espectro, em alta freqncia, pode ser observado alargamento na banda G e aumento
na banda D que se une a banda G. Isto mostra que houve mudanas estruturais dos
NTC como o aumento de defeitos pelo processo altamente reativo.
68
Tese Doutorado Edelma Eleto da Silva
intensidFreqnc
100 200 1350 1500 1650 1800
i
n
t
e
n
s
i
d
a
d
e

(
u
.
a
.
)
Freqncia Raman (cm
-1
)
SWNT Ni/Co bifosfonado
Figura 5-10: Espectroscopia Raman de NTC funcionalizados com alendronato.
Como foi visto, a funcionalizao dos NTC com alendronato de sdio
vivel, uma vez que houve a introduo dos grupos fosfnicos ligados a sua
superfcie.
O efeito biolgico principal dos fosfonatos a inibio da reabsoro ssea. O
mecanismo exato de ao do alendronato ainda no totalmente conhecido, mas ele
parece ter dois mecanismos principais de ao: em primeiro lugar, o alendronato se
liga fortemente aos cristais de fosfato de clcio, inibindo, assim, a formao, a
agregao e a dissoluo dos cristais. Apesar disso, o alendronato no apresenta o
efeito indesejvel de alguns outros medicamentos inibem o processo de
biomineralizao.; em segundo lugar, o alendronato age como inibidor da reabsoro
ssea atravs de uma ligao direta sobre a gerao e/ou sobre a atividade dos
osteoclastos.
Portanto, o alendronato melhora a rigidez do osso atravs de sua ligao com
os cristais de hidroxiapatita. Ao mesmo tempo, tambm capaz de interromper a
atividade aumentada dos osteoclastos, diminuindo, assim, a reabsoro ssea.
De posse destes resultados e sabendo da capacidade de solubilizao destes
nanotubos, possvel utiliz-los na produo de biocompsitos.
69
Tese Doutorado Edelma Eleto da Silva
Solubilidade de nanotubos de carbono funcionalizados em soluo
aquosa.
A solubilidade dos NTC com vrias funcionalizaes foi calculada utilizando
um mtodo de secagem a baixa temperatura, utilizado para estipular concentrao de
slidos em solventes lquidos. Para realizar este procedimento necessria uma
balana de grande preciso, cadinhos de cermica, por reterem menos umidade e as
solues supersaturadas de NTC.
Cada soluo foi feita com 10 mg de NTC por 1 mL de gua. A soluo foi
agitada em ultra-som por 20 min e deixada em repouso por um perodo de 8-10h para
que no houvesse influncia da supersaturao nos resultados. O sobrenadante destas
solues, denominada soluo saturada, foi retirado e medido volumetricamente, e
colocado nos cadinhos cermicos tratados termicamente. O tratamento trmico dado
aos cadinhos necessrio para eliminar vestgios de umidade. Para este tratamento
so utilizados os seguintes procedimentos:
1. Devem ser utilizados recipientes de vidro ou de cermica; estes recipientes
devem ser colocados em estufa 120
o
C, vazios, por 12h e depois deste perodo
colocados em dessecadores at atingir temperatura ambiente. Eles devero ser
pesados e suas massas anotadas.
2. Um volume conhecido de soluo deve ser colocado nestes recipientes que
devero ser novamente levados para a estufa 60
o
C.
3. Quando secos a temperatura da estufa, estes devem ser elevada novamente a
100
o
C por 4h para garantir umidade prxima de zero.
4. Os recipientes devem ser novamente pesados e suas massas anotadas.
5. As massas do cadinho so comparadas antes e depois da secagem e a
diferena de massa corresponde quantidade de soluto no solvente. No caso nosso
soluto so os NTC funcionalizados.
Para a utilizao dos nanotubos funcionalizados, geralmente a concentrao
da soluo de suma importncia. Esta pode ser definida secando a soluo cuja
preparao foi descrita anteriormente. Este mtodo til para saber a concentrao
de solutos em solventes de qualquer soluo, alm de indicar a solubilidade mxima
em solventes. A solubilidade obtida seguindo os passos acima de preparao da
soluo sem utilizao de centrifuga. O armazenamento dos NTC funcionalizados
70
Tese Doutorado Edelma Eleto da Silva
deve ser em ambiente seco e para tal devem ser colocados em estufa com temperatura
em torno de 40
o
C para secagem lenta. De outra forma, eles aglomeram e se tornam
difceis de serem solubilizados.
A figura 5-11mostra a variao da solubilidade de NTC funcionalizados.
0,00
0,20
0,40
S
o
l
u
b
i
l
i
d
a
d
e

(
g
/
l
)
Amostras
SWNT-cido Nitrico
MWNT - Acido nitrco
SWNT-Alendronato de Sdio
Figura 5-11: Grfico de comparao de solubilidade entre diversos NTC.
Entre as amostras de NTC funcionalizados solveis em gua aqui mostradas
podemos verificar na figura 5-11, que a maior solubilidade corresponde aos
nanotubos de carbono com parede nica funcionalizados com carboxila. As
principais diferenas que podem ocorrer entre estas funcionalizaes so: a
polaridade do grupo funcional, o tamanho da molcula que interage com os NTC, o
tipo de ligao (covalente, ou no-covalente), o nmero de grupos funcionais nos
NTC.
Porm, o mais importante para cada uma destas funcionalizaes no o
quanto elas so solveis e sim as funes que podem exercer na formao de novos
materiais ou aplicaes.
71
Tese Doutorado Edelma Eleto da Silva
6. Compsito de NTC e colgeno
Os compsitos sintetizados com matrizes reforadas com NTC, como epxi,
termoplsticos, gels, poli(metil metacrilato) (PMMA), poliacrilonitrila (PAN) e
alguns outros polmeros, tm suas caractersticas estruturais e propriedades
mecnicas alteradas. Quando iniciamos este estudo, nenhum artigo ou patente sobre
compsitos de colgeno e NTC havia sido divulgado. O primeiro e nico artigo
encontrado que divulgava esta mistura foi realizado em Nova York por Rebecca A.
MacDonald em 2005
[188}
. Este trabalho mostra a sntese de um compsito de NTC e
colgeno como matriz de gel tridimensional para cultura de clulas. Em resumo,
mostrado que os NTPS-COOH so facilmente incorporados a matrizes de colgeno
tipo I e que a presena dos NTC na matriz no afeta, significativamente, a
compactao do gel, a viabilidade celular, ou a proliferao de clulas. Os autores
discutem a possibilidade da criao dos compsitos de colgeno e NTC para o uso
em suportes para engenharia de tecido, bem como outras aplicaes biomdicas e,
ocasionalmente, em aplicaes no biolgicas.
Nosso trabalho de biomineralizao de matrizes para reconstituio ssea foi
baseado no trabalho de Bin Zhao e colaboradores
[187]
, j citado no captulo de
funcionalizao. Neste trabalho, os autores mostram a possibilidade de crescer
hidroxiapatita sobre nano estruturas de carbono e comenta que para uma aplicao
mais real de reconstituio ssea, se faz necessrio acrescentar uma matriz. Baseado
neste fato, criamos o compsito com os nanotubos funcionalizados onde seria
possvel crescer estruturas similares a ossos, dando um importante passo no
desenvolvimento de biomateriais. Esse biocompsito alm de induzir a osteognese,
tambm teria suas propriedades melhoradas pelos CNT.
Os nossos primeiros experimentos com compsitos de colgeno e NTC foram
feitos atravs da solubilizao do Colgeno tipo I originrio de cartilagem ovina
cedidos pela Universidade Federal do Cear, em colaborao com o professor Jlio
Cesar Ges.
A solubilizao do colgeno tipo I feita por meio de cido actico para
quebra das ligaes entre as hlices do colgeno e posterior diluio em gua.
Quando o colgeno solubilizado, seu pH deve ser elevado at que esteja entre 6,5 e
7. Em soluo bsica, o colgeno possui pr-disposio a encadear, induzindo assim
72
Tese Doutorado Edelma Eleto da Silva
uma transformao sol-gel, tornando-se um gel.
O NTC suspenso em soluo aquosa, funcionalizado com COOH ou grupo
fosfanato (-P) acrescentado soluo de colgeno e levado em ultra-som por 10
min. Posteriormente, parte da soluo deve ser evaporada e o restante passa por um
processo de liofilizao. O processo de liofilizao deste material compsito consiste
de um congelamento em nitrognio lquido, seguido de uma lenta etapa de retirada de
solvente por sublimao assistida por vcuo.
Uma seqncia de compsitos de colgeno:NTC foi sintetizada com a
utilizao de diferentes concentraes de NTC em colgeno. A figura 6-1 mostra o
um compsito com 4% de NTC.
figura 6-1: Compsito Colgeno: NTC fabricado no laboratrio
Depois de sua obteno, foram feitas medidas de resistncia mecnica destes
compsitos para verificar a possibilidade de construo de estruturas corporais
artificiais utilizando este material. Os NTC, antes de serem incorporados ao
colgeno, foram funcionalizados com grupos fosfonatos e carboxilas para estudo de
biomineralizao de HAp. Este procedimento visa aplicaes de NTC em formaes
sseas; uma vez que, os NTC funcionalizados que possuem carga negativa atraem
ctions de clcio e formam agregados de HAp
[189]
.
6.1. Extrao do colgeno e produo do compsito
O colgeno usado para a fabricao do biocompsito aqui estudado do tipo I.
O colgeno tipo I fibrilar, insolvel em soluo fisiolgica e formado por trs
cadeias polipeptdicas que se organizam em uma conformao tripla hlice. De uma
73
Tese Doutorado Edelma Eleto da Silva
forma geral, a soluo de colgeno tipo I adquirida a partir de tendes de animais.
Os tendes extrados so imersos em cido actico 4% com agitao constante
durante 3 dias e ento a soluo centrifugada. A parte precipitada descartada e a
soluo restante chamada de suspenso misturada a uma soluo salina de NaCl 7%
massa/volume sob agitao e novamente centrifugada. Desta vez, a parte precipitada
reservada e a soluo em suspenso descartada. O material precipitado deve ser
disperso novamente em soluo aquosa de cido actico 0,5 M com concentrao
variando na faixa de 2-5 mg/mL. A extrao deve finalizar, preferencialmente, com
soluo aquosa de colgeno a 3 M. Esta soluo aquosa, provinda da extrao, rica
em colgeno tipo I e ser usada para a incorporao dos NTC. Para purificar esta
soluo de colgeno, esta ltima colocada em membrana de dilise com porosidade
de dezenas de nm, submersa em soluo fisiolgica e meio de cultura, que contm
principalmente compostos antibactericida, antibiticos e tampo fosfato. A dilise
feita por 48h sob agitao constante, sendo responsvel pela excreo de
aminocidos e cadeias polipeptdicas muito pequenas que no faro parte do
entrelaamento final. Esta etapa foi feita somente em uma de nossas extraes e
fisicamente no ofereceu diferena significativa no compsito.
O biocompsito basicamente uma mistura de colgeno com NTPS ou NTPM
funcionalizados ou no, homogeneamente dispersos nesta matriz de colgeno. Os
compsitos podem ser apresentados aps sua obteno com aspecto seco (liofilizado)
ou na forma hidrogelatinosa. O processo de fabricao do biocompsito de colgeno
e NTC cria um suporte tridimensional, onde suas caractersticas e propriedades
fisicas podem ser controladas, atravs da proporo entre os dois reagentes bsicos.
O biocompsito colgeno-NTC preparado a partir de soluo de colgeno e
de uma soluo de NTC dispersos. As solues aquosas de colgeno nas
concentraes de 2-5 mg/mL permitem uma boa incorporao de NTC, com alto grau
de homogeneidade na disperso em matriz de colgeno. Deve-se sempre enfatizar
que a disperso dos NTC em solventes fundamental para promover a distribuio
homognea dos NTC na soluo aquosa de colgeno, de modo a produzir um
compsito com grande homogeneidade de mistura. Os NTC ainda permitem uma
gama imensa de funcionalizaes qumicas que podem possibilitar a criao de
variaes deste biocompsito, com funes bioqumicas especficas, como
hipoteticamente, a induo de processos de inibio ou aumento das reaes
74
Tese Doutorado Edelma Eleto da Silva
inflamatrias na rejeio, ou induo de formao de tecido celular, processos de
biomineralizao ssea e suporte de crescimento celular.
Na produo deste compsito necessrio que a quantidade de NTC, dispersos
em gua ou em outro solvente, seja previamente preparada e com concentrao
conhecida assim como, a soluo aquosa de colgeno, de modo a controlar a razo
entre os NTC e o colgeno na fabricao do compsito. A mistura das duas solues
deve ser assistida por agitao mecnica ou ultrasonificao at atingir um alto grau
de homogeneidade. O tempo de agitao pode variar dependendo da concentrao e
viscosidade das solues usadas na mistura.
O compsito preparado a partir das duas solues acima descritas,
previamente preparadas. Uma soluo denominada soluo 1, constituda de uma
disperso de fibras de colgeno em meio aquoso que foi preparada pela mistura de
colgeno com gua destilada ou deionizada por um perodo de tempo suficiente para
formar uma mistura homognea. O pH da soluo ajustado para um nvel entre 2-4
atravs da adio de cido actico de modo a garantir uma boa disperso aquosa do
colgeno a temperatura 4
o
C para evitar sua degradao. Como mostrado no esquema
abaixo:
Uma soluo denominada soluo 2, constituda de uma disperso aquosa de
NTC deve ter o pH ajustado na faixa de 2-4 com adio de cido actico
temperatura ambiente, com concentrao previamente conhecida. Como mostrado no
esquema abaixo:
As solues 1 e 2 so ento misturadas lentamente sob agitao mecnica ou
assistida por ultrasonificao formando a base do compsito. O grau de
homogeneidade feito por simples inspeo visual e a mistura considerada
75
Tese Doutorado Edelma Eleto da Silva
homognea quando no apresenta aglomerados de carbono.
Esta ltima mistura, denominada soluo 3, ento levada a pH bsico com a
utilizao de hidrxido de sdio 0,4 M e submetida a um processo de retirada do
solvente por processo de secagem em estufa com temperaturas que no excedem
60
o
C e posteriormente submetida a um processo de liofilizao como mostrado no
esquema abaixo.
No processo de fabricao do compsito pode-se incluir, antes da etapa de
liofilizao, etapas adicionais de adio de agentes funcionais ativos e ou agentes
biologicamente ativos, tanto no colgeno quanto nos NTC. Quando houver
necessidade de incluso de clulas, estas devem ser colocadas no compsito; neste
caso, o processo de liofilizao deve ser feito antes da colocao das clulas, ao
contrrio elas morreriam.
O compsito geralmente feito utilizando uma concentrao pr-definida de
NTC e uma referncia do colgeno sem NTC. Para efeito de comparao, a seguir,
vamos mostrar as principais diferenas entre o colgeno e o compsito contendo
NTC-COOH com concentrao de 4% massa:massa.
Em primeiro lugar, podemos verificar a mudana na caracterstica estrutural
do material atravs de micrografias eletrnicas de varredura. As micrografias que
esto na figura 6-2a ilustram o colgeno produzido com tendes de ovelhas (sem
NTC) e a figura 6-2b ilustra este mesmo colgeno com NTC-COOH; a figura 6-2c
ilustra o colgeno produzido com caudas de ratos sem NTC e a figura 6-2d ilustra
este mesmo colgeno com NTC-COOH.
Nesta figura observa-se uma maior estruturao do colgeno com aumento na
orientao das fibras de colgeno (figura 6-2a e c) e diminuio da porosidade do
compsito (figura 6-2b e d), as imagens direita mostram uma pequena ampliao
destas estruturas, evidenciando estas caractersticas morfolgicas gerais. Esta
estruturao similar ao colgeno tratado com glutaraldeido,
[190]
que induz a
formao de ligaes cruzadas entre as cadeias de colgeno atravs de pontes de
76
Tese Doutorado Edelma Eleto da Silva
aldedos. As fibras de colgeno so tratadas com glutaraldeido, por exemplo,
tornando-se uma fibra de maior estabilidade devido s ligaes e entrelaamentos
entre fibras do colgeno. Podemos observar que, colgenos de matrias-primas
diferenciadas no se diferem com relao as suas caractersticas morfolgicas, isto ,
o colgeno puro possui alto grau de porosidade; em contra partida, com o aumento do
material reforo (NTC), os poros diminuem e a estruturao aumenta.
77
Tese Doutorado Edelma Eleto da Silva
Figura 6-2: Seqncia de duas imagens de Micrografias da estrutura morfolgica de
colgeno produzidos de a) tendes de ovelha, b) e o compsito originado deste colgeno, c)
colgeno produzidos de caudas de rato e d) compsito originado este colgeno, e respectivas
ampliaes.
A caracterstica principal desse biocompsito a construo de estruturas com
morfologia distinta pela proporo de mistura de seus dois constituintes bsicos.
Quanto maior a quantidade de NTC acrescentada ao colgeno, maior a estruturao
do material e possvel notar grande alterao do tamanho dos poros, sendo que
estes diminuem com o aumento da concentrao de NTC. Esse biocompsito
altamente poroso, com esqueleto tridimensional na ordem de grandeza de estruturas
celulares, de tal forma que as clulas, se agregadas ao compsito, podem alcanar o
centro do mesmo, bem como, passarem de uma extremidade a outra, podendo
promover uma reconstituio celular e ntima integrao matriz hospedeira. Alm
disso, como os NTC esto na faixa de dimenses tpicas das molculas de colgeno,
em escala nanomtrica, possvel um alto grau de entrelaamento entre estas duas
nano estruturas. O controle do entrelaamento entre colgeno e nanotubos de carbono
atravs de ligaes qumicas ou pela variao da quantidade de cada material na
mistura pode permitir ainda um controle das propriedades fsico-qumicas deste
biocompsito. Alm disto permite um controle adicional de sua porosidade. Este
controle de fundamental importncia para o crescimento celular como tambm, na
sua velocidade de degradao quando implantado.
A ligao entre os NTC e o colgeno promove uma diferenciao estrutural
entre o colgeno e o compsito, necessitvamos ento confirmar a integridade das
78
Tese Doutorado Edelma Eleto da Silva
fibras de colgeno no compsito. Isto foi possvel atravs da anlise de espectros no
infravermelho destas molculas. A integridade da molcula de colgeno
comprovada pela existncia da tripla hlice, que dada pela razo igual a 1 entre as
intensidades das bandas 1235/1450 cm
-1
, referentes a aminas ii e iii.
[191]
Tanto no
colgeno quanto no compsito a razo entre estas duas bandas esto em torno de 0,9,
o que indica a existncia da tripla hlice nas estruturas formadas. Todas as medidas
foram feitas aps a liofilizao, confirmando que este processo no degrada as
estruturas moleculares nem do colgeno, nem do compsito. As demais bandas
comprovam a composio esperada para o colgeno. Na figura 6-3 esto
representados os modos vibracionais das protenas presentes na estrutura do colgeno
[191]
. As freqncias de vibrao das bandas referentes amida A do estiramento
NH (~3328, 3327 e 3334 cm
_1
), amida I (1637, 1657 e 1640 cm
_1
), C=O (1667 cm
-
1
), amida II (1548, 1554 e 1549 cm
_1
), estiramento C-N e N-H ~1550 cm
-1
, amida III
(1241, 1238 e 1239 cm
_1
), amida ii e iii (~1450, 1402, 1350, 1250 cm
-1
).
4000 3500 3000 2500 2000 1500 1000 500
Compsito com 4% de NTC-COOH
T
r
a
n
s
m
i
t

n
c
i
a

(
u
.
a
.
)
Freqncia (cm
-1
)
Colgeno puro
Figura 6-3: Espectro IR do compsito de colgeno com 4% de NTC e colgeno puro
obtidos por ATR
Verificamos tambm a integridade dos NTC na matriz de colgeno atravs da
espectroscopia Raman do compsito no espectro mostrado na figura 6-4, que
apresenta algumas caractersticas vibracionais referentes ao modo vibracional do
carbono. No espectro Raman do compsito a banda G sofre alargamento e h
aumento na banda D mostrando uma interao entre o colgeno e os nanotubos de
79
Tese Doutorado Edelma Eleto da Silva
carbono.
1200 1400 1600 1800
I
n
t
e
n
s
i
d
a
d
e

(
u
.
a
.
)
Freqncia (cm
-1
)
Compsito
Figura 6-4: Espectro Raman do compsito de colgeno com 4% de NTC
Estas duas tcnicas mostram que a estrutura do colgeno para elaborao do
compsito permanece ntegra e que no h variaes significativas nos espectros de
infravermelho devido ligao do NTC com o colgeno.Este fato indica que eles eles
no interagem atravs de ligaes qumicas fortes.
Este compsito, como pode ser visto, um biomaterial nanoestruturado.
Porm, a capacidade de substituir estruturas biolgicas em fraturas sseas, implantes
biodegradveis, reparo de cartilagens e tendes, ou como agente de transporte de
frmacos depende de outras caractersticas, como por exemplo, sua resistncia
mecnica e trmica, seu poder de adsorver lquidos e o tempo de degradao em
soluo fisiolgica. Estes fatores foram analisados e sero mostrados a seguir para
trs tipos de colgeno: Colgeno extrado de caudas de rato, tendo de carneiro e
tendo bovino comercial da Aldrich (liofilizado).
6.2. Anlise trmica
Sabendo que houve estruturao das matrizes pelo material reforo, e que esta
estruturao e a origem do colgeno podem interferir na temperatura de degradao
trmica
[191]
dos mesmos, foram feitas anlises de Termogravimetria (TG) dos
materiais liofilizados.
Normalmente, as primeiras transies trmicas ou degradao dos colgenos
80
Tese Doutorado Edelma Eleto da Silva
ocorrem em temperaturas entre 40 e 100
o
C, com mxima perda de massa em 64
o
C
para tendes bovinos nativos
[192]
e pele de boi.
[191]]
Nessa temperatura ocorre a
eliminao de gua das protenas (desnaturao). Em inferncia a estes resultados,
verificamos a variao da resistncia trmica atravs de medidas de termogravimetria
para os nossos biocompsitos de colgeno tipo I e NTC. A figura 6-5a mostra duas
curvas de TG relativas ao colgeno de cauda de rato sem NTC e deste colgeno com
4% de NTC; a figura 6-5b mostra duas curvas de TG relativas ao colgeno de tendo
de carneiro com 0,2% de NTC e deste colgeno com 4% de NTC.
Podemos observar que a incorporao de 4% de NTC na matriz de colgeno
aumenta a temperatura de degradao trmica dos colgenos de 68,7 para 86,5
o
C no
colgeno sintetizado a partir de caudas e em torno de 51,5 para 88,5
o
C no colgeno
sintetizado a partir de tendes.
100 200 300 400
Compsito com 4% de NTC-COOH
d
m
/
d
t
Temperatura
o
C
86,5
68,7
302
310
Cauda de rato
Colgeno
81
Tese Doutorado Edelma Eleto da Silva
100 200 300 400 500
Colgeno com
4% de NTC-COOH
88,5
d
t
/
d
m
Temperatura (
o
C)
Tendo de carneiro
51,5
330
Compsito
Figura 6-5: Anlise trmica de estruturas de compsito e colgeno a) de cauda de rato e
b) de tendo de carneiro.
Estes resultados obtidos no foram repetidos para colgeno sintetizado a partir
de colgeno de tendes de boi comercial, os quais j vinham liofilizados e tinham
que sofrer processo de solubilizao. Podemos verificar que a variao na
temperatura de degradao pode estar ligada integridade da tripla hlice na
estrutura do colgeno e/ou estruturao do colgeno que mais difcil de
desnaturar, mas fica claro que a presena dos NTC na matriz causa uma maior
estruturao e aumento da temperatura de degradao. O compsito por ter a
temperatura de degradao mais alta do que o colgeno indica maior estruturao da
matriz de colgeno, promovendo a ele mudanas na capacidade de estabilizao em
ambiente fisiolgico.
6.3. Ensaio de Trao
As propriedades mecnicas constituem uma das caractersticas mais
importantes dos compsitos, visto que suas aplicaes se baseiam, principalmente,
no comportamento destas propriedades.
No ensaio de trao uniaxial, realizado no Departamento de Metalurgia da
UFMG, com a colaborao do professor Herman Mansur, o material deformado por
alongamento, at o momento em que se rompe. Os ensaios de trao permitem saber
como os materiais reagem aos esforos de trao, quais os limites de trao que
82
Tese Doutorado Edelma Eleto da Silva
suportam e a partir de que momento os mesmos se rompem. A tenso na ruptura e a
elongao foram obtidas diretamente do ensaio mecnico de trao atravs da curva
tenso x deformao. O mdulo elstico calculado apartir da inclinao da parte
linear da curva tenso x elongao.
O colgeno tem uma excelente compatibilidade biolgica e qumica, mas no
resiste mecanicamente a condies tpicas recorrentes aplicao clnica.
O desenvolvimento deste compsito requer claramente o entendimento das
propriedades mecnicas deste compsito e os dados acima podem, portanto, capacitar
o desenvolvimento e o melhoramento das propriedades mecnicas deste compsito.
Baseado nos testes mecnicos realizados por Shanmugasundaram
[Erro! Indicador no
definido.]
, os experimentos foram realizados com velocidade constante de deslocamento
de 5 mm/min entre as pinas fixas nas extremidades das amostras. A figura 6-6
ilustra as curvas de tenso de ruptura em funo da deformao obtida pelo teste de
trao do compsito de colgeno com NTC e colgeno puro. Observa-se que ambas
as curvas so tpicas de materiais polimricos flexveis e pouco resistentes.
0,08 0,09 0,10 0,11 0,12 0,13
0
1
2
3
Colgeno
T
e
n
s

o

(
M
P
a
)
Deformao
Compsito
83
Tese Doutorado Edelma Eleto da Silva
0,00 0,02 0,04 0,06 0,08
0
1
2
3
4
Compsito Bovino
T
e
n
s

o

M
P
a
Deformao
Colgeno Bovino
Figura 6-6: Exemplo das curvas de tenso versus elongao de filmes colgeno e
compsito.(a) colgeno de rato (b) colgeno de rato
Os valores das propriedades mecnicas obtidas nos testes de trao neste
trabalho esto apresentados na
84
Tese Doutorado Edelma Eleto da Silva
Tabela 6-2. Nesta tabela podem ser observados valores menores de tenso na
ruptura e mdulo elstico do colgeno do que no compsito; isto , esse compsito
produziu filmes mais resistentes e mais rgidos que o do colgeno puro. Comparados
a outros polmeros, como PLLA e PAN, os compsitos so menos resistentes a trao
que o prprio polmero. Nestes polmeros, os NTC agem de forma diferenciada; no
PAN, o NTC torna a matriz mais frgil e no PLLA, o NTC deixa o compsito mais
resistente, assim como no colgeno. Apesar de serem menos resistentes
mecanicamente do que os polmeros sintticos, os compsitos de colgeno possuem
caractersticas que os diferencia, isto , eles apresentam caractersticas semelhantes
ao organismo, por ser o colgeno uma molcula constituinte de todo os rgos do
corpo humano. Assim, o interesse em substituir os compsitos j utilizados em
implantes pelo compsito de colgeno: NTC, reside no fato de poder ser implantado
com menos risco de rejeio, alm de ter a possibilidade de ser absorvido no local
implantado e regenerado simultaneamente pelo organismo.
85
Tese Doutorado Edelma Eleto da Silva
Tabela 6-2 Tenso na ruptura (MPa), e mdulo elstico (MPa) para colgenos,
compsitos e outras matrizes polimricas.
Materiais tenso (MPa)mdulo elasticidade (MPa)
PLLA (Poly(L-lactic acid))
[193]
5,73 44,38
PLLA+ 1% NTPS 5,90 154,77
PLLA + Poly -L lisine 6,98 53,37
PLLA+ Poly -L lisine +1% NTPS 8,93 124,03
PAN (polyacrylonitrile)
[194]
8,90 230,00
PAN+ 1% NTPS 12,40 0,65
PAN+ 3% NTPS 7,00 0,37
PAN+ 5% NTPS 5,50 0,27
Colgeno - cauda de rato 0,53 15,53
Colgeno - tendo bovino 2,42 46,67
Compsito - cauda de rato 3,13 101
Compsito - tendo bovino 3,11 101,43
Os filmes produzidos com colgeno de cauda de rato foram menos resistentes
do que os bovinos. A reduo da tenso entre o colgeno extrado de tendo de rato e
seu respectivo compsitos de 83% e a reduo da tenso em torno de 22% menor
nos colgenos extrado de tendo bovino que no seu respectivo compsito. Por
comparao, vemos que o valor da tenso de ruptura na amostragem de compsitos
menor nos compsitos produzidos com tendes bovinos do que com caudas de rato,
como pode ser visto na distribuio ilustrada pela figura 6-7. Possivelmente, esta
diferena de comportamento pode ser explicada pela estruturao provocada pelo
processo de produo do compsito, tanto no compsito produzido por colgeno de
tendo bovino quanto no colgeno de tendo de rato.
86
Tese Doutorado Edelma Eleto da Silva
Tenso de ruptura
0.00
1.00
2.00
3.00
4.00
5.00
tendo rato
Colgenos
T
e
n
s

o

d
e

R
u
p
t
u
r
a

(
M
P
a
)
compsito
Colgeno
Figura 6-7: Distribuio de tenso de ruptura para duas amostragens de colgeno.
De uma forma geral, podemos dizer que o colgeno tem resistncia mecnica
menor que o compsito independentemente da fonte de colgeno devido
estruturao provocada pelos NTC. Os compsitos se apresentam sempre com maior
homogeneidade estrutural que o colgeno no importando sua origem.
O presente trabalho mostra que o colgeno combinado com NTC constitui uma
estrutura similar a um suporte celular, constitudo de um gel polimerizante e fatores
de interligamento referente a funes celulares. Houve um aumento de propriedades
mecnicas e trmicas resultantes da sntese do material, uma vez que o compsito
tem caractersticas parecidas com as dos compsitos j utilizados, com a vantagem
de ser um biocompsito feito a partir de molculas proticas formadoras do
citoesqueleto de sistemas vivos.
6.4. Hidratao dos compsitos
A hidrofilicidade das matrizes tem grande importncia em procedimentos
teraputicos, uma vez que, a taxa de absoro de gua afeta a liberao de
medicamentos, que podem ser adicionados ao compsito para melhorar a
cicatrizao, para manter o nvel de hormnios no organismo, para aniquilar uma
infeco com a incorporao de antibiticos, entre outras posologias possveis. A
hidratao do material depende de sua porosidade e afeta a rea superficial da matriz
pela difuso de lquido, com isto, matrizes com diferentes taxas de hidratao podem
resultar em diferentes cinticas de liberao de drogas.
Neste experimento foi determinada a quantidade de tampo absorvido pelas
amostras de colgeno e de compsitos colgeno/NTC. As amostras foram preparadas
de duas formas diferentes: uma amostragem composta de biocompsitos
87
Tese Doutorado Edelma Eleto da Silva
liofilizados, que so suportes tridimensionais; e a outra amostragem composta
destes mesmos biocompsitos no liofilizado, seco em estufa com temperatura
constante de 45
o
C, que so filmes bidimensionais. As amostras liofilizadas se
dividem em outros dois grupos, um feito com NTC-COOH e outro feito com NTC
fosfonado. Cada amostra preparada tinha em torno de 5 mm de dimetro.
As amostras com massas de 5 a 25 mg foram colocadas em tampo fosfato pH
7,2 e permaneceram imersas por tempo determinado entre 15 e 24h e novamente
pesadas. O tampo foi preparado adicionando 5,2 g de fosfato de sdio monobsico
NaH
2
PO
4
e 23 g de fosfato de sdio dibsico Na
2
HPO
4
em 900 mL de gua destilada.
Em seguida, ajustou o pH com NaOH para 7,4 e completou o volume para 1 litro com
gua destilada, e a soluo foi armazenada em geladeira.
Aps as amostras terem sido retiradas do tampo, elas foram colocadas sobre
papel toalha para retirar o excesso de gua superficial e estabelecer um padro para
coleta de dados.
A quantidade de tampo absorvida foi calculada pela seguinte equao:
% 100
m s
m
m m
gua
m

= .
Onde m
m
e s
m
so a massa dos compsitos e colgenos molhados e secos
respectivamente.
A figura 6-8 mostra a capacidade de hidratao por tampo PBS pelas
amostras. Pode-se observar que a partir de 15 min de exposio das amostras o
percentual de hidratao j ultrapassa um pouco mais de 50% nos filmes e mais de
85% nos compsitos liofilizados. Foi possvel perceber que a incorporao de NTC
alterou a capacidade de hidratao dos compsitos. Pode-se observar que a partir de
60 minutos de imerso a percentagem de lquido absorvido praticamente constante.
No colgeno liofilizado, a adsoro aquosa aumenta sutilmente com o aumento de
tempo de imerso. Os compsitos com nanotubos carboxilados tem um poder de
adsoro 6,5% maior do que o colgeno e o compsito com bifosfanato 2,2% menor
que o colgeno. Nos filmes, o comportamento inverso, o filme de compsito mais
absorvedor de lquido do que o colgeno, porm com o tempo de imerso o poder da
absoro menor para o compsito.
88
Tese Doutorado Edelma Eleto da Silva
10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120
50
60
70
80
90
100
Filme Colgeno
Compsito-COOH
H
i
d
r
a
t
a

o

%
Tempo (min)
Colgeno
Compsito-2P
Filme Compsito-COOH
Figura 6-8: Comparativo entre a hidratao de colgeno e compsito em forma de filme
e de suporte 3D.
Alm da diferenciao na molhabilidade, o compsito tem densidade
diferente da matriz de colgeno, como pode ser visto na figura 6-9. A incorporao
de nanotubos ao colgeno causa um aumento da densidade. Uma das hipteses para
este fato o maior emaranhamento das fibras de colgeno. Infelizmente no foi
possvel medir a diferena entre a densidade destes dois materiais.
Figura 6-9: Imagem para comparao de densidade qualitativa
Outra caracterstica analisada (do compsito feito com NTC-COOH) foi o seu
tempo de solubilizao. Esta caracterstica, por exemplo, importante para medir a
estabilidade do material em um implante. A medida de solubilidade foi feita
adicionando 3 mL de tampo fosfato em 0,345 mg colgeno liofilizado. Estes
materiais foram incubados temperatura ambiente que variou entre 21-36C.
89
Tese Doutorado Edelma Eleto da Silva
A figura 6-10 ilustra o experimento de solubilizao de compsitos com
diferentes concentraes de nanotubos de carbono observados diariamente. Na figura
6-10 observa-se esquerda compsito com 4% de NTC-COOH e a direita com 0,2%
de NTC-COOH. O nmero escrito em cada figura corresponde ao nmero de dias
decorridos desde a imerso do material na soluo fisiolgica.
1 2 12
15
20
61 82
91
139 250
36
1 2 12
15
20
61 82
91
139 250
36
1 2 12
15
20
61 82
91
139
250
36
1 2 12
15
20
61 82
91
139
250
36
Compsito 4% (NTC) Compsito 0,2% (NTC)
Figura 6-10: Solubilizao de compsitos com diferentes concentraes de nanotubos de
carbono observados diariamente, esquerda compsito com 4% de NTC-COOH e a direita com
0,2% de NTC-COOH. O nmero escrito em cada figura corresponde ao nmero de dias
decorridos desde a imerso do material na soluo fisiolgica.
Em sntese, podemos observar que quanto maior a quantidade de NTC na
matriz maior o tempo de solubilizao. Enquanto o colgeno sem NTC solubilizou
nas primeiras semanas, o compsito com 4% de NTC permanece inerte a mais de 6
meses. Fazendo uma interligao entre estes ltimos experimentos relatados sobre os
compsitos, podemos concluir que os NTC agem como reforo na matriz de colgeno
proporcionando a ele, maior temperatura de desnaturao, passando de 50
o
C no
colgeno, para 85
o
C no compsito. Eles proporcionam tambm maior resistncia
90
Tese Doutorado Edelma Eleto da Silva
mecnica tornando o compsito pelo menos duas vezes mais resistente do que o
colgeno; e proporcionando uma maior densidade ao compsito do que ao colgeno
puro.
A variao de massa de NTC colocado no compsito pode inferir no tempo de
solubilizao do material em ambiente fisiolgico e pode ser um promissor agente de
carreamento de drogas devido sua molhabilidade.
Estas caractersticas promovem ao compsito uma vasta gama de aplicaes
raramente encontradas em um nico compsito conhecido.
6.5. Hipteses de interaes
Como os NTC possuem grande resistncia e tem forma quase unidimensional,
com dimenses semelhantes s separaes das cadeias trplices do colgeno, a
exposio de molculas de colgeno da hlice tripla, aberta em soluo aquosa aos
NTC dispersos, pode induzir interaes entre eles. Algumas formas de ligao entre
o colgeno e os NTC podem ser especuladas uma vez que, no h indcios de como
ocorrem estas interaes. Quando a matriz recebe o material de reforo, ocorre um
contacto ntimo entre eles e pode haver adeso. Um nmero de diferentes tipos de
adeso pode ser formado, ou seja, para uma certa combinao de materiais, um ou
vrios tipos de mecanismos de adeso podem ocorrer: adeses mecnica,
eletrosttica, qumica e por interdifuso. Os tipos de adeso dependem de alguns
fatores como a presena de impurezas ou adio de agentes de acoplamento.
De uma forma resumida, alguns mecanismos de adeso entre os constituintes
de um compsito so os seguintes
[195]
:
1- Adeso mecnica: consiste em um intertravamento ou chaveamento
mecnico das duas superfcies. Este tipo de adeso o tipo mais eficaz, quando a
fora aplicada paralelamente interface, aumentando consideravelmente a tenso
ao cisalhamento. Em muitos casos, a adeso mecnica no ocorre sem a ajuda de
algum outro mecanismo de adeso.
2- Adeso eletrosttica: adeso ocorre entre a matriz e o material de reforo
quando as superfcies so carregadas negativa e positivamente. Isto promove uma
atrao eletrosttica entre os componentes do compsito que depender da diferena
de carga de suas superfcies. Esta interao eletrosttica baixa e eficaz apenas
quando as distncias so pequenas na ordem de distncias interatmicas.
91
Tese Doutorado Edelma Eleto da Silva
3- Adeso qumica: formada por ligao entre grupos qumicos sobre as
superfcies do compsito. Este tipo de adeso depende do nmero de stios de ligao
por rea e do tipo da ligao qumica.
4- Adeso por interdifuso: os tomos ou molculas de dois componentes do
compsito podem interdifundir na interface para promover a adeso conhecida como
interdifuso.
5- Adsoro e molhamento: o molhamento eficiente da carga pelo polmero
remove o ar incluso e cobre todas as protuberncias da fibra
Na mistura de um material reforo (fibrosa ou no) com uma matriz
polimrica deve ocorrer uma boa interao reforo-polmero, que pode ser medida
atravs do ensaio de resistncia trao. Caso esta propriedade seja superior do
polmero puro, significa que a matriz polimrica transferiu parte das tenses para a
fase dispersa desde que este seja mais resistente que a matriz. Esta transferncia de
tenses acontece atravs da regio de contato entre o polmero e o material reforo,
chamada de interface, sendo o resultado da deformao elstica longitudinal entre
material reforo e a matriz e do contato por frico entre os componentes.
De acordo com este entendimento, a interface assume papel decisivo nas
propriedades mecnicas do material final, de modo que uma boa adeso resulta em
boas propriedades mecnicas. Esta adeso est relacionada com as propriedades
qumicas do material reforo, bem como com as conformaes moleculares e
constituio qumica da matriz e, caso esta adeso no seja perfeita, surgiro
inevitavelmente vazios na regio interfacial, provocando a fragilizao do material.
Normalmente a fratura de um compsito ocorre devido quebra da interface
polmero/material reforo e no devido quebra de um dos componentes. A
concluso mais bvia que quanto menor o tamanho das fibras maior o nmero de
extremidades para uma mesma concentrao e dimetro, resultando em propriedades
mecnicas inferiores. Desta forma, o aumento no comprimento da fibra aumenta a
eficincia do reforo. Compsitos fibrosos so altamente anisotrpicos, podendo
apresentar propriedades muito diferentes conforme a direo da solicitao da carga.
A presena de fibras restringe a deformao da matriz. Por fim, as propriedades de
um compsito com material reforo fibroso dependero fundamentalmente dos
seguintes fatores:
- razo de comprimento/espessura
92
Tese Doutorado Edelma Eleto da Silva
- frao volumtrica presente na matriz- orientao (anisotropia)
- resistncia da interface (adeso com a matriz polimrica)
Estudos sobre o desempenho de materiais compsitos reforados com fibras
mostram que a razo de aspecto crtica, ou o comprimento crtico das fibras depende
da frao volumtrica destas nos compsitos. Em baixa frao volumtrica ou teor de
fibras na matriz, as fibras influenciam pouco a resistncia do compsito que
denominada pela matriz. Acima de uma frao crtica a resistncia dos compsitos
aumenta com o teor de fibras na matriz. Em geral, quanto maior a razo de aspecto
menor a frao volumtrica crtica ou teor crtico
[196, 197]
.
No caso especfico do compsito aqui estudado podemos concluir que o
compsito de colgeno e nanotubos de carbono assumem uma interao de carter
eletrosttica, entrelaamento nas fibras ou simples mistura. Estas interaes esto
ilustradas na figura 6-11.
Inicialmente, os dois materiais se apresentam isolados. Com o processo de
mistura, duas situaes se manifestam: a primeira a interao entre as molculas de
colgeno e os NTC e a segunda a simples mistura desses elementos: Na primeira
opo mais trs possibilidades surgem: (a) os nanotubos interagem com o colgeno
superficialmente por uma atrao fraca em parte ou em toda a sua superfcie; (b) os
nanotubos fazem parte da formao de tripla hlice se encaixando entre elas; (c) o
colgeno se enrola em torno do NTC.
Como os NTC que possuem dimenses semelhantes s das cadeias trplices do
colgeno, provavelmente a exposio de molculas de colgeno em estado sol com
NTC dispersos pode induzir um enrolamento estrico.
93
Tese Doutorado Edelma Eleto da Silva
Figura 6-11: Possibilidades de arranjos de colgeno em NTC.
Outras formas para a ligao podem ser proporcionadas pela exposio de
molculas de colgeno em estado sol com NTC dispersos, promovendo interaes
qumicas nas terminaes funcionais dos NTC com as terminaes proticas do
colgeno facilitando a ligao qumica entre elas, como ilustrado na figura 6-12.
Figura 6-12: Fragmento de uma hlice do colgeno (seqncia de protenas) ligada
ao NTC
[198]
.
94
Tese Doutorado Edelma Eleto da Silva
O comportamento de reforo do colgeno, aumentando a resistncia, a trao
de ruptura e a estabilidade trmica do colgeno, indicam que existe uma adeso
eficiente na interface colgeno NTC, que pode ser proveniente da interao do
colgeno com os NTC, via enrolamento ou ligao qumica. Estas caractersticas
promovem ao compsito a possibilidade de permanecer estvel no organismo e
promover regenerao de tecidos, por exemplo.
95
Tese Doutorado Edelma Eleto da Silva
7. Induo de crescimento de Hidroxiapatita sobre
nanoestruturas.
A mineralizao dos tecidos vem sendo estudada vastamente desde 1959
quando Glimcler
[199]
props a teoria de mineralizao por deposio de mineral. O
autor diz que a mineralizao ocorre pela interao entre a fase mineral do fluido
extracelular e os componentes orgnicos da matriz. Entre estes componentes esto s
fibrilas colgenas cujas matrizes orgnicas so formadas principalmente por
colgeno, como o exemplo da dentina, do osso e da cartilagem. Nestes tecidos, a
mineralizao ocorre pela precipitao de fosfatos de clcio nos componentes
fibrilares e no fibrilares das matrizes orgnicas. Este processo independente de
qualquer outra participao celular e dirigida apenas por parmetros fsico-qumicos.
Os sais minerais derivados dos ons clcio e fosfato presentes no fluido extracelular
so depositados, seletivamente, nas denominadas matrizes "mineralizveis" desses
tecidos. Na cartilagem, no osso e na dentina a deposio inicial de mineral
caracterizada pela aparecimento de depsitos de fosfatos de clcio (hidroxiapatita)
em associao com uma populao de corpos envolvidos por membrana, as vesculas
da matriz. As vesculas da matriz so corpos arredondados envolvidos por membrana
e esto presentes no espao extracelular das matrizes de colgeno que se calcificam.
Elas derivam das clulas formadoras desses tecidos e aparecem logo aps a
deposio do colgeno que rapidamente adquirem incluses com aparncia de
cristais, contendo clcio e fosfato em diversas espcies denominadas hidroxiapatita.
A maneira que o processo de mineralizao se difunde das vesculas para o colgeno
um assunto bastante controverso.
Os estudos realizados sobre a compartimentalizao da matriz orgnica do
osso em desenvolvimento sugerem a existncia de duas fases durante o processo
inicial de mineralizao, a saber: uma primeira, vesicular, onde as vesculas da
matriz desempenhariam um papel na nucleao inicial; e uma segunda, fibrilar, onde
as fibras de colgeno, em associao, provavelmente, com outras molculas da
matriz, forneceriam os locais para a continuao do processo de biominerizao. J
conhecido que o colgeno e molculas associadas a eles, fosfoprotenas, por
exemplo, so capazes de fornecer a geometria estereoqumica tridimensional e a
96
Tese Doutorado Edelma Eleto da Silva
distribuio de cargas eltricas necessrias para a nucleao da apatita
[200]
.
Na linha dos implantes, os diversos biomateriais utilizados clinicamente
induzem diferentes respostas do tecido e, em funo do tipo de interface tecido-
implante desenvolvido, podem ser classificados em bioinertes ou bioativos. A
incorporao do grupo de fosfatos de clcio, ao qual pertence a HAp, superfcie de
implantes metlicos e materiais cermicos bioativos so altamente difundidos
[201]
. A
HAp, por exemplo, considerada um material osteocondutor por acelerar a formao
de osso novo ao redor do implante e, com isso, reduzir o tempo de cicatrizao,
diminuindo, conseqentemente, o tempo total de tratamento. O uso dos
recobrimentos de HAp, sobre implantes metlicos, permite associar a resposta
biolgica favorvel destes materiais s excelentes propriedades mecnicas dos metais
normalmente utilizados em implantes odontolgicos. Outra prtica comum utilizar
em implantes raspas de ossos, retiradas do prprio paciente. Para esta extrao, o
paciente deve se sujeitar a uma cirurgia extra. Os fosfatos de clcio, em especial a
hidroxiapatita Ca10(PO4)6(OH)2, favorecem o crescimento sseo para os locais em que
ela se encontra, estabelecendo ligaes de natureza qumica entre a hidroxiapatita e o
tecido sseo (bioativo). Tambm permite a proliferao de fibroblastos, osteoblastos
e outras clulas sseas, sendo que as clulas no distinguem entre a hidroxiapatita e a
superfcie ssea, o que indica a grande similaridade qumica superficial.
O interesse pela HAp como um biomaterial est ento relacionado com o fato
desta ser a principal fase mineral encontrada no tecido sseo e ter alta
biocompatibilidade. Suas aplicaes estendem-se desde a ortopedia e traumatologia
para correes de maxilas, traumatismos coluna cervical, tumores msculos-
esquelticos entre outras. Na odontologia, em casos de doenas periodontais,
implantes dentrios e preenchimento de sseos. O colgeno pode ser usado como
arcabouo de HAp, por ser um agente de unio biocompatvel e reabsorvvel,
responsvel pela preveno da migrao das partculas de HAp, at sua incorporao
no tecido. O biomaterial sempre deve permitir um crescimento sustentado do osso
vizinho na sua superfcie, promovendo contato direto entre o osso e o material para
ocorrer o fenmeno da osteointegrao. Neste fenmeno ocorre uma conexo direta e
funcional do osso, estruturado e vivo, com a superfcie de um implante, submetido
carga funcional, sem a interposio de tecido fibroso
[201]
.
Sabendo destes argumentos, comeamos a estudar a formao da HAp sobre
97
Tese Doutorado Edelma Eleto da Silva
os materiais por ns estudados, isto NTC, colgeno e compsitos. Idealmente, um
biocompsito de boa eficincia na induo de osteognese deve propiciar a nucleao
de hidroxiapatita em condies de concentrao de Ca
2+
e PO
4
3+
encontradas no
meio fisiolgico. Para verificar tal caracterstica, foi realizado um teste in-vitro
utilizando uma soluo tampo com concentrao de ons Ca
2+
similar a encontrada
no sangue.
importante saber que a concentrao de Ca
2+
no sangue , normalmente, de
10 mg/dl, o que corresponde uma soluo com concentrao de 25 mM. Destes,
40% so representados por Ca
2+
ligado a protenas plasmticas e 60% so
ultrafiltrveis. Uma poro de 10% dos componentes ultrafiltrveis est complexada
com anons (por exemplo, sulfato fosfato e citrato) e a outra poro de 50%
representa Ca
2+
livre, ionizados. Esta ltima a nica forma de Ca
2+
biologicamente
ativa. Com isto, para simularmos o organismo precisamos de uma soluo com no
mximo 12,5 mM de ons clcio. O organismo humano munido de ons de Ca
2+
circulante e ons fosfato ativos nos tecidos mineralizveis, onde a interao destas
estruturas com o fludo sanguneo, nos implantes, poder promover a osteoinduo
devido aos ons circulantes. Na maioria dos trabalhos j realizados at hoje, a HAp
(hidroxiapatita) sintetizada para produo de compsitos implantveis so
sintetizadas a partir de altas concentraes de substncias ricas em ons de fosfatos e
de clcio
[202, 203]
. Porm, alguns trabalhos recentes, mostram a possibilidade de
promover a mineralizao com baixas concentraes destes ons em substratos ou
solues, como foi mostrado por Haddon e colaboradores
[204]
. Neste trabalho, os
autores mostram uma deposio mineral de hidroxiapatita sobre substratos de silcio
cobertos com NTC de 455 nm em 7 dias e uma deposio de 1,8 m em 14 dias.
Nesta etapa do trabalho, nos baseamos nos procedimentos realizados por
Haddon no artigo citado acima, utilizando no lugar dos NTC-PABS os NTC-COOH e
uma soluo com concentrao molar abaixo da fisiolgica para verificar a
incorporao de fosfato de clcio nos NTC. Como necessria uma matriz de
ancoramento deste material para implantes, fizemos o experimento tambm no
colgeno e no compsito, onde estes compsitos foram sintetizados com NTC-
COOH. Estes experimentos foram realizados para verificar a viabilidade de aplicao
em recuperao de falhas sseas em seres vivos. O comportamento destes materiais
como matriz de formao mineral ser relatado na prxima seo.
98
Tese Doutorado Edelma Eleto da Silva
7.1. Teste de biomineralizao de Hidroxiapatita in vitro
O desenvolvimento de biomateriais que imitam os ossos tem tido enfoque
estratgico no crescimento de cristais de HAp em condies fisiolgicas. No entanto,
alguns fatores afetam a mineralizao como: os meios de controle desse processo e a
razo molar da reao, que tem importncia primria. Ns investigamos a sntese de
HAp usando soluo fisiolgica de ons Ca
+2
e PO
4
3-
.
As deposies foram efetuadas misturando simultaneamente solues 5 mM de
Na
2
HPO
4
e 10 mM de CaCl
2
e imergindo os materiais nesta soluo. As seguintes
reaes podem ocorrer sobre os materiais:
2
2 2 4 4
2
H O
CaCl Na HPO NaCl CaHPO + +
2 2 4 2 10 4 6 2
10 6 12 ( ) ( ) 8 CaCl Na HPO H O NaCl Ca PO OH HCl + + + +
2 2 4 2 5 4 3
10 6 12 2 ( ) 8 CaCl Na HPO H O NaCl Ca PO OH HCl + + + +
Antes de realizarmos os experimentos de mineralizao sobre os materiais
nanoestruturados, com concentrao fisiolgica, foram feitas duas deposies
comparativas sobre substrato de silcio. Na primeira, o substrato ficaria imerso em
soluo com concentrao fisiolgica, usando as solues descritas acima; e no
segundo ficaria imerso em soluo com alta concentrao molar, usando solues 5
M de Na
2
HPO
4
e 10 M de CaCl
2
, sempre mantendo a proporo entre elas na mistura.
Neste experimento, podemos observar o processo de mineralizao sobre
substratos de silcio. No substrato exposto a soluo com baixa concentrao no
houve mineralizao. Na figura 7-1a podemos ver trs paticulas, um nmero
desprezvel em relao ao outro substrato exposto soluo com altas concentraes
onde houve uma espessa mineralizao, como ilustrado na figura 7-1b. Esta
diferenciao da formao particulada de cristais de HAp entre os dois substratos
demonstra que em condies fisiolgicas no h formao nem nucleao de HAp
sobre um substrato plano de Si.
99
Tese Doutorado Edelma Eleto da Silva
Figura 7-1: Imagens comparativas de HAp sobre substrato de Si, mostrando a
mineralizao a) soluo fisiolgica b) soluo molar.
Desta forma, este resultado indica que a mineralizao sobre substratos
imersos em soluo com concentrao fisiolgica deve ocorrer assistida por
superfcie com imperfeies ou rugosidades em escala nanoscpicas ou de grupos
qumicos para induzir a nucleao da fase mineral. Para comprovar este argumento,
realizamos um estudo sistemtico do processo de mineralizao sobre os materiais
nanoestruturados (colgeno, compsito e NTC), seguindo o seguinte procedimento:
cada amostra foi colocada dentro da soluo fisiolgica de Ca
2+
e PO
4
3-
. Decorrido
uma semana parte da amostra era retirada e analisada, at o tempo mximo de 6
semanas.
A partir da primeira semana j era possvel identificar precipitados sobre a
superfcie dos materiais. Estes precipitados podem ser observados na figura 7-2 (a) e
(b) que correspondem a NTC depositado em um substrato de Si e biocompsito,
respectivamente com exposio soluo fisiolgica por 1 semana. Nestas imagens
podemos perceber uma pequena poro de material com forma granular. Na figura 7-
2 (c) e (d), corresponde a estes mesmos materiais expostos a soluo por um perodo
de 4 semanas. Nestas imagens podem ser observados o recobrimento do material
exposto e no caso do compsito no mais possvel perceber a presena da matriz, e
nos NTC grande parte de sua superfcie foi recoberta.
100
Tese Doutorado Edelma Eleto da Silva
Figura 7-2: Materiais expostos a soluo fisiolgica de Ca
2+
e PO
4
3-
A) NTC, B)
Compsito expostos por 1 semana e C) Nanotubo de carbono e D) compsito expostos por 4
semanas.
Podemos ento verificar que para ambas as amostras houve um aumento
massivo de partculas depositadas sobre a superfcie do substrato em soluo
fisiolgica, o que demonstra que a presena de uma superfcie nanoestruturadas
induz a formao de cristais de HAp.
Atravs de tcnicas como difrao de raios-X podemos verificar que as
partculas formadas nos dois casos so basicamente compostas de
4
( ) CaH PO ,
5 4 3
( ) ( ) Ca PO OH e
10 4 6 2
( ) ( ) Ca PO OH . A figura 7-3, mostra um difratograma tpico de
hidroxiapatita, obtido de amostras produzidas em nosso laboratrio.
101
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2 tetha
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Hidroxiapatita
Figura 7-3: Difratograma de Raios-X de HAp sobre substrato amorfo com soluo
molar.
O estudo sistemtico do processo de mineralizao foi iniciado com amostras
de NTC-COOH. Durante o processo de mineralizao foi possvel observar o quadro
evolutivo da induo da precipitao das partculas de HAp sobre a matriz de NTC.
A figura 7-4 mostra a evoluo temporal desta mineralizao. A partir de 4 semanas
existe um recobrimento sobre as fibras de carbono. Estas se tornam mais estruturadas
em 6 semanas. Nas imagens de duas semanas as partculas podem ser vistas somente
com grande aumento, como na figura 7-2a. Em 3 semanas possvel visualizar vrios
pontos de precipitao das partculas de HAp. vlido lembrar que essa induo foi
feita em condies fisiolgicas.
102
Tese Doutorado Edelma Eleto da Silva
2 semanas 3 semanas
4 semanas 6 semanas
Figura 7-4: Mineralizao sobre NTC-COOH
Estas deposies formam uma estrutura cristalina de HAp como pode ser
confirmada nas anlises de raios-X ilustrada pela figura 7-5 que indicam fases de
CaH(PO
4
) e sendo esta ltima estrutura denominada Hidroxiapatita.
103
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Hidroxiapatita sobre NTC-COOH
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HA
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2 tetha
HA
Figura 7-5: Difratograma de raio-X sobre NTC
As bandas largas no difratograma de raio-X indicam que a nucleao acontece
de forma heterognea formando partculas que posteriormente se agregam gerando
estruturas policristalinas. Esta deposio ocorre provavelmente por um processo de
interao qumica entre as carboxilas terminais do NTC e a HAp, que ser discutida
mais adiante.
Aps o processo de mineralizao de fundamental importncia a limpeza da
amostra para retirada de resduos e a purificao do material para evitar
contaminaes e falsos resultados. A extrao de impurezas residuais como
NaCl, e
HCl deve ser feita por lavagem. Como o NaCl e o HCl no esto adsorvidos na
superfcie dos NTC, eles se diluem na gua e so eliminados da matriz. Para
confirmar a inexistncia de cidos livres, sempre deve ser conferido o pH da soluo
de lavagem, onde ao final do processo necessrio que ela esteja neutra.
No trabalho realizado por Haddon, ele relata um experimento de mineralizao
com NTC funcionalizados em solues e substratos. Ele mostra que as cargas
negativas atraem o ons de Ca
2+
e so um precursor de crescimento auto organizado,
formando largas camadas de HAp sobre os filmes de NTC funcionalizados
[204]
. Os
nossos resultados podem ser comparados ao dele, porque ambos promovem a
formao de HAp auto-organizada sobre matrizes nanoestruturadas.
104
Tese Doutorado Edelma Eleto da Silva
Durante os experimentos foi observado que a agitao da soluo interfere na
formao de HAp. Quando a soluo contendo NTC est sob agitao a HAp cresce
de forma particulada, e quando a soluo permanece esttica formada uma espcie
de filme sobre o NTC com largas placas. Como mostrado na figura 7-6 as setas
mostram na figura 7-6a as placas de HAp e na figura 7-6b as partculas de HAp.
Figura 7-6: Comparao de formao de HAp sobre substrato de Si linha a) sem
agitao e linha b) sob agitao com as respectivas ampliaes.
Nas duas situaes, acima descritas, so formados cristais de CaH(PO
4
),
Ca
5
(PO
4
)
3
(OH) e Ca
10
(PO
4
)
6
(OH)
2
com estrutura mais particulada do que as
estruturas formadas pela mineralizao feita sob agitao.
Podemos concluir, desta primeira parte dos estudos acerca da mineralizao,
105
Tese Doutorado Edelma Eleto da Silva
que os NTC so timas matrizes indutoras de cristalizao de HAp, mesmo em
solues fisiolgicas. Estes resultados viabilizam a aplicabilidade dos NTC em
compsitos para proliferao ssea, e consequentemente aplicao em seres vivos.
Como j foi mostrado, o NTC promove, ao compsito, resistncia mecnica,
trmica, entre outras. Alm disto, o colgeno pode ser usado como arcabouo de
partculas por ele ser um agente de unio responsvel pela preveno da migrao
dessas partculas, at sua incorporao.
Visando a aplicabilidade do compsito desenvolvido durante nossos estudos
foi repetido o processo de mineralizao utilizando como matriz os compsitos e
colgeno. Felizmente, neste caso, tambm foi possvel observar a precipitao de
partculas de HAp sobre as matrizes como foi observado na figura 7-2 favorecendo
nosso estudos.
O estudo sistemtico do processo de mineralizao do biocompsito foi
iniciado de forma similar ao dos NTC j relatados. A nica diferena entre os dois
mtodos foi utilizao de uma amostra para cada tempo de deposio. Este
procedimento foi realizado para que no houvesse interferncia nas medidas devido
fragmentao da amostra.
Durante a primeira semana foi possvel identificar nas micrografias partculas
precipitadas de HAp sobre o compsito, porm elas no so encontradas nas matrizes
de colgeno, como pode ser observado na figura 7-7a e b. As amostras de colgeno
necessitam um tempo mais prolongado para que a HAp comece a precipitar sobre ela.
Em quatro semanas, o compsito e o colgeno se apresentam totalmente
mineralizados, igualando a cristalizao das duas matrizes. Como pode ser observado
na figura 7-7c e d possvel visualizar ainda a formao de alguns cristais sobre as
matrizes de compsito.
106
Tese Doutorado Edelma Eleto da Silva
Figura 7-7: Comparao morfolgica de HAp em a) colgeno imerso por 1semana e c)
colgeno imerso h 4 semanas e b) compsito imerso a 1semana d) compsito imerso por 1
semana
Na primeira semana de deposio foi feita uma anlise elementar do
compsito e do colgeno, onde em ambas as matrizes foi possvel identificar a
presena de clcio e fsforo. As anlises de raios-X, realizadas nas amostras com
perodo de deposio de 4 semanas, confirmam a formao de estruturas de HAp
tanto na matriz de colgeno quanto na de compsito. Sendo que todas as duas so
compostas por HAp, no colgeno a fase predominante a Ca
10
(PO
4
)
6
(OH)
2
e no
compsito foi possvel identificar as fases Ca
10
(PO
4
)
6
(OH)
2
e Ca
5
(PO
4
)
3
(OH) da
HAp e o CaH(PO
4
) como pode ser observado na difrao de raios-X mostrado na
figura 7-8 (a) e (b).
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Hidroxiapatita sobre colgeno
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Hidroxiapatita sobre compsito
4
( ) C aH PO
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2 tetha
HA
Figura 7-8: Difrao de raio-X das matrizes de a)colgeno e b) compsito.
Foram feitas analises atravs da espectroscopia de infravermelho (FTIR) nas
amostras de colgeno e compsito mineralizados. Os espectros FTIR referentes a
estas amostras esto mostrados na figura 7-9 e mostram que os picos referentes aos
modos vibracionais das protenas presentes na estrutura do colgeno diminuram ou
se extinguiram e novos modos de vibrao foram visualizados. So encontrados nos
espectros de FTIR picos referentes s freqncias de vibrao da hidroxiapatita que
108
Tese Doutorado Edelma Eleto da Silva
so: estiramento CH (~2962 e ~2902 cm
_1
), amida ii e iii freqncia de vibrao
(~1450,1402,1350,1250 cm
-1
), vibrao de grupo funcional PO
4
3-
, (~1093-1080 cm
-
1
), estiramento ons fosfatos PO
4
3-
~1006 1050 cm
-1
e ~659 cm
-1
, P-O-C em torno
de 1050 cm
-1
. A vibrao referente a OH
-
da ligao P-OH esto em ~870cm
-1
, as do
HPO
4
~1150 cm
-1
e a vibrao assimtrica do PO
4
~1107 cm
-1
.
4000 3000 2000 1000
Compsito
T
r
a
n
s
m
i
t

n
c
i
a

(
u
.
a
.
)
Nmero de onda (cm
-1
)
Colgeno
Figura 7-9: Espectro na regio do infravermelho para estrutura do colgeno e do
compsito.
A caracterstica fundamental da HAp em espectros de infravermelho so as
bandas do PO
4
3-
constitudas pela deformao 2
v
O-P-O em 475 cm
-1
, deformao
assimtrica 4
v
em 576 cm
-1
no visveis neste espectro e modos de deformao
simtrica 4
v
em ~605 cm
-1
e deformao 1
v
P-O em ~975 cm
-1
e deformao 3
v
P-O
em ~1086 cm
-1
e grupos OH em ~630 cm
-1 [205]
.
Como as principais vibraes do fosfato esto presentes nos espectros das
amostras de colgeno e compsito aps mineralizao fica comprovado a presena de
109
Tese Doutorado Edelma Eleto da Silva
fosfatos nas matrizes, como mostrado no difratogramas de raio-X. Devido s
interaes do colgeno e dos NTC com a HAp no possvel confirmar o
entrelaamento da tripla hlice do colgeno aps a mineralizao, porm a imerso
do colgeno ou do compsito, em soluo com pH neutro, no influencia na
estruturao do colgeno no que diz respeito ao entrelaamento da tripla hlice. Esta
afirmao foi comprovada por testes de solubilidade, similar ao apresentado na seo
anterior. As amostras permanecem ntegras na soluo de mineralizao por um
perodo de 4 meses.
Em sntese, o compsito de colgeno: NTC com HAp (similar aos ossos de
seres vivos) pode ser sintetizado a partir do sistema auto organizado entre as
superfcies de compsito e da soluo promotora de HAp em soluo fisiolgica. O
resultados obtidos pela imerso dos materiais na soluo composta de ons clcio e
fosfato promovem a induo de HAp e mostram que h uma nucleao heterognea
sobre as nano estruturas tanto dos NTC quanto dos compsitos. Estes, possivelmente,
podero ser utilizados para implantes em estruturas sseas para promover a
osteointegrao.
A interao das estruturas de colgeno e HAp pode ser mostrada pela mudana
de freqncia de alguns modos de vibrao molecular por espectroscopia IR. Essa
interao entre o colgeno e a HAp foi mostrada no trabalho de Masanori Kikuchi e
colaboradores
[206]
. Neste trabalho, os autores colocam a interao interfacial como
responsvel pela ligao do colgeno com a HAp. suposto que a orientao dos
cristais de HAp automaticamente determinado pelas caractersticas estruturais da
prpria HAp. Esta orientao coordenada pelos ons de Ca
2+
da HAp em
conformao a molcula de colgeno. De acordo com a estrutura do HAp, o Ca
2+
aparece como o ponto de orientao de crescimento de sua estrutura cristalina. As
coordenadas de Ca so perpendiculares a um eixo de crescimento de HAp, e
conseqentemente, a interao do Ca com grupos carboxlicos dissociados da
superfcie do colgeno permitida. Apesar dos grupos carboxlicos poderem girar
livremente por serem terminaes moleculares [
206
], quando o segundo Ca
2+
interage
com ele se orienta perpendicularmente a molcula do colgeno. Este mecanismo pode
ser visualizado na figura 7-10.
110
Tese Doutorado Edelma Eleto da Silva
Figura 7-10: Desenho esquemtico da relao entre a interface do compsito de HAp e
Colgeno
206.
O mesmo procedimento deve ocorrer tambm com os feixes de NTC
carboxilados, isto , o Ca
2+
interage com o grupo carboxila que est ligado ao NTC.
Outra interao possvel a nucleao heterognea, onde a nucleao primria
iniciada por partculas suspensas de substncias, que no o soluto, uma vez que partculas
slidas esto invariavelmente presentes. O mecanismo da nucleao primria se d por
adsoro do soluto nas superfcies das partculas slidas. Neste caso a teoria de nucleao
heterognea clssica no consegue descrever a formao cristalina, pois, ela ocorre em escala
atmica. Isto , o primeiro agente responsvel pela interao molecular um tomo. Sendo
assim as partculas estveis crescem em forma de cristais como esquematizado na figura 7-11
sobre os NTC.
Figura 7-11: Desenho esquemtico da relao entre a interface do NTC e da HAp.
111
Tese Doutorado Edelma Eleto da Silva
Portanto, no que se diz respeito ao crescimento de HAp sobre colgeno, ocorre
uma interao entre os ons Ca
2+
e o grupo carboxil (OH) presentes na superfcie do
colgeno e a partir desta interao, os ons fosfatos so atrados por estes primeiros e
ligam-se quimicamente formando ento cristais de HAp. Quanto aos NTC, o mesmo
processo pode ocorrer, pois sabido que a curvatura da estrutura do NTC tambm
influncia na interao de molculas ou grupos funcionais que entram em contato
com os mesmos.
Durante a mineralizao, todas as amostras testadas foram excelentes matrizes
de deposio mineral, entretanto, podemos destacar para aplicaes em testes
biolgicos, o compsito por suas caractersticas estruturais e mecnicas. Dentro do
organismo, a porosidade da matriz vai deixar passar de uma extremidade outra o
fluido corporal necessrio para os processos de regenerao de tecidos,
osteointegrao, sseo induo, entre outros. Como os testes in vitro foram
realizados em soluo fisiolgica, a baixa concentrao de Ca e P, possivelmente,
dentro do organismo ocorrero comportamento similar ao que diz respeito
mineralizao. Basta saber, se o material ser rejeitado, possivelmente isto no vai
ocorrer, pois todos as matrias primas para sntese do compsito so
comprovadamente biocompatveis, o que o diferencia dos demais compsitos
utilizados para implantes nos dias de hoje.
7.2. Teste de Biomineralizao de Hidroxiapatita in vivo
O compsito de colgeno e nanotubos de carbono um avano tecnolgico por
possuir uma superfcie quimicamente ativa que interage com o organismo, e que
busca nele fatores de crescimento que aceleram a osteognese e a produo de uma
interface entre implante e osso, isto , uma osteointegrao mais rpida.
A superfcie hidroflica do compsito, junto aos grupos funcionais adsorvidos
a elas, aumenta processo de osteointegrao, sendo estas, as caractersticas de
materiais osteocondutores. Os grupos funcionais ativos como hidroxilas, carboxilas e
fosfonatos, quando entram em contato com o sangue resultam em uma interao forte
que inicia a adeso de plaquetas para formao de cogulos e a interao com ons de
clcio, liberados por enzimas.
O nosso teste in vivo foi realizado na Clnica Veterinria Professor Israel,
localizada na Rua Piau, n 1567, Bairro Funcionrios na cidade de Belo Horizonte -
112
Tese Doutorado Edelma Eleto da Silva
MG, pelo veterinrio Luiz Fernando Ferreira em um experimento piloto. Foi feito um
implante, em um cachorro de pequeno porte, que tinha sofrido um acidente que
provocou uma fratura com perda ssea, irrecupervel sem o uso de um implante.
Durante a cirurgia foi utilizado um pino de titnio para que o espao entre as
extremidades sseas fosse mantido, uma vez que o compsito no auto suportvel,
e envolto a este pino foi colocado o compsito feito com colgeno e NTC
funcionalizados com alendronato de sdio (CNT-P). Este compsito, durante o
procedimento entrou em contato com o lquido medular. Nos implantes, para
regenerao ssea, sempre devem ser feitas intervenes que permitam a exposio
da medula ssea. Esta medula tem uma vascularizao importante, rica em
osteoblastos e clulas mesenquimais que provoca osteognese, osteoinduo e
osteoconduo perfeita. Durante a cirurgia, quando o implante colocado sua
propriedade hidroflica logo pode ser observada, uma vez que o implante atrai o
sangue diretamente para os poros do compsito. Devido a sua porosidade, o
compsito apresenta maior rea superficial comparado a outros materiais
implantveis como titnio e hidroxiapatita cristalina.
A figura 7-12 mostra alguns passos da cirurgia por fotos, que ilustram o
compsito antes de ser implantado (figura 7-12a), a distncia entre as extremidades
sseas (figura 7-12b) e o compsito j adicionado em torno do pino de titnio (figura
7-12).
Figura 7-12: Passos da cirurgia em fmur de co.
113
Tese Doutorado Edelma Eleto da Silva
Este tratamento foi acompanhado radiograficamente durante 1 ms e confirma
a eficincia da mineralizao. O compsito radiotransparente consequentemente
no aparece nas primeiras radiografias, como pode ser visualizado na figura 7-13a.
Na figura 7-13a possvel verificar tambm a disposio da fratura ssea e a
distncia entre as extremidades dos ossos sustentada por pino de titnio. Depois de 1
ms aps a cirurgia a fratura decresceu significativamente, a rea antes sem
preenchimento, agora est rdio-opaca, como pode ser observado na figura 7-13b.
Podemos tambm observar nesta figura, que o pino de Ti est rompido, pois no meio
do tratamento o cachorro sofreu nova leso, e foi imobilizado at a finalizao deste
perodo. Este fato prejudicou a anlise do restabelecimento sseo, porm possvel
observar mesmo assim que ocorreu mineralizao no local da leso.
114
Tese Doutorado Edelma Eleto da Silva
Figura 7-13: Radiografias para acompanhamento de reestruturao ssea. a e b
primeiro dia, c e d trinta dias aps a cirurgia.
A utilizao do compsito com NTC-P como matriz de recomposio ssea se
mostrou eficiente no teste piloto. O restabelecimento do paciente foi em mdia duas
vezes mais rpido do que com implantes de ossos modos e promoveu a
osteointegrao. Para este caso, somente o implante metlico no seria capaz de
promover a osteointegrao devido distncia entre as extremidades dos ossos. Nos
casos em que uma leso ocorre com perda de segmento sseo ou ocorre uma leso
sria que necessita remoo ssea, no h possibilidade de reparao por no haver
formao do calo sseo, sem o preenchimento adequado.
No contato inicial com o sangue, que forma uma densa camada de protena, as
plaquetas aderem a esta superfcie e so ativadas. A ligao contnua e acumulativa
destas plaquetas essencial para a integrao do implante junto com a formao de
matriz no mineralizada e mineralizada, assegurando a estabilidade ssea do
implante e sua cicatrizao rpida.
Atravs deste teste piloto podemos concluir que o compsito proporciona uma
induo de biomineralizao da matriz dentro do organismo. Podemos observar que a
hidrofilicidade do material ajuda na conexo entre as extremidades da fratura,
fazendo com que o sangue medular tenha uma passagem direta de uma extremidade a
outra, possibilitando assim o contato do compsito com o Ca
2+
presente no sangue.
Este resultado no permite tirar nenhuma concluso sobre o papel do grupo fosfonato
no processo de osteognese porm, importante enfocar que o compsito no
provocou reaes inflamatrias prejudiciais e pode ser considerado biocompatvel e
115
Tese Doutorado Edelma Eleto da Silva
osteoindutor.
Um segundo teste de osteognese in vivo foi feito no Instituto de Cincias
Biolgicas da UFMG com colaborao da professora Tarclia A. da Silva. Nestes
experimentos foram feitos implantes em calvria de ratos para estudar o efeito do
compsito e sua mineralizao dentro do organismo e verificar a osteointegrao e
possveis reaes inflamatrias devido ao contato do compsito com os tecidos do
organismo vivo.
A observao de tecidos no microscpio tico feita por laminas de tecidos.
Para tal, necessrio que o tecido que ser submetido a inspeo por microscopia
tica deve ser submetido a cortes finssimos, passando por diversas etapas como
desmineralizao, processamento do material com embutimento em parafina e
gerao de lminas com preparados histolgicos permanentes. Estes cortes
histolgicos so submetidos a um tratamento por corantes que destacam
determinadas partes das clulas. Essas lminas ento, podem ser finalmente
observadas ao microscpio tico. A anlise histolgica das amostras, onde foi feito o
implante em falhas sseas evidenciou no primeiro perodo de sacrifcio, tecido sseo
com grande quantidade de rea de inflamao. Como podem ser vistas na figura 7-14.
116
Tese Doutorado Edelma Eleto da Silva
Figura 7-14: Fotomicrografias das regies implantadas com a) controle b) colgeno c)
compsito COOH - As setas menores indicam a rea de ossificao, as setas maiores indicam os
limites do defeito sseo, As setas brancas indicam o colgeno:nanotubo carboxilado, a rea
delimitada indica o tecido conjuntivo com intenso infiltrado inflamatrio.
O resultado da histologia do implante de nanotubos de carbono em falhas
sseas na calvria de ratos, em inferncia aos dados preliminares, apresenta uma
grande rea inflamatria prejudicando assim a visualizao da osseoinduo no
117
Tese Doutorado Edelma Eleto da Silva
perodo analisado (uma semana aps o implante). O ideal seria avaliar o mesmo
procedimento em perodo de tempo maior quando a ossificao estaria mais avanada
e os processos inflamatrios estariam reduzidos.
Podemos inferir observando as micrografias, que a rea de inflamao e
tambm a rea de formao ssea aumentam com a presena de nanotubos de
carbono. No controle existe uma rea considervel de ossificao, porm, a formao
ssea parece mais desorganizada e menor que nos outros grupos.
118
Tese Doutorado Edelma Eleto da Silva
8. Concluso
Neste trabalho, estudamos a incorporao de NTC em matrizes de colgeno
para a obteno de um biocompsito com o objetivo de criar e caracterizar um novo
biomaterial para reparao ssea. Ainda no se sabe ao certo os efeitos que os
compsitos de colgeno e nanotubos causam na regenerao ssea. Pode ser provvel
que os compsitos acelerem ou diminuam a formao do novo osso alveolar ou que
at mesmo no cause efeito algum nas etapas de reparo do tecido, no entanto h
indcios de que ele estimula a produo ssea.
Neste trabalho nos focamos principalmente no estudo das propriedades fsico-
qumicas do compsito e de sua relao com a atividade extracorprea.
O primeiro passo para a obteno deste compsito foi a extrao do colgeno
e a sntese de NTC em larga escala.
Para a sntese dos NTC foram estudados diversos catalisadores suportados em
matrizes cermicas. Entre eles, o que mais se destacou pela produo de grandes
quantidades de NTC por deposio qumica da fase vapor foi o catalisador ferro
suportado em MgO. O processo de produo de NTC via CVD de grande eficincia
para produo de NTPS ou NTPM permitindo gerar at 5,0 g de CNT, os quais aps
processos de purificao resultam em no mnimo 2,5 g de nanotubos de carbono com
pureza de 96%. Os NTC produzidos por CVD apresentaram uma grande inrcia
qumica impossibilitando a sua funcionalizao. Na produo deste biocompsito
utilizamos NTPS sintetizados via arco eltrico por apresentarem grande facilidade de
funcionalizao qumica. Os NTC gerados neste processo apresentam-se em feixes,
com dimetro de aproximadamente 1,4 nm e com baixo contedo de carbono amorfo
como impureza majoritria que aps processos de purificao atinge ndice de pureza
de at 99%. Estes NTC foram submetidos a vrios processos de funcionalizao
qumica visando sua hidrosolubilidade para aplicaes biolgicas.
O processo de extrao de colgeno de tendes da cauda de ratos resultou em
um gel de colgeno e gua constitudo de arranjo em tripla hlice.
O compsito aqui desenvolvido foi obtido pela mistura simples entre colgeno
e NTC solubilizado que aps processo de gelificao e secagem por liofilizao se
torna um biomaterial nanoestruturado. Verificamos que, quanto maior a quantidade
de NTC acrescentada ao colgeno, maior a estruturao do material. Foi possvel
119
Tese Doutorado Edelma Eleto da Silva
notar grande alterao do tamanho dos poros, sendo que estes diminuem com o
aumento da concentrao de NTC. Podemos concluir que os NTC agem como reforo
na matriz de colgeno elevando sua temperatura de desnaturao; proporcionando,
ainda, maior resistncia mecnica, tornando o compsito pelo menos duas vezes mais
resistente do que o colgeno. Observamos, tambm, que uma maior concentrao de
NTC no compsito aumenta sua estabilidade em meio aquoso.
Experimentos de mineralizao mostraram que a imerso dos NTC, colgeno e
biocompsitos em soluo composta de ons clcio e fosfato em concentrao
fisiolgica promovem uma induo seletiva de formao de HAp sobre estes novos
arranjos fibrilares. Sendo que, a partir de uma semana, j possvel observar
pequenas formaes cristalinas sobre estes materiais e, em quatro semanas, eles se
apresentam com as fibras totalmente cobertas com HAp.
Testes in vivo mostraram que o compsito com NTC-P induz a formao ssea
dentro do organismo, no provocando reaes inflamatrias prejudiciais, porm no
possvel concluir se ocorre osteointegrao no implante. O potencial de osteoinduo
em implantes de colgeno e compsito na calvria de ratos segue aparentemente a
seguinte ordem de formao ssea: Controle<colgeno<compsito. A anlise
histolgica de seco da calvria apresentou uma extensa rea de inflamao para
todos os implantes. Este resultado indicou apenas que a biomineralizao foi maior
implantes com NTC.
O biocompsito colgeno: NTC foi capaz de promover a osteoinduo e
mineralizao de estruturas extra e intracorpreas.
120
Tese Doutorado Edelma Eleto da Silva
A. Anexo
1. Caracterizaes utilizadas
Diversas tcnicas foram utilizadas para a caracterizao das amostras obtidas,
conforme descrito a seguir:
1.1. Microscopia de fora atmica.
Utilizou-se microscpio Nanoscope IV (Veeco) do Laboratrio de Nanoscopia
do Departamento de Fsica da UFMG para a realizao de imagens microscopia de
fora atmica no modo intermitente (tapping mode). Esta tcnica foi utilizada para a
caracterizao rpida e direta das amostras de NTC depositados sobre substratos,
incluindo a anlise estatstica do seu dimetro e comprimento.
Preparao das amostras:
Para preparar as amostras deve ser feita uma soluo aquosa de nanotubos
funcionalizados com baixa concentrao centrifugada 7000 RPM durante 30 min. (a
soluo deve ficar com aspecto acinzentado).
Os substratos devem ser tratados para ficarem hidroflicos. Para isto
utilizada uma soluo de aminopropildisilane 0,1 M, em substratos previamente
limpos com banho de acetona e lcool isoproplico, cada um com durao de 5-10
min em ultra-som. Os substratos devem ficar imersos na soluo amina por 5 min e
secos com um sopro de gs inerte. Os substratos de silcio ou mica que foram
recobertos com amina e os que no foram utilizados no momento devem ser lavados
com lcool isoproplico, quando forem utilizados. Para isto, os substratos devem
ficar mergulhados por aproximadamente 5 min e depois disso devem ser secos por
um sopro de gs inerte. A amostra deve ser preparada imergindo o substrato na
soluo de NTC por 20 minutos e posteriormente mergulhados em gua deionizada
para lavar. Logo aps, os substratos com nanotubos devem ser secos em estufa
120
o
C por 30 min. Outra forma de se preparar as amostras colocar gotas da soluo
de NTC sobre o substrato e sec-los em estufa a 120
o
C por 30 min.
1.2. Microscopia eletrnica de varredura.
A Microscopia Eletrnica de Varredura (MEV) foi utilizada rotineiramente
121
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para a obteno de imagens das amostras produzidas, principalmente das amostras de
nanotubos de carbono sintetizados sobre suporte de xido. Em geral, para facilitar a
visualizao, as amostras eram recobertas com uma fina camada de ouro (~20 nm)
usada para aumentar o contraste. Utilizou-se o modo de eltrons secundrios, com a
energia do feixe incidente variando de 15 a 30 kV. O MEV foi feito em um
equipamento JEOL 840 A.
Preparao das amostras:
Em suporte apropriado devem ser coladas fitas dupla-face de carbono ou outro
material condutor, e colocado sobre elas um pouco de NTC. Em algumas amostras
necessrio colocar sobre elas uma camada de ouro para melhorar o contraste. Esta
camada deve ser fina o suficiente para no promover interferncia na topografia da
amostra. Geralmente colocada uma camada de alguns angstroms (
A
o
).
1.3. Espectroscopia Raman
A espectroscopia Raman foi utilizada para a rpida identificao da qualidade
das amostras de NTC. Um espectro tpico de uma amostra de NTC possui em geral
duas bandas bem caractersticas: a banda G, centrada em cerca de 1580-1590 cm
-1
,
associada a modos de vibrao tangencial da grafite, e a banda D centrada em cerca
de 1530 cm
-1
, associada a defeitos e/ou desordem. A anlise da forma, posio e
intensidade relativa destas bandas permite a identificao da presena de NTPU e/ou
NTPM bem como o grau de impureza (carbono amorfo) e/ou defeitos nas amostras.
Alm disso, o espectro Raman de NTPU apresenta um modo de vibrao radial na
regio de 100 a 400 cm
-1
. A energia deste modo inversamente proporcional ao
dimetro dos nanotubos, o que permite a estimativa do dimetro dos mesmos. O
espectro Raman foi obtido usando laser de argnio com comprimento de onda 514
nm em um espectrmetro com trs grades de difrao (DILORXY).
Preparao das amostras:
Uma poro dos NTC deve ser colocada sobre uma lmina de vidro, de tal
forma que a superfcie superior tenha sees planas. Para isto, pode-se utilizar uma
outra lmina para prensar. De outra forma, pode ser feita uma soluo saturada de
nanotubos de carbono em lcool isoproplico e pingar gotas sobre a lmina, deixar
secar e fazer as medidas.
122
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1.4. Anlise termogravimtrica
As tcnicas de anlise termo-gravimtrica (TG), e anlise trmica diferencial
(DTA) tambm foram utilizadas para a caracterizao das amostras de NTC. Estas
tcnicas (TG e DTA) permitem quantificar as formas de carbono presentes nas
amostras e impurezas. Na tcnica de termogravimetria (TG) as curvas de
aquecimento variam de 20 a 800C, com uma taxa de aquecimento de 10C/min, em
atmosfera de ar seco.
Preparao das amostras:
Devem ser pesadas de 0,5 a 3 mg de NTC e colocados dentro de cadinhos de
alumina, apropriados para o equipamento.
1.5. Espectroscopia de Absoro de Iinfravermelho (modo transmisso).
A Espectroscopia de Infravermelho foi utilizada para a rpida identificao
das funcionalizaes quimicas em amostras de NTC. Os espectros de infravermelho
foram obtido pelo espectrmetro FTIR da marca Nicolet-Nexus 470 equipado com
um microscpio tico, fonte de SiC, divisor de feixe KBr e detector MCT. As
amostras foram medidas no intervalo de freqncia de (400-4000) cm
-1
, com
resoluo espectral de 4 cm
-1
e 64 varreduras.
Preparao das amostras:
Devem ser pesados 150 mg de KBr e 10
g
de NTC e macerados em um pilo
com temperatura maior que a ambiente ~ 45
o
C para no haver adsoro de gua at
obter uma mistura homognea. Esta mistura dever ser prensada em um pastilhador
com presso de aproximadamente 5 ATM. Deve-se tomar cuidado para que a pastilha
tenha a mesma espessura em toda a seco e que no tenha manchas brancas ou
negras, isto , as pastilhas devem ser totalmente transparentes a luz visvel ou ter um
aspecto um pouco acinzentado.
Tambm pode ser utilizado substrato de silcio intrnseco <111>, transparente
aos raios infravermelhos. Para isto, o substrato deve ser limpo com acetona para
desengordurar e lcool isoproplico para tirar outros resduos, ambos com banho em
ultra-som de 5-10 min, e secos com um sopro de gs inerte.
A utilizao do substrato para preparao da amostra dada da seguinte
forma:
O substrato colocado sobre uma chapa aquecedora com temperatura de
123
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aproximadamente 150
o
C e sobre ele uma gota de soluo de NTC previamente
preparada. Podem ser colocadas no mesmo substrato vrias amostras. Porm, deve-se
tomar cuidado com contaminaes cruzadas, que podem ocorrer caso sejam usados o
mesmo conta-gotas ou a mesma ponteira de micropipeta para diferentes
funcionalizaes sem a lavagem apropriada. A contaminao tambm pode ocorrer
durante a suspenso quando forem utilizados recipientes plsticos, de poliacrilato ou
outros que soltam resduos quando ultrasonificados.
1.6. Microscopia eletrnica de transmisso
A Microscopia Eletrnica de Transmisso (MET) foi feita em amostras
diversas de NTC para verificar sua morfologia. O MET foi realizado no Laboratrio
Nacional de Luz Sncroton (LNLS-Brazil) com 300 kV HRMET (JEM 3010 URP).
Preparao das amostras:
As amostras para anlise foram preparadas pela professora Karla Balzuweit e
pelo professor Andr S. Ferlauto do Departamento de Fsica da UFMG atravs de
ultrasonificao colocando o nanotubo de carbono em etanol e colocando algumas
gotas da soluo em uma grade de carbono de lacey comercial.
1.7. Preparao de amostra para medida de solubilidade.
Deve ser feira uma soluo supersaturada de NTC agitando em ultra-som por
meia hora ou at que a soluo esteja bem dispersa. O recipiente onde a soluo foi
ultrasonificada deve ficar em repouso por 8h, aproximadamente. A soluo deve ser
retirada sem que os nanotubos precipitados ressuspendam. A soluo deve ser
quantizada para estabelecer a razo de massa entre soluto e solvente.
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