Você está na página 1de 10

Bioqumica Fisiolgica I 1 Aula Introduo bioqumica Soluo toda a mistura homognea de duas ou mais substncias. Contm um soluto e um solvente.

nte. Classificao de solues: Quanto condutividade elctrica o Electrolticas ou inicas o No electrolticas ou moleculares Quanto proporo soluto / solvente o Diluda o Concentrada o No saturada o Saturada o Supersaturada

Reagentes podem ser: Tcnicos Para fins industriais frequentes, com grau de pureza no muito elevado. Puros Para preparaes laboratoriais correntes, que no envolvem tcnicas muito especficas de anlise. Para-anlise Para anlises mais exigentes. Indicam os teores mximos de impurezas. Cromatograficamente puros Para processos analticos altamente sensveis como a cromatografia. Espectrograficamente puros Para anlise espectroscpica, com o grau de pureza superior aos anteriores.

Comportamento de misturas Suspenso as partculas so facilmente separveis pela gravidade ou pela centrifugao. (ex. suspenso de eritrcitos) Disperses As solues mantm-se dispersas mesmo depois da centrifugao. (ex. hemoglobina em gua) Unidades Unidades para descrio quantitativa de solues Unidades qumicas M Molaridade Nmero de moles de soluto por litro de soluo (mol/L) m molalidade Nmero de moles de soluto por quilograma de solvente (mol/kg) N Normalidade Nmero de equivalentes-grama de soluto por litro de soluo (eq.g/L) (o equivalente-grama de um elemento qumico a massa deste elemento que capaz de reagir ou deslocar com 1g de hidrognio) X Fraco Molar Fraco molar de A (XA) = n de moles de A / total de moles na soluo

Unidades fsicas % peso em peso gramas de soluto por 100g de soluo (%p/p) % peso em volume gramas de soluto por 100ml de soluo (%p/v) % volume em volume ml de soluto por 100ml de soluo (%v/v) Partes por milho mg de soluto por litro de soluo (ppm) Partes por bilio - g de soluto por litro de soluo (ppb)
Factor 10n 1018 1015 1012 109 106 103 102 101 100 101 102 103 106 109 1012 Prefixo Exa Peta Tera Giga Mega Quilo Hecto Deca Smbolo E Equivalente decimal 1 000 000 000 000 000 000 1 000 000 000 000 000 1 000 000 000 000 1 000 000 000 1 000 000 1 000 100 10 1 (unidade) 0,1 0,01 0,001 0,000 001 0,000 000 001 0,000 000 000 001

-deci centi mili micro nano pico

P T G M k h da -d
c m n p

Frmulas bsicas (formulrio):


( ) Concentrao Molar ( ( ) )

quantidade de substncia volume total

( ) ( ) ( )

( )

Grau de ionizao ou dissociao

n (qtd. de subst. Ionizada/dissociada) n0 (qtd de subst. dissolvida)

Frequncia de 1 rad. electrom.

Velocidade da luz

comp. de onda no vcuo

Energia de 1 rad. elect. De 1 foto

constante de planck (6,63 x 10

-34

J.s)

frequncia

Absorvncia (adimensional)

Coeficiente de extino molar Percurso ptico concentrao da soluo

Equivalente-Grama (Eq.) de um elemento qumico a relao entre o tomo-grama (A) e a sua valncia (v), no composto considerado. Equivalente-Grama de um cido a relao entre a molcula-grama (MM) do cido e o nmero de hidrognios cidos ou ionizveis (x). Ex. cido sulfrico (H2SO4) Eq = MM / x = 98 g / 2 = 49 eq.g Massa Molecular (H2SO4) = 2 x 1 + 4 x 16 + 32 = 98 g/mol (2 hidrognios cidos) Equivalente-Grama de um sal a relao entre a molcula-grama (MM) do sal e a valncia total do catio ou anio (x). Exemplos: Cloreto de Sdio (NaCl) Eq = MM / x = 58,5g / 1 = 58,5 eq.g

Diluir uma soluo significa torn-la menos concentrada. Diluio uma operao em que se acrescenta solvente soluo. A quantidade de soluto permanece constante.
Espectrofotometria

Mede a diferena entre a intensidade de radiao luminosa incidente (I0) e emergente (I), depois de esta atravessar a amostra. Tcnica bastante usada em bioqumica, tanto em laboratrios de anlises clnicas, como de investigao para identificar e quantificar compostos especficos em solues diludas.

Mede-se a quantidade de radiao UV(100-400nm) ou visvel (400-700nm) que absorvida pelas molculas da amostra. A radiao incide numa cuvette transparente de largura b.

Leis de Bouguer Lambert Beer: Transmisso Absorvncia Absorvncia Molar Relao entre absorvncia e concentrao

A quantidade de radiao absorvida pode ser medida de diferentes formas: Transmitncia: T = I / I0 % Transmitncia: % T = I / I0 . 100 Absorvncia: A = log I0 / I = log 1/T

Absorvncia Permite relacionar a concentrao de partculas da amostra com a diferena de intensidade de radiao luminosa incidente e emergente. Anlise quantitativa.

( a medida da quantidade de radiao que absorvida por unidade de concentrao) A lei no pode ser aplicada para altas concentraes (perda de linearidade) Estrutura do espectrofotmetro:

Curva de calibrao Interpolao da regio linear. A linearidade de Lambert-Beer no se mantm indefinidamente. O espectrofotmetro permite a determinao da concentrao de substncia em soluo: Substncia investigada possui cor prpria (ex. hemoglobina)

Substncia investigada capaz de constituir composto corado ao adicionar-se um reagente. Substncia capaz de mudar a estrutura qumica de um reagente agregado que passa a ter cor.

Testes para determinao de colorao em amostras salivares: Teste do Biureto o Formao de um complexo entre os ies de cobre (do reagente Biureto) e 4 grupos NH que formam as ligaes peptdicas (reaco em meio alcalino). o Colorao roxa (mximo de absoro 330-550nm) o A intensidade da colorao directamente proporcional [protena]. o Pouco sensvel. o Requer ligaes peptdicas. Os aminocidos livres no afectam. Teste de Lowry o Em condies alcalinas. o O cobre com o reagente de folinciocalteau reagem com os grupos fenlicos dos aminocidos. o Colorao azul dos 650 750 nm o Mais sensvel que o biureto. Teste de Bradford o Em condies cidas. o Entre o azul brilhante de Coomassie e a protena. o Colorao azul-roxa. o Pouco linear. Requer curva de calibrao. o Muito sensvel. Absoro de luz H libertao de energia como calor ou luz, quando os electres passa do estado excitado ao fundamental. A diferena de energia entre os dois estados energticos determina o comprimento de onda a que esse composto vai absorver. A energia directamente proporcional frequncia de radiao. o Logo, a energia necessria para alterar um estado energtico de uma molcula corresponde a uma frequncia (ou comprimento de onda) especfico da radiao.

A anlise espectrofotomtrica mede a fraco de radiao de determinado comprimento de onda que absorvida. Espectrofotmetro (cuidados): Ligar 20 minutos antes. Calibrar convenientemente. Colocar os dedos apenas nas faces baas das cuvettes. Usar sempre o mesmo aparelho e a mesma cuvette. Quando se muda de soluo, lavar em gua corrente, depois em gua destilada e limpar bem.

Fixar o comprimento de onda do espectrofotmetro no valor de comprimento de onda da cor complementar observada. o Luz visvel para solues coradas o Luz U.V. para solues incolores

Identificao qualitativa de protenas Reaco do Biureto Consiste em adicionar a uma amostra igual volume de hidrxido de sdio e, de seguida, algumas gotas de sulfato de cobre. A ocorrncia de formao de flocos azuis de hidrxido de cobre que precipitam, ficando a soluo com um anel violeta, indicadora da presena de protenas. o A designao biureto advm do facto de quando se aquece a seco alguns cristais de ureia, se forma uma substncia slida, o biureto. As protenas ou pptidos com mais de 2 ligaes peptdicas reagem com o sulfato de cobre II em meio alcalino, formando um complexo de cor azul violeta, cuja intensidade est relacionada com o nmero de ligaes peptdicas presentes na amostra. A absorvncia ser proporcional concentrao da protena presente Reaco usada para quantificao de protenas.

Propriedades cido-base e sistemas tampo Autoionizao da gua As molculas de gua sofrem uma autoionizao reversvel, ionizando-se a H+ (proto) e a OH(io hidrxido).

A gua comporta-se como cido e como base.

ELEVADA RELEVNCIA FISIOLGICA Diversas reaces bioqumicas dependem da transferncia de H+ entre molculas e enzimas. pH = - log [H+] = log 1/[H+]

[H+] = [OH-] [H+] > [OH-] [H+] < [OH-]

pH = 7 pH < 7 pH >7

Soluo neutra Soluo cida Soluo bsica/alcalina

Conceito importante Qualquer soluo tem um determinado pH. Por exemplo, suco gstrico (pH = 2), saliva humana (6,4-7,5), sangue humano (7,34 7,45) Muitas macromolculas possuem grupos que podem sofrer protonao ou desprotonao. Em muitos casos, o estado de protonao de uma molcula afecta a sua actividade biolgica. Medidores de pH Menos sensveis Fitas de pH Solues indicadoras Elctrodo de pH Mais sensveis Classificao de substncias: cido Substncia que doa protes (transforma-se na sua base conjugada) Base Substncia aceitadora de protes (transforma-se no seu cido conjugado)

Ionizao de cidos e bases fracas (os cidos fortes no tm relevncia biolgica)

cidos monoprticos cidos diprticos cidos triprticos

Doa um proto Doa dois protes Doa trs protes

Ka1 Ka1; Ka2 Ka1; Ka2; Ka3

Qualquer modificao nas concentraes normais de H+ e OH- pode afectar seriamente a funo de uma clula. Os sistemas tampo so fundamentais para a actividade biolgica. Sem eles no existia vida. O sistema Bicarbonato o principal tampo. Neutraliza os cidos provenientes do metabolismo.
pH diferente entre os vrios fluidos mas os limites normais de cada um so especficos e estreitos.

Compostos dissolvidos que actuam como tampo. Sistemas de tamponamento do corpo.

Previnem mudanas drsticas de pH e auxiliam na manuteno da homeostase.