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GUIA PRTICO - MTODOS DE ASSEPSIA, DESINFECO E ESTERILIZAO (MICROBIOLOGIA)

TERMINOLOGIA BSICA

Esporo bacteriano (endsporos): Muitas evidncias nos mostram que a anatomia das bactrias ajudam-na a ajustar-se a diversos habitats. Os endsporos so corpos dormentes (assim como sementes) produzidos pelas bactrias Bacillus, Clostridium, Sporosarcina. Resumindo: um endsporo formado quando a bactria se encontra em condies onde seu desenvolvimento, metabolismo, replicao fica prejudicado por condies ambientais e nutricionais (temperatura inadequada espcie, deficincia de nutrientes etc..). Os esporos bacterianos so as forma de vidas mais resistentes, so capazes de suportar extremas temperaturas, baixa umidade, congelamento, radiao e agentes qumicos que, normalmente, matariam facilmente outras clulas comuns. A vida til de um esporo tende a imortalidade.

Biocida: um termo geral utilizado para descrever um agente qumico, geralmente de amplo espectro (broad spectrum), que inativa microrganismos. Dependendo da atividade do biocida este pode ganhar um sufixo: -sttico refere aos agentes que inibem o crescimento (ex. bacteriostticos, fungisttico e esporosttico), pode aparecer tambm como cida, no qual refere-se a agentes que matam os microrganismos (ex. esporicida, viruscida, bactericida, fungicida).

Antibitico: so definidos como substncias sintticas ou naturais que inibem (bacteriosttico) ou destroem (bactericidas) bactrias seletas (certo tipo de.). Embora o termo antibitico seja normalmente associado a bactrias ele pode englobar outros microrganismos como os fungos. Antibiticos atuam normalmente em baixa concentrao. Podem ser administrados de forma tpica, intramuscular, intravenosa etc.

Antissptico: so biocidas ou produtos que destroem ou inibem o crescimento de microrganismos no ou em tecidos vivos (ex. assepsia das mos, mucosa, regio de aplicao de injees, campos cirrgicos, regio para coleta de materiais como sangue, puno lombar etc.).

Desinfetantes: antisspticos so similares aos desinfetantes, no entanto os desinfetantes so usados em objetos e superfcies inanimadas (mesas, microscpios, bancadas, piso, paredes etc..). Os desinfetantes podem ser esporostticos, mas NO necessariamente esporicidas.

Esterilizao: a esterilizao refere-se a processos qumicos ou fsicos que removem ou destroem POR COMPLETO toda a forma de vida microbiana, incluindo os esporos.

Preservao: a preveno da multiplicao de microrganismos em produtos formulados, incluindo produtos farmacolgicos como tambm alimentos.

Limpeza: o procedimento de remoo de sujidade e detritos para manter em estado de asseio os artigos, reduzindo a populao microbiana. A limpeza deve preceder os procedimentos de desinfeco ou de esterilizao, pois reduz a carga microbiana atravs remoo da sujidade e da matria orgnica presentes nos materiais. possvel limpar sem esterilizar, mas no possvel garantir a esterilizao sem antes limpar

Descontaminao de Artigos: Descontaminao e desinfeco no so sinnimos. A descontaminao tem por finalidade reduzir o nmero de microrganismos presentes nos artigos sujos, de forma a torn-los seguros para manuse-los, isto , ofeream menor risco ocupacional.

Desinfeco: O termo desinfeco dever ser entendido como um processo de eliminao ou destruio de todos os microrganismos na forma vegetativa, independente de serem patognicos ou no, presentes nos artigos e objetos inanimados. A destruio de algumas bactrias na forma esporulada tambm pode acorrer, mas no se tem o controle e a garantia desse resultado.

PRINCPIOS ATIVOS USADOS COMO DESINFETANTES (MAIS COMUNS E DE FCIL ACESSO/CUSTO)

Formaldedo: Como desinfetante mais utilizado a formalina, soluo em gua a 10% ou em lcool a 8%, sendo bactericida, tuberculicida, fungicida e viruscida aps exposio de 30 minutos e esporicida aps 18 horas. No pode ser utilizado como agente de assepsia, pois corrosivo, txico, irritante de vias areas, pele e olhos.

Iodo

Alm do uso como antissptico pode ser usado na desinfeco de vidros, ampolas, metais resistentes oxidao e bancadas. A formulao pode ser de lcool iodado, contendo 0,5 e 1,0 % de iodo livre em lcool etlico de 77% (v/v), que corresponde a 70% em peso ou iodforos na concentrao de 30 a 50 mg/L de iodo livre. O (PVPI) Iodopovidona pode ser utilizado na assepsia das mos, regies para injeo, campos cirrgicos etc. No se recomenda o uso em mucosas (ex. boca, olhos, nus etc.).

Cloro: O hipoclorito est indicado para desinfeco e descontaminao de superfcies e de artigos plsticos e borracha. Tambm utilizado em superfcies de reas como lavanderia, lactrio, copa, cozinha, balces de laboratrio, banco de sangue, pisos etc. um agente desinfetante de amplo espectro, barato, no txico dentro de suas especificaes (utilizar equipamento de proteo individual como mscara, culos, luvas e aventais). Em sua concentrao a 5% ou 50.000 ppm com aproximadamente 20 minutos de exposio, destri

lcool O lcool amplamente usado como desinfetante, tanto o lcool etlico, 70% (p/v), como o isoproplico, 92% (p/v), por terem atividade germicida, menor custo e pouca toxicidade, sendo que o lcool etlico tem propriedades germicidas superiores ao isoproplico. O seu uso restrito pela falta de atividade esporicida, rpida evaporao e inabilidade em penetrar na matria proteica. recomendvel para desinfeco de nvel mdio, com tempo de exposio de 10 minutos, sendo recomendveis trs aplicaes intercaladas pela secagem natural. A concentrao ideal da faixa de 60% a 90%. O mecanismo de ao do lcool depende de sua concentrao. Diferentemente de outros desinfetantes o lcool mais concentrado ou absoluto no exerce maior poder de desinfeco. Em concentraes de lcool superiores a 50%-70% eles dissolvem membranas lipdicas, desestabilizam a tenso da superfcie celular, comprometendo a integridade da membrana levando as clulas a lise. J as concentraes 60% a 70% lcool entra no nucleoplasma (meio que contorna o material gentico) desnatura protenas atravs de coagulao, outro fato importante que o lcool 70% possui maior tempo de ao (evapora mais devagar). A gua necessria para a coagulao das protenas, e, portanto a concentrao ideal para a atividade microbicida de 70% lcool. O lcool no esporicida a temperatura ambiente. No entanto, eficaz contra formas vegetativas de muitas bactrias e esporos de fungos.

AGENTES RECOMENDADOS PARA ASSEPSIA/DEGERMAO.

Etanol (lcool etlico): Utilizar em concentraes de 60%-70% aps a limpeza qumica com sabonetes comuns e ou escova. Utilizar em at 3 repeties deixando o produto secar por si. O

lcool pode ressecar a pele e mucosas, por isso, a adio de glicerina na frmula pode evitar o ressecamento precoce. (Obs.: Formulaes prontas comercializadas em farmcias geralmente j incluem hidratantes base de glicerina + aromatizantes)

Clorexidina: O composto clorexidina (Hibiclens, Hibitane) um complexo orgnico contendo cloro e anis fenlicos. Seu mecanismo de ao ocorre nas duas membranas celulares pela diminuio da tenso superficial e da estrutura proteica atravs de desnaturao. Em concentraes moderado-altas um bactericida para bactrias tanto gram-positivas quanto gram-negativas, porm ineficaz contra esporos. Sua ao em fungos e vrus varivel. A clorexidina tem vantagens sobre outros antisspticos devido seu carter suave/benigno, baixa toxicidade, ao rpida e baixa absoro tecidual. o antissptico mais utilizado no controle de Staphylococcus MRSA (cepas bacterianas resistentes a antibiticos) em hospitais. Dentre as suas principais aplicaes, destacam-se: degermao das mos eantebrao da equipe; preparo da pele (pr-operatrio e procedimentos invasivos);lavagem simples das mos.

Triclosan: Apresenta ao contra bactrias Gram positivas e a maioria das Gram-negativas, exceto para a Pseudomonas aeruginosa, e apresenta pouca ao contra fungos. O triclosan pode ser absorvido atravs da pele ntegra, mas sem consequncias sistmicas relevantes. A sua ao antimicrobiana se faz num perodo intermedirio e tem uma excelente ao residual. Sua atividade minimamente afetada pela presena de matria orgnica. O triclosan encontrado em formulaes de sabonetes em barra e lquidos, e um dos agentes utilizados na degermao de mdicos cirurgies em muitos hospitais.

OUTRAS TCNICAS TEIS

Flambagem (Incinerao por calor seco): A temperatura da chama de um bico de Bunsen (1100 1,870 C) ou vela (em mdia 1000 C) dependendo do gs usado como combustvel eficaz na reduo de microrganismos e outras substncias ao nvel de cinzas e gs. A incinerao de alas bacteriolgicas, pinas, agulhas utilizando um bico de Bunsen uma prtica muito comum em laboratrios de microbiologia. Esse mtodo considerado rpido e efetivo, no entanto limitado a metais e vidros resistentes ao calor. Uma desvantagem nesse mtodo que o gs resultante da queima possa conter partculas virais (ativas, ou no), bem como gases

txicos resultantes da queima de certos materiais. Isto pode ser contornado utilizando mscaras ou capelas com fluxo de ar controlado.

Dica: Quando trabalhando com inoculao de meios ou distribuio de bactrias, esporos de fungos ou outros organismos que necessitam de controle. O trabalho com o bico de Bunsen associado ao lcool 70% ou lcool absoluto (95% - 100%) de grande ajuda. O procedimento simples: Flambar o material na chama (parte apical, mais azulada do bico, ou topo da vela) at incandescncia e aps isso resfriar na soluo alcolica; ou apenas deixar imerso na soluo at o momento de utilizar. Mantenha o recipiente com lcool no muito longe do bico/vela, e tomar bastante cuidado com a manipulao do fogo prximo ao lcool.

Esterilizao/Desinfeco por luz ultravioleta.

Outro modo no qual a energia serve como um agente antimicrobiano o uso da radiao. Radiao definida como energia emitida da atividade de um tomo e dispersa a uma alta velocidade atravs da massa ou espao. caracterizada por um faixa de comprimento de ondas conhecida como espectro eletromagntico. Embora existam outras formas de radiao, irei considerar aqui, a mais simples de conseguir e manipular: a radiao ultravioleta.

Raios Ultravioleta: A radiao ultravioleta (UV) possui um comprimento de onda de aproximadamente 100 nm (nanmetros) a 400 nm. mais letal de 240 nm a 280 nm (com pico em 260 nm). Na prtica cotidiana a fonte de raios ultravioleta a lmpada germicida, que gera radiao a 254 nm. A radiao ultravioleta no to penetrante quanto a radiao ionizante. Isso porque a radiao ultravioleta passa livremente pelo ar, relativamente pela gua, e muito pouco por slidos, ento os objetos a serem desinfetados necessitam estar diretamente expostos para ao completa. Como a radiao UV passa entre a clula, e inicialmente absorvida pelo DNA. Danos especficos moleculares ocorrem nas bases pirimidnicas (Tiamina e Citosina) que forma ligaes anormais. Sem muitos detalhes, essa ligao formada anormalmente (dmeros de pirimidina) interferem com a normal replicao e transcrio do DNA. Como resultado a clula para de crescer e morre. Alm das mutaes genticas a radiao UV tambm gera substncias txicas fotoqumicas conhecidas como radicais livres. Eficiente: destruio de clulas e esporos de fungos, formas vegetativas de bactrias, protozorios e vrus. Os esporos bacterianos so 10 vezes mais resistentes que as bactrias em sua forma vegetativa, mas podem ser destrudos se o tempo de exposio for maior. Desvantagem e precaues: Alm da baixa penetrao em materiais slidos como vidro, tecidos, massas, meios difusos, objetos densos, os materiais precisam ser espalhados de forma que a maior quantidade de luz possvel incida sobre eles. Outro ponto negativo que a

radiao UV prejudicial nos tecidos humanos, como tambm causa queimaduras, danos na retina, cncer e rugas na pele (envelhecimento celular). Uso: Desinfeco do ar, ambientes, alguns lquidos, reduo de microrganismos do ar, desinfeco de alimentos e gua.

Dicas: As lmpadas germicidas so de valor acessvel, porm possuem uma vida-til pequena. Recomenda-se a instalao da lmpada e no momento de funcionamento isolar o ambiente de pessoas e animais. O tempo de exposio varia com o nvel de contaminao (antes ou depois de uma limpeza ou desinfeco qumica, por exemplo). Caso necessite de trabalhar em conjunto com a luz utilizar ternos HAZMAT ou qualquer vestimenta que inviabilize a penetrao da luz. Utilizao de culos com filtro UV respectivo ao comprimento da onda utilizada na lmpada.

Espero que tenha sido til e que isso ajude a todos nas suas culturas e experimentos. Caso encontrem erros, por favor, avisem-me para que a devida correo seja feita.

REFERNCIAS

Talaro, Kathleen P. Foundations in microbiology / Kathleen Park Talaro, Barry Chess. 8th ed. Benson: Microbiological Applications Lab Manual, Eighth Edition. Antiseptics and Disinfectants: Activity, Action, and Resistance. GERALD MCDONNELL1 e A. DENVER RUSSELL. IMPORTNCIA DO LCOOL NO CONTROLE DE INFECES EM SERVIOS DE SADE. Adlia Aparecida Maral dos Santos, Mariana Pastorello Verotti, Javier Afonso Sanmartin, Eni Rosa Aires Borba Mesiano. Brasil. Ministerio da Saude. Secretaria de Vigilancia em Saude. Departamento de Vigilancia Epidemiologica. Biosseguranca em laboratorios biomedicos e de microbiologia / Ministerio da

Saude, Secretaria de Vigilancia em Saude, Departamento de Vigilancia Epidemiologica. 3. ed. em portugues rev. e atual. Brasilia: Ministerio da Saude, 2006.