Rev Cubana Oncol 2001;17(1):65-71

TEMA DE REVISIN
Instituto Nacional de Oncologa y Radiobiologa

LOS GENES SUPRESORES DE TUMORES Y EL CNCER

Lic. Mara de los A. Ros Hernndez1 y Lic. Mait Hernndez Menndez2

RESUMEN
En el siguiente trabajo de revisin, se exponen los aspectos ms relevantes acerca de los genes supresores y el papel que stos juegan en la aparicin y desarrollo del cncer. Para abordar esta novedosa temtica, se mencionan los diferentes tipos de genes supresores de tumores as como la asociacin de los mismos con las diferentes enfermedades malignas. Se hizo nfasis en el modo de accin de algunos de ellos, por considerar que son de gran importancia dentro de la clula, en el control de los procesos de proliferacin y diferenciacin. Seguidamente se describen de forma breve algunas de las principales herramientas con que se cuenta para la determinacin de las diferentes alteraciones en estos genes supresores. Finalmente se aborda la importancia del conocimiento de los mismos en el diseo de nuevas terapias que acten de forma especfica y dejen atrs los efectos indeseables de las terapias convencionales. Descriptores DeCS: SUPRESION GENETICA; MUTACION; NEOPLASMAS/gentica; NEOPLASMAS/terapia.

Las ms de 30 000 millones de clulas que constituyen nuestro organismo nacen, crecen, se dividen y mueren bajo la estricta vigilancia del material hereditario, o sea, de la molcula de ADN. Por tanto unas clulas regulan la proliferacin de otras, para asegurarse de este modo que los rganos y tejidos crezcan en equilibrio y mantengan la arquitectura corporal. La reproduccin celular est supervisada por determinados sistemas de control extrema1 2

damente rigurosos. Para que una clula se divida en 2 clulas hijas idnticas es necesario la participacin de una gran cantidad de molculas como protenas, enzimas, factores de crecimientos y de genes que se activan y desactivan con la precisin de la maquinaria de un reloj.1-4 En las clulas normales, el reloj integra la mezcla de seales reguladoras del crecimiento recibidas por la clula y decide si sta debe o no pasar a travs de su ciclo de vida. 5,6 El

Licenciada en Biologa. Investigadora Auxiliar. Licenciada en Bioqumica. Aspirante a Investigadora.

65

ms mnimo fallo que tenga lugar en uno de los sistemas de control puede acarrear una tragedia celular. Las clulas de un tumor descienden de una ancestral comn, que en algn momento, generalmente dcadas antes de que el tumor se manifieste, inici un programa de divisin indebido. La transformacin maligna de una clula acontece por acumulacin de mutaciones en unos genes especficos, los cuales son la clave molecular para entender las races del cncer. Estos genes estn agrupados en 2 familias. La primera est integrada por los protooncogenes, los cuales dirigen la produccin de protenas como ciclinas, factores de crecimiento, receptores, etctera que estimulan la proliferacin celular. Cuando stos mutan se transforman en oncogenes, los cuales son capaces de orquestar la multiplicacin anrquica de las clulas, de modo que algunos de ellos hasta fuerzan la maquinaria celular plara que sintetice de forma masiva determinados factores de crecimiento. La segunda familia est integrada por los genes supresores de tumores tambin conocidos como genes supresores, que en el organismo sano controlan la proliferacin celular. Ellos, por tanto son reguladores negativos de crecimiento y cuando no estn presentes en la clula o se encuentran inactivos a causa de mutaciones, las clulas dejan de crecer normalmente y adquieren propiedades proliferativas anormales, caractersticas de las clulas tumorales.

active un simple alelo es dominante sobre su variante sana y la tumorignesis resulta de la ganancia de una funcin, existen tumores que son causados por un mecanismo diferente como la prdida de ambos alelos en un locus (lo cual tiene accin tumorignica). La propensin para formar tales tumores puede ser heredado a travs de la lnea germinal y esto tambin puede ocurrir como resultado de cambios somticos en el individuo. Tales casos identifican genes supresores de tumores: secuencias genmicas cuyos productos son necesarios para el funcionamiento normal de la clula y cuya prdida de funcin causa tumores.7-10 En el conocimiento de los genes supresores se han dado algunos pasos importantes. Los estudios moleculares han identificado hasta la fecha ms de 17 genes supresores de tumores implicados directamente en el cncer humano. Ellos codifican para una serie de protenas localizadas en distintas regiones dentro de la clula, tanto en el citoplasma como en el ncleo. Los 2 genes mejor caracterizados de esta clase codifican para las protenas p53 y RB. 11 GENES SUPRESORES DE TUMORES
GENES PARA PROTENAS EN EL CITOPLASMA

APC

ALGUNOS GENES SUPRESORES Y SU ASOCIACIN CON LOS DIFERENTES TUMORES

A diferencia de aquellos tumores causados como resultados de alteraciones de los oncogenes, donde una mutacin que

Est involucrado en cnceres de colon y estmago. DPC4 Codifica para una molcula en una ruta de sealizacin que inhibe la divisin celular. Involucrado en cncer pancretico. NF-1 Codifica para una protena que inhibe una protena (Ras) estimulatoria. Involucrado en neurofibroma y pheochromocytoma (cnceres de el sistema nervioso perifrico) y leucemia mieloide.

66

NF-2 Involucrado en meningioma y ependimoma (cnceres de cerebro) y schwannoma (afecta la vaina que envuelve los nervios perifricos).
GENES PARA PROTENAS EN EL NCLEO

MTS1 Codifica para la protena p16, un componente del reloj del ciclo celular. Involucrada en un amplio rango de cnceres. RB Codifica para la protena pRB, uno de los principales controles del ciclo celular. Involucrado en el retinoblastoma y cnceres de hueso, vejiga, clulas pequeas de pulmn y cncer de mama. p53 Codifica para la protena p53, la cual puede detener la divisin celular e inducir a las clulas anormales a matarse ellas mismas. Involucrado en una gran cantidad de cnceres. WT1 Involucrado en el tumor de Wilm del rin.
GENES PARA PROTENAS CUYA LOCALIZACIN CELULAR NO EST CLARA AN

BRCA1 Involucrado en cnceres de mama y ovario. BRCA2 Involucrado en cncer de mama. VHL Involucrado en cncer de clulas renales. P53 El gen p53 es considerado por muchos autores como "el guardin del genoma". A partir de este gen se sintetiza una protena, que lleva el mismo nombre y se activa cuando la clula se dispone a dividirse, para vigilar la secuencia normal de acontecimientos genticos que permi-

ten la proliferacin celular. Si el material gentico de la clula resulta daado o si algn sistema de control se desajusta, esta lo detecta e intenta restaurarlo. Si la lesin no es grave, la p53 detiene la divisin celular y activa los genes reparadores del ADN. Si la p53 estima que el dao es irreparable entonces ordena que se pongan en marcha los mecanismos genticos para que la clula entre en apoptosis o muerte celular programada. Si este gen (p53) sufre alguna mutacin, no permite que la clula sea eliminada mediante la muerte programada, tampoco se ocupa de reparar los daos en el ADN y da lugar al inicio del proceso tumoral. Este gen es el ms frecuentemente mutado en los cnceres humanos, ms de un 50 % de los tumores tienen genes p53 anormales, producindose una protena alterada.12-14 Pero la prdida de la funcin de esta protena no solo puede deberse a una mutacin en el gen que la origina, sino que existen otros mecanismos que pueden provocar que la clula carezca de un control tan importante como ste. Un ejemplo bien estudiado es la infeccin por ciertos virus como el papilomavirus humano, el cual presenta una protena temprana denominada E6, la cual se une a la protena p53 y potencia su degradacin mediada por ubiquitina.15-17 RB El producto del gen supresor de tumores RB, ejerce su efecto durante la primera parte de la fase G1 del ciclo celular. En este perodo o en las clulas quiescentes, esta protena es unida al factor de la transcripcin E2F. Este complejo tiene 2 funciones, en primer lugar, muchos de los genes cuyos productos son esenciales para la fase S de dicho ciclo dependen de la

67

actividad del factor E2F. Por tanto el RB, mediante el secuestro de este factor de la transcripcin garantiza que la fase S no pueda ser iniciada. En segundo lugar, el complejo E2F-RB reprime la transcripcin de otros genes. En el punto de restriccin de la fase G1 del ciclo celular o cerca del mismo el RB es fosforilado por el complejo quinasa/ dependiente de ciclinas y esta fosforilacin causa la liberacin del factor E2F por el RB, el cual entonces activa los genes cuyas funciones son requeridas para la fase S, tambin derreprime otros genes cuya funcin estaba controlada por el mismo complejo. El retinoblastoma es una enfermedad humana infantil que involucra un tumor de retina. La misma es causada por la prdida de ambas copias del gen RB en la banda q14 del cromosoma 13.3,18,19 En la forma hereditaria un cromosoma tiene una delecin en esta regin y la segunda copia es perdida por delecin somtica en el individuo. En la forma espordica, ambas copias se pierden por eventos somticos individuales. (fig.). Las deleciones en los alelos normales del gen RB no es la nica causa de la
RB+ AB+

prdida de la funcin proteica. Tambin los papilomavirus humanos se valen de una protena temprana, denominada E7, capaz de unir a la protena RB permitiendo la liberacin del factor de la transcripcin E2F con la activacin de los genes cuyos productos proteicos son requeridos en los procesos de sntesis celulares que acontecen mientras la clula se prepara para su divisin.20-23 NF1 Otra de las formas en que pueden actuar estos genes supresores de tumores es bloqueando el flujo de seales a travs de los circuitos estimulatorios del crecimiento. Uno de estos genes supresores de tumores es el producto proteico del gen NF1. Esta protena citoplasmtica atrapa a la protena Ras antes de que esta pueda emitir sus directivas promotoras del crecimiento. Las clulas carentes de NF1, han perdido un contrabalance importante para Ras. Este gen est relacionado con los neurofibromas, pheochromocytoma , leucemia mieloide y ciertos cnceres del sistema nervioso perifrico.

Individuo normal, que tiene ambos alelos RB+.

RB+

RB-

La prdida de un alelo en clulas somticas no tiene efecto: la prdida de un alelo en clulas germinales crea un portador de fenotipo salvaje.

RB-

AB-

La prdida del segundo alelo en clulas somticas induce la formacin del tumor.

Fig. El retinoblastoma es causado por la prdida de ambas copias del gen RB en la banda del cromosoma 13q14. En la forma hereditaria, un cromosoma tiene una delecin en esta regin, y la segunda copia es perdida por mutacin somtica en el individuo. En la forma espordica ambas copias se pierden por eventos somticos individuales.

68

BRCA1 En el ao 1990, un grupo de investigadores report la relacin existente entre la aparicin temprana del cncer de mama con una regin del brazo largo del cromosoma 17.24 Ms tarde se precis que la regin que contena el locus de la enfermedad (denominado BRCA1) era en el 17q21. En 1994 se report la clonacin y la secuenciacin del gen BRCA1.25 Se conoce de la existencia de cientos de mutaciones diferentes de las cuales pueden resultar protenas truncadas o ausentes. Se han descrito tambin 5 mutaciones puntuales en tumores de ovario.26 Adems, se ha detectado la prdida de heterocigosidad de 2 nuevos genes supresores de tumores.27 BRCA2 En el brazo 13q fue mapeado otro locus relacionado con la aparicin del cncer mamario familiar.28 A finales de 1995 fue identificado el gen y la secuencia completa fue publicada en marzo del siguiente ao.29,30 Mutaciones en BRCA2 estn muy relacionadas con el cncer de mama, siendo las mutaciones somticas de este gen infrecuentes en la aparicin del cncer de ovario.

bios pequeos en la secuencia nucleotdica como mutaciones puntuales y pequeas deleciones e inserciones que no afecten la transcripcin y la traduccin de la protena resultan de gran utilidad el anlisis de polimorfismo conformacional de simple cadena (SSCP, del ingls single-stranded conformation polymorphism ), la electroforesis en geles con gradientes desnaturalizantes (DGGE, del ingls denaturing gradient gel electrophoresis) y los ensayos de truncamiento de la protena (PTT, del ingls protein truncation). Una vez que se ha visto la presencia de mutaciones en las muestras, entonces la secuenciacin directa determinara la naturaleza de la mutacin.

IMPORTANCIA DE LOS GENES SUPRESORES DE TUMORES EN EL DIAGNSTICO Y EN LA TERAPIA

Uno de los factores limitantes en los tratamientos utilizados para la cura del cncer es la toxicidad o dao que se le hace a los tejidos normales. Las altas dosis de radiaciones y agentes quimioteraputicos necesarias para matar clulas tumorales resistentes podra conducir a la muerte del paciente como resultado de la toxicidad sobre los tejidos normales. El xito consiste en encontrar la forma de matar selectivamente las clulas tumorales sin afectar al tejido normal. Para esto es muy importante conocer las diferencias moleculares y celulares entre clulas normales y clulas tumorales con vista a definir blancos especficos dentro de estas ltimas. La terapia gnica abre las puertas a una nueva era, aunque los estudios en humanos apenas comienzan, realizndose la mayora de dichos experimentos en animales, donde se han obtenido resultados alentadores. Uno de los principales objetivos

DETECCIN DE ALTERACIONES MOLECULARES EN LOS GENES SUPRESORES DE TUMORES

En la actualidad se cuenta con tcnicas muy tiles en la determinacin de alteraciones moleculares en los genes supresores de tumores.31 La pesquisa de la prdida de heterocigosidad permite la deteccin de inserciones o deleciones. Si se trata de cam-

69

de la transferencia de genes teraputicos contra el cncer es normalizar el ciclo celular inhibiendo oncogenes o restaurando la actividad de los genes supresores de tumores. En personas que hayan perdido ambos alelos del gen que codifica para la protena p53 o para RB, la administracin de las versiones sanas pueden restablecer el funcionamiento normal de la clula, la cual

contara otra vez con su sistema de vigilancia de los eventos genticos que tienen lugar durante la proliferacin celular.32 Por esta razn los estudiosos del tema se enfrascan en la difcil tarea de determinar y caracterizar todas las variantes genticas implicadas en la aparicin y desarrollo del cncer.

SUMMARY
The present review paper sets forth the most relevant aspects of suppressor genes and their role in the occurrence and development of cancer. To deal with this novel issue, the different types of tumor suppressor genes as well as their linking with various malignant diseases are mentioned. Emphasis was made on the mode of action of some of these genes because we consider that they are very important within the cell for the control of the proliferation and differentiation processes. Some of the main tools available for determining different alterations in these genes are briefly described. Finally, the importance of knowing such genes for the design of new therapies that act in a specific way and leave behind the undesirable effects of the conventional therapies are addressed. Subject headings: SUPPRESSION, GENETIC; MUTATION; NEOPLASMS/genetics; NEOPLASMAS/therapy.

REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
1. Hortwell LH, Kastan MB, Cell cycle control and cancer. Science 1994;266:1821. 2. Kastan MB. Molecular biology of cancer: the cell cycle. En : de Vita VT. Cancer: principles and practice of oncology. 5 ed. Philadelphia: Lippincot , 1997;121. 3. Lewin B. Oncogenes and cancer. En: Lewin B. Genes VI. 6 ed. New York: Oxford University, 1997;1131-72. 4. Alberts B, Bray D, Lewis J, Raff M, Roberts K, Watson JD. Molecular biology of cell. 3 ed. New York: Garland 1994:1255. 5. Boss JL, Kreijl CF van. Gene and gene products that regulate proliferation and differenciation: critical targets in carcinogenesis. IARC Sci Publ 1992;116:57-67. 6. Robert A. Wienberg. How cancer Arises, Sci Am 1996;62-70. 7. Sherr CJ.Cancer cell cycles. Science 1996;274: 1672-7. 8. Marx J. How cells cycle toward cancer. Science 1994;263:319. 9. Vogelstein B, Kinszler KW. The multistep nature of cancer.Trends Genet 1993;9:138. 10. Vogelstein B. Kinszeler in trends in Genetics. The Multistep Nature of Cancer, 1993;4:138-41. 11. Peeper DS, Upton TM, Ladha MH, Neuman E, Zalvide J, Bernards R, DeCaprio- JA; Ewen-Ras. 12. Symonds H, Krall C, Remington L, Dependent apoptosis supresses tumor growth and progression in vivo. Cell 1994;78:703. 13. Funk JO, Kind P. [Cell cycle control, genetic instability and cancer] Hautarzt 1997;48(3):157-65. 14. Perry ME, Levine AJ. Tumor suppressor p53 and the cell cycle. Curr Opin Genet Devel 1993;3:50. 15. Werness BA, Levine AJ, Howley PM. Association of human papillomavirus types 16 and 18 E6 proteins with p53. Science 1990;248:76-9. 16. Crook T, Tidy JA, Vousden KH. Degradation of p53 can be targeted by HPV E6 sequences distinct from those required for p53 binding and trans-activation. Cell 1991;67:547-56. 17. Sheffner M, Nuber U, Huibregtse JM. Protein ubiquitination involving an E1-E2-E3 enzyme ubiquitin thioster cascade. Nature 1995;373:81-3. 18. Harris CC. Tumors suppresor genes, multistage carcinogenesis and molecular epidemiology. IARC Sci Publ 1992;116:67-85.

70

19. Hwa LW, Shen LY, Hong FD. The retinoblastoma susceptibility gene encodes a nuclear phosphoprotein associated with binding activity. Nature 1987;329:40-2. 20. Johnson DG, Cress WD, Jakoi L, Nevins JR. Oncogenic capacity of the E2F1 gene. Proc Naft Acad Sci USA 1994;91:12823-7. 21. Singh P, Wong SH. Hong W. Overexpression of E2F-1 in rat embryo fibroblast leads to neoplastic transformation. EMBO J 1994;13:3329-38. 22. Beijersbergen RL, Benards R. Cell cycle regulation by the retinoblastoma family of growth inhibitory proteins. Biochem Biophys Acta 1996;1287:103. 23. Holey P. Mechanistic role for human papilomavirus in human cancer. En: Forther J, Rhoads JE. Accomplishments in cancer research 1994. Philadelphia: Lippincott, 1995;174. 24. Hall JM, Lee ML, Newman B. Linkaje of early-onset familial breast cancer to chromosome 17q21. Science 1990;250:1680-9. 25. Miki Y, Swensen J, Shattuck-Eidens D. A strong candidate for the breast and ovarian cancers susceptibility gene BRCAI. Science 1994;266:66-71. 26. Merajver SD, Pham TM, Caduff RF. Somatic mutations in the BRCAL gene in sporadic ovarian tumours. Nature Genet 1995;9:433-39. 27. Y okota J, Hatta Y, Takeuchi S, Koeffter HP. Ovarian cancer has frequent loss of heterozygosity at chromosome 12p12.3-13.1 (region of TEL and Kip1 loci) and choromosome 12q23-ter:evidence for two new tumoursuppressor genes. Br J Cancer 1997;75(9):1256-62. 28. Wooster R, Neuhausen S, Mangion J. Localization of a breast cancer susceptibility gene BRCA2, to cromocome 13q12-13. Science 1994;265:2088-90. 29. Wooster R, Bignell G, Lancaster J. Identification of a breast cancer susceptibility gene BRCA2. Nature 1995;378:789-92. 30. Tavtigian SV, Simard J, Rommens J. The complete BRCA2 gene and mulations in choromosome 13q-linqued kindred. Nature Gen 1996;12:333-7. 31. Sidransky D. Advances in cancer detection. Sci Am 1997;275(3):104-6. 32. Nagaraja RR. Targets for cancer therapy in the cycle pathway. Curr Opin Oncol 1996;8:516. Recibido: 14 de junio del 2000. Aprobado: 30 de octubre del 2000. Lic. Mara de los A. Ros Hernndez. Instituto Nacional de Oncologa y Radiobiologa. Calle 29 esquina a E, El Vedado, Ciudad de La Habana, Cuba.

71