Microscopa y organizacin celular

ESTUDIO DE LAS CLULAS

Ligado al empleo y perfeccionamiento de los microscopios

Observacin de s s estr ct ras !incoloras y transl"cidas# con alg nas e$cepciones en % e &ay pigmentos'

Est dio de los org)n los aislados y de los componentes molec lares

Est dio de las actividades cel lares !movimiento# reprod ccin# endocitosis+++'

Locali*acin y seg imiento de mol(c las en la c(l la

T(cnicas de Fijacin y tincin

T(cnica de fraccionamiento celular

Aislamiento y cultivo de las clulas

Utili*acin de istopos radioactivos o anticuerpos marcados+

/I0ACI12 Es na t(cnica destinada a impedir la a todegradacin en*im)tica !a tlisis' y el ata% e bacteriano !p trefaccin' % e s fren las c(l las c ando se e$traen del organismo o el organismo m ere+ Adem)s evita# en lo posible# la alteracin de las estr ct ras originales en el procesamiento posterior necesario para la observacin+ La fi,acin preserva las caracter-sticas morfolgicas y molec lares % e ten-an las c(l las en vivo !es como &acer na fotograf-a del te,ido vivo y poder observarla# tras cierto tratamiento# con el microscopio'+ . eden sarse fi,adores % -micos !formol# etanol# metanol o me*clas fi,adoras para microscop-a ptica o bien tetr$ido de osmio# paraformalde&ido o gl taralde&ido para m+ electrnica' o m(todos f-sicos como la desecacin# el calor seco# el fr-o o la congelacin+

TI2CI12 A menta el contraste entre las c(l las y el fondo as- como entre s s estr ct ras# me,orando la observacin de las c(l las y de s contenido+ La mayor-a de los colorantes son comp estos org)nicos con afinidad espec-fica por alg nos materiales cel lares3 4 Los colorantes cargados positivamente !a* l de metileno# cristal violeta o safranina' se combinan con los constit yentes cel lares cargados negativamente# como )cidos n cleicos o polisac)ridos )cidos+ 4 Los colorantes con carga negativa !eosina# f csina )cida o ro,o Congo' se combinan con los constit yentes cel lares cargados positivamente# como m c&as prote-nas+ 4 Otro gr po de colorantes son liposol bles# como el S d)n# y se combinan con los materiales lip-dicos de la c(l la# s)ndose a men do para revelar la locali*acin de gotitas o deps-tos de grasa o las vainas de mielina +

Tra% eidas del le5o de .in s Coloracin3 safranina

Seccin longit dinal de ra-* te5ida con el reactivo de /e lgen+ Se aprecian los n"cleos !te5idos en ro,o'

/7ACCIO2A8IE2TO CELULA7 El fraccionamiento cel lar es na t(cnica tili*ada para separar los distintos org)n los y componentes cel lares para s est dio+ La t(cnica se inicia con la homogeneizacin+ El te,ido se trit ra en n &omogenei*ador de manera % e las c(l las se rompen y liberan s contenido+ L ego se filtra el &omogenei*ado y se somete a centrifugacin a diferentes velocidades y tiempos# de manera % e se obtienen fracciones de los distintos org)n los+

Animacin
Es% ema del .roceso de /raccionamiento Cel lar !Tomado de3 666+genomas r+com'

ULT7ACE2T7I/U@ACI12

El svedberg !s-mbolo S# a veces Sv' es na nidad !no del S+I+' % e se sa en ltracentrif gacin para medir el coeficiente de sedimentacin de na part-c la o macromol(c la + Esta magnit d tiene dimensiones de tiempo# de modo % e n svedberg e% ivale a 9:49; seg ndos+ Se nombr en &omena,e al f-sico y % -mico s eco T&eodor Svedberg# premio 2obel de < -mica en 9=>? por s invencin de la ltracentr-f ga+

AISLA8IE2TO A CULTIBO DE CLULAS El primer paso para aislar c(l las a partir de n te,ido consiste en separar la matri* e$tracel lar % e las mantiene nidas# generalmente tili*ando en*imas % e la degradan# obteni(ndose as- na s spensin de c(l las libres+ El seg ndo paso es el aislamiento de cada tipo cel lar# % e p ede conseg irse mediante centrif gacin !% e separa las m)s grandes o densas de las m)s livianas'# apartando las % e se ad&ieren a n s strato de las % e no lo &acen o con aparatos % e lo &acen a tom)ticamente !citmetros'+ Una ve* aisladas# las c(l las p eden c ltivarse# es decir# mantenerse y m ltiplicarse Cin vitroC dentro de recipientes de vidrio o pl)stico# como placas de .etri o frascos de 7o $# en medios de c ltivo adec ados !con na serie de mol(c las n trientes como sales# gl cosa# amino)cido y vitaminas' a ;DEC y en condiciones apropiadas de & medad y o$igenacin# as- como de esterilidad+

UTILIFACI12 DE 7ADIOIS1TO.OS E2 EL ESTUDIO DE LAS CLULAS La introd ccin de radioistopos en las mol(c las biolgicas permite rastrear el destino de esas mol(c las detectando la radiactividad emitida mediante a torradiograf-a !el radioistopo se desintegra e impresiona na placa fotogr)fica revelando s locali*acin en la c(l la' + Los est dios a torradiog)ficos &an permitido determinar donde se sinteti*an distintas macromol(c las as- como s s movimientos posteriores dentro de la c(l la+ Utili*ando esta t(cnica se pone de manifiesto % e el D2A se replica en el n"cleo# % e el 72A se sinteti*a en el n"cleo y l ego sale al citoplasma o el tr)nsito de mol(c las por el sistema de endomembranas de la c(l la e caritica+ Entre los radioistopos de so com"n en la investigacin biolgica destacan el fsforo4;># el a* fre4;G# el carbono49H# el tritio o el yodo49>G+

b4d' Diagrama de na sec encia de a torradiograf-as % e m estran el movimiento de las prote-nas secretoras marcadas !representadas por gran los ro,os' a trav(s de na c(l la acinar pancre)tica+ La radiactividad se locali*a s cesivamente en el ret-c lo endopl)smico !b'# en el comple,o de @olgi y ves-c las adyacentes !c ' y en los gran los secretorios y comien*a a ser liberada en los cond ctos pancre)ticos !d'+ e' 7es men de la cin(tica de marcado de los diferentes compartimientos de la c(l la acinar pancre)tica en el e$perimento anterior

Informacin

UTILIFACI12 DE A2TICUE7.OS 8A7CADOS .A7A EL ESTUDIO DE LAS CLULAS La especificidad de la nin ant-geno4 antic erpo p ede aprovec&arse para poner en evidencia# espec-ficamente# na mol(c la determinada# en na c(l la o te,ido+ .ara ello se tili*an antic erpos marcados % e se nen espec-ficamente a esas mol(c las de la c(l la# % e son reconocidas como ant-genos+ Los antic erpos p eden obtenerse a partir de n animal de laboratorio al % e se le &a inyectado la mol(c la p rificada# o bien a partir de n c ltivo de c(l las preparadas especialmente para % e lo prod *can+ Los antic erpos se p eden marcan ni(ndoles# por e,emplo# na mol(c la fl orescente# como la fl oresce-na o la rodamina# % e permita s vis ali*acin posterior por medio del microscopio+ Informacin

LOS .7I8E7OS 8IC7OSCO.IOS !SI@LO IBII'

A mediados del siglo IBII n comerciante &oland(s# Leen6en&oeJ# tili*ando microscopios simples de fabricacin propia describi por primera ve* proto*oos# bacterias# espermato*oides y glb los ro,os+

8icroscopio de Anton Ban Lee 6en&oeJ

EL T78I2O CCLULAC /UE ACUMADO .O7 7OLE7T KOONE E2 9??G !A' Dib ,o &ec&o por 7obert KooJe de s microscopio# reprod cido de s libro C8icrograp&iaC p blicado en 9??G+ La l * de na l)mpara de aceite se dirige &acia la m estra gracias a na esfera de cristal llena de ag a % e act"a de condensador+ La m estra va montada sobre na ag ,a# deba,o del microscopio+ El microscopio se enfocaba movi(ndose arriba y aba,o con n tornillo nido al soporte por na abra*adera+ !L' En el libro tambi(n aparecen# entre otras# dos il straciones de las l)minas de corc&o c ya observacin le s giri el t(rmino Cc(l laC+

Robert Hooke

8IC7OSCO.IO 1.TICO

Sistema ptico
OCULAR3 Lente sit ada cerca del o,o del observador+ Ampl-a la imagen del ob,etivo+ OBJETIVO3 Lente sit ada cerca de la preparacin+ Ampl-a la imagen de (sta+ CONDENSADOR3 Lente % e concentra los rayos l minosos sobre la preparacin+ DIAFRAGMA3 7eg la la cantidad de l * % e entra en el condensador+ FOCO3 Dirige los rayos l minosos &acia el condensador+

Sistema mecnico
SO ORTE3 8antiene la parte ptica+ Tiene dos partes3 el pie o base y el bra*o+ LATINA3 L gar donde se deposita la preparacin+ CABE!AL3 Contiene los sistemas de lentes oc lares+ . ede ser monoc lar o binoc lar+ REV"LVER3 Contiene los sistemas de lentes ob,etivos+ .ermite# al girar# cambiar los ob,etivos+ TORNILLOS DE ENFO#UE3 8acrom(trico % e apro$ima el enfo% e y microm(trico % e consig e el enfo% e correcto+

8IC7OSCO.IO 1.TICO CO8.UESTO !II' Con los menores a mentos se p ede disting ir la organi*acin de los te,idos en n rgano y de las c(l las y el material e$tracel lar en n te,idoO con los mayores a mentos se llegan a vis ali*ar las principales estr ct ras de las c(l las e cariotas3 se diferencian el citoplasma y el n"cleo# y dentro de (ste el n cleolo y las masas de cromatina+ Con tinciones especiales p eden disting irse en el citoplasma alg nos org)n los# sin mayor detalle de los mismos+ Tambi(n se llega a observar el contorno de las c(l las procariotas# pero no se p ede ver la estr ct ra interna de estas c(l las# ni los detalles m)s finos de las c(l las e cariotas+ Una bacteria# o na mitocondria# est)n pr)cticamente en el l-mite de resol cin de este microscopio+

C(l las de m cosa b cal observadas con microscopio ptico

C(l las de epidermis de cebolla observadas con microscopio ptico

AU8E2TOS DE U2 8IC7OSCO.IO 1.TICO Los a mentos de n microscopio indican la relacin entre el tama5o observado y el real+ El n"mero de a mentos con los % e observamos na m estra en el microscopio ptico se obtiene al m ltiplicar los a mentos % e proporciona el ob,etivo por los del oc lar+

A mentos del oc lar3 De H$ &asta 9G$

A mentos del ob,etivo3 Los m)s frec entes son3 9:$# >:$# H:$# y 9::$ !este "ltimo de inmersin'

As-# el n"mero de a mentos con los % e observamos la m estra p ede llegar como m)$imo &asta nos 9G::$+ .resentacin3 microscopio ptico Otra presentacin

8IC7OSCO.IO ELECT712ICO DE T7A2S8ISI12 !8ET# TE8' Es el aparato % e &a permitido obtener pr)cticamente toda la informacin con % e &oy se c enta sobre la organi*acin interna de las c(l las !estr ct ra s bcel lar o ltraestr ct ra' p es permite disting ir n-tidamente las membranas cel lares# los org)n los y otros detalles+

Imagen de mitocondria al ME de transmisin

8IC7OSCO.IO ELECT712ICO DE T7A2S8ISI12 !8ET O TE8'

El &a* de electrones# prod cido por n filamento de t ngsteno calentado al vac-o# es acelerado con alto volta,e y se dirige y enfoca mediante tres lentes electromagn(ticas o electroimanes % e f ncionan como condensador# ob,etivo y oc lar !proyectora' +Todos los dispositivos del 8ET est)n encerrados en n t bo dentro del c al se &ace vac-o# debido a % e los electrones ser-an dispersados si c&ocaran contra las mol(c las de aire+ Este vac-o e$ige la fi,acin y des&idratacin de la m estra !ra*n por la % e no se p eden observar c(l las vivas'+

8IC7OSCO.IO ELECT712ICO DE LA77IDO !8EL# SE8' .roporciona im)genes tridimensionales del material observado# lo % e res lta especialmente "til para conocer el aspecto s perficial de las c(l las # o la disposicin de (stas en los te,idos# partic larmente en el caso de revestimientos de cond ctos o cavidades+ El poder de resol cin es de 9: nm !considerablemente menor % e el 8ET'# pero permite amplios m)rgenes de amplificacin+

vulo y espermatozoides vistos al ME de barrido

8IC7OSCO.IO ELECT712ICO DE LA77IDO !8EL O SE8'

El &a* de electrones se despla*a barriendo la s perficie de la m estra !rec bierta de na fina capa de n metal pesado' y provocando la emisin de electrones sec ndarios de ba,a energ-a# % e son transferidos a na pantalla de televisin

@ranos de polen vistos al 8icroscopio electrnico de barrido

In$o%macin

MICROSCO IO " TICO ORTAOBJETOS De vidrio

M& ELECTR"NICO DE M& ELECT"NICO DE TRANSMISI"N 'MET( BARRIDO 'MEB( 7e,illa de cobre !el vidrio es opaco a los electrones' Ka* de electrones

FUENTE DE ILUMINACI"N

L * visible !La l * atraviesa la preparacin'

!los electrones atraviesan la m estra'

!los electrones son dispersados a partir de la s perficie de la m estra'

LENTES

De cristal

Electromagn(ticas

ODER DE RESOLUCI"N

:#> Pm

Kasta :#> nm !&abit almente > nm'

9: nm

AUMENTOS OBSERVACI"N IN VIVO IMAGEN O FOTOGRAF)A

9G:: SI

G::+::: 2O

>:+:::

Llanco y negroQ color

Solo blanco y negro !solo con l * visible es posible disting ir colores'+ Las fotos al 8E se p eden colorear con programas inform)ticos+

.ODE7 DE 7ESOLUCI12 DE U2 8IC7OSCO.IO

El poder de resol cin es la distancia m-nima % e debe &aber entre dos p ntos para % e se perciban como separados y distintos+ El poder de resol cin depende de la longit d de onda de la f ente de il minacin3 a menor longit d de onda mayor resol cin+ Los electrones son constit yentes partic lados de los )tomos y# en condiciones adec adas# tambi(n presentan propiedades ond latorias+ S longit d de onda es siempre m c&o menor ! nas 9::+::: veces' % e la de la l * visible y# por tanto# el poder de resol cin de n microscopio electrnico ser) m c&o mayor % e el de n microscopio ptico+

TEO7SA CELULA7 En 9R;R# los alemanes 8+ Sc&leiden# bot)nico y T+ Sc&6ann# *ologo# form laron la teor-a cel lar# seg"n la c al las plantas y los animales est)n constit -dos por na o mas nidades f ndamentales# las c(l las+ En 9RGR# el patlogo 7+ Birc&o6 complet la teor-a cel lar generali*ando % e todas las c(l las proceden de otras c(l las pree$istentes+ En la act alidad# la teor-a cel lar se p ede res mir en c atro p ntos f ndamentales3 94Todos los seres vivos est)n formados por nidades f ndamentales3 las c(l las !la c(l la es la nidad estr ct ral'+ >4Todas las reacciones % -micas de los seres vivos tienen l gar en el interior de las c(l las !la c(l la es la nidad f ncional'+ ;4Cada c(l la procede de otra c(l la por divisin !la c(l la es la nidad de origen'+ H4Las c(l las contienen la informacin &ereditaria de los seres vivos+

Sc&leiden

Birc&o6

U2IBE7SALIFACI12 DE LA TEO7SA CELULA7 La innovadora teor-a cel lar# desarrollada d rante el siglo III# % e defend-a la entidad independiente de las c(l las en cada no de los te,idos de n organismo# no se admit-a# sin embargo# en el caso del te,ido nervioso+ Los Cretic laristasC sosten-an % e el sistema nervioso estaba formado por fibras nerviosas en forma de na comple,a red dif sa en la % e el imp lso nervioso se propagaba sin interr pcin+ /rente a la teor-a retic larista# el investigador espa5ol Santiago 7amn y Ca,al prop so la Cteor-a ne ronalC# seg"n la c al el sistema nervioso est) formado por c(l las independientes# sin cone$in citopl)smica y con a tonom-a anatmica y fisiolgica+ La defensa de la teor-a ne ronal# iniciada en 9RRR por 7amn y Ca,al# c lmin# en 9=:?# con la concesin del premio 2obel+ La demostracin de la individ alidad de cada ne rona# concedi valide* niversal a la teor-a cel lar+

"antiago Ramn y !a al
Neuronas dibu adas por Ramn y !a al

O7@A2IFACI12 CELULA7 .7OCA7IOTA EUCA7IOTA

TC(l las de menor comple,idad y menor tama5o !949: Pm' TSin envolt ra n clear TUn cromosoma circ lar en na *ona llamada n cleoide+ . ede &aber mol(c las e$tra de AD2 circ lares llamadas pl)smidos T7ibosomas D: S TOrganismos nicel lares !7+ 8oneras' TCon pared cel lar !peptidoglicano' TDivisin sin mitosis

TC(l las de mayor comple,idad y mayor tama5o !9:4G: Pm' TCon envolt ra n clear % e delimita n compartimento llamado n"cleo donde se enc entra el material gen(tico TBarios cromosomas lineales T7ibosomas R: S TOrganismos ni y pl ricel lares !7+ .rotoctistas# Kongos# .lantas A Animales' TSolo pared cel lar en plantas !cel losa'# &ongos !% itina' y m c&as algas TDivisin con mitosis o meiosis

CLULAS .7OCA7IOTAS

Imagen al microscopio electrnico de barrido de 8ycobacteri m t berc losis Esc&eric&ia coli al 8+electrnico de barrido

Imagen al microscopio electrnico de transmisin de na bacteria

Streptococc s pne moniae !ne mococo' observados al 8+electrnico de barrido

Treponema pallid m al 8+electrnico de barrido

EST7UCTU7A DE LA CLULA .7OCA7IOTA Env eltas 8embrana plasm)tica .ared cel lar !peptidoglicano' C)ps la en alg nas bacterias Citoplasma 7ibosomas D: S Informacin gen(tica !n cleoide# pl)smidos' Incl siones .rolongaciones .ili o fimbria /lagelos

CLULA EUCA7IOTA BE@ETAL

CLULA EUCA7IOTA A2I8AL