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Anais do 9 Seminrio Anual de Iniciao Cientfica, 19 a 21 de outubro de 2011

RIZOBACTRIAS PROMOTORAS DO CRESCIMENTO DE MUDAS DE AAIZEIRO (Euterpe spp.)


Halina Stffany Lopes COSTA1; Marcela Cristiane Ferreira RGO 2; Gisele Barata da SILVA3

Resumo
Sementes de aaizeiro (Euterpe spp.) apresentam a germinao desuniforme que pode variar de 22 a 45 dias, bem como taxa de crescimento inicial lento, assim uma muda comercial obtida em um intervalo de 6 a 9 meses aps o semeio. Deste modo este trabalho visa a seleo de isolados de rizobacteria que aumente a taxa inicial de crescimento e auxilie assim na uniformidade das mudas. Os isolados foram obtidos da rizosfera da Base de Urucu-AM, durante os anos de 2008 e 2009. Foi realizado um experimento em delineamento inteiramente ao acaso, com 11 tratamentos (10 isolados+ controle) e quatro repeties. As sementes foram submersas por 24 horas em suspenso bacteriana de cada isolado separadamente e o semeio foi realizado em substrato. as mudas obtidas aos 9meses foram submetidas a avaliaes. As avaliaes constaram de altura de planta, comprimento da raiz, e biomassa. Os experimentos in vitro constaram de teste de AIA, Citocinina e giberelina. Foi realizada a ANOVA para todas as variveis e as mdias comparadas pelo teste de Scott-Knott (P<0.05). Palavras-chave: rizobactrias e promoo de crescimento.

Introduo A cultura de Euterpe sp. (aa), apresenta grande visibilidade nacional como reconhecimento como bebida, rico em fibras, minerais e antocianina apresentando funo antioxidante evitando doenas cardiovasculares. A extrao uma fonte de renda para os ribeirinhos, alm de serem utilizadas em reas degradadas. Porm apresenta germinao desuniforme e crescimento inicial lento. A demanda crescente pelo fruto de aa provocou grande interesse no manejo de aaizeiros nas reas de vrzeas e no plantio em reas de terra firme, aumentando a rea plantada pela cultura e a demanda por mudas que apresentem uniformidade (HOMMA, 2006). Deste modo este trabalho visa a seleo de isolados de rizobacteria que aumente a taxa inicial de crescimento e auxilie assim na uniformidade das mudas. Rizobactrias promotoras do crescimento (PGPR) so um grupo heterogneo de bactrias que podem ser encontrados na rizosfera, na superfcie radicular em associao com as razes, o que pode melhorar a extenso ou a qualidade do crescimento das plantas diretamente e ou indiretamente (FARAH., 2002). A promoo
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direta de crescimento ocorre quando uma rizobactria produz metablitos que promovam diretamente o crescimento das plantas pela produo de reguladores de crescimento, tais como citocinina e giberelina (NELSON, 2004). O uso de rizobctrias tem sido aplicado a diversas culturas para promover a emergncia, o crescimento, e produo de mudas (HERMAN et al., 2008). Material e Mtodos As rizobactrias foram cultivadas em placa de Petri em meio solidificado de 523 de Kado & Heskett, (1970), e aps 24h preparou-se a suspenso bacteriana ajustada em espectrofotmetro 550 nm (A550 = 0,1). As sementes de aa foram previamente esterilizadas com 1 [ETOH - 70%], seguidas de 1em [hipoclorito de sdio - 2%] e 1gua estril e depositadas em papel filtro estril. As mesmas foram submersas por 24 horas em suspenso de cada isolado (10) de rizobactria [108 ufc.mL-1] e posteriormente semeadas em substrato. Testes in vivo

Acadmica do Curso de Agronomia da Universidade Federal Rural da Amaznia; Bolsista PIBIC-CNPq/UFRA; Email: ster_fany18@hotmail.com 2 Mestranda em Agronomia da Universidade Federal Rural da Amaznia; Bolsista CAPES; E-mail: marcela.rego@ufra.edu.br 3 Profa. Dra da Universidade Federal do Rural da Amaznia; Av. Tancredo Neves, 2501. CEP 66077-530, Belm-PA; Email: gisele.barata@ufra.edu.br.

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As mudas obtidas foram avaliadas aos 9 meses. Avaliou-se o a altura das mudas, o comprimento radicular. E a biomassa. Testes in vitro Produo de cido indol actico (AIA) Este mtodo colorimtrico foi adaptado de Bric et al. (1991). Se transferiu as bactrias para placas contendo 1/ 10 TSA enriquecido com 5 mM de L-triptofano (1,021 g por L). Aps a transferncia, o meio foi coberto com membrana de nitrocelulose e incubar a 28C por 24h. Foi remover a membrana para outra placa e saturada com a soluo de Salkowski (Gordon & Weber, 1951) e incubada temperatura ambiente. Os isolados que formam halo avermelhado na membrana, no perodo entre 30 min, so produtores de AIA. Produo de citocininas e giberelinas Esse mtodo foi adaptado do bioensaio do cotildone de rabanete para determinao de citocininas descrito por Letham (1971). Foram germinadas as sementes de rabanetes sobre folhas de papel filtro umedecidas, em placas de Petri. Incubar no escuro, a 25-26C. Aps 35 h, destacar o cotildone menor. Separar os hipoctilos dos cotildones. Se colocou 8 cotildones de tamanho uniforme em placas de Petri com papel filtro umedecido com 3 mL de sobrenadante de cada isolado. Os cotildones colocados com a superfcie superior em contato com o papel. Os hipoctilos, uniformizados para 3 mm de comprimento, so colocados logo abaixo dos cotildones. Incubar a 24C sob luz fluorescente fraca contnua. Aps trs dias, foram secados os cotildones com papel absorvente (blotted dry) e pesados. Comparar os pesos dos cotildones e o comprimento dos hipoctilos com aqueles do controle (apenas com a soluo tampo). O sobrenadante de isolados produtores de citocininas aumentam o peso dos

cotildones mas no o crescimento dos hipoctilos. Resultados e Discusso Testes in vivo As mudas obtidas foram avaliadas aos 9 meses. Avaliou-se o a altura das mudas, o comprimento radicular e a biomassa. No ouve diferena significativa no comprimento das mudas tanto na parte area quanto no comprimento radicular, pelo teste de Scott-Knott a 5% de probabilidade (Figura 3). Para estes parmetros. Enquanto que a massa seca no diferiu da testemunha (Figura 2). Testes in vitro Produo de cido indol actico (AIA) Foi observada a produo dep AIA por 30% dos isolados testados, isolados Rizo-42, RIZO-61 e RIZO-67. Segundo Shrivastava (2008) Indol-3-cido actico (IAA) fundamental nos processos radiculares, e tambm leva a diminuio do comprimento da raiz e aumentar na formao de plos radiculares, aumentando assim a capacidade de da planta de absorver nutrientes do solo. Como podemos observar na Figura 3. Produo de citocininas e giberelinas Foi observado a produo de gibereina por 80% dos isolados testados, e no foi observada a prodio de citocinina. Como pode ser observado na (Figura 1). A giberelina exerce uma importante influencia na germinao e na quebra de dormncia, podendo agir como bioestimulante celular provocando alongamento e estimulando a diviso celular. Conforme Castro (2005) Deste modo podemos observar que os isolados positivos no teste de giberelina apresentaram plantas com maior altura.

Figura 1. Teste de giberelina com rizobactrias provenientes de Euterpe sp.. Colunas seguidas pela mesma letra no mostram diferena significativas entre os substratos pelo teste de Scott-Knott a 5% de probabilidade.

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Figura 2. Massa (gr) de mudas de Euterpe sp. provenientes de sementes tratadas com rizobactrias (mudas aos 9 meses de idade). Colunas seguidas pela mesma letra no mostram diferena significativas entre os substratos pelo teste de Scott-Knott a 5% de probabilidade.

Figura 3. Comprimento (cm) de mudas de Euterpe sp. provenientes de sementes tratadas com rizobactrias (mudas aos 9 meses de idade). Colunas seguidas pela mesma letra no mostram diferena significativas entre os substratos pelo teste de Scott-Knott a 5% de probabilidade. Tabela 1.Caracterizao bioqumica dos isolados de rizobactrias. ISOLADOS CITOCININA GIBERELINA AIA RIZO-35 + RIZO-37 RIZO-38 + RIZO-42 + + RIZO-58 + RIZO-61 + + RIZO-67 + + RIZO-68 + RIZO-71 RIZO-92 + + resultado positivo no teste - resultado negativo

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Concluses - No ouve diferena siguinificativa no comprimento radicular e na massa seca. E na altura das plantas em relao a testemunha, -80% das rizobactrias foram positivas no testes de produtores de giberelina, - 30% das rizobactrias so promotoras de AIA. -No houve resultado positivo para o teste de Citocinina Agradecimentos Ao CNPq/Ufra pela concesso da bolsa de Iniciao Cientfica ao primeiro autor. A Fapespa e ao Cnpq pelo financiamento do projeto.

Erwinia, Pseudomonas and Xanthomonas. Phytopathology, v.60, p.696-979, 1970 NELSON, L. M. Plant growth promoting rhizobacteria (PGPR): Prospects for new inoculants. Crop. Management. University Way, Kelowna.2004. SHRIVASTAVA, S.; DSOUZA, S. F.; DESAI, P. D.. Production of indole-3-acetic acid by immobilized actinomycete (Kitasatospora sp.) for soil applications. Current science, vol. 94, no. 12, 25 june 2008.

Referncias Bibliogrficas BRIC, J.M.; BOSTOCK, R.M.; SILVERSTONE, S.E. Rapid in situ assay for indoleacetic acid production by bacteria immobilized on a nitrocellulose membrane. Applied and Environmental Microbiology, Washington, v.57, p.535-538, 1991. CATTELAN, ALEXANDRE JOS. Mtodos quantitativos para determinao de caractersticas bioqumicas e fisiolgicas associadas com bactrias promotoras do crescimento vegetal. Londrina: Embrapa Soja, 1999. FARAH, AHMAD; IQBAL, AHMAD. Screening of free-living rhizospheric bacteria for their multiple plant growth promoting activities. Microbiological Research. 2006, India GORDON, S.A.; WEBER, R.P. Colorimetric estimation of indoleacetic acid. Plant Physiology, Bethesda, v.26, p.192-195, 1951. HOMMA, Alfredo Kingo Oyama; NOGUEIRA, Oscar Lameira; MENEZES, Antnio Jos Elias Amorim; CARVALHOR, Jos Edmar Urano; NICOLE, Clarisse Maia Lana; MATOS, Grimoaldo Bandeira. Aa: novos desafios e tendncias. amaznia: ci. & desenv., belm, v. 1, n. 2, jan./jun. 2006. KADO, C.I., HESKETT, M.G. Selective media for isolation of Agrobacterium, Corynebacterium,

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