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UNIVERSIDADE DO ESTADO DO RIO DE JANEIRO INSTITUTO DE QUMICA DEPARTAMENTO DE TECNOLOGIA DE PROCESSOS QUMICOS BIOTECNOLOGIA EXPERIMENTAL

PRTICA 1: ESPECTROFOTOMETRIA

LEONARDO SILVA VIANA RICARDO FERNANDES DE ARAJO PROFESSOR: FBIO MERON

22 / SETEMBRO / 2009

1 - Objetivo Treinamento na utilizao de tcnicas espectrofotomtricas e elaborao de uma curva padro para determinao da concentrao de leveduras em uma soluo aquosa. 2 - Metodologia Os procedimentos foram realizados para prtica com espectrofotmetro analgico e digital. 2.1 - Procedimentos A partir de uma suspenso preparada de fermento biolgico contendo 15g de fermento em 100 mL de gua destilada (150 g/L), tomou-se 5 quantidades de 1 mL desta suspenso e diluiu-se em 1/50, 1/100, 1/200, 1/250 e 1/500 no balo volumtrico. Utilizando-se gua destilada como branco, realizou-se o procedimento para zerar os espectrofotmetros. Leu-se as absorbncias das suspenses diludas em espectrofotmetro a 570 nm, assim como as absorbncias de duas solues de concentraes desconhecidas, soluo A e soluo B. Construiu-se uma curva padro de absorbncia e calculou-se o coeficiente de absoro para cada equipamento. A partir da equao da reta obtida pela curva, determinaram-se as concentraes das suspenses A e B. 2.2 - Material utilizado - Espectrofotmetro Digital - Espectrofotmetro Analgico - Bales volumtricos de 50, 100, 200, 250 e 500 mL - Pipeta graduada de 1 mL

3 - Resultados

A partir da leitura das absorbncias das suspenses de concentrao conhecida construiu-se a Tabela 1. Tabela 1 - Leitura de Absorbncia
Diluio Concentrao (g/L) Absorbncia (Analgico) Absorbncia (Digital) 1/500 1/250 1/200 1/100 1/50 0,3 0,6 0,75 1,5 3 0,065 0,125 0,160 0,330 0,560 0,150 0,307 0,354 0,651 1,066

Com os dados da Tabela 1 construram-se os grficos da Figura 1 e da Figura 2. Figura 1 - Grfico: Curva Padro - Absorbncia x Concentrao

Analgico
0.700 0.600 0.500 Absorbncia 0.400 0.300 0.200 0.100 0.000 0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5 Concentrao (g/L) y = 0.184x + 0.0217 R = 0.9911

Figura 2 - Grfico: Curva Padro - Absorbncia x Concentrao

Digital
1.200 1.000 Absorbncia 0.800 0.600 0.400 0.200 0.000 0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5 Concentrao (g/L) y = 0.332x + 0.0972 R = 0.9881

A partir da leitura das absorbncias das suspenses de concentrao desconhecida construiu-se a Tabela 2. Tabela 2 - Leitura de Absorbncia
Concentrao (g/L) Absorbncia (Analgico) Absorbncia (Digital) A B 0,140 0,270 0,320 0,588

Segundo a lei de Lambert-Beer:

, onde K o coeficiente de absortividade, C

a concentrao da amostra e d o dimetro da cubeta utilizada. Como as cubetas utilizadas apresentam d=1,0 cm, temos que Abs = KC e pelas equaes das retas obtidas nos grficos temos que K = 0,184 L(g.cm)-1 e K = 0,332 L(g.cm)-1para o equipamento analgico e digital respectivamente. Obtm-se pelas equaes da reta as equaes para o calculo da concentrao de A e B:

Abs = 0,184c + 0,021 Abs= 0,332c+ 0,097

(1) (2)

Utilizando a equao 1 determinou-se a concentrao das suspenses A e B pelo uso do espectofotmetro analgico: Utilizando a equao 2 determinou-se a concentrao das suspenses A e B pelo uso do espectofotmetro digital:

4 - Concluses Atravs do processo realizado pelo espectrofotmetro pode-se analisar a concentrao das solues. E com a utilizao de clculos a partir dos resultados obtidos, pode-se determinar a concentrao de solues com concentrao desconhecidas. A falta de linearidade nas curvas e a diferena dos resultados obtidos entre os equipamentos analgico e digital pode ter sido causado por erro na diluio, na leitura, limpeza e manuseio das cubetas.