UN MUNDO PEQUEO:

INICIACIN EN LA OBSERVACIN MICROSCPICA.

Autor: Francisco Luis Lpez Rodrguez DNI: 80 127 204 -B

INTRODUCCIN

Para poder ver un objeto es necesario que la luz reflejada o emitida por el mismo sea percibida, al menos, por dos clulas de nuestra retina. En el caso de objetos muy pequeos, como los llamados organismos microscpicos, esto no ocurre as y por lo tanto no pueden ser observados a simple vista. Para percibir, observar y estudiar estas formas disponemos de instrumentos que nos permiten amplificar su tamao, son los llamados microscopios. Para observaciones incluso de menos de una micra (0,000001 m) podemos utilizar el microscopio ptico, mientras que para tamaos inferiores se deben utilizar los microscopios electrnicos u otras tcnicas ms especficas.

La aplicacin de los mtodos y actividades prcticas descritas en este documento es perfectamente aplicable a cualquier nivel de Secundaria.

Antes de describir los mtodos que nos permitirn la observacin de algunos de estos pequeos seres conviene conocer bien el manejo del aparato que vamos a utilizar, garantizando de esta forma el xito de nuestro trabajo.

1. EL MICROSCOPIO PTICO: ESTRUCTURA Y MANEJO.

PARTES DEL MICROSCOPIO.

PARTE MECNICA.

1. PIE. Es la base del aparato. En l se encuentra el sistema de iluminacin y sirve de apoyo para el brazo.

2. BRAZO. Sustenta el aparato ptico y el l se fija la platina. Contiene dos tomillos de ajuste, el macromtrico (macro) y el micromtrico (micro).

3. PLATINA. Placa metlica con un orificio que permite el paso de luz. En ella se coloca la preparacin y suele tener un sistem de fijacin de la misma y, en ocasiones, dos tomillos coaxiales que permiten desplazar la preparacin adelante y atrs y lateralmente, con el fin de colocar la muestra debajo del objetivo.

4. TORNILLOS DE AJUSTE. Permiten desplazar la platina verticalmente para regular la distancia de la preparacin al objetivo y conseguir el enfoque adecuado. El tomillo de ajuste macromtrico permite un desplazamiento mayor de la platina y un enfoque grueso. El tomillo de ajuste micromtrico realiza un desplazamiento muy pequeo y un enfoque fino.

PARTE PTICA.

5. OCULAR. Tubo provisto de una lente por donde se mira. Suele ser intercambiable. El aumento que consigue aparece grabado en el lateral.

6. OBJETIVO. Tubo provisto de varias lentes, es la parte ms cercana a la preparacin. El aumento de cada objetivo aparece grabado en el lateral. Suelen ser: x4, x10, x40, xl00.

EL AUMENTO TOTAL SE CALCULA MULTIPLICANDO EL AUMENTO DEL OBJETIVO POR EL AUMENTO DEL OCULAR.

7. REVOLVER. Pieza giratoria que contiene los objetivos. Se puede hacer girar con el fin de cambiar el objetivo que estamos utilizando.

SISTEMA DE ILUMINACIN

8. Actualmente se suele utilizar una lmpara situada sobre el pi, cuya intensidad est controlada por un regulador. Adosado a la parte inferior de la platina hay un condensador que concentra el flujo de luz, su posicin ms correcta es cerca de la preparacin. Tambin encontramos el diafragma que se abre o cierra para regular la luz que llega a la preparacin.

MANEJO DEL MICROSCOPIO

PREPARACIN

La muestra que queremos observar debe ser transparente, ya que la luz debe pasar a su travs y llegar hasta el objetivo. Colocamos la muestra sobre el portaobjetos, vidrio rectangular y grueso, y se le aplica el tratamiento adecuado (tincin, fijacin, etc), posteriormente se coloca encima el cubreobjetos, vidrio cuadrado muy fino.

OBSERVACIN

1. Comprobamos que la platina est lo ms separada posible de los objetivos y que tenemos colocado el objetivo ms pequeo (x4). 2. Colocamos la muestra en la platina y la sujetamos con el sistema de fijacin. 3. Encendemos la luz y desplazamos la platina hasta que la muestra quede colocada encima del haz de luz. 4. Usando el tomillo macromtrico acercamos la platina al objetivo ms pequeo

sin que llegue a tocarlo. Para asegurarnos de esto realizaremos esta operacin sin mirar por el ocular. 5. Mirando ya por el ocular bajaremos lentamente la platina hasta que observemos la preparacin enfocada. A continuacin utilizaremos el tomillo de ajuste micromtrico para conseguir un enfoque perfecto. 6. Buscaremos la iluminacin ms adecuada 7. Utilizando los tomillos de desplazamiento lateral localizaremos en la muestra la zona ms adecuada para la observacin. 8. Para observar la muestra a ms aumento bajaremos la platina, giramos el revolver hasta colocar sobre la muestra el siguiente objetivo, volvemos a subir la platina mirando lateralmente para que no toquen la preparacin y el objetivo, moramos por el ocular y bajamos la platina para enfocar. 9. Se dibujar lo observado en cada uno de los aumentos, indicando lo que se est viendo y el aumento. 10. Al acabar la observacin se baja la platina, se coloca el objetivo de menor aumento y se retira la preparacin. El microscopio se guarda de forma que quede bien protegido y se lava el material utilizado.

OCULARES (A) REVOLVER (B) OBJETIVOS (C) (los aumentos en el ext.) PLATINA (D) Tornillos para desplazar la preparacin sobre la platina en sentido longitudinal y transversal (E) F. CONDENSADOR (F) G. Tornillo MACROMTRICO (G) H. Tornillo MICROMTRICO (H) I. DIAFRAGMA IRIS (I) J. Tornillo para regular la altura del condensador (J) K. INTERRUPTOR (K) L. Regulador de la Intensidad de Luz (L) M. PINZAS para ajustar la preparacin sobre la platina (M) N. PIE O SOPORTE (N)

A. B. C. D. E.

Fuente:

(http://www.uam.es/personal_pdi/ciencias/bolarios/BiologiaCCAA/Guiones/Practica3.htm)

2. ACTIVIDADES PRCTICAS DE MICROSCOPA

Comenzaremos describiendo una serie de preparaciones sencillas, tradiciones ya en el inicio del uso de tcnicas de microscopa como son la observacin de clulas vegetales y animales:

2.1. OBSERVACIN DE CLULAS DE LA PULPA DEL TOMATE.

nicamente necesitaremos un trozo de tomate, unas pinzas, dos portaobjetos y un microscopio ptico. Comenzaremos extrayendo una muestra de la pulpa de tomate, para ello tomaremos un trozo muy pequeo del tejido de color rojo intenso que est prximo a la piel, en su parte interna. A continuacin colocaremos la muestra en el centro de un portaobjetos y colocaremos el segundo cristal encima de la pulpa, apretando fuertemente por los bordes (nunca por el centro). Ahora podemos colocar la preparacin en el microscopio y observarla al menor de los aumentos, con el fin de localizar aquellas clulas ms adecuadas. Una vez centrada la clula elegida colocamos sucesivamente aumentos mayores, pudiendo distinguirse fcilmente las distintas partes de la clula vegetal: pared celular, membrana plasmtica, citoplasma, ncleo e incluso orgnulos como los cromoplastos, donde se encuentran los pigmentos que dan color al tomate.

2.2. OBSERVACIN DE CLULAS DE LA EPIDERMIS DE LA CEBOLLA.

En este caso usaremos : una cebolla, bistur (o un cuchillo), pinzas,

un portaobjetos, un cubreobjetos, azul de metileno, cubeta de tincin, frasco lavador microscopio.

Para obtener la muestra separaremos una de las capas de la cebolla. De su parte interna cortaremos un rectngulo de aproximadamente 1 cm x 0,5 cm. Lo extraeremos con las pinzas y lo colocamos sobre el portaobjetos. Para mejorar la observacin vamos a teir las clulas con un colorante llamado azul de metileno. Para ello colocamos el porta sobre la cubeta de tincin y aadimos una gota del colorante, esperamos un minuto. A continuacin, y sujetando la piel de la cebolla con la pinza, inclinamos la preparacin sobre la cubeta y dejamos caer un chorro de agua sobre la zona teida con el frasco lavador, de forma que arrastre el exceso de colorante. Por ltimo se tapa la muestra con un cubreobjetos y la colocamos en el microscopio. Seguimos los pasos explicados anteriormente y podremos observar de nuevo las distintas partes de una clula vegetal. En este caso adems podemos ver como se asocian las clulas individuales para formar un tejido. Se trata en este caso de tejido epitelial en forma de panal ya que las clulas son hexagonales.

2.3. OBSERVACIN DE CLULAS DE LA MUCOSA BUCAL HUMANA.

Se tratan de clulas animales, con caractersticas distintas a las vistas anteriormente y mucho ms pequeas, por lo que no conviene desesperarse.

Usaremos : una pequea esptula de borde romo, frasco lavador, cuentagotas, mechero de alcohol, cubeta de tincin

azul de metileno, portaobjetos, cubreobjetos, microscopio ptico.

Tomaremos la muestra del interior de la boca, haciendo pasar la esptula muy suavemente por la parte interna de la mejilla, con una ligera pasada ya se obtiene una abundante cantidad de clulas. El lquido que queda en el borde de la esptula se coloca en el centro del portaobjetos y se le aade una gota de agua con el cuentagotas. A continuacin se procede a su secado, situndolo a unos 10 cm. sobre la llama del mechero de alcohol, moviendo la preparacin sobre la misma y evitando que se caliente excesivamente, pues se quemaran las clulas. Una vez seca y fijada la muestra la colocamos sobre la cubeta de tincin y aadimos una gota de azul de metileno. Esperamos dos minutos. Volcamos sobre la cubeta y lavamos el sobrante de colorante, como anteriormente. Finalmente se coloca el cubreobjetos y observamos al microscopio.

En este caso tendremos que utilizar aumentos mayores ya que son clulas ms pequeas que las vegetales. Podremos diferenciar membrana plasmtica, citoplasma y ncleo, e incluso orgnulos en forma de grnulo coloreados de azul.

2.4. OBSERVACIN DE MICROROGANISMOS DE AGUA DULCE: DE UNA INFUSIN Y DE CHARCA.

Se trata en este caso de preparaciones muy sencillas que nos van a permitir observar pequeos seres vivos y algunos en movimiento. La mayora sern protistas, algas, crustceos y larvas de diversos animales que forman parte del plancton.

Solo necesitaremos una muestra de agua, un portaobjetos excavado y microscopio.

Para preparar una infusin nicamente tendremos que verter abundante agua en un vaso y aadir diversas hojas de vegetales (hortalizas, lechuga, acelgas .). Si estn en estado de descomposicin mejor an. Esperaremos unos das y ya est lista la muestra.

Para observar organismos de charca conviene tomar la muestra de un lugar donde el agua est encharcada, escogiendo preferentemente las zonas prximas a vegetacin.

El procedimiento en ambos casos se limita a colocar una gota de agua en la excavacin del porta (tambin se puede utilizar un porta no excavado) y observarlo a pocos aumentos, tratando de identificar los diferentes seres que podremos encontrar mientras desplazamos la preparacin en toda su amplitud. Hay que tener en cuenta que algunos de estos seres se mueven libremente, y algunos muy rpidamente, por lo que hay que estar muy atento. Para identificarlos es necesario disponer de una gua de organismos de agua dulce. En la direccin de Internet http://msnucleus.org/watersheds/mission/plankton.pdf aparecen dibujados e identificados algunos de ellos.

2.5. OBSERVACIN DE BACTERIAS DEL YOGUR.

Mayor dificultad implica la observacin de bacterias, debido a su pequeo tamao y a la necesidad de aplicar las tcnicas microscpicas con mayor precisin.

Necesitaremos : un yogur natural, que tendremos durante una semana a temperatura ambiente, azul de metileno, cubeta de tincin, frasco lavador, cuentagotas, mechero de alcohol, alcohol metlico, porta y cubreobjetos, glicerina, cucharilla

microscopio.

Colocamos una pequea muestra de yogur en el centro del potaobjetos y aadimos una gota de agua, mezclndolos. Secamos al mechero de alcohol igual que hicimos anteriormente. Aadimos unas gotas de alcohol metlico para eliminar la grasa del yogur y secamos al aire. Se coloca el porta sobre la cubeta y se tie con azul de metileno durante dos minutos. Lavamos con agua a chorro (frasco lavador) y dejamos secar. Colocamos sobre la muestra una gota de glicerina y colocamos el cubreobjetos.

En este caso solo podremos observar a aumentos grandes, pudiendo distinguir al bacilo lctico (estreptococo) de forma esfrica y asociado formando cadenas granuladas y al bacilo bulgrico con forma alargada de bastn y de mayor tamao.

BIBLIOGRAFA.

MANUAL DE PRCTICAS DE MICROSCOPA. 1975. ENOSA. MADRID.

J. CAETE. ACTIVIDADES DE LABORATORIO BIOLOGA I y II. LIBRO DEL PROFESOR. TECNOLOGA Y SISTEMAS DIDCTICOS. ENOSA. 1995 MADRID.