Ficheiro 1 pesquisa Adaptado de Alves e Bragagnolo 2002

Mtodo de extraco da cafena Dissolver num erlenmeyer 5g de xido de magnsio na amostra a ser analisada (aproximadamente 250mL) Aquecer a mistura numa chapa de aquecimento com agitao constante durante 45 minutos; Depois de arrefecer, filtrar a mistura para um funil de separao atravs de 1 funil de vidro e de papel de filtro. Adicionou.se 4ml de cido sulfrico a 10% e homogeneizou-se o sistema; Extraiu-se a cafena com 20ml de clorofrmio , agitando vigorosamente o sistema deixando a fase clorofrmica separar e transferindo-a para outro funil de separao; Esta extraco foi repetida 5 vezes, transferindo sempre a fase clorofrmica para o mesmo funil de separao; Na fase de clorofrmio foi adicionado 5ml de hidrxido de potssio a 1%, agitando-se esta mistura durante 1 min, deixando-se separar as fases; Filtrar a fase clorofrmica, atravs de 1 funil de separao com algodo, para um balo volumtrico de 100ml, completando-se o volume com clorofrmio; O extracto foi guardado numa geladeira at ser analisado (3 rplicas de cada amostra);

Curva Padro da cafena 5 solues padro de cafeina em clorofrmio em bales volumtricos de 50ml (4.64pm, 9.28ppm, 13.92ppm, 18.56ppm, 23.20ppm); Calibrou-se o espectrofotmetro com 1 branco de clorofrmio e fez-se a curva a 272nm (comprimento de onda mximo da cafena)

Ficheiro 3 pesquisa Association of oficial Analytical Chemists

Mtodo de extraco da cafena

Baseia-se na extrao com clorofrmio em meio alcalino e determinao por espectrofotometria na regio do ultravioleta;

Procedimento

Pipete de 20 a 50 mL da amostra descarbonatada para um funil de separao; Junte 10 mL da soluo de permanganato de potssio a 1,5 % e agite. Aps 5 minutos, junte 20 mL da soluo redutora com agitao contnua. Adicione 2 mL da soluo de cido fosfrico e agite. Adicione 2 mL da soluo de hidrxido de sdio a 25 % e agite. Extraia a cafena com trs pores de 30 mL de clorofrmio. Aps a separao, retire a camada inferior e filtre-a em sulfato de sdio anidro e algodo e recolha os filtrados em um mesmo balo volumtrico de 100 mL. Lave a haste do funil de separao e o filtro com pores de 2 mL de clorofrmio, aps cada extrao. Complete o volume com clorofrmio. Determine a absorvncia a 276 nm, usando clorofrmio como branco. Para amostras com alto teor de cafena, faa uma diluio pipetando uma alquota de 10 mL para balo volumtrico de 50 mL, complete o volume com clorofrmio e faa a leitura da absorvncia a 276 nm.

Curva Padro da cafena

Pipete 1, 2, 3, 4, 5 e 6 mL da soluo-padro de cafena para bales volumtricos de 50 mL e complete o volume com clorofrmio. Estas solues contm, respectivamente, 0,2; 0,4; 0,6; 0,8; 1 e 1,2 mg de cafena por 100 mL de clorofrmio. Determine a absorvncia dessas solues a 276 nm, usando clorofrmio como branco. Trace a curva padro, registrando os valores de absorvncia nas ordenadas e as concentraes de cafena em mg/100 mL de clorofrmio nas abcissas.

Ficheiro 6 pesquisa Mtodo fsico-qumico para anlise de alimentos do Instituto Adolfo Lutz (2008) igual ao do artigo 3 Reagentes utilizados cafena com pureza de 99%; clorofrmio, grau espectrofotomtrico; soluo redutora pesou-se 5 g de sulfito de sdio e 5 g de tiocianato de potssio, os quais foram dissolvidos em gua e diludos a 100 mL em balovolumtrico; soluo de hidrxido de sdio a 25% m/v; soluo de permanganato de potssio a 1,5% m/v; soluo de cido fosfrico foram diludos 15 mL de cido fosfrico (d=1,69g/cm3) em 85 mL de gua; sulfato de sdio anidro; soluo-padro de cafena foram pesados 100 mg de cafena e diludos em clorofrmio num balo volumtrico de 100 mL. Foi pipetado 10 mL da soluo-estoque de cafena e diludos a 100 mL com clorofrmio. Esta soluo tem a concentrao de 0,1 mg de cafena por mL de clorofrmio.

Procedimento

A quantidade de cafena extrada em cada amostra para todos os casos, foi determinada por espectrofotometria, de acordo o mtodo fsico-qumico para anlise de alimentos do Instituto Adolfo Lutz (2008), sendo determinado em triplicatas para cada amostra. Devido amostras serem muito concentradas pipetou - se de 5 a 2 mL da amostra descarbonatada para um funil de separao, juntamente com 10 mL da soluo de permanganato de potssio a 1,5 % e agitou-se . Aps 5 minutos, foi adicionado 20mL da soluo redutora com agitao contnua. Aps, adicionou-se 2 mL da soluo de cido fosfrico e agitou-se. Foi adicionado 2ml da soluo de hidrxido de sdio a 25 % e agitou se. Extraiu-se a cafena com uma pores de 40 mL de clorofrmio. Aps a separao, foi retirada a camada inferior e filtrou-se em sulfato de sdio anidro e algodo recolhendo-se os filtrados em um becker. Efetuou-se a leitura em um espectrofotmetro Scinco SUV-2120 com cubetas de quartzo a 276 nm, usando clorofrmio como branco.

Curva padro da cafena com clorofrmio Para a realizao da curva-padro foi pipetado 1, 2, 3, 4, 5 e 6 mL da soluo-padro de cafena para bales volumtricos de 50 mL e completou-se o volume com clorofrmio. Estas solues continham, respectivamente, 0,2; 0,4; 0,6; 0,8; 1 e 1,2 mg de cafena por 100 mL de clorofrmio. Foram determinadas as absorvncias dessas solues a 276 nm, usando clorofrmio como branco. Traou-se a curva padro, registrando os valores de absorbncia nas ordenadas e as concentraes de cafena em mg/100 mL de clorofrmio nas abcissas.

Ficheiro 7 pesquisa APOSTILA DAS UNIDADES CURRICULARES: ANLISE INSTRUMENTAL EXPERIMENTAL E ANLISE INSTRUMENTAL EXPERIMENTAL APLICADA BIOPROCESSOS aula experimental cafena e cido benzico

Reagentes Soluo estoque de cido benzico 100 mg L-1 Soluo estoque de cafena 200 mg L-1 Soluo de cido clordrico 0,10 mol L-1 Procedimento A partir da soluo estoque de cido benzico, preparar 100 mL de solues contendo 2, 4, 6, 8 e 10 mg mL-1, em soluo de cido clordrico 0,10 mol L-1. Obs: Adicionar somente 10 mL de soluo de cido clordrico 0,10 mol L-1 a cada balo volumtrico. De maneira similar, preparar 100 mL de solues de cafena contendo 4, 8, 12, 16 e 20 mg mL-1 em soluo de cido clordrico 0,10 mol L-1. Em uma placa de aquecimento, ferver aproximadamente 20 mL de refrigerante em um bquer de 100 mL at eliminao do CO2 e filtrar o lquido quente usando um papel de filtro, para remoo das partculas. Deixar esfriar a temperatura ambiente. Pipetar 4,00 mL de amostra em um balo volumtrico de 100 mL. Adicionar 10,0 mL de soluo de cido clordrico 0,10 mol L-1 e aferir a soluo (Diluio de 1:25). Preparar uma segunda amostra contendo 2,00 mL ao invs de 4,00 mL (Diluio de 1:50) Registar a linha de base do instrumento na faixa de 210 a 350 nm colocando gua nas duas cubetas (amostra e referncia). Registrar o espectro de ultravioleta de cada uma das dez solues padro usando gua na cubeta de referncia e padro na cubeta da amostra. Anotar os comprimentos de onda mximos de absoro do cido benzico e da cafena. Medir a absorbncia de cada padro em ambos os comprimentos de onda e subtrair a absorbncia da linha de base, caso o instrumento no o faa automaticamente. Com base nestes dados, obter a curva analtica de absorbncia versus concentrao de cada um dos compostos em cada um dos dois comprimentos de onda. Obs: Elas devem passar pelo zero. A inclinao da reta a absortividade molar do composto em cada comprimento de onda. Medir o espectro de absoro das amostras de refrigerante nas diluies de 1:50 e 1:25. Com as absorbncias nos dois comprimentos de onda, calcular a concentrao de cido benzico e cafena na amostra original.