TCNICAS BSICAS DE MICROBIOLOGA DE SUELOS

NATALIA ACOMODA INTRODUCCION

PROFESORA: SANDRA RIVAS Universidad de !a"!a P#$a%&n Fa!" 'ad de !ien!ias a(r#$e!"arias In(enier)a a(r#ind"s'ria

LA

RESUMEN La practica tiene como fin el reconocimiento de los diferentes microorganismos presentes en el suelo los cuales juegan un papel crucial en el desarrollo de la flora que crece sobre este. En la primera prueba se realizo el muestreo de un terreno determinado, a partir del cual se realizaron pruebas a partir de las disoluciones seriadas obtenidas de este (10-1,10-3,10-5 10! ". #e realizo la respecti$a siembra de las dos ultimas disoluciones en diferentes medios (%&, '(%, )*&, #+# %,-.&/0 1,E-E#" estos medios inoculados se lle$arona incubaci2n por un periodo de tiempo determinado despu3s de lo cual se 4ndices de di$ersidad de poblaciones del suelo. En la segunda prueba se trabajo un muestras de organismos rizosfericos

obtenidas de los nodulos de raices de algunas plantas los cules se sembraron en medio cr ma INTRODUCCION Los microorganismos son los componentes ms importantes del suelo, constituyen su parte viva y son los responsables de la dinmica de transformacin y desarrollo. La diversidad de microorganismos que se encuentran en una fraccin de suelo cumple funciones determinantes en la transformacin de los componentes orgnicos e inorgnicos que se le incorporan; esto permite comprender su importancia en la nutricin de las plantas al efectuar procesos de transformacin hasta elementos que pueden ser asimilados por sus races; La humificacin de la materia orgnica es un proceso netamente microbiolgico. La microflora del suelo est compuesta

por bacterias, actinomicetos, hongos, algas, virus y protozoarios. Entre las funciones ms importantes que cumplen asociadamente en los procesos de transformacin estn !uministro directo de nutrientes "#i$acin de nitrgeno%. &ransformacin de compuestos orgnicos que la planta no puede tomar a formas inorgnicas que si pueden ser asimiladas "'ineralizacin%. E$emplo (rotena hasta aminocidos y a nitratos. !olubilizacin de compuestos inorgnicos para facilitar la absorcin por las plantas. E$emplo. #osfato triclcico a #osfato monoclcico.

)ambios qumicos en compuestos inorgnicos debido a procesos de o*idacin y reduccin. E$emplo. +*idacin del azufre mineral a sulfato. +*idacin del nitrgeno amoniacal a nitrato. ,umento del desarrollo radicular en la planta que me$ora la asimilacin de nutrientes, la capacidad de campo y el desarrollo. -eacciones parasitismo y fitopatgenos. antagnicas, control de

'e$oramiento de las propiedades fsicas del suelo.

METODOLOGIA DETERMINACION DE POBLACION MICROBIANA DE BACTERIAS *+ONGOS* LEVADURAS , ACTINOMICETOS DEL SUELO , GRUPOS FUNCIONALES

PROCESAMIENTO DE RAICES PARA DETERMINAR PRESENCIA DE MICROORGANISMOS RI-OSFERICOS "Rhizobium y Agrobacterium)

RESULTADOS DETERMINACION DE POBLACION MICROBIANA DE BACTERIAS* +ONGOS* LEVADURAS , ACTINOMICETOS DEL SUELO , GRUPOS FUNCIONALES OBSERVACIONES , CALCULOS )omo no hay placas que contengan entre ./ y .// colonias procedemos de la siguiente manera 0acemos el clculo multiplicando por la inversa de la dilucin y se informa el resultado, e*presndolo por gramo de muestra. En este caso se informa el resultado como estimado. 'E12+ 1E )3L&24+ ,9 #;9 (1, ,)&29+ !-! 1iluciones 5/67 5/67 5 / : 5 < . / . 5 :/ 5/68 / / 5 / / 5/68 / / 5 / / (romedio 5/67 : / :.7 5 5..7 5/68 / / 5 / /

El procedimiento estndar para hallar las unidades formadoras de colonia ufc a partir del conteo de colonias es el siguiente "se traba$a con los promedios calculados para cada disolucin%. (ara el caso del agar nutritivo A(ar N"'ri'iv# DISOLUCION 10 -5

: = 5/67 > :=5/7 ufc?g DISOLUCION 10 5

/ = 5/68 > / ufc?g -ecuento total ":=5/7 @ /%?: > 5=5/7 ufc?g

Los anteriores clculos se realizaron para todas las muestras, con procedimiento anlogo, en los diferentes medios de cultivo; para encontrar la relacin de ufc por gramo de suelo. ,s, de esta manera se obtuvieron los siguientes resultados.

Medi# de !" 'iv# ,9 #;9 (1, ,)&29o'A)E&E! !-! CARACTERISTICAS MORFOLOGICAS

U.! / ( de s"e # Re!"en'# T#'a 5=5/7 / 8.:.=5/7 7=5/B 8.<=5/7

Di "!i0n Medi# De C" 'iv# ,gar 9utritivo

1234 Ca6a 1 Ca6a 7 )olonias de color blancuzco, forma redondeada 9o se observa formacin de colonias similar al anterior

1235 Ca6a 1 9o se observa formacin de colonias 9o se observa formacin de colonias !imilar al anterior totalmente blancas "hongos% 9o se observa formacin de colonias 9o se Ca6a 7 9o se observa formacin de colonias 9o se observa formacin de colonias )olonias de mayor tamaCo de caractersticas similares a la anterior "hongos%. 9o se observa formacin de colonias 9o se observa

#;9

9o se observa formacin de colonias )olonias de diferentes tamaCos, de color amarillo claro y centro blancuzco "hongos%. )olonia homogDneas en su tamaCo "pequeCas% color blanco algunas colonias de

(1,

,)&29+')E&E!

!-!

)olonia ramificada de color blanco "actinomycet es% !imilar al

color cafD y forma circular "bacterias% y otras camarillo cafD ramificadas "hongos%

anterior "hongos%.

observa formacin de colonias

formacin de colonias

ANALISIS DE RESULTADO La actividad de los microorganismos es muy importante para la transformacin y la vida de los suelos. Las bacterias y los hongos participan en los ciclos del carbono, nitrgeno, azufre, fsforo y en la incorporacin del potasio y el magnesio, entre otros, para su asimilacin por los vegetales. 1e acuerdo a los clculos realizados se pude ver que tanto hongos como bacterias tienen una buena representacin en el suelo analizado. Medi# A(ar N"'ri'iv# La siembra realizada sobre el agar nutritivo dio como resultado el crecimiento solo de bacterias, ya que este tipo de micro organismo hetertrofos son capases de metabolizar compuestos carbonados comple$os para su uso como. En la muestra de suelo analizada se calculo una cantidad nimia de crecimiento bacteriano Medi# PDA !e obtuvo solo crecimiento de poblaciones de hongos, esto se debe a que Los hidratos de carbono y la infusin de papa favorecen la esporulaci2n de este tipo de microorganismos en tanto que por el ba$o rango de p0, la flora acompaCante se reduce significativamente. Medi# FBN El nitrgeno es un compuesto qumico esencial para el crecimiento de las plantas y El fsforo es un nutriente esencial para el crecimiento y desarrollo de las plantas en todas sus etapas, sin embargo es un elemento poco disponible para su absorcin. Las plantas toman desde soluciones de fosfato encontradas en el suelo, pero al ser tan reactivo la mayora de este queda inmovilizados con otros elementos del suelo como son el )a:@ y 'g:@ en suelos alcalinos y #e.@ y ,l.@ en suelos cidos. (or lo tanto el ( es altamente insoluble y sntesis de aminocidos corresponde cerca del EB por ciento del total del aire atmosfDrico , sin embargo su disponibilidad para las plantas esta limitada por la dificulta que conlleva su asimilacion. El proceso de fi$acin del 9: atmosfDrico, es decir, la reaccin del 9: con otros elementos para formar un compuesto qumico que lo contenga, puede lograrse mediante mDtodos biolgicos gracias a que algunos microorganismos procariotas "bacterias y cianobacterias% tiene la capacidad de atrapar y aprovechar el nitrgeno de la atmsfera, es decir, de llevar a cabo el proceso de fi$acin biolgica de nitrgeno "#;9%. En la muestra de suelo analizada no hubo crecimiento de este tipo de microorganismo de lo que se puede inferir que en la misma escaseaba este elemento en forma de diferentes compuestos quimicos Medi# SRS

una ba$a proporcin del ( total, esta disponible para las plantas. E*isten microorganismos que se encargan de solubilizar los fosfatos presentes en el suelo para liberar fsforo inorgnico 1ebido a las caractersticas de las colonias analizadas despuDs del sembrado e incubacin podemos concluir que en esta se hallaban tanto hongos "posiblemente Aspergillus ,Trichoderma ,Cladosporium, usarium% como bacterias "posiblemente !acillus,"#$ero%ac$er,"r&i#ia,'seudomo# as, (hi)o%ium, Serra$ia% Medi# A!'ini8%!e'es Los actinomycetes son microorganismos que se parecen a los hongos y a las bacterias. )recen a manera de micelio radial, forman conidias como los hongos pero las caractersticas morfolgicas de sus cDlulas son similares a las de las bacterias. !e encuentran en el suelo, las aguas estancadas, el lodo y los materiales orgnicos en degradacin. !e nutren de materiales orgnicos "hetertrofos%. 1egradan desde azFcares simples, protenas, cidos orgnicos hasta substratos muy comple$os compuestos por hemicelulosas, ligninas, quitinas y parafinas. (or esto son importantes en el proceso de transformacin hasta la obtencin del humus en el suelo. ,dems son considerados como los me$ores agregadores del suelo, pues son muy eficientes produciendo sustancias hFmicas. En suelos bien aireados con alto contenido de materia orgnica alcanzan poblaciones muy altas. )onstituyen del 5/ al 7/G de la comunidad microbiana del suelo. !e desarrollan bien en suelos con p0 desde 7 hasta <. !e reproducen por conidias y estas son resistentes a condiciones difciles de temperatura, acidez y humedad. Esto les permite germinar cuando se restablecen las condiciones favorables para su desarrollo.

En suelos secos los actinomicetos se comportan muy bien. Los gDneros de actinomicetos del suelo ms importantes para la nutricin de las plantas son S$rep$om*ces, Nocardia, +icromo#ospora, Thermoac$i#omices, ra#,ia y Ac$i#om*cesEn la muestra analizada se pudo observar colonias que presentaban caractersticas muy similares a las de los hongos, pero teniendo en cuenta las caractersticas descritas anteriormente y que el medio era especifico para cierto tipo de microorganismos, se los clasifico como actinomycetes. &ambiDn se observaron colonias de otras especies de bacterias, pero en menor proporcin. PROCESAMIENTO DE RAICES PARA DETERMINAR PRESENCIA DE MICROORGANISMOS RI-OSFERICOS

En el entorno adacente a las raices de la planta e*iste gran diversidad en cuanto a microorganismos debidos esencialmente a la cantidad de nutrimentora e*udados por las raices de la lanta, provenientes de la fotosntesis. La rizfora es un nicho localizado en el terreno ba$o la palanta alrededor de sus raices que se encuenta influido bioqumicamente por estas, donde proliferan y compiten los micro orga6 nismos; algunos micro organismos en la rizfora son benDficos para la planta por que la ayudan a transportar nutrimentos, producen hormonas o contribuyen al control de patgenos. Las plantas depositan una gran variedad de compuestos orgnicos en la rizfora , proceso conocido como rizo deposicin, entre estos se encuentran compuestos que no requieren de energa

metablica para ser liberados , como azucares ,aminocidos, flavonoides etc; estos compuestos son usados por los microorganismos como substrato para el crecimiento , tanto por los patgenos "agro%ac$erium%, como por los benDficos "rhizobium, ,zospirillum, micorrizas%. !e especula toamando como base informacin bibliografica que el crecimiento de micro organismos en cultivo obedece a bacterias del genero rhi)ho%ium- )olor rosado al interior del ndulo evidencia la presencia de legemoglobina y una fi$acin de nitrgeno activa las colonias eran 9od CONCLUSIONES (odemos concluir que la poblacin microbiana encontrada en el suelo es pobre debido a la poca proliferacin de micro organismos cultivados y conteo e*igua de colonias en comparacin con los datos bibliogrficos.

BIBLIOGRAFIA

!tanier A. -oger, ,delberg ,. EdHard, 2ngraham L. Iohn, 'icrobiologa, versin espaCola actualizada de la Ba edicin de J&he 'icrobial KorldL, Editorial -evertD, !.,. 5MEB.