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UNIVERSIDADE ESTADUAL DO MARANHO


CENTRO DE CIENCIAS AGRRIAS
MESTRADO EM CIENCIA ANIMAL

ESTUDO EPIDEMIOLGICO E VIROLGICO DAS LENTIVIROSES DE


PEQUENOS RUMINANTES (LVPR) NA MESORREGIO DO OESTE
MARANHENSE, BRASIL.

PATRICK ASSUNO MOURO

So Lus - MA
2013

PATRICK ASSUNO MOURO

ESTUDO EPIDEMIOLGICO E VIROLGICO DAS LENTIVIROSES DE


PEQUENOS RUMINANTES (LVPR) NA MESORREGIO DO OESTE
MARANHENSE, BRASIL.

Dissertao apresentada ao programa de Psgraduao em Cincia Animal como requisito


parcial para obteno do grau de Mestre em
Cincia Animal.
rea: Medicina Veterinria Preventiva
Orientadora: Prof. D. Sc. Ana Lucia Abreu Silva
Co-orientadora: Prof. D. Sc. Michele Moreira Martins Oliveira

So Lus - MA
2013

MOURO, Patrick Assuno


Estudo epidemiolgico e virolgico das lentiviroses de pequenos
ruminantes (LVPR) na mesorregio do oeste maranhense, Brasil / Patrick
Assuno Mouro - So Lus, 2013.
...f
Dissertao (Mestrado). Ps-graduao em Cincia Animal, Universidade
Estadual do Maranho, 2013.
Orientador: Prof. D. Sc. Ana Lcia Abreu Silva
1. Lentivrus de pequenos ruminantes (LVPR). 2. Perfil soro
epidemiolgico. 3. Cultura de clulas e isolamento viral. I.Ttulo
CDU: 000.0:000.000.00

Dissertao de Mestrado defendida e aprovada em 27/05/2013 pela banca examinadora


composta pelos seguintes membros:

___________________________________________
Prof. D. Sc. Ferdinan Almeida Melo...
Universidade Estadual do Maranho
1 Membro

___________________________________________
Prof. D. Sc .Hamilton Pereira Santos...
Universidade Estadual do Maranho
2 Membro

___________________________________________
Prof. D. Sc. Michele Moreira Martins Oliveira
Faculdade de Imperatriz FACIMP
Co-orientadora

___________________________________________
Prof. D. Sc. Ana Lucia Abreu Silva
Universidade Estadual do Maranho
Orientadora

minha famlia, amigos e mestres.

AGRADECIMENTOS

A Deus, que sempre abenoou a minha vida;


A Universidade Estadual do Maranho que possibilitou a realizao de um sonho.

RESUMO
ESTUDO EPIDEMIOLGICO E VIROLGICO DAS LENTIVIROSES DE
PEQUENOS RUMINANTES (LVPR) NA MESORREGIO DO OESTE
MARANHENSE, BRASIL. . MOURO, P. A.; ABREU SILVA, A. L. 2013. __ f.
Dissertao de Mestrado Universidade Estadual do Maranho, So Luis, 2013.

O presente estudo foi avaliado os perfis sanitrio e epidemiolgico das Lentiviroses de


pequenos ruminantes (LVPR) na Mesorregio do Oeste Maranhense, microrregio de
Imperatriz. Com esta finalidade, foi aplicado questionrio em 57 propriedades de 14
municpios da regio estudada, totalizando 710 amostras (THRUSFIELD, 2004). Alm
disso, realizou-se o estudo sorolgico por meio da deteco de anticorpos anti-LVPR
pelo teste de imunodifuso em Gel de Agarose (IDGA) (ABREU et al., 1998) e o cocultivo por meio da inoculao das clulas de cultura primria em garrafas de cultivo de
leuccitos de animais comprovadamente infectados. A associao entre o manejo
adotado nas criaes e a ocorrncia das lentiviroses foram testadas utilizando o teste de
Qui-quadrado (2), sendo ainda calculada a razo de odds (OR) com intervalo de
confiana de 95% utilizando-se programa Statistical Package for Social Science for
Windows (SPSS), verso 20. Os resultados mostraram ocorrncia de miases em
78,90% dos rebanhos, linfadenite caseosa (59,6%), pododermatite (47,40%), aborto
(43,90%), mamite (31,60%), entre outros como pneumonia e artrite. Em relao s
prticas bsicas de manejo sanitrio foi constatado que estas so ignoradas pelos
produtores. A prevalncia das lentiviroses de pequenos ruminantes foi de 7,5% dos
ovinos e 7,4% dos caprinos. Dentre os 14 municpios avaliados, 12 apresentam animais
positivos para LVPR, o que caracteriza o vrus circulante nas propriedades avaliadas. A
tcnica de cultivo de leuccitos com posterior co-cultivo foi eficaz no isolamento do
vrus, demonstrando efeito citoptico das amostras positivas analisadas.
Palavras-Chave:

Lentivrus de pequenos ruminantes (LVPR); perfil


epidemiolgico; cultura de clulas e isolamento viral.

soro

ABSTRACT
EPIDEMIOLOGIC AND VIROLOGICAL STUDY OF LENTIVIRUSES (SRLV)
IN SMALL RUMINANT) FROM THE WEST MESOREGION MARANHENSE,
BRAZIL. MOURO, P. A.; ABREU SILVA, A. L. 2013. __ f. Dissertation (Master in
Animal Science) Universidade Estadual do Maranho, So Luis, 2013.

SUMRIO
Pgina
1. INTRODUO

12

2. JUSTIFICATIVA

14

3. OBJETIVOS
3.1 Objetivo Geral
3.2 Objetivos especficos

15
15
15

4. REVISO DE LITERATURA
4.1 Lentiviroses de Pequenos Ruminantes (LVPR)
4.2 Estrutura viral dos Lentivrus de caprinos e ovinos
4.3 Epidemiologia
4.4 Patogenia
4.5 Imunologia
4.6 Infeco in vivo e in vitro
4.7 Transmisso
4.8 Sinais Clnicos
4.9 Diagnstico
4.10 Medidas de Controle

16
16
17
20
23
24
25
27
30
32
35

5. MATERIAL E MTODO
5.1 Marco amostral
5.2 Aplicao dos questionrios
5.3 Amostra e Prevalncia
5.4 Estudo Sorolgico
5.4.1 Clculo de Prevalncia
5.5 Cultivo Celular e Isolamento Viral
5.6 Anlises Estatsticas

38
38
39
39
40
41
42
43

6. RESULTADOS

44

6.1 Inqurito soroepidemiolgico para Lentiviroses de Pequenos


Ruminantes
6.2 Cultura de clulas e isolamento viral

44
51

7 DISCUSSO

52

8 CONCLUSES

57

REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS

58

APNDICE

75

10

LISTA DE TABELAS
Pgina
TABELA 01. Doenas causadas por Lentivrus.

16

TABELA 02. Ocorrncia sorolgica do vrus da artrite-encefalite Caprina


(CAEV) em levantamentos realizados no Brasil

22

TABELA 03. Teste de Imunodifuso em Gel de Agarose (IDGA) para


Lentivrus de Pequenos Ruminantes (LVPR) de animais da microrregio de
Imperatriz, MA

44

TABELA 04. Associao entre fatores predisponentes infeco por


lentivrus e a presena de pequenos ruminantes positivos no teste de
Imunodifuso em Gel de Agarose em 57 propriedades da microrregio de
Imperatriz MA

48

TABELA 05. Associao entre a realizao de algumas prticas zoosanitrias


e presena de animais positivos para Lentivrus de Pequenos Ruminantes
(LVPR) em 57 propriedades da microrregio de Imperatriz MA
49

11

LISTA DE FIGURAS
Pgina
FIGURA 01. Estrutura das partculas virais, apresentando a localizao das
principais protenas: transcriptase reversa (RT), capsdeo (CA),
transmembranar (TM), protena de superfcie (SU) e nucleoprotena (adaptado
de COFFIN, 1996).

20

FIGURA 02. Ciclo de replicao dos retrovrus demonstrando as etapas desde


a adsoro da partcula viral clula hospedeira at o remonte e brotamento de
novas partculas virais (OLIVEIRA, 2007).

FIGURA 03. Mapa da microrregio de Imperatriz MA.

38

FIGURA 04. Venopuno jugular utilizando tubo tipo vaccutainer sem


anticoagulante.

40

FIGURA 05. Clulas epiteliais de crnea

43

FIGURA 06. Co cultivo de crnea e leuccitos

44

FIGURA 07. Prevalncia de Lentivrus em Pequenos Ruminantes (LVPR) em


caprinos e ovinos testados pela Imunodifuso em Gel de Agarose (IDGA) na
microrregio de Imperatriz, MA

45

FIGURA 08. Frequncia de propriedades positivas para Lentivrus de


Pequenos Ruminantes (LVPR) em caprinos e ovinos testados pela
Imunodifuso em Gel de Agarose (IDGA), por municpio da microrregio de
Imperatriz MA

46

FIGURA 09. Problemas sanitrios de caprinos e ovinos em propriedades da


microrregio de Imperatriz, MA
FIGURA 10. Frequncia das prticas zoosanitrias frequentemente adotadas
nas 57 propriedades estudadas localizadas na microrregio de Imperatriz
MA.

50

51

FIGURA 11. Co cultivo de leuccitos apresentando formao de sinccios


corados com cristall de violeta a 0,1%.

52

FIGURA 12. Co cultivo de leuccitos apresentando formao de sinccios


corados com cristall de violeta a 0,1%.

52

12

LISTA DE ABREVIATURAS E SMBOLOS

1. FAO
2. IBGE - Instituto Brasileiro de Geografia e Estatstica
3. PPM 4. LVPR - lentiviroses de pequenos ruminantes
5. MVV - vrus maedi-visna
6. CAEV vrus artrite-encefalite caprina
7. IDGA - Imunodifuso em Gel de Agarose
8. OIE - Organizao Mundial para Sade Animal
9. MAPA - Ministrio da Agricultura, Pecuria e Abastecimento
10. PNSCO - Programa de Sanidade Caprina e Ovina
11. PNVCLVPR - Plano Nacional de Vigilncia e Controle de Lentiviroses de
Pequenos Ruminantes
12. AIDS - vrus da imunodeficincia adquirida
13. FIV - imunodeficincia felina
14. SIV - imunodeficincia dos macacos
15. MSC - membrana sinovial caprina
16. RIFI - Imunofluorecncia Indireta
17. PCR - reao em cadeia da polimerase
18. MEM - meio essencial mnimo de Eagle
19. SFB - soro fetal bovino
20. BVD vrus da diarreia viral bovina
22. OR - razo de odds
23 . SPSS - Statistical Package for Social Science for Windows

13

1. INTRODUO
Os pases em desenvolvimento detm aproximadamente 95% dos rebanhos
de caprinos e ovinos no mundo, refletindo o importante papel econmico e social para
populaes de baixa renda (FAO, 2008).
Segundo dados do Instituto Brasileiro de Geografia e Estatstica (IBGE,
2011), o efetivo brasileiro de caprinos de, aproximadamente, 9,3 milhes de cabeas.
O principal efetivo encontra-se localizado no Nordeste do Pas (91,2%). A Bahia o
grande estado produtor de caprinos no Brasil, detendo 29,2% do efetivo nacional. O
rebanho nacional de ovinos est estimado em 17,6 milhes de cabeas, sendo o maior
efetivo do rebanho na regio Nordeste e o estado do Rio Grande do Sul, na regio Sul, o
detentor dos maiores rebanhos de ovinos.
No estado do Maranho a principal atividade pecuria a criao de
bovinos com um rebanho estimado em, aproximadamente, 7,2 milhes de cabeas
(PPM, 2011). Neste estado a criao de caprinos e ovinos corresponde a 369.450 e
231.348, respectivamente, e segundo dados do Instituto Brasileiro de Geografia e
Estatstica (IBGE) ocorreu queda de 0,99% no rebanho caprino e aumento de 0,76% no
rebanho ovino em relao ao ano de 2010.
A criao de caprinos caracteriza-se, na maioria das vezes, pelo baixo uso
de tecnologia, o que facilita a prevalncia de doenas infecciosas, parasitrias e
nutricionais, dificultando a expanso da atividade. Dentre as doenas j identificadas
nos rebanhos brasileiros destacam-se alguns agentes considerados exticos como o
vrus da lngua azul, Brucella ovis e os lentivrus de pequenos ruminantes (LVPR)
(SOUZA et al., 2010; SOUZA, 2011; MARTINEZ et al., 2011) que compreende vrios
isolados distribudos, basicamente, em dois grupos filogenticos, cujos prottipos so os
vrus Maedi-Visna (MVV) que acometem ovinos e Artrite-encefalite Caprina (CAEV)
em caprinos (VALAS et al., 1997; CASTRO et al., 1999a; VALAS et al., 2000).
Os LVPR so responsveis por causarem enfermidades infectocontagiosas e
acometem animais de todas as idades, sexo ou da raa, e tm como principais sinais
clnicos a artrite, encefalite, mamite e com menor frequncia problemas respiratrios
(FRANKE, 1998). Essas enfermidades levam o animal a apresentar uma queda

14

acentuada na produo podendo comprometer a rentabilidade da atividade na


explorao destes animais (PINHEIRO, 1989).
A principal forma de transmisso dos LVPR a vertical, que ocorre por
meio da ingesto de colostro e leite contaminados, favorecida pela permeabilidade
intestinal dos animais recm-nascidos (ADAMS et al., 1983; HOUWERS e VAN DER
MOLEN, 1987). A transmisso materna fetal dos LVPR, mesmo que com baixa
incidncia, indicada podendo ocorrer por meio da transmisso intrauterina e a
transmisso no canal vaginal no momento do parto, mediante a ingesto ou inalao de
clulas infectadas pelas crias (SILVA & LIMA, 2007; KONISH et al., 2011). Esta
hiptese foi reforada por FIENI et al., (2003), que sugeriram que a presena de clulas
infectadas por CAEV no tero e tubas uterinas. A transmisso tambm pode ocorrer
pelo contato direto prolongado e por meio de outras fontes de infeco como sangue,
fezes, saliva e secrees urogenitais. Quando caprinos no infectados so confinados
com caprinos infectados por longo perodo h soroconverso de nmero significativo de
animais (NORD et al., 1998; PUGH, 2004). Transmisso por meio do aerossol, contato
animal-animal e a atividade sexual podem igualmente ocorrer (LEITNER et al., 2010).
O vrus tambm j foi identificado no smen de animais infectados, representando assim
uma possibilidade de transmisso pela monta natural ou inseminao artificial
(ANDRIOLI et al., 2006).
A forma de diagnstico dos LVPR mais empregada a sorologia, por meio
da realizao do teste de Imunodifuso em Gel de Agarose (IDGA), preconizado pela
Organizao Mundial para Sade Animal (OIE) e classificada como teste de triagem. O
teste de IDGA eficiente para CAEV e Maedi-Visna devido semelhana antignica
que estes possuem (CRAWFORD et al., 1980). um teste de fcil execuo e leitura,
exigindo poucos equipamentos; apresenta alta especificidade e sensibilidade variada
dependendo do tipo de antgeno usado.
De acordo com os dados do IBGE (2011) a queda no efetivo de rebanho de
caprinos e o lento desenvolvimento do rebanho de ovinos pode ser explicado por
problemas advindos da m implantao dos manejos alimentar, higinico-sanitrios e
reprodutivos, que possibilitam a entrada de patgenos causadores de doenas como, por
exemplo, as lentiviroses de pequenos ruminantes (LVPR).

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So escassos os dados sobre a prevalncia dos LVPR no rebanho de


caprinos e ovinos do Estado do Maranho. Pelo exposto, este trabalho tem por objetivo
estimar a prevalncia dos lentivrus de pequenos ruminantes no rebanho de ovinos e
caprinos da Mesorregio Oeste do Estado do Maranho, microrregio de Imperatriz.

2. JUSTIFICATIVA
No Brasil, os rebanhos caprino e ovino, representam 26,9 milhes de
cabeas (IBGE, 2011). Os maiores plantis nacionais esto nas Regies Sul e Nordeste,
que, juntas, possuem 94,6% do rebanho caprino nacional e 85,2% do rebanho ovino
nacional (IBGE, 2011). No estado do Maranho o rebanho de caprinos e ovinos
representam 3,9% e 1,3%, respectivamente, da criao nacional. A Microrregio de
Imperatriz apesar de apresentar condies geoclimticas favorveis criao de
caprinos e ovinos apresenta uma populao pequena destes animais, sendo estimada em,
aproximadamente, 7.550 caprinos e 35.219 ovinos (IBGE, 2011). No estado do
Maranho a criao dessas espcies vem diminuindo o que, possivelmente, pode ser
explicado pela queda da produo e da produtividade destes rebanhos, causada por
problemas advindos da m implantao dos manejo alimentar e higinico-sanitrios,
que possibilitam a entrada de patognos causadores de doenas como por exemplo as
lentiviroses de pequenos ruminantes (LVPR). As lentiviroses so causadas por RNAvrus pertencentes famlia Retroviridae que apresenta tropismo por clulas do sistema
monoctico-fagocitrio. Aproximadamente 25% dos caprinos e ovinos infectados com
LVPR podem desenvolver artrite, sobretudo da articulao carpo-metacarpiana,
encefalomielites,

emagrecimento,

mastite

complicaes

respiratrias,

como

pneumonia (NARAYAN et al., 1980; CRAWFORD e ADAMS, 1981). No Brasil, os


LVPR ocorrem em altas prevalncias em rebanhos caprinos leiteiros especializados
criados intensivamente. Como no existe tratamento e nem vacina, o controle das
lentiviroses realizado pela adoo de medidas de manejo que diminuam o risco de
transmisso do vrus. O Ministrio da Agricultura, Pecuria e Abastecimento (MAPA)
criou um Programa de Sanidade Caprina e Ovina (PNSCO) (BRASIL, 2004a) que
contempla um Plano Nacional de Vigilncia e Controle de Lentiviroses de Pequenos
Ruminantes (PNVCLVPR) (BRASIL, 2004b). Este Plano foi elaborado com os

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objetivos de controlar ou erradicar a doena, certificar criaes livres, promover a


educao sanitria e agregar valor aos produtos da ovinocaprinocultura.

3. OBJETIVOS
3.1 Objetivo Geral
Avaliar as condies scio-econmicas, de manejo alimentar e higinicosanitrio, bem como, realizar o diagnstico das lentiviroses de pequenos ruminantes, em
criaes de caprinos e ovinos em 14 municpios da microrregio de Imperatriz - MA.
3.2 Objetivos especficos
Realizar aplicao de questionrio para o reconhecimento das condies de
manejo higinico-sanitrio, reprodutivo e alimentar, nas criaes de
caprinos e ovinos na regio estudada;
Realizar diagnstico sorolgico por meio da tcnica de Imunodifuso em Gel de
Agarose para Lentivrus de Pequenos Ruminantes (LVPR) nos caprinos e
ovinos amostrados;
Estabelecer cultura de clulas primrias de crnea, plexo coride e membrana
sinovial ovina e caprina de fetos;
Isolar vrus de animais suspeitos nas culturas de clulas anteriormente
estabelecidas para observar efeito citoptico.

4. REVISO DE LITERATURA
4.1 Lentiviroses de Pequenos Ruminantes (LVPR)
Os pequenos ruminantes podem ser infectados por um grupo de lentivrus,
genericamente denominados de Lentivrus de Pequenos Ruminantes (LVPR), que
compreende vrios isolados distribudos, basicamente, em dois grupos filogenticos,

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cujos prottipos so os vrus Maedi-Visna (MVV) e Artrite-encefalite Caprina (CAEV)


(CALLADO et al., 2001).
As lentiviroses so nomeadas com base na espcie hospedeira naturalmente
parasitada por estes agentes e incluem humanos, smios, gatos, bovinos, eqinos, ovinos
e caprinos (Tabela 01). Em seus hospedeiros o vrus provoca infeco em clulas da
linhagem monoctica-fagocitria e, alm disso, causa infeco em subpopulaes de
linfcitos. Estes vrus compartilham similaridades estruturais e biolgicas com outros
lentivrus como, por exemplo, o vrus da imunodeficincia adquirida (AIDS),
imunodeficincia felina (FIV), a imunodeficincia dos macacos (SIV) (CLEMENTES e
PAYNE, 1994). Estes vrus causam infeco de macrfagos e linfcitos T, uma
combinao que leva profunda imunossupresso do hospedeiro (NARAYAN et al.,
1983).

TABELA 01 - Doenas causadas por Lentivrus.


Nome do Vrus
Abreviatur

Hospedeiro

Tropismo

Vrus da anemia infecciosa equina


Vrus da maedi-visna
Vrus da artrite-encefalite caprina
Vrus da imunodeficincia felina

a
AIEV
MVV
CAEV
FIV

Equinos
Ovinos
Caprinos
Felinos

Macrfagos
Macrfagos
Macrfagos
T-

Vrus da imunodeficincia bovina

BIV

Bovinos

CD4+/Macrfagos
T-

Vrus da imunodeficincia smia

SIV

Primatas

CD4+/Macrfagos
T-

Humanos

CD4+/Macrfagos
T-

Vrus da imunodeficincia

HIV 1/2

humana
Fonte: Tavares e Pereira (1999).

CD4+/Macrfagos

4.2 Estrutura viral dos Lentivrus de caprinos e ovinos


Maedi-Visna e CAEV, como todos os membros da famlia Lentivrus, so
partculas envelopadas de 80-100 nm (NARAYAN, 1980). O vrus pouco resistente s
condies ambientais, sendo o calor a 56C suficiente para inativar o vrus em secrees
como colostro e leite de animais infectados (ADAMS et al., 1983). Tambm so
sensveis ao de diversos produtos qumicos em virtude da frgil estrutura do seu

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envelope lipoprotico, sendo facilmente inativados por fenis, detergentes, compostos


quaternrios de amnio, formalina e hipoclorito (SILVA, 2007).
Os lentivrus so vrus envelopados (Figura 1). A partcula viral composta
pelos produtos do gene Gag, Pol, Env e pelo RNA genmico. O gene Gag (antgeno
grupo-especfico) codifica protenas estruturais internas. O gene pol (polimerase)
codifica as enzimas transcriptase reversa e integrase. O gene env (envelope) codifica
glicoprotenas-transmembrana e de superfcie do envelope. H tambm os genes que
regulam a expresso do genoma viral (tat, rev e vif). O vrus ainda apresenta no seu
envelope uma glicoprotena importante, a gp135, e no capsdeo, a p28, que induzem a
formao de anticorpos nos animais infectados. Apresentam uma grande quantidade de
cido silico na superfcie do vrus, o qual protege a protena viral da digesto das
proteases e de uma rpida neutralizao viral por anticorpos (QUINN et al., 2005;
ICTV, 2009).
Mediante a transcrio reversa, o RNA genmico da origem ao DNA
proviral, o qual se integra ao genoma das clulas-alvo (moncitos e macrfagos), sendo
que a replicao ocorre preferencialmente em algumas populaes de macrfagos
teciduais, resulta na produo e excreo do vrus infeccioso no leite e provavelmente
secrees respiratrias (Figura 2) (SILVA, 2005).
Os lentivrus compartilham trs caractersticas gerais que promovem a
persistncia da infeco em seus hospedeiros. Primeiro, aps a transcrio reversa do
RNA viral nas clulas infectadas, o DNA pr-viral se integra no genoma celular,
permitindo que o vrus escape dos mecanismos de defesa do hospedeiro e preserve o seu
genoma; segundo, os lentivrus se multiplicam em clulas do sistema imunolgico,
normalmente responsveis pela eliminao de clulas infectadas, assim, o hospedeiro
no consegue desenvolver resposta imunolgica curativa. Alm disso, a restrio da
expresso viral, sem produo de partculas virais, permite que as clulas infectadas
pelo vrus escapem do sistema imunolgico (NARAYAN et al., 1980); Terceiro, esses
vrus acumulam alta taxa de mutao durante o processo de replicao, devido a falhas
da transcriptase reversa em corrigir as novas seqncias de nucleotdeos, resultando em
variabilidade gentica e, consequentemente fenotpica, que permite escapar do sistema
imunolgico do hospedeiro (CHEEVERS et al., 1993).

19

Protease (PR)
Matriz (MA)

Envelope

Integrase (IN)
RNA
genmico

Nucleoproten
a (NP)
Protena de
Superfcie
(SU)
Transcriptase
Reversa (RT)
Adsoro

Transcriptase
reversa

Capsdeo
(CA)
RNA

Protena
Transmembranar
(TM)
DNA Viral

80 - 100nm
DNA pr-viral
Transcrio

FIGURA 01 Estrutura das partculas virais, apresentando a localizao das principais


protenas: transcriptase reversa (RT), capsdeo (CA), transmembranar (TM), protena de
superfcie (SU) e nucleoprotena (adaptado de COFFIN, 1996).

Protenas

Vrus livre

Remonte e brotamento
das partculas virais

RNA m
Traduo

20

FIGURA 02 Ciclo de replicao dos retrovrus demonstrando as etapas desde a


adsoro da partcula viral clula hospedeira at o remonte e brotamento de novas
partculas virais (OLIVEIRA, 2007).

4.3 Epidemiologia
O reconhecimento da Maedi-Visna provavelmente remonta a 1915, quando
uma pneumonia intersticial progressiva foi relatada em ovinos da frica do Sul. Uma
sndrome similar foi posteriormente notificada em ovinos de Montana em 1923
(PASSICK, 1998 apud MARSH, 1923). No entanto, somente aps uma epidemia de
pneumonia e paralisia progressiva, envolvendo ovinos da Islndia entre 1939 e 1952,
que esta doena recebeu maior ateno. A origem deste surto foi rastreada, indicando a

21

importao de ovinos caracul da Alemanha em 1931. O agente etiolgico foi finalmente


isolado do pulmo de uma ovelha com pneumonia intersticial progressiva em 1967
(SIGURDSON, 1960).
Em contraste com Maedi-Visna, CAEV uma das mais recentemente
reconhecidas sndromes de caprinos. Foi descrita pela primeira vez em meados dos anos
1970, no noroeste dos Estados Unidos, na sequncia de uma leucoencefalomielite
acompanhada de uma pneumonia intersticial sub-clnica em caprinos jovens
(CRAWFORD, 1980). Em retrospectiva, este surto provavelmente no resultou na
introduo repentina de um novo vrus, mas a partir de mudanas nas prticas de gesto,
facilitaram a propagao de um vrus anteriormente existente. O vrus da artriteencefalite caprina posteriormente foi isolado a partir da membrana sinovial de uma
cabra

adulta

com

artrite

num

rebanho

com

uma

elevada

incidncia

de

leucoencefalomielite. Ambas as doenas so atualmente reconhecidas como tendo uma


distribuio mundial (CRAWFORD, 1980).
Logo em 1981, lentivrus de ovinos e caprinos foram reconhecidos como
tendo reao imunolgica cruzada (PASSICK, 1998 apud DAHLBERG, 1981).
Relatrios posteriores confirmaram que MVV e CAEV tm pelo menos um eptopo em
comum em cada uma das suas protenas estruturais. Apesar das provas que demonstram
que MVV e CAEV esto estreitamente relacionados antigenicamente, ele tambm foi
reconhecido que ambos os vrus tm a capacidade de sofrer significativa variao
antignica no mesmo animal infectado. (McGUIRE, 1988).
Os inquritos epidemiolgicos demonstram que a infeco est disseminada
na maioria das reas do mundo, como a Europa, Amrica do Norte, frica, Oceania e
Amrica do Sul, com diferenas na prevalncia entre os pases; menor prevalncia nos
pases desenvolvidos, pois no importam animais do tipo leiteiro da Amrica do Norte
ou da Europa (RADOSTITS et al., 2002).
No Brasil, tem sido registrada a ocorrncia de animais soropositivos em
vrios estados (CALLADO et al., 2001). O primeiro registro sorolgico da CAE e o
primeiro isolamento do vrus foram realizados no Rio Grande do Sul e, j se sabe que o
vrus se encontra bastante disseminado por todo pas, principalmente nos estados de So
Paulo e Minas Gerais (Tabela 2).

22

TABELA 02 - Ocorrncia sorolgica do vrus da artrite-encefalite Caprina (CAEV) em


levantamentos realizados no Brasil
Estado
Piau
Cear
Cear
Rio Grande do Norte
Paraba
Paraba
Pernambuco
Pernambuco
Pernambuco
Sergipe
Bahia
Bahia
Bahia
Bahia
Bahia
Bahia
Rio de Janeiro
Rio de Janeiro
Minas Gerais
Minas Gerais
So Paulo
So Paulo
So Paulo
Santa Catarina
Rio Grande do Sul
Gois
Tocantins
Fonte: LIMA, 2012.

N de
amostras
360
248
4019
420
270
600
397
1344
672
47
692
1605
245
3146
343
150
242
562
1294
2350
125
1030
275
253
67
29
843

Ocorrncia
(%)
2,5
40,73
1
11
2,2
8,2
17,6
22,99
3,8
4,25
29,2
13,4
21,63
0,73
8,75
0
21,07
14,1
0,3
5,9
48,8
43,01
34,93
6,72
6
34,5
2,7

Autores
Batista et al. (2004)
Melo & Franke (1997)
Pinheiro et al. (2001a)
Silva et al. (2005)
Castro et al. (2002)
Bandeira et al. (2008)
Saraiva Neto et al. (1995)
Callado et al. (2003)
Oliveira et al. (2006a)
Melo et al. (2003)
Ramalho (2000)
Almeida et al. (2001)
Edelweis et al. (2001)
Oliveira et al. (2006b)
Torres et al. (2009)
Lima et al., 2009
Cunha & Nascimento (1995)
Lilembaun et al. (2007)
Yorinori (2001)
Gouveia et al. (2003)
Garcia et al. (1992)
Leite et al. (2004)
Madureira & Gomes (2007)
Sell (2000)
Moojen et al. (1986)
Santin et al. (2002)
Sobrinho et al. (2010)

4.4 Patogenia
A idade, raa e o sexo dos animais parecem no intervir na sua
suscetibilidade frente ao CAEV (ROWE e EAST, 1997), porm outros fatores como
estresse, as infeces bacterianas e virais concomitantes podem aumentar o risco da

23

infeco (ZINK et al., 1987). Existindo a possibilidade de alguns animais infectados


poderem expressar mais o vrus do que outros (ADAMS et al., 1983).
Os LVPR so introduzidos no organismo dos animais susceptveis
geralmente por via digestiva ou respiratria (HUSSO et al., 1988). Em seguida o vrus
infecta as clulas do sistema monoctico-fagocitrio, produzindo a infeco persistente
do hospedeiro. Os mecanismos desenvolvidos pelos lentivrus para persistncia da
infeco frente a resposta imune incluem: capacidade dos moncitos de conter pro-vrus
integrado em seu genoma sem ser detectado pelo sistema imune pois a expresso do
gene viral s ativada quando os moncitos maturam para macrfagos (BRODIE et al.,
1995); capacidade de infectar persistentemente macrfagos, sem causar lise celular,
podendo disseminar o vrus no prprio hospedeiro, sem a produo de partculas virais,
por meio do contato com outras clulas (NARAYAN et al., 1983); interrupo do ciclo
viral pelo processamento incompleto da SU (CHEBLOUN et al., 1996); replicao de
variantes antignicos na presena de anticorpos neutralizantes (McGUIRE et al., 1988;
CHEEVERS et al., 1991); a produo insuficiente de anticorpos neutralizantes e
produo de interferon, que diminui o ndice de replicao e favorece a persistncia do
estmulo antignico (KLEVJER-ANDERSON e McGUIRE 1988; NARAYAN et al.,
1984; ZINK et al., 1987; BERTONI et al., 1994; CHEEVERS et al., 1993). Por outro
lado, a presena de cido silico na superfcie da partcula viral, o que dificulta a ao
dos anticorpos neutralizantes (HUSSO et al., 1988), e a alta mutabilidade do agente que
pode resultar em variantes antignicas, funcionam como mecanismos de escape da
resposta celular e humoral (KNOWLES et al., 1990; CHEEVERS et al., 1993;
LICHTENSTEIGER et al., 1993).
4.5 Imunologia
A denominao lentivrus corresponde a uma doena de evoluo lenta e
progressiva, com longo perodo de incubao (SILVA & LIMA, 2007). A infeco com
CAEV resulta numa replicao viral persistente de baixa intensidade, seguida por
surgimento retardado (anos) das alteraes clnicas (EAST, 2006).
Os LVPR apresentam tropismo pelas clulas da linhagem moncitofagocitrias (NARAYAN et al., 1982; NARAYAN et al., 1983), principalmente os

24

macrfagos, tanto em animais sintomticos quanto nos assintomticos (STORSET et al.,


1997). No causam imunossupresso como as outras lentiviroses (HIV, SIV e FIV), por
infectar, principalmente, moncitos-macrfagos e no os linfcitos (QUINN et al.,
2005). Ponti et al. (2008), relataram que animais infectados com CAEV no so
considerados imunodeficientes, como tambm mas no se exclui a possibilidade das
clulas imunes serem fisiologicamente danificadas.
Na fase inicial da infeco, a produo de anticorpos inexistente ou baixa,
e continua assim por um longo perodo, o que pode levar, entre meses ou anos, a uma
soroconverso tardia dos animais infectados (FROTA et al., 2005). A replicao viral
seguida pela produo de anticorpos e citocinas que participam do desenvolvimento das
alteraes imunopatolgicas que ocorrem nos rgos-alvo (DeMARTINI e al. 1993;
LEGASTELOIS et al., 1996a). A produo persistente de antgenos virais e interao
quer seja na forma de protena livre ou expressa na clula durante a infeco, e os
anticorpos, formando imunocomplexos, contribui para a progresso da doena
(KNOWLES et al., 1990; BERTONI et al., 1994; MDURVWA et al., 1994; BRODIE et
al., 1995; PERRY et al.,1995).
A primeira resposta imune detectada em torno da terceira semana aps a
infeco, sendo principalmente dirigida contra a protena do capsdeo (p25 ou p28) e
estes anticorpos persistem (HOUWERS e NAUTA, 1989); por volta da quinta semana
so produzidos anticorpos contra as demais protenas: nucleoprotena (NP), da matriz
(p17), transmembranar (gp44) e de superfcie (gp135) (DE LA CONCHABERMEJILLO et al., 1995). FEVEREIRO et al. (1999) afirmam que os anticorpos
contra as protenas de envelope (anti-gp135) esto presentes em ttulos mais elevados do
que os contra protenas nucleares (anti-p25 ou anti-p28), e que todos os animais que
apresentam anticorpos contra p25 apresentam anticorpos anti-gp-135, porm queles
que apresentam anticorpos anti-gp135 nem sempre possuem anti-p25.
Os animais infectados desenvolvem imunoglobulinas da classe G (IgG) do
tipo 1 e 2. TRUJILLO et al., (2004) demonstraram que animais infectados cronicamente
e que desenvolvem artrite tm predominantemente IgG do tipo 1 dirigidos contra as
glicoprotenas de envelope (gp135), enquanto que as IgG do tipo 2 esto presentes, de
forma predominante, nos animais com ausncia de alteraes patolgicas nas
articulaes.

25

As alteraes patolgicas que ocorrem nas infeces causadas por lentivrus


so, na maior parte, mediadas indiretamente pela resposta imune do hospedeiro,
resultado da alterao da atividade ou produo de citocinas (WERLING et al., 1994).
J foi demonstrada a presena de elevados nveis de interferon no lquido sinovial de
caprinos naturalmente infectados com o LVPR (YILMA et al., 1988). O interferon
responsvel pelo desenvolvimento da resposta linfoproliferativa por induzir a expresso
de antgenos (ZINK et al., 1987). provvel ainda que infeces oportunistas possam
induzir secreo de fatores celulares que modulem a replicao viral e a manifestao
da infeco como doena clinicamente aparente (ELLIS et al., 1994; LUJN et al.,
1994).

4.6 Infeco in vivo e in vitro


A infeco viral clssica consiste em trs fases de interao entre o vrus e
as clulas hospedeiras (JOAG et al., 1996):
1. Disseminao do agente para as clulas alvo seguida da infeco do
hospedeiro;
2. Replicao viral nas clulas alvo;
3. Eliminao do vrus, onde ocorre um declnio na taxa de replicao viral
associado com a mobilizao dos mecanismos de defesa especficos e
inespecficos do hospedeiro.
O vrus j foi isolado in vivo de outras clulas e rgos como: as clulas
de membrana sinovial caprina (MSC) (CHUNG e OSULLIVAN, 1981) e dos pulmes
(CUTLIP e LAIRD, 1976). Neste rgo, as clulas que podem ser reservatrios para os
LVPR so os macrfagos alveolares e intersticiais, pneumcitos do tipo I e II, clulas
epiteliais, clulas endoteliais e fibroblastos (CARROZA et al., 2003). Sua presena
tambm tem sido relatada na terceira plpebra (CARPUCCHIO et al., 2003), clulas
epiteliais das criptas intestinais, dos tbulos renais, da tireide (ZINK et al., 1990), do
trato genital feminino (tero e oviductos) e em clulas epiteliais mamrias, o que sugere
que estas clulas sejam um potencial reservatrio e fonte de infeco para a transmisso

26

vertical de LVPR para embries e fetos (FIENI et al., 2003; BOLEA et al., 2006).
Moncitos contendo LVPR esto presentes intermitentemente na circulao de animais
infectados, porm nas fmeas, provavelmente por influncia hormonal, ocorrem
perodos alternados de expresso viral reduzida e um grande nmero de moncitos
infectados circulantes, principalmente no final da gestao e inicio da lactao
(MILHAU et al., 2005).
A soroconverso dos animais infectados pode ocorrer em um intervalo de
semanas, meses ou at mesmo anos, podendo ocorrer perodos de sororeverso
(HANSON et al., 1996).
Os LVPR apresentam algumas caractersticas interessantes como
persistncia da infeco, mesmo na presena de uma resposta imunolgica, devido
restrio da replicao viral (GENDELMAN et al., 1986) e da capacidade de mutaes,
resultando na formao de subpopulaes virais heterogneas denominadas quasispcie
(PASICK, 1998a).
Os LVPR podem se replicar em vrios tipos celulares (Tabela 1), tais como:
as clulas musculares lisas (LEROUX et al., 1995a), clulas epiteliais da tuba uterina
(LAMARA et al., 2002a), clulas endoteliais (LECHAT et al., 2005), clulas epiteliais
da glndula mamria (MILHAU et al., 2005), clulas epiteliais de crnea de feto
caprino (HECKERT et al., 1992; SIMARD et al., 2001). No entanto, a principal clula
utilizada in vitro para replicao destes vrus so as de membrana sinovial (MS)
(CRAWFORD et al., 1980); segundo ABREU et al. (1998) estas clulas replicam
CAEV satisfatoriamente, tanto em clulas de baixa passagem (5 a 7) como de alta (17
a 18), produzindo efeito citoptico (ECP) tpico caracterizado por vacuolizao e
formao de sinccios, seguido de morte celular. A formao destes sinccios parece ser
resultado da ligao do vrus clula e que ocorre graas a interaes das glicoprotenas
de envelope (SU) virais e receptores especficos das clulas. Na superfcie das clulas
de membrana sinovial caprina (MSC) e plexo coride ovino so expressas trs protenas
(15, 30 e 50 kDa) que foram identificadas como receptores para Maedi-Visna
(LEROUX et al., 1995a).
As clulas de linhagem tambm vm sendo usadas para replicao dos
LVPR. As clulas fibroblsticas de embrio caprino imortalizadas-T (TIGEF) e as de
MS imortalizadas com telomerase humana apresentam boa permissividade a ambos

27

LVPR, suportando um ciclo completo de replicao viral, sobretudo entre a 60 e 120


passagem (TEIXEIRA et al., 1997; ROLLAND et al., 2004).

4.7 Transmisso
J est bem estabelecido que a principal via de infeco da LVPR a
digestiva, por meio da ingesto de colostro ou leite pelas crias de mes infectadas
(ADAMS et al., 1983; ROWE et al., 1992; STACHISSINI et al., 2007), porm a
transmisso pode ocorrer, tambm, por outras vias onde h contato direto entre os
animais, ou indiretamente por materiais contaminados com sangue ou leite de animais
infectados (AL-ANI e WESTWEBER, 1984). A presena do anticorpo no colostro no
evita a infeco (RADOSTITS et al., 2002).
ROWE et al. (1991) relatam que aproximadamente 69% das infeces pelo
CAEV ocorrem pela ingesto de leite ou colostro contaminado e que os 31% restantes
devem ser creditadas a outras vias de infeco. Desta forma, tem sido observada uma
limitao dos programas de controle baseados somente na transmisso por leite e
colostro entre a me infectada e sua prole enfatizando a necessidade da adio de outros
mtodos de controle que considerem um maior espectro de vias de infeco (SILVA,
2007).
EAST et al. (1993) descreveram as vias de transmisso do vrus, dividindoas em quatro vias possveis e constatadas:
- Colostro: A ingesto do colostro de fmeas soropositivas tem sido considerada a
principal via de transmisso nas propriedades onde realizado o aleitamento coletivo
com pool de colostro ou leite, onde uma s fmea positiva poder contaminar todos
os filhotes (EAST et al., 1993). O vrus da CAEV pode ser encontrado nos leuccitos
perifricos a partir de duas semanas aps a infeco e permanecer disseminando vrus
durante toda vida. Cabras soropositivas eliminam o vrus durante toda vida pelo leite e
outras secrees, servindo desse modo como reservatrio do vrus. Cabras soronegativas
tambm podem eliminar o vrus pelo leite (GEDEK et al., 1993).
- Infuso Intramamria: esta via de transmisso possvel de ocorrer durante a
ordenha mecnica, com equipamentos de ordenha ou manejo inadequado dos mesmos.

28

- Transplacentria: filhotes de mes soropositivas afastados de suas genitoras


imediatamente aps o parto e alimentados com leite ou substitutos lcteos livres do
vrus, tm at 15% de soroconverso inexplicada, aos seis meses de idade
(STACHISSINI et al., 2007).
- Transmisso horizontal: pelo contato direto prolongado e por meio de outras fontes
de infeco como sangue, fezes, saliva e secrees urogenitais (LEITNER et al., 2010).
Aproximadamente 10% de filhotes soronegativos introduzidos em rebanhos
soropositivos, tornam-se soropositivos em 20 semanas (ADAMS et al., 1983).
H evidncias que indicam a transmisso materno-fetal dos LVPR ocorra,
mesmo que com baixa incidncia (EAST et al., 1993), podendo ocorrer por meio de
duas possveis vias: transmisso intrauterina e transmisso no canal vaginal no
momento do parto, por meio de ingesto ou inalao de clulas contaminadas pelas crias
(SILVA & LIMA, 2007; KONISH et al., 2011). Em percentual varivel de 2,5 a 15%,
tem-se observado a soroconverso de crias geradas por cabras soropositivas, nascidas de
parto cesariano ou assistido com separao da cria antes da ingesto do colostro, e
mantidas separadas das mes recebendo colostro e leite de vaca (ADAMS et al., 1983;
ELLIS et al., 1983; EAST et al., 1993).
Embora DNA pr-viral de lentivrus caprino e partculas virais livres
infecciosas tenham sido detectadas no smen de machos naturalmente infectados com
CAEV (ANDRIOLI et al., 1999), a transmisso venrea ainda no foi confirmada. A
comprovao da presena do lentivrus no smen refora a possibilidade da transmisso
do LVC pela via sexual. ROWE et al., (1992) observaram maiores taxas de
soroconverso em fmeas cobertas por machos soropositivos do que naquelas cobertas
por machos negativos. Como os lentivrus infectam moncitos e macrfagos,
inflamaes ou infeces no rgo reprodutor podem carrear fluxo de clulas
inflamatrias, o que aumenta a carga viral no smen (NASH et al., 1995; QUAYLE et
al., 1997; ANDRIOLI et al., 2006). CONCHA-BERMEJILLO et al. (1996) e
PREZIUSO et al. (2003) detectaram o lentivrus ovino no smen de carneiros,
concomitantemente, infectados por Brucella ovis. A presena de leuccitos foi
constatada nos ejaculados de todos os animais.

29

H ainda a possibilidade do vrus est presente no smen na forma livre e


como os vrus geralmente no infectam os espermatozides (NASH et al., 1995;
TRAVASSOS et al., 1999), cogita-se o uso de mtodos fsicos para separar os
espermatozides do fluido seminal, visando a eliminao dos patgenos.
Os estudos filogenticos realizados com amostras de LVPR tm indicado
que esses vrus devem ser considerados como quasispcies virais nicas que tm a
capacidade de infectar tanto ovinos quanto caprinos, indicando, portanto a transmisso
entre espcies (PASICK, 1998; LIMA et al., 2004) e representa uma fonte importante
para a persistncia viral. Dados epidemiolgicos e anlises filogenticas de dados da
sequncia de nucleotdeo dos animais naturalmente infectados podem ser utilizados para
identificar o curso da transmisso dentro das populaes de caprinos e ovinos
(GJERSET et al., 2007).

4.8 Sinais Clnicos


A infeco por lentivirus geralmente persistente e assintomtica, mas pode
causar doena acometendo simultaneamente vrios rgos cuja evoluo geralmente
crnica e de agravamento progressivo das leses causando perda de peso e debilidade
at a morte. Do ponto de vista clnico e anatomohistopatolgico, as apresentaes
clnicas das lentiviroses tm sido classificadas em quatro formas bsicas: nervosa,
artrtica, respiratria e mamria (DAWSON, 1987; NARAYAN, 1985; PERETZ et al.,
1993). A freqncia de ocorrncia e gravidade da manifestao clnica varia, mas, as
leses mantm suas caractersticas tanto em caprinos como ovinos (DAWSON, 1987;
NARAYAN, 1985). Ocasionalmente ocorrem, em animais soropositivos, alteraes
inflamatrias nos rins, proliferao de clulas linfides no bao e linfonodos
(GONZALES et al., 1987) e infiltraes mononucleares do endomtrio (ALI, 1987).
Apenas 35% dos animais infectados apresentam algum sinal clnico da enfermidade
(GUEDES et al., 2001).
Ovinos infectados com Maedi-Visna apresentam perodo de incubao
superior a 1 ano e a doena detectada em ovinos de mais de 2 anos de idade. Doena
de manifestao pulmonar em ovinos e raramente caprinos e a gravidade maior entre

30

ovinos quando comparado ao caprino. So observados tosse, dispnia (aps exerccios


fsicos),

taquipnia,

consolidao

pulmonar,

som

mido

auscultao

comprometimento do estado geral (CUTLIP et al., 1988; NARAYAN, 1985; PEREIRA,


1995).
A forma nervosa pouco importante, tendo sido relatada em ovinos adultos,
geralmente como complicao da forma respiratria (NARAYAN, 1985; LARA et al.,
2005). Na necropsia, observam-se aderncias pleurais, pulmes pesados e firmes
palpao e reas de colorao rseo-acinzentadas. Os achados histopatolgicos so de
pneumonia intersticial e broncointersticial. As leses ocorrem principalmente no lobo
caudal e no cranioventral (CALLADO et al., 2001). A encefalite observada mais
freqentemente em animais jovens entre 2-6 meses de idade com achados
microscpicos de meningoencefalomielite e desmielinizao (CRAWFORD, 1981;
CUTLIP et al., 1988; NARAYAN, 1985; NORMAN e SMITH, 1983; GONZALES et
al., 1987).
No diagnstico clnico de CAEV se observa que os animais, mesmo
mantendo o apetite e estado ativo, apresentam ataxia e paresia uni ou bilateral dos
membros posteriores, que evolui para tetraparesia (CRAWFORD, 1981; CUTLIP et al.,
1988; NARAYAN, 1985; NORMAN e SMITH, 1983). Doena igualmente de evoluo
lenta e progressiva que se inicia com andar cambaleante, movimento desordenado dos
lbios e deslocamentos laterais da cabea e posteriormente surgem paresias e paralisias.
O diagnstico consiste em examinar o rebanho em descanso para observar o movimento
da cabea, para em seguida provocar movimentao dos animais com caminhadas
rpidas para observ-los em marcha. A freqncia de ocorrncia num determinado
momento sempre baixa. A doena tem durao variando de vrias semanas a at dois
anos e um rebanho que tenha recebido animais infectados, a infeco persiste por 4-5
anos.
A forma mais importante a artrtica que se manifesta em animais com mais
de oito meses de idade (CRAWFORD e ADAMS, 1981; GONZALES et al., 1987). As
articulaes mais afetadas so as carpianas que manifestam aumento na consistncia e
no volume (CRAWFORD e ADAMS, 1981; CUTLIP et al., 1988; GONZALES et al.,
1987; NARAYAN, 1985). Portanto, o 1 sinal clnico de poliartrite crnica com
sinovite e bursite. Ao exame macro e microscpico observam-se leses tpicas de

31

processos degenerativos e inflamatrios, que afetam os tecidos conjuntivos


periarticulares, bolsas sinoviais, tendes e bainhas tendinosas (NARAYAN, 1985;
CUTLIP et al., 1988; PEREIRA, 1995; WOODWARD, 1982).
A forma mamria freqente e com grande significado econmico em face
do comprometimento da produo leiteira e predisposio a infeces secundrias da
glndula mamria (LERONDELLE, 1988; SMITH e CUTLIP, 1988). As cabras
afetadas apresentam mamite aguda ou crnica. A aguda observada no incio da
lactao, havendo endurecimento no edematoso do rgo, com reduzida ou nula
produo de leite (PERETZ et al., 1993). A crnica, tambm comum entre as ovelhas,
instala-se durante a lactao com assimetria e endurecimento da mama e leite de aspecto
normal (CUTLIP et al., 1988; OLIVER et al., 1985; PERETZ et al., 1993). Nas duas
formas h hipertrofia persistente dos linfonodos retromamrios e, histologicamente,
observa-se mamite intersticial com presena de ndulos linfides (CUTLIP et al., 1988;
OLIVER et al., 1985; PEREIRA, 1995; PERETZ et al., 1993).

4.9 Diagnstico
Levando em considerao que cerca de 35% dos animais infectados
apresentam sintomas clnicos da enfermidade (GUEDES et al., 2001), so de extrema
importncia os testes laboratoriais no diagnstico da infeco (LARA et al., 2005).
Desse

modo

diagnstico

dever

basear-se

nos

sinais

clnicos,

leses

anatomopatolgicas e exames sorolgicos (KNIGHT e JOKINEN, 1985; PLAZA et al.,


2009).
O diagnstico laboratorial baseia-se na deteco de anticorpos, no
isolamento viral ou na deteco de antgenos virais ou pores correspondentes ao seu
genoma (CORREA et al., 2001). Pelas caractersticas da infeco persistente por LVPR,
a forma mais prtica de diagnstico a sorologia, pois a presena de anticorpos
demonstra indiretamente a existncia de infeco (CALLADO, 2001).
A Imunodifuso em Gel de Agarose (IDGA) recomendada pela
Organizao Mundial para Sade Animal (OIE), por ser de fcil aplicabilidade e no
exigir equipamentos nem instalaes sofisticadas. O IDGA a forma de diagnstico

32

mais utilizado em todo mundo, principalmente em programas de controle da doena que


j so empregados em vrios pases (MOOJEN, 2001). Alm da fcil aplicabilidade o
IDGA tem alta especificidade o que acaba credenciando-o para a realizao dos
diagnsticos de triagem nos programas de controle da enfermidade (VAREA et al.,
2001). Segundo VITU (1982) o teste de IDGA capaz de identificar animais
experimentalmente infectados como MVV cerca de quatro a cinco meses aps a
infeco, e afirma ainda que este teste mostrou-se mais sensvel que o teste de fixao
do complemento, sendo que quando comprado com o ELISA mostrou resultados
bastante semelhantes. O teste de IDGA pode ser utilizado tanto para a deteco de
anticorpos anti-LVPR no soro sanguneo quanto no colostro de animais infectados,
podendo esta presena de anticorpos no colostro pode ser utilizada na deteco da
infeco no rebanho (ALKAN e TAN, 1998).
A tcnica de isolamento em cultivo celular apresenta algumas restries,
pois laboriosa, apresenta elevado custo, necessita da implantao de cultivos celulares
especiais, alm da sua incapacidade em detectar vrus que no causem efeito citoptico
(KNOWLES, 1997). O isolamento dos LVPR pode ser feito em clulas da membrana
sinovial de caprinos (MSC), clulas fobroblsticas, clulas do plexo coride ovino,
clulas TIGEF (TEIXEIRA et al., 1997) e clulas de crnea caprina (OLIVEIRA,
2007).
So poucos os trabalhos utilizando teste de Imunofluorecncia Indireta
(RIFI) no diagnstico dos lentivrus de pequenos ruminantes. No Brasil, REISCHAK
(2000) desenvolveu uma RIFI utilizando trs vrus de isolados brasileiros de caprinos e
um de ovino e comparou com o teste de IDGA usando antgeno do MVV. Em amostras
de soro caprino e ovino, verificou que a RIFI detectou mais animais soropositivos que o
IDGA, sendo que foram observados resultados diferentes de acordo com as cepas virais
isoladas e os tipos celulares empregados.
Testes moleculares como a reao em cadeia da polimerase (PCR) e da
hibridizao in situ podem detectar diretamente a presena do vrus em cultura celular,
bem como a microscopia eletrnica pode evidenciar o vrus em cultivos celulares. A
tcnica de PCR altamente sensvel e especfica, detectando o DNA pr-viral do CAEV
mesmo um dia aps a infeco dos cultivos celulares, e de apenas uma clula infectada
em um cultivo de 106 clulas. A PCR a tcnica mais eficiente em detectar DNA viral

33

no sangue nos estgios iniciais da doena, sendo uma alternativa tambm para
identificao de animais falso negativos (PINHEIRO et al., 2001a; FROTA et al.,
2005). Para isto, tm sido utilizados iniciadores derivados das sequncias dos genes gag
ou pol, em PCR, em amostras de leuccitos, clulas do leite, lavado brnquio alveolar,
lquido sinovial e clulas obtidas por tripsinizao de monocamadas ou explantes
(COSTA et al., 2007).
As prticas de gerenciamento para controle da enfermidade em rebanhos de
alta qualidade tm demonstrado insuficincia no seu objetivo, sendo a tcnica de PCR
uma ferramenta importante para diminuir o risco de resultados falso negativos, possveis
de ocorrer com a tcnica de IDGA (MODOLO et al., 2009). O leite, colostro, smen ou
lquido sinovial como fonte de DNA do vrus para a tcnica de PCR oferece menor
sensibilidade se comparado a amostras de sangue (REINA et al., 2008).
Os LVPR podem ser isolados de amostras de animais vivos, tanto pelo cocultivo em clulas de membrana sinovial caprina (MSC), como leuccitos do sangue
perifrico, clulas somticas do leite, smen e fluidos uterinos, como, tambm de
animais mortos infectados, a partir de explantes de tecidos como MSC, glndula
mamria, pulmo, plexo coride e tecidos linfides. Para isolamento do lentivrus
caprino de amostras clnicas, utiliza-se cultivo primrio de clulas de MSC, sendo que o
efeito citoptico caracterstico a presena de clulas multinucleadas tpicas (sinccio)
(PINHEIRO et al., 2001).
FIENI et al. (2003), identificaram tecidos infectados com o lentivrus
caprino do trato reprodutivo empregando a tcnica de Double-Nested-PCR, com esta
tcnica demonstraram o DNA pr-viral em clulas uterinas, da glndula mamria,
clulas do oviduto e no fluido uterino.
Outra tcnica utilizada para identificao de partculas virais em tecidos
infectados a imunohistoqumica, podendo esta ser utilizada tanto para testes de
susceptibilidade in vitro quanto para identificao do vrus em tecidos de animais
naturalmente infectados. CARROZA et al. (2003) utilizando o PCR in situ associado
imunohistoqumica em clulas de tecido pulmonar e glndulas mamrias, identificaram
vrios tipos celulares carreando o cido nuclico viral.
A Microscopia Eletrnica (ME) para o diagnstico viral encontra como
principal limitante o alto custo e a necessidade de equipamento sofisticado e pessoal

34

com treinamento apurado para a realizao dos exames. PINHEIRO (2001) observou o
CAEV por ME, em cultivo clulas de plexo coride caprino. As partculas virais de 70110 nm, com um corpo central de 30-50 nm, apresentaram forma e tamanho semelhante
ao MVV.

4.10 Medidas de Controle


Com a evoluo da caprinovinocultura e o constante crescimento do
mercado, houve a necessidade dos rgos pblicos dispensarem uma maior preocupao
com aspectos sanitrios desses animais, assim, a produo de caprinos e ovinos deve ser
fundamentada em sistemas de explorao que possam garantir melhores condies
sanitrias para estes animais, por meio de medidas de biossegurana e de exames
diagnsticos confiveis e acessveis.
No h tratamento especfico para a infeco pelo CAEV e no h vacina
(CORREA et al., 2001); por esses motivos se torna de suma importncia sua preveno,
evitando comprar animais de criatrios onde ela ocorre e nunca adquirindo animais com
sintomas clnicos (RIBEIRO, 1997).
Recomenda-se o controle da infeco realizando os testes sorolgicos
peridicos (uma a duas vezes por ano) nos caprinos acima de 9 meses de idade
(CORREA et al., 2001).
O Programa Nacional de Sanidade de Caprinos e Ovinos (PNSCO)
determina que testes sorolgicos para CAEV devem ser realizados quando da entrada de
qualquer animal no pas, bem como smen e embries, previsto no Plano Nacional de
Vigilncia e Controle das Lentiviroses de Pequenos Ruminantes, do Ministrio da
Agricultura, no artigo 24 (BRASIL, 2009).
Uma vez introduzindo a doena no plantel, devem adotar algumas medidas
para seu controle e posteriormente erradicao. Segundo GARCIA (1993), em primeiro
lugar deve ser feito um levantamento da situao do rebanho por meio de exames
sorolgicos. Em casos de prevalncia baixa de animais soropositivos (5 10%),
recomenda-se erradicao do problema com o abate desses animais. Em uma
prevalncia mais alta (acima de 10%) pode-se optar pela manuteno dos animais de

35

elevado valor zootcnico, desde que sejam identificados com uma marca de fcil
visualizao.
recomendvel ainda a separao de animais sadios e infectados, pois a
transmisso horizontal pelo contato com secrees e excrees pode ocorrer (ADAMS
et al., 1983; ZINK et al., 1990). A transmisso horizontal pode ser potencializada em
rebanhos infectados quando se aumenta a concentrao de animais, uma vez que o
contato ntimo aumenta a probabilidade de contato com macrfagos ou moncitos
contendo o vrus, j que estes no so resistentes no ambiente (NARAYAN et al.,
1983). Recomendam-se testes sorolgicos peridicos, de uma a duas vezes por ano, em
animais acima de nove meses (MOOJEN, 2001).
Diversos

estudos

epidemiolgicos

das

Lentiviroses

de

Pequenos

Ruminantes no Brasil tm demonstrado a disseminao dos lentivrus em vrios


estados, sendo que um dos fatores que tem contribudo para isso a prtica de
melhoramento gentico utilizando-se raas exticas (PINHEIRO et al., 2001;
ALMEIDA et al., 2001; ALMEIDA et al., 2003; PINHEIRO et al., 2004).
Para CORREA et al. (2001), a formao de dois rebanhos, um com animais
positivos e outro com negativos, mantidos separadamente, e a eliminao gradativa dos
afetados uma medida eficaz no controle da infeco. Os animais negativos devem
ficar permanentemente isolados por uma faixa de no mnimo 1,8 m de largura com
relao aos animais soropositivos. No se deve permitir que os animais compartilhem
comedouros e bebedouros. Cabras soro negativas devem ser montadas por bodes CAENEGATIVOS (SMITH, 1993).
Recomenda-se dispensar cuidados especiais com as agulhas, seringas e
materiais cirrgicos que devem ser criteriosamente esterilizadas dando preferncia a
materiais descartveis. Quando no for possvel a utilizao desses, necessrio
desinfet-los entre o uso de um animal e outro. Materiais como canivetes e tatuadores
devem ser mergulhados em gua fervente antes de serem utilizados em outros animais.
Konishi et al. (2011) demonstraram a erradicao de CAEV em um rebanho
de caprinos leiteiros, a partir da combinao de trs estratgias: separao dos cabritos
imediatamente aps o parto, segregao de cada nova gerao e abate de animais
positivos em testes peridicos (IDGA e PCR), realizados a cada dois meses. Tambm
foi observado o aumento da produo de leite aps a erradicao.

36

37

5. MATERIAL E MTODO

5.1 Marco amostral


O Estado do Maranho situa-se na Regio Nordeste do Brasil, entre as
coordenadas de 0101 a 1021 latitude sul e 4148 a 4840 longitude oeste. Abrange
uma rea de 329.555,8 km, limitando-se a norte com o Oceano Atlntico, a leste com o
Piau, a sul e sudoeste com o Tocantins e a noroeste com o Par. Abrange cinco
Mesorregies Geogrficas: Norte Maranhense, Oeste Maranhense, Centro Maranhense,
Leste Maranhense e Sul Maranhense que se encontram subdivididas em 21
Microrregies Geogrficas, compreendendo um total de 217 municpios.
O presente estudo foi desenvolvido em propriedades criadoras de caprino e
ovinos, localizadas na Mesorregio do Oeste Maranhense, Microrregio Imperatriz, em
quatorze municpios: Aailndia, Amarante do Maranho, Buritirana, Cidelndia,
Davinoplis, Governador Edison Lobo, Imperatriz, Itinga do Maranho, Joo Lisboa,
Lajeado Novo, Montes Altos, Ribamar Fiquene, So Francisco do Brejo e Senador La
Roque (Figura 3).

FIGURA 03 Mapa da microrregio de Imperatriz MA. (Wikipedia, 2012)


5.2 Aplicao dos questionrios

38

Visando descrever a forma de produo e inferir sobre o perfil sanitrio dos


estabelecimentos produtores de caprinos e ovinos por meio de inqurito epidemiolgico
nos rebanhos, foram estudadas algumas caractersticas de produo e manejo, com base
em informaes obtidas pela aplicao de um questionrio, adaptado de Tinoco (1985).

5.3 Amostra e Prevalncia


O nmero mnimo de amostras de caprinos e ovinos a serem testadas foi
determinado utilizando-se frmula a seguir descrita recomendada por Thrusfield (2004),
totalizando 710 amostras:

n=

p . q . z
d

Onde:
p = Prevalncia esperada (50,00%, uma vez que no existem relatos da
prevalncia de LVPR no municpio de Imperatriz, MA).
q = 100 p
z = 1,96 (intervalo de confiana a 95%)
d = erro amostral ( 5%)
Foram testados 10 animais por rebanho, estratificados segundo a composio
aproximada dos rebanhos (SOUZA NETO, 1987) com um reprodutor, seis matrizes e
trs fmeas jovens (entre 6 e 12 meses), selecionados aleatoriamente.

5.4 Estudo Sorolgico

39

Para fins deste estudo foi coletado sangue por venopuno jugular
utilizando tubo tipo vaccutainer sem anticoagulante (Figura 04), para a realizao da
Imunodifuso em Gel de Agarose utilizando o kit comercial1 seguindo as
recomendaes do fabricante.

FIGURA 04 - Venopuno jugular utilizando tubo tipo vaccutainer sem anticoagulante.


Para deteco dos anticorpos anti-LVPR, o soro sanguneo dos caprinos e
ovinos foi submetido ao teste de imunodifuso em gel de agarose (ABREU et al., 1998),
no Laboratrio de Patologia Clnica do Centro de Estudos Superiores de Imperatriz,
Universidade Estadual do Maranho. Foi utilizado o kit antgeno CAEV, Biovetech 2,
seguindo as instrues do fabricante. A agarose 1% (p/v) em soluo tampo cido
brico-borato de sdio (108 mM; pH 8,6), mantida entre 4 a 8C at o momento do uso,
quando foi ento liquefeita em forno de microondas (potncia 1000w por trs minutos)
e distribuda em placas de Petri descartveis de 90 mm de dimetro (16 ml de Agarose
por placa), permanecendo as placas a temperatura de 25C at solidificao do gel,
sendo em seguida armazenadas entre 4 e 8C, invertidas, at o momento de uso, para se
evitar a desidratao e consequente retrao do gel de agarose. No momento do teste, o
gel foi perfurado com molde, de forma hexagonal, de maneira a formar sete poos de 8
mm de dimetro e 3 mm de distncia entre as bordas, sendo um central, onde foi
adicionado o antgeno (Ag), e seis perifricos eqidistantes, onde foram adicionados, de
forma alternada, o soro padro positivo e os soros a serem testados (ABREU et al,
1
2

Antgeno CAEV IDGA; Biovetech, Brasil


Gentilmente cedido pelo Professor DSc. Roberto Soares de Castro da UFRPE.

40

1998). Terminada a adio dos reagentes, as placas foram incubadas em cmara mida
temperatura em torno de 25C, sendo a leitura final realizada aps 48 horas de
incubao.
Os soros foram considerados positivos quando ocorria a formao de linha
de precipitao entre o poo central (Ag) e o soro testado, apresentando identidade com
a linha formada entre o soro padro e o Ag (Figura 3); no caso de animais negativos no
houve formao de linha de precipitao com identidade.

5.4.1 Clculo de Prevalncia


A prevalncia e o desvio padro foram calculados de acordo com a frmula
de Astudillo (1979):
p=

nmero de amostras positivas no teste


total de amostras testadas

Onde:

p = prevalncia observada.

p.(100-p)
n

Onde:

= desvio padro;
p = prevalncia observada;
n = nmero de amostras testadas.
Os resultados dos testes sorolgicos foram analisados utilizando-se o teste

de Qui-quadrado (2) ou Prova Exata de Fischer, com intervalo de confiana de 95%


utilizando-se programa Epi Info 6, verso 6.04 (DEAN et al., 2001).

41

5.5 Cultivo Celular e Isolamento Viral


Para isolamento viral foram utilizadas clulas de cultura primria obtidas
por explantao de crnea, plexo coride e membrana sinovial caprina e ovina
cultivadas de acordo com Oliveira et al. (2008) (FIGURA 05). As clulas foram
cultivadas em garrafas de cultivo celular de 25cm2, com meio essencial mnimo de
Eagle (MEM) suplementado com antibiticos (penicilina e estreptomicina), antifngicos
(fugizon ou anfotericina B) e 10% de soro fetal bovino (SFB) livre de BVD, incubadas
a 37C, em atmosfera de 5% de CO2.
Foi estabelecido cultivo de leuccitos de sangue proveniente de animais
positivos na tcnica de IDGA (FIGURA 06). O sangue foi centrifugado e os leuccitos
obtidos por sucessivas centrifugaes e lavagem com cloreto de amnio (0,84%) e
tampo fosfato, segundo Feitosa et al (2010). Os leuccitos extrados foram
condicionados em garrafas de cultivo celular de 25cm 2, com meio essencial mnimo de
Eagle (MEM) suplementado com antibiticos (penicilina e estreptomicina), antifngicos
(fugizon ou anfotericina B) e 10% de soro fetal bovino (SFB) livre de BVD, incubadas
a 37C por uma semana, quando foi observado confluncia acima de 90%.
O co-cultivo se deu por meio da inoculao das clulas de cultura primria
em garrafas de cultivo de leuccitos de animais comprovadamente positivos para LVPR
por meio do teste de IDGA. O passo seguinte foi a observao do comportamento em
cultivo destes vrus quanto formao de efeito citoptico (ECP), caracterizado por
sinccios e lise celular, conforme os apontamentos de Pinheiro (2010). Para visualizao
do efeito citoptico, corou-se a monocamada com cristal violeta 0,1%, por 10 minutos,
lavou-se com gua destilada para retirar o excesso do corante e, em seguida, observouse em microscpio ptico invertido.

42

FIGURA 05 - Clulas epiteliais de crnea

FIGURA 06 - Co cultivo de crnea e leuccitos

5.7 Anlises Estatsticas


Nos inquritos soroepidemiolgicos foram calculadas as prevalncias com
os respectivos desvios padres. A associao entre o manejo adotado nas criaes e a
ocorrncia das lentiviroses foram testadas utilizando o teste de Qui-quadrado ( 2), sendo
ainda calculada a razo de odds (OR) com intervalo de confiana de 95% utilizando-se
programa Statistical Package for Social Science for Windows (SPSS), verso 20.
6. RESULTADOS

6.1 Inqurito soroepidemiolgico para Lentiviroses de Pequenos Ruminantes

43

Foram visitadas 57 propriedades distribudas nos 14 municpios da


microrregio de Imperatriz, MA. O nmero de animais dos rebanhos variou entre 12 e
3000 cabeas, com mdia de 49 animais por propriedade. Foi constato que os ovinos
correspondem 73,2% (520/710) do rebanho e os caprinos representam 26,8% (190/710)
dos animais analisados (Tabela 03).
Foram coletadas 710 amostras de sangue de ovinos e caprinos nas 57
propriedades visitadas; as amostras foram analisadas mediante diagnstico sorolgico
por meio da tcnica de imunodifuso em gel de agarose. A frequncia de animais
positivos na tcnica de IDGA para lentiviroses de pequenos ruminantes foi de 7,5%
(53/710). Em relao espcie acometida e analisada pela tcnica houve uma
prevalncia semelhante entre as espcies com 7,5% (39/520) de ovinos e 7,4% (14/190)
de caprinos soropositivos, respectivamente (Figura 07). As fmeas apresentaram maior
prevalncia (90%) que os machos analisados (Tabela 03).
TABELA 03 Teste de Imunodifuso em Gel de Agarose (IDGA) para Lentivrus de
Pequenos Ruminantes (LVPR) de animais da microrregio de Imperatriz, MA
LVPR +
Espcie
Ovina
39
Caprina
14
Categoria animal
Matriz
34
Fmea Jovem
11
Reprodutor
5
Fonte: trabalho de campo, 2012.

OR
(95% IC)

520 (72,2%)
190 (27,8%)

ns

0,9185

426 (60,0%)
210 (30,0%)
71 (10,0%)

ns

0,4469

LVPR -

n (%)

481
176
392
199
66

44

600
500
400
300

481
(92,5%)

200
176
(92,6%)

100
0

39
(7,5%)

14
(7,4%)

Ovinos

Caprinos
Positivo

Negativo

FIGURA 07 Prevalncia de Lentivrus em Pequenos Ruminantes (LVPR) em


caprinos e ovinos testados pela Imunodifuso em Gel de Agarose (IDGA) na
microrregio de Imperatriz, MA

Quanto frequncia de propriedades com animais positivos para LVPR,


pela tcnica de IDGA (Figura 08), os municpios de Governador Edison Lobo e
Amarante tiveram 100% de frequncia de propriedades com animais positivos; os
municpios de Aailndia, So Francisco do Brejo e Cidelndia tiveram maioria de
suas propriedades positivas para LVPR. Ribamar Fiquene e Montes Altos no
apresentaram nenhuma das propriedades analisadas com anticorpos para LVPR.

45

2 (50,0%)

Senados La Roque
S. Franscisco do

2 (50,0%)

2 (40,0%)

3 (60,0%)
4 (100,0%)

Ribamar Fiquene

5 (100,0%)

Mont es Altos

4 (80,0%)

Lajeado Novo

1 (20,0%)

Joo Lisboa

1 (25,0%)

It inga

1 (33,3%)

Imperatriz

1 (33,3%)

3 (75,0%)
2 (66,7%)
2 (66,7%)

Gov. Edson Lobo

4 (100,0%)

Davinpolis

4 (80,0%)

1 (20,0%)

Cidelndia

1 (25,0%)

Buritirana

1 (50,0%)

3 (75,0%)
1 (50,0%)

Amarante

3 (100,0%)
2 (33,3%)

Aailndia
0

4 (66,7%)
2

Negativo

Posit ivo

FIGURA 08 Frequncia de propriedades positivas para Lentivrus de Pequenos


Ruminantes (LVPR) em caprinos e ovinos testados pela Imunodifuso em Gel de
Agarose (IDGA), por municpio da microrregio de Imperatriz MA.

Nas Tabelas 04 e 05 podem ser verificados os fatores analisados como


predisponentes nas infeces por LVPR.
Das propriedades visitadas, adotava-se o regime de criao extensivo em
54,4% (31/57) e semi-intensivo em 45,6% (26/57), no foi verificado sistema intensivo
de criao em nenhuma das propriedades visitadas. No foi verificada diferena
estatstica entre os sistemas extensivo e semi-intensivo (Prova Exata de Fischer, , P >
0,05).
Observou-se quanto s espcies que 68,40% das propriedades criam ovinos,
apenas 7,00% caprinos e 24,6% apresentam criao conjunta de caprinos e ovinos onde

46

as espcies usufruem do mesmo ambiente e manejo. Esta modalidade de manejo no


demonstrou diferena estatisticamente significativa em relao a soropositividade dos
animais para LVPR neste trabalho (P = 0,2600).
O rebanho de caprinos e ovinos estudados, cerca de 94,70% (54/57) advm
do estado do Maranho e uma pequena proporo originria do estado do Cear 1,8%
(1/57) e Pernambuco 3,50% (2/57). No houve relao entre animais originados dos
Estados de Pernambuco e Cear nos resultados positivos encontrados neste trabalho.
Quanto a aquisio dos reprodutores, 78,90% dos produtores informaram
que compram, j 1,8% usam animais emprestados e 19,30% realizam o sistema de troca
com produtores da mesma regio. Em relao a exposio dos animais em feiras, 86,9%
relataram que no participam dessa modalidade de evento e 14,00% participam de feiras
de exposies locais. O trnsito de animais em eventos ou em compra venda ou troca
no resultou em fator estatisticamente significativo na titulao positiva de anticorpos
para LVPR neste trabalho (P = 0,5).

TABELA 04 Associao entre fatores predisponentes infeco por lentivrus e a


presena de pequenos ruminantes positivos no teste de Imunodifuso em Gel de
Agarose em 57 propriedades da microrregio de Imperatriz MA

47

Fatores
predisponentes

LVPR +

LVPR% -

n (%)

OR
(95%
IC)

Origem dos rebanhos


Maranho
27
27
54 (94,7%)
ns
0,2636
Cear
0
1
1 (1,8%)
Pernambuco
0
2
2 (3,5%)
Tipo de criao
Extensiva
15
16
31(54,4%)
ns
0,9218
Semi-intensiva
12
14
26 (45,6%)
Origem dos
reprodutores
Comprados
21
24
45 (79,0%)
ns
0,5434
Emprestados
0
1
1 (1,8%)
Trocados
6
5
11 (19,2%)
Participao em feiras
Sim
4
4
8 (14,0%)
ns
0,5848
No
23
26
49 (86,0%)
Conhecimento sobre
LVPR
Presente
1
8
9 (16,0%)
s
0,019151
Ausente
26
22
48 (84,0%)
Medidas profilticas
Sim
4
6
10 (17,5%)
ns
0,4362
No
23
24
47 (82,5%)
Colostro oferecido s
crias
Cabra
23
29
52 (91,2%)
ns
0,2530
Vaca
3
1
4 (7,0%)
Vaca e Cabra
1
0
1 (1,8%)
Aleitamento
Natural
9
8
17 (29,8%)
ns
0,7953
Artificial
18
22
40 (70,2%)
Leite utilizado
Cabra
11
6
17 (29,8%)
ns
0,1558
Vaca
16
24
40 (70,2%)
Criao conjunta de
caprinos e ovinos
Sim
12
8
20 (35,1%)
ns
0,2600
No
15
22
37 (64,9%)
1
Teste Exato de Fisher.
TABELA 05 Associao entre a realizao de algumas prticas zoosanitrias e
presena de animais positivos para Lentivrus de Pequenos Ruminantes (LVPR) em 57
propriedades da microrregio de Imperatriz MA
Prticas
Zoosanitrias

LVPR +

LVPR% -

n (%)

OR
(95% IC)

48

Aleitamento
artificial
Realiza
No realiza
Quarentena
Sim
No
Piquete maternidade
Possui
No possui
Marcao
Sim
No
Isolamento de
animais doentes
Isola
No isola
Utilizao de
descartveis
Sim
No
Separao de jovens
e adultos
Realiza
No realiza

17
10

21
9

38 (66,7%)
19 (33,3%)

ns

0,7784

7
20

6
24

13 (22,8%)
44 (77,2%)

ns

0,8288

7
20

9
21

16 (28,1%)
41 (71,9%)

ns

0,9628

3
24

4
26

7 (12,3%)
50 (87,7%)

ns

0,4759

15
12

15
15

30 (52,6%)
27 (47,4%)

ns

0,8778

14
13

19
11

33 (57,9%)
24 (42,1%)

ns

0,5432

3
24

4
26

7 (12,3%)
50 (87,7%)

ns

0,5607

Os aspectos clnicos apontados por ordem de importncia e que mais


acometem os caprinos e ovinos so descritos na figura abaixo (Figura 09). Ressalta-se
que esses sinais foram apresentados ao criador num vocabulrio adequado ao seu
entendimento. Em 78,90% das propriedades foram relatados predominantemente
problemas com miases. A linfadenite caseosa relatada como segunda (59,60%) das
principais doenas do rebanho, sendo citada como rotina no manejo da extrao dos
ndulos. A pododermatite relatada como terceiro problema mais frequente (47,40%),
seguida por aborto representando 43,90%. A mamite aparece em quinto lugar (31,60%).
A diarria tambm relatada com bastante relevncia (29,80%), provavelmente pelo
fato de que essa alterao est intimamente relacionada com verminose e coccidiose.

49

FIGURA 09 - Problemas sanitrios de caprinos e ovinos em propriedades da


microrregio de Imperatriz, MA.
Em relao s prticas zoosanitrias estabelecidas nas propriedades (Figura
10), 8,8% (2/57) das propriedades no realizam vermifugao do rebanho e 91,2%
(55/57) das propriedades realizam no mesmo calendrio do rebanho bovino. A
verminose gastrointestinal uma doena comum aos rebanhos com incidncia de
aproximadamente 99%. Quanto prtica do aleitamento artificial realizado por 66,7%
(38/57) das propriedades, necessrio ressaltar que a prtica feita quando da rejeio
das crias pelas mes, e no como uma prtica de controle de doenas advindas do
aleitamento. Conforme a Tabela 05, a associao entre a realizao de algumas prticas
zoosanitrias e a presena de animais positivos para LVPR no demonstrou diferena
estatisticamente significativa (P 0,9)

50

FIGURA 10 Frequncia das prticas zoosanitrias frequentemente adotadas nas 57


propriedades estudadas localizadas na microrregio de Imperatriz MA.

6.2 Cultura de clulas e isolamento viral.


O cultivo estabelecido correspondeu a animais dos municpios de
Imperatriz, Governador Edson Lobo e Davinpolis. Foram visualizados alguns efeitos
citopticos como formao de sinccios e alteraes morfolgicas celulares (FIGURA
11 e 12).
Aps o 16 dia da inoculao das clulas de cultura primria nas clulas de
cultura de leuccitos dos animais comprovadamente positivos pelo IDGA, a amostra
35.2, demonstrou a ao muito ltica, havendo formao de vrios sinccios e destruio
da monocamada acima de 90%, onde foi observado debris e clulas mortas. As amostras
35.3, 35.4 e 33.9 apresentaram discreta formao de sinccio e alteraes morfolgicas.

51

FIGURA 11 Co cultivo de leuccitos apresentando formao de sinccios corados


com cristal de violeta a 0,1%.

FIGURA 12 - Co cultivo de leuccitos apresentando formao de sinccios corados com


cristall de violeta a 0,1%.

7. DISCUSSO
A maioria dos produtores informou que criam os animais apenas para o
consumo, no entanto, esporadicamente medida que o rebanho cresce, eles vendem o
excedente. Os produtores que criam para consumo prprio (36,36%) no vendem os
animais porque estes so de baixo valor zootcnico. Em contrapartida, os que realizam a

52

venda descobriram que as criaes podem representar uma possibilidade de capital


rpido quando necessrio.
Um dos grandes entraves da nossa agricultura familiar a falta de
conhecimento dos pequenos proprietrios em gesto financeira. No presente estudo
constatamos a falta de viso empresarial no gerenciamento da propriedade, aliados ao
completo desconhecimento de mercado e dos meios para acess-lo e incapacidade para
agregar preo aos produtos.

De acordo com Holanda Jnior e Campos (2003) a

administrao ineficiente quando no planeja e no contabiliza as receitas e seus


gastos, ou seja, no utilizam os recursos administrativos. Assim extremamente que os
proprietrios que gerenciam seus negcios mantenham atualizados, conforme afirmam
Faria et al. (2004).
De acordo com Holanda Jnior e Campos (2003) a ineficincia da administrao que
no planeja e no contabiliza suas receitas e seus gastos, no utilizando recursos
administrativos. FARIA et al. (2004) comentaram a necessidade da atualizao dos
produtores que gerem seus prprios negcios. Neste estudo observou-se
Dos produtores que produzem para consumo prprio (36,36%) no se
sentem prontos para venda, pois os animais so de baixo valor zootcnico, em
contrapartida realizam a venda e j descobriram que tem em suas criaes, uma
possibilidade de capital rpido quando necessrio.
A maioria das propriedades adotava o regime de criao extensivo (54,4%)
ou semi-intensivo (45,6%). Esses dados so semelhantes aos encontrados em trs
municpios no interior da Bahia (TINCO, 1983), bem como no trabalho realizado nas
regies centro, leste e norte do estado do Maranho (TEIXEIRA, 2012). Magalhes
(1985), em levantamento realizado em criatrios caprinos localizados nos estados do
Rio de Janeiro e Minas, encontrou 54,2% dos criatrios de caprinos em regime
intensivo e 45,8% em regime semi-intensivo. O regime de criao encontrado reflete o
nvel sociocultural dos criadores de caprinos.
A explorao dos caprinos e ovinos do Nordeste est mais relacionada com
a subsistncia, com baixa adoo de tecnologia e pouco incremento da renda, enquanto
nos criatrios das regies Sul e Sudeste so mais tecnificados (GOUVEIA, 2003).

53

Apenas duas propriedades (8,80%) no realizam vermifugao do rebanho e


a maioria dos criatrios (91,2%) a realizam no mesmo calendrio do rebanho bovino. A
verminose gastrointestinal uma doena comum aos rebanhos de caprinos, com
incidncia de aproximadamente 99% (VIEIRA et al., 1998). OLIVEIRA et al., (1995)
encontraram a prtica de vermifugao em 74%, 75%, 93% e 96% dos criatrios
pesquisados nos estados do Cear, Piau, Bahia e Pernambuco, respectivamente,
enquanto que MAGALHES (1985) observou vermifugao em 79,1% dos criatrios
leiteiros. CALDAS et al. (1989) relatam que no Nordeste da Bahia somente 36,5% dos
criadores realizavam vermifugao dos rebanhos.
CALDAS et al. (1989) verificaram que somente 8,7% dos criadores de
caprinos no Nordeste da Bahia realizavam vacinao contra raiva/aftosa, 0,4% contra
botulismo/carbnculo e 0,1% contra linfadenite caseosa.
As alteraes clnicas observadas neste estudo so citadas por Teixeira
(2012), sendo as de maior ocorrncia em caprinos e ovinos respectivamente, verminose
(97,60% e 95,2%), linfadenite caseosa (84,10% e 79,5%), miase (79,30% e 73,50%),
aborto (73,30% e 67,50%) e pododermatite (70,70% e 68,70%).
O baixo ndice de utilizao das prticas de manejo sanitrio por parte dos
criatrios estudados contribui, sem dvida, para a manuteno dos altos nveis de
mortalidade e de morbidade observados.
Quando analisamos estes dados associando ausncia das prticas de
manejo sanitrio e, principalmente a falta de planejamento administrativo conclumos
que de fato a caprinovinocultura no est no mesmo nvel de maturidade estratgica e de
negcios de outros setores da pecuria como a avicultura, a suinocultura e mesmo a
bovinocultura.
No estado do Maranho, a enfermidade est disseminada desde a dcada de
90, alcanando ndices de prevalncia de 50,60% em animais de distintos padres
raciais (ALVES e PINHEIRO, 1997). Estudo recente realizado por Teixeira (2012)
relata a permanncia e circulao das lentiviroses de pequenos ruminantes nas regies
leste, centro e norte do estado do Maranho, com prevalncia em caprino e ovinos de
2,8% e 0,7%, respectivamente. Este fato refora a necessidade do controle desta doena,
visto que este estudo demonstrou prevalncia ainda maior do que o observado nestas
regies.

54

Os estados fornecedores de caprinos e ovinos para formao de rebanho e


melhoramento gentico foram: Minas Gerais, que apresenta prevalncia que varia de
47,9% 51,2%, em caprinos leiteiros das raas Saanen e Torggenburg (CASTRO et
al.,, 1999c); Bahia, com prevalncia variando de 12,82% 24,19%, em animais com
aptido leiteira (ASSIS E GOUVEIA, 1994; EDELWEIS et al.,, 2002); e Paraba, onde
a prevalncia variou de 1,5% 0,70% em animais sem raa definida (CASTRO, 2002).
A transmisso horizontal de LVPR por fezes, saliva, secrees respiratria e
urogenital tem sido considerada importante (CUTLIP et al., 1988, CONCHABERMEJILLO, 1997). Quando caprinos e ovinos participam de feiras, exposies ou
outras atividades que promovem aglomerao de animais, dependendo da situao
particular de exposio dos animais (ADAMS et al., 1983, PERETZ et al., 1993), estes
podem se infectar com LVPR, considerando-se que nestes eventos muitos animais so
alojados em baias superlotadas. Isso explica no presente estudo a alta prevalncia para
LVPR encontrada em propriedades que os animais participam destes tipos de eventos.
Nas 57 propriedades que foram visitadas, 24,6% (20/57) criam caprinos e
ovinos juntos. Destas, 60,00% (12/20) apresentam animais com anticorpos anti-LVPR.
Entre os anos de 1983 e 85 foram realizados estudos de transmisso interespcie
experimentalmente (BANKS et al., 1983, OLIVER et al., 1985). Embora at o fim da
dcada de 90, CAEV e Maedi-visna vrus eram tidos como vrus espcie-especficos.
Em 1988 MARCHESIN et al., sugeriram similaridade gentica entre CAEV e MaediVisna ao realizar a caracterizao molecular parcial do gene gag, o que levantou a
hiptese da transmisso interespcie. Com o isolamento, no Brasil, de amostras de vrus
caprino e os seus estudos filogenticos dos genes Pol e Tat, que as caracterizou mais
prximas do vrus Maedi-Visna K1514 dos ovinos na rvore filogentica (CASTRO et
al., 1999a). Graas a esses estudos, atualmente, pode-se afirmar que ocorre a
transmisso de LVPR interespcie. Quando foi avaliada a criao conjunta de caprinos e
ovinos, constatou-se que no houve diferena estatisticamente significativa (P =
0,2600).
A tcnica de cultivo de leuccitos com posterior co-cultivo foi eficaz no
isolamento do vrus. Lima et al (2004) e Tigre et al (2006) demonstraram que a tcnica
de cultivo de leuccitos e co-cultivo em MSC eficiente para o isolamento do CAEV.

55

Feitosa et al (2010) tambm obtiveram xito no isolamento viral por meio do co-cultivo
de leuccitos com MSC.
O efeito citoptico produzido caracterizado pela formao de clulas
gigantes multinucleadas (sinccio) e lise celular (CAREY & DALZIEL, 1983).
Os padres relacionados ao tipo de efeito citoptico e destruio da
monocamada, de forma geral foram similares com os relatos de isolamento de amostras
lticas de LVPR (NARAYAN et al., 1980; CHEBLOUNE et al., 1996; MARCHESIN
et al., 1997; CASTRO et al., 1998; LIMA, 2004).

56

8. CONCLUSES
Os resultados obtidos por meio da aplicao de questionrio aos produtores,
os testes de imunodifuso em gel de agarose e cultivo celular demonstram que:

O caprinovinocultor da mesorregio oeste do Estado do Maranho, mesmo


sendo um indivduo alfabetizado e detentor de patrimnio que viabilize a
contratao de tcnicos especializados, no tem acesso informao pertinente
sua criao, seus rebanhos so pequenos e criados extensivamente em
instalaes rsticas;

O gerenciamento da propriedade inadequado e sua ineficincia impede


inclusive a reserva alimentar para o perodo de escassez. O manejo sanitrio dos
caprinos e ovinos nesses criatrios precrio, independente do tipo de
explorao ou regime de criao;

Verificou-se que problemas como helmintoses, linfadenite, mamite, pneumonia


e artrite acometem a maioria dos rebanhos estudados e que as prticas bsicas de
manejo sanitrio so ignoradas pelos produtores;

Neste estudo no foi observada alta prevalncia das lentiviroses de pequenos


ruminantes, correspondendo a 7,5% (53/710) em ovinos e 7,4% (14/190) em
caprinos; dentre os quatorze municpios avaliados, doze apresentam animais
positivos para LVPR, o que caracteriza o vrus circulante nas propriedades
avaliadas;

A tcnica de cultivo de leuccitos com posterior co-cultivo foi eficaz no


isolamento do vrus, demonstrando efeito citoptico das amostras positivas
analisadas.

57

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73

APNDICE 1 - Questionrio aplicado aos produtores de caprinos e ovinos da


microrregio de Imperatriz, Estado do Maranho.

IDENTIFICAO DO PRODUTOR
Nome:____________________________________________________Idade:________
Endereo: ________________________________________________________
Cidade: ___________________________ CEP: _____________________________
Telefone de Contato:__________________Com: _______________________
Reside na Propriedade:
( ) Sim
( ) No
Filiado : _______________________________________________________
REBANHO
1)
Ano de Incio da Criao : _________________________________________
2)

Motivo para Iniciar a Criao : _____________________________________

3)

Origem do Rebanho Base:


( ) ImportadoPas : ________ ( ) Nacional

Estado: ______

4)

Tipo de Explorao : ( ) Carne

( ) Leite

5)

Tipo de Criao :

( ) Intensiva

( ) Semi-intensiva

6)

Espcies que Cria :

( ) Caprina

( ) Ovina

7)
Origem dos Reprodutores: ( ) Comprados
Emprestados
8)
Participa de Feiras de Animais ?
( ) No
Onde ? _________________
9)
Composio de Rebanhos Caprino e Ovino :

( ) Mista
( ) Extensiva

( )Outras__________

( ) Trocados (

( ) Sim

Caprinos - Raa/ Tipo Racial


Anglo - Toggembur British. Saane Alpin Boe Mesti
Nubiana
g
Alpine
n
a
r
a

SR
D

Outr
a

Rebanho
Total

Ovinos Raa/Tipo Racial


Sta. Ins
Outra: ________________________________________________________________
IDENTIFICAO DA PROPRIEDADE
10)
rea ( ha ): ______________________________________________________
11)

Tipo de Aprisco: ( ) Cho Batido ( ) Ripado

( ) Cimentado ( ) Outro

74

12)

Pastagem:

( ) Natural

13)

rea de Pastagem:

( ) Artificial

Natural : __________ ha

( ) Ambas
Artificial : __________ ha

14)
Tipo
de
Pastagem
_____________________________________________
15)
Finalidade da Pastagem Artificial:
Direto ( ) Suplementao Cocho

( ) Feno

16)

( ) No

Possui Reserva de Mata Nativa :

Artificial:

( ) Silagem (

) Pastoreio

( ) Sim

rea da Reserva: ______________ ha


17)

Possui Cercas Limtrofes ?

( ) No

( ) Sim

18)
19)

Possui Cercas de Diviso de Cercados ?


( ) No
Alimentao: ( ) Pasto ( ) Silagem ( ) Feno
( ) Concentrado Industrial ( ) Outro _____

20)
Mineralizao :
( ) No
( ) Qual : __________________________

( ) Sim

21)
Sala de Processamento de Leite :
( ) No
( ) Tipo : __________________________
22)

Destino do Leite :

( ) Consumo

( ) Sim
) Capim de Corte

( ) Sim

( ) Venda

23)
A Comercializao Feita: ( ) In Natura ( ) Congelado( ) Subprodutos
Em P ( ) Longa Vida
24)
Local de Comercializao:
Municpio ___________

( ) Mesmo Municpio

25)
Fabricao de Subprodutos: ( ) Queijo
( ) Sorvete ( ) Outro ______________
26)

Acompanhamento Tcnico : ( ) No

) Iorgute

( ) Em Outro
(

) Doce de leite

( ) Sim

27)
Profissional que Realiza o Acompanhamento :
( ) Veterinrio
( ) Zootecnista
( ) Engenheiro Agrnomo (
Tcnico em Agropecuria
( ) ADR
28)
Freqncia de Acompanhamento Tcnico :
( ) Semanal
( ) Quinzenal ( ) Mensal ( ) Semestral (
Necessita
29)

Tipo de Acompanhamento: ( ) Privado

( )

( ) Pblico

) S Quando

75

MANEJO SANITRIO:
30)
Numerar, em ordem de importncia, as alteraes clnicas, colocando o mesmo
nmero nas de mesmas importncias.
( ) Aborto
( ) Ectoparasitoses
( ) Artrite
( ) Linfadenite Caseosa - Mal do Caroo
( ) Miases - Bicheiras
( ) Mamites
( ) Ceratoconjuntivites
( ) Pneumonias
( ) Diarrias Freqentes
( ) Pododermatites - Mal dos Cascos
( ) Sintomas Nervosos
( ) Ectima Contagioso
31)

Vermifugao:

( ) No

( ) Sim

Freqncia : ____________

32)

Produto(s) Utilizado(s): ____________________________________________

33)
Sim

Alterna o produto utilizado na Vermifugao ?


Periodicidade : _________________

( ) No

34)
Prticas Zoosanitrias Adotadas com Freqncia :(
) Administrao do
Colostro
( ) Corte e Desinfeco do Umbigo
( ) Marcao
( ) Vermifugao
( ) Permanncia Mnima de 12 Horas Aps a Vermifugao no Curral
( ) Desinfeco do Curral aps Vacinao e Vermifugao
( ) Troca Anual do Vermfugo
( ) Faz Uso de Esterqueiras
( ) Vermfuga os Animais Recm Chegados na Propriedade
( ) Faz Quarentenrio Mesmo dos Animais da Propriedade Aps Feiras
( ) Separa Animais Jovens de Adultos
( ) Separa Machos de Fmeas
( ) Faz Descanso de Pastagens
( ) Enterra ou Crema Animais Mortos com Morte Natural
( ) Os Diagnsticos So Feitos por Tcnicos
( ) Isola Animais Doentes
( ) Possui Piquete Maternidade
( ) Esteriliza Material de Aplicao de Medicamentos
( ) Usa Seringas e Agulhas Descartveis
( ) Faz Aleitamento Artificial
( ) Adota e Cumpre Calendrio Profiltico
Vacinas
Doena
Freqncia

Exames Laboratoriais

76

Doena
Coprolgico
Brucelose
Leptospirose
Tuberculose
Toxoplasmose
CAEV

No

Sim

Observao

Periodicidade

CONTROLE DE LENTIVRUS DE PEQUENOS RUMINANTES


35)
Tem conhecimento da Doena ?
( ) No

( ) Sim

36)

Tem Diagnstico no Rebanho ?

( ) Sim

37)

Tipo de Diagnstico :

( ) No
( ) Clnico

( ) Laboratorial

38)
Assinale com um "X" , no quadro a seguir, as medidas adotadas no criatrio e
acrescentar outras no citadas.
X

Medidas
Sorologia peridica e sacrifcio dos positivos
Sorologia peridica e separao dos positivos
Sorologia de todos os animais antes e 30 dias aps a compra
Utilizao individual de materiais descartveis ( seringas e agulhas) ou esterilizados
Desinfeco do nmero do tatuador antes do uso em cada animal
Separao imediata das crias e das mes logo aps o parto
Administrao de colostro de cabra termizado e leite pasteurizado ou fervido
Administrao de colostro e leite de vaca como substituto aos de cabra
Utilizao de inseminao artificial com smen congelado procedente de lote testado por
PCR

REPRODUO
39)
Faz Estao de Monta?
( ) No
( ) Sim
40)
Usa Rufies?
( ) No
( ) Sim
41)
Origem do reprodutor
( ) Mesmo Estado (
)
Outro
Estado
______________
42)
Qual a Relao de Reprodutores por Matriz ? ____ Reprodutor : ___ Matrizes
43)
Observa Repetio de Cios? ( ) No
( ) Sim
44)
Faz Inseminao Artificial ? ( ) No
( ) Sim
45)
Faz Diagnstico de Prenhez ?
( ) No
( ) Sim
46)
Faz Pr-Parto ?
( ) No
( ) Sim

77

47)

Tem Observado Casos de Reteno de Placenta?

MANEJO DAS CRIAS


48)
Identificao do Rebanho : ( ) No

( ) No

( ) Sim

( ) Sim

49)
Tipo de Marcao:
( ) Brinco ( ) Tatuagem
Corte na Orelha
( ) Outro _________________

50)
Tipo de Colostro Dado s Crias:
( ) Artificial

( )De Cabra

51)
Tratamento do Colostro:
Termizado
52)

Possui Banco de Colostro ?

53)

Aleitamento:

( ) In Natura

( ) Natural

Nmero de Ordenhas por Dia:

57)

Local da Ordenha :

( ) Sim

) De Soja

( ) Mecnica
( )1

58)
Higienizao da Sala e/ou Equipamento:
Produto : ___________________________

( )2

60)
Limpeza das Mos e bere: ( ) No
_____________

( ) Mais de 2

( ) Baia

( ) Curral

( ) No

( ) Sim

( ) No

61)
Imerso das Tetas Aps Ordenha:
_______

) Pasteurizado ( )

( ) De Cabra ( ) De Vaca (

( ) Sala

Faz Linha de Ordenha?

( ) Artificial

( ) Manual

56)

59)

( ) No

54)
Leite Utilizado no Aleitamento :
( ) Artificial
( ) Outro _______
PRODUO DE LEITE
55)
Tipo de Ordenha :

( ) De Vaca

)Medalha

( ) Sim
( ) Sim

( ) No

Produto

( ) Sim

Produto

:
:

62)
Tratamento Preventivo de Mamites em Cabras Secas: ( ) No
Produto: ______________________

( ) Sim

63)
Critrio de Secagem da Cabra : ( ) Baixa Produo
Lactao
( ) Perodo de Gestao ( ) Outro

) Perodo de

64)

Perodo Mdio de Lactao: _____________________ dias

PRODUO DE CARNE E PELES

78

65)
Local que Vende Cabritos:
( ) Outro Estado

( ) Prprio Municpio

66)

( ) Em P

Vende Animais :

67)
Idade ao Abate:
Mais de 12

( ) Outros Municpio

( ) Abatidos

( ) Menos de 6 Meses

( ) Entre 6 e 12

( ) Recria

69)

( ) No

( ) Sim

( ) Prprio Municpio

( ) Outros Municpio

70)
Destino da Pele:
( ) Outro Estado

PREVENO DE VETORES E RESERVATRIOS DE DOENAS


71)
Faz Controle de Roedores na Propriedade? ( ) No
Como? ____________________________

68)
Compra Animais Para:
Terminao
Beneficia a Pele?

( )Terminao

) Recria e

( ) Sim

72)

Quantos Gatos Existem na Propriedade? ___________________

73)
Sim

Os Gatos Tm Acesso s Baias, Sala de Ordenha, ou Currais?

( ) No ( )

74)

Os Caprinos e Ovinos So Criados Juntos?

( ) Sim

75)
No

Os Caprinos e Ovinos tm Contato Direto com Animais Silvestres ?


( ) Sim
Especifique: ___________

( ) No

AMOSTRAS:
o

N de ordem

Sangue
Protocolo Identificao

N de ordem

Leite
Protocolo

Identificao

79

OBSERVAES ADICIONAIS
______________________________________________________________________
______________________________________________________________________
__________