UNIVERSIDADE FEDERAL DO RIO GRANDE DO NORTE

Grupo: Bruno Robson Simonetti Silva Fernanda da Silva Pereira Vanessa da Silva Pessa Data: 12/11/10 Disciplina: Bioqumica Fundamental para n!en"eiros Professor: #ui$ Roberto %i$ de &breu

Aula Prtica:
Intro$u"#o:

aracteri!a"#o $as Prote%nas

&s protenas s'o as macromol(culas mais abundantes nas c(lulas vivas) sinteti$adas pelos or!anismos vivos a partir da condensa*'o e rearran+o entre os 20 amino,cidos presentes na nature$a) li!ados covalentemente em sequ-ncias lineares. & partir da capacidade de combinar os amino,cidos nas mais variadas /ormas os or!anismos podem sinteti$ar protenas lar!amente di/erentes entre si) e0ercendo /un*1es como en$imas) "ormnios) transportadores) anticorpos) protenas do cristalino do ol"o) pernas de p,ssaros) teias de aran"a) c"i/re de rinoceronte) protenas do leite) antibi2ticos) venenos de /un!os e dentre outras in/inidade de produtos. &s protenas s'o /ormadas pela desidrata*'o de amino,cidos) onde os resduos de amino,cidos se li!am aos seus vi$in"os por li!a*1es covalentes e podem ser redu$idas tamb(m aos seus amino,cidos constituintes pela "idr2lise. S'o divididas quanto a sua estrutura em: prim,ria 3li!a*1es peptdicas e estrutura linear4) secund,ria 3mantidas por pontes de "idro!-nio entre as carbonilas e o "idro!-nio) /ormando cadeias em "(lice ou /ol"as4) terci,ria 3/ormada pelo enovelamento da cadeia polipeptdica apresentando li!a*1es do tipo) intera*1es inicas) intera*1es "idro/2bicas) ponte de "idro!-nio e pontes dissul/eto4 e quatern,ria 3mais de uma cadeia polipeptdica4. 0istem caractersticas prot(icas que podem ser identi/icadas com simples rea*1es) que permitem a descoberta e identi/ica*'o das li!a*1es peptdicas) dos !rupos aminas) de como as protenas se comportam /ora e dentro de seu ponto isoel(trico) a observa*'o da desnatura*'o prot(ica e quais /atores inter/erem nessa desnatura*'o.

O&'eti(os: 5bservar v,rias caractersticas das protenas com o au0lio de rea*1es de mecanismo previamente con"ecido: Rea*'o do Biureto 36denti/icar #i!a*1es Peptdicas4) Rea*'o da 7in"idrina 36denti/icar 8rupos &minos4) Rea*'o de Precipita*'o pelo 9cido :ricloroac(tico 35bservar desnatura*'o e precipita*'o das protenas carre!adas positivamente4) Rea*'o de Precipita*'o Salina 35bservar a precipita*'o da protena causada pela desidrata*'o) ;Saltin! 5ut<4) :ermocoa!ula*'o 35bservar a rea*'o de coa!ula*'o da protena estando dentro ou /ora do seu ponto isoel(trico4. )aterial e )*to$os: =aterial: > :ubos de nsaio? > Suporte para :ubos de nsaio? > Bast'o de Vidro? > Pipetas? > P-ra? > #amparina? > Reativo de Biureto? > sp,tula? > 9!ua destilada? > @r(ia? > Solu*'o de 5voalbumina? > Solu*'o de 7in"idrina? > Solu*'o de 9cido :ricloroac(tico A 10B? > Solu*'o de Sul/ato de &mnia A CDB? > Solu*'o de 9cido Elordrico 0)1=? > Solu*'o de Fidr20ido de S2dio 0)1=? > Solu*'o :amp'o &cetato pF G)C? > Procedimentos: + , Rea"#o $o -iureto: > numerou>se 0H tubos de ensaio? > 7o primeiro tubo pipetou>se 2 m# de ,!ua destilada? > 7o se!undo tubo adicionou>se uma pequena quantidade de ur(ia com a+uda de uma esp,tula e aqueceu>se? > &dicionou>se 2 m# de ,!ua destilada no se!undo tubo? > 7o tubo terceiro tubo adicionou>se 2 m# de solu*'o de ovoalbumina? >&dicionou>se H m# do Reativo de Biureto em cada tubo) "omo!enei$ou>se e anotou>se os resultados obtidos. . , Rea"#o $e Ni/in$rina > m um tubo de ensaio adicionou>se 2 m# da solu*'o de 7i"indrina? > &dicionou>se 0D !otas da solu*'o de ovoalbumina? > Ferveu>se a solu*'o por 2 minutos) cuidadosamente. 0 , Rea"#o $e Precipita"#o pelo T A 12ci$o Tricloroac*tico3 > Eolocou>se em um tubo de ensaio 2 m# de solu*'o de ovoalbumina? > &dicionou>se 1 m# de ,cido tricloroac(tico A 10B? > 5bservou>se a precipita*'o.

4 , Rea"#o $e Precipita"#o por Satura"#o Salina 1Saltin5 Out3 > Pipetou>se para um tubo de ensaio D m# de solu*'o de ovoalbumina? > &dicionou>se 10 m# de solu*'o de sul/ato de amnia A CDB? > =isturou>se por invers'o? > &p2s 10 minutos /iltrou>se para um novo tubo de ensaio? > Pipetou>se 2 m# do /iltrado para um outro tubo de ensaio e adicionou>se H m# do Reativo de Biureto? > &notou>se as obversa*1es. 6 , Ter7ocoa5ula"#o > 7umerou>se 0H tubos de ensaio? > &dicionou>se D m# de solu*'o de ovoalbumina nos tr-s tubos? > 7o primeiro tubo adicionou>se 1 m# de ,cido clordrico 0)1=? > 7o se!undo tubo adicionou>se 1 m# de "idr20ido de s2dio 0)1=? > 7o terceiro tubo adicionou>se 1 m# de solu*'o :amp'o &cetato pF G)C? > &!itou>se os tubos e os colocou em ban"o>maria /ervente por D minutos? > Res/riou>se os tubos e obvervou>se em quais "ouve /orma*'o de coa!ulo? > 7o se!undo tubo adicionou>se 0)D m# de solu*'o :amp'o &cetato pF G)C? > 5bservou>se os resultados. Resulta$os e Discuss#o: 7a rea*'o do Biureto observou>se na ovoalbumina a presen*a de li!a*1es peptdicas) atrav(s do aparecimento da colora*'o violeta) decorrente da rea*'o entre o !rupo E57F da ovoalbumina e o cobre do Biureto) que estava o0idado pelo pF alcalino. 7a rea*'o da 7in"idrina observou>se a presen*a de !rupos aminos) pois a solu*'o de 7in"idrina aquecida com solu*'o de amino,cidos) peptdeos) ou protenas) desenvolve colora*'o a$ul>violeta. & rea*'o se d, por o0ido> redu*'o) com libera*'o de amnia e aldedo por desamina*'o o0idativa. 7a rea*'o de Precipita*'o pelo ,cido tricloroac(tico observou>se a desnatura*'o e precipita*'o das protenas em meio ,cido) /ormando sais de protenas. 7a rea*'o de Precipita*'o Salina observou>se a que adi*'o de sais precipitou a ovoalbumina e que esta depois de /iltrada) n'o apresentou positividade para a Rea*'o do Biureto) indicando que toda a protena precipitada /oi retida no papel /iltro. 7a rea*'o de :ermocoa!ula*'o observou>se que s2 ocorre coa!ula*'o mediante aquecimento se a protena encontrar>se em seu ponto isoel(trico) e tamb(m que se a protena /or aquecida /ora da /ai0a do seu P6 e depois /or inserida nesta /ai0a ocorrer, uma possvel /locula*'o. 8uest9es para Fi:a"#o $a Aula Prtica: 01 I Jual o ob+etivo de reali$ar a rea*'o do biureto com a ur(ia aquecida e com a ovoalbuminaK Resposta: 5 ob+etivo de reali$ar a rea*'o do biureto com as duas substLncias citadas ( mostrar que ambas possuem li!a*1es peptdicas e consequentemente que estas substLncias possuem estrutura de proteinas)

visto que a rea*'o entre o Biureto) o cobre o0idado e o !rupo E57F das li!a*1es peptdicas das protenas resulta em uma colora*'o violeta. 02 I Eomo rea!e uma protena quando precipitada por ,cidos como o Pcrico) :un!stico) :E&) etc.K Resposta: Juando uma protena rea!e com ,cidos como os citados acima elas desnaturam e precipitam) pois estes ,cidos /ornecem ons ne!ativos) que se li!am as mol(culas de protenas positivamente carre!adas e /ormam sais de protenas) que precipitam) pois n'o possuem car!a lquida e consequentemente n'o intera!em /ortemente com as mol(culas de ,!ua. 0H I 0plique o que voc- observou na e0peri-ncia G. 5 que /icou retido no papel /iltroK Por que a rea*'o do biureto /oi ne!ativa para o /iltrado obtidoK Resposta: 7a e0peri-ncia G observou>se que a adi*'o de sais precipitou a ovoalbumina. & ovoalbumina /icou completamente retida no papel /iltro. & rea*'o do Biureto /oi ne!ativa para o /iltrado obtido) pois este /iltrado n'o contin"a ovoalbumina) +, que esta /icara totalmente retida no papel /iltro. 0G I Por que "ouve coa!ula*'o no tubo HK 5 que voc- observou nos tubos 1 e 2K Resposta: Fouve coa!ula*'o no tubo H porque a ovoalbumina estava dentro da /ai0a do seu ponto isoel(trico) ent'o as protenas depois de desnaturadas coa!ularam pois estavam sem car!a lquida e n'o estavam intera!indo /ortemente com a ,!ua. 7os tubos 1 e 2 n'o "ouve coa!ula*'o) pois a ovoalbumina estava /ora da /ai0a do seu ponto isoel(trico) lo!o mesmo sendo desnaturada pelo calor ainda manteve>se solMvel em ,!ua devido A presen*a de car!a que resulta em intera*'o com a ,!ua. 0D I &p2s adicionar a solu*'o tamp'o no tubo 2 o que voc- veri/icouK Resposta: &p2s a adi*'o de solu*'o tamp'o no tubo 2 veri/icou>se o aparecimento de um co,!ulo esbranqui*ado na super/cie) indicando que se a protena estiver desnaturada e /ora da /ai0a do seu ponto isoel(trico) ela poder, ser coa!ulada quando inserida dentro da /ai0a do seu p6. onclus#o: Eoncluiu>se que e0istem v,rias rea*1es que nos permitem entender mel"or a estrutura das protenas) como tamb(m observar /atores como precipita*'o e coa!ula*'o e tamb(m a in/lu-ncia do ponto 6soel(trico sobre a coa!ula*'o. 5bservou>se que a rea*'o do Biureto serve para identi/icar as li!a*1es peptdicas e a rea*'o da 7in"idrina nos permite identi/icar os !rupos aminos. Eonstatou>se que al!umas substLncias em contato com as protenas /a$em com que estar precipitem) como por e0emplo) al!uns ,cidos e al!uns sais. Por /im) viu>se que uma protena estando /ora do seu ponto isoel(trico n'o coa!ula mediante aquecimento) a protena s2 ir, coa!ular se ocorrer aquecimento e ela estiver no seu ponto isoel(trico ou /or posteriormente inserida neste 37este caso a coa!ula*'o ( menor4. -i&lio5rafia:

LEHNINGER, A. L.; NELSON, D. L. COX, M. M. Princpios de Bioqumica. So Paulo: Sarvier, 199 . CHAMPE, Pa!ela C.; HAR"E#, Ri$%ar& A. Bioqumica Ilustrada. Artes Mdicas. Por'o Ale(re, 199).