Efecto del uso de productos qumicos de laboratorio en Drosophila melanogaster (Diptera Drosophilidae) en trminos de bioqumicos y morfolgicos

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&'#! (O )!*+%',O I. (ntroduccin. II. !ntecedentes. (((. Ob/eti0os.

)!*+%',O 1 Efectos de la e2posicin de Drosophila melanogaster (Diptera 3 Drosophilidae) al a4ul de )omassie. (ntroduccin. #ateriales y #todos. esultados y discusin. eferencias. )!*+%',O 5 Efectos de la acrilamida sobre producti0idad6 el comportamiento y peso en dos poblaciones de Drosophila melanogaster esumen (ntroduccin #ateriales y mtodos. esultados Discusin eferencias )!*+%',O 7 Efectos de las ba/as concentraciones de plomo6 cromo y aluminio6 sobre la producti0idad de Drosophila melanogaster esumen (ntroduccin #ateriales y mtodos esultados Discusin eferencias )!*+%',O 8 Efectos de las ba/as concentraciones de aluminio6 cromo y plomo en el comportamiento6 peso6 0iabilidad del hue0o y acti0idad de la carbo2ilesterasa de un stoc9 de isofemale de Drosophila melanogaster esumen (ntroduccin #ateriales y #todos esultados Discusin eferencias )!*(%',O : Discusin general. )!*+%',O ; )onclusin.

)!*+%',O (

esumen
La presencia de residuos qumicos en el medio ambiente afecta a todo el ecosistema. Una de las tcnicas empleadas para estudiar los efectos de los residuos qumicos txicos es la biovigilancia, que utiliza modelos como los organismos vivos, incluidos los insectos. Uno de los gneros utilizados es Drosophila, en particular, las especies D. melanogaster cosmopolita de distribucin. e trata de un bien explorada genticamente, de mantenimiento f!cil " r!pido ciclo de vida, que despus de la secuenciacin completa de su genoma revel #$% de homologa de sus genes con los genes de enfermedades humanas. &ntre los productos qumicos que fueron investigadas en este traba'o son los tres metales txicos (aluminio, cromo " plomo), un colorante (azul brillante de *oomassie +,-$) " la acrilamida producto sinttico. &l an!lisis se llev a cabo a ba'as concentraciones (-$ micras), con nfasis en la funcin acumulativa de cada exposicin a sustancias qumicas durante diez generaciones. &l an!lisis, basado en la biologa del insecto, calificaron su productividad, cambios morfolgicos, viabilidad de las diferentes etapas de desarrollo, el peso de los insectos, el comportamiento sexual " la actividad de la enzima carboxilesterasa. .ambin se llev a cabo un experimento en la productividad en comparacin con dos lneas, una masa " isof/mea otro. La exposicin a la acrilamida, el aumento de la productividad en la primera exposicin, " tambin redu'o la viabilidad de los huevos a los adultos en las generaciones 01 " 02$. 3 su vez, entre los metales, el plomo, afectado a la viabilidad de los huevos en pupas en la dcima generacin " que los cambios en el momento de la pre4cpula " la cpula. La exposicin al cloruro de aluminio, se revela en la primera " la quinta ma"or duracin de la unin, " la dcima generacin aumento de la duracin de la cpula. Dicromato de potasio mostr un aumento en la frecuencia de cambios morfolgicos en la tercera generacin. 5ubo una reduccin en el n6mero de huevos generaciones 01 " 02$, prolongado apareamiento pre4generaciones 02 " 0- " 02$ en la generacin de la cpula. La tincin de *oomassie azul fue el producto menos afectado que la biologa de D. melanogaster. &n la sptima generacin ha habido aumento significativo en la emergencia del adulto. &n las pruebas de comportamiento se observ aumento prcpula tiempo de generacin en generacin, sin embargo, hubo aumento de la viabilidad de los huevos cuando la hembra supongo que el grupo tratado con *oomassie. &n comparacin con las dos cepas, cada una tena sus peculiaridades, de acuerdo con la sustancia de ensa"o, el cambio en el promedio de las economas emergentes eran frecuentes, pero mantuvo un patrn o una tendencia. &l traba'o dio lugar a varias preguntas sobre la toxicidad " los mecanismos de defensa que debe ser analizado con ma"or profundidad. (. ("% OD'))(<" Las sustancias qumicas est!n presentes en todas las formas de la actividad humana, "a sea directa o indirectamente. in embargo, dependiendo de las condiciones en que se encuentren o se utilizan, pueden crear riesgos para la salud " el medio ambiente. Una de las formas m!s visibles de la exposicin humana a productos qumicos se produce a travs de la generacin de residuos procedentes de actividades industriales (*alafat et al., ,$$#), " estos a menudo se celebran en lugares cerca de los hogares, lo que aumenta la probabilidad de contaminacin por la poblacin slidos, lquidos " gaseosos (7ordaens et al., ,$$#). 8tra forma de exposicin es el profesional, "a sea en la industria manufacturera o en los laboratorios de investigacin. 3 menudo, los procedimientos desarrollados requieren contacto directo con productos txicos, cancergenos o genotxicos. &n la actualidad, por uno de estos productos, existe poca informacin sobre los efectos txicos para la salud (*alafat et al., ,$$#), especialmente cuando se refiere a la exposicin continua durante m!s tiempo. *omo la presencia de residuos qumicos en el medio ambiente afecta a todo el ecosistema

en trminos de funcionamiento " la estructura (0&9., ,$$1) durante los 6ltimos 1$ a:os comenz a traba'ar las tcnicas de biomarca;<o base para el an!lisis de una exposicin txica. =iomonitoreo como una herramienta para el estudio de toxicidad tiene varias venta'as tales como ba'o costo, posibilidad de grabar la contaminacin " sus efectos "a en muchos lugares al mismo tiempo (>3993? et al., ,$$-). Dado que esta tcnica se basa en el uso de organismos vivos ha iniciado recientemente un proceso de reduccin del uso de animales vertebrados en las pruebas toxicolgicas " de investigacin ( iddiqui et al., ,$$-). Dada la importancia ecolgica de los invertebrados, su uso como un sistema modelo para los vertebrados (5irsch et al., ,$$1) ha contribuido a los estudios de toxicologa. Un uso invertebrados grandes en los estudios de toxicologa es la Drosophila melanogaster, una distribucin cosmopolita. &l gnero Drosophila es recomendado por el *entro &uropeo para la @alidacin de Atodos 3lternativos (*&@A3), como modelo apropiado para la investigacin de insectos " las pruebas en esta !rea (=enford et al., ,$$$). Durante la 6ltima dcada, este gnero se ha convertido en uno de los me'ores organismos para el estudio de enfermedades humanas " los estudios toxicolgicos ( iddiqui et al., ,$$-). Bor lo tanto, se ha utilizado no slo por las poblaciones naturales son resistentes a las toxinas liberadas por los humanos en el medio ambiente, sino tambin por los beneficios derivados de su ciclo de vida, como el desarrollo r!pido " f!cil mane'o. &l ciclo de vida de Drosophila melanogaster se compone de tres etapas larvales, diferenciados en el primero, estadios , " 1, seguido de una etapa que es la forma de pupa, que despus de cinco das, emergen como adultos voladores. Bor lo tanto, una generacin se completa en dos semanas. 8tras venta'as de la utilizacin de D. melanogaster que merecen especial atencin son, entre otros, la facilidad de cruzar, un peque:o n6mero de cromosomas, la posibilidad de traba'ar con un gran n6mero de personas, adem!s de los beneficios de la simplicidad en el proceso de transformacin gentica " la disponibilidad de la secuencia completa del genoma (>ilson, ,$$2), que revel que alrededor del #$% de los genes humanos tienen homologa con la Drosophila ( chneider, ,$$$). &n la segunda dcada del siglo pasado, Lutz " turtevant conclu" que Drosophila puede servir no slo para los estudios genticos en la comparacin con los animales m!s grandes, sino tambin para las investigaciones el comportamiento " la seleccin sexual, "a que el comportamiento de estas especies son especies especficas de apareamiento (3 5=UC9 et al., 2DE1). umado a todos estos venta'as, Drosophila es un sistema conveniente para hacer frente a las preguntas de cmo el cuerpo se defiende contra el exceso de un contaminante, "a que muchos aspectos de la homeostasis, especialmente los metales, se conservan entre las moscas " los seres humanos (F&BG H8B8 F39 et al. , ,$$#). 3lgunos desechos txicos, principalmente industrias, son potencialmente peligrosos porque contienen metales pesados " colorantes ( eco et al., ,$$1). Los tintes son org!nicos " son difciles de degradacin f!cil " se bioacumulan en las cadenas alimentarias (.iedge et al., 2DE#). &n las aguas residuales o emisiones industriales todava se pueden encontrar sustancias de origen sinttico, cu"a toxicidad puede ser consecuencia de la inhalacin o el contacto con la piel (*amargo et al., ,$$,). e cree que los metales son las sustancias m!s txicas conocidas por el hombre, a diferencia de los otros porque no se sintetizan o destruidos por el hombre. La actividad industrial se reduce significativamente la permanencia de estos metales en el mineral, la produccin de nuevos compuestos, " el cambio de la distribucin de elementos en el planeta. Los iones son vitales para muchos procesos biolgicos como la transcripcin, la respiracin " el crecimiento. in embargo, la acumulacin de metales esenciales como el cobre " el zinc o no esenciales, como el cadmio " el mercurio es txico para el organismo (F&BG H8B8 F39 et al., ,$$#). &n cuanto a la terminologa qumica, estos compuestos tambin son llamados Imetales txicosI, los elementos son estables " no puede ser metabolizado por el cuerpo, no tienen ninguna

funcin fisiolgica " son bioacumulables en la cadena alimentaria. &sta lista inclu"e los siguientesJ mercurio, nquel, plomo, arsnico, cadmio, aluminio, platino " cobre. Llegar al cuerpo por inhalacin, ingestin " absorcin por la piel, " se acumulan en los te'idos a un ritmo m!s r!pido que el desintoxicacin " eliminacin de los procesos del cuerpo. La exposicin humana a estas sustancias ha crecido de forma espectacular en los 6ltimos -$ a:os, como resultado de un aumento exponencial de su uso en procesos industriales " sus derivados (el mercurio 4 un metal txico ..., ,$$K). &ntre los da:os causados por los metales txicos, son los derivados de la proliferacin de radicales libres oxidantes que ellos provocan. eg6n los estudios, dos enzimas antioxidantes importantes son inhibidas por los metales pesados son algunos de superxido dismutasa " catalasa. (&L *U&CB8 .G&9& 9&*& GD3D D& ..., ,$$#). 8tro an!lisis de la toxicidad del oxgeno en los sistemas vivos implica directamente a la oxidacin de los grupos tiol de las enzimas " la produccin de intermedios txicos como el perxido de hidrgeno " el radical hidroxilo. &l tripptido glutatin evita que las enzimas de oxidacin, mientras que la peroxidasa " catalasa enzimas son eficaces en el mantenimiento de ba'os niveles de perxido de hidrgeno. uperxido dismutasa convierte el anin superxido en una reaccin desproporcionada de perxido de hidrgeno " oxgeno e indirectamente puede prevenir la formacin de iones ferrosos o de oxgeno4radical org!nico (9icLle et al., 2DE1). Los metales tambin pueden causar da:os irreversibles en el desarrollo neuronal de mamfero por los mecanismos de accin desconocido (3Lins et al., 2DD,). e puede tambin directamente (a travs de mutaciones en las clulas germinales) o indirectamente (a travs de la mutacin som!tica, o los efectos fisiolgicos " ecolgicos) cambiar la arquitectura gentica de la poblacin (+illespie " +uttman, 2DDD, =icLham et al., ,$$, D& >8L0, =luster " =3*HL73U, ,$$M). &ntre las respuestas bioqumicas de la contaminacin por metales fueron estudiados en los estudios de vertebrados se centr en las metalotionenas, peque:as protenas ricas en cistena, que se encuentra en diversos te'idos, responsable de la unin de los iones met!licos para facilitar el proceso de desintoxicacin (>ilson, ,$$2). 8tras enzimas ampliamente estudiado en Drosophila forman parte del grupo de esterasas. &stas son algunas de las enzimas genticamente variable que se encuentra en plantas " animales. Un grupo se compone de la carboxilesterasas esterasa (*& 1.2.2.2), que son altamente polimrficos en Drosophila. &ste grupo de enzimas que hidrolizan steres de !cidos grasos de cadena corta, con varias funciones, inclu"endo la neurotransmisin en los animales, la degradacin de la feromona de xenobiticos en el hgado de los mamferos, los organofosforados " otros xenobiticos ", especficamente, la resistencia a insecticidas en insectos (=onacci et al., ,$$M). *on respecto a la toxicidad, en trminos de control biolgico " la ecotoxicologa, es importante recordar que existen diversas formas de resistencia a la exposicin a toxinas. &l cuerpo puede evitar las toxinas vas de comportamiento, la participacin, en este caso, los cambios genticos, sin embargo, este mecanismo no es mu" relevante. Las toxinas tambin pueden penetrar a travs de la cutcula de los insectos por el sistema respiratorio " el sistema digestivo. &stos cambios en las rutas de entrada puede resultar en el desarrollo de mecanismos de resistencia, esto debido a la estructura de entrada comple'a de compuestos en el cuerpo. in embargo, un cambio en slo uno de los componentes bioqumicos pueden no ser suficientes para evitar la penetracin de la toxina (>ilson, ,$$2). &l mecanismo de ma"or inters " eficacia en trminos de resistencia de los animales puede estar relacionado con los cambios metablicos causados por las toxinas. Usando una variedad de reacciones enzim!ticas, los organismos tienen la capacidad de metabolizar una gran variedad de molculas org!nicas, por lo general que sean m!s hidroflicas (" generalmente menos txicos) " por lo tanto m!s f!cilmente excretados por el cuerpo. &sta capacidad de evolucin para desintoxicar fitotoxinas de los alimentos, " insectos, al igual que otros animales, utilizando el mismo con'unto de enzimas que metabolizan xenobiticos se encuentran en el medio ambiente. 8tro tipo de resistencia a las toxinas se caracteriza

por la interaccin con molculas diana. &ste mecanismo constitu"e el segundo m!s grande encontrado en los insectos. Una vez dentro del insecto, las toxinas interactuar con algunas de dichas molculas diana, protenas normalmente " alterar su funcin, dando lugar a varias enfermedades (>ilson, ,$$2). Los efectos de las drogas, entre individuales " xenobiticos se basan tanto en la patognesis " las interacciones ambientales, tales como las caractersticas genticas. &n muchos casos, la toxicidad depende de la concentracin en el sitio de accin " tambin las reacciones resultantes de los productos txicos (*3 *8C=G, ,$$#). ((. !"%E)EDE"%E& La exposicin a los insumos qumicos es cada vez m!s prominentes, siendo este 6ltimo presente en el aire, el suelo e incluso en los alimentos " el agua. &l an!lisis de la exposicin relacionada con la salud relacionados con el conocimiento, permite establecer los riesgos qumicos a los que est! expuesta la poblacin, " permite una intervencin eficaz para comprender los efectos reales de los contaminantes, " para evitar una probable contaminacin. Bor tanto, es esencial para estudiar los efectos txicos derivados de la exposicin crnica a los contaminantes, as como los mecanismos de defensa disponibles para los seres vivos. (((. OB=E%(>O& &ste estudio tuvo como ob'etivo determinar el efecto de algunos productos qumicos potencialmente txicos que se encuentran sobre todo en los laboratorios de investigacin, si el uso de Drosophila melanogaster, como bioindicador. La determinacin de la toxicidad se realiz para los siguientes metales " productos qumicosJ aluminio (como el cloruro de aluminio), el cromo (dicromato de potasio), plomo (nitrato plomo), la acrilamida " el azul *oomassie =rilliant =lue +4,-$. &l an!lisis, basado en la biologa de la mosca, con el ob'etivo de estudiar, durante 2$ generaciones, " en dos lneas, (a isof/mea de comunicacin " otros) los aspectos enumerados a continuacin, " los productos qumicos o metales utilizados en la concentracin de -$ micras. e hizo, aunque el an!lisis del efecto de diferentes concentraciones de las sustancias qumicas a prueba. productividad diaria de m!s de 2- das, comportamiento en trminos de tiempo de pre4cpula " la cpula, los cambios en los patrones morfolgicos (el patrn de tergitos " coloracin, la posicin de las estructuras del cuerpo, peso, etc.) &l nivel bioqumico, con las medidas de la actividad enzim!tica de la carboxilesterasa.

CAPTULO 2

Efectos de la e2posicin de Drosophila melanogaster (Diptera ? Drosophilidae) )oomassie Blue

("% OD'))(<" &l aumento sustancial en la generacin de residuos slidos industriales, es de gran preocupacin para los cientficos de todo el mundo " puede afectar no slo a determinadas especies de flora " fauna, sino tambin la estructura " funcin de ecosistemas enteros (0ent, ,$$1). Gnformacin sobre los riesgos para la salud humana debido a la exposicin a sustancias qumicas del medio ambiente es un !rea parcialmente inexploradas, " los programas de control biolgico son 6tiles en mtodos de investigacin esta !rea (*alafat et al., ,$$#). &n los 6ltimos a:os, ha habido un esfuerzo por reducir el uso de los animales superiores en la investigacin toxicolgica " la prueba ( iddique et al., ,$$-). &l nfasis se ha centrado en las capacidades de los insectos holomet!bolos, que tienen un comple'o ciclo de vida con diferentes etapas. Las larvas " los adultos tienen una forma diferente, " puede tener un rgimen alimentario diferente. imilares presiones ambientales pueden afectar a cada etapa de la vida de una manera diferente, " las estrategias de adaptacin pueden depender de la etapa de la vida particular (Loeshche et al., 2DD#). Drosophila melanogaster es un modelo bien establecido de insectos, recomendado por

el *entro &uropeo para la @alidacin de Atodos 3lternativos (*&@A3). &sta especie se ha utilizado ampliamente para los estudios de la gentica " la biologa del desarrollo ( iddique et al, ,$$-.), F en la 6ltima dcada, la Drosophila ha emergido como uno de los modelos m!s potentes para las enfermedades humanas (3ulucL et al ,$$,N. Haazantsev et al., ,$$,) " para la Gnvestigacin .oxicolgica ( iddique et al., ,$$-). Aosca de la fruta tiene la venta'a de varios, como el ciclo de vida corto (de una generacin se ha completado el plazo de dos semanas) " la facilidad para llevar a cabo estudios genticos de cruce (>ilson, ,$$2). Los residuos slidos generados por algunas industrias son peligrosos porque pueden contener Ilos metales pesados " los pigmentos. Los colorantes son compuestos arom!ticos, constituido por material lignocelulsico, que puede ser degradado por microorganismos (=alan " Aonteiro, ,$$2). in embargo, el inconveniente es el hecho4sustancias org!nicas e inorg!nicas que son difciles de degradar (anliLa et al., 2DE2). La literatura revela que los tintes tienen un alto potencial para acumularse en la cadena alimenticia (.onogai et al., 2DE$, .iedge et al., 2DE#). Gndustrias qumicas " laboratorios de disponer de grandes vol6menes de estos compuestos en el sistema de alcantarillado. &ntre los pigmentos, *oomassie azul es uno de los colorantes m!s utilizados en Los laboratorios biolgicos, tanto para la medicin " para te:ir los geles de electroforesis de protenas. La literatura que no se deleita en los seres humanos la ingesta de dosis ba'as de la azul *oomassie causar efectos da:inos, en dosis m!s altas puede producir hiperestesia de la piel " los m6sculos, n!useas, vmitos " diarrea (5offman et al, 2D#2).. 3unque no se considera la posesin de riesgos para la salud moderado, este traba'o pretende analizar el efecto de azul de *oomassie en D. melanogaster. &ntendemos que es importante para determinar las concentraciones qumicas que pueden producir da:os en el organismo. #!%E (!,E& @ #%ODO& Los e'emplares de Drosophila melanogaster se recogieron en ao 7ose do Cio Breto, &stado de ao Baulo, =rasil, en ma"o de ,$$-. Los individuos fueron mantenidos en viales con pl!tano medio de agar a temperatura constante a ,- O *. Las hembras se utiliza para configurar las acciones de una lnea homocigtica isofemale. Bara el medio de cultivo utilizado para la alimentacin de los insectos que a:adi *oomassie =rilliant =lue +4,-$ a una concentracin final -$ mA " la mezcla se mezcla completamente. &l grupo control fue alimentado con medio de cultivo sin contaminar. Un estudio de la bioacumulacin se llev a cabo durante diez generaciones. Doce hembras vrgenes " las pare'as de los males emergidas de las acciones para generar la primera generacin, para las otras generaciones, 2, nuevas pare'as fueron recogidos surgi entre los animales en el quinto da despus de que los adultos apareci por primera vez. Las hembras se les permite poner sus huevos durante diez das. 3dultos emergidos se contaron el da a da es de nueve das consecutivos, " luego e conteos nuevo hecho para los das 22, 21 " 2-. Durante el experimento, todos los adultos tambin fueron analizados fenotpicamente (tergitos " el patrn de color, la forma " las alas de apertura, " el color de los o'os I). *on el fin de estudiar los efectos sobre el peso de los insectos, 02$ fueron separados

de los adultos por vie durante seis das consecutivos, se transfiri a tubos de 2,- ml, " se ponderaron todos los das usando una balanza analtica. &n la prueba de apareamiento, los adultos de la 02 " 02$ fueron separados por vie durante seis das en cinco grupos de insectos, " se mantiene a temperatura constante (,- P). Despus de seis das, " los males fueron trasladados mu'eres, sin anestesia, al vial " el mismo proceso durante una hora para determinar el tiempo de pre4cpula " la cpula. Bara los ensa"os enzim!ticos de las actividades, se formaron tres muestras, cada una con cinco adultos recogidos a partir de 0-. Los animales fueron homogeneizadas en tampn fosfato 2$$ mA p5#.,. *arboxilesterasa actividad se midi por el mtodo de &llman et al. (2D#2). Las lecturas de absorbancia se realizaron en un espectrofotmetro @arian 2$$ " todos los ensa"os se midieron por triplicado. La concentracin de protenas se determin seg6n =radford (2DK#). &n los experimentos de viabilidad de una pare'a de adultos a partir de 02$ fue colocado en un envase de ,-$ ml que contiene una cuchara de pl!stico llena de az6car en medio de agar. La hembra se le permiti poner sus huevos durante ,M horas, " luego la pare'a se retir. Los huevos fueron contados " la cuchara se coloca dentro de una botella que contena medio de cultivo. Bara las pare'as que recogi en el grupo de control, la cuchara se coloca en un frasco de control, haciendo un procedimiento similar para las personas expuestas, transferir a un frasco con azul de *oomassie. Bosteriormente, los huevos, pupas " adultos fueron contados. &l an!lisis de las concentraciones diferentes se hicieron para las pare'as de 0E. Una mu'er hombre " una se les permiti par de ,M horas en un frasco con medio de cultivo. &l hombre se retir " la mu'er se le permiti poner sus huevos durante tres das, cuando fue .ransferido a un vial de nuevo idntico. &l procedimiento fue realizado por siete veces consecutivas, " la descendencia fue emergentes, que se anot. e realizaron tres repeticiones para cada concentracin " nueve para el grupo de control. 3n!lisis estadstico Bara los experimentos se bioacumulativas la prueba de la igualdad de , proporciones (?49ormal aproximacin) (Aoore, ,$$-) se realiz en octubre Los gr!ficos de la proporcin que representan 0ueron urgi urgi de las moscas en tres repeticiones de cada da en que surgieron las moscas en cada generacin. &n otros experimentos, se realiz la prueba t de tudent (?ar, 2DDD). Las diferencias significativas fueron considerados cuando p Q$,$-. &l programa =io&stat M.$ (3"res et al., ,$$-) se utiliz. E&',%!DO& @ D(&)'&(<" La variacin entre los grupos se distribu"en de manera desigual. Bara la cepa isofemale seis de las 2$ generaciones analizadas (02, 0,, 01, 0-, 0K " 0D) mostr el m!s alto es la aparicin de la proporcin expuesta comparacin con los grupos de control. in embargo, slo para el 0K se encontraron diferencias significativas (0igura 2). Bara los grupos expuestos se observ una tendencia se verifica una disminucin en la productividad a partir 0K, mientras que para el control 0D " 02$ mostr la misma tendencia. &n una comparacin entre la masa (AL) " isofemale (GL) lneas, en la cepa de la masa en la primera generacin slo significa la aparicin en el grupo tratado fue ma"or que en el control, pero en los otros, el grupo de control de la emergencia fue ma"or que para el grupo expuesto. Bodra ser la respuesta a la presencia del producto, para aumentar la emergencia con el fin de producir una descendencia adaptativo (5irsch et al, ,$$1). Bara la cepa isofemale en diez generaciones analizadas aparicin en el grupo tratado fue siempre menor que el control (0igura ,). 02.

@eces antes de la cpula " la cpula Reres evaluados para la 02, 0- " 02$ generaciones (0igura 1). Bara el tiempo de pre4cpula se *oomassie observado que ha aumentado el perodo (la diferencia no fue significativa), se produ'o la cpula dnde est! la diferencia entre los tratados " el grupo control, en las mismas generaciones analizadas. 9o ha" evidencia de que puedan producir alteraciones del comportamiento

*oomassie. &l malestar fsico revela slo la literatura en los seres humanos *uando el colorante se ingiere (5offman et al., 2D#2). La influencia de las moscas en el peso de *oomassie, se puede observar en la 0igura M. &l peso promedio de los adultos en *oomassie sometidos a tratamiento, es casi tres veces menor que en los de el efecto de control 02..he en el peso del insecto podra ser explicado por la hiptesis de que los adultos &vite el medio de cultivo debido a la presencia del contaminante propuesto por el .rumble et al. ,$$M). 8tra posibilidad es debido a alteraciones metablicas, algunas situaciones observadas en la acrilamida, por e'emplo (Fousef et al., ,$$#).

Los experimentos se llevaron a cabo viabilidad de los huevos en las generaciones 01 " 02$ (.abla 2). Los resultados muestran, en presencia de *oomassie que ha" un aumento en la viabilidad de los huevos " pupas en la generacin de 02$, en comparacin con el control.

&n cuanto a la actividad enzim!tica, carboxilesterasa se analiz en cinco, pero no hubo diferencia entre el control ,1.,USmg K,,-) " el grupo expuesto (K$,# ,M,# U S mg). De acuerdo con =onnacci et al. (,$$M), esta enzima 'uega la proteccin frente a compuestos neurotxicos BroAinent en nuestros experimentos, " la exposicin coomassie no revel un efecto en las pruebas de comportamiento. Bara el efecto de la concentracin en la aparicin de D. melanogaster, se comprob que en la emergencia fue la concentracin m!s ba'a del 3ltsimo, " de esta manera no fue una respuesta dependiente de la dosis (0igura -). 8tra caracterstica de su eliminacin es coomassie r!pido en los seres humanos, ocho horas despus de que se elimina del organismo por completo

&ste traba'o, aunque con algunas alteraciones inducidas por el medio de contraste, corrobora la toxicidad cuando se utilizan en peque:as concentraciones ba'as. La solucin utiliza para te:ir los geles de electroforesis se concentra casi -$ veces m!s que la que hemos utilizado, pero nuestra preocupacin es, en primer lugar, con los posibles efectos biolgicos debidos a la exposicin crnica a ba'as dosis. &n resumen, nuestros resultados confirman la observacin anterior acerca de la ba'a toxicidad del azul brillante de *oomassie +4,-$. 3gradecimientosJ 3gradecemos al Departamento de =iologa de la U9& B G=GL*& donde en el stocL de vuelo se mantuvo a ,M O *.. &l presente estudio ha sido financiado por la 03B& B " el *9Bq.

)!*+%',O 5

Efectos de la acrilamida sobre producti0idad6 el comportamiento y peso

en dos poblaciones de Drosophila melanogaster

Resumen
La acrilamida se utiliza principalmente en las industrias qumica y laboratorios. es neurotxicos en animales de experimentacin y en humanos, y tambin tiene mutagnico y efectos cancergenos. El presente trabajo utiliza la . melanogaster como bioindicador de toxicidad de la acrilamida, en primer lugar el seguimiento de diez generaciones expuestas a la acrilamida baja operacin de concentracin !"# micras$ mezclado a un medio de culti%o del banano& agar, y tambin %ariando a concentraciones de acrilamida. 'e analizaron los efectos en la fertilidad !como se anot al da hijos$, el comportamiento reproducti%o !tiempo de pre&cpula y la cpula$ y el peso, utilizando un isofemale y una cepa masal, ambos recogidos en '(o )os do *io +reto, ,rasil. En resumen, la acrilamida causado perturbaciones en . melanogaster, y cuando el aumento de la concentracin, los efectos tendieron a aumentar demasiado. Las alteraciones se obser%aron en el comportamiento de las moscas !aumento del tiempo de pre&cpula$, otros se

%erificaron en la %ida ciclo que afecta de diferentes maneras los hue%os, pupas y adultos. Los efectos comprobados en la cada lnea son diferentes, y los resultados indicaron efectos noci%os, incluso a baja concentraciones de acrilamida

Introduccin
La exposicin humana a productos qumicos de sntesis del medio ambiente ha cambiado considerablemente en las -ltimas dcadas. Este perodo ha sido testigo de cambios importantes en las dietas, las pr.cticas de estilo de %ida, y sociales, algunos de los cuales puede tener profundos efectos en la salud humana salud !'harpe e /r%ine, 0##1$. Las consecuencias de la exposicin crnica a estos compuestos son frecuentemente desconocida. La acrilamida es una importante sustancia qumica utilizada desde el. mediados de 23"# !4ie et al., 0##1$ y puede ser perjudicial para los organismos %i%os Lo+achin !0##1$ demostr que es neurotxico tanto en humanos como en animales de laboratorio. Este producto es un monmero de %inilo, producido por la hidratacin de acronitrile !56*E*E, 0##1$ y tiene m-ltiples aplicaciones qumicas e industriales. 6dem.s de esos aspectos, est. presente en una serie de alimentos ricos en almidn fritos, horneados y procesados con calor !768 9 8:', 0##0$, se utiliza para producir agua&solubles poliacrilamidas, como un floculante para clarificar el agua de consumo, como aditi%os cosmticos y tambin en papel y los en%ases de cartn de alimentos y recubrimiento. ;ambin es un componente del humo de tabaco, lo que indica que puede estar formada por calentamiento demateria biolgica !56*E*E, 0##1$. En consecuencia, la exposicin continua a peque<as cantidades de acrilamida es com-n. 8rganizacin :undial de la 'alud !8:'$ public los datos de la la ingesta media diaria de acrilamida para la poblacin general, como 2=g9>g !4ie et al., 0##1$. ?na consulta con%ocada por la 768 9 8:' en 0##0, reconoci la presencia de acrilamida en los alimentos @como una preocupacin importante en los seres humanos basado en la capacidad de inducir c.ncer y heredable mutacin en animales de laboratorios @. La 5omisin Europea !5E$ 5omit 5ientfico sobre 6limentos !'57$ !56*E*E, 0##1A llegado a una conclusin similar en 0##0. La acrilamida es un compuesto simple, su composicin qumica se basa en el alfa y beta insaturados dobles enlaces. 'u con%ersin metablica conduce a glicidamida, un epxido metabolito muy

reacti%o con electrfilos !6 B$, pero un importante proceso segundos se produceC se le llama una reaccin de :ichael&tipo, en el que la beta&carbono reacciona con una nuclefilo !protenas$. Estas dos reacciones son importantes porque explican laobjeti%os principales de acrilamida !protenas$ y la glicidamida !6 B$ !56*E*E, 0##1$. ?no de la reaccin m.s importante de la acrilamida con las protenas es la aduccin de la hemoglobina !Db$. 6ductos se forman en los grupos 'D y en los grupos amino de la B&terminal %alinas !4ie et al., 0##1$. Es importante recordar que la acrilamida es metabolizada por 5E+0E2 +F"# a glicidamida, que es responsable de muchos efectos txicos, especialmente genotxico !EdGards, 23H"C. 'umner et al, 2330$. ;anto la acrilamida y la glicidamida puede formaraductos con grupos sulfhidrilo y amino de la hemoglobina !Db$ !56*E*E, 0##1$ y otros protenas. e esta manera los efectos genotxicos de acrilamida y la glicidamida metablica puede explicar muchos de los resultados obtenidos con . melanogaster expuestas a la acrilamida. La acrilamida se oxida a glicidamida, un epxido reacti%o, y se somete a conjugacin con el glutatin. 6ductos de 6 B de glicidamida han sido reportados tras la administracin de acrilamida ! ybing y 'anner, 0##I$. Este producto qumico es capaz, por lo tanto, de interactuar con %itales nuclefilos celulares que poseen&'D,&BD0 o&8D !Eousef y El emerdash, 0##1$, incluyendo, en consecuencia, las cadenas laterales deresiduos de cualquier protena. rosophila, que fue recomendado por el 5entro Europeo para la Jalidacin de :todos 6lternati%os !5EJ:6$ como un modelo apropiado para la in%estigacin y como uno de los mejores modelos de enfermedades humanas !'iddique et al., 0##"$. Este insecto tiene holomet.bolos una serie de %entajas para la deteccin de la genotoxicidad de sustancias qumicas !KLrgler et al., 23MF$. Estos incluyen la facilidad de manejo, r.pido ciclo de %ida, el peque<o n-mero de los cromosomas, y la facilidad de manipulacin de los cromosomas !Kilson, 0##2$. El presente trabajo tu%o como objeti%o establecer alg-n comportamiento, bioqumicos y respuestas morfolgicas de rosophila melanogaster expuestas a diez generaciones de . melanogaster a bajas concentraciones de acrilamida !"# m:$. Dabida cuenta de . melanogaster es un insecto modelo para las pruebas toxicolgicas y de la biologa gentica y molecular de este especies ya est. documentado, los efectos de la acrilamida podra estar comparando a otro organismos

Materiales y Mtodos.
Los experimentos se lle%aron a cabo utilizando rosophila melanogaster conseguidas por trampas !:edeiros y Nlacz>o, 2333$ de las poblaciones naturales de '(o )os do *io +reto, Estado de '(o +aulo, en mayo de 0##". Las pruebas se realizaron con dos gruposO un homocigota isofemale tensin para esterasa 1 y una cepa masal. Las moscas

eran mantenido en c.maras de culti%o a temperatura constante !0"o5$ y la humedad sobre una pl.tano 9 medio de agar.La acrilamida se a<adi al medio de culti%o, a una concentracin final de "# micras, equi%alente a I.I2mg 9 g de pl.tano 9 medio de agar en frascos de 0"# ml. ?n grupo control fue de mantenido sin adicin acrilamida. El grupo experimental y el control se hace en tres repeticiones. La capacidad reproducti%a !producti%idad$, se analiz a tra%s de 2# generaciones. oce hembras %rgenes y machos recin emergidos se obtu%ieron de la isofemale colar con el fin de producto la primera generacinC para las otras generaciones, el mismo n-mero parejas fueron recogidos de entre las moscas surgido en el quinto da despus de los primeros adultos han surgido en la generacin anterior. 6s que en cada generacin de la hembra se le permiti para poner sus hue%os durante diez das y los adultos emergidos fueron contados por nue%e das consecuti%os, seguido por contar en los das 22, 2I y 2". 6dultos emergidos fueron analizados morfolgicamente !terguitos de modelo y el color, la apertura de las alas y la forma, y los ojos de color$. Este mismo procedimiento se lle% a cabo para la cepa masal demasiado, pero la 72 slo, 7" y 72# fueron analizados. ?so de la cepa isofemale otros experimentos se lle%aron a caboO los insectos @ de peso se %erific en la 72 y 72#. Los adultos emergieron durante tres horas y se anot transferidos a tubos de 2," mL se inclinen en una balanza analtica y D* 0##. Era hecho en un perodo de seis das consecuti%os. 6 los efectos del desarrollo del hue%o a adulto an.lisis, tres parejas de hembras %rgenes y los hombres se mantienen por separado en %iales que contiene pl.tano&agar medio durante cinco das. En el 1 P da cada pareja se puso en pngase en contacto con en botellas que contienen una cuchara llena con agar 9 mediano az-car, donde la hembra de los hue%os. Los hue%os fueron contados y la cuchara se transfiri a un medio de culti%o contengan o no acrilamida !"# Q m$. Las pupas y los adultos se contaron. Este procedimiento se realiz para 7I y 72#. 5on el fin de analizar el efecto de diferentes concentraciones de acrilamida !0", "# y 2## micras$, una hembra y un macho desde 7M, se permiti a par durante 0F horas en un %ial con medio de culti%o. El macho fue remo%ido y la hembra se le permiti sentar los hue%os durante tres das. +osteriormente esta hembra fue trasladado a un nue%o tubo que contiene el mismo medio de culti%o por otros I das, y posteriormente fue trasladado nue%amente. Este procedimiento se repiti siete %eces. La descendencia de cada hembra se haba contado. ;res rplicas fueron hechas para cada concentracin de acrilamida y nue%e para el control. 'e realizaron pruebas de apareamiento, la obser%acin de la cpula antes de los tiempos y la cpula durante una hora. Los adultos de la 72 y 72# fueron separados por sexo en

grupos de cinco, de seis das en tubos que contienen medio de culti%o. Entonces, las mujeres y los hombres fueron trasladados, sin anestesia, a un solo %ial, sin medio de culti%o para ser analizado la precopulation y los tiempos de cpula con un cronmetro digital, interpretada por /toyama!2330$ El an.lisis estadstico de los experimentos en los que la producti%idad se lle% a cabo mediante la prueba de la igualdad de 0 proporciones !R&normal de aproximacin$ !:oore, 0##"$ y su los gr.ficos se representan como la proporcin de moscas emergidas !obser%ada 9 total de generacin$ +ara los otros experimentos se les aplic el test de 'tudent !Rar, El an.lisis estadstico de los experimentos en los que la producti%idad se lle% a cabo mediante la prueba de la igualdad de 0 proporciones !R&normal de aproximacin$ !:oore, 0##"$ y su los gr.ficos se representan como la proporcin de moscas emergidas !obser%ada 9 total degeneracin$ +ara los otros experimentos se les aplic el test de 'tudent !Rar, 2333$. Las diferencias con p S#,#" fueron considerados significati%os. Los an.lisis estadsticos fueronrealizado mediante el programa ,ioEstat F.# !6yres et al., 0##"

Resultados
En la 72, 70, 71, 7H y 72# generaciones la aparicin promedio de "# micras grupo acrilamida tratados fue mayor que en el control de uno !7igura 2$, sin embargo, slo para la prueba de la t de 'tudent de la 72 re%el diferencias significati%as. En la figura 0, el primer contacto con acrilamida !72$, present dos m.ximos emergencia en comparacin con el grupo de control. En el las generaciones siguientes !de 70 a 7"$ el perfil de emergencia del grupo expuesto tu%ieron similares tendencia del control uno. En 71 !7igura 0$ la aparicin de m.ximo control estaba en el sexto das, mientras que para el grupo tratado hubo un retraso que se produjo en los das H y M. La diferencia en el da octa%o fue significati%a. En 7H el surgimiento primer m.ximo en el grupo de control estaba en el 0 P da, y el segundo m.ximo en los das de 1 P de control grupo. +ara el grupo tratado das I, " y 3 tienen la proporcin m.s alta emergencia %alor en toda la generacin sptimo, de acuerdo con esto, un retraso en el patrn de aparicin era obser%ado. El an.lisis de la 7M y 72#, sobre todo, demostr que en el -ltimo da !2" P$ de la surgimiento tendido a aumentar, mientras que en el grupo control la tendencia fue la opuesta !7igura 0$.

7igura 2 & Tr.fico de la emergencia media de 2# generaciones en el el control y la acrilamida grupo expuesto. U /ndica p S#,#".

?n estudio comparati%o de la lnea de isofemale !/L$ y la lnea masal !:L$, de acuerdo a la figura I muestra que en el primero la emergencia disminuy en 72#, tanto enel control y los grupos expuestos, pero en la lnea masal la emergencia se increment !7iguraI$. En el an.lisis estadstico que compara los grupos expuestos y de control de la masal lnea, en la 72, la aparicin fue significati%amente diferente

7igura I & 5omparacin de la producti%idad entre elcepas masales y isofemale para la 72, 7" y 72#

7igura 0 & Los gr.ficos de la proporcin de emergencia en 2# generaciones de . melanogaster !72 a 72#$, donde continulnea era grupo de control y una lnea discontinua era el grupo tratado con acrilamida. Los asteriscos indican p S#,#"

En la lnea de isofemale el porcentaje de adultos con alteraciones fenotpicas fue mayor en el grupo tratado en la mayora de las generaciones !72, 7I, 7F, 7", 71, 7H y 7M$, en la figura F. 'in embargo, las diferencias significati%as slo en 71. 6lteraciones de las alas eran m.s frecuente !en ocho generaciones$ que los que afectan a los terguitos, que apareci en slo cinco generaciones !;abla 2 y 7igura F$. 'e obser% un macho con los ojos alterados color en el grupo expuesto a la acrilamida !7igura "$. El efecto de la acrilamida sobre el ciclo de %ida de . melanogaster se in%estig en7I y 72# generaciones. 'e obser% que el contacto con el producto reducidoo%iposicin. En 7I y 72# surgido adultos %iables a partir de la mitad de los hue%osC este %alor en lagrupo control fue del 3H,3V en la categora 7I y H0,IV en 72#, como se muestra en la tabla 0. La acrilamida ejerci un efecto mayor sobre la transicin de hue%os a las pupas, ya que alrededor del ""V de la los hue%os no eclode en 7I y 72#

7igura FO +orcentaje de alteraciones en 2# generaciones de la isofemale la lnea de . melanogaster.

;abla 2O +orcentaje de alteraciones de las alas y el tergito en cada generacin para el control y expuestos a los grupos de acrilamida a partir de la lnea de isofemale de . melanogaster

7igura "O Ejemplos de alteraciones morfolgicas en ,O terguito y 5O alas

. melanogasterO color ?n ojo&de

;abla 0 & Jalores medios y des%iacin est.ndar en el control y la acrilamida grupos tratados relati%os a los hue%os, pupas y adultos de contar en la 7I y 72#

+ruebas de apareamiento se lle%aron a cabo para la 72, 7" y 72# !7igura 1 6$ mostraron que la precopulation tiempo aumenta en todas las generaciones. +ara el tiempo de copulacin se obser% una disminucin de slo en la 72, pero estas diferencias no fueron significati%as

7igura 1O Los gr.ficos de 6O La media de tiempo de copulacin antes en la 72, 7" y 72# y ,O el tiempo de copulacin medio en la 72, 7" y 72# para el control y acrilamida tratada grupos La influencia de acrilamida fue analizada tambin en el respeto al peso de los insectos. En la 72 el peso promedio disminuy en los adultos del grupo tratado, pero Wen 72# moscas

peso es similar para ambos grupos !7igura H$. Estas diferencias no fueron significati%as. El an.lisis del efecto de las concentraciones de acrilamida diferentes !0", "# y 2## m$ sobre el surgimiento, mostraron que la concentracin m.s baja indujo una disminucin, y como aumenta la concentracin, la emergencia plantea en consecuencia, como mostr en la figura M

0igura K 4 +r!fico de la media de peso de los adultos en la 02 " 02$ para el control de las generaciones " los grupos de tratamiento

Discusion
La acrilamida es un compuesto conocido para producir neuropata perifrica en los animales y el hombre !Nuperman, 23"M$. Efectos neurotxicos en los seres humanos son bien conocidos, basado en la exposicin ocupacional y accidental. El tratamiento con esta droga caus en %i%o som.tica mutaciones !BeuhXuser&Nlaus y 'chmahl, 23M3$, translocacin hereditaria !'helby et al. 23MH$ y las mutaciones del locus especficos en ratones !*usell et al., 2332$, y letal dominante mutaciones en ambos ratones y ratas !'helby et al, 23MHC.. de ;rabajo y col, 23MH$. En concreto, seg-n lo citado por ;rypathy et al. !2332$, este producto no fue mutagnico en 'almonella y Nlebsiella pneumoniae, puede inducir aberraciones cromosmicas en espermatogonias de ratn, y tambin letales dominantes en ratones y ratas. En rosophila, despus de recesi%o ligado al sexo pruebas, este producto parece ser mutagnico !;ripathy et al., 2332$. El perfil de emergencia a lo largo de diez generaciones de la cepa isofemale !7igura 0$ puso de manifiesto dos respuestasO en primer lugar, los retrasos de los m.ximos en los grupos expuestos !71 y 7H$. 6 La segunda obser%acin es que en algunas generaciones, hubo una tendencia para continuar con la aparicin despus del da 2"C en otras palabras, un retraso en 7M y 72# generaciones. En el primera generacin la proporcin de la emergencia fue mayor en el grupo tratado y puede este ser %erificada en 7H y 72# tambin, pero en las otras generaciones, este %alor es similar para ambos grupos !7igura

2$. 8tro punto es que slo despus de cinco generaciones de continua exposicin, el an.lisis surgimiento mostr algunas diferencias !7igura 0$. +ara una comparacin directa entre las cepas de rosophila, debemos centrarnos en la 72, 7" y 72#. Efectos de la acrilamida se obser%aron en la 72 y 72#, pero en 7", las emergencias fueron similares !7igura I$. Esta diferencia puede explicarse en parte por las peculiaridades de cada lnea, a pesar de que fueron recolectados en la misma regin. Dirsch et al !0##I postula que las hembras de . melanogaster puede utilizar diferentes estrategias frente a un xenobitico compuesto. ;eniendo en cuenta las malformaciones, a lo largo de diez generaciones de la cepa de la isofemale . melanogaster, se obser% una tendencia en el grupo expuesto a la acrilamida. En la 71 frecuencia de alteraciones fue significati%amente mayor en el grupo tratado !figs. F y " y ;abla 2$. e acuerdo con ;ripathy et al. !2332$, la acrilamida es genotxica a la som.tica y las clulas germinales de . melanogaster y puede inducir a los dos puntos indi%iduales y dobles en puntos alas de las adultas despus de la exposicin de lar%as, lo que podra explicar el alto porcentaje de alteraciones se obser%a en algunas generaciones. 6lteraciones del ala fueron m.s frecuentes que las que afectan a tergitos !;abla 2$. ;ambin se realiz un an.lisis del efecto de la acrilamida en el ciclo biolgico de el insecto !;abla 0$. Este producto afectado a la eclosin y la aparicin, y como se mencion anteriormente, la acrilamida es genotxica a las clulas germinales, y las lar%as expuestas a concentraciones que %an desde 2,# a 0," mm !;ripathy et al., 2332$. Estos resultados podran explicar la reduccin de la eclosin del hue%o&adulto. La acrilamida tambin se ha clasificado como un carcingeno animal y probables carcingeno humano ! earfield et al., 23MM$. Los ratones expuestos a la acrilamida tenan su esperma concentracin y morfologa afectada !'a>amoto y Dashimoto, 23M1$, y, en ratas, morfologa, mo%ilidad y el transporte de los espermatozoides en el -tero se %ieron afectados tambin !'ublet et al. 23M3C. Eang et al, 0##"$, lo que indica que la exposicin a este producto disminuy esteras frecuencia !4ie et al., 0##1$. earfield et al. !23MM$ sugiere que los actos de acrilamida directamente sobre el sistema reproducti%o y no indirectamente por el estrs que causa y de otro tipo efectos sistmicos. +uede ser una explicacin para las diferencias, especialmente en la pre el tiempo de copulacin !7igura 1$. e acuerdo con 8dland et al. !233F$, la acrilamida es un bien conocido compuesto neurotxico que produce axonopata distal central y perifrico. La neuropata perifrica y la inhibicin de la acti%idad de acetilcholinesterase El presente trabajo recibi apoyo financiero de la 76+E'+ #"9#0F2M y 5B+q !T8,*$ y 56+E' ! B8$.

Referencias
3ires, A., 3"res, 7r., A., 3"res, DL, antos, como ,$$-. =io&stat M.$J 3plica;Tes &statsticas nas !reas das *iencias =iolgicas e medicas. ociedade *ivil Aamirau!, *At e Gmprensa 8ficial do &stado do Bar!. *3C&C&, 3. ,$$#. +enotoxicidad " carcinogenicidad de acrilamidaJ una crtica revisar. 3nn primera 6per aneamiento M,J 2MM42--.

*hartte'ea, A.9., hinde, C. ,$$,. .exto Libro de =ioqumica Adica, 9ueva 9ueva Delhi, - U ed. 7a"pee =rothers, &ditores Adicos, 12K. Deerfield, HL, 3bernath", *8, 8utle", A , =rantner, 75 5a"es, B0 2DEE. 3crilamidaJ su metabolismo, efectos sobre el desarrollo " reproductiva, genotoxicidad " la carcinogenicidad. La mutacin de Gnvestigacin 2D-J M-4KK. D"bing, &. " anner, .. ,$$1. &valuacin de riesgos de la acrilamida en los alimentos. .oxicologa *iencia K-, K42-

CAPTULO 4 Efectos de las bajas concentraciones de plomo, cromo y aluminio, sobre la producti idad de Drosophila melanogaster
En este artculose presentar aToxicology Letters

Cap!tulo Cuatro

Efectos de las bajas concentraciones de plomo, cromo y aluminio, sobre la productividad de Drosophila melanogster 36

"esumen La contaminacin por metales pesados en todo el mundo ha aumentado de manera espectacular debido principalmente al proceso de industrializacin. i bien ciertos iones metlicos son de !ital importancia para muchos procesos biolgicos" su acumulacin puede ser per#udicial. $no de los metales %ue tienen una &uncin de postulado biolgico es el cromo" aun%ue tambi'n es genotxico y probablemente tambi'n carcinog'nico. En cuanto al plomo inorgnico" es un probable carcingeno para los seres humanos" y #unto con el aluminio" estos elementos no tienen ninguna &uncin &isiolgica conocida. El (luminio parece estar relacionada a las en&ermedades neurodegenerati!as. La resistencia o tolerancia a ciertos productos es e!idente en los in!ertebrados. )ara la in!estigacin con metales" La *rosophila es un sistema prctico ya %ue muchos aspectos de la homeostasis de metales se conser!an entre las moscas y humanos. )ara este estudio se hizo un seguimiento de diez generaciones de *rosophila melanogaster expuesto al cromo" plomo y aluminio. )ara &ines de comparacin" se utilizaron dos poblaciones de *.melanogaster.Los resultados indican %ue para cada metal" los insectos responden de una manera di&erente" con di&erencias en la cantidad de moscas surgidas y el da+s,de producti!idad alcanza un !alor mximo. Todos los metales a&ect tambi'n la mor&ologa" dando lugar a un mayor n-mero de mal&ormaciones en tergitos" las alas y la coloracin patrn. #ntroducci$n La contaminacin se ha con!ertido en una de las preocupaciones actuales ms importantes" ya %ue muchos de sus impactos a&ectan a nuestro mundo. $na tendencia en la ecotoxicologa y la e!aluacin de riesgo ecolgico es desarrollar nue!os m'todos de monitoreo de poblaciones subrayado por los contaminantes %umicos +.raham et al." /003,. En la historia de los estudios toxicolgicos" 1alentny oul' +/023, sugirieron %ue la inestabilidad del desarrollo podra ser un indicador de estr's. La contaminacin por metales pesados se ha incrementado dramticamente en los -ltimos 34 a5os como resultado de un aumento exponencial de su uso en productos de &abricacin. La e!olucin de la pesada tolerancia a los metales ha sido bien documentada en poblaciones naturales de cientos de especies en todo el mundo +(ntono!ics et al" /02/6.. 7osenheimet al" /006,. Los metales pesados +o txicos, son los elementos traza %ue son al menos cinco !eces ms densos %ue el agua .Estos elementos son estables +no pueden ser metabolizados por el cuerpo, y bioacumulati!as +por e#emplo8 el mercurio" n%uel" plomo" ars'nico" cadmio" aluminio y cromo,. .ran parte del da5o producido por metales txicos surge de la proli&eracin de radicales oxidati!os %ue causan"9:;" <:9:y 9<;. (lgunos iones metlicos son !itales para muchos procesos biolgicos" tales como la transcripcin" la respiracin y el crecimiento. in embargo" sobre la acumulacin de metales esenciales o no esenciales" metales txicos" incluso es per#udicial +=epis>oposyan et al." :446,. $no de los metales %ue tiene &uncin biolgica es el cromo" propuesto para participar en el metabolismo de la glucosa y de lpidos + ano et al." :444,. u acumulacin puede causar da5os gra!es en el cuerpo" pero los

e&ectos toxicolgicos dependen del estado de ionizacin" ?r +III," ?r +I1," ?r +1, o ?r +1I,. ?r +1I, es mucho ms txico %ue el ?r +III, +@lora de et al." /0A2 y uzu>i" /0AA,. Este hecho se ha explicado por%ue las c'lulas" a tra!'s de las protenas transportadoras de aniones" &cilmente se acumulan de ?r +1I, +I(7?" /004,. Ba#o condiciones &isiolgicas el ?r +1I, no parece reaccionar con el (*C" aun%ue una !ez dentro de las c'lulas se reduce por el < :9:" glutatin reductasa" hidratos de carbono" cido ascrbico" y otras mol'culas a productos ms reacti!os" incluidos los ?r +1, y ?r +I1, y la &orma ms estable" ?r +III,. Este proceso de reduccin pro!oca la generacin de especies acti!as de oxgeno +DaEanishi et al." /0A6,. Los e&ectos genotxicos de compuestos de cromo han sido ampliamente estudiados utilizando di&erentes sistemas de prueba y medicin de ob#eti!os di!ersos y F o puntos &inales gen'ticos +(mrani et al." /000,.

9tro metal %ue se deri!e de los procesos de contaminacin es el plomo" tambi'n muy extendido en el medio ambiente. La mayor parte pro!iene de acti!idades humanas como la minera" la &abricacin y la %uema de combustibles &siles. eg-n la (gencia Internacional de In!estigacin del ?ncer" las &ormas inorgnicas de plomo son unos probables carcingenos para los seres humanos. (proximadamente el /4G de este metal puede ser absorbido por el sistema digesti!o +?orey y .al!Ho" /0A0,. i se administra en exceso puede competir con el calcio +)ounds" /0AI, y puede inhibirla sntesis del grupo hemo +?asta5eda et al." :44/,. En los ni5os" el plomo puede a&ectar el desarrollo de la conducta +<irsch et al." :443,. $n tercer metal" el aluminio" es uno de los elementos ms abundantes en la Tierra. Este elemento se encuentra en pe%ue5as cantidades en todos los organismos" pero sin ning-n propsito &uncional +Jilliams" /000,. El aluminio se encuentra especialmente en el maz" %ueso amarillo" sal" hierbas" especias" t'" cosm'ticos" artculos de aluminio y en!ases. Tambi'n est presente en los medicamentos y se agrega al agua potable para &ines de depuracin +9chmans>i y Barabasz" :444, La resistencia o tolerancia a determinados productos es e!idente en los in!ertebrados +Dala#dzic et al." :446,. Los insectos responden a las toxinas+los iones metlicos e insecticidas, %ue implican los mecanismos bio%umicos y gen'ticos +Jilson" :44/,. En particular" la *rosophila melanogaster es una especie muy extendida" com-nmente utilizados en los estudios gen'ticos. e re%uiere de los medios de culti!o ba#o costo" tiene corto tiempo de generacin +alrededor de /4das a :3K ?," genera un gran n-mero de indi!iduos por generacin y los ensayos in !i!o son &cilmente &actibles +Jilson" :44/,. )ara la in!estigacin con los metales" en concreto" la *rosophila es un sistema prctico para abordar las cuestiones de contaminacin" ya %ue muchos aspectos de la homeostasis de metales se conser!an entre las moscas y los humanos. En los -ltimos a5os numerosos estudios condu#eron a una me#or comprensin de la captacin" la distribucin" la desintoxicacin y la eliminacin de iones metlicos +=epis>oposyan et al." :446,. Este estudio describe algunos e&ectos de la bioacumulacin de los tres metales8 cromo" plomo y aluminio" en dos poblaciones de bioindicadores" *rosophila melanogaster. Los datos &ueron recogidos a lo largo de diez generaciones" con la

aparicin diaria de los adultos. Las alteraciones mor&olgicas tambi'n se obtu!ieron para cada producto.

%ateriales y m&todos )roductos Lumicos El cloruro de aluminio" bicromato de potasio y nitrato de plomo se utilizaron en una concentracin &inal de 34 micras" se disol!i en agua destilada y se a5adi al medio de culti!o del banano;agar +pltano" agar" agua" az-car y Cipagincomo &ungicida,. ( &in de e!itar el cambio de estado oxidati!o del cromo" la mezcla se prepar ba#o temperatura controlada" aproximadamente a I3K ?. El medio culti!o +34 ml, &ue trans&erido a &rascos de !idrio de :34 mL y se utilizar para alimentar a las moscas de la &ruta. Las cepas Los e#emplares de *rosophila melanogaster se recogieron en mayo del :443 en Ho Mos' do 7io )reto" Estado de Ho )aulo" Brasil. *os poblaciones &ueron &ormadas8 un iso&emale +IL, y una cepa masal +NL,. Esta cepa &ue &ormada por cinco pare#as. Los insectos y los culti!os experimentales se mantu!ieron en una cmara de temperatura controlada a :3 O / K ?" alimentados desde un medio de culti!o del banano;agar. 'eneraci$n de an(lisis )ara cada experimento" las moscas se mantu!ieron en un medio de culti!o contaminado +grupos de prueba, u medio de culti!o ordinario +grupo control, durante diez generaciones. *esde la primera generacin" /: pare#as surgidas recientemente &ueron retiradas de la poblacin iso&emale o masal. )ara cada metal y para el control +sin metales, hicimos tres repeticiones. Tras cinco das de la aparicin en primer lugar" /: nue!as pare#as se las lle!aron para iniciar una nue!a generacin" y todo este procedimiento se repiti para las otras generaciones. Las pare#as parentales se les permitieron permanecer en botellas de !idrio de :34 ml durante diez das y para la cepa iso&emale la descendencia &ue anotada por 0 das consecuti!os y despu's de los das //" /3 y /3. Los adultos &ueron analizados mor&olgicamente +color tergitos y el patrn" la &orma y la apertura de las alas" el color de o#os" la pigmentacin del cuerpo,. )ara la cepa masal" estos anlisis se produ#eron slo en la @/" @3 y @/4. Los an(lisis estad!sticos La signi&icacin estadstica para el experimento de la producti!idad se determin mediante la prueba de la igualdad de : proporciones +P;normal de aproximacin, +Noore" :443,. Las di&erencias entre los grupos de prueba y sus controles &ueron analizados por la prueba de tudent +Par" /000,. Las di&erencias con p Q4"43 &ueron considerados signi&icati!os. Los anlisis estadsticos se realizaron utilizando el programa BioEstat I.4 +(yreset al." :443,.

"esultados En cuanto a la cepa iso&emale" en los anlisis diarios para aluminio +@igura/, las tres primeras generaciones mostraron un patrn de cur!a similar para el grupo de prueba y el grupo control en t'rminos de proporcin. En las otras tres generaciones +@I y @3," el primer da de la emergencia para el grupo de prueba &ue uno de los ms altos de la generacin y &ue siempre superior a la emergencia en el control. En @2" tanto el control como en los grupos de prueba tu!o dos mximas emergencias" pero para el grupo tratado los picos pas uno o dos das despu's del control. )ara la generacin no!ena" el surgimiento present su mximo en el da primero" al igual %ue en @I y @3" y en los das siguientes la cur!a &ue similar a sus controles" pero en una proporcin in&erior. En la -ltima generacin" el grupo expuesto tena dos mximos8 uno estaba en el 3 K da y el otro en el da sexto. Entre los dos das se produ#o el mximo de control +da I,. eis de los per&iles mostraron aparicin retrasada en los -ltimos das del perodo de /3das. En presencia de cromo +@igura:, los e&ectos &ueron di&erentes a los anlisis con aluminio. iete de los diez per&iles muestran una mayor proporcin de la emergencia para el grupo de ensayo al &inal del perodo de conteo" algunos de ellos lo %ue sugiere &uertemente +@/" @3" @0, %ue continuara ms all del da /3a!o. )ara @/4 el mximo de surgimiento en el control estaba en el cuarto da" pero en el grupo tratado &ue en el sexto da" un mximo agudo" con una proporcin mayor %ue en el control. )or otro lado la generacin termin en el da decimo%uinto" y %ue la tendencia contin-e no se obser!. )ara el plomo +@igura 3," podemos !er %ue seis de los diez per&iles mostraron" tambi'n para este metal" un retraso en su aparicin. Eso es particularmente claro para la @/" ya %ue la puntuacin del grupo de pruebas en el da decimo%uinto present una mayor proporcin %ue el control" y se obser! en la categora @3 tambi'n. )ara la segunda generacin" las di&erencias %ue implican la aparicin mxima entre el control y el grupo tratado &ueron en los das I y 3. En estos das se produ#o la mxima aparicin del grupo tratado" %ue no correspondan al mximo control. Estos das eran exactamente en el medio de los puntos ms altos de surgimiento para el control. En @6" @2 y @/4 tambi'n se presentan di&erencias claras en el control. )or e#emplo" en @2" el I K da de aparicin para el grupo de prueba se encontraba en medio de los dos das de aparicin mxima +: K y 6 K, del control. En @/4" tal como ocurri con el aluminio y cromo" la #ornada mxima de aparicin para el grupo tratado +6 K , tu!o un retraso de dos das despu's de la de control +I K," y para el segundo mximo" la di&erencia &ue de un da +A K da de control y los 0 das para el grupo tratado,. $n anlisis de la emergencia media por generacin +@igura I," mostr para los metales un alto !alor para @A" y una disminucin clara para @0 y @/4. Los grupos expuestos a cromo y el plomo tambi'n tu!ieron la emergencia mxima en la @/ y @3. )or otro lado" la repeticin expuesta al aluminio tu!o picos secundarios en @3y @6. ( ni!el mundial" los grupos expuestos mostraron de cinco a siete generaciones con !alores medios superiores a los de la aparicin del control. En cuanto a la &orma general de los per&iles" para los grupos expuestos al plomo y aluminio los !alores siguen ms o menos cercanamente a%uellos del control. )ara los animales tratados con cromo +@igura IB, de las generaciones @/" @3" @2 y @A" present una mayor emergencia

media %ue el control +en la media @2 la emergencia para el tratado &ue de alrededor del 62G superior a la de control,. )or todo lo experimental establece la -ltima generacin tu!o el menor !alor medio de la emergencia" y tambi'n ocurri en el control.

@igura / ;)roporcin de emergencia a lo largo de/4 generaciones de *. melanogaster expuestas a 34 Rm de aluminio +cepa iso&ermale,. Lnea continua8 grupo de control" lnea discontinua8 grupo de prueba. Los asteriscos indican pQ4"43.

@igura : ;)roporcin de emergencia a lo largo de/4 generaciones de *. melanogaster expuestas a 34 Rm de cromo +cepa iso&ermale,. Lnea continua8 grupo de control" lnea discontinua8 grupo de prueba. Los asteriscos indican pQ4"43.

@igura 3 S)roporcin de emergencia a lo largo de /4 generaciones de *. melanogaster expuestas a 34 Rm de plomo +cepa iso&ermale,. Lnea continua8 grupo de control" lnea discontinua8 grupo de prueba. Los asteriscos indican pQ4"43.

@igura I S.r&ico de la media de emergencia. (8 ?ontrol y cloruro de aluminio6 B8 control y bicromato de potasio6 ?8 control y nitrato de plomo. Los asteriscos indican pQ4"43. *urante los %uince das analizados" simultneamente con el surgimiento de puntuacin" se e!alu y cuanti&ic la mor&ologa de las alas" terguitos y otras mal&ormaciones e!identes" en cada generacin para cada metal. Los !alores &ueron representados en t'rminos de porcenta#e de &recuencia +@igura 3(,. En cuanto a las parcelas" todos los metales muestran una mayor &recuencia en la primera y la -ltima" aun%ue no es tan e!idente para el plomo. Esta obser!acin es igualmente !lida para el control" as %ue parece %ue el e&ecto de los metales" incluso alcanzando en muchas generaciones una mayor &recuencia de mal&ormaciones" seguido de una tendencia presente tambi'n en los animales no expuestos. Estas di&erencias no &ueron signi&icati!as" aun%ue en algunas generaciones y para algunos productos %ue &ueron mayores %ue en el grupo control. El aluminio es el metal %ue induce alteraciones mor&olgicas ms" en comparacin con el plomo y el cromo. ?omo se obser!a en la Tabla/" para la exposicin al aluminio" las alteraciones %ue in!olucran los tergitos &ueron ms &recuentes" y para el plomo" alteraciones del ala +@igura 6(,. ;odos los metales afectaron a la morfologa de las alas significati%amente, especialmente el plomo. +or otra parte, los tergitos no mostraron una significati%a frecuencia de alteraciones en presencia de este metalC de hecho, la frecuencia fue slo alrededor de Q que los del control. 5uriosamente, el cromo no pro%oc alteraciones significati%as de las alas o terguitos. Es interesante notar que el cromo y plomo indujo las alteraciones atpicos en la formacin de los ojosY. En la presencia de

cromo, el ojo derecho no se form correctamente, y en %ez de la coloracin roja com-n, ellos eran de color amarillo !7igura 1,$. 8tro plomo malformacin que se trateO el ojo izquierdo no se form y en su lugar apareci una estructura diferente, asemej.ndose a una antena !7igura 15$.

@igura 38 @recuencia de mal&ormacin para los tratamientos (8 aluminio6 B8 el cromo y ?8 el plomo.T;Indica p Q4"43.

@igura38 E#emplos de la mal&ormacin %ue a&ecta a *. melanogaster expuestas a los metales (8 alteracin terguito +(/,6 B8 alteracin del o#o derecho +?r, y ?8 alteracin del o#o iz%uierdo +)b,. Tabla /8 )orcenta#e +G, de las alteraciones de las alas y el tergito de *rosophila melanogaster expuestas a los metales" a lo largo de/4 generaciones.

9tra parte del estudio hizo un anlisis comparati!o de los datos descritos por dos poblaciones8 una iso&emale +IL, y una masal +NL, de la lnea de *. melanogaster. Los datos mostraron %ue las di&erencias de ambas poblaciones. Lnea de Nassal8 @/ y @/4 mostraron" para el aluminio y cromo" una menor emergencia de los grupos expuestos. )ara el aluminio en @3 no hubo di&erencias de la producti!idad entre los grupos expuestos y control" pero para el cromo de nue!o los con#untos expuestos tu!ieron menor emergencia. El plomo tiene un e&ecto di&erente8 los grupos expuestos tu!ieron una mayor producti!idad %ue el control en la @/ y @3" y otro in&erior en el @/4. ?epa Iso&emale8 )ara los tres metales" los grupos expuestos tu!ieron una mayor producti!idad %ue sus respecti!os controles para la @/y @/4. La %uinta generacin mostr mayores !alores medios de los grupos expuestos a cromo y plomo" mientras %ue para el control de aluminio era ms producti!o. ?omparando ahora las dos cepas" la mayor di&erencia sucedido para @/4" la cepa masal muestra" para los tres metales" el aumento de los !alores medios de la emergencia" pero los grupos de control tu!ieron di&erencias a-n ms grandes" manteniendo la misma tendencia.

@igura28 ?omparacin de la emergencia de la media iso&emale +IL, y masal+NL, de las cepas de *rosophila melanogaster en tres generaciones de tres metales8 (8 de aluminio6 B8 el cromo y el ?8 el plomo.

)iscusi$n

Los resultados indican %ue por cada ion metlico utilizado en este traba#o" los insectos tu!ieron respuestas di!ersas. e podra explicar por las di&erencias en la masa molecular o en la !alencia de cada ion. )or e#emplo" el aluminio es un ion tri!alente" pero el cromo es un hexa!alente y plomo es un di!alente. *e esta manera cada metal podra ser absorbido de una manera distinta" y competir con otros cationes por la unin a las enzimas" por e#emplo +Macobson et al." /0A3,. Aluminio Este es unin metlico conocido por ser un pro;oxidante y recientemente ha sido implicado en la generacin de un entorno oxidati!o ayudando en la produccin de especies reacti!as del oxgeno +79 ," tales como 9:;y <:9: +Naillouxy (ppanna" :446,. En los anlisis diarios +@igura/," slo despu's de tres generaciones de la cur!a del grupo tratado demostr algunas di&erencias del control uno. (lgunas generaciones presentaron una tendencia a continuar en el da /3 y otros llegaron al mximo de la emergencia desplazados de la UcumbreU del control. Las sales de aluminio de acuerdo a =ouse& +:44I," puede unirse al (*C y (7C" inhibiendo a las enzimas como la hexo%uinasa" cido y &os&atasas alcalinas" la &os&odiesterasa y oxidasa&os&ato. Esta toxicidad pro!iene de la sustitucin de los iones @e o Ng" induciendo alteraciones en la se5alizacin intracelular" las &unciones de excrecin y el crecimiento celular. e pueden sustituir algunos metales como el hierro y el calcio y por lo tanto podra ayudar a desestabilizar la homeostasis biolgica +Niddaugh et al" :446,. *e esta manera" estos e&ectos podran explicar las di&erencias en la aparicin de la generacin. La -ltima generacin +@/4, &ue el ms a&ectado por el aluminio" %ue present el mximo desplazado un da antes" y un segundo mximo despu's de %ue el control +@igura /,. *e acuerdo con las concentraciones de aluminio en la literatura" los aumentos de la totalidad del organismo durante el desarrollo y el en!e#ecimiento de *. melanogaster. (luminio disminuy la duracin de la !ida por tanto como :4G" para 4"/ mN cloruro de aluminio y para /mN nitrato de aluminio y sul&ato +Nassie et al." /0A3,. 9tra obser!acin en @/4 es el !alor de &recuencia importante para las alteraciones mor&olgicas +@igura 3(,. $na de las principales mani&estaciones de la toxicidad por aluminio es la peroxidacin lipdica y el da5o oxidati!o a las biomol'culas" como lpidos" (*C y las protenas +=ouse&" :44I," en consecuencia" pueden alterar las caractersticas &isiolgicas y bio%umicas de los sistemas biolgicos +)ra>ashy 7ao" /003,. )ara los seres humanos" hay un consenso de %ue algunas !eces el aluminio es retenido en el cuerpo" probablemente en el es%ueleto y algunos depsitos en el cerebro" pero la mayor parte se excreta en la orina en unos pocos das o semanas" y el tracto gastrointestinal o&rece una e&ecti!a barrera para la absorcin de aluminio+ acerdote" :44I," y en los !ertebrados la toxicidad de aluminio in&luye en el sistema es%uel'tico" como un resultado de la resistencia disminuida y aumento de la tendencia a la rotura sea. 1iene de la sntesis de colgeno y menor ralentizacin del proceso de mineralizacin +9chmans>i y Barabasz" :444,.

El Cromo

La carcinogenicidad y la genotoxicidad de cromo estn relacionadas con el estado oxidati!o y la solubilidad de los iones. *e @lora et al. +/004, y I(7? +/004, examinaron los e&ectos cancergenos" hexa!alente acti!idad mutag'nica de sales" pero en general la genotoxicidad de los di&erentes compuestos de cromo puede atribuirse a los iones cromato" %ue predomina en p< &isiolgico" el cual es capaz de penetrar las membranas c'lulares +Le!is y Bianchi" /0A:,. El per&il de la emergencia +@igura :, mostr %ue en la @/ y @3" en particular" en el -ltimo da obtu!o +/3a!o, la proporcin de moscas surgidas en el grupo tratado aument. En @2 y @/4" la emergencia mxima ocurri cuatro y un das" respecti!amente" desplazados del control. *e acuerdo a la literatura" las moscas inducidas por?r +1I, haban retrasado el desarrollo de lar!as +@rei y JVrgler" /006,. En @3" @2" @A" @0 y @/4 +@iguraIB," las media del n-mero de moscas en el grupo tratado &ue mayor %ue en el grupo control. (lgunos traba#os a&irman %ue los compuestos de cromo redu#eron de manera signi&icati!a la &ertilidad y el desarrollo de animales de experimentacin +Pi!ano!;?urliset al." :446,. in embargo" en este caso" la estrategia para sobre!i!ir en ese ambiente ad!erso podra ser di&erente6 el aumento de la &ecundidad podra ser una respuesta a la presencia de iones metlicos con el &in de aumentar la !ariabilidad de la descendencia" y producir descendientes !iables resistentes a ese contaminante" seg-n lo propuesto por <irsch et al." :443. 9tra in&ormacin de la literatura a ser considerada es la acti!idad de toxicidad del cromo6 la capacidad para atacar el (*C depende del sistema redox celular" as %ue en este caso" el cromo no se redu#o a cromato +?r1I, y era incapaz de atacar el (*C" lo %ue podra aumentar la descendencia signi&icati!amente. En cuanto a la &recuencia de mal&ormaciones +@igura 3," slo en tres generaciones" este !alor &ue mayor %ue en el grupo de control8 @:" @3 y @/4. *e acuerdo con .ra& et al." /00:" en las c'lulas somticas de *. melanogaster la alta acti!idad genotxica de xido de cromo hexa!alente es ms del 04G debido a la acti!idad recombinog'nica" %ue no se !e in&luenciada por el citocromo );I34;dependiente de metabolismo de xenobiticos y <epburn et al ." +:443, re!el una &uerte acti!idad somtica recombinogWnica en las alas de los adultos de *. melanogaster %ue haban sido alimentados con ?r +1I, las sales durante la &ase lar!aria. Es importante tener en cuenta %ue las alteraciones aparecieron en todas las generaciones" pero en slo tres de ellos" este !alor &ue mayor %ue en el control" pero slo en la categora @3 el anlisis estadstico demostr p Q4"43. Es interesante obser!ar la mosca con el o#o derecho mal&ormados +@igura 6B,6 el reacti!o ?r+1I, causara di&erentes lesiones en las c'lulas disco imaginal de *. melanogaster" dando lugar a mutaciones yFo los e!entos de recombinacin. in embargo este da5o puede ser reparado utilizando la in&ormacin de los cromosomas homlogos +7esoluciones et al." /000,. ( pesar de la alta acti!idad recombinog'nica" en las c'lulas mitticas se produce poca acti!idad" pero el da5o en el cromosoma por la presencia de cromo" puede resultar en aumento de la recombinacin mittica con las cromtidas hermanas. El resultado es empare#amiento errneo de (*C. in embargo" en el caso de la celda disco imaginal" esto ocurre en la etapa lar!al %ue puede sostener da5os al (*C" y toda!a puede ser un adulto !iable +<epburn et al." :443,.

Plomo *e acuerdo con <irsch et al. +:443,6 En la *rosophila se bioacumula plomo" y %ue la exposicin a esta sustancia txica puede tener e&ectos signi&icati!os en el n-mero de apareamiento de las hembras. El anlisis de los e&ectos de nitrato de plomo en *. melanogaster re!el %ue para el grupo tratado" en la @/" @I" @3" @2 y @/4 de la media del n-mero de emergencias &ue mayor %ue en el control +@igura I?," pero slo en la @/ esta di&erencia &ue signi&icati!a . e ha in&ormado %ue el plomo reduce la &ecundidad en *rosophila melanogaster" cuando se a5ade 4"43 a 34G de acetato de plomo al medio culti!o +$ysal y Bahceci" /0066. ?ohn et al" /00:,. <irsch et al. +:443, tambi'n demostr %ue el plomo reduce la &ecundidad en *rosophila melanogaster con : mg F g y no a&ectados por la exposicin a :4 ug F g de plomo. El per&il de los emergentes analizados diariamente +@igura 3," mostr %ue los retrasos en el ciclo biolgico eran e!identes en algunas generaciones tales como @:" @2 y @/4. La toxicidad del plomo en *rosophila se sabe %ue a&ecta el curso del tiempo de desarrollo pre;adulto +(>ins et al." /00:,. La &recuencia de alteraciones en el grupo tratado &ue mayor en algunas generaciones8 @/" @I y @6 +@igura 3,. Los e#emplares de Drosophila subobscura cuando se exponen al plomo en concentraciones altas y ba#as" tu!o un cambio de arreglos de &recuencias de genes cromosmicos en las generaciones @I y @6 +Dala#dzic et al." :446," de acuerdo con los !alores de la proporcin de alteraciones mor&olgicas. Comparacin de las poblaciones En el anlisis de las dos poblaciones utilizadas en estos experimentos" la respuesta a los metales era di&erente en cada cepa. En la cepa iso&emale +IL, para los tres metales +@igura 2(" B y ?, en la @/ y @/4" la emergencia media &ue mayor %ue en sus respecti!os controles. ?omo se discuti por <irsch et al." +:443," podra ser una estrategia &emenina para sobre!i!ir en ese ambiente ad!erso. La hembra puede aumentar el tiempo de apareamiento y F o el n-mero de hue!os puestos" el aumento de la di!ersidad gen'tica de su descendencia y maximizando la posibilidad de %ue algunos de ellos podran estar bien adaptado a la presencia de metal. Tambi'n es posible %ue en lugar de e#ercer el control la hembra est perdiendo" el apareamiento ms pronto y de manera indiscriminada y por una mayor cantidad de hue!os de calidad in&erior +<irsch et al." :443, Es interesante notar %ue para todas las repeticiones desde la lnea de iso&emale" en la -ltima generacin la media del n-mero de emergentes disminuy" incluso en el control. e podra explicar de una manera similar a la anterior6 el n-mero de moscas disminuy despu's de diez generaciones de endogamia constante" debido a una disminucin de la di!ersidad gen'tica. Este e&ecto no se obser! en la otra cepa +NL," donde la !ariabilidad &ue mayor %ue en la cepa de la IL" &ormado slo con una hembra. En la cepa masal +NL, para el aluminio +@igura 2(, y cromo +@igura 2B, el surgimiento media para este grupo &ue siempre por deba#o del !alor para el grupo control. 9tra estrategia utilizada por los insectos" de acuerdo con <irsch et al. +:443, sera %ue las hembras %ue !i!en en ambientes ad!ersos pueden posponer la o!iposicin hasta %ue el ambiente me#ore. in embargo" para los grupos expuestos al cromo +@igura 2b, en

la tendencia obser!ada se registr una disminucin progresi!a de la emergencia con las generaciones. Esto no se !eri&ic para los grupos expuestos al aluminio +@igura 2(, donde el per&il de la cur!a de control y el un tratado" tenan el mismo patrn. El estudio de Dala#dizic et al. +:446, con arreglos de genes inducidos por el plomo mostraron %ue el mecanismo gen'tico de resistencia a metales pesados en *rosophila es un sistema altamente comple#o y dinmico" y podra estar relacionado con los procesos de adaptacin en el curso de la e!olucin de una respuesta gen'tica a los metales pesados. 7aes et al. +/00:, y 1an traalen et al. +/0A2, a&irmaron %ue los in!ertebrados tienen algunos mecanismos %ue podran blo%uear la absorcin de metales pesados en el intestino. (lternati!amente" es posible %ue un;da;!ie#as moscas no puedan consumir los medios con tanta &acilidad como moscas mayores y por lo tanto sera menos a&ectadas +Macobson et al." /0A3,. En este traba#o" las moscas se mantu!ieron en contacto con el producto slo por un da" por%ue ellos &ueron anotados diariamente. La presencia de iones metlicos en el medio de culti!o de la mosca podra inducir cambios en la bio%umica" biologa celular" el sistema ner!ioso" en la gen'tica y otros sistemas biolgicos. En consecuencia" el resultado de posibles da5os podra producir e&ectos sin'rgicos o antagnicos6 en otras palabras6 podra producir cambios para la adaptacin en ese ambiente ad!erso o no" o incluso podra enmascarar los e&ectos txicos.

)!*+%',O 8

Efectos de las ba/as concentraciones de aluminio, cromo y plomo en el comportamiento6 peso, 0iabilidad del hue0o y acti0idad de la carbo2ilesterasa de un stoc9 de isofemale de Drosophila melanogaster

esumen La exposicin a contaminantes ambientales" como metales pesados" contin-a siendo un problema generalizado en muchos pases. En la in!estigacin toxicolgica y las pruebas ha sido un es&uerzo mundial para reducir el uso de los !ertebrados. ?on el &in de analizar la acti!idad txica del cromo" aluminio y plomo" este estudio ha utilizado una ba#a concentracin de estos" para analizar los e&ectos acumulati!os en algunos aspectos biolgicos de *rosophila melanogaster" incluyendo la acti!idad de la carboxilesterasa" el comportamiento sexual" el peso de las moscas y la !iabilidad de los hue!os. En este traba#o se e!aluaron los e&ectos de aluminio" cromo y plomo6 mezclado al medio de culti!o pltano;agar en una concentracin &inal de 34 mN. La !iabilidad del hue!o se puso a prueba en dos generaciones +@3 y @/4,. El cromo aument signi&icati!amente el tiempo de la pre cpula en la @/ y @3" mientras %ue en el tiempo de copulacin @/4 se increment de manera signi&icati!a tambi'n. El plomo tambi'n &ue el metal %ue produ#o la mayor disminucin de la !iabilidad de hue!os" a aproximadamente 34G en @/4. Los datos mostraron %ue el principal ob#eti!o de los metales a%u analizados &ue el paso de hue!o a pupa" ya %ue la trans&ormacin de las pupas de los adultos &ue menos a&ectada. )or otro lado" el aluminio aument la acti!idad de carboxilesterasa" y sobre la el peso de los insectos8 en @3" aument. )alabras cla!e8 *rosophila melanogaster" aluminio" cromo" plomo" !iabilidad" emergencia (ntroduccin La rpida industrializacin en los pases desarrollados y en desarrollo lle! a un aumento sustancial en la generacin de residuos slidos industriales + iddi%ue et al." :443," y muchos son peligrosos por%ue contienen metales pesados + eco et al." :443,.(lgunos iones de metales %ue pueden actuar como !enenos en el organismo" generalmente a%uellos con una masa atmica mayor %ue /04 no tienen ninguna &uncin esencial +Macobson et al." /0A3," tales como plomo" mercurio" aluminio y cadmio. 9tros metales son esenciales" pero por encima de concentraciones &isiolgicas causan e&ectos noci!os +=epis>oposyan et al." :446 y et Niddaugh al." :446,. =a sea el apoyo a las &unciones esenciales o inter&erir en ellos" la &orma por el cual un in metlico produce sus e&ectos debe re&le#ar sus propiedades y las propiedades de las mol'culas biolgicas con los %ue interact-a +Macobson et al." /0A3,. Los metales pesados son una causa bien establecida de una en&ermedad gra!e" y estos problemas deben ser abordados +Brod>in et al." :442,. En los -ltimos a5os existe un es&uerzo mundial para sustituir a los !ertebrados en los estudios toxicolgicos y pruebas" por in!ertebrados tales como *rosophila melanogaster.

Esta especie tiene una &cil crianza y manipulacin de los cromosomas" ciclo de !ida rpido y pe%ue5o n-mero de cromosomas" &cil de trans&ormacin gen'tica y la disponibilidad de su genoma secuencial +Jilson" :44/,. *espu's de la secuenciacin del genoma de *rosophila" las similitudes *rosophila ; humanos se han &ortalecido" ya %ue el 64G de los genes de las en&ermedades humanas tienen homlogos en esta mosca + chneider" :444,. Las similitudes entre *rosophila y los organismos superiores a ni!el bio%umico bsico de la &uncin celular son bien conocidas +Macobson et al." /0A3,. *ado %ue los metales no se metabolizan" las oportunidades para in&luir en la toxicidad son ms restringidas %ue para muchos productos %umicos orgnicos" para %ue las !as metablicas pueden in&luyen pro&undamente en la respuesta de un organismo +.och&eld" /002,. )ara la in!estigacin con los metales" la mosca de la &ruta es un sistema prctico para abordar las cuestiones de contaminacin" ya %ue muchos de los aspectos de la homeostasis de metales se conser!an entre las moscas y los humanos. En los -ltimos a5os numerosos estudios condu#eron a una me#or comprensin de la absorcin" la distribucin" la desintoxicacin y la eliminacin de iones metlicos +=epis>oposyan et al." :446,. $no de los metales constantemente presentes en el ambiente es el cromo. Es ubicuo en la naturaleza6 puede ser detectada en toda la materia en concentraciones %ue oscilan entre menos de 4"/ mgFm3 en el aire a I g F >g en los suelos. Este metal es generalmente presente como ?r +III," pero cromo hexa!alente en el medio ambiente" es casi totalmente deri!ado de las acti!idades humanas +9N " /004, y se utiliza principalmente en &orma de sales solubles" la exposicin excesi!a en el lugar de traba#o ha demostrado %ue el ?r +1I, puede actuar como un irritante agudo" un carcingeno y una al'rgeno para los seres humanos +*ayan y )aine" :44/,. Los e&ectos genotxicos de compuestos de cromo han sido ampliamente estudiados utilizando di&erentes sistemas de prueba y medicin de ob#eti!os di!ersos y Fo puntos &inales gen'ticos +(mrani et al." /000,. ?ompuestos de cromo hexa!alente en di&erentes solubilidades de agua &ueron sistemticamente acti!os en numerosos estudios %ue abarcan una amplia gama de pruebas de gen'tica y los e&ectos relacionados" siendo clasi&icado como cancergeno por la (gencia Internacional para la In!estigacin de ?ncer +I(7?,. En particular" potasio" sodio y amonio dicromatos y cromatos inducen da5o en el (*C" las mutaciones de genes en un n-mero de ob#eti!os" incluyendo las c'lulas animales in !i!o y de los animales y c'lulas humanas in !itro +9N " /004,. 9tro elemento ubicuo es de aluminio" sino %ue puede ser encontrado en cada producto alimenticio" y es uno de los elementos ms comunes en nuestro planeta +Jilliams" /000,. Las &uentes de aluminio son especialmente maz" %ueso amarillo" sal" hierbas" especias" t'

y agua del gri&o. Este ion metlico puede causar en&ermedades en humanos" apuntando a alg-n proceso metablico" por e#emplo" como la reposicin de calcio" &s&oro y hierro +9chmans>i y Barabsz" :444,. e ha in!estigado la acumulacin de aluminio en el te#ido cerebral de pacientes con la en&ermedad de (lzheimer y la demencia par>insoniana +(lshuaib y NatheE":4436 =ouse&" :44I,. Los comple#os de este in tri!alente con oxalato pueden cruzar el plasma de la membrana de algunas c'lulas y se deposita en las !esculas !acuolares +Jilliams" /000,. El -ltimo in metlico a considerar es plomo" este se utiliza en muchas industrias" incluyendo &usin de plomo y trans&ormacin" la &abricacin de bateras" pigmentos" soldadura" plsticos" lminas de cable" las municiones y la cermica. La mayora de los casos de en!enenamiento por plomo en los adultos son resultado de la exposicin ocupacional" aun%ue la exposicin al plomo en la poblacin general es principalmente a tra!'s de la dieta. Esto tiene muchos e&ectos en el cuerpo. $no de los ms estudiados es el impacto sobre la sntesis de hemoglobina" la inhibicin de !arias de las enzimas en la !a de &ormacin del hemo +.och&eld" /002,. *entro de este marco" y con el &in de analizar la acti!idad txica de ion cromato" aluminio y plomo" este estudio utiliz ba#as concentraciones de estos metales" para analizar el e&ecto acumulati!o en algunos aspectos de biologa de *. melanogaster" incluyendo la acti!idad de carboxilesterasa" el comportamiento" el peso y la !iabilidad de los hue!os.

#ateriales y #todos
*roductos qumicos y medios de culti0o

&l cloruro de aluminio, dicromato de potasio " nitrato de plomo se utilizaron en una concentracin final de -$ micras, se disolvi en agua destilada " se a:adi al medio de cultivo del banano4agar (pl!tano, agar, agua, az6car " 9ipagin como fungicida). 3 fin de evitar el cambio de estado oxidativo del cromo, la mezcla se prepar ba'o temperatura controlada, aproximadamente M- O *. 3cerca de 1$ mL de este medio fueron transferidos a frascos de ,-$ mL de vidrio " se utiliza para alimentar a las moscas de la fruta.

!cciones

Los e'emplares de Drosophila melanogaster se recolectaron usando trampas (Aedeiros " HlaczLo, 2DDD) en ma"o de ,$$- en ao 7os do Cio Breto, &stado de ao Baulo, =rasil. Uno de archivo isofemale fue creado, formado por una hembra. Los insectos " las culturas experimentales se mantuvieron en una c!mara de temperatura controlada a ,- V 2 O *.

Aeneraciones

Bara cada experimento las moscas se mantuvieron en un medio de cultivo contaminado con el metal durante diez generaciones. &n la formacin de la primera generacin, 2, pare'as recin emergidas fueron retirados de las existencias isofemale. Bara cada metal " para el control (sin

metales) hicimos tres repeticiones. Despus de cinco das de la emergencia de los adultos en primer lugar, 2, nuevas pare'as se retiraron para iniciar una nueva generacin, " todo este procedimiento se repiti durante 2$ generaciones.

,os e2perimentos e0aluando la 0iabilidad y el desarrollo

Las moscas hembras " machos de la poblacin isofemale se recogieron inmediatamente despus de la emergencia ", posteriormente, mantuvo separados en tubos con medio de cultivo durante cinco das. &n el sexto da un hombre " una mu'er se puso en contacto en botellas de medio de cultivo est!ndar o tratada por un da. Bosteriormente el macho fue removido " los huevos depositados femeninos durante ,M horas en una cuchara que contiene agar4az6car medianas. Los huevos fueron contados " la cuchara se transfiri a una botella que contiene el control o medio de cultivo tratada. Bosteriormente, los casos de pupas " el n6mero de adultos emergidos se anot. &ste procedimiento se realiz por triplicado en la 01 " 02$ generaciones.

Efectos sobre el peso

Las progenies de la 02 " 02$, de la cepa isofemale, se pesaron en una balanza analtica. 5emos utilizado los adultos surgidos recientemente (1 horas). &llos fueron separados por sexo durante seis das en tubos de 2,- mL con pl!tano4agar " ponderada a diario en una balanza analtica " de recursos humanos ,$$.

Efectos de diferentes concentraciones

e analiz el efecto de tres concentracionesJ uA ,-, -$ " 2$$, en la productividad.Un macho hembra " uno de 0E se permiti a pare'a por un da en un tubo que contiene medio de cultivo (control o que contiene un metal), despus, el macho fue removido " la hembra se le permiti sentar huevo durante tres das en el mismo tubo. &sta hembra fue trasladado a un nuevo tubo que contiene el mismo medio de cultivo, " esto se repiti para otras siete veces. La descendencia se anot en cada tubo. .res repeticiones de cada concentracin se hiciera, " para el grupo control, nueve.

*ruebas de apareamiento

e trata de un an!lisis del comportamiento de las moscas, que se utiliza para medir la cpula antes " los tiempos de cpula. Los adultos de la 02 " 02$ de la poblacin isofemale fueron separados por sexo en grupos de cinco, durante seis das en tubos que contenan medio de cultivo (control o que contiene un metal).&ntonces, las hembras " machos de cada grupo fueron transferidos, sin anestesia, a un tubo sin el medio de cultivo. &n cada vial de los hombres " las mu'eres tenan el antecedente de exposicin misma. *ada vial se observ durante #$ minutos, para determinar los tiempos de pre " copulacin con un cronmetro digital, realizado por Gto"ama (2DD,).

Ensayo de la acti0idad esterasa carbo2ilo y cuantificacin de protenas totales

3ctividad *arboxilesterase se midi de acuerdo con el mtodo de &llman et al, (2D#2), a raz de la liberacin de tiol4derivados a M2, nm en un espectrofotmetro @arian *ar" 2$$, " utilizando phen"lthioacetate como sustrato (=onacci et al, ,$$MN.. @ioque4 0ern!ndez et al., en prensa). L de .ris45*l 2$$ mA de tampn, p5 E,$, " se centrifuga a 2$.$$$ xg durante 2- min. Biscinas de cinco animales fueron homogeneizados en ,$$ utilizando una centrifugadora 7ouan *C1i, a M o*. Los ensa"os se llevaron a cabo la adicin de alcuotas de la fraccin sobrenadante a una cubeta que contiene el tampn de homogeneizacin con 2 mA de concentracin D.9= final. Los espacios en blanco sin sustratos o muestras se incubaron previamente a ,- O * durante , min para evaluar endgeno reaccin cruzada con D.9=. Los ensa"os iniciado por adicin de la phen"lthioacetate sustrato (concentracin mA final M,-). Las actividades especficas se expresan como U mg de protena42N una unidad es la cantidad de enzima hidrolizar un sustrato moles min42. La concentracin de protena se determin por el mtodo de =radford (2DK#). Las lecturas de absorbancia se llevaron a cabo en un espectrofotmetro @arian *ar" 2$$.

,os anBlisis estadsticos

*on el fin de determinar si los grupos de tratamiento " de control tiene diferencias significativas, se aplic la prueba t de tudent (?ar, 2DDD). Las diferencias con p Q$,$- fueron considerados significativos. Los c!lculos se realizaron utilizando el programa =io&stat M.$ (3"res et al., ,$$-).

"esultados
Los primeros experimentos se analizaron los e&ectos de metal sobre la !iabilidad de los hue!os" la in!estigacin de los e&ectos en cada etapa del ciclo de desarrollo. ?on el &in de obser!ar el e&ecto acumulati!o" las hembras y los machos utilizados eran de @3 y @/4. ?omo se muestra en la Tabla /" en la categora @3 el n-mero de hue!os puestos mostr una disminucin para todos los grupos expuestos a los metales. El mayor e&ecto &ue producido por el plomo" %ue se redu#o el hue!o a la !iabilidad de adultos en un :/G. El n-mero de pupas y adultos disminuy alrededor de I !eces entre el control" en un lado" y los grupos expuestos a los iones de metales en el otro. $n punto destacable es %ue el e&ecto txico de @3 dirigido especialmente a los hue!os" ya %ue prcticamente todas las pupas emergieron como las moscas" con la -nica excepcin del grupo expuesto al plomo" %ue presenta e&ectos txicos tambi'n en el proceso de pupa;adulto. *espu's de siete generaciones de constante contacto con los iones de metales" en @/4" los !alores cambiaron" en comparacin a @3. Teniendo en cuenta las ci&ras absolutas de hue!os puestos" la mayor disminucin a&ect al grupo de control. Las reducciones se produ#eron tambi'n para los grupos expuestos a plomo" mientras %ue un aumento de la pupa;adulto era e!idente para la replica expuesto al cromo.

?omparando solamente los grupos analizados en el @/4" la !iabilidad de los hue!os de las pupas se redu#o para el plomo y el incremento de aluminio y cromo en el @/4" incluido el control" los cuales tenan un promedio in&erior a dos de los grupos expuestos +(l y ?r,. ( di&erencia de @3" la !iabilidad de las pupas de los adultos estaba en @/4" menor para el aluminio y el plomo en los tratamientos" disminuyendo en promedio de alrededor del 3G para el grupo control.

Cuadro *+ !iabilidad de los hue!os durante tres tratamientos di&erentes8 aluminio" cromo y plomo. Theeggs" pupas y adultos se anotaron en la @3 y @/4 de la lnea de iso&emale en cada treatmentand en el control.

)uesto %ue el peso de los insectos podra re&le#ar los e&ectos txicos" se determin la masa de los adultos %ue emergieron en la @/ y @/4. ?omo se muestra en la &igura /" en la primera generacin de aluminio slo tu!ieron un aumento en el peso medio" mientras %ue para el cromo y el plomo" los !alores &ueron ms ba#os %ue para el control" aun%ue estas di&erencias no &ueron signi&icati!as. En la -ltima generacin" @/4" el peso medio en el control" as como en el grupo de plomo expuesta aumentado" cuando se compara con la primera generacin" pero estas di&erencias no &ueron signi&icati!as. Los grupos expuestos a aluminio y de cromo tu!o una disminucin de aproximadamente el 34G en el peso medio del grupo de control.

,i-ura *+ )eso promedio O des!iacin estndar de andmales hembras adultas en dos generaciones +@/ y @/4, de la lnea de iso&emale de *. melanogaster la exposicin al aluminio" el cromo andlead. ?ada tratamiento se lle! a cabo por triplicado.

<emos tratado de analizar la neurotoxicidad de los puntos de !ista di&erentes" el tiempo de la cpula antes de la cpula +expresado como proporcin media, &ue e!aluada por pare#as sometidas a un mismo elemento. ?omo se obser!a en la &igura :" el promedio de tiempo de pre;cpula era di&erente para cada metal. El tratamiento con aluminio tu!o un tiempo medio similar al control en la @/ y @/4. En @3 present un incremento del 63G en comparacin con el grupo control. )ara el cromo" el tiempo medio cpula pre &ue mayor para controlar en la @/ y @/4. )or otro lado" para el plomo" el tiempo de copulacin de pre tu!o un aumento no signi&icati!o en todas las generaciones obser!adas.

,i-ura 2+ )romedio de tiempo de pre;cpula en threegenerations de la lnea de iso&emale de *. melanogaster +@/" @3 y @/4, la exposicin al aluminio" el cromo andlead.

El e&ecto de cada ion metlico en el tiempo de copulacin &ue analizado +&igura 3," y los resultados &ueron di&erentes desde el tiempo de pre;cpula. En la @/ y @3 a todos los grupos expuestos tu!ieron un tiempo similar copulacin media" aproximadamente un 3G ms ba#o %ue el de control. (nlisis en el @/4 mostr un aumento del tiempo de copulacin antes de media para el aluminio y cromo. )ara el cromo esta di&erencia &ue signi&icati!a" aun%ue esta di&erencia &ue menor %ue en el anlisis de la cpula antes )ara el grupo expuesto al plomo" el tiempo medio de la cpula ha disminuido ms.

,i-ura .+ tiempo de copulacin media en tres generaciones +@/" @3 y @/4, expuestos al aluminio" cromo andlead. (steris> indicates pQ4.43. El asterisco indica p Q4"43.

El anlisis bio%umico se centr en la acti!idad carboxilesterasa. e midi con grupos de cinco adultos de cada compuesto de metal. ?omo &igura muestra I" el grupo expuesto al aluminio tena una acti!idad de la enzima aumento en comparacin con el grupo control. )ara los otros grupos la acti!idad &ue similar a la encontrada en el control. Es interesante %ue para el cromo de la !ariacin &ue mnima" lo %ue indica mayor homogeneidad del grupo y en la prueba de la t de tudent esta di&erencia &ue signi&icati!a. Los -ltimos experimentos implican un anlisis de las concentraciones de metales di&erentes +:3" 34 y /44 mN,. $n par de @A expuestos a una concentracin de metal de 34 micras" se trans&iri a !iales con una concentracin di&erente o igual. Los resultados se muestran en la &igura 3. )ara los insectos expuestos a las de aluminio" la concentracin ms ba#a +:3 mN, redu#o la aparicin promedio" y para 34 micras" la emergencia se increment comparando con el control. ?uando la concentracin duplic +/44 N," el surgimiento alcanzado el !alor mismo del grupo de control. El experimento demostr %ue con el cromo Easnot emergencia a&ectados por la creciente concentracin del producto. En el grupo expuesto al plomo" la aparicin promedio aument slo para la concentracin ms alta.

,i-ura 4+ (cti!idad de carboxilesterasa para @3 adults&rom expuestos al aluminio" el cromo y el plomo.

,i-ura /+ *esarrollo de media de los adultos de la @A de la lnea de iso&emale sometido a di&erentes concentraciones de metales" / ; :3 uN" : ; y 3 uN 34 ; /44 micras. $n gr&ico;para el aluminio" B;.raph para el cromo y ?;.raph para el plomo. Los !alores son el promedio de tres repeticiones para los grupos expuestos y nue!e para el control.

)iscusi$n
*ese%uilibrio &isiolgico de los metales debido a trastornos gen'ticos o la contaminacin ambiental es un problema mundial asociado con e&ectos ad!ersos para la salud. <ay un n-mero de genes y mecanismos reguladores %ue participan en la homeostasis de metales pesados. El dese%uilibrio de cobre y zinc" por e#emplo" puede conducir a la en&ermedad y supone un riesgo signi&icati!o para la salud de los seres humanos y animales +=epis>oposyan et al." :446,. (nlisis realizado para el plomo" mostr %ue" en los experimentos de !iabilidad de los hue!os +Tabla /," este producto a&ectado las etapas del ciclo de *rosophila en las dos generaciones analizadas. e in&orm ya %ue el acetato de plomo +/": mN, en *. melanogaster a&ecta el curso del tiempo de pre;adulto desarrollo +(>ins et al." /00:,. *e com-n acuerdo con $ysal y Bahceci" +/006, el plomo ha sido in&ormado a reducir la &ecundidad +4"43 a 3"4G de acetato de plomo,. En los estudios de comportamiento +@iguras : y 3, las mu#eres y los hombres expuestos al plomo tenan ms di&erencias en los tiempos pre y la cpula en comparacin con el grupo control (umentando el tiempo de la cpula" seg-n el paso anterior generacin" y la disminucin de la cpula en el @/4" aun%ue la di&erencia no &ue signi&icati!a en el anlisis estadstico. La literatura re!ela %ue *rosophila acumula plomo y este producto es neurotxico. La exposicin a este producto %umico puede tener e&ectos signi&icati!os en el n-mero de hembras

%ue se aparean en :4 minutos y tambi'n sobre su &ecundidad +<irsch et al." :443,. El plomo es neurotxico" produce cambios en las conexiones sinpticas entre las neuronas de los mam&eros y las moscas +<irsch et al" :443,. En los seres humanos" la exposicin al plomo se sabe %ue a&ecta el desarrollo del ni5o" pro!ocando cambios en la atencin y la &uncin cogniti!a +Jal>oEia> et al" /00A6.. Lanphear et al" :444,. )eso en las moscas de la in!estigacin conducen present una reduccin de peso en la primera generacin y un aumento de la masa en la -ltima generacin. in embargo" los cambios pro!ocados por el plomo en t'rminos de retrasos del desarrollo" no !an acompa5adas de cambios en el peso corporal para adultos" lo %ue indica %ue las modi&icaciones en el estado a largo plazo de nutricin de las lar!as no son la causa subyacente +(>ins et al." /00:,. En t'rminos de carboxilesterasa" una esterasa serina;dependiente %ue hidroliza una amplia gama de sustratos xenobiticos +Bonacci y col." :44I," su acti!idad no &ue a&ectado. e sabe %ue el plomo inhibe !arias enzimas en la !a de la &ormacin del grupo hemo +.och&eld" /002," pero no se encontr nada sobre la acti!idad de la esterasa relacionados con el sistema de la toxicidad del plomo. En cuanto a la experimento hecho con di&erentes concentraciones" el plomo %ue a&ect el n-mero surgimiento del grupo expuesto a /44 micras +@igura 3,. +/00:," la toxicidad del plomo en *rosophila es conocido por ser dependiente de la dosis6 en este caso" la respuesta a la presencia del metal era un aumento de la descendencia. El otro metal in!estigado era cromo. Los estudios re!elaron %ue ?r?l: y ?r93 disminuir la &idelidad de la sntesis de (*C in !itro + iro!er y Loeb" /026,. Este hallazgo es interesante por%ue la capacidad de un compuesto para producir la in&idelidad durante la polimerizacin se correlaciona con sus propiedades mutag'nicas y cancergenas +Loeb et al" /02I6. Nizutani y Temin" /026,. Espec&icamente en la *rosophila" ?r?l3 +4.:3RN," en el medio nutriti!o tiene e&ectos intensos sobre la &ormacin de ho#aldre en *. melanogaster +Ci>i&oro! et al." /024 Los estudios con *. melanogaster mostr %ue las alteraciones gen'ticas inducidas por ?r X6 y ?r I parecen surgir de recombinacin mittica inducida6 es probable %ue el e!ento de iniciacin en la carcinog'nesis cromo implica la escisin de doble hebra de la h'lice del (*C %ue conduce a una p'rdida de heterozigosidad en sitios di!ersos ob#eti!os en el genoma nuclear +Datz et al." :44/,. En los ensayos de mutacin somtica y las pruebas de recombinacin + N(7T, con *. melanogaster" ?r +1I, demostr ser genotxico" induciendo altos ni!eles de recombinacin mittica +.ra& et al." /00:,. 7ecientemente" se demostr %ue el picolinato de cromo generar cambios gen'ticos hereditarios y los retrasos en el desarrollo de la progenie en *rosophila melanogaster + tallings et al." :446,. En nuestro estudio la !iabilidad de hue!os de cromo tu!o ms e&ecto en la -ltima generacin" por lo %ue es un indicati!o de un proceso acumulati!o.

El e&ecto del cromo sobre la cpula de pre y los tiempos de cpula +@iguras : y 3," demostr %ue el tiempo de copulacin de pre aument en la primera exposicin" y el tiempo de copulacin slo aument signi&icati!amente en la -ltima generacin en comparacin con el grupo control. El estudio de !iabilidad +Tabla /, muestran %ue el cromo en la -ltima generacin analizada" ha me#orado ligeramente la aparicin en la edad adulta. comentamos %ue" en todos los casos" la lar!a expuesta a picolinato de cromo mostraron una disminucin de la capacidad para trans&ormarse en crislida" la !iabilidad de reducir las pupas" y dependientes de la dosis retrasos en la consecucin de los hitos del desarrollo de la &ormacin de la pupa y la eclosin. in embargo" los e&ectos sobre la !iabilidad de las lar!as" aun%ue siempre es e!idente" eran algo !ariable de experimento a experimento. Es importante se5alar %ue Le!inson y Bergmann" /030" encontrado para Nusca !icina %ue el cromo como el cido picolnico a&ectado super!i!encia lar!as" peso" y el 'xito de pupacin y tambi'n en -ltima instancia el 'xito de las lar!as se desarrollen en adultos en una manera per#udicial. ?on respecto al e&ecto sobre la masa corporal +@igura /," los grupos expuestos a cromo tenan un mayor peso promedio +no signi&icati!o, en comparacin con el grupo de control en la @/ y @3. En los seres humanos" se postul %ue los suplementos de cromo en la dieta tiene e&ectos sobre la composicin del cuerpo" incluyendo la reduccin de la masa grasa y aumentar la masa corporal magra +<epburn et al." :443,. En relacin con carboxilesterasa" la acti!idad &ue similar al control" pero otras enzimas pueden estar in!olucrados en este proceso. El glutatin y cistena parecen ser los co&actores ms importantes para la reduccin intracelular de cromo hexa!alente" pero el cido ascrbico" microsomas en presencia de C(* F C(*<" microssomal citocromo )I34" las mitocondrias y protenas como la hemoglobina y glutatin reductasa tambi'n puede estar acti!o en la proceso de reduccin +*ayan y )aine" :44/,. El -ltimo elemento analizado &ue de aluminio" sino %ue es un ion tri!alente di&cil para los sistemas biolgicos para mane#ar" %ue tiende a participar en las reacciones lentas" especialmente de los &os&atos" en todos los organismos +Jilliams" /000,. Es conocido por sus e&ectos neurodegenerati!as en humanos" relacionados con en&ermedades como el (lzheimer +Nailloux y (ppanna" :446,. Este elemento a&ectado signi&icati!amente la !iabilidad hue!os;adultos de @3. En cuanto a la prueba de comportamiento" slo cpula pre signi&icar tiempo &ue alterada +@igura :,. En la @/ y @/4 %ue era similar al control" pero en @3 un aumento obser!ado &ue. (luminio inhibe con retraso;recti&icador de corriente de potasio en *rosophila neurona y redu#o la a&luencia de !olta#e;dependiente de calcio en synaptossomes y c'lulas musculares lisas en cone#os y gatos. En *rosophila esta reduccin tambi'n se increment la entrada de calcio a tra!'s de los canales de calcio dependientes del !olta#e" y esto en la terminal ner!iosa presinptica puede me#orar directamente la liberacin de neurotransmisores

+(lshuaib y NatheE" :443,. copulacin.

e podra explicar el aumento del tiempo de pre

Los ensayos carboxilesterasas de insectos expuestos mostr %ue la acti!idad &ue mayor %ue para el grupo control" pero no signi&icati!a. ?lsicamente" los contaminantes son conocidos por causar inhibicin de la esterasa" pero un e&ecto estimulante tambi'n se ha in&ormado de las sustancias como el lindano +Nu5oz;Blanco et al." /0A3," tolueno" cloruro de !inilo" el etilparatin organo&os&orados + anz y 7epetto" /003," y tambi'n los metales" como plomo +Bainy et al." :446, y aluminio +Patta et al." :443,. +:443, obser!aron una mayor acti!idad de la acetilcolinesterasa en el parus auratus peces expuestos durante :4 das a concentraciones subletales de cobre" proponiendo %ue el cobre podra me#orar la &ormacin del comple#o enzima;sustrato" el aumento de la acti!idad de la acetilcolinesterasa +la acetilcolinesterasa,. 9tra posibilidad para la acti!acin esterasa por metales tambi'n estara relacionado con una sntesis de no!o de la enzima como una respuesta a una inhibicin inicial. *e hecho" una acti!acin di&erencial de m-ltiples &ormas moleculares del sistema de esterasa se ha in&ormado anteriormente para el camarn ?. thyrrena despu's de la exposicin al <g +Tha>er y <aritos" /0A0,. En general" se ha relacionado con %ue los metales causan esterasa de acti!acin despu's de las exposiciones agudas" y la inhibicin de la esterasa despu's de exposiciones crnicas. +:44/, obser!aron un aumento en la acti!idad de la acetilcolinesterasa en el cerebro de ratas expuestas a /4 mg F >g de plomo" despu's de 34 min" pero una disminucin &uerte en esta enzima despu's de :I y 2: horas de exposicin. (s" la tendencia de aumentos carboxilesterase obser!ados en nuestro traba#o para a%uellos animales expuestos al aluminio estn de acuerdo con los in&ormes anteriores sobre el comportamiento de esterasa en respuesta a di&erentes metales. En los :3 mN +concentracin menor de edad, la emergencia &ue la ms ba#a tambi'n" pero la mayor concentracin tu!o el surgimiento mismo del grupo mN 34. Toxicidad de aluminio pro!iene de la sustitucin de iones de magnesio en el crecimiento celular. La accin de este metal neurotxico" probablemente pro!iene de la sustitucin de los iones de Ng en la (T)" lo %ue &inalmente in&luye en la &uncin de cada enzimas (T) utilizando. (un%ue la mayora de los organismos %ue sucumben a la in&luencia txica de aluminio" algunos sistemas !i!os son conocidos por elaborar estrategias comple#as para de&enderse de los peligros asociados con un entorno rica en aluminio +Niddaugh et al." :446,. Este estudio mostr %ue los tres metales mostr in&luencias en la biologa de *rosophila" a pesar de su ba#a concentracin. in embargo" es importante recordar %ue el mecanismo gen'tico de resistencia a metales pesados en *rosophila es un sistema altamente comple#o y dinmico" y los metales pesados pueden directamente +a tra!'s de mutaciones de c'lulas germinales, o indirectamente +a tra!'s de mutaciones somticas o e&ectos &isiolgicos y ecolgicos, las poblaciones de cambio +Mordaens et al." :446,. )ara obtener

una comprensin ms pro&unda de los e&ectos reales en el de metales pesados en los organismos !i!os" es importante conocer sus toxicocin'tica en di&erentes bioindicadores y poblaciones.

)!*+%',O :

D(&)'&(<" AE"E !,

La probabilidad de exposicin de las personas y el medio ambiente a productos %umicos est aumentando por el incremento en su uso en industrias y en su !olumen de produccin. in embargo" en muchos casos no hay in&ormacin acerca de los peligros txicos de esta exposicin" en particular" se re&iere a los e&ectos de la exposicin crnica +?ala&at et al." :443,. (dems" los e&ectos de xenobiticos son indi!iduales" sobre la base de las interacciones patog'nicas y el medio ambiente" con &uerte in&luencia de las caractersticas gen'ticas. En muchos casos la toxicidad depende de la concentracin en el sitio de accin +?( ?97BI" :446," una relacin directa entre la concentracin de e&ectos de la exposicin y txicos para ser obser!ados. Esto &ue !eri&icado en los experimentos de di&erentes concentraciones de acrilamida" (zul de ?oomassie y los metales %ue hemos probado %ue se !eri&ic %ue" en t'rminos de n-mero de emergentes" no siempre la concentracin ms alta &ue la de un mayor e&ecto. En el caso del cloruro de aluminio" la concentracin ms ba#a +:3 YN, mostr menor emergencia. in embargo" para el nitrato de plomo" con creciente concentracin hubo un aumento en el promedio de los indi!iduos %ue han surgido. Tambien para el dicromato de potasio" no hubo in&luencia alguna de la concentracin del producto %umico en el medio de culti!o. ?on respecto a los experimentos conductuales para e!aluar la neurotoxicidad" es importante recordar %ue de acuerdo a (shburner y ?antn +/0A3, el corte#o y el apareamiento" %ue se producen en los perodos en %ue las moscas se alimentan. Los machos corte#an a las hembras %ue son recepti!as" %ue producen un estmulo apropiado" ello desencadena las otras secuencias de la corte. La accin de corte de las hembras son ms limitados en n-mero y di!ersidad %ue los de los machos" %ue son producidos por los mo!imientos de las alas" pies" genitales y el abdomen. La accin de corte de las mu#eres son ms limitados en n-mero y di!ersidad %ue la de los machos" %ue son producidos por los mo!imientos de las alas" pies" genitales y el abdomen. Las hembras pueden reaccionar de dos &ormas ante los machos8 rechazarla o aceptarla" ella puede caminar o alimentarse durante la cpula. La duracin de este comportamiento !ara desde 34 minutos a / hora +(shburner y ?antn" /0A3,. *e acuerdo con algunos in!estigadores de los machos *. melanogaster llegar a una acti!idad de corte mxima durante la segunda mitad de la noche y las hembras pueden producir /4;:4 hue!os" pero en condiciones adecuadas de laboratorios" llega a /44 hue!os por da" lo %ue corresponde a su propio peso +*a!id" /0246 ?ohet y *(1I*" /02A, (s" de acuerdo con los experimentos de tiempo de pre;cpula y la cpula" slo los e!entos %ue se encontraron di&erencias estadsticamente signi&icati!as se produ#o con cromo y plomo en la generacin @/. El tiempo de la cpula present una disminucin en comparacin con el control. )ara otros productos o metales probados"las di&erencias en los tiempos de antes de la cpula y la cpula no &ueron signi&icati!as. )ara algunos metales utilizados como el plomo y el cromo las !ariaciones obser!adas y !iabilidad en el experimento son similares a los reportados en la literatura +<E)B$7C et al." :443 y <irsch et al." :443," pero para la etapa lar!al. El anlisis de porcenta#es de hue!os %ue llegaron a la &ase de pupa %ue se con!irtieron

en adultos" re!el %ue la acrilamida era el producto ms txico" a&ectando el ciclo de !ida" analizada en dos generaciones +@3 y @/4,. (s" en la categora @3 slo el I3"/G de los hue!os entr en erupcin en los adultos y los @/4" esta tasa &ue del I4"2G. Es importante destacar %ue" para los metales %ue han sido e!aluados" !arios iones metlicos son !itales para muchos procesos biolgicos" tales como catlisis enzimtica" transcripcin" respiracin y el crecimiento. in embargo" la acumulacin de 'stos" incluso cuando sean esenciales" es per#udiciales para la homeostasis de los metales %ue pueden dar lugar a en&ermedades o un mayor riesgo de la salud" tanto en animales como en el hombre +=E)I D9)9 =(C et al." :446,. (lgunos de los metales utilizados en este proyecto tienen la &uncin biolgica de plantas y animales" como por e#emplo" el cromo %ue parece estar implicado en el metabolismo de la glucosa. El plomo y el aluminio no tienen ninguna &uncin conocida +Jilliam y Narchi" :4426 Jilliams" /002,. )or otra parte" la susceptibilidad a los metales pueden ser analizados en t'rminos indi!iduo o poblacin y se puede medir como la probabilidad o la se5al respuesta de un e!ento o exposicin en particular +.och&eld" /002,. En el caso este traba#ar" la cuanti&icacin de las se5ales procedentes de la exposicin continua a los productos de !igilancia %umica se realiz contando las generaciones de indi!iduos adultos" ms all de los experimentos en el ni!el de las enzimas y el comportamiento. En cuanto al aspecto de la susceptibilidad de la poblacin a agentes %umicos u orgnica puede ser representado por su distribucin" sin embargo este patrn rara !ez se conoce. La susceptibilidad a cual%uier agente es el resultado de la interaccin entre gen'tica +polimor&ismo gen'tico" por e#emplo, y el medio ambiente +nutricin" exposicin pasada" acti!idad" entre otros, +.och&eld" /002,. La resistencia a metales pesados en *rosophila" por e#emplo" es un proceso comple#o y dinmico %ue a&ecta a la &recuencia de in!ersiones" y aumenta las interacciones epistticos con todo el genoma como en el caso de estudio de los e&ectos del plomo en la Drosophila subobscura +D(L(M*PI. et al." :446,. Esta interaccin entre la gen'tica y el medio ambiente en el proceso de la toxicidad puede ser obser!ado en el estudio comparati!o de las cepas" donde incluso el grupo de control parece se han !isto a&ectadas por la endogamia durante los diez generaciones. En el grupo tratado para cada tipo de producto %umico utilizado no haba una respuesta di&erente con el paso generaciones" es decir" aumentos y disminuciones en la emergencia del adulto promedio" .olini y col. +:44I," en un estudio lle!ado a cabo con el saltador crustceo Talitrus in&orm %ue no hubo una correlacin positi!a entre el grado de di!ersidad gen'tica y grado de contaminacin con metales pesados. 7ecientemente Mordaens y col. +:446, en estudio realizado con los crustceos Cepaea nemoralis y Putris uccinea re!el %ue los cambios gen'ticos en estas poblaciones deben ser el resultado de la accin de los cuellos de botella" la seleccin mediada por la contaminacin o una combinacin de estos &actores" pero no sera indicati!o de la presencia de los alelos resistentes a la contaminacin o modi&icacin despu's de la traduccin o despu's de la transcripcin. (s" en los estudios relacionados con la contaminacin se debe considerar los aspectos de la gen'tica y la resistencia" %ue estn siendo in!estigados.

En un intento de !eri&icar la importancia ecolgica de los cambios inducidos por productos %umicos y metales en la cpula y la &ertilidad se &ormularon algunos temas principalmente relacionados a la contaminacin con plomo" pero %ue sera !lido para todos los tipos de contaminacin %ue implican cambios en lle!ar a cabo. eg-n <irsch et al. +:443," aumento de la &recuencia de la cpula y la &ertilidad en las poblaciones de *. melanogaster tratados con plomo" puede ser interpretado en t'rminos de cambios en la asignacin de recursos por la hembra. <ay tres posibilidades de interpretacin8 El primero" cuando las condiciones ambientales son &a!orables" las hembras puede ser ms selecti!o en la eleccin de pare#a y puede in!ertir &uertemente en la descendencia indi!iduales +los hue!os, ms la maximizacin de su calidad. En contraste" en ambientes hembra ad!erso puede aumentar la &recuencia con %ue la cpula y F o el n-mero de hue!os +Los menores de edad," lo %ue aumenta la di!ersidad gen'tica de su descendencia puede hacer %ue algunos de ellos est' muy bien adaptado a estas condiciones. $na segunda posibilidad" toda!a de acuerdo con <irsch et al. +:443, a&irma %ue las hembras en un entorno ad!erso no se pueden reproducir hasta %ue las condiciones me#orar" es decir" hasta %ue ellos se trans&ieren a un control de medio de culti!o +sin el %umica,. En ambos casos" la hembra estara utilizando la in&ormacin acerca del medio ambiente" a cambiar sus estrategias de reproduccin" %ue in&luyen en la composicin de la prxima generacin. La tercera hiptesis se basa en la o!iposicin indiscriminada en t'rminos de cantidad" en el medio de culti!o. in embargo" no creemos %ue el &enmeno de ele!acin de la emergencia se explica por los supuestos anteriores. En la continuacin de este traba#o se lle! a cabo experimentos en busca de una explicacin plausible. El anlisis de las dos cepas re!el %ue en d'cima generacin del lina#e hubo un aumento el n-mero promedio de emergentes con relacin al anlisis de la generacin anterior. Este hecho se encontr a disminuir en el isolina#es emergentes. El aumento del n-mero de emergente puede ser atribuido a una mayor !ariabilidad del lina#e masal" desde %ue se &orm a partir de !arias pare#as. ?onsiderando %ue la disminucin obser!ado en isolina#e" el mismo e&ecto podra ser explicado por la menor la !ariabilidad gen'tica del lina#e" &ormado a partir de una sola hembra. El anlisis de per&iles de emergencia de sustancias %umicas y metales ensayados durante las diez generaciones re!el %ue en la primera generacin siempre el n-mero promedio de indi!iduos emergentes &ue mayor para el grupo tratado %ue en el control" es decir" en la presencia de contaminantes a las hembras sera la asignacin de ms recursos para la produccin de descendencia. in embargo" las pruebas mostraron %ue la masa corporal a excepcin de cromo y plomo" despu's de sucesi!as exposiciones a las sustancias ensayadas +@/4, de la indi!iduos tenan p'rdida de masa en comparacin con el control. ( su !ez" el seguimiento del ciclo biolgico indica %ue para algunos casos al igual %ue el azul de ?oomassie" la presencia de xenobiticos aumentado la !iabilidad de los hue!os" o es decir" el porcenta#e de hue!os %ue eclosionaron en los adultos &ue mayor %ue para los tratados para el control. (hora" con respecto a los aspectos analizados" contando adultos" cambia la &recuencia" duracin de la cpula y la cpula" las

acti!idades de la enzima y la masa corporal" la acrilamida &ue el producto %ue ocasion en !igor en todos los artculos" por el otro mano" el azul de ?oomassie &ue el producto %ue caus el menor impacto. (un%ue muchos de los productos %umicos probados ya tienen su carcinogenicidad o genotoxicidad probado o e!aluado por la I(7? +(gencia Internacional para la In!estigaciones sobre el ?ncer," muchas de las reacciones resultantes de la presencia de estos organismo" puede presentar ambos e&ectos sin'rgicos como antagonistas" presentando resultados di&erentes a los esperados por la toxicologa apropiado + iddi%ue et al. En el a5o :443,. ?omo se puede obser!ar en los resultados de los anexos /" :843" donde el incremento en n-mero de emergentes en el grupo de los tratados se in&orm en la mayora de las generaciones analizado. *e acuerdo con el (nexo I" despu's de diez generaciones de la exposicin continua cada producto %umico" hubo un aumento en total emergente para tratada" principalmente para la exposicin a dicromato de potasio. Los resultados obtenidos &ueron con las moscas de la mayora de un da de !ida" y de acuerdo con Macobson et al. +/0A3," existe la posibilidad de %ue estas moscas tienen consume menos contaminantes %ue a%uellos %ue lle!e el me#or curso de la !ida" en promedio" disminuyendo el e&ecto de producto txico. )ara llegar a una conclusin sobre la toxicidad" es necesario tener en cuenta" ms all de las acciones en el organismo" todo el proceso de toxicodinmica" es decir" es necesario conocer el mecanismo de accin del producto %umico para identi&icar cules son los e&ectos ad!ersos de los %ue act-an +(morim" :443,.

CO0CLU1#20

Este traba#o nos ha permitido analizar los e&ectos de ba#as concentraciones de !arios las sustancias utilizadas de &orma rutinaria en los laboratorios de in!estigacin y el rea de %umica biolgica. La e!aluacin bsica" hemos in!estigado los e&ectos sobre los ni!eles de producti!idad diaria de ms de /4 generaciones de dos lina#es di&erentes8 una masal y otro iso&Zmea. (l mismo tiempo el control de la aparicin de cada uno generacin" se realiz un anlisis mor&olgico de los principales mor&olgico obser!ados en adultos. (dems" se realizaron experimentos de comportamiento +tiempos de pre;cpula y la cpula," la !iabilidad del hue!o" lar!a;pupa;adulto la acti!idad carboxilesterasa y el e&ecto de di!ersas concentraciones de la sustancia %umica sobre la producti!idad. Lo %ue sigue es un resumen de las obser!aciones8 )ara acrilamida obser! una respuesta dosis;dependiente entre la concentracin de este producto en el medio de culti!o y la media de aparicin de *. melanogaster. Tambi'n hubo reduccin de la !iabilidad de hue!os en 34G. Cosotros tenemos pruebas de comportamiento" hubo aumento en promedio de tiempo de pre;cpula" sin cambios e!identes en el momento de la cpula. En cuanto a la producti!idad" medida con basado en el n-mero de las generaciones emergentes en /4 no detect un e&ecto acrilamida pronunciado aun%ue en algunas situaciones espec&icas tienen !eri&icado un aumento en el n-mero de las economas emergentes presentado a la acrilamida y un desplazamiento de pico +s, de emergencia.

En el caso de aluminio" ms de diez generaciones de la exposicin continua" se produ#o reduccin en el n-mero de hue!os" pero los aspectos prcticos de las situaciones de emergencia y brotes se mantu!o similar a las de control. Co hubo disminucin en el n-mero de indi!iduos despu's de diez generaciones sometidas al metal. En cuanto a la pauta de emergencia parece %ue hay un desplazamiento del mximo de emergencia. La de aluminio &ue tambi'n el metal %ue ha causado el aumento de la &recuencia anormal mor&olgica. En algunas generaciones" por e#emplo" @3" obser! aumento en el pre;apareamiento tiempo" y el aumento de la acti!idad de la carboxilesterasa.

Los principales e&ectos obser!ados sobre la exposicin al cromo hexa!alente despu's de diez generaciones de la exposicin &ueron una disminucin del peso y aumento signi&icati!o en el momento de la cpula. El n-mero de descendientes en las generaciones &ue mayor en grupos tratados con cromo en comparacin con el control. Co hubo respuesta a la dosis una relacin de dependencia entre la concentracin del producto en el medio de culti!o y la media emergencia.

eg-n <irsch et al. +:443," aumento de la &recuencia de la cpula y la &ertilidad en las poblaciones de *. melanogaster tratados con plomo" puede ser interpretado en t'rminos de cambios en la asignacin de recursos por la hembra. <ay tres posibles interpretaciones. La primera" cuando las condiciones ambientales son &a!orables" las hembras pueden ser ms selecti!a en la eleccin de pare#a y puede in!ertir &uertemente en la descendencia indi!idual +ms hue!os, maximizar su calidad. En contraste" la hembra en ambientes hostiles puede aumentar la &recuencia con %ue la cpula y F o el n-mero de hue!os +ms pe%ue5o," aumentando as la di!ersidad gen'tica. El plomo" #unto con acrilamida" &ue el producto %ue ms a&ecta a la !iabilidad de los hue!os" alrededor del 34G de ellos no llegaron a la &ase de pupa.

La mitad de las generaciones expuestas a nitrato de plomo present un incremento en la emergencia en comparacin con el control" siendo la di&erencia en la @/ signi&icati!o. La cambios mor&olgicos &ueron &recuentes" sobre todo en la cuarta y sexta generacin" en la %ue" de acuerdo a la literatura para aumento de las in!ersiones cromosmico en D! subobscura. En la -ltima generacin tambi'n se increment el tiempo antes de la cpula. (dems" en el experimento con di&erentes concentraciones ms altas" %ue present el mayor promedio de emergencia" en comparacin con el control

El ?oomassie (zul Brillante .;:34 &ue el producto %ue menos a&ect a la biologa de D! melanogaster. En nuestros experimentos en la mitad de las generaciones analizadas hubo aumento en proporcin de las economas emergentes en comparacin con el control" y %ue en la s'ptima generacin" este aumento &ue signi&icati!o. )ruebas de comportamiento no di&iri signi&icati!amente" slo haba %ue aumentar el tiempo de pre; apareamiento %ue se pro&undiz con el paso de las generaciones. ?uriosamente" la !iabilidad de los hue!os se increment hacia la exposicin a te5ir

Los resultados mostraron %ue todas las sustancias testeadas e#ercan alg-n tipo de respuesta medible en la *rosophila melanogaster" aun%ue en di!ersos grados de magnitud. $na !ariedad de sustancias analizadas en el proyecto nos ha permitido caracterizar la m'todo %ue se utiliza como bioindicador D! melanogaster como !lido y capaz de re&le#ar de manera e&iciente la toxicidad de cual%uier sustancia capaz de mezcla con medio de culti!o

Los agentes %umicos probados" cada uno con su mecanismo de toxicidad intrnseco" probablemente causado algunos cambios en el (*C" la acti!idad de las

enzimas en la expresin de la protena" el comportamiento" y otros no considerados a%u" lo %ue result en las !ariables medidas. Era e!idente" tambi'n" la amplitud de respuestas indi!iduales dentro de una poblacin sometida a la misma condicin experimental. Las cuestiones planteadas por este traba#o" por e#emplo" los mecanismos de la toxicidad y la de&ensa" los e&ectos sobre el material gen'tico" la sensibilidad di&erente en cada etapa del ciclo de !ida" merecen a-n ms" haciendo %ue las metas continuacin de esta in!estigacin.