PR CTICAS OB BLIGATORIA AS PROPUE ESTAS EN EL E PROGRA AMA DE CON NTENIDOS (PAU) ( MAT TERIA BIOL LOGA

Pr rctic ca1. Ob bserv vacin n de d los l fen menos os smti icose enepi iderm misde eceb bolla.

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Objetivo: Visualizar los fenmenos osmticos de turgencia y plasmlisis celular. Introduccin:

La clula vegetal adulta encierra una voluminosa vacuola separada del medio que la rodea por una membrana llamada tonoplasto. sta se comporta en primera aproximacin como membrana semipermeable con respecto a numerosas sustancias disueltas, como por ejemplo, el cloruro sdico o la sacarosa. La pared celular rgida limita la posibilidad de dilatacin de la clula y, en consecuencia, la absorcin de agua. Ello constituye, por otra parte, un marco gracias al cual, los cambios en el contenido hdrico son perceptibles directamente.

Material:
Hojas de cebolla. Colorante rojo neutro al 1 % en tampn fosfato 0,1 M pH=7,4. Disolucin de NaCl al 6 %. Microscopio ptico.

Manipulacin:
Sirvindose de pinzas y bistur, tomar un fragmento de epidermis, de la parte interna del casco de cebolla, de aproximadamente 0,5 cm de lado. Sumergirlo durante un minuto en la disolucin de rojo neutro al 1 % solubilizado en tampn fosfato 0,1 M pH=7,4. Montar el fragmento de epidermis en el porta, tapndolo a continuacin con el cubre, eliminando el exceso de lquido succionando con papel de filtro y observar al microscopio. Reemplazar el colorante, en la preparacin, con disolucin de NaCl al 6%, colocando unas gotas de esta disolucin en el porta-objetos, junto a un borde del cubre, pero sin mancharlo y colocando un fragmento de papel de filtro en el lado opuesto, para aspirar por capilaridad el colorante.
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La disolucin de cloruro sdico ocupar el lugar de aquel, lo que se reconoce porque el lquido de la preparacin se aclara. Repetir los lavados cuatro o cinco veces y observar inmediatamente la preparacin al microscopio.

Informacin que debe adquirir o cuestiones que debe resolver el alumno con el desarrollo de la prctica:
A qu se debe la gran extensin de la coloracin de la clula tras la tincin con rojo neutro? Qu papel desempean las diferentes concentraciones de las disoluciones de tampn fosfato y de cloruro sdico sobre la del jugo vacuolar? A qu atribuye los cambios que se observan en la vacuola en cada caso?

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Pr rctic ca2. Ob bserv vacin n y/ /o tinci t n d de los gr ranos de almid a dn de d la pata ata co on Lu ugol.

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Objetivo: Obs servar grano os de almidn de la pat tata y conoc cer la tcnic ca de tincin n con
Lugo ol para el reconocimien nto de la pre esencia de dicho d polisa acrido.

Intr roduccin n:
El Lu ugol es una a disolucin n acuosa de yodo y yoduro potsi ico que sirv ve para aver riguar si, en n una disolu ucin de az cares no re eductores (r reaccin de Fehling ne egativa), exi iste el polis sacrido alm midn (prueb ba de Lugol l positiva). El almidn es un n polisacri ido mezcla de d amilosa y amilopect tina. Cuan ndo el almidn se pon ne en contac cto con una as gotas de Lugol tom ma un color azulviole eta caracter stico (la am milosa se co olorea de az zul oscuro a negro y la a amilopecti ina se color rea entre na aranja y ama arillo). Se tr rata de una reaccin no o qumica, en e la que se e forma un compuesto de inclusi n del yodo o en el inte erior de las s hlices de e la amilosa. Esta inc clusin es r reversible y est cond dicionada po or la temper ratura.

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Material:
Patata. Microscopio ptico. Reactivo Lugol (yodo-yoduro potsico 1%). Suspensin acuosa de almidn.

Manipulacin:
Coger un trozo de patata, aadirle una gota de agua en la superficie y hacer un raspado de tejido. Se obtiene una suspensin de granos de almidn que enturbia la gota de agua, dndole color blanquecino. Poner una gota de esta suspensin sobre el porta, colocar el cubre y observar al microscopio. Poner ahora una gota de reactivo yodo-yoduro potsico (1%) sobre el porta, en contacto con el borde del cubre, y con un papel de filtro en el borde opuesto, hacer que penetre en la preparacin. Observar de nuevo en el microscopio.

En caso de que no se disponga de microscopio: Se puede hacer reaccionar la suspensin obtenida tras el raspado de la patata con una gota de reactivo yodo-yoduro potsico (1%), para observar el cambio de coloracin.

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Se colocan en un tubo de ensayo 3 ml de una suspensin acuosa de almidn, se le aaden 3 gotas de la solucin de Lugol, se observar la aparicin del color azul-violeta caracterstico. A continuacin se calienta suavemente, sin que llegue a hervir, se observar que pierde el color. Posteriormente se enfra el tubo de ensayo con agua del grifo y, despus de unos 2-3 minutos, reaparecer el color azul.

Informacin que debe adquirir o cuestiones que debe resolver el alumno con el desarrollo de la prctica:
Conocer la forma de los granos de almidn obtenidos a partir de este material vegetal. Relacionar el tamao de los granos y el nmero de capas que se observan en ellos. Conocer la posibilidad de utilizar el reactivo yodo-yoduro potsico (1%) para detectar la presencia de almidn en un medio. Fundamento de la reaccin de color y de los cambios con la temperatura.

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Prctica3. Determinacindelpoderreductorde azcares.

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Objetivo: Poner de manifiesto la presencia de azcares reductores en un medio,

mediante una reaccin de color de tipo redox.

Introduccin:
Los monosacridos y la mayora de los disacridos poseen poder reductor, que deben al grupo carbonilo que tienen en su molcula. El reactivo de Fehling es utilizado con el fin de poner de manifiesto la capacidad reductora de un azcar. Consiste en una mezcla de dos reactivos: el Fehling A (sulfato cprico), de color azul, y el Fehling B (tartrato sdico-potsico), incoloro. La reaccin con el glcido reductor (en caliente) da lugar a xido de cobre (I) que forma un precipitado de color rojo. De este modo, el cambio de color indica que se ha producido una reaccin de tipo redox y que, por tanto, el glcido presente es reductor.

Material y Manipulacin:
1 parte Poner, en distintos tubos de ensayo, 3 ml de solucin acuosa de glucosa, fructosa, sacarosa y almidn. Aadir en cada tubo 1 ml de solucin de Fehling A (contiene CuSO4) y 1 ml de Fehling B (tartrato sdico-potsico, para alcalinizar el medio y permitir la reaccin). Calentar los tubos en un bao mara hasta que hiervan durante 10 minutos. La reaccin ser positiva si la muestra se vuelve de color rojo y ser negativa si queda azul o cambia a un tono azul-verdoso. 2 parte La sacarosa es un disacrido que carece de poder reductor (porque en el enlace de los monosacridos que forman parte de su molcula participan los carbonos anomricos), por lo que la reaccin con el reactivo de Fehling es negativa, tal y como se ha visto en la 1 parte.

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Sin embargo, en presencia de HCl y en caliente, la sacarosa se hidroliza y se descompone en los monosacridos que la forman, glucosa y fructosa, que s son reductores. La prueba de que se ha verificado la hidrlisis se realiza con el reactivo de Fehling y, si el resultado es positivo, aparecer un precipitado rojo (tras el calentamiento en bao mara a ebullicin, durante 10 minutos). Si el resultado es negativo, la hidrlisis no se habr realizado correctamente, y si en el resultado final aparece una coloracin verde en el tubo de ensayo se debe a una hidrlisis parcial de la sacarosa. Para llevar a cabo esta parte de la prctica: Tomar 3 ml de solucin de sacarosa y aadir 10 gotas de HCl diluido. Calentar a la llama del mechero durante unos 5 minutos. Dejar enfriar. Neutralizar, aadiendo 3 ml de solucin alcalina. Realizar la prueba de Fehling como se indica en la 1 parte.

Informacin que debe adquirir o cuestiones que debe resolver el alumno con el desarrollo de la prctica:
Establecer a qu se deben las diferencias observadas entre los cuatro carbohidratos analizados (glucosa y fructosa dan positiva la reaccin de Fehling, mientras que sacarosa y almidn no dan positiva la reaccin). Analizar e interpretar los resultados obtenidos tras la hidrlisis de la sacarosa.

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Prctica4. ExtraccinyaislamientodeADN.

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Objetivos: Romper o lisar con detergentes la pared celular, la membrana plasmtica y

la membrana nuclear para dejar libre el ADN y hacer que precipite en alcohol, para poder visualizar las fibras del ADN.

Introduccin:
ADN es la abreviatura del cido Desoxirribonucleico. Es la molcula de la vida, pues constituye el material gentico de todos los organismos vivos y se encuentra en el interior del ncleo de las clulas. EL ADN es el componente qumico primario de los cromosomas y el material que constituye los genes. Su funcin esencial es la de conservar la informacin durante la divisin celular, transmitirla de generacin en generacin y hacer efectiva la informacin gentica que contiene. La extraccin de ADN de una muestra celular se basa en el hecho de que los iones salinos son atrados hacia las cargas negativas del ADN, permitiendo su dispersin coloidal y posterior extraccin de la clula. Se empieza por lisar (romper) las clulas, vacindose su contenido molecular, procedindose a continuacin a su proteccin frente a enzimas que puedan degradarlo, para conseguir finalmente su aislamiento, hacindolo precipitar en alcohol.

Material: Guisantes. Agua destilada. Detergente lavavajillas. Sal (NaCl).

Zumo de pia o de papaya. Alcohol de 96 muy fro.

Tubos y vasos de plstico. Colador. Cucharilla de caf. Batidora/mortero. Hielo. Gasa para colar.

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Manipulacin:
Preparacin del tampn de extraccin: en un vaso echamos media cucharadita de detergente de lavavajillas, una pizca de sal y media cucharadita de zumo de pia. Aadimos 30 ml de agua destilada. A continuacin, se mezcla esta solucin con 30 g de guisantes y se procede a triturar la mezcla, con el mortero (en este caso se adicionan 2 g de sal gorda para que acte como abrasivo) o la batidora (a velocidad mxima durante 30 segundos). Los jabones utilizados como lavavajillas emulsionan los lpidos de las membranas celulares y, ayudados por la trituracin con el mortero o la accin de la batidora, son capaces de romper la pared celular y las membranas plasmtica y nuclear. La sal evita la unin de las protenas al ADN y solvata sus cargas negativas. Los zumos de pia y papaya contienen un enzima, la papana, que contribuye a eliminar las protenas que puedan contaminar o degradar el ADN. Filtramos el lquido obtenido con un colador y gasa. Llenamos la mitad de un tubo con la disolucin filtrada. Aadimos cuidadosamente la misma cantidad de alcohol muy fro, hacindolo resbalar muy despacio por las paredes del tubo, para que forme una capa sobre el filtrado, no debiendo mezclarse el filtrado y el alcohol. El alcohol fro se utiliza para precipitar el ADN en la interfase formada entre el alcohol y el agua. Dejamos reposar durante 2 3 minutos. En la interfase de las dos soluciones aparecen unos filamentos de ADN que van emigrando hacia la fase alcohlica. Podemos ayudar a la migracin del ADN efectuando movimientos de rotacin (suavemente) del tubo de ensayo. Los filamentos de ADN acaban aglomerndose, formando un precipitado de aspecto algodonoso (fotografa cedida por la Profesora Ana Calvo Nez, IES Saavedra Fajardo, Murcia).

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Informacin que debe adquirir o cuestiones que debe resolver el alumno con el desarrollo de la prctica:
Para qu se utiliza el detergente y el NaCl en la extraccin? Qu componente aporta el zumo de pia o de papaya y cul es su utilidad? Por qu se incorpora finalmente el etanol fro al medio?

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Pr rctic ca5. Cu ultivo o de levad duras s. Est tudio o de la Re espira acin n.

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Objetivo: Estudiar la produccin de CO2 durante la respiracin e investigar el efecto

de un inhibidor de la gliclisis.

Introduccin:
La respiracin es un proceso por el cual las clulas obtienen energa, mediante la degradacin de compuestos orgnicos tales como los azcares, de alto contenido energtico. La gliclisis consiste en la conversin de un azcar sencillo (hexosa) en dos molculas de piruvato. Esta ruta, prcticamente comn a todos los seres vivos, consta de varios pasos catalizados enzimticamente. Uno de ellos, el paso de 2-Fosfoglicerato a Fosfoenolpiruvato, est catalizado por la enzima Enolasa, que necesita la presencia de iones Mg2+ para poder actuar. En presencia de iones F- , el Mg2+ se compleja en forma de MgF2, con lo cual, se inhibe la gliclisis y no hay respiracin. En el transcurso de la gliclisis se producen, por cada molcula de glucosa, 2 molculas de ATP, y otras dos de coenzimas reducidos (NADH + H+). El piruvato puede sufrir distintas transformaciones dependiendo del tipo de organismo y de las condiciones en que se encuentre. En presencia de O2, los seres aerobios y los anaerobios facultativos continan la oxidacin del piruvato, a travs del ciclo de Krebs y de la cadena de transporte de electrones de las mitocondrias, hasta dar CO2 y H2O como productos finales. Los organismos anaerobios estrictos, y los facultativos en ausencia de O2, transforman el piruvato en otros compuestos ms reducidos, para regenerar el NAD+ necesario para continuar la gliclisis, con lo cual la mayor parte de la energa de la glucosa es desaprovechada. Esta va se conoce con el nombre de fermentacin y, dependiendo del producto final, se le llama alcohlica, lctica, etc. En el caso que vamos a estudiar, las levaduras Saccharomyces cerevisiae son organismos facultativos que, en ausencia de O2, producen CO2 y etanol a partir del piruvato, por lo cual son muy utilizados industrialmente, por ejemplo, en la fabricacin de la cerveza.

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Material:
Levaduras en suspensin acuosa, durante 24 h, a 25C. Disolucin de glucosa al 5%. Disoluciones de NaF 0,01, 0,05 y 0,10 M. Tubos de ensayo para respirmetro.

Manipulacin:
Antes de empezar a operar, rotule 5 tubos graduados, numerndolos del 1 al 5 en la parte cerrada del tubo. Para construir el respirmetro simple, llene con suspensin de levaduras, agua, solucin de glucosa e inhibidor, segn se indica a continuacin en la tabla. Coloque un tubo de ensayo grande (de mayor dimetro que el graduado) sobre el graduado, introducindolo lo ms posible y, presionando ambos, invierta el conjunto rpidamente, de manera que derrame la menor cantidad de lquido posible. Se mide el volumen de aire que queda entre el lquido y el fondo del tubo graduado e invertido, y se anota. Si las levaduras respiran, el CO2 desprendido se acumular en la cmara de aire, aumentando la presin sobre el lquido, con lo que ste ser desplazado y el volumen gaseoso aumentar. Al cabo de una hora aproximadamente, midiendo el volumen final de la cmara gaseosa y restndolo del inicialmente obtenido, tendremos una medida de la cantidad de respiracin que haya tenido lugar.

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N Tubo Suspensin levadura Agua destilada Solucin Glucosa 10% NaF

Vi

Vf

Vf-Vi

5 ml

10 ml

5 ml

5 ml

5 ml

5 ml

5 ml

5 ml (0,01M)

5 ml

5 ml

5 ml (0,05M)

5 ml

5 ml

5 ml (0,1M)

Vi = volumen inicial cmara gaseosa Vf = volumen final cmara gaseosa Vf-Vi = Diferencia de volmenes (indicativo del CO2 desprendido)

Informacin que debe adquirir o cuestiones que debe resolver el alumno con el desarrollo de la prctica:
Razonamiento sobre los procesos que estn ocurriendo en cada uno de los 5 tubos. Cul es la funcin del tubo 1? Por qu se aade glucosa a los tubos 2, 3, 4 y 5? Diferencias observadas en los tubos 3, 4 y 5 (inhibicin parcial o total, dependiendo de la concentracin del inhibidor).

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