Você está na página 1de 16

12/02/2014

Genes e expresso gnica


Gentica (do grego genno; fazer nascer) a cincia do estudo da hereditariedade e da variabilidade dos organismos Cromossomo e elementos genticos Plasmdeos, transpsons, sequncias de insero Dogma central da biologia molecular

Eucariotos 1 mRNA 1 gene 1 ptn

Caractersticas gerais do DNA


Material Gentico (hereditariedade) Presente em qualquer micro-organismo cidos nucleicos Polinucleotdeos Nucleotdeo Resduo de acar + base nitrogenada + PO4 Uma base nitrogenada = purinas ou pirimidina DNA Bases nitrogenadas
Purinas (R) Pirimidinas (Y) Adenina (A) Guanina (G) Citosina (C) Timina (T) D-2 desoxirribose

RNA
Adenina (A) Guanina (G) Citosina (C) Uracil (U) D-ribose

Procariotos 1 mRNA + 1 gene + 1 ptn


RNA policistrnico

Acar

pentose

12/02/2014

DNA cromossmico bacteriano


Cromossomo nico disperso no citoplasma Circular e de fita dupla (500- 10.000 kb) Compactao: DNA circular super-enovelado (super-coiled)

Topoisomerases bacterianas
Enovelamento do DNA Topoisomerase classe I Adiciona ou remove 1 hlice (quebra de 1 fita) Topoisomerase classe II Adiciona ou remove 2 super-enovelamentos

DNA girase

(alvo de antibiticos)

Organismo

Elemento

Tipo de cido nucleico

Descrio

Nucleases bacterianas
Rompimento das ligaes fosfodister DNases: DNA como substrato especfico RNases: RNA como substrato especfico Nucleases propriamente ditas: DNA ou RNA como substrato
Todos os organismos Plasmdeo DNA de fita dupla Eucarioto Cromossomo DNA de fita dupla Procarioto Cromossomo DNA fita dupla Extremamente longo, geralmente circular Extremamente longo, linear Molcula circular ou linear relativamente curta, extra cromossmica Sempre encontrado inserido em outra molcula de DNA Tamanho intermedirio, geralmente circular Relativamente curto, circular ou linear

Todos os organismos

Elemento transponvel

DNA fita dupla

Mitocncria ou cloroplasto

Genoma

DNA de fita dupla

Vrus

Genoma

DNA ou RNA, fita simples ou dupla

12/02/2014

Mapa Gentico
Cromossomo: inmeros genes Codificam inmeras funes mRNA, tRNA, rRNA Expresso de genes Molculas envolvidas no transporte de aa Funo estrutural ou enzimtica

Expresso de genes

Independente

RNA Monocistrnico (1) RNA Policistrnico (2)

(1)

5 Pr

Pr transcrio

RNAs

(2)

5 Pr transcrio

RNAs

Duplicao
Acontece antes da diviso celular Semi-conservativa, simtrica e bidirecional Origem de replicao: oriC Sequncia de bases especficas ricas em A + T
Dna B frenteou da forquilha

Unio dos fragmentos da fita descontnua

(fragmentos de Okazaki)

DNA circular 2 forquilhas de replicao

Protena de iniciao especfica

12/02/2014

Liberao pirofosfato Ligaes fosfodister

REPLISSOMO

Reviso e terminao Pol I e Pol III atividade de exonuclease 3 5


extremidade

Stio de terminao (Ter) bloqueio do avano das forquilhas de duplicao pela protena Tus

12/02/2014

DNA extra-cromossmico bacteriano


Molculas de cido nucleico adicionais, no-essenciais, presentes em algumas bactrias, e que geralmente confere vantagens s cepas que o possuem Propriedades Gerais
DNA fita-dupla, acessrio (presente ou no), circular ou linear 1,5 a 300 Kb Alto peso molecular, baixo nmero de cpias Maior tamanho, maior codificao de funes adicionais

Nmero de cpias caracterstico de cada plasmdeo Regulao do nmero de cpias Alto nmero de cpias X baixo nmero de cpias Manuteno conservativa) estvel (duplicao autnoma/semi-

Protenas de justaposio une as duas extremidades Volta a produzir protenas de justaposio

Integrao Bloqueio das protenas de justaposio

Cura vs Compatibilidade

Distribuio desigual de cada plasmdeo Deleo das protenas de Exciso justaposio - exciso (falta de uma das sequncias repetidas invertidas estabiliza o plasmdeo na forma integrada)

Distribuio desigual de cada plasmdeo Plasmdeos regulam o nmero de cpias de ambos Distribuio desigual Distribuio desigual

Cada plasmdeo regula seu nmero de cpias Grupos de incompatibilidade distintos

Exciso normal: recombinao legtima Exciso anormal: recombinao ilegtima Envolve sequncias diferentes das envolvidas na integrao O plasmdeo carreia parte do DNA cromossmico

SDS: interfere no sistema de partio dos plasmdeos Acridina e EtBr: insero nas Estirpe curada molculas de DNA Eletroporao

Estirpe curada Mesmo grupo de incompatibilidade

12/02/2014

Classificao (funo) caractersticas adicionais


Fertilidade: capacidade de conjugar (plasmdeo F)
- Contm genes tra, que conferem fertilidade pela capacidade de conjugao

Resistncia radiao U.V. Resistncia a drogas e a ons de metais pesados


Plasmdeo R/Fator R Contm genes que codificam resistncia a antibiticos

Produo de bacteriocinas (plasmdeo Col) E. coli Produo de antibiticos


- Atuao mais ampla que das bacteriocinas

Conhecidos tambm como fator R

Produo de enterotoxinas
- Associadas a intoxicao alimentar

Utilizao de carboidratos Degradao de hidrocarbonetos, tolueno, cido salcilico,... (Pseudomonas)


Plasmdeos degradveis

Produo de hemolisinas Produo de fmbrias de adeso a tecidos ou outras superfcies


- Plasmdeos virulentos

Fixao de nitrognio (Sinorhizobium)

Transpsons
Fragmentos de DNA linear de tamanho varivel Mnimo 5 Kb Codifica protenas acessrias Enterotoxinas, enzimas degradativas Elementos mveis Capazes de inserirem no cromossomo bacteriano

Sntese de RNA: TRANSCRIO


mRNA (RNA mensageiro) - carreia informaes genticas do genoma para o ribossoma tRNA (RNA transportador) - transporte de aminocidos durante a sntese proteica rRNA (RNA ribossomas ribossomal) - funo e estrutura dos

RNA polimerases
Genes de transposio Gene estrutural jumping genes 5 subunidades (, , , e ) Fator - Facilmente dissocivel - Reconhecimento do stio de incio da transcrio

12/02/2014

Reconhecimento de regio extremamente conservada antes do promotor: regio 10 (sequncia consenso TATAAT)/regio 35 (TTGACA)

Fatores sigma de E. coli Nome Sequncia consenso de reconhecimento a montante Funo

Stio de reconhecimento para Fator iniciao da transcrio RNA abre a dupla hlice bolha de transcrio Transcrio de UMA fita por vez Deslocamento da RNApol desenrola DNA em curtos segmentos Geralmente transcrito apenas 1 gene ou 1 operon 38 RpoS 54 RpoN 70 RpoD

TTGACA

Para a maioria dos genes, principal fator sigma durante o crescimento normal

TTGGCACA

Assimilao de nitrognio

CCGGCG

Principal fator sigma durante a fase estacionria, tambm para genes envolvidos e respostas oxidativas e osmticas

28 FliA

TAAA

Para genes envolvidos na sntese de flagelos

Terminao da transcrio Presena de sequncias especficas, ricas em GC

Sntese de protenas: TRADUO


Produto final: protena Cdigo gentico Aminocido:cdon
Correspondncia cido nucleico entre e molde de de sequncia

aminocidos do polipeptdeo

Mais de 1 cdon pode codificar um mesmo aminocido Pareamento especfico Cdon de iniciao (AUG, N-formilmetionina); Cdons de

terminao (UAA, UAG e UGA) Gene codificador de protena Fases de leitura aberta (ORF Open Reading Frames) UAA UAG UGA

AUG

12/02/2014

tRNA

Ligao covalente ao aminocido cognato

Stios da sntese proteica Subunidades

Pareamento com sequncia especfica de reconhecimento para formao do complexo de iniciao da traduo

30S subunidade 16S + 21 protenas 23S 50S + ~ 31 protenas 5S Papel essencial no mecanismo de traduo 16S Regies conservadas, variveis e hiper-variveis Grande importncia taxonmica

rRNA
3 subunidades, regies espaadoras Podem existir em mais de 1 cpia, iguais ou diferentes

97-100% de similaridade 16S rDNA, bactrias da mesma espcie (70% de similaridade no DNA total) Construo de rvores filogenticas (evoluo)

Sequncias Shine Delgarno Sequncias de 3 9 nts Precedente ao cdon de iniciao AUG Ligao especfica (bases complementares) entre 5 mRNA e 3 - 16S rRNA Stio de ligao ao ribossomo auxilia a ligao do mRNA ao ribossomo Manuteno da fase de leitura (oscilao) mRNAs policistrnicos

12/02/2014

Mutao
Alteraes (hereditrias) na sequncia de nucleotdeos de um gene

Recombinao gnica
Elementos genticos contidos em dois genomas diferentes so reunidos em uma mesma unidade Provoca alteraes mais significativas

12/02/2014

Mutaes espontneas vs mutaes induzidas


Espontneas Erros DNApol Incorporao trocada Escorreges sequncias repetitivas Danos espontneos sofridos pelo DNA a partir da e em de base cometidos pelas Induzidas Agentes externos Qumicos Hidroxilamina Nitrosoguanidina xido nitroso Fsicos Radiao (raios-X, luz ultra-violeta, )

Principais tipos de mutao


Mutaes de ponto (substituies de bases/transio transverso)
Mutao silenciosa Mutao missense conservativa/no conservativa Mutao nonsense

hidrlise,

desaminao

depurinao Elementos genticos mveis

Mutao frameshift (alterao da fase de leitura)


Insero/deleo de nucleotdeo

Mecanismos de reparo do DNA


Preveno de erros (mutao corrigida ANTES da diviso no h mutao) Neutralizao de compostos potencialmente danosos ao DNA
Superxido

Radicais superxido

dismutase

Perxido de hidrognio

Catalase

gua

Mutaes reversas Reverses de mesmo stio/reverses de segundo stio Reparo do pareamento errado Substituio da base incorreta pela base correta complementar (reviso DNApol) depende CH3 Reparo direto ou por exciso (base nica ou sequncia de nts)

10

12/02/2014

Sistema SOS
Danos em larga escala impedem replicao
DNA normal mutao endonuclease exonuclease Polimerase I ligase

Sistemas de reparo no conseguem reverter mutao SISTEMA REGULATRIO SOS Pode ocorrer na ausncia de fita molde Introduo de muitos erros Gerao de inmeras mutaes! Polimerases especiais de reparo Sntese transleso Regulon: conjunto de genes relacionados, regulados de maneira coordenada por LexA e RecA

Recombinao gnica
Troca fsica de DNA entre elementos genticos Recombinao homloga Troca de sequncias homlogas de DNA

Existem trs processos NATURAIS de transferncia gnica horizontal:

Diferentes maneiras profundas alteraes no organismo

Determinao da variabilidade gentica

11

12/02/2014

Transformao
Processo pelo qual um segmento de DNA livre no meio, oriundo de uma clula doadora geralmente morta e lisada, incorporado ao genoma de uma clula receptora DNA livre no ambiente Estado de competncia
Gram-negativa
Pli Membrana Externa

Etapas bsicas para a transformao em procariotos 1) Desenvolvimento do estado de competncia 2) Adsoro do DNA 3) Penetrao do DNA 4) Pareamento 5) Recombinao (homologia)
Pli

Gram-positiva

Flagelo Peptidoglicana Citoplasma DNA Ribossomas Flagelo

Gram-positivas vs Gram-negativas
Membrana Parede Celular Celular

Parede Membrana Celular Celular

Bacillus sp.
1. Produo do fator de competncia feromnio ComX 3. Induo da autofosforilao da protena ComP (protena sensora feromnio (Fc) 2. Acmulo do Fc no meio (aps o ComX crescimento atingir densidade) celular alta ComA ComA - P 4. Transferncia do fosfato de ComP para ComA srfA SpoO permease Peptdeo de competncia 2 ComQ ComP ComP - P P membrana citoplasmtica. Muda conformao sob ao Fc)

Conjugao
Processo de transferncia de genes onde h necessidade de contato celular. Altamente especfico e realizado atravs de um complexo multiproteico denominado aparato de conjugao
Meio Complexo
Met-Bio-Thr-Leu+Tia+ (estirpe A) Met+Bio+Thr+Leu-Tia(estirpe B)

Estirpe 1

Estirpe 2

109 clulas

108 clulas

109 clulas

(protena

reguladora

citoplasmtica)

Genes de competncia 5. Ativao da transcrio dos Filtro Bacteriolgico

A
genes necessrios competncia

A/B
10-7

Lederberg e Tatum, 1946

12

12/02/2014

Ocorre em bactrias Gram-positivas e Gram-negativas Depende, (plasmdeo F)


Contm genes para a transferncia, codificando estruturas ou molculas presentes na superfcie das clulas doadoras e que esto envolvidas no contato celular

em

sua

maioria,

de

plasmdeos

conjugativos

Gram-negativas: pli sexual Meio lquido e slido

Pli sexual

Gram-positivas: contato feito pela presena de feromnios Meio slido e/ou meio lquido
Plasmdeo F de E. coli Ap, ampicilina; Cm, cloranfenicol; Em, eritromicina; Gm, gentamicina; Hp, mercrio; Mup, mupirocina; Pc, penicilina; Qam, amnia quaternria; Sm, estreptomicina; Su, sulfa

Etapas bsicas: 1) Contato entre clulas doadora e receptora Gram-positiva (Enterococcus faecalis) Receptora: produz feromnio difusvel (termoestvel, sensvel a proteases)
Clula Doadora Clula Receptora

Gram-negativa Pli sexual Contato especfico LPS importncia como stio receptor OmpA: porina provavelmente envolvida na estabilizao dos pares

Induo

Ligao SA

Feromnios Sexuais

feromnio induz aderncia das clulas doadoras (facilitando a formao de pares)

Contato Celular

13

12/02/2014

Transferncia de DNA
Gram-positivas: processo pouco estudado, acredita-se similar de Gram-negativas Sntese prvia de DNA e transporte de macromolcula pela membrana Uma das fitas derivada da clula doadora e a fita complementar sintetizada pela receptora

Operon tra: codificado pelo plasmdeo Genes tra e trb: replicao e transferncia do DNA

Dois complexos proteicos: relaxossomo (oriT) e complexo de formao de pares (transferossoma formao do canal intermembrana)

Transferncia

de

caractersticas

fenotpicas

adicionais

(resistncia a drogas, produo de bacteriocinas, utilizao de carboidratos,) Pode ocorrer transferncia de DNA cromossmico
Depende da integrao do plasmdeo conjugativo ao DNA cromossmico Homologia Integrao reversvel

Bactrias com plasmdeo conjugativo integrado so denominadas Hfr (high frequency recombination)

14

12/02/2014

Transpsons conjugativos Pode ocorrer conjugao como consequncia da presena de transpsons conjugativos nas clulas doadoras Encontrados principalmente em Gram-positivas (Enterococcus e Streptococcus) Gram-negativas (Neisseria, Bacteroides, Salmonella enterica,...) Importncia na disseminao da resistncia a drogas - S. pyogenes e S. pneumoniae: resistncia associada presena de transpsons conjugativos
oriT, relaxase, genes tra Integrase e excisionase

Doao: transferncia de plasmdeos no-conjugativos Plasmdeos muito pequenos, NO carreiam genes para a transferncia Plasmdeo mobilizvel +
oriT e genes mob (1 a 3) mobA: relaxase (liga e cliva o plasmdeo na oriT) mobC: helicase

Plasmdeo/transpson conjugativo = transferncia Transferncia dos dois elementos ou de apenas um deles pode haver retromobilizao Conduo: transferncia de plasmdeos no-conjugativos, nomobilizveis No possuem oriT, nem relaxase Depende da transposio do transpson conjugativo ou da recombinao aditiva (mediada pelo sistema Rec bacteriano)

Transduo
Processo de transferncia de genes mediado por partculas virais (bacterifagos) Bacterifagos ou fagos temperados Vrus capazes de
Trp-Phe-His+Met+ Trp+Phe+His-MetEstirpe L2 DNase

Adsoro do fago a uma clula sensvel Clula precisa ter receptores na superfcie Gram-negativas: Protenas de transporte ou LPS Gram-positivas: cidos teicoicos ou lipoteicoicos Pinos e fibras, cauda
Estirpe L22

infectar bactrias Virulentos Fagos temperados


cabea

ou cabea

DNA fd
cauda (contrtil ou no) 10-5

Filtro Bacteriolgico

apndices (fibras e pinos, nmero varivel)

15

12/02/2014

Ciclo ltico ou lisognico Ltico: liberao da progene fgica Lisognico: latncia integrao e

Transduo generalizada o tipo mais frequente Qualquer parte do gene pode ser transferida

Transduo especializada Bactria lisogenizada Genoma fgico fica integrado ao DNA hospedeiro em stio especfico Converso fgica Fago temperado normal

FIM

lisogeniza uma clula e seu DNA convertido ao estado profago, a cultura lisognica torna-se imune infeco pelo mesmo tipo de fago

16