UNIVERSIDAD TECNOLOGICA DE MXICO CAMPUS ATIZAPN

GRUPO: ENF01C PRCTICA No. 2 MEDIO DE CULTIVO MICROBIOLOGA EQUIPO 1

DESARROLLO DE LA PRCTICA Preparacin de Medios de Cultivo 1. Limpie el rea de trabajo con una solucin desinfectante (benzal). 2. En el platillo de la balanza granataria coloque un vaso de precipitados de 250 ml y calcule el peso del mismo.

Peso del vaso de precipitados= 56.2 g

3. Se elaborarn 60 ml de Agar Nutritivo, si para 1 litro de agua destilada se usan 23 g de Agar Nutritivo. Cuntos gramos de Agar Nutritivo se necesitan para los 60 ml de agua destilada? 23 g X= ? 1000ml 60 ml ( )( )

Se elabora una regla de tres para obtener la cantidad que debe usarse de agar para hacer el medio.

4. Coloque las pesas de la balanza granataria de modo que indiquen la cantidad restante para alcanzar el peso del Agar Nutritivo a utilizar.
La balanza granataria tiene que estar indicando un peso de 57.6g aunque el ndice fiel no corresponda. Esto con la finalidad de que al ir agregando el polvo de Agar Nutritivo dentro del vaso de precipitados obtengamos la cantidad requerida del mismo.

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5. Con la ayuda de la esptula agregue poco a poco el polvo de Agar Nutritivo hasta que el ndice fiel de la balanza granataria corresponda. Retire el vaso de precipitados con el Agar Nutritivo del platillo de la balanza.

6. Tome la probeta de 50 ml y enjuguela con un poco de agua destilada. Con la ayuda de una piceta mida 60 ml de agua destilada en la probeta, primero mida 50 ml y luego 10 ml.

7. Vierta los 60 ml de agua destilada dentro del vaso de precipitados que contiene el Agar Nutritivo. Sobre un tripie coloque la rejilla de asbesto y encima coloque el vaso de precipitados con le Agar Nutritivo, encienda el mechero de Bunsen abajo del tripie.

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8. Con el agitador de vidrio mueva constantemente el medio de cultivo Agar Nutritivo de manera circular para evitar que se pegue, este tiene que tornarse transparente (cuando se torna transparente indica que ya est listo). Djelo en el fuego hasta que este ebulla.

9. Una vez que ebulla y se torne transparente el medio Agar Nutritivo, retrelo del fuego. Dentro del rea de asepsia (en un radio de 10-15 cm de la llama del mechero) coloque dos cajas de Petri de plstico estriles sobre la mesa.

10. Vierta el medio de cultivo Agar Nutritivo dentro de las cajas de Petri, cuidando no salir del rea de asepsia, tape inmediatamente las cajas y deje enfriar hasta que se solidifique el medio.

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11. Etiquete las cajas con Medio de Cultivo con los siguientes datos: Grupo Material Qu tipo de medio de cultivo es El nmero de Equipo y el nombre de un representante 12. Repita los pasos del 2 al 11 para el Agar Saboraud exceptuando la cantidad de Agar a pesar, tome en cuenta el siguiente clculo. Para 1 litro de agua destilada se necesitan 65g de Agar Saboraud. Cuntos gramos de Agar Saboraud se necesitan para 60 ml de agua destilada? 65 g X= ? 1000 ml 60 ml ( )( )

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Siembra de microorganismos 1. Tome un hisopo largo, abra la envoltura del mismo por la parte trasera del mismo, cuidando no tener contacto con la torunda. Introduzca el hisopo dentro de la boca del paciente tocando suavemente las amgdalas (localizadas a los costados de la vula).

2. Rpidamente, cuando retire el hisopo de la boca del paciente, tome una placa de Agar Nutritivo y dentro del rea de asepsia siembre usando la tcnica de estra continua con el hisopo. Repita este mismo paso en una placa de Agar Saboraud.

3. Deseche el hisopo dentro de la bolsa roja. Etiquete las placas sembradas con el nombre del paciente y el tipo de muestra. 4. Con ayuda de otro hisopo estril, tome una muestra de sudor de otro paciente y siembre de igual manera que la muestra anterior. Etiquete las cajas sembradas con el nombre del paciente y el tipo de muestra.

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5. Una vez sembradas las placas colquelas de manera inversa dentro de la incubadora a una temperatura de 37C durante un periodo de 72 horas.

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PRCTICA No. 2 MEDIO DE CULTVO

INTRODUCCIN Lo microorganismos y los dems seres vivos, toman del ambiente las sustancias (nutrientes) que requieren para sintetizar su material celular, generar energa y efectuar un funcionamiento adecuado. Los medios de cultivo son mezclas de agua y sustancias orgnicas y/o inorgnicas que contiene todos los nutrientes necesarios en cantidades apropiadas a los requerimientos especficos de aquellos microorganismos que se desea propagar y cultivar. En general, el primer aspecto que se considera en la formulacin de un medio, es la composicin qumica de las clulas, sta nos indica los principales nutrientes requeridos para el crecimiento. Considerando la composicin qumica de las clulas y consecuentemente sus necesidades nutricionales, al hacer un medio de cultivo para favorecer el desarrollo de un microorganismo cualquiera, se debe tener cuidado con los siguientes aspectos: Proporcionar una mezcla equilibrada de todos los nutrientes. Que los nutrientes se encuentren en concentraciones que permitan el crecimiento. Tener un control del pH. Controlar la formacin de precipitados minerales. La composicin de los medios de cultivo vara no slo en funcionamiento el grupo microbiano para el cual se utilizan, sino tambin en funcin de su complejidad qumica, su estado fsico y su aplicacin. Clasificacin de los medios de cultivo por su composicin Sintticos o de composicin qumicamente definida: Estos medios no son utilizados en forma rutinaria, ya que su elaboracin es minuciosa y los ingredientes son muy costosos por su alto grado de pureza. Naturales o complejos o de composicin qumicamente desconocida o no definida: Estos se elaboran con ingredientes de naturaleza compleja tales como extractos de tejidos animales o vegetales, sueros o incluso clulas completas de cultivos bacterianos o cultivo de tejidos animales y vegetales.

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Clasificacin de los medios de cultivo por su estado fsico Lquidos: Conocidos tambin como caldos, estos son especialmente tiles para hacer diluciones, para homogenizar mezclas de microorganismos, para enriquecer cultivos y para rehidratar cepas liofilizadas. Slidos: Se usan para separar microorganismos y favorecer el desarrollo de colonias aisladas. Estos medios se preparan agregando a las soluciones nutritivas lquidas un agente solidificante como el agar y el gel de slice. El agar es un carbohidrato complejo formado por galactanas que se extraen de ciertas algas marinas, principalmente del gnero Gelidium. Semislidos: Son aquellos medios lquidos a los que se adiciona agar en concentraciones de 0.4 a 0.8%. Estos se emplean para determinar la movilidad de los microorganismos microaeroflicos.

Clasificacin de los medios de cultivo segn su aplicacin Selectivos: Son aquellos que favorecen el desarrollo de un microorganismo especfico y suprimiendo el crecimiento de otros. Enriquecimiento: Favorecen la multiplicacin y aumento o enriquecimiento celular de un grupo de microorganismos con caractersticas especficas. Enriquecidos: Permiten el desarrollo de microorganismos hetertrofos exigente, son medios qumicamente complejos o ricos en nutrientes, los que se preparan a partir del caldo nutritivo enriquecido con sangre, suero o extractos de tejidos animales o vegetales. Diferenciales: Contiene sustancias nutritivas o indicadoras que permiten poner en manifiesto alguna actividad metablica del microorganismo que es diferente al de los dems. Para la cuantificacin de bacterias: Se usan para determinar la cantidad de microorganismos y la calidad microbiolgica del agua y productos como la leche se utilizan medios especficos con formulacin y especificaciones establecidas en los mtodos y normas estndares.

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De valoracin: Se utilizan medios sintticos o de composicin definida y se emplean para valorar vitaminas, aminocidos, efecto de antibiticos y desinfectantes. Tambin se les conoce como medios de prueba. Para caracterizacin: Su composicin es muy variable y se utilizan para determinar el tipo de crecimiento, as como las caractersticas metablicas de los microorganismos. De mantenimiento: En este se emplean formulaciones diferentes a aquellas que son ptimas para el crecimiento de un cultivo. Estos medios se caracterizan por estar constituidos por concentraciones muy limitadas de nutrientes.

Para efectuar el estudio de los microorganismos se han diseado diversos mtodos que permiten cultivarlos bajo condiciones artificiales, en los que es posible controlar las condiciones experimentales y manejar un solo tipo de microorganismo. Una de las tcnicas ms usadas en el laboratorio de Microbiologa, consiste en transferir una muestra microbiolgica de un ambiente determinado a un medio de cultivo, lo que permite obtener cultivos microbianos. Cultivar un microorganismo significa promover intencionalmente el desarrollo de ste en medios de cultivo y condiciones de laboratorio controladas. La poblacin de microorganismos desarrollada en un medio de se denomina cultivo. Cuando ste contiene una sola especie de microorganismos, se denomina cultivo puro o axnico, cuando contiene ms de una especie de microorganismos se denomina cultivo mixto. Para impedir la contaminacin de los cultivos es necesario: Desinfectar el rea de trabajo Lavado de manos Esterilizacin de todos los utensilios y medios de cultivo a emplear Realizar la transferencia de microorganismos en una zona estril (se obtiene trabajando cerca de la flama del mechero)

A este conjunto de procedimientos que evitan la contaminacin del medio de cultivo se le llama tcnica asptica. En la transferencia de microorganismos se emplean agujas, asas de inoculacin, hisopos, pipetas o pipetas Pasteur, estos debern esterilizarse previamente.

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Los medios lquidos se preparan en tubos o matraces que se cubren con tapones de algodn o tapas especiales, en este tipo de cultivo los microorganismos presentan un desarrollo particular que se manifiesta en la superficie o a travs de todo el lquido. La desventaja que presentan es que es difcil detectar contaminaciones a simple vista. Los medios semislidos se preparan en tubos, se inoculan con aguja de siembra (asa recta). Se emplean para estudiar la movilidad de los microorganismos y para favorecer la separacin de microorganismos con diferentes requerimientos de oxgeno. Los medios slidos se preparan en tubos o en matraces dependiendo de la cantidad o de las necesidades, despus de esterilizarlos se inclinan o vierten en cajas de Petri. La siembra se realiza con el asa inoculando la superficie del agar con mucha suavidad. En estos medios los microorganismos al multiplicarse forman agregados denominados colonias. Tcnicas de estriado: 1. Estriado continuo 2. Estriado en cuadrantes 3. Estriado en cuadrante radial

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OBJETIVOS: Aprender a hacer uso de la balanza granataria durante el pesaje de los Medios de Agar a utilizar. Elaborar adecuadamente los medios de cultivo y aprender a verter estos de la forma correcta para no contaminarlos. Aplicar las tcnicas adecuadas de asepsia para evitar contaminaciones el momento de inocular. Aprender las tcnicas de estriado.

MATERIALES: Bolsa Roja 3 vasos de precipitados de 250 ml Mechero de Bunsen Rejilla de Asbesto Trpode 1 Agitador de Vidrio 3 Cajas de Petri estriles 1 asa de siembra Piceta con Agua destilada 2 Hisopos estriles Balanza Granataria Agar Nutritivo Agar Saboraud

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CONCLUSIN: Todo el procedimiento se vio correctamente empleado hasta que realizamos el vertido de los medios a la cajas de Petri estriles, ya que en lugar de verterlo sobre la superficie plana de la mesa; lo hicimos con ambas manos cerca de la llama del mechero. Esto provoc que parte del medio de cultivo se adhiriera a las paredes de la tapa de la placa de Petri. Tal accin puede provocar una contaminacin del medio de cultivo, debido a que no empleamos de manera correcta las tcnicas para el vertido de medio en la placa de Petri.

BIBLIOGRAFA: Laboratorio de microbiologa. Prctica No. 1. Disponible en: campus.usal.es/~micromed/Practicas_odontologia/.../practica1.html R. M. Ramrez Gama. Manual de prcticas de Microbiologa General. (2011). Pginas: 60 84. Antonio Domenech. SEMINARIOS DE MICROBIOLOGA. Medios de Cultivo. Disponible en: http://www.uib.es/depart/dba/microbiologia/seminarios/1%20Medios%20de %20cultivo.pdf