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Dosagem Microbiolgica de Antibiticos e Fatores de Crescimento.

Introduo
H que se considerar tambm,da o A necessidade de confirmao aspecto como o eficcia econmico, teraputica assim dos produtos de falsificaes com molculas medicamentosos constitui-se em estruturalmente similares; aspecto de preocupao;
9000-8000 a.c.

A quantificao da substncia ativa demanda sempre no emprego de uma avaliao comparativa, frente a um padro biolgico de referncia; H situaes em que a margem entre a dose ineficaz do ponto de vista Pode ser empregado um ensaio macrobiolgico ou direto, teraputico e uma dose txica como o ensaio de insulina empregando camundongos, ou relativamente pequena; ainda microbiolgico ou indireto, como o ensaio de estreptomicina e tetraciclina;

Introduo
No segundo caso os dois mtodos mais usados so de difuso em gar (ou em placas) e o turbidimtrico (ou de tubos), prestando-se particularmente determinao do teor de 9000-8000 a.c. antibiticos e fatores de crescimento;

O mtodo de difuso em gar relaciona o tamanho da zona de exibio (fatores de crescimento) ou inibio (antibitico) com a dose da substncia ensaiada e mais comumente empregado para determinao de antibiticos;

Ensaio de Difuso em gar


O ensaio por difuso, desenvolvido para antibiticos, um mtodo fsico, no qual um microrganismo usado como revelador; Muitas9000-8000 das a.c. variaes observadas so causadas pela negligncia dos aspectos fsico-qumicos, e no por variaes biolgicas;

O mtodo de difuso emprega meio de cultura slido inoculado, distribudo em placas, em sistema de mono ou bicamada, atravs do qual a substncia-teste se difunde;

Ensaio de Difuso em gar


A soluo-teste aplicada sobre a superfcie deste meio, em uma rea restrita, e as placas so ento encubadas; O crescimento do microrganismo ocorre respeitando, porm, reas onde tenha ocorrido a difuso do antibitico, gerando contraste e resultando a chamada 9000-8000 a.c. zona de inibio do crescimento;
Formao de zonas de inibio (x) do crescimento microbiano, decorrente da difuso de antibitico, em gar contido na placa (difuso radial) e tubos (difuso linear);

Ensaio de Difuso em gar


Formao da Zona de Inibio de Crescimento
significa que o microrganismo AIsto aplicao de conhecimentos de difuso para avaliao teve seu crescimento inibido em padronizao de de potncia de antibiticos exige funo da concentrao de fenmenos fsicos condies, pois h que conciliar os antimicrobiano difundido ser capaz sensvel, meio de (difuso) e biolgicos (microrganismo de impedir o seu desenvolvimento, cultura, incubao), a fim de que a distncia de difuso em medida oposio ao restante do meio de a revelao sob a seja experimentalmente, aps cultura; forma de zona ou halo de inibio de crescimento; A necessidade do dimensionamento das zonas de inibio de crescimento conduz exigncia de inculo com populao microbiana homognea. Assim, foi possvel a determinao terica dos valores de dimetro para diferentes concentraes do antibitico;

Importncia da padronizao
A principal melhora na orientao laboratorial dos antibiogramas nas ltimas dcadas provm do desenvolvimento de procedimentos padres;

importante aderir aos protocolos para obter resultados passveis de reproduo;


Fatores importantes do Antibiograma: Meio de crescimento: O caldo de cultura e o gar Mueller-Hinton foram escolhidos para as bactrias aerbicas e anaerbicas facultativas;

Fatores importantes do antibiograma


pH: Deve estar entre 7,2 e 7,4 a temperatura ambiente. O pH do meio em caldo de cultura pode ser testado diretamente com um eletrodo de pH, e o meio do gar pode ser testado pela macerao de gar suficiente, de modo que a ponta do eletrodo possa ser imersa; Soro: O grau de ligao dos antibiticos s protenas apresenta grande variao. Podem ser obtidos valores diferentes se for adicionado soro ao meio;

Fatores importantes do antibiograma


Concentrao [ ] de ctions: A concentrao de ctions divalentes Ca2+ e Mg2+ afeta os resultados da sensibilidade quando so testadas determinadas combinaes de espcies bacterianas e antibiticos;

Pseudomonas aeruginosa

Reao cruzada

Fatores importantes do antibiograma


Concentrao [ ] de ctions:

O caldo de Mueller-Hinton [ em ]s Quando os cultura microrganismos estoapresenta crescendo muito baixas de ctions divalentes e deve ser meio deficiente em ctions, a permeabilidade da suplementado concentraes fisiolgicas; parede celular para aos antibiticos aminoglicosdeos e a outros compostos aumenta; Alguns lotes do gar Mueller-Hinton podem na Assim, microrganismos so mais sensveis verdadeos apresentar concentrao anormalmente ao dos aminoglicosdios, produzindo ] alta desses ctions, de modo que [ so inibitria mnima falsamente baixa ou grandes produzidas pequenas zonas inibidoras quando zonas inibidoras; P. aeruginosa testado com aminoglicosdeos;

Fatores importantes do antibiograma


Atmosfera: O gar ou caldo de cultura incubado em uma incubadora em ar ambiente. Uma incubadora com CO2 no deve ser utilizada para testes de rotina. O cido carbnico formado na superfcie do gar ou no caldo pode causar reduo do pH; Nos laboratrios com pequena carga de trabalho e onde existe apenas incubadora de CO2, aceitvel colocar as placas ou tubos de sensibilidade em uma jarra selada;

Fatores importantes do antibiograma


Temperatura: As placas e os tubos devem ser incubados rotineiramente a 35C. Quando em temperaturas mais altas, a deteco de estafilococos resistentes a oxacilina fica comprometida. Se houver suspeita de resistncia contra oxacilina e no houver manifestaes em 35C, as placas ou tubos podem ser incubados a 30C;

Fatores importantes do antibiograma


Inculo: , em geral, preparado a partir do caldo de cultura que foi incubado por 4 a 6 horas, quando o crescimento considerado em fase logartmica; Devem ser coletadas amostras de vrias colnias de aspecto semelhante para diminuir a variao na populao bacteriana; A densidade da suspenso ajustada para aproximadamente 108 CFU/ml;

Escala de McFarland
preparado adicionando-se 0,5 ml de 0,048M BaCl2 (1,175% p/v BaCl2H2O) a 99,5 ml de 0,36N H2SO4. Alquotas de 4 a 6 ml do padro de turbidez do BaSO4 so distribudas em tubos de mesmo tamanho, fechado com tampa de rosca, firmemente selados e armazenados, no escuro, a temperatura ambiente; Comumente o grau de turbidez no caldo de cultura comparado com o padro, visualizando os dois contra um fundo branco no qual foram desenhadas linhas pretas;

Fatores importantes do antibiograma


Agentes Antimicrobianos: Discos impregnados com antimicrobianos devem ser armazenados a -20C ou menos em condio anidrosa. Os fabricantes de discos precisam controlar rigorosamente a concentrao dos agentes antimicrobianos nos discos para 60-120% do teor declarado; a variao existente em geral consideravelmente menor;

Fatores importantes do antibiograma


Agentes Antimicrobianos: Um pequeno estoque pode ser mantido em temperaturas de refrigerador em um dessecador;
Os discos sempre devem ser aquecidos at temperatura ambiente antes de se abrir o dessecador, de modo que a condensao da umidade do ar no reidrate parcialmente os discos.;

Teste de sensibilidade em Macrodiluio em Caldo de Cultura


Esteve entre os primeiros testes a serem desenvolvidos e ainda serve como mtodo de referncia;

Teste de sensibilidade por Diluio em gar


o segundo mtodo de referncia, foi adaptado com sucesso para uso rotineiro nos grandes laboratrios avaliando apenas as [ ]s escolhidas dos antimicrobianos;

Teste de sensibilidade por Difuso em Disco


Assim que o disco impregnado com agente antimicrobiano entra em contato com a superfcie mida do gar, a gua absorvida pelo filtro de papel e o agente antimicrobiano se difunde para o meio circulante;

Interpretao dos Resultados

OBRIGADO