UNIVERSIDAD MARIANO GALVEZ FACULTAD DE CIENCIAS MDICAS Y DE LA SALUD BIOLOGIA MOLECULAR Y CELULAR, SEDE JUTIAPA.

KARLA MARIA ARIZA HERNANDEZ 7200-10-13492

Practica No.4, Practica No.5

Mecanismos de Transporte Celular Analisis Quimico de los Componentes del Protoplasma

Reporte 1) RESUMEN O SUMARIO En la prctica de mecanismos de transporte celular, se realizo una prueba con hoja de elodea, la cual se observo en estado natural, o preparacin en fresco, luego se absorbi el agua de la preparacin anterior y se agrego solucin salina al 15%, con lo cual se hizo la respectiva comparacin de las dos presentaciones, observando como con solucin salina se redujo el tamao de la misma (se comprimi) Dentro de la practica No. 5 realizamos ms pruebas y comparaciones dentro de las cuales se observo protenas, (Prueba de Biuret), asimismo se practicaron pruebas de solubilidad, pruebas de azucares (Prueba de Benedict), pruebas con Lugol (Almidn), y Anlisis simultneos de varios parmetros donde se realizo una prueba de orina, comparamos los resultados con los considerados normales, dando unos positivos y otros negativos.

2) MARCO TERICO MECANISMOS DE TRANSPORTE Las clulas requieren nutrientes del exterior y deben eliminar sustancias de desecho procedentes del metabolismo y mantener su medio interno estable. La membrana presenta una permeabilidad selectiva, ya que permite el paso de pequeas molculas, siempre que sean lipfilas, pero regula el paso de molculas no lipfilas. Los mecanismos de transporte pueden verse en el siguiente esquema:

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Transporte de molculas de baja masa molecular:

El transporte pasivo. Es un proceso de difusin de sustancias a travs de la membrana. Se produce siempre a favor del gradiente, es decir, de donde hay ms hacia el medio donde hay menos. Este transporte puede darse por: Difusin simple. Es el paso de pequeas molculas a favor del gradiente; puede realizarse a travs de la bicapa lipdica o a travs de canales proteicos. Difusin simple a travs de la bicapa As entran molculas lipdicas como las hormonas esteroideas, anestsicos como el ter y frmacos liposolubles. Y sustancias apolares como el oxgeno y el nitrgeno atmosfrico. Algunas molculas polares de muy pequeo tamao, como el agua, el CO2, el etanol y la glicerina, tambin atraviesan la membrana por difusin simple. La difusin del agua recibe el nombre de smosis Difusin simple a travs de canales Se realiza mediante las denominadas protenas de canal. As entran iones como el Na+, K+, Ca2+, Cl-. Las protenas de canal son protenas con un orificio o canal interno, cuya apertura est regulada, por ejemplo por ligando, como ocurre con neurotransmisores u hormonas, que se unen a una determinada regin, el receptor de la protena de canal, que sufre una transformacin estructural que induce la apertura del canal. Difusin facilitada. Permite el transporte de pequeas molculas polares, como los aminocidos, monosacridos, etc, que al no poder atravesar la bichaba lipdica, requieren que protenas trasmembranosas faciliten su paso. Estas protenas reciben el nombre de protenas transportadoras o permeasas que, al unirse a la molcula a transportadora sufren un cambio en su estructura que arrastra a dicha molcula hacia el interior de la clula. El transporte activo: En este proceso tambin actan protenas de membrana, pero stas requieren energa, en forma de ATP, para transportar las molculas al otro lado de la membrana. Se produce cuando el transporte se realiza en contra del gradiente electroqumico. Son ejemplos de transporte activo la bomba de Na/K, y la bomba de Ca. La bomba de Na+/K+ Requiere una protena transmembranosa que bombea Na+ hacia el exterior de la membrana y K+ hacia el interior. Esta protena acta contra el gradiente gracias a su actividad como ATP-asa, ya que rompe el ATP para obtener la energa necesaria para el transporte.

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Por este mecanismo, se bombea 3 Na+ hacia el exterior y 2 K+ hacia el interior, con la hidrlisis acoplada de ATP. El transporte activo de Na+ y K+ tiene una gran importancia fisiolgica. De hecho todas las clulas animales gastan ms del 30% del ATP que producen ( y las clulas nerviosas ms del 70%) para bombear estos iones. Transporte de molculas de elevada masa molecular: Para el transporte de este tipo de molculas existen tres mecanismos principales: endocitosis, exocitosis y transcitosis. En cualquiera de ellos es fundamental el papel que desempean las llamadas vesculas revestidas. Estas vesculas se encuentran rodeadas de filamentos proteicos de clatrina. ENDOCITOSIS: Es el proceso por el que la clula capta partculas del medio externo mediante una invaginacin de la membrana en la que se engloba la partcula a ingerir. Se produce la estrangulacin de la invaginacin originndose una vescula que encierra el material ingerido. Segn la naturaleza de las partculas englobadas, se distinguen diversos tipos de endocitosis. PINOCITOSIS. Implica la ingestin de lquidos y partculas en disolucin por pequeas vesculas revestidas de clatrina. FAGOCITOSIS. Se forman grandes vesculas revestidas o fagosomas que ingieren microorganismos y restos celulares. Endocitosis mediada por un receptor. Es un mecanismo por el que slo entra la sustancia para la cual existe el correspondiente receptor en la membrana. EXOCITOSIS. Es el mecanismo por el cual las macromolculas contenidas en vesculas citoplasmticas son transportadas desde el interior celular hasta la membrana plasmtica, para ser vertidas al medio extracelular. Esto requiere que la membrana de la vescula y la membrana plasmtica se fusionen para que pueda ser vertido el contenido de la vescula al medio. Mediante este mecanismo, las clulas son capaces de eliminar sustancias sintetizadas por la clula, o bien sustancias de desecho. En toda clula existe un equilibrio entre la exocitosis y la endocitosis, para mantener la membrana plasmtica y que quede asegurado el mantenimiento del volumen celular. TRANSCITOSIS. Es el conjunto de fenmenos que permiten a una sustancia atravesar todo el citoplasma celular desde un polo al otro de la clula. Implica el doble proceso endocitosisexocitosis. Es propio de clulas endoteliales que constituyen los capilares sanguneos, transportndose as las sustancias desde el medio sanguneo hasta los tejidos que rodean los capilares.

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PROTOPLASMA: Elemento fundamental de que se componen todos los seres vivos; es la parte de la clula compuesta en un 85 a 90 por ciento por agua, que contiene protenas, sustancias grasas y sales inorgnicas. COMPONENTES QUMICOS DEL PROTOPLASMA El protoplasma no es una sustancia qumica homognea, sino una mezcla organizada, coloidal, de numerosos compuestos qumicos, en su mayora orgnicos, pero algunos tambin inorgnicos, que se hallan disueltos y otros, en forma slida, y que en gran parte estn en transformacin continua dentro de la clula viviente. El contenido en agua del protoplasma activo es generalmente elevado (del 60 al 90 %); en las esporas y semillas en reposo es ms pequeo (del 5 al 15%). FUNCIN El protoplasma posee muchas funciones fisiolgicas, todas las clulas vivas muestran dichas propiedades y define la funcin de la clula en relacin a las capacidades del protoplasma. Todas las reacciones qumicas relacionadas con la nutricin llevada a cabo dentro de la clula se llaman metabolismo. SUSTANCIAS CONSTITUTIVAS FUNDAMENTALES La masa principal de la sustancia seca del protoplasma (40-50 %) corresponde a los prtidos. Esto explica que el protoplasma se coagule y endurezca por accin del calor (fijacin). Para purificar los prtidos se aprovecha su propiedad de precipitar con cido tricloractico y con otros agentes floculantes, sobre todo sales de metales pesados (por ejemplo, acetato de uranilo). Puede comprobarse la presencia de prtidos en la clula viva, por ejemplo, con el reactivo de Millon (coloracin roja). Pertenecen tambin a los prtidos en sentido amplio los ncleo proteidos combinaciones de protenas con cido desoxirribonucleico (ADN) y cido ribonucleico (ARN); estas combinaciones no se encuentran solamente en el ncleo: el ADN, aparte el ncleo celular, se observa tambin en los cloroplastos y en los mitocondrias; el ARN forma la masa principal de los nuclolos y de los ribosomas, cuyo nombre es un derivado del de dicha sustancia. Una segunda clase, tambin importante, de substancias que intervienen siempre en la constitucin del protoplasma, son los lipoides (2-3 de la materia seca; en los plastidios hasta el 50 %); muchas veces estn unidos dbilmente a los prtidos, formando lipoproteidos. A consecuencia de su estructura molecular polar, que les permite entrar en relacin con substancias tanto hidrfilas como hidrfobas, los lipoides desempean un papel muy importante en la constitucin del sistema de membranas internas y de los estratos que limitan el plasma, pues, forman pelculas monomoleculares o bimoleculares que contribuyen a limitar algunos lugares de reaccin (los compartimentos). El plasmatolema y el tonoplasto son especialmente ricos en lipoides, lo mismo que los cromatforos. Los hidratos de carbono (azcares y sus productos de polimerizacin; 15-20 % de la materia seca), juegan un papel importante como material de consumo en sus formas normales, de molcula pequea, y, como productos de reserva, en estado polimerizado. Las grasas (10-20 % de la materia seca) representan el sistema en que se almacena mayor proporcin de energa; por tal razn se acumulan como substancias de reserva. Especialmente racionales en distintos rganos perdurantes (por ejemplo, esporas y semillas).

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3) CLCULOS, DATOS Y RESULTADOS.

MUESTRA: Hoja de Elodea OBJETIVO: 40X AUMENTO: 400 PREPARACION: Fresco DISCUSION: Se observaron clulas en todo su esplendor, compactadas unas entre otras, alargadas, con pared celular definida, que delimitaba cada una, con presencia de cloroplastos (pigmentacin verde) dentro y alrededor de cada una de las clulas. Se observo en condiciones normales.

MUESTRA: Hoja de Elodea OBJETIVO: 40X AUMENTO: 400 PREPARACION: Solucin Salina al 15% DISCUSION: Se observaron clulas comprimidas, ms compactadas y pequeas siempre con presencia de cloroplastos (pigmentacin verde), se comprimieron en una gran cantidad. PRUEBA DE BIURET (PROTEINAS) POSITIVO: AZUL NEGATIVO: CUALQUIER OTRO COLOR. Clara de Huevo + Biuret Morado intenso (POSITIVO)

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PRUEBA DE SOLUBILIDAD: Con SUDAN III POLAR/APOLAR Polar Apolar Apolar Polar Apolar SUSTANCIA Agua (H2O) Alcohol (CH3CH2OH) Cloroformo ( CHCl3) Na2CO3 Carbonato de
Sodio

SOLUBLE

INSOLUBLE X

X X X X

HCl Acido Clorhdrico

PRUEBA DE BENEDICT: 3mL de solucin + 5gts de Benedict + Bao Mara Cambio de Color (Positivo) Sin cambio (Negativo)

Positivo

Negativo

Glucosa

Control

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ANALISIS SIMULTNEO DE VARIOS

PARAMETROS:

Urobilinogeno Glucosa C. Cetonicos Bilirrubina Protena Nitrito PH Sangre Densidad Leucocitos

normal Negativo Negativo Positivo Trazas Negativo 6 Negativo 1.025 Trazas

4) DISCUSIN DE RESULTADOS HOJA DE ELODEA. Al momento de observar la hoja de elodea en preparacin fresco, se observo en su medio natural, ya que es una planta acutica, de ah que se observaron las clulas en su mximo esplendor. Cosa contrario al observarla en la preparacin con solucin salina al 15%, Una solucin hipotnica tiene una concentracin de soluto menor que el citoplasma celular, por lo que la clula absorbe agua y se hincha, aumentando la presin de turgencia. Una solucin hipertnica tiene una concentracin de soluto mayor que el citoplasma celular, por lo que tiene un potencial hdrico menor que el del contenido celular. La clula pierde agua, la membrana se retrae separndose de la pared y la clula se vuelve flcida, se dice que la clula se ha plasmolizado . PRUEBA DE BIURET Al obtener el resultado de esta prueba nos dio un color uva intenso (morado), nos dio positivo ya que la clara de huevo es una fuente de protenas (albmina) nos hubiera quedado un color mas azul si hubiramos agregado mas protena. A ms concentracin, ms color.

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PRUEBA DE SOLUBILIDAD (GRASAS, CON SUDAN III) El alcohol y el Cloroformo fueron las nicas sustancias en las cuales hubo solubilidad ante el aceite vegetal, ya que son sustancias apolares, en las cuales si se pudo disolver las grasas, el agua y carbonato de sodio son sustancias polares y el aceite apolar y como sabemos que cargas iguales se repelan y cargas opuestas se atraen (Igual disuelve a igual). Por ello los resultados en unos fueron solubles y en otros insolubles. PRUEBA DE BENEDICT: La prueba dio positiva ya que la glucosa es un monosacridos, al igual que la fructosa y la sacarosa que dan positivo en la prueba de benedict, por lo cual al realizar esta prueba hubo un cambio de color en el tubo de ensayo de la glucosa dando como resultado una coloracin naranja como una naranja madura. ANLISIS SIMULTNEOS Hay parmetros establecidos para la lectura respectiva de cada uno de los exmenes, la orina examinada dentro de la prctica, fueron dentro del parmetro de normales, ya que no se sobrepaso ningn parmetro, en las que hubo variabilidad pudo afectar el tiempo de espera al momento de la lectura, o los diferentes colores de las casas que distribuyen las tiras para realizar el examen, de ah que hubo variabilidad en los resultados de algunos grupos. Mas es nuestros resultados no se sobrepaso de los rangos normales. 5) CONCLUSIONES 1. La hoja de elodea en preparacin en fresco, siempre se observaran sus clulas en todo su esplendor, ya que se puede concluir q esta en su estado o medio ambiente normal. 2. La hoja de elodea en preparacin con solucin salina siempre se comprimirn sus clulas debido a la solucin hipertnica, porque el protoplasma sale de la clula. 3. En las pruebas de solubilidad se puede concluir con el enunciado que igual disuelve a igual de ah las polaridades de las sustancias. 4. Al realizar una prueba de Biuret a mas concentracin de protenas, mas concentracin de color azul. 5. La fructuosa y la glucosa tienen que dar positivo en una prueba de benedict , ya que son azucares. 6. Los resultados de anlisis simultneos, pueden variar de una tira a otra, usando la misma orina, por la lectura, manejo de la misma, o los parmetros que usan las casas distribuidoras.

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6) CUESTIONARIO: Practica 4

1. Qu es la albmina? Es una protena que se encuentra en una gran proporcin en el plasma sanguneo, principal protena de la sangre, sintetizada en el hgado. 2. Qu pas cuando el agua, en que se mont el preparado, fue reemplazada por la Solucin salina? Se sali en protoplasma de la clula, y se comprimieron las clulas, por la solucin hipertnica. Suponiendo que las clulas no estuvieran muertas qu pasara si la solucin salina fuera remplazada por agua? Debera aumentar ya que el agua tiene una concentracin de soluto menor que el citoplasma celular, por lo que la clula absorbe agua y se hincha, aumentando la presin de turgencia la presin de turgencia. Practica 5 3. Puede Ud. Concluir que esta solucin funciona como una prueba para protenas? (PRUEBA DE BIURET) Si ya que detecta la presencia y as mismo el colar da una idea de la concentracin a analizar 4. Qu debe colocar en el tubo b? PRUEBA DE BENEDICT: En control que es esta ocasin se utilizo agua destilada 5. Qu observo? Para que sirve el control? Que el control sirvi como tubo comparativo, que se someti al mismo proceso y no tubo cambio de color, dndonos el patrn de lo que se considera como negativo en la prueba. 6. Cuntas pruebas diferentes contiene? Cules son? (anlisis de orina) Tiene 8. (Urobilinogeno, Glucosa, C. Cetonicos, Bilirrubina, Protena, Nitrito, PH, Sangre, Densidad y Leucocitos) 7. Investigue cundo o en qu casos varan los valores normales de la glucosa, Protenas, bilirrubinas y el pH de la orina. En el PH: Valores de pH mayores o iguales a 7 pueden indicar la presencia de bacterias que alcalinizan la orina. Valores menores de 5,5 pueden indicar acidosis en la sangre o enfermedad en los tbulos renales.

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GLUCOSA: La presencia de glucosa en la orina es un fuerte indicio de que los niveles sanguneos estn altos. Es muy comn que personas con diabetes mellitus presenten prdida de glucosa por la orina. Esto ocurre porque la cantidad de azcar en la sangre est tan alta que parte de sta acaba saliendo por la orina. Cuando los niveles de glucosa en la sangre estn arriba de 200 mg/dl, generalmente hay prdida en la orina. PROTEINAS: La presencia de protenas en la orina se llama proteinuria, y puede indicar enfermedad renal y debe ser siempre investigada. El examen de orina de 24h es normalmente hecho para cuantificar con exactitud la cantidad de protenas que se est perdiendo en la orina. BILIRRUBINAS: pueden indicar enfermedad eptica (hgado) o hemlisis (destruccin anormal de los hemates). La bilirrubina slo suele aparecer en la orina cuando sus niveles sanguneos sobrepasan 1,5 mg/dL.

6) REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS. Cooper y Hausman, 2005, "La Clula" (5 ed.), Editorial Marbn, Madrid Alberts y col., 2002, "Molecular Biology of the Cell" (4 ed.), Garland Publishing, New York. Alberts, B., et al. Molecular Biology of the Cell,5th ed., Garland Pub., 2007 Watson, J.D., et al. Molecular Biology of the Gene, 6th ed., Benjamin Cummings and Cold Spring HarborLaboratory Press, 2008. Strasinger, Susan K.; Di Lorenzo Schaub, Marjorie (2008). 5 (en Espaol).Anlisis de orina y de los lquidos corporales (5 edicin). Editorial panamericana. Salud y Sntomas; Anlisis de Orina; 2011 http://www.saludysintomas.com/2011/09/analisis-de-orina.html Consultado el 28 de Agosto del 2012.