RESULTADOS del experimento Rata Tiep Acumulacin de microtubulos en la taiep oligodetrocito La densidad de los microtubulos se incrementa en la taiep oligodentrocito

por ambos vivo e in vitro. Fig. 1 muestra una tpica taiep oligodentrocito cultivado por 5 das in vitro. Una anormal y progresiva acumulacin de microtubulos es observada en ambos cuerpos de la clula Algunos microtubulos estn estrechamente agrupados, con microtubulos paralelos separados por menos de 10 nm extendindose por distancias de 100 a 200 nm. Los microtubulos agrupados algunas veces estn desenredados por una corta distancia despus nuevamente se vuelven a agrupar. Los microtubulos continan acumulndose en clulas mutantes con tiempo de cultivacin. A los 5 das en cultivo, los microtubulos ocupan 10.5 1.2% del total del citoplasma en el proceso de la taiep, comparado solo con 4.4 08% del citoplasma total de la de tipo salvaje. Por 21 das in vitro, los microtubulos ocupan 22.9 1.1% del volumen total del citoplasma en el proceso de la taiep, comparado con 10.5 1.4 % en la de tipo salvaje.

Distribucin restringida de RNA grnulos en la taiep oligodentrocito Para estudiar el trfico de RNA en la taiep oligodentrocito, RNA contiene A2RE transporta seal de MBP mRNA se marc con alexafluor 543 UTP y microinyecciones en las clulas cultivadas por 5 das in vitro. FICT-conjugado dextran (10kDa) se coinyecto como marcador de volumen citoplasmico. Inyectadas clulas que fueron encubadas por 20 minutos para permitir el transporte, y la visualizacin utilizando el lser de doble canal de microscopia con enfocal de barrido. En ambas, taiep y tipo salvaje oligodentrocitos el RNA marcado se ensambla en grnulos discretos, que puede ser resuelta en el proceso de clula. Como se muestra en la figura 2a, en la de tipo salvaje oligodentrocito, los grnulos de RNA estn distribuidos a lo largo del citoplasma incluyendo procesos distales y mielina compartida. En contraste, en la taiep oligodentrocito los grnulos de RNA la mayora estn restringidos por el pericarion y prximos procesos.

Anlisis cuantitativos revelaron una significante disminucin en el nmero de grnulos de RNA en la taiep proceso distal comparado con la de tipo salvaje. Tras el anlisis, el proceso que emana directamente del oligodentrocito cuerpo de la clula est definido como primaria (1), proceso de derivacin del proceso primario est definido como segundo (2), proceso de derivacin del segundo proceso est definido como terciario (3), y el proceso de derivacin del tercero est definido como cuaternario (4). La densidad de grnulos en la taiep proceso 1 es 8.1 0.3 per 1 m del proceso (84.7% del control del nivel), 5.2 0.4 el proceso 2867.5% del control), 2.25 0.3 en el proceso 3 (39.1% del control), y 0.45 0.1 en proceso 4 (14.5% del control del nivel). Sin el tiempo en cultivo la densidad del microtubulo en el proceso de la taiep aumentado, mientras que el grado de transporte de RNA disminuyo. Por 9 das en cultivo, la densidad de los grnulos en el 3 proceso de la taiep FIG3. RNA la dinmica de grnulos en el tipo primitivo y oligodendrocitos taiep. El movimiento de RNA in los oligodendricitos estn analizados utilizando un lapso de tiempo de microscopia confocal. El panel muestra 10 tiempos de tramas sobre un perodo de 36 s para un tipo primitivo y un proceso taiep