INCLNILRA ACROINDUSTRIAL DOCLNTL OCASIONAL GUA DE LABORATORIO PROGRAMA INGENIERIA AGROINDUSTRIAL EXTRACCION DE PRINCIPIOS ACTIVOS GUA DE APRENDIZAJE FACULTAD DE CIENCIAS AGROPECUARIAS Y RECURSOS NATURALES PROGRAMA DE INGENIERIA AGROINDUSTRIAL PROCESOS AGRICOLAS NO ALIMENTARIOS BIOTECNOLOGIA PRACTICA DE LABORATORIO: EXTRACCION DE PRINCIPIOS ACTIVOS Objetivo: Aplicar los conocimientos de osmosis para la extraccin de principios activos a partir de plantas medicinales. RESULTADOS DE APRENDIZAJE Fortalecer los conocimientos prcticos de los fenmenos que se llevan a cabo durante los procesos de extraccin. Analizar los resultados obtenidos en la prctica de laboratorio. Evaluar el potencial de las materias primas de origen medicinal para la obtencin de nuevos productos. 1. INTRODUCCIN Y MARCO TEORICO Los aceites esenciales y esencias se encuentran en el interior de las clulas vegetales Se pueden encontrar localizados en diferentes partes de la planta, por ejemplo:en las hojas (albahaca, menta, romero, etc.), en las races (valeriana, clamo, etc.), en la corteza (canela, sndalo, etc.), en las flores (jazmn, rosa, etc.), en la cscara del fruto (limn, mandarina, naranja, etc.), en los frutos (ans, cardamomo, hinojo, etc.), generalmente se encuentran en clulas epidermicas, la volatilidad y capacidad excretora de estos componentes en las plantas no solo actan como medio para su propia reproduccin, tambin sirven como mecanismo de defensa ante predadores (Romero Mrquez, 2004), dentro de los mtodos de extraccin esto es importante a tener en cuenta, la maceracin sirve para romper las pareces celulares y se recomienda cuando el disolvente elegido es muy voltil, la maceracin es favorecida con la agitacin y aumentos leves de temperatura (Garcia Bermejo, Colom Valiente, & Jaramillo Sanchez, 2003). Para aprovechar las sustancias activas de una planta, se recurre frecuentemente a los extractos. El proceso de extraccin consiste en incorporar las sustancias activas de una planta a un solvente, que generalmente suele ser agua o alcohol; se puede realizar en fro o en caliente, y el producto resultante puede ser una solucin concentrada o espesa en funcin de la sustancia de origen, o espesarse por propio inters en base a la aplicacin que se le vaya a dar. Los procesos de extraccin ms simples empleados se dividen de acuerdo al disolvente utilizado en: Extraccin con agua: infusin, destilacin por arrastre con vapor de agua y decoccin. Extraccin con solventes orgnicos: maceracin, lixiviacin o percolacin, extraccin Soxhlet, digestin y por fluido supercrtico. La seleccin de uno de ellos y del disolvente depende de parmetros tcnicos y econmicos: Para la eleccin del disolvente se debe tener en cuenta su selectividad, estabilidad, inercia qumica temperatura de ebullicin no demasiado elevada para permitir su eliminacin total, no demasiado IROCRAMA DL INCLNILRIA ACROINDUSTRIAL MARIA CRISTINA OSIINA INCLNILRA ACROINDUSTRIAL DOCLNTL OCASIONAL GUA DE LABORATORIO PROGRAMA INGENIERIA AGROINDUSTRIAL EXTRACCION DE PRINCIPIOS ACTIVOS baja para evitar las prdidas; seguridad de manipulacin (si es posible no txico ni inflamable). Los disolventes ms utilizados son los hidrocarburos alifticos: ter de petrleo, hexano, y tambin propano o butano lquido (a presin). Aunque el benceno es un buen disolvente, su toxicidad limita cada vez ms su utilizacin. Igualmente, se ha recurrido a disolventes halogenados y al etanol. Tambin se utilizan otros solventes como soluciones cidas o alcalinas para la extraccin selectiva de algunos compuestos, sin embargo se debe tener precaucin con el pH de las mezclas para prevenir hidrlisis o reordenamiento de compuestos sensibles. METODOS DE EXTRACCINSIMPLE: Maceracin: Es una extraccin que se realiza a temperatura ambiente. Consiste en remojar el material vegetal, debidamente fragmentado en un solvente (agua o etanol, se prefiere el etanol puesto que a largos tiempos de extraccin el agua puede propiciar la fermentacin o la formacin de mohos) hasta que ste penetre y disuelva las porciones solubles. Se puede utilizar cualquier recipiente con tapa que no sea atacado con el disolvente; en ste se colocan el material vegetal con el disolvente y tapado se deja en reposo por un perodo de 2 a 14 das con agitacin espordica. Luego se filtra el lquido, se exprime el residuo, se recupera el solvente en un evaporador rotatorio y se obtiene el extracto. Extraccin Soxhlet: Mtodo en caliente, que se desarrolla empleando solventes con puntos de ebullicin bajo, para evitar la degradacin de la muestra. Conveniente para obtener los extractos crudos de las plantas. Infusin y Decoccin: Tanto la infusin como la decoccin son procesos simples de extraccin con agua, en el primer caso se agrega agua caliente o fra al material molido y luego se filtra; en el segundoel material se hierve por espacio de 15 minutos con el agua. Percolacin: Tambin conocido como lixiviacin, es uno de los procesos ms difundidos pues se puede realizar con disolventes orgnicos en fro para preservar los compuestos termolbiles que pudiera contener el material. Consiste en colocar el material fragmentado en un embudo o recipiente cnico, y hacer pasar un disolvente adecuado a travs del mismo. No es apropiado para resinas o materiales que se hinchen dado que el disolvente no percolar. Se requiere agregar solvente constantemente. Destilacin por Arrastre de Vapor: La destilacin por arrastre con vapor es una tcnica usada para separar sustancias orgnicas insolubles en agua y ligeramente voltiles, de otras no voltiles que se encuentran en la mezcla, como resinas o sales inorgnicas. Cuando se tienen mezclas de lquidos que no son miscibles entre s, se tiene un tipo de destilacin que sigue la ley de Dalton sobre las presiones parciales. Como resultado de este comportamiento, y cuandouno de los componentes es agua, al trabajar a presin atmosfrica, se puede separar un componente de mayor punto de ebullicin que el del agua a una temperatura menor a su punto de ebullicin. Debido a lo anterior, con esta tcnica se pueden separar sustancias inmiscibles en agua y que se descomponen a su temperatura de ebullicin o cerca de ella, por lo que se emplea con frecuencia para separar aceites esenciales naturales que se encuentran en hojas, cscaras o semillas de algunas plantas (t limn. menta, canela, cscaras de naranja o limn, ans, pimienta, etc,), estos aceites esenciales tambin pueden aislarse de sus fuentes naturales por medio de la extraccin con disolventes orgnicos, la pureza y rendimiento del aceite esencial depender de la tcnica que se utilice para el aislamiento. IROCRAMA DL INCLNILRIA ACROINDUSTRIAL MARIA CRISTINA OSIINA INCLNILRA ACROINDUSTRIAL DOCLNTL OCASIONAL GUA DE LABORATORIO PROGRAMA INGENIERIA AGROINDUSTRIAL EXTRACCION DE PRINCIPIOS ACTIVOS Destilacin por arrastre con vapor. (Equipo para dos alumnos) MaLraz Lrlenmeyer de 12S ml 2 lrasco de vldrlo "vlal" 1 MaLraz Lrlenmeyer de 2S0 ml 2 LspaLula 1 8efrlgeranLe (agua) c/mangueras 1 Lmbudo de separacln de 2S0 ml con Lapn 1 Lqulpo de desLllacln de arrasLre de vapor 1 Anlllo de hlerro 1 ColecLor 1 Mechero con manguera 1 Lmbudo de vldrlo 1 1ela de alambre con asbesLo 1 robeLa de 2S ml 1 lnza de Lres dedos con nuez 4 vaso de preclplLados de 2S0 ml 1 8eclplenLe de pelLre 1 1ubo capllar 1 - Coloque aproximadamente 150 ml de agua destilada en el matraz No. 1 (generador de vapor) y agregue cuerpos porosos. - En el matraz No. 2 coloque la muestra. cortada en trozos pequeos hasta donde dice 200 ml. Son aproximadamente 40 g. (Al tapar este matraz, cuide que la conexin de vidrio no se obstruya con los la muestra; pues de ser as no habr paso de la corriente de vapor.). - Con el mechero, caliente hasta ebullicin el matraz No. 1 a fin de generar el vapor que pasar al matraz No. 2, extrayndose de esta manera el aceite esencial de la muestra, que inmediatamente es arrastrado por el vapor de agua en un proceso de codestilacin. - Suspenda el calentamiento cuando el volumen del destilado sea de 100 ml aproximadamente. - De este destilado extraiga totalmente el aceite esencial, colocando en el embudo de separacin cantidades adecuadas del destilado y de acetato de etilo. Las fases acuosas se desechan y los extractos orgnicos se colectan en un matraz Erlenmeyer de 50 ml, agregue entonces la cantidad necesaria de sulfato de sodio anhidro para eliminar el agua remanente. Filtre o decante el extracto seco y colquelo en un vial. IROCRAMA DL INCLNILRIA ACROINDUSTRIAL MARIA CRISTINA OSIINA INCLNILRA ACROINDUSTRIAL DOCLNTL OCASIONAL GUA DE LABORATORIO PROGRAMA INGENIERIA AGROINDUSTRIAL EXTRACCION DE PRINCIPIOS ACTIVOS 3. PLANTEAMIENTO DE LAS ACTIVIDADES Y ESTRATEGIAS DE APRENDIZAJE Metodologa y actividades a desarrollar 1. Previa seleccin de las plantas medicinales dentro del vademcum aprobado bajo normatividad vigente. 2. Previa esterilizacin de los envases (deben ser de vidrio y color ambar). 3. Calculo de solucin disolvente para la extraccin por alcoholatura. 4. Pesado de planta + agua + alcohol (el tipo de alcohol a trabajar depende de la utilizacin del principio activo, tpico o via oral. 5. Macerar la cantidad de planta segn los clculos realizados. 6. Realizar la mezcla (oh, H2O, planta) 7. Envasado (Envase color ambar) 8. Almacenamiento sin presencia de luz. 9. Extraccion por infusin 10. Calculo de la formula. 11. Pesado 12. Mezclado 13. Adicion de conservantes. (propil englycol) 14. Envasado 15. Almacenado 4. CRITERIOS DE EVALUACIN CUALITATIVA: Capacidad de anlisis de resultados. Trabajo en equipo Responsabilidad en el manejo de reactivos y manejo de equipos de laboratorio Calidad en el informe de laboratorio CALCULO DE DATOS EXTRACCION POR ALCOHOLATURA V1 x ( )1 =V2 x (2) ENSAYO 1 MATERIALES CANTIDAD EN gr o mL OH H2O PLANTA: PRINCIPIO ACTIVO: IROCRAMA DL INCLNILRIA ACROINDUSTRIAL MARIA CRISTINA OSIINA INCLNILRA ACROINDUSTRIAL DOCLNTL OCASIONAL GUA DE LABORATORIO PROGRAMA INGENIERIA AGROINDUSTRIAL EXTRACCION DE PRINCIPIOS ACTIVOS CALCULO DE DATOS EXTRACCION POR INFUSION PRODUCTO: USO: ENSAYO 2 MATERIALES CANTIDAD EN gr o mL OH H2O PLANTA: PRINCIPIO ACTIVO: PRODUCTO: USO: ENSAYO 3 MATERIALES CANTIDAD EN gr o mL OH H2O PLANTA: PRINCIPIO ACTIVO: PRODUCTO: USO: ENSAYO 1 MATERIALES CANTIDAD EN gr o mL PROPIL ENGLYCOL H2O PLANTA: PRINCIPIO ACTIVO: PRODUCTO: USO: ENSAYO 2 MATERIALES CANTIDAD EN gr o mL PROPIL ENGLYCOL H2O PLANTA: PRINCIPIO ACTIVO: PRODUCTO: USO: IROCRAMA DL INCLNILRIA ACROINDUSTRIAL MARIA CRISTINA OSIINA INCLNILRA ACROINDUSTRIAL DOCLNTL OCASIONAL GUA DE LABORATORIO PROGRAMA INGENIERIA AGROINDUSTRIAL EXTRACCION DE PRINCIPIOS ACTIVOS EXTRACCION POR DISOLVENTE ACEITE MINERAL ENSAYO 3 MATERIALES CANTIDAD EN gr o mL PROPIL ENGLYCOL H2O PLANTA: PRINCIPIO ACTIVO: PRODUCTO: USO: ENSAYO 1 MATERIALES CANTIDAD EN gr o mL PROPIL ENGLYCOL ACEITE MINERAL PLANTA: PRINCIPIO ACTIVO: PRODUCTO: USO: ENSAYO 2 MATERIALES CANTIDAD EN gr o mL PROPIL ENGLYCOL ACEITE MINERAL PLANTA: PRINCIPIO ACTIVO: PRODUCTO: USO: ENSAYO 3 MATERIALES CANTIDAD EN gr o mL PROPILENGLYCOL ACEITE MINERAL PLANTA: PRINCIPIO ACTIVO: PRODUCTO: USO: IROCRAMA DL INCLNILRIA ACROINDUSTRIAL MARIA CRISTINA OSIINA INCLNILRA ACROINDUSTRIAL DOCLNTL OCASIONAL GUA DE LABORATORIO PROGRAMA INGENIERIA AGROINDUSTRIAL EXTRACCION DE PRINCIPIOS ACTIVOS PROCESO DE ELABORACION DE GEL REPELENTE PARA INSECTOS INGREDIENTES CANTIDAD Agua 500ml Principio activo 10gr Carbopol 5gr Propil Englycol 5gr Mentol 5gr Metil parabeno 0,5 gr Propil parabeno 0.02 gr Trietanolamina 4 a 6 gotas Tecnologa de fabricacin de gel: 1. Adicionar al Agua el carbopol. 2. Mezclar y agitar bien hasta total dilucin de los grumos. 3. Adicionar el propil parabeno y agitar continuamente. 4. Adicionar el colorante. 5. Mezclar el Mentol a parte agitando continuamente con el principio activo. 6. Adicionar el Metilparabeno. 7. Adicionar las gotas de T.E.A. (Tri Etanol Amina). 8. Envasar. 9. Rotular. 5. MEDIOS Y RECURSOS DIDCTICOS Video bean, computador, gua de laboratorio, documentacin bibliogrfica. 6. BIBLIOGRAFA Y CIBERGRAFA Vademecum plantas medicinales aprobadas en Colombia, convenio Ministerio de Salud universidad Nacional de Colombia INVIMA. Garcia Bermejo, M. J., Colom Valiente, M. F., & Jaramillo Sanchez, J. A. (2003). IROCRAMA DL INCLNILRIA ACROINDUSTRIAL MARIA CRISTINA OSIINA INCLNILRA ACROINDUSTRIAL DOCLNTL OCASIONAL GUA DE LABORATORIO PROGRAMA INGENIERIA AGROINDUSTRIAL EXTRACCION DE PRINCIPIOS ACTIVOS Manual Del Auxiliar de Laboratorio. (MAD-Eduforma, Ed.) Romero Mrquez, M. D. (2004). Plantas Aromticas. Editorial Kier. Elaborado Por: Sandra Yaneth Delgado Solano, Maria Cristina Ospina Ladino, Javier Alexander Jimnez Forero. Fecha: 04/10/2013