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Quim. Nova, Vol. 27, No.

4, 655-660, 2004 PRODUTOS NATURAIS COMO CANDIDATOS A FRMACOS TEIS NO TRATAMENTO DO MAL DE ALZHEIMER Cludio Viegas Junior, Vanderlan da Silva Bolzani e Maysa Furlan Instituto de Qumica, Universidade Estadual Paulista Jlio de Mesquita Filho, CP 355, 14801-970 Araraquara - SP Carlos Alberto Manssour Fraga* e Eliezer J. Barreiro Faculdade de Farmcia, Universidade Federal do Rio de Janeiro, CP 68006, 21941-590 Rio de Janeiro - RJ Recebido em 28/7/03; aceito em 20/10/03; publicado na web em 27/05/04

NATURAL PRODUCTS AS CANDIDATES FOR USEFUL DRUGS IN THE TREATMENT OF ALZHEIMERS DISEASE. Alzheimers disease (AD) is a progressive neurodegenerative pathology with severe economic and social impact. There is currently no cure, although cholinesterase inhibitors provide effective temporary relief of symptoms in some patients. Nowadays drug research and development are based on the cholinergic hypothesis that supports the cognition improvement by regulation of the synthesis and release of acetylcholine in the brain. There are only four commercial medicines approved for treatment of AD and natural products have played an important role in the research for new acetylcholinesterase inhibitors. Keywords: Alzheimers disease; acetylcholinesterase; natural products.

INTRODUO A doena de Alzheimer: impacto social e fisiopatologia da doena A doena de Alzheimer (DA) uma desordem neurodegenerativa, de grande impacto scio-econmico, responsvel por ca. 50-60% do nmero total de casos de demncia dentre pessoas acima dos 65 anos1. Esta patologia afeta cerca de 1,5% da populao em idade entre 6569 anos, 21% entre 85-86 e 39% acima dos 90 anos, acometendo aproximadamente 15 milhes de pessoas em todo o mundo. Nos Estados Unidos, considerada um dos principais problemas de sade devido ao enorme impacto causado ao indivduo, famlias, sistema de sade e sociedade como um todo, uma vez que metade dos pacientes so internados em instituies de sade. O restante recebe tratamento em casa, envolvendo em seu cuidado, familiares, parentes e amigos. Invariavelmente, o acompanhamento do paciente traz um enorme stress emocional, psicolgico e financeiro s famlias, uma vez que o tratamento caro e o paciente perde gradualmente suas funes motoras e de aprendizado, passando a no reconhecer os familiares mais prximos2. Cientistas estimam que cerca de 4 milhes de pessoas possuem esta doena e que sua incidncia duplica a cada 5 anos, aps os 65 anos de idade2. Alm disso, 4 milhes de americanos possuem 85 anos ou mais e, no pas mais industrializado do mundo, este grupo etrio um dos segmentos da populao que mais cresce, devendo atingir pelo menos 19 milhes de indivduos no ano de 2050, dos quais metade poder desenvolver alguma forma de DA2. Um estudo recente estima que o custo anual do tratamento de um paciente com DA leve de U$ 18.408,00, U$ 30.096,00 para DA moderada e U$ 36.132,00 para um paciente com DA severa2. O processo degenerativo progressivo das funes psicomotoras e cognitivas, descrito inicialmente pelo patologista alemo Alois Alzheimer em 1907, dura cerca de 8,5-10 anos, desde o aparecimento dos primeiros sintomas clnicos at a morte. As regies cerebrais

associadas s funes mentais superiores, particularmente o crtex frontal e o hipocampo, so aquelas mais comprometidas pelas alteraes bioqumicas decorrentes de DA1,3,4. Dentre as causas mais evidentes da gnese da doena esto a ocorrncia de deposio extracelular de peptdeo -amilide (derivado do precursor amilide de protena APP) em plaquetas senis e a formao errtica de neurofibrilas intracelulares (contendo uma forma anormal, fosforilada, de uma protena associada a microtbulos - TAU)1,4. Todo este processo resulta em perda da funo neuronal e dano sinptico, com subseqente comprometimento da memria, da coordenao motora e do raciocnio, alm de perda da capacidade cognitiva e demncia. Em nvel celular, a DA est associada reduo das taxas de acetilcolina (ACh) no processo sinptico, diminuindo a neurotransmisso colinrgica cortical, alm de outros neurotransmissores como noradrenalina, dopamina, serotonina, glutamato e substncia P em menor extenso5,6. Estudos mais recentes demonstraram ocorrncia de reduo do nmero de receptores nicotnicos e muscarnicos (M 2) de ACh, muitos dos quais localizados nas terminaes colinrgicas pr-sinpticas, havendo preservao dos receptores muscarnicos (M1 e M2) ps-sinpticos1,2. Biossntese, hidrlise e funo da acetilcolinesterase A acetilcolina biossintetizada a partir da acetil-coenzima A (acetil-CoA) e colina por ao da enzima colina-acetiltransferase (Esquema 1)7 .

Esquema 1. Reao de biossntese de acetilcolina (ACh)

*e-mail: cmfraga@pharma.ufrj.br, URL: http://www.farmacia.ufrj.br/lassbio

Este neurotransmissor encontrado no crebro e nas junes neuromusculares, compondo parte do sistema nervoso parassimptico.

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Seus efeitos incluem a contrao dos msculos lisos, dilatao dos vasos sanguneos e regulao da taxa de batimentos cardacos; no crebro est envolvido nas sinapses associadas ao controle motor, memria e cognio7. Sua atividade e permanncia na fenda sinptica so reguladas por hidrlise catalisada pela acetilcolinesterase (AChE), que regenera a colina, seu precursor. O stio ativo da AChE composto por uma trade cataltica composta por resduos de aminocidos serina (Ser200), histidina (His-440) e glutamato (Glu-327) (Figura 1). O mecanismo de hidrlise de AChE envolve o ataque nucleoflico da serina ao carbono carbonlico da ACh, gerando um intermedirio tetradrico estabilizado por ligaes de hidrognio, o qual produz colina livre e serina acetilada. Ao final, a hidrlise do grupo acetila da serina pela gua recupera o stio cataltico da enzima8 .

Alternativamente, dados farmacolgicos em modelos animais demonstraram que o bloqueio dos auto-receptores M2 ps-sinpticos (Figura 2) acarreta o aumento dos nveis de ACh, e a conseqente melhora do dficit cognitivo. Entretanto, a despeito de um grande nmero de antagonistas M2 terem sido relatados, poucos mostraram seletividade frente a outros subtipos de receptores muscarnicos12.

Figura 2. Viso esquemtica da hiptese colinrgica e localizao dos receptores muscarnicos. Adaptada da Ref. 12

Figura 1. Viso do stio ativo da AChE e dos resduos de aminocidos que constituem a trade cataltica

Terapia Colinomimtica da doena de Alzheimer O fundamento da hiptese colinrgica est relacionado capacidade de frmacos potencializadores da funo colinrgica central induzirem melhora do perfil cognitivo e, tambm, de alguns efeitos comportamentais oriundos pela doena. Vrias alternativas teraputicas foram avaliadas no intuito de corrigir o dficit colinrgico em portadores de DA. Algumas estratgias inicialmente empregadas envolveram a utilizao ou substituio de precursores de ACh, e.g. colina ou lecitina, as quais entretanto no se mostraram eficientes no incremento da atividade colinrgica central1. Outros estudos investigaram o uso de inibidores de acetilcolinesterase (AChE) que reduzam a hidrlise de AChE aumentando, conseqentemente, seu tempo de vida-mdia, e.g. fisostigmina. Recentemente, tm sido exploradas abordagens teraputicas envolvendo agonistas especficos de receptores muscarnicos (M1) e nicotnicos ou antagonistas muscarnicos M21,4. Os avanos obtidos na compreenso da evoluo e das razes moleculares da gnese de DA tm demonstrado que o uso de inibidores de AChE deve ser a forma mais eficiente de controle da evoluo da doena1,5,6,10,11. Outra abordagem teraputica para DA o desenvolvimento de agonistas diretos de receptores muscarnicos ps-sinpticos M1 (Figura 2). A estimulao destes receptores demonstrou efeitos de aumento da cognio em animais. Entretanto, apesar dos esforos no desenvolvimento de ligantes agonistas de receptores M1, muitos dos compostos testados mostraram baixa seletividade, alm de vrios efeitos colaterais devidos ativao de iso-receptores muscarnicos M3 nos intestinos, bexiga e pulmo (Figura 2). Agonistas de receptores M1 no-seletivos podem, tambm, interagir com receptores M4 e M5 no SNC, com conseqncias ainda desconhecidas12 (Figura 2).

A observao inicial de que os antagonistas muscarnicos tipo escopolamina produziam dficits na memria de curta durao levou proposta de que o dficit colinrgico na DA era predominantemente de natureza muscarnica. Entretanto, este ponto de vista foi alterado por uma srie de evidncias, incluindo estudos autoradiogrficos e histoqumicos de autpsia de tecido cerebral, alm de estudos em imagens cerebrais em pacientes, que demonstraram a perda especfica de receptores nicotnicos em maior extenso que de muscarnicos na DA 10,13,14. Atualmente, existem muitas evidncias indicando que substncias moduladoras de receptores nicotnicos afetam o aprendizado e a memria. A nicotina e outros agonistas nicotnicos podem melhorar as funes cognitiva e psicomotora, enquanto que antagonistas nicotnicos causam deficincia na cognio. Alm disso, a incidncia da DA em fumantes menor que em no-fumantes, o que pode se relacionar ao aumento dos nveis de expresso dos receptores nicotnicos da ACh (nAChRs) observados no crebro de fumantes. Assim sendo, moduladores nicotnicos podem apresentar efeitos agudos e crnicos na funo cognitiva, dentre os quais pode-se incluir a neuroproteo13. Os receptores nicotnicos neuronais (nAChR) so expressos sob vrios subtipos nos mamferos, sendo que os subtipos 42 e 7 so os mais proeminentes e esto presentes em regies ps-, pr-, peri e extrasinpticas. Os nAChR 7 exercem funes pouco diferenciadas daquelas dos subtipos 42, com maior permeabilidade para ons Ca++, dessensibilizao muito mais rpida e diferente perfil farmacolgico, o qual inclui ativao por colina (Ch) e bloqueio pela -bungarotoxina (uma toxina de cobra)14. Devido a sua sensibilidade Ch, os receptores nicotnicos 7 podem ser quimicamente excitados mesmo aps o agonista natural, i.e. ACh, ter sido hidrolisado pela AChE. Alm disso, devido a sua alta permeabilidade a ons Ca++, a ativao dos receptores 7 pode produzir respostas metabotrpicas nas clulas excitadas, incluindo a liberao de transmissores controlada por Ca++ e estimulao da transcripo gentica e biossntese protica10,13,14. Modernamente, h duas estratgias principais sendo aplicadas para equilibrar o dficit colinrgico em portadores de DA: inibio da degradao da ACh e administrao de agonistas de receptores nicotnicos10,13,14 (Figura 3). Os frmacos inibidores de acetilcolinesterase vm sendo, atualmente, a alternativa teraputica mais comu-

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mente empregada por apresentarem melhores resultados no controle da doena10 sem, entretanto, serem capazes de impedir sua progresso em nenhum de seus nveis13,14. Vrios agonistas de receptores nicotnicos encontram-se em fase de ensaios pr-clnicos e clnicos, embora j se saiba que seja relativamente difcil seu ajuste de dosagem; em nveis elevados, podem causar dessensibilizao de nAChR em maior extenso que o aumento de sua ativao. Outros desafios, ainda insolveis at o presente momento, consistem no transporte do frmaco at o receptor nicotnico-alvo no crebro e o incremento da seletividade pelo subtipo de receptor especfico13. Os ltimos avanos realizados no estudo dos receptores nicotnicos permitiram a melhor caracterizao de alguns aspectos relacionados sua fisiologia, bioqumica e expresso gnica, bem como sua efetiva participao nos eventos relacionados DA. Adicionalmente, estes estudos com nAChR permitiram caracterizar uma nova estratgia possvel para o tratamento de DA, atravs de sua modulao alostrica10,13,14. Moduladores alostricos so substncias que interagem com o receptor atravs de stios de ligao distintos daqueles utilizados pela ACh e pelos agonistas e antagonistas nicotnicos14. Como DA est associada com a reduo da neurotransmisso nicotnica, os moduladores alostricos so potencializadores da atividade da ACh sobre os canais inicos dos receptores nicotnicos. Estas propriedades deram origem a uma nova classe de ligantes de nAChR, os ligantes potencializadores alostricos (APL)10,14.

Figura 3. Resumo do processo e das formas de interveno desde a liberao at a degradao da ACh. Adaptada da Ref. 10

Frmacos comerciais para o tratamento da DA A tacrina (THA, Cognex, 1) foi o primeiro frmaco sinttico aprovado pelo FDA (Food and Drug Administration) nos Estados Unidos para uso teraputico, demonstrando efeito moderado, mas significativo no alvio dos sintomas de DA de intensidade, mdia e leve. Entretanto, sua aplicao tem sido limitada devido aos srios efeitos colaterais, como a hepatotoxicidade, que tm forado os pacientes a descontinuarem o tratamento5. Alm da tacrina, atualmente outros trs frmacos esto sendo comercializados nos EUA e Europa: donepezil (2, Aricept), rivastigmina (3, Exelon) e, por ltimo, a galantamina (4, Reminyl). Dentre estes, as substncias 1, 2 e 4 so inibidores reversveis da AChE, sendo que a galantamina (4) um produto natural, recentemente aprovado pelo FDA, que est servindo de prottipo para desenvolvimento de novos frmacos anticolinestersicos3,5. Busca por novos candidatos de origem natural para o tratamento da DA A diversidade estrutural dos IAChEs conhecidos e a possibilidade de se explorar modos de ao distintos tm estimulado o estudo

fitoqumico de vrias espcies vegetais e de microorganismos, que possam fornecer novos modelos de substncias anticolinestersicas. Neste sentido, vrias exemplares da biodiversidade tm sido estudados em decorrncia de sua utilizao popular ou de dados etno-botnicos. Um dos exemplos mais difundidos como fitomedicamentos so os extratos de Ginkgo. A Ginkgo biloba (Ginkgoaceae) uma rvore fssil utilizada h sculos na medicina tradicional chinesa para melhoria do estado de alerta. Hoje em dia, a ginkco , talvez, o extrato vegetal mais difundido especificamente para aumento da funo cognitiva, sendo seu uso prevalente especialmente na Europa onde, recentemente, o German Bundesgesundheit Association aprovou sua utilizao para tratamento de demncia15. A maioria das evidncias sugere que a capacidade de aumento da funo cognitiva est associada ao uso de um extrato padronizado, o EGb 761. A medida dos efeitos cognitivos vem sendo realizada em testes de ateno, aprendizado, memria de tempo-curto e tempo de reao e escolha, mas os resultados no so reprodutivos interpopulaes. Alm disso, muitos estudos esto publicados em peridicos de circulao restrita, o que dificulta o acesso s informaes; na maior parte dos casos, os experimentos in vivo, tanto em animais como em humanos, restringem-se a pequeno nmero de indivduos, o que compromete uma avaliao conclusiva e abrangente dos resultados15. Alguns estudos utilizando pacientes tratados com o extrato padronizado de Ginkgo biloba e com placebo revelaram que os efeitos foram comparveis aos obtidos com o donepezil (2), que atualmente um dos frmacos de escolha para o tratamento da DA15. Aparentemente, muitos dos efeitos protetores do SNC associados ao uso crnico de extratos de Ginkgo esto relacionados presena de constituintes terpnicos e flavonides com propriedades antioxidantes e antiinflamatrias. Estas substncias podem atuar de diferentes formas, contribuindo para a integridade do tecido neuronal: a) inibindo a atividade das enzimas superxido-dismutase e monoamina-oxidase, que contribuem para a gerao de radicais livres no crebro e no corpo; b) seqestrando radicais livres que poderiam causar dano aos neurnios e, conseqentemente, retardar as mudanas associadas idade no crebro e c) reduzindo a liberao de cido araquidnico, um co-produto txico do metabolismo lipdico, que aparece no crebro logo aps o episdio isqumico15. A necessidade de tornar mais objetivas e menos dispendiosas as pesquisas por constituintes qumicos de plantas, animais e microorganismos levou ao desenvolvimento de numerosas tcnicas de ensaios qumicos e bioqumicos para monitoramento e seleo de extratos, fraes de extratos e substncias puras bio/farmacologicamente teis. Quanto busca de inibidores de AChE, dois testes bioautogrficos em cromatografia em camada delgada foram recentemente desenvolvidos16. Marston e colaboradores17 utilizaram um corante azico para identificar a atividade da AChE sobre o acetato de 1-naftila; no outro caso, Rhee et al.18 preconizaram a utilizao de 5,5-ditiobis-(cido 2-nitrobenzico) (reagente de Ellmann) para a visualizao da atividade enzimtica. Aparentemente, o nico inconveniente da utilizao do reagente de Ellmann o limite de deteco visual pois, em ambos os casos, formam-se halos de inibio brancos sobre placa corada de azul (teste de Marston et al.17) e amarelo (teste de Rhee et al.)16. Um estudo recente com plantas brasileiras19 utilizou o ensaio bioautogrfico de Rhee et al. e o ensaio de Ellmann em microplaca18,20, para identificar extratos que poderiam conter substncias inibidoras da AChE. Foram estudados 58 extratos de 30 espcies de diversos gneros vegetais, dos quais os autores consideraram os resultados de inibio maior ou igual a 50% como critrio de seleo para o fracionamento qumico. A partir do trabalho de triagem, Paullinia cupana (guaran), Amburana cearensis (cumaru) e Lippia

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sidoides foram as espcies que demonstraram os melhores resultados, inibindo de 65-100% da atividade enzimtica, em ambos os bioensaios. No caso do guaran, foi evidenciado um efeito positivo de incremento de memria aps a administrao aguda e crnica; o fracionamento bio-guiado dos extratos de A. cearensis e L. sidoides levou ao isolamento de 12 cumarinas at o momento19, demonstrando a utilidade e praticidade deste tipo de ensaio para a bioprospeco de novos frmacos anticolinestersicos. A galantamina (4) um alcalide isolado de vrias espcies vegetais da famlia Amaryllidaceae e mostrou-se um inibidor da AChE de ao longa, seletivo, reversvel e competitivo, cujos efeitos teraputicos permanecem mesmo aps o trmino do tratamento9. O excelente perfil teraputico de 4, que caracterizou um grande avano no planejamento de frmacos para o tratamento de DA, decorrente de seu mecanismo de ao duplo, como inibidor da AChE e como APL nos receptores nicotnicos cerebrais10,11. A galantamina (4) atua ligando-se ao stio ativo da AChE cerebral e ainda estimula os receptores nicotnicos pr- e ps-sinpticos os quais podem, ento, aumentar a liberao de neurotransmissores como ACh e glutamato, estimulando diretamente a funo neuronal21. Outro alcalide isolado de Eucharis grandiflora (Amaryllidaceae), a sanguinina (9-O-desmetilgalantamina, 5), mostrou-se 10 vezes mais ativo que a prpria galantamina em ensaios in vitro. A busca por outras substncias inibidoras de AChE (IAChE) nesse gnero vegetal levou ao isolamento de outros dois derivados ativos da galantamina, a 11-hidroxigalantamina (6) e a epinorgalantamina (7). Outro padro estrutural de alcalides, tipo-licorina, foi isolado desse gnero, cujos constituintes mais ativos foram a oxoassoanina (8), a assoanina (9) e a pseudolicorina (10)9.

Os resultados obtidos com a huperzina A estimularam Orhan et al.24 a estudarem outras 5 espcies de Lycopodium, procura de outro metablitos inibidores de AChE. Aps uma avaliao preliminar dos extratos pelo ensaio de Ellmann20, o extrato das partes areas de L. clavatum foi selecionado e o fracionamento bio-guiado resultou no isolamento da -onocerina (12a). Os resultados da atividade anticolinestersica demonstraram que a -onocerina (IC50= 5,2 m) foi melhor que o donepezil (2) nas concentraes de 1 e 3 mg/mL e praticamente equipotente na concentrao de 5 mg/mL, embora no tenha atingido a potncia da galantamina em nenhuma dose testada. Alguns alcalides triterpnicos foram isolados de Buxus hyrcana, como a homomoenjodaramina (13) e a moenjodaramina (14), os quais mostraram-se promissores inibidores de AChE25. Desta mesma famlia, Buxus papillosa forneceu outros trs alcalides esteroidais inibidores seletivos de AChE: cicloprotobuxina C ( 15 ), ciclovirobuxeina A (16) e ciclomicrofilina A (17) 26.

A zeatina (18), inicialmente descrita como agente indutor de crescimento de plntulas, foi isolada de Fiatoua villosa, cujo extrato metanlico havia sido selecionado aps triagem para atividade inibitria de AChE27. A substncia pura 18 inibiu a atividade da AChE de modo dose-dependente com IC50 de 1,09 x 10-4 M 27. Os glico-alcalides presentes em altas concentraes na casca da batata (Solanum tuberosum L.) tm sido responsveis por vrios dos casos de intoxicao alimentar. A observao de pacientes intoxicados revelou sintomas como confuso mental, depresso e fraqueza. Estes efeitos foram atribudos inibio da AChE pela solanina (19) e -chaconina (20), que correspondem a 95% dos glicoalcalides presentes em S. tuberosum28.

O estudo de vrias espcies vegetais de uso corrente na medicina popular chinesa e do Oriente Mdio levou ao isolamento de vrios alcalides ativos. Exemplo disso foi Huperzia serrata (sinonmia: Lycopodium serratum), que fornece um ch prescrito h sculos na China para o tratamento da febre e inflamao. O estudo fitoqumico dessa planta levou ao isolamento de huperzina A (11), um candidato interessante para o tratamento de desordens do SNC e epilepsia, cujo efeito diminui a morte neuronal causada por altas concentraes de glutamato. um IAChE seletivo, muito potente e o uso sistmico aumenta a liberao de ACh, dopamina e norepinefrina, sendo que o aumento da concentrao de ACh persiste por at 6 h e praticamente no possui ao sobre a butirilcolinesterase plasmtica (BuChE)22,23. Dessa mesma planta foi obtida a huperzina P (12), um novo alcalide tipo-licopodium, entretanto sua atividade foi menor que aquela evidenciada para a huperzina A ( 11).

Culturas de microorganismos, especialmente de fungos de diversas famlias e gneros, vm sendo sistematicamente estudadas como importantes fontes na busca por frmacos teis no tratamento de doenas graves como cncer, malria e infeces bacterianas, dentre outras. Buscando novos candidatos a frmacos capazes de re-estabelecer o sistema de neurotransmisso colinrgica, Otoguro, Kuno et al.29-31 descobriram novos inibidores de AChE atravs da triagem sistemtica de produtos naturais produzidos por fungos, i.e. arisugacinas. A partir das culturas WK-4164 e FO-4259 de fungos do

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solo foram obtidas a ciclofostina (21), a arisugacina A (22) e B (23), alm das j conhecidas territrems B (24) e C (25) e a ciclopenina (26). Dentre estes derivados, as arisugacinas A (IC50= 1,0 nM) e B (IC50= 25,8 nM) no inibiram a BuChE, mesmo em concentraes 20.000 vezes superiores concentrao de inibio de 50% da atividade da AChE, demonstrando excelente perfil de seletividade. J os derivados territrems B e C foram muito menos seletivos, apesar de apresentarem bom perfil de inibio de AChE, i.e. IC50= 7,6 nM e 6,8 nM, respectivamente. A ciclopenina (26) foi a substncia menos ativa desta famlia como inibidor de AChE (IC 50= 2040 nM); entretanto, foi bastante seletiva, no inibindo a BuChE em concentraes at 2000 vezes maiores que sua IC50. Apesar de muito potente (IC50= 1,3 nM), a ciclofostina (21) foi a substncia que apresentou menor seletividade, passando a inibir a BuChE em doses superiores a 35 vezes sua IC5029-32.

reoismeros quinolactacina A1 (34) e quinolactacina A2 (35). A avaliao da atividade anticolinestersica destas substncias revelou que 35 apresentou atividade inibitria da AChE 14 vezes superior a seu diastereoismero 34. Seu efeito foi dose-dependente, apresentando uma IC50= 19.8 M, enquanto que a IC50 de 35 foi de apenas 280 M. Alm disso, o diastereoismero bioativo 35 mostrou atividade inibitria competitiva com o substrato e seletiva para a AChE versus butirilcolinesterase (BuChE, IC50= 650 M), utilizando-se em todos os ensaios a tacrina como padro positivo (IC50 BuChE = 0.006 M, IC50 AChE = 0,12 M)34.

Pelo exposto, torna-se evidente a necessidade de se explorar os produtos naturais oriundos da grande biodiversidade brasileira, como fonte de inspirao para o planejamento racional de novos candidatos a frmacos potentes e seletivos e com baixo perfil de toxicidade, que permitam o controle da evoluo da doena de Alzheimer. AGRADECIMENTOS Os autores agradecem a FAPESP, FINEP, CAPES, FAPERJ, FUJB e ao CNPq pelo apoio financeiro e bolsas concedidas. REFERNCIAS As territrems A (27), B (24) e C (25) j haviam sido isoladas de culturas de Aspergillus terreus e apesar da baixa seletividade demonstrada pelos estudos de Otoguro et al.31, a territrem B foi cerca de 20 vezes mais potente que a neostigmina na inibio da AChE. Estes resultados estimularam Peng33 a preparar os derivados dos territrems 28-33 para estudo da relao estrutura qumica-atividade biolgica. A avaliao da inibio da atividade enzimtica pelo mtodo de Ellmann20 no revelou aumento de potncia para nenhum dos derivados semi-sintticos dos territrems, entretanto permitiu o reconhecimento da ligao dupla em C-2, da carbonila em C-1 e da unidade -pirona intacta como os grupos farmacofricos imprescindveis para a atividade anticolinestersica desta srie de compostos.
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O interesse por inibidores de AChE em metablitos microbiais monitorados pelo ensaio de Ellmann20 levou Kim et al.34 a investigarem as culturas de um novo fungo, o Penicillium citrinum 90648. Do fermentado slido deste microorganismo foram isolados os diaste-

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Viegas Jr. et al.

Quim. Nova

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