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Universidade Estadual do Sudoeste da Bahia - UESB Departamento de Qumica e Exatas - DQE Docente: Graziele Disciplina: Bioqumica Clnica Curso:

Farmcia

Relatrio de Bioqumica Clnica

Jequi/BA Junho/2013

Universidade Estadual do Sudoeste da Bahia - UESB Departamento de Qumica e Exatas - DQE Docente: Graziele Disciplina: Bioqumica Clnica Curso: Farmcia

Determinao de Triglicerdeos

Relatrio apresentado disciplina de Bioqumica Clnica, sob a superviso da professora Graziele, como requisito parcial de avaliao da I unidade.

Jequi/BA Junho/2013 2

Sumrio

Introduo

Os cidos graxos ocorrem, principalmente, como steres de glicerol (acilgliceris). A classe dos acilgliceris depende do nmero de cidos graxos presentes na molcula: monoglicerdios (um cido graxo esterificado), diglicerdios (dois cidos graxos esterificados) e triglicerdios (trs cidos graxos esterificados). Os triglicerdeos so as formas mais importantes de armazenamento de cidos graxos, e os mesmos so sintetizados no fgado e intestino, sendo transportados nas formas de quilomcrons, VLDL e pequena parte (cerca de < 10%) das LDL presentes no plasma. A funo principal das lipoprotenas plasmticas parece ser a de transporte dos triglicerdeos e do colesterol dos locais de origem, no intestino (origem exgena) e no fgado (origem endgena) para os locais de armazenamento e utilizao. O HDL deve ser visto como tendo um papel vital no transporte do excesso de colesterol dos tecidos extra-hepticos de volta para o fgado, por onde excretado na bile (transporte reverso do colesterol). A remoo do excesso de colesterol celular das paredes arteriais pode ter um papel crucial em diminuir o acmulo de colesterol nas paredes arteriais, inibindo a aterognese. O aumento da HDL retarda o aparecimento de aterosclerose e

conseqentemente faz a diminuio da progresso das doenas da artria coronria. A HDL exerce efeito protetor com enzimas antioxidantes que podem prevenir algum processo inflamatrio inicial (8). O papel antiaterognico da HDL tem implicaes importantes para o controle das doenas cardacas Os triglicerdeos e o colesterol entram no plasma na forma de partculas de lipoprotenas ricas em triglicerdeos (quilomcrons e VLDL) e sofrem mudanas intravasculares atravs da enzima lipase lipoprotica, que hidrolisa os triglicerdeos e os diglicerdeos em cidos graxos e monoglicerdeos. A quase totalidade das gorduras ingeridas na dieta so triglicerdios formados por cidos graxos saturados e insaturados. Alguns cidos graxos piliinsaturados (cidos linolnico, linolico e araquidnico) no so sintetizados no organismo e devem ser supridos na dieta. Os triglicerdios da dieta so hidrolizados pela 4

ao das lipases pancreticas e sais biliares para formar 2-monoglicerdios e cidos graxos livres. Por difuso, os 2-monoglicerdios e os cidos graxos entram no retculo endoplasmtico das clulas da mucosa e so reesterificados a triglicerdos. Estudos experimentais investigam a elevao dos triglicerdeos no soro associada a aumento do risco de doenas coronarianas. Surgem evidncias de que a hipertrigliceridemia um fator de risco independente para doenas coronarianas , pois contribui para estas doenas por um efeito aterognico direto das lipoprotenas ricas em triglicerdeos, particularmente as VLDL. O tamanho das partculas de VLDL liberadas depende da disponibilidade de triglicerdeos no fgado. Os valores de referncia para o colesterol total, segundo o Expert Parol of the National Cholesterol Education Program (NCEP, 1987) so de at 200mg/dl (17). Altos nveis de LDL e baixos nveis de HDL esto relacionados com doenas cardacas, sendo dessa forma necessrias dietas adequadas e exerccios fsicos no intuito de diminuir esses nveis e evitar doenas crdicas que matam milhes de pessoas todos os anos.

Objetivos

Geral: Realizar determinao de triglicrides em amostra de sangue. Especficos: Realizar teste cromognio com leitura da absorbncia no espectrofotmetro. Realizar clculos dos valores obtidos da anlise. Verificar resultados e comparar aos valores de referncia.

Material utilizado

Tubos de ensaio Seringa e agulha Centrfuga Espectrofotmetro Cubetas Micropipeta de 100 e 1000 microlitros Algodo lcool 70 Garrote Ponteiras para micropipeta

Reagentes

Reagente 1 Padro

Procedimento experimental

Para a coleta da amostra o paciente deve estar com peso e dieta estveis por trs semanas e em jejum de 12 a 14 horas. A abstinncia alcolica desejvel nas 72 horas que antecedem o teste. Obter a amostra com o paciente assentado. O torniquete no deve ser mantido por tempo maior que um minuto e deve-se obter a amostra de sangue aps liberar o torniquete. Aps a retirada da amostra a mesma foi transferida para um tubo contendo EDTA (plasma), para posterior centrifugao. Realizada a centrifugao, o plasma da amostra foi retirado por meio de um filtro de separao. Tomaram-se trs tubos de ensaio e procedeu-se como a seguir:

Misturou-se e colocou em banho-maria 37C por dez minutos. O nvel da gua no banho deve ser superior ao nvel do reagente nos tubos de ensaio. Determinaram-se as absorbncias do teste e padro em 505 nm. A cor estvel por 60 minutos.

Resultados e discusso

Aps a realizao dos procedimentos e leitura no espectrofotmetro, os resultados foram obtidos a partir dos clculos abaixo:

Triglicrides (mg/dL) = Absorbncia da amostra x 200 Absorbncia do padro

Como a reao segue a Lei de Lambert-Beer, o Fator de calibrao pode ser usado. Fator de calibrao = Concentrao do padro( 200 mg/dL ) Absorbncia do padro Triglicrides(mg/dL) = Absorbncia do teste x Fator de calibrao

Fator de calibrao =200 = 338,98 0,59 Triglicrides(mg/dL) = 0,70 x 338,98 = 237,28 mg/dL

Os valores de referncia para o colesterol total, segundo o Expert Parol of the National Cholesterol Education Program (NCEP, 1987) so de at 200mg/dl. Os valores obtidos no exame se encontram elevados diante dos nveis de referncia, ultrapassando assim uma margem de segurana para evitar vrios problemas de sade. Elevados nveis de triglicerdeos no soro esto associados com quatro condies patognicas que aceleram a aterosclerose (Rapp, R.J, 2002): diminuio dos nveis de HDL no soro (Abbasi, F, 2000); aumento das lipoprotenas remanescentes; pequena Influncia da dieta na concentrao srica de triglicerdeos (Nakaya, elevao N, 2002). na LDL; aumento que das algum condies tipo de

trombognicas

Isto

sugere

hipertrigliceridemia poder ser a causa de aterosclerose (Nakaya, N, 2002).

O aumento dos triglicerdeos um distrbio lipdico relativamente freqente na prtica clnica. Os nveis ps-prandiais de triglicerdeos aumentam dentro de duas horas (faixa de duas a dez horas) aps a ingesto de alimentos. Recomenda-se, portanto, jejum de 12 a 16 horas antes da coleta da amostra, pois pode haver uma variao de 25% a 50% (faixa de 18% a 100%) entre os dias. Esta grande variao de um dia para outro est bem observada nos nveis dosados de triglicerdeos (Ravel, R, 1997). A obesidade, o estresse agudo, a ingesto de lcool, as dietas com alto teor de gordura e doces, a gravidez, a estrogenoterapia, a terapia de glicocorticides e um nmero considerado de doenas (diabetes, pancreatite aguda, sndrome nefrtica, gota e uremia, entre outros) aumentam consideravelmente os nveis de triglicerdeos (Ravel, R, 1997). Os triglicerdeos tm um papel primrio na formao de aterosclerose em se tratando de hipertrigliceridemia (Rapp, R.J, 2002). A hipertrigliceridemia o distrbio lipdico de mais fcil controle, pois os nveis de triglicrides podem ser satisfatoriamente controlados por mudanas nos hbitos de vida, dieta equilibrada, aumento da atividade fsica e restrio ao lcool. Raramente encontra-se hipertrigliceridemia isolada, sendo freqentemente acompanhada por aumento no colesterol total, no LDL-colesterol e diminuio no HDL-colesterol. Utilizou-se um mtodo enzimtico colorimtrico onde os triglicerdeos so determinados de acordo com as seguintes reaes:
Lipase da lipoprotena

Triglicerdes ------- Glicerol + cido graxos


Glicerolquinase

Glicerol + ATP ------- Glicerol-3-fosfato + ATP


Glicerol-3-fostato Oxidase O2 ------- Dihidroxiacetona

Glicerol-3-fosfato +

+H2O2

Peroxidase

2 H2O2 + 4 Aminoantipirina + 4 Clorofenol ------- Quinoneimina + 4H2O Quanto maior for concentrao de triglicerdeos na amostra, mais intensa ser a cor vermelha do produto final, em nveis muito elevados a amostra

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demonstra um aspecto leitoso de cor amarelada devido presena de quilomicrons.

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Concluso

Por meio da presente prtica foi possvel realizar o teste de determinao de triglicrides, onde o resultado obtido da amostra coletada apresentou alterado em relao aos valores de referncia, no entanto o(a) paciente no estava no jejum preconizado para tal teste, podendo assim afetar no resultado da anlise.

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Referncias Abbasi, F. et al. High carbohydrate diets, triglyceride-rich lipoproteins, and coronary heart disease risk. Am J Cardiol., 85: 45-8, 2000. Henry, J.B. Diagnsticos clnicos e tratamento por mtodos laboratoriais.18 ed. So Paulo: Manole, 1998. Libby, P. Managing the risk of atherosclerosis: the role of high-density lipoprotein. Am J Cardiol., 88: 3N-8N, 2001. Nakaya, N. Hypertriglyceridemia as a cause of atherosclerosis. Nippon Rinsho., 60(5): 860-7, 2002. Rapp, R.J. Hypertriglyceridemia: a review beyond low-density lipoprotein. Cardiology in Review, 10(3): 163-72, 2002. Ravel, R. Laboratrio clnico: aplicaes clnicas dos dados laboratoriais. 6 ed. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, 1997. Schiavo. M. et al, Influncia da dieta na concentrao srica de triglicerdeos, Jorna Brasileiro de Patologia e Medicina Laboratorial; Rio de Janeiro, v. 39, n.4, 2993.

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