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Se obtienen por puncin quirrgica, en condicin de asepsia, con tcnicas que varan segn la ubicacin del lquido. Conviene recoger una porcin en 3 tubos o recipientes estriles que contengan uno de ellos citrato de sodio para evitar una probable coagulacin (til para el examen fsico e inmunolgico), el segundo tubo con medio enriquecido de cultivo para transporte (bacteriolgico) y el tercero con solucin salina (qumico y microscpico). Las tcnicas de obtencin de la muestra varan de acuerdo ala zona o cavidad en que se requiera el estudio.
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20% < QUE GLUCOSA SANGUINEA <3g% NEGATIVA NEGATIVO < QUE CALCIO SERICO < 200 UI/ l
PRCTICA No. 6
ANALISIS DE EXUDADOS. EXAMEN FISICO
A) B) C) D) E) F) Aspecto y color Olor Consistencia Coagulacin pH Densidad
5, 11, 12
MATERIAL, EQUIPO E INSTRUMENTACIN MATERIAL PARA TOMA DE MUESTRA 1 1 1 1 tubo de ensaye de 13 x 100 mm estril con anticoagulante tubo de ensaye de 13 x 100 mm estril sin anticoagulante tubo de ensaye de 13 x 100 mm estril con solucin salina isotnica pipeta Pasteur con bulbo hisopos estriles torundas de algodn con alcohol MATERIAL PARA LA PRUEBA 1 5 1 tubo de ensaye de 13 x 100 mm portaobjetos pipeta Pasteur con bulbo gradilla aplicadores de madera papel pH INSTRUMENTACIN Refractmetro o densitmetro A) ASPECTO Y COLOR El aspecto de los exudados depende de su origen y del agente etiolgico, pueden ser serosos cuando contienen pocas clulas; serofibrinosos suelen coagular parcialmente por la presencia de fibringeno procedente de la inflamacin. El aspecto se presenta s ero-purulento cuando contiene abundantes clulas y es francamente purulento cuando contiene pus pura, o hemorrgicos con sangre. El color vara de amarillo plido al pajizo cuando no contienen sangre. A veces presenta coloracin amarillo verdosa debido a la presencia de Pseudomonas.
B) OLOR
Generalmente son inodoros o expiden un olor dulzn, excepto cuando son retenidos por mucho tiempo y muestran alteraciones putrefactas. Los exudados ocasionados por grmenes
intestinales poseen en muchos casos un olor fecal debido a la necrosis de los tejidos.
C) CONSISTENCIA
Son fibrinosos o mucoide de fcil coagulacin por su riqueza en fibringeno.
D) COAGULACIN
Para su comprobacin se coloca una pequea cantidad de lquido una vez extrado, en un tubo que no contenga anticoagulante y se observa si la coagulacin ocurre espontneamente. Generalmente los exudados coagulan por la gran cantidad de protenas, si no produce coagulacin se observan usualmente grandes flculos. No se presenta en las cavidades, si no despus de hacer la aspiracin parcial o completa; particularmente en el caso de la infecciones neumoccicas. El hecho de que no se presente la coagulacin, se debe a la destruccin de la fibrina por enzimas tisulares bacterianas.
E) pH
El pH es alcalino o levemente cido y se determina con el potencimetro o papel pH. F) DENSIDAD Se mide usando los densitmetros comunes para orina, pero si la cantidad es pequea con el uso del refractmetro. El peso especfico de los exudados es mayor que el de los trasudados, varia entre 1.018 a 1.025 debido a la mayor cantidad de protenas existentes.
A)
existentes para orina y/o suero sanguneo. Debido a que los exudados contienen una alta
concentracin de protenas es conveniente realizar una dilucin previa de los mismos (1:10) con solucin salina isotnica, multiplicndose el resultado obtenido por el factor de dilucin. En los exudados purulentos consecutivos a inflamaciones graves en los que hay formacin o derrame de pus como en el caso de empiema, la protena total de la porcin serosa sobrepasa por lo regular los 3 g % y llega a ser aproximadamente igual que en el plasma sanguneo. En los exudados consecutivos a procesos inflamatorios de menor intensidad la protena total es por lo general de 0.l a 0.5 g %.
REACTIVOS 1. CIDO ACTICO GLACIAL G.R. 2. AGUA DESTILADA MATERIAL, EQUIPO E INSTRUMENTACIN MATERIAL PARA LA PRUEBA 2 1 1 1 TECNICA 1. Coloque en un tubo 5 ml de agua destilada agregar 0.01 ml de cido actico glacial y completar con agua destilada a los 10 ml. Mezclar por inversin. Sobre esta solucin se dejan caer unas gotas (5 a 10) del lquido y se observa cuidadosamente, la formacin de una nubcula parecida al humo de un cigarrillo. La intensidad de turbidez se expresa en cruces. tubos de ensaye de 15 x150 mm pipetas lineales de 10 ml pipetas lineales de 0.2 ml (1/10) pipeta Pasteur con bulbo gradilla
VALOR DE REFERENCIA En los exudados se forma una nubcula por lo que el resultado es positivo. Y en general en los trasudados la prueba es negativa.
B) DETERMINACIN DE GLUCOSA
La cuantificacin de glucosa en exudados se hace igual que en las tcnicas descritas para suero y/o sangre completa. La glucosa en los exudados existe en cantidades muy bajas
comparado con la concentracin de glucosa sangunea, esta disminucin obedece a que la gluclisis es continua por la accin de las bacterias y clulas; dependiendo hasta cierto punto de la gravedad del proceso inflamatorio.
B) DETERMINACIN DE CLORUROS
La determinacin de cloruros se hace igual que en el plasma o suero. La concentracin de cloruros es menor en los exudados que en los trasudados pero muy parecida a la del plasma sanguneo. El grado de disminucin depende del aumento de protenas, de acuerdo con las leyes que regulan la concentracin de las sustancias fcilmente difusibles a travs de una membrana semipermeable. TCNICA Revisar la tcnica disponible
EXAMEN MICROSCPICO
1) 2) OBSERVACIN DIRECTA (muestra en solucin salina) PREPARACIONES TEIDAS (con tinciones hematolgicas y bacteriolgicas) COLORANTE PARA TINCIN DE MAY GRUENWALD GIEMSA COLORANTE PARA TINCIN DE WRIGHT SOLUCIN BUFFER DE FOSFATOS PARA TINCIN DE WRIGHT CITRATO DE SODIO ACEITE DE INMERSIN EN FRASCO GOTERO SOLUCION SALINA
REACTIVOS. 1. 2. 3. 4. 5. 6.
MATERIAL, EQUIPO E INSTRUMENTACIN MATERIAL PARA LA PRUEBA 1 1 5 5 tubo de ensaye de 13 x 100 mm con anticoagulante estril pipeta Pasteur con bulbo portaobjetos cubreobjetos gradilla, perilla puente de tincin aplicadores de madera papel Parafilm
TCNICA. A) OBSERVACION DIRECTA EN FRESCO La observacin directa en fresco se realiza a los exudados de origen vaginal, uretral, prosttico y de lesiones chancroides, obtenindose de manera especial para cada caso, por medio de hisopos, pipetas Pasteur capilares (chancro) depositando la muestra en el tubo de ensaye con solucin salina. La observacin microscpica se hace de una preparacin entre portaobjetos y cubreobjetos de la muestra homogeneizada en solucin salina, primero se observa con objetivo seco dbil y luego con seco fuerte para investigacin de parsitos, hongos, espiroquetas, predominio de flora bacteriana, etc.
3. Dejar secar y teir con la tcnica de May Gruenwald Giemsa para efectuar la diferenciacin celular. 4. Puede teirse con Wright, Papanicolaou, etc. Es conveniente agregar citrato sdico a la muestra biolgica para evitar coagulacin.
II) TINCIONES BACTERIOLOGICAS Se usan las tinciones Gram y Ziehl Neelsen para teir los frotis. REACTIVOS 1. TINCION DE GRAM CRISTAL VIOLETA LUGOL ALCOHOL-ACETONA SAFRANINA 2. TINCION DE ZIEHL NEELSEN (BAAR) FUCSINA FENICADA ALCOHOL CIDO AZUL DE METILENO MATERIAL, EQUIPO E INSTRUMENTACIN MATERIAL PARA LA PRUEBA 1 1 5 5 tubo de ensaye de 13 x1200 mm estril con anticoagulante pipeta Pasteur con bulbo portaobjetos cubreobjetos gradilla, puente de tincin aplicadores de madera papel Parafilm
TINCION DE GRAM 1. Se prepara el extendido bacteriolgico y se deja secar al aire, se fija por calor suave sobre a la flama de un mechero Bunsen y luego pasadas a travs de ella (debe tenerse cuidado para evitar calor excesivo, que altere morfologa bacteriana). 2. La preparacin se coloca en un puente de tincin y se cubre con cristal violeta tiendo por un minuto, se escurre. 3. Se cubre con lugol por un minuto, se escurre y se decolora con alcohol acetona en 2 tiempos de 15 segundos cada uno enjuagando entre ellos con agua de la llave (para no exceder la decoloracin), se contratie con zafranina de 30 a 60 segundos. Se escurre se enjuaga con agua, se deja secar y se observa al microscopio con objetivo de inmersin.
TINCION DE ZIEHL NEELSEN 1. Se efecta un extendido delgado del material a teir, sobre un portaobjetos NUEVO, secar al aire y se fija a la flama. 2. Se coloca sobre un puente, se cubre con solucin de fucsina fenicada y se calienta se deja
suavemente hasta emisin de vapores dejando actuar por 5 minutos calentando varias veces, reponiendo el colorante que se pierda por evaporacin. 3. Se lava con agua, se decolora con alcohol acido hasta que el extendido tome un color rosa plido, se neutraliza con agua de la llave. 4. Se cubre con azul de metileno por 1 minuto, se escurre, se lava con agua, se deja secar y se observa con objetivo de inmersin.
TCNICA 1. Seguir los procedimientos habituales de cada tincin y observar las preparaciones con aceite de inmersin en el microscopio. 2. Al trmino de la observacin asegrese de dejar limpios los objetivos y la platina. As como colocar en posicin de transporte segura el microscopio.
PRCTICA No. 7
ANLISIS DE TRASUDADOS.
EXAMEN FSICO
A) B) C) D) E) F) Aspecto y color Olor Consistencia Coagulacin pH Densidad
5, 9, 11, 12
MATERIAL, EQUIPO E INSTRUMENTACIN MATERIAL PARA TOMA DE MUESTRA 1 1 1 1 tubo de ensaye de 13 x 100 mm estril con anticoagulante tubo de ensaye de 13 x 100 mm estril sin anticoagulante tubo de ensaye de 13 x 100 mm estril con solucin salina isotnica pipeta Pasteur con bulbo hisopos estriles torundas de algodn con alcohol MATERIAL PARA LA PRUEBA 1 1 5 tubo de ensaye de 13 x 100 mm pipeta Pasteur con bulbo portaobjetos gradilla, aplicadores de madera papel Parafilm INSTRUMENTACIN Refractmetro o densitmetro
A) COLOR Y ASPECTO.
El aspecto normal va de transparente a opaco y el color suele ser de verde a amarillo, a menos que contenga sangre ser de tono rosado-rojizo. Los trasudados en las ictericias se observan de color amarillo oscuro debido a la presencia de bilirrubina. Los lquidos pleurales son quilosos (lechosos), al igual que los peritoneales. Generalmente los trasudados recin extrados son transparentes, al enfriarse se tornan lechosos.
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C) COAGULACIN La coagulacin en los trasudados suele ser negativa o ligeramente positiva, y es mas lenta que en los exudados. Excepto en caso de trasudados hemticos y quiloides, especialmente cuando se debe a la presencia de tumores malignos. De 1 2 ml de lquido recin extrado se colocan en un tubo de ensaye de 13 x 100 mm y se observa con que rapidez coagula. D) DENSIDAD Por lo general la densidad de los trasudados es inferior a la de los exudados, varia de 1.006 1.015, esta prueba ayuda a su diferenciacin; sin embargo, los resultados estn sujetos a considerables alteraciones, de acuerdo a la cantidad de protena presente, lo cual depende de la permeabilidad de los capilares del cuerpo. As, los trasudados pleurales y peritoneales contienen mayor cantidad de protenas y por consiguiente son de mayor densidad. En los trasudados tumorales la densidad se eleva hasta 1.025. La tcnica empleada es la misma utilizada para muestras de orina. E) pH. El pH de los trasudados es alcalino cerca de 7.4. y se determina con el potencimetro o papel pH.
A) DETERMINACIN DE PROTEINAS Esta determinacin es de gran valor para diferenciar los trasudados de los exudados. Se realiza con los mismos mtodos que se usan para sangre y orina, efectundose diluciones multiplicndose la cifra obtenida por el factor de dilucin y los resultados se expresan en g/ l. En los trasudados pleurales y peritoneales, en caso de insuficiencia cardiaca congestiva, cirrosis, nefrosis, pueden mostrar de 0.1 a 1 g/ 100 ml en la concentracin de protena. Si estos trasudados permanecen varios das en la cavidad, el lquido se reabsorbe mas por lo que la concentracin de protenas en estos casos esta elevada, llegndose a confundir algunas veces con los exudados, (que a diferencia de los trasudados son de origen inflamatorio).
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B) DETERMINACIN DE CLORUROS La determinacin de cloruros se hace igual que en suero. El cloruro en los trasudados suele ser mayor que el cloruro plasmtico, varia de 720 a 750 mg / 100 ml de NaCl. Esta diferencia se debe al equilibrio Donan el cual depende de la mayor concentracin de protenas en el plasma que en los trasudados. C) OTRAS DETERMINACIONES Se pueden hacer determinaciones de glucosa, creatinina, cido rico, urea, fsforo inorgnico, y enzimas teniendo concentraciones iguales que en el suero, las tcnicas son las mismas que se emplean para las determinaciones sricas. Se recomienda tambin electroforesis de protenas. El contenido de Ca se encuentra mas elevado en los trasudados y exudados que en el plasma debido a las protenas presentes los valores de Na, Mg, K se encuentran disminuidas con respecto a los plasmticos. La presencia de bilirrubinas se ve en los trasudados pleurales y peritoneales sin que exista aumento en la sangre. Por lo general, no contienen lpidos pero el aspecto quiloso es debido a la presencia de pequeas cantidades de lecitina y colesterol. La determinacin de mucoproteinas es importante por que se elevan en procesos neoplsicos o disminuyen en cirrticos, los valores de referencia se encuentran entre 60 y 100 mg / 100 ml. La determinacin de la deshidrogenasa lctica es til en el diagnostico de tumores
metastticos, pleurales o ascticos. Todas estas determinaciones son los mismos que se realizan en sangre.
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MATERIAL, EQUIPO E INSTRUMENTACIN MATERIAL PARA LA PRUEBA 1 1 5 5 tubo de ensaye de 13 x1200 mm con anticoagulante estril pipeta Pasteur con bulbo portaobjetos cubreobjetos gradilla, perilla puente de tincin aplicadores de madera papel Parafilm INSTRUMENTACIN Microscopio binocular con iluminacin Koheler TCNICA. A) OBSERVACION DIRECTA O EN FRESCO Puede realizarse la observacin directa en fresco a los trasudados aunque poseen
escasas clulas, una segunda opcin en concentrar por centrifugacin las muestras lquidas con anticoagulante y del sedimento se hace una preparacin entre portaobjetos y cubreobjetos para la observacin microscpica, primero se observa con objetivo seco dbil y luego con seco fuerte para bsqueda de clulas mesoteliales, linfocitos, clulas tumorales, leucocitos, eritrocitos, etc. B) OBSERVACION MICROSCPICA DE MUESTRAS TEIDAS
TINCIONES HEMATOLGICAS La observacin de muestras teidas tiene dos propsitos fundamentales el primero: al utilizar colorantes para extendidos sanguneos tratamos de distinguir procesos infecciosos agudos (donde existe predominio de clulas polimorfonucleares) de los procesos infecciosos crnicos (el predominio es de clulas mononucleares -tuberculosis, sfilis, tumores-), mientras que si se distinguen eosinfilos predominantemente sugiere procesos alrgicos o parasitarios. Y el segundo objetivo con las tinciones bacteriolgicas, es informar de manera rpida la poblacin bacteriana persistente para instituir el protocolo de tratamiento lo ms pronto posible.
TCNICA
1. Depositar una pequea gota de material a estudiar sobre el portaobjeto limpio y seco. 2. Hacer un extendido delgado tipo hematolgico o bacteriolgico. 3. Dejar secar y teir con la tcnica de May Gruenwald Giemsa para efectuar la diferenciacin
celular.
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TINCIONES BACTERIOLOGICAS Se usan las tinciones Gram y Ziehl Neelsen para teir los frotis. REACTIVOS 1. TINCION DE GRAM CRISTAL VIOLETA LUGOL ALCOHOL ACETONA SAFRANINA 2. TINCION DE ZIEHL NEELSEN (BAAR) FUCSINA FENICADA ALCOHOL ACIDO AZUL DE METILENO
MATERIAL, EQUIPO E INSTRUMENTACIN MATERIAL PARA LA PRUEBA 1 1 5 5 tubo de ensaye de 13 x 100 mm estril con anticoagulante pipeta Pasteur con bulbo portaobjetos cubreobjetos gradilla, puente de tincin aplicadores de madera papel Parafilm
TECNICA 1. Seguir los procedimientos habituales de cada tincin y observar con aceite de inmersin en el microscopio, las preparaciones. 2. Al trmino de la observacin asegrese de dejar limpios los objetivos.
EXAMEN BACTERIOLGICO
Para los lquidos extravasculares revisados en esta unidad se recomienda realizar simultneamente los exmenes bacteriolgicos que se requieran, de acuerdo a la sospecha clnica. Siguiendo el protocolo habitual tcnico-microbiolgico para la inoculacin, cultivo, aislamiento e identificacin de los microorganismos patgenos.
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CARACTERSTICA REFERENCIA ASPECTO VOLUMEN COLOR pH DENSIDAD COAGULACION GLUCOSA TRANSPARENTE < 3.5 ML AMARILLO O PLIDO 6.9 7.6
ALTERACIONES HEMORRGICO, POR TUMORES MALIGNOS TURBIO, POR CARGA BACTERIANA O MICTICA
ELEVADO = > CARGA DE SOLUTOS POSITIVA BACILAR DISMINUIDO = CARGA BACTERIANA Y/O CLULAS NEOPLSICAS = ETIOLOGA INFECCIOSA
PROTENAS
RELACIN DE CONCENTRACIN INVERSA CON PROTENAS > QUE VALORES PATOLOGAS PANCRETICAS Y SRICOS PERFORACIONES GASTROINTESTINALES ELEVADO = LCERA PPTICA PERFORADA IGUAL QUE SUERO VEJIGA DESGARRADA (JUNTO CON DE CREATININA) IGUAL QUE SUERO ELEVADO = PERFORACIN DE INTESTINO DELGADO < 200 / mm3 118 128 meq/l CLULAS MESOTELIALES DEL 20 30% PMN < 25% MN 45 65% PREDOMINIO LINFOCITOS SUGIERE ETIOLOGA CRNICA BACILAR CLULAS NEOPLSICAS = TUMORES PREDOMINIO PMN SUGIERE PERITONITIS BACTERIANA Y CIRROSIS
CLULAS
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LQUIDO PERICRDICO.
CARACTERSTICA REFERENCIA VOLUMEN 10 15 ml TURBIO = PROCESOS INFECCIOSOS, MALIGNOS QUILOSO = ALTERACIONES DE SISTEMA LINFTICO HEMORRGICO = AFECCIN TUBERCULOSA O MALIGNA SANGUINOLENTO = PUNCIN ANMALA USO DE FRMACOS ANTICOAGULANTES > ETIOLOGA INFECCIOSA SIGNIFICADO CLNICO
ASPECTO
TRANSPARENTE
LEUCOCITOS TOTALES
DIFERENCIAL
PMN 25% MN 45 65% CLULAS > % PMN = ENDOCARDITIS BACTERIANA MESOTELIALES 20%
CLASIFICACIN DE GRUPOS
I II NO INFLAMATORIOS INFLAMATORIOS
SIGNIFICADO PATOLGICO
TRASTORNOS DEGENERATIVOS EVENTOS INMUNOLGICOS: ARTRITIS REUMATOIDE, LUPUS ERITEMATOSO DISEMINADO INFECCIONES BACTERIANAS
GOTA
HEMORRGICOS
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LQUIDO SINOVIAL
GRUPO I GRUPO II No inflamatorio inflamatorio > 3.5 ml Transparent e Amarillo Alta Positivo compacto Igual que suero < 5.0 < 5.0 No ponderado 200 a 3000 / mm3 > 30% Ausentes No ponderado > 3.5 ml Turbio Amarillo opalescente Baja Positivo -friable > de 25 mg% < que srica < 5.0 < 1.8 No ponderado 300 a 10 000 /mm3 > 50% Ausentes No ponderado GRUPO IV Compuestos insolubles > 3.5 ml Turbio - lechoso Amarillo Alta Positivo compacto Disminuida < 5.0 < 5.0 Elevado GRUPO VI Hemorrgicos > 3.5 ml Turbio rojizo Amarillo opalescente Alta Positivo friable Normal < 5.0 < 1.8 No ponderado < 5000 /mm3 < 50% Abundantes Ausentes
CARACTERSTICA REFERENCIA VOLUMEN ASPECTO COLOR VISCOSIDAD COAGULACIN GLUCOSA PROTENAS GLOBULINAS CIDO RICO CLULAS TOTALES PMN ERITROCITOS CRISTALES < 3.5 ml Transparente Amarillo claro Alta Positiva compacto Igual que suero 1.36 g% 0.05 g% Igual que suero < 200/mm3 PMN > 25% < 5 /mm3 Ausentes
GRUPO III sptico > 3.5 ml Turbio Amarillo a verde Baja Positivo- friable > de 25 mg% > 5.0 > 2.0 No ponderado
> 100000 / mm3 500 - 200000 / mm3 > 75% Ausentes No ponderado > 90% Ausentes Presentes
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REFERENCIA VOLUMEN ASPECTO TRANSPARENTE COLOR DENSIDAD COAGULACION pH AMARILLO CLARO 1.008 1.020 NEGATIVA 7.4 < 3.5 ml
SIGNIFICADO CLNICO
CELULAR
< DE 1.015 = CIRROSIS, NEFROSIS, CARDIOPATAS O NEOPLASIAS > DE 1.018 = PLEURESIA TUBERCULOSA > = HIPERPROTEINEMIA < 7.3 EXUDADO?, EMPIEMA, AFECCIONES MALIGNAS, PLEURESIA REUMATOIDE, PLEURITIS POR LUPUS, TUBERCULOSIS Y ROTURA ESOFGICA > 60 mg% : AFECCIONES TUBERCULOSAS Y MALIGNAS; EN DERRAMES POR LUPUS ERITEMATOSO DISEMINADO < 60 mg%. AFECCIONES BACTERIANAS O PLEURITIS REUMATOIDE, AFECCIONES TUBERCULOSAS Y MALIGNAS > = AFECCIONES PANCRETICAS, TUMORES PANCRETICOS Y NEUMONAS, ROTURA ESOFGICA = DERRAMES TUBERCULOSOS Y OTROS
GLUCOSA
AMILASA
VALORES > 2 3 VECES LO NORMAL = QUILOTRAX PLEURESIA TUBERCULOSA > = PROCESO INFLAMATORIO, DERRAME, HEMORRAGIA 80% DE TRASUDADO Y 20% DE EXUDADOS > 10 000/mm3 = NEUMONA, PANCREATITIS, SNDROME DE POSTINFARTO AL MIOCARDIO Y LUPUS ERITEMATOSO DISEMINADO 50 % > LINFOCITOS PEQUEOS TUBERCULOSOS, MALIGNOS > 30% PMN = NEUMONAS, ENFERMEDADES DE COLGENA = DERRAMES
DIFERENCIAL
PANCREATITIS,
ERITROCITOS
< DE 5 /mm3
> 100 000 /mm3 = TODOS TIPOS DERRAMES > 100 000/ mm3 = ENFERMEDAD PLEURAL MALIGNA, INFARTO PULMONAR O TRAUMATISMO
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