26/02/13

APACAME - Mensagem Doce 66 - Artigo

Artigo

O POTENCIAL TERAPUTICO DA APITOXINA

Amazile Biagioni Maia Engenheira qumica, doutora em bioqumica LABM Pesquisa e Consultoria - amazile@labm.com.br

RESUMO A apitoxina, veneno produzido pela abelha Apis mellifera, compe-se principalmente de peptdeos e enzimas, quase todos fisiologicamente ativos, sendo historicamente reconhecida como instrumento valioso para o combate artrite. Alguns polipeptdeos, especialmente a melitina, que representa cerca de 50% de seu peso seco, tm ao antiinflamatria mais potente que a cortisona e seus derivados, sobre os quais tm a vantagem adicional de ausncia de efeitos colaterais. Atualmente, o produto atinge altssimas cotaes no mercado internacional. No Brasil, porm, seu emprego ainda restrito e cercado de preconceitos, devido falta de garantias sobre a sua pureza e risco de efeitos alrgicos. Neste trabalho, apresenta-se uma viso geral sobre os componentes, uso teraputico e reduo da alergenicidade da apitoxina. Palavras-chave : apitoxina, alergenicidade, terapia da artrite. 1 - INTRODUO

Diversos organismos produzem "veneno" como instrumento de defesa contra possveis predadores. As aes fisiolgicas so variadas, podendo imobilizar ou at matar a presa (38). O primeiro registro de morte humana atribuda a veneno de inseto (vespa) foi o do Rei Mens do Egito, cerca de 2.600 anos AC (8). Bem abaixo das doses agressivas, os "venenos" podem ter aes fisiolgicas desejveis e at teraputicas. As propriedades anti-artrticas da apitoxina, o veneno produzido pela abelha Apis mellifera, so reconhecidas h muitos sculos. H cerca de 2.500 anos, Hipcrates j empregava ferroadas de abelha em seus procedimentos teraputicos. No sculo II de nossa era, outro mdico grego, Galeno, escreveu sobre o tratamento com veneno; Carlos Magno, no sculo VIII, foi tratado com ferroadas de abelha para combater suas inflamaes nas juntas (8). Nos ltimos anos, devido comprovao cientfica dos seus efeitos teraputicos, a procura tem aumentado em diversos pases, elevando consideravelmente a cotao da apitoxina no mercado internacional (67). No entanto, apesar do peso do setor apcola nacional, a participao brasileira neste mercado tem-se mantido muito aqum de suas potencialidades. Com o objetivo de contribuir para o aumento do emprego teraputico da apitoxina brasileira, apresenta-se uma reviso sobre a composio qumica, valor teraputico e recursos para reduo
www.apacame.org.br/mensagemdoce/66/apitoxina.htm 1/11

26/02/13

APACAME - Mensagem Doce 66 - Artigo

de sua alergenicidade. 2- TERAPIA DA ARTRITE E RISCO ALRGICO A apitoxina tem uma aplicao muito importante no tratamento da artrite, doena que causa dores intensas, restringe os movimentos e at deforma o paciente. Largamente disseminada em todo o mundo, pode advir de desgaste natural, esforos excessivos, envelhecimento ou ainda problemas na circulao, acarretando inflamao das juntas e eroso das cartilagens. No tem cura e pode evoluir para a invalidez (8). As terapias tradicionais passam pelo uso de sais de ouro e de antiinflamatrios no-esterides (aspirina, ibuprofeno e fenilbutazona...) e esterides (cortisona, prednisona e dexametasona...) (15). Todas elas tm efeitos colaterais, acentuados devido necessidade de tratamento permanente. Em especial, as drogas esterides podem acarretar impotncia, edema, queda da resposta imunolgica, crescimento excessivo dos cabelos e irregularidades cardacas (8). Pelo emprego da apitoxina, vrios pesquisadores j demonstraram que possvel reverter a evoluo da doena sem ocorrncia de efeitos colaterais (12, 18, 60). A ttulo de ilustrao, KIM (29) acompanhou um grupo de 108 pacientes artrticos que no tinham obtido sucesso nas terapias tradicionais e que foram tratados com veneno de abelha duas vezes por semana durante seis semanas. Segundo o autor, nenhum efeito colateral foi observado e a maioria dos pacientes mostrou uma melhoria acentuada nos sintomas. Apesar disso, embora j largamente difundido nos pases do leste europeu, o emprego da apitoxina ainda enfrenta preconceitos na medicina ocidental, geralmente atribudos a riscos de efeitos txicos e de reaes alrgicas (37). A reao normal apitoxina consiste de uma dor aguda no local da picada, que dura apenas alguns minutos; em algumas pessoas pode ocorrer tambm reao na vizinhana da picada, com aparecimento de edema, rubor, calor ou coceira, que persistem durante algumas horas. Com efeito, alguns polipeptdeos da apitoxina so referidos como "toxinas" porque atuam sobre os mastcitos do tecido conjuntivo e os basfilos sanguneos, liberando grnulos carregados de aminas biognicas, especialmente a histamina. Geralmente a influncia da histamina liberada pelos mastcitos perdura apenas alguns minutos. Efeitos txicos s advm de doses excessivas, associadas a um nmero muito grande de picadas em regies intensamente vascularizadas (59, 60). Nesses casos, vrios mediadores vasoativos podem continuar sendo produzidos durante horas, mantendo as alteraes de permeabilidade vascular e vasodilatao (15, 46). Diferentemente dos efeitos txicos, os efeitos alrgicos, que se estima atingirem cerca de 1% da populao, podem advir de pequenssimas dosagens de apitoxina e esto relacionadas principalmente s suas protenas de alto peso molecular. Nas pessoas alrgicas, ou hipersensveis, as reaes podem variar desde sensao de desconforto at edema espalhado, dificuldade de respirao, constrio do peito, fraqueza intensa, clicas, nuseas e vertigens. O caso extremo o choque anafiltico que, se no for tratado rapidamente, pode ser fatal (46). As reaes alrgicas esto associadas ativao do sistema imune atravs de antgenos. Segundo NEGREIROS et al. (46), as substncias alrgicas tm peso molecular acima de 10.000; entre 10 e 40 mil so antgenos fracos e somente acima de 40 mil so antgenos fortes. Polipeptdeos com peso molecular abaixo de 10.000 no so antgenos, embora possam agir como tal se ocorrerem ligaes com adjuvantes, que podem ser protenas do prprio organismo (46). Em qualquer caso, a chance de ativao de anticorpos est fortemente relacionada existncia e preservao da estrutura terciria da molcula antignica (46). Neste sentido, entende-se que as
www.apacame.org.br/mensagemdoce/66/apitoxina.htm 2/11

26/02/13

APACAME - Mensagem Doce 66 - Artigo

enzimas (todas com PM acima de 10.000) sejam os componentes mais alergnicos da apitoxina. Entende-se tambm que os polipeptdeos da apitoxina, com pesos moleculares predominantemente na faixa de 2 a 3 mil, tenham um potencial alergnico baixo, com riscos equivalentes aos de outras drogas de largo uso, como a insulina. Com efeito, as reaes alrgicas so geralmente associadas s enzimas da apitoxina (9, 26, 29). Dentre elas, a fosfolipase A2 a mais alergnica, seguindo-se a hialuronidase e a fosfatase cida (29). 3- COMPOSIO QUMICA

A apitoxina uma mistura complexa de compostos nitrogenados, que correspondem a mais de 90% do seu peso seco. Na Tabela 1 encontram-se relacionados seus principais componentes, agrupados por faixas de peso molecular.

Tabela 1- Principais componentes da apitoxina (43, 56)

Peso molecular (D)

< 1000

Componente

% base seca

Observaes

Peptdeos Monoaminas Outros

15 3 6

Cadeias de at 9 aminocidos Histamina, dopamina, noradrenalina... Aminocidos isolados, carboidratos, fosfolpides... Anti-inflamatrio Anti-inflamatrio Anti-inflamatrio Tertiapina, secapina, cardiopep... Principal alergnico Alergnico secundrio Fosfatase cida, a -glucosidase, esterases... Adolapina, inibidor de protease...

Polipeptdeos 1000 a 10.000

Melitina Apamina Peptdeo MCD Outros

50 2 2 3 12 2 3

Enzimas > 10.000

Fosfolipase A2 Hiauronidase Outras

Outras substncias

Observa-se que os componentes nitrogenados com peso molecular abaixo de 1000 consistem principalmente de pequenos peptdeos e monoaminas. Na faixa entre 1 e 10 mil encontram-se numerosos polipeptdeos, com amplo predomnio da melitina. Acima de 10 mil ocorrem diversas
www.apacame.org.br/mensagemdoce/66/apitoxina.htm 3/11

26/02/13

APACAME - Mensagem Doce 66 - Artigo

enzimas, com amplo predomnio da fosfolipase A2. No total, a apitoxina contm cerca de 20 substncias ativas. 3.1- MONOAMINAS

Do ponto de vista farmacolgico, as monoaminas da apitoxina so referidas como "aminas biognicas", atuando como vasodilatadores e neurotransmissores. Estas substncias ocorrem naturalmente em todos os organismos vivos e, nos nveis presentes na apitoxina, no representam potencial txico (30, 43, 46). A histamina (b -imidazol-etilamina) um potente vasodilatador. Promove a secreo de pepsina e de cido pelo estmago, com poderosa ao estimulante da secreo gstrica. No teor em que ocorre na apitoxina no tem qualquer efeito txico. A dose letal em ratos (LD50) de 2020 mg/kg de peso (10), o equivalente a mais de 100 g para um adulto com 50 kg de peso. Na apitoxina, a maior parte da histamina presente encontra-se ligada a peptdeos, com destaque para as estruturas referidas como procamina A, procamina B e peptdeo de Nelson (Figura 1). Existe a possibilidade de "choque histamnico" pela apitoxina. Contudo, o risco no se encontra relacionado ao contedo de histaminas do prprio veneno, mas sim grande quantidade de histaminas liberadas pela prpria vtima, quando uma quantidade excessiva de veneno promove o rompimento das membranas de grande nmero de mastcitos e basfilos.

Ala-Gly-Pro-Gln-Histamina Procamina A

Ala-Gly-Pro-Ala-Gln-Histamina Procamina B

Ala-Gly-Pro-Ala-Gln- Histamina Peptdeo de Nelson Figura 1- Histaminas presentes na apitoxina A dopamina [a -(3,4-dihidroxifenil)- b -aminoetano] e a noradrenalina so catecolaminas de ocorrncia natural que atuam na estimulao dos receptores de adrenalina. Potentes neurotransmissoras, so muito usadas em procedimentos teraputicos, estimulando a vascularizao, vasodilatao e excreo de sdio (15, 46). Doses excessivas, porm, provocam vasoconstrio, elevando a presso arterial. A apitoxina contm ainda pequenssimas quantidades de outros neurotransmissores, como a serotonina e a norepinefrina, que tm efeitos fisiolgicos bem conhecidos (10).

3.2 - POLIPEPTDEOS

A apitoxina contm aminocidos isolados (cerca de 1%) e oligopeptdeos (14%) com peso
www.apacame.org.br/mensagemdoce/66/apitoxina.htm 4/11

26/02/13

APACAME - Mensagem Doce 66 - Artigo

molecular abaixo de 1.000. Os polipeptdeos ativos tm peso molecular acima de 1.000, sendo que os mais importantes tm cadeias entre 18 e 25 aminocidos (34).

3.2.1- MELITINA

A melitina uma substncia de elevada ao anti-inflamatria, sendo considerada o principal agente da apitoxina na terapia da artrite. Junto com a apamina, a melitina estimula os sistemas adrenal e pituitrio a produzirem cortisol e outros esterides naturais, que tm importante papel na terapia da artrite e no produzem as complicaes mdicas associadas aos esterides sintticos (66, 79). Trata-se de um peptdeo formado por 26 aminocidos (Figura 2) dos quais dez so fortemente hidrofbicos e seis so positivamente carregados em pH neutro. Por isso tem fortes propriedades tensoativas. Geralmente se considera o teor mdio de melitina como 50% do peso seco da apitoxina (44), mas sabe-se que este valor pode variar bastante, conforme a procedncia. Por outro lado, no existe grande diferena nos teores de melitina em venenos de abelhas europias e africanas (61).

Gly (+)-Ile-Gly-Ala-Val5 -Leu-Lys(+)-Val-Leu-Thr10 -Thr- Gly-Leu-Pro-Ala15 -Leu-Ile-Ser-Trp-Ile20 -Lys(+)-Arg(+)-Lys(+)-Arg(+)-Gln25 -Gln-NH2 Figura 2 - Estrutura da melitina (PM = 2846,5)

3.2.2- OUTROS POLIPEPTDEOS

Entre os outros polipeptdeos da apitoxina (Figura 3) destacam-se a apamina (2%), o peptdeo MCD (2%), cardiopep (0,7%), secapina (0,5%), tertiapina, (0,1%) e a melitina F (< 0,1%) (29). A ao fisiolgica da apamina est associada a modificaes na noradrenalina, dopamina e serotonina e interferncia nas transmisses sinpticas, entre outras. Como a melitina, tambm estimula a funo hipofisocorticorenal, acarretando aumento agudo imediato dos nveis de cortisol no sangue (8, 9). O peptdeo MCD (do ingls "mast cell degranulating") como o prprio nome diz, induz a degranulao dos mastcitos, clulas de defesa do organismo, acarretando a liberao de heparina (que impede a coagulao do sangue) e histaminas (vasodilatadores). Da resulta uma ao antiinflamatria, considerada 100 vezes mais potente que a cortisona, em doses equivalentes (5). Similarmente, testes em cachorros e macacos demonstraram que o cardiopep, alm de estimular as glndulas adrenais para liberar hormnios endgenos, atua diretamente sobre o miocrdio,
www.apacame.org.br/mensagemdoce/66/apitoxina.htm 5/11

26/02/13

APACAME - Mensagem Doce 66 - Artigo

aumentando tanto a fora de contrao como o ritmo cardaco, com um efeito pequeno ou nulo sobre a circulao coronria. Esta frao apresenta, alm disso, propriedades anti-arrtmicas em coraes isolados ou intactos (9).

3.3 - ENZIMAS

Existem vrias enzimas na apitoxina. Devido sua faixa de peso molecular, todas so potencialmente alergnicas. As mais destacadas na literatura, porm, so a fosfolipase A2, a hialuronidase e a fosfatase cida. 3.3.1- FOSFOLIPASE A2

Fosfolipase A2 o nome atribudo a todas as enzimas capazes de retirar, por meio de hidrlise, o cido graxo situado na posio 2 da molcula de lecitina e substratos similares (fosfodiacilgliceris), substncias largamente presentes nas membranas celulares (30). Esta enzima est naturalmente presente em todos os seres vivos (19), sendo que os pesos moleculares, as estruturas qumicas e funes paralelas a ela associadas variam acentuadamente conforme o organismo produtor, acarretando os mais diversos espectros de efeitos fisiolgicos. Dependendo da origem, a fosfolipase A2 pode acarretar efeitos anticoagulantes e inflamatrios, por exemplo. No entanto, estas aes txicas esto relacionadas a pores da molcula distintas do centro ativo
www.apacame.org.br/mensagemdoce/66/apitoxina.htm 6/11

26/02/13

APACAME - Mensagem Doce 66 - Artigo

responsvel pela atividade enzimtica (17, 26, 41, 42, 48). Na apitoxina existem duas estruturas de fosfolipase A2, ambas com peso molecular da ordem de 11.000 e estruturas bem caracterizadas (2, 4, 6, 17, 63, 64, 65, 73). Usualmente considera-se o teor mdio de 12% mas, segundo SCHUMACHER et al. (61), as concentraes podem variar de 1,8 a 27,4% p/p, sendo geralmente maiores nas abelhas africanas que nas europias. Em pequenas doses, a fosfolipase A2 da apitoxina no apresenta danos, exceto para pessoas alrgicas. Em doses elevadas (por exemplo, associadas a centenas de picadas simultneas) ocorrem efeitos txicos associados inibio da agregao de plaquetas (21, 76, 82), necroses nas clulas do msculo esqueltico (49, 51) e do pncreas (41). Esta enzima tem sido alvo de grande nmero de estudos. Atualmente, com base em inmeros trabalhos sobre mecanismos de defesas imunolgicas fosfolipase A2 (1, 11, 16, 27, 28, 39, 47, 69) existem vrios procedimentos descritos para testes de hiper-sensibilidade e para terapia de imunizao (6, 27, 43, 44, 48, 62). 3.3.2- OUTRAS ENZIMAS

A hialuronidase uma enzima que atua sobre o cido hialurnico, importante componente do tecido conetivo. Com isso, propicia a difuso dos demais componentes do veneno, sendo referida como "fator de espalhamento." Na apitoxina, esta enzima uma glicoprotena, sendo que a parte proteica tem peso molecular em torno de 40.000 (349 aminocidos) (13, 23, 77). A fosfatase cida da apitoxina (1%) considerada o principal alergnico em 18% dos pacientes alrgicos (5, 28, 29). Esta enzima est associada liberao de histamina dos basfilos humanos, alm de produzir inflamao e ardor na pele.

4- REDUO DA ALERGENICIDADE 4.1- FRACIONAMENTO

Os componentes mais alergnicos da apitoxina so as enzimas com peso molecular acima de 10.000 e os de interesse teraputico so cadeias com peso molecular entre 2 e 3 mil, alm de outros ainda menores. Partindo desta premissa, pode-se conseguir uma drstica reduo da alergenicidade do veneno de abelha mediante tcnicas de fracionamento por peso molecular, como a cromatografia em coluna (34), a dilise e a ultrafitrao (81). Em trabalho recente (35, 36) a cromatografia de vrias amostras de apitoxina brasileira em coluna de Sephadex G-50 fine resultou em trs fraes, sendo que os componentes com peso molecular at 7.000 se concentraram na terceira frao. possvel obter fraes com faixas de peso molecular cada vez mais estreitas, mediante o fracionamento sucessivo em colunas de porosidade cada vez menor (72). 4.2- EFICINCIA

www.apacame.org.br/mensagemdoce/66/apitoxina.htm

7/11

26/02/13

APACAME - Mensagem Doce 66 - Artigo

A eletroforese em gel um recurso rpido e adequado para anlise da pureza e faixas de peso molecular das fraes da apitoxina (3, 14, 22, 35, 53, 58). Segundo RAMES & RICKWOOD (53), embora as separaes em gel bidimensionais tenham maior poder de resoluo, a eletroforese unidimensional ainda a mais largamente difundida. Alem de permitir determinar o peso molecular de todos os componentes da apitoxina (58), ajusta-se a procedimentos para determinao de atividade enzimtica (24, 70). Se o objetivo do fracionamento reduzir sua alergenicidade, um parmetro importante para avaliar a eficincia do procedimento a dosagem da enzimtica residual nas fraes. Neste sentido, a medida da atividade da fosfolipase A2 a mais importante, por se tratar do principal alergnico da apitoxina, e que est presente em maior proporo. Alm disso, no caso do fracionamento por tamanho, a comprovao da retirada desta enzima uma garantia da ausncia das demais. Existem diversas formas para se determinar a atividade fosfolipsica. As tcnicas baseiam-se no efeito direto da enzima, que o aumento da acidez decorrente da liberao de um cido graxo da lecitina e similares (34) ou em efeitos indiretos, como a variao do tempo de coagulao das protenas da gema de ovo na presena e ausncia da enzima (32, 75). Para amostras muito pequenas existem tcnicas de fluorescncia (54) e eletroforese (50) , entre outras. Para a atividade da hialuronidase tambm existem opes baseadas na eletroforese em placa de gel (13), turbidimetria (52) e espectrofotometria (7, 31, 33, 77) sendo estas ltimas as mais utilizadas. A atividade hemoltica um parmetro muito empregado como referencial de controle da apitoxina (32, 55). Contudo, como resulta das aes conjugadas da fosfolipase A2, da melitina e outros peptdeos (34), a medida desta atividade no permite avaliar a eficincia do fracionamento do veneno. 5- CONCLUSO

A aplicao teraputica da apitoxina j foi amplamente comprovada. No se trata de uma opo desprovida de riscos, mas existem recursos tecnolgicos para que sejam amplamente minimizados. Riscos mais graves encontram-se associados s terapias tradicionais da artrite com esterides. Sob a ptica financeira, a apitoxina uma fonte valiosa de divisas, cujo aproveitamento est muito abaixo de suas potencialidades, apesar da posio de destaque j ocupada pela apicultura brasileira no mercado mundial, principalmente atravs da prpolis. Isto se deve s dificuldades ainda encontradas no Brasil para o fracionamento adequado da apitoxina e at mesmo para o fornecimento de garantias de autenticidade e pureza do produto in natura. Com este trabalho, espera-se estimular novos estudos sobre a apitoxina no Brasil. Neste sentido, enfatiza-se a importncia de formao de grupos interdisciplinares, para se assegurar tanto a eficincia dos mtodos de fracionamento como a garantia da ao teraputica. 6- REFERNCIAS

1. AKDIS,C.A et al.. J. Allergy Clin. Immunol., 99 (3): 345-53. 1997. 2. AMERATUNGA R. V. et al. Pathology, 27 (2): 157-60. 1995.
www.apacame.org.br/mensagemdoce/66/apitoxina.htm 8/11

26/02/13

APACAME - Mensagem Doce 66 - Artigo

3. ANDREWS, A.T. Electrophoresis: Theory, Techniques and Biochemical and Clinical Applications. 2 ed. New York, Oxford Univ. Press, 1986. 4. ANNAND, R. R et al. Biochemistry, 35 (14): 4591-601. 1996. 5. BILINGHAN et al (1973). Apud: BLUM, M. S. Chemical defenses in arthropods. New York, Academic Press, 1981. 562 p. 6. BLASER, K. et al. Int. Arch. Allergy Immunol., 117 (1): 1-10. 1998 . 7. BONNER & CANTEY (1965). Apud: WAYBE et al. Methods in Enzimology, 235: 60612. 1994. 8. BROADMAN, J. Bee Venom - The Natural Curative for Arthritis and Rheumatism. New York, Putnam & Sons. 1962. 224 p. 9. BROOKS, R. et al. Estudios sobre el veneno de abejas. Habana, Universidad de la Habana, 1994. 11 p. 10. BUDAVARI, S. ed. The Merck Index. Raway, Merck Res. Lab., 1996. 11. CARBALLIDO, J.M. et al. Eur.J. Immunol. ,27 (2): 515-21. 1997. 12. CHANG,Y. H. & BLIVEN, M. L. Agents Actions, 9: 205-11. 1979. 13. CHEN, S. S. et al. Clin. Chim. Acta, 95 (2): 277-84. 1979. 14. CHETTIBI, S. & LAWRENCE, A. Toxicon, 27 (7): 781-7. 1989. 15. COUTINHO, A.C. Dicionrio Enciclopdico de Medicina. 3 ed. Lisboa, Argo Ed., 1970. 4 v. 16. DEREGNAUCOURT, C. & SCHREVEL, J. J. Biol Chem., 275 (51): 39973-80. 2000. 17. DHILLON, M et al. J. Allergy Clin. Immunol., 90 (1): 42-51. 1992. 18. EISEMAN,J. L. et al. Biochem. Pharm., 31:1139-46. 1982. 19. GARCIA-PASTOR, P. et al. J. Pharmacol. Exp.Ther. 289 (1): 166-72.1999. 20. GRENIER, D.& MICHAUD, J. J. Clin. Microbiol: 31 (7): 1913-15. 1993. 21. HAKALA,J.K. et al. Thromb.Vasc-Biol., 19 (5): 1276-83. 1999. 22. HAMES, B.D. & RICKWOOD, D. Gel electrophoresis of proteins. 2 ed. Oxford, IRL Press, 1990. 23. HARRISON, R. A. Biochem. J.: 252 (3): 875-82. 1988. 24. HOFFMANN, W.J. et al. Arch. Biochem. Biophys.: 221: 361-70. 1983. 25. HOLLANDER, T. et al. Carbohydr-Res. 247291-7. 1993. 26. ISHEY et al., 1975. Apud: MEYER, W.L. Most Toxic Insect Venom in: University of Florida Book of Insect Records. Florida, University of Florida, 1996. 27. KAMMERER,-R. et al. Clin. Exp. Allergy, 27 (9): 1016-26. 1997. 28. KETTNER, A. et al. Clin. Exp. Allergy, 29 (3): 394-401. 1999 29. KIM, C. M.M. Bee venom therapy and bee acupuncture therapy. Korea, South Korean Ed., 1992. 30. LEHNINGHER, A L. Bioqumica. Sp Paulo, Edgard Blucher, 1976. 4 v. 31. LIEN, Y. H. et al. Biochim. Biophys. Acta, 1034 (3): 318-25 . 1990. 32. LORENZO, M.M.L. et al. Propiedades farmacolgicas del veeno de abejas y caracterizacion parcial de uno de sus componentes: la fosfolipasa A2. Havana, Universidad de la Habana, 1990. 33. LYON, M. & PHELPS, C.F. Biochem. J., 199 (2): 419-26. 1981. 34. MAIA, A.B.R.A. Desenvolvimento Tecnolgico da Apitoxina Nacional. Belo Horizonte, CNPq/RHAE, LABM, 2001. (Rel. Tcnico) 35. MAIA, A.B.R.A. ROCHA, M.P.S. Fracionamento e Caracterizao da apitoxina. Mensagem Doce, Apacame, So Paulo, 2002. (no prelo). 36. MAIA, A.B.R.A et al. Fracionamento e aferio da pureza da apitoxina. Caxambu,, BRAZMEDCHEM. 1o Simpsio Brasileiro em Qumica Medicinal, 11-16/11/2001. 37. MALONE, F. Bees Don't Get Arthritis. New York: Dutton. 1979. ISBN 0-914960-60-1. 179 p.
www.apacame.org.br/mensagemdoce/66/apitoxina.htm 9/11

26/02/13

APACAME - Mensagem Doce 66 - Artigo

38. MEYER, W.L. Most Toxic Insect Venom. In: University of Florida Book of Insect Records. Florida, University of Florida, 1996. Cap. 23. 39. MICHILS, A et al. J. Allergy Clin.Immunol. 102 (1): 118-26. 1998. 40. SEEGER, M. et al. Eur. J. Immunol., 28 (7): 2124-30. 1998. 41. MOSSNER, J. et al. Int. J. Pancreatol., 27 (1): 29-38. 2000. 42. MUKHOPADHYAY, A. & STAHL, P. Arch. Biochem. Biophys., 324(1): 78-84. 1995. 43. MULLER, U. et al. Clin. Exp. Allergy, 27 (8): 915-20. 1997. 44. MULLER, U. et al. J. Allergy Clin. Immunol.,101 (6 Pt 1): 747-54. 998. 45. NAIR, B. et al.. Toxicon, 17: 557-69. 1979. 46. NEGREIROS, E.B. et al. Alergia para Clnicos e Pediatras. Rio de Janeiro, Atheneu, 1987. 47. NICOLAS, J. P. et al. J. Biol. Chem. 14; 272 (11): 7173-81. 1997. 48. OKANO, C.L. et al. Allergy, 54 (8): 811-8. 1999. 49. OWNBY, C.L. et al. Toxicon. 35 (1): 67-80. 1997. 50. PACAKOVA, V. & STULIK, K. JAOAC, 83 (3): 549-54. 2000. 51. PETROIANU,G. et alli. Am. J. Emerg. Med.,18 (1): 22-7. 2000. 52. PLATER, G. et al. Toxicon, 33: 157-69. 1995. 53. RAMES, B.D. & RICKWOOD, D. Gel Electrophoresis of Proteins. 2 ed. Oxford, IRL, 1990. 54. RICHIERI, G. V. & KLEINFELD, A. M. Anal Biochem.: 229 (2): 256-63. 1995. 55. ROSARIO & OKASAKI (1980). Apud: SCHMIDT, J. O. Toxicon, 33 (7): 917-27. 1995. 56. ROTHFELD, G. Bee Venom Therapy. http://www2.shore.net/~spectrum/welcome.html 57. SCHUMACHER, M. J. et al. J. Allergy Clin Immunol., 90 (1): 59-65. 1992. 58. SHAPIRO, A.L. et al. Biochem. Biophys. Res. Commun., 28: 815, 1967. 59. SCHMIDT, D.K. et al. Prostaglandins, 16 (2): 233-8. 1978 60. SCHMIDT, J. O. Toxicon, 33 (7): 917-27. 1995. 61. SCHUMACHER, M.J. et al. Am. J. Trop. Med. Hyg. , 55 (2): 197-201. 1996. 62. SCHUMACHER, M.J. et al. J. Allergy Clin. Immunol., 90 (1): 59-65. 1992. 63. SCOTT, D. L. et al. Science: 250 (4987): 1541-6. 1990. 64. SCOTT, D. L. et al. Science, 250 (4987): 1563-6. 1990. 65. SCOTT,-D. L et al. Science, 252 (5007): 764. 1991. 66. SHKENDEROV & KOBUROVA,1979. Apud: WILKINSON, S. Bee Culture Magazine. http://www.airoot.com/beedevelop/index.htm 67. SIMICS,M. Canadian Beekeeping, Vol. 18(6): 140. 1994. 68. SMITH, R.F. & WILLETT, N.P. Applied Microbiol., 16: 1434. 1968. Apud: WAYBE et al, Methods in Enzimology, 235: 606-12. 1994. 69. SPECHT, C. & KOLSCH, E. Int. Arch. Allergy Immunol., 112 (3): 226-30. 1997. 70. SRI VENUGOPAL, K.S. & ADIGA, P.R. Anal. Biochem., 101: 215. 1980. 71. SULTANA, G.N. et al. Biotechnol. Appl. Biochem., 21 ( Pt 1): 101-10. 1995. 72. SZOKAN., G. et al.. J. Liquid Chromatog.: 17(16): 333-49. 1994. 73. VALENTIN, E. et al. J. Biol. Chem., 275 (11): 7492-6. 2000. 74. VIDAL, J.C. & STOPPANI, A.O.M. Experientia, 26; 831-2. 1970. 75. VIDAL, J.C. & STOPPANI, A.O.M. Arch. Biochem. Biophys.,145: 543-6. 1971. 76. WATALA, C. et al. Comp. Biochem. Physiol., 97 (1): 187-94. 1990. 77. WAYBE et al. Methods in Enzimology, 235: 606-12. 1994. 78. WEBER, A. et al. Allergy, 42 (6): 464-70. 1987. 79. WILKINSON, S. Bee Culture Magazine. 2002. http://www.airoot.com/bee develop/index.htm 80. WOLF, R. A et al. Am. J. Cardiol., 15; 53 (7): 941-4. 1984. 81. YANG, T. & ZALL. (1984). Apud: GOLDSTEIN, W.E. et al. Biochemical Engineering VI, 589 (Pt. 4): 192- 260. 1990.
www.apacame.org.br/mensagemdoce/66/apitoxina.htm 10/11

26/02/13

APACAME - Mensagem Doce 66 - Artigo

82. YUAN, Y. et al. Blood, 86 (11): 4166-74. 1995.

www.apacame.org.br/mensagemdoce/66/apitoxina.htm

11/11